Spirodela Polyrhiza -uutteiden valkaiseva ja ryppyjä estävä vaikutus
Mar 25, 2022
Ottaa yhteyttä:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791
Dong Hee Kim 1 · Tae Soon Park 1 · Katso Gie Kim 2
Abstrakti
Spirodela polyrhiza -uutteiden ja -fraktioiden antioksidantti-, valkaisu- ja ryppyjä ehkäisevä vaikutus arvioitiin sen tehokkuuden määrittämiseksi toiminnallisena kosmeettisena materiaalina. 1,1-difenyyli-2-pikryylihydratsyyli ja 2,2'-atsinobis-3-etyylibentsotiatsoliini-6-sulfonihapporadikaaleja poistavat aktiivisuudet olivat 44,2 ja 74,3 prosenttia 1{{42 }}0 ug/ml SE-E:tä (70-prosenttisen etanoliuutteen etyyliasetaattifraktio). Ryppyjä ehkäisevien vaikutusten mittaamiseksi määritettiin prokollageenibiosynteesi ja matriksin metalloproteinaasin-1 (MMP-1) estoaktiivisuus. Arvolla 25 ug/ml SE (70 % etanoliuute) biosynteesiaktiivisuus oli 48,5 %, ja SE-E osoitti parasta aktiivisuutta (57,8 %) samalla pitoisuudella. SE:n ja SE-E:n MMP-1-inhibitioaktiivisuus oli 13,4 ja 28,5 prosenttia, vastaavasti, pitoisuudella 25 µg/ml. Lopuksi solun melaniinin synteesin ja solujen tyrosinaasin esto mitattiin valkaisuvaikutuksen määrittämiseksi; pitoisuudella 25 ug/ml SE:n estoaktiivisuus oli 9,6 ja 13,8 prosenttia, vastaavasti, ja SE-E:n estoaktiivisuus oli vastaavasti 15,4 ja 22,0 prosenttia. Tuloksemme vahvistivat SE:n ja SEE:n mahdollisuuden tehokkaina toiminnallisina materiaaleina. Lisätutkimukset, joissa tutkitaan S:n antimikrobisia, anti-inflammatorisia ja syöpää ehkäiseviä vaikutuksia. polyrhiza on tarpeen sen mahdollisen käytön varmistamiseksi elintarvike-, kosmetiikka- ja lääketeollisuudessa.
Hapettumisenesto-, ryppyjä ehkäiseviä ja valkaisevia vaikutuksia arvioitiin Bupyeongcho-uutteen ja Bupyeongcho-fraktion tehokkuuden mittaamiseksi toiminnallisena kosmeettisena materiaalina. DPPH ja ABTS plus radikaalinpoistoaktiivisuus olivat 44,2 ja 74,3 prosenttia, vastaavasti, pitoisuudessa 100 ug/ml Bupyeongchon 70-prosenttisen etanoliuutteen etyyliasetaattifraktiosta (SE-E). Ryppyjä ehkäisevän aktiivisuuden mittaamiseksi mitattiin prokollageenin biosynteesiaktiivisuus ja MMP{9}}:n estoaktiivisuus soluissa. Tämän seurauksena Bupyeongcho 70-prosenttinen etanoliuute (SE) osoitti korkeinta biosynteettistä aktiivisuutta, 48,5 prosenttia pitoisuudella 25 µg/ml, ja SE-E:llä samalla pitoisuudella 57,8 prosenttia. SE:n ja SE-E:n MMP-1:n estoaktiivisuus oli 13,4 ja 28,5 prosenttia pitoisuudella 25 µg/ml, vastaavasti. Lopuksi valkaisuvaikutuksen varmistamiseksi mitattiin melaniinin biosynteesiä estävä aktiivisuus ja solunsisäinen tyrosinaasia estävä aktiivisuus. Konsentraatiolla 25 ug/ml SE osoitti 9,6 ja 13,8 prosenttia estävää aktiivisuutta, vastaavasti, ja SE-E oli 15,4 ja 22,0, vastaavasti. Prosentin arvo näytetään. Tämän tutkimuksen tuloksista vahvistettiin SE:n ja SE-E:n korkea ryppyjä ehkäisevä ja valkaiseva aktiivisuus, ja mahdollisuudet kehittyä erinomaiseksi toiminnalliseksi materiaaliksi lisääntyvät. Katsotaan, että sitä voidaan käyttää tehokkaana materiaalina
Avainsanat: Antioksidantti · Ryppyjen esto · Toiminnallinen kosmetiikka · Spirodela polyrhiza · Valkaisu
cistanche bienfaitson antioksidantti,Rypistymisen esto, jaihoa valkaisevia ainesosia
Johdanto
Kotimainen terveysvaikutteinen elintarvike- ja kosmetiikkateollisuus kehittyy voimakkaasti 2000-luvulla, ja kosmetiikkateollisuuden kehitystrendi on ympäristöystävällinen ja hypoallergeeninen kosmetiikka. Joissakin kosmetiikassa orgaanisia synteettisiä ainesosia, jotka aiheuttavat ihoärsytystä, käytetään halpojen raaka-aineiden saamiseksi suuria määriä, ja iho-ongelmat ovat usein kiistanalaisia [1,2]. Siksi johtavat kotimaiset ja ulkomaiset kosmetiikkayritykset pyrkivät aktiivisesti korvaamaan voimakkaasti ihoa ärsyttävät ainesosat hypoallergeenisilla ja luonnollisilla materiaaleilla. Lisäksi valkaisu-, ryppyjä parantavien ja UV-suojatoimintojen funktionaalisen kosmetiikan myynti kasvaa merkittävästi, joten kasviperäisiä materiaaleja käyttävien funktionaalisten kosmeettisten materiaalien kehitys on erittäin aktiivista [3,4]. Reaktiiviset happilajit (ROS) hyökkäävät dermikseen tai epidermaaliseen kudokseen ja aktivoivat elastaasia, entsyymiä, joka hajottaa elastiinia [5]. Aktivoitu elastaasi muokkaa elastiiniproteiinin tertiääristä rakennetta vähentäen dermiksen joustavuutta ja luoden ihon ryppyjä [6]]. Ihon ikääntyminen voidaan jakaa tekijöiden mukaan sisäiseen ikääntymiseen ja ulkoiseen ikääntymiseen. Ulkoinen ikääntyminen johtuu ulkoisesta stressistä, ja UV-säteiden aiheuttama valovanheneminen on tärkein syy. Ultraviolettisäteille altistuessaan matriisiproteiinit, kuten kollageeni- ja elastiinikuidut, vaurioituvat, kollageenin määrä ihossa on riittämätön, elastiset kuidut denaturoituvat, mikä aiheuttaa ryppyjen, täplien, pisamioiden ja ikääntymisen lisääntymistä. [7,8]. Lisäksi ultraviolettivalolle altistuessaan melanosyytteihin erittyy signalointiaineita, kuten -melanosyyttiä stimuloivaa hormonia (-MSH) ja adrenokortikotrooppista hormonia [9]. Melaniinia tuotetaan melanosomin sisällä ja aminohappo L-tyrosiini muunnetaan dopakinoniksi tyrosinaasientsyymin vaikutuksesta. Liiallinen melanogeneesi voi kuitenkin aiheuttaa merkittäviä ongelmia sellaisissa olosuhteissa kuin melanoosissa, tulehduksen jälkeisessä pigmentaatiossa, pisamioissa tai siemenissä [10]. Funktionaalisen kosmetiikan kehittämiseen liittyvässä tutkimuksessa tutkitaan aktiivisesti erilaisia ihoa valkaisevia ja ryppyjä parantavia materiaaleja ja erityisesti keskitytään sellaisten luonnonmateriaalien kehittämiseen, joilla on turvallisia ja erinomaisia vaikutuksia leviämisen ansiosta. hyvinvointitrendit [11,12].
Spirodelae Herba on monivuotinen vesikasvi, joka kuuluu Lemnaceae-heimoon. Spirodela polyrhiza(L.) Schneider) ja Cheongpyeong (Lemna minorL.), riisisammakkokala (Lemna paucicostataHegelm) on kuivattu yrtti, kerätään kesä-syyskuussa ja pestään epäpuhtauksien poistamiseksi. , sitten kuivataan ja käytetään hoitoon. Tutkimuksena Bupyeongchon ainesosista, sammakkoriisistä (S. polyrhiza) steroleista, kuten kampesterolista, -sitosterolista ja stigmasterolista [13], sekä flavonoideista, kuten apigeniini-7-O- -D-glukosidista, kynarosidin, hypokretiini-8-O- -D-glukosidin, viteksiinin, orientiinin sekä antosyaniinin ja tanniinin on raportoitu [14,15]. Muinaisista ajoista lähtien itämaisessa lääketieteessä ja kansanperinnössä kuivattua Bupyeongchoa on käytetty lääkkeenä ihoon liittyviin sairauksiin, kuten turvotukseen, turvotukseen, janoon, toonisuuteen, hikoiluun, myrkytysten poistamiseen, myrkytykseen, vesimyrkytykseen, villaan, diabetekseen, haavaumiin ja palovammoihin. [16,17]. Uskotaan, että sitä voidaan käyttää biomateriaalina varmistamalla objektiivisesti atooppiin liittyvä teho, ihon uudistumiseen liittyvä teho, tulehdusta ehkäisevä teho, ihoa rauhoittava vaikutus ja ihon valkaisuun liittyvä teho. Lisäksi Bupyeongin tehoa koskevassa tutkimuksessa uskottiin, että Bupyeongilla oli vaikutusta liikalihavuuden syihin, kuten märkimiseen, damnumiin ja yangheoon. , immuniteetista, atopiaan liittyvästä tehokkuudesta ja syövänvastaisesta vaikutuksesta [19,20] sekä tutkimuksista Bupyeongchon kemiallisista komponenteista ja antioksidanttisista vaikutuksista on raportoitu, joten sen uskotaan olevan potentiaalinen käyttää terveyteen tai biomateriaalina tai biomateriaalina. ruokavaliomateriaalia. Tässä tutkimuksessa tutkittiin ja arvioitiin erilaisten vesikasvien tehokkuutta, jotta löydettiin luonnollisia materiaaleja, joilla on antioksidanttisia, ryppyjä ehkäiseviä ja valkaisevia vaikutuksia vesikasveista. polyrhiza) Vahvista 70-prosenttisen EtOH-uutteen ja kunkin fraktion voimakas radikaaleja poistava, ryppyjä ehkäisevä ja valkaiseva aktiivisuus ja raportoi tulokset.
Materiaalit ja menetelmät
Kokeellisten materiaalien ja uutteiden valmistus
Bupyeongcho (S. polyrhiza) ostettiin Gyeongsan-sissa sijaitsevalta lääkeyritykseltä 2. syyskuuta{{20}}16, ja sen alkuperämaa on Kiina. Todistusnäytteitä säilytetään Korea Institute of Oriental Medicine -instituutin näytehuoneessa. Bupyeongcho-vesiuutteen (SW) osalta 200 g näytettä jäähdytettiin palautusjäähdyttäen, minkä jälkeen uutettiin kuumalla vedellä kahdesti 3 tunnin ajan. Sitten kuumavesiuute suodatettiin, väkevöitiin ja pakastekuivattiin, jolloin saatiin 23,5 g:n kuivapaino, ja saanto oli 11,8 prosenttia. Bupyeongcho 70-prosenttinen etanoliuute (SE) uutettiin kahdesti upottamalla 4 kg Bupyeongchoa käyttäen 30 litraa 70-prosenttista etanolia huoneenlämpötilassa 2 päivän ajan. Uute suodatettiin, konsentroitiin täysin alennetussa paineessa 40 °C:ssa tai alemmassa ja pakastekuivattiin, jolloin saatiin 480,29 g:n kuivapaino, ja saanto oli 12,0 prosenttia. Tästä 457,2 g suspendoidaan tislattuun veteen ja sitten liuottimen-heksaanin, EtOAc:n ja n-BuOH:n polaarisuudesta riippuen fraktioimalla peräkkäin käyttäen n-heksaanifraktiota (SE-H) 94,05 g, EtOAc-fraktiota (SE-E) Saatiin 68,80 g n-BuOH:ta 50,26 g fraktiota (SE-B). Loppuosa oli H20-fraktiota (SE-W), ja saatiin 212,09 g, ja vastaavat saannot olivat 20,6, 15,0, 11,0 ja 46,4 prosenttia tässä järjestyksessä.
vesisäiliö myytävänäottaa talteen
DPPH-radikaaleja poistava aktiivisuus
Bupyeongcho-uutteiden ja -fraktioiden 1,1-difenyyli-2-pikryylihydratsyyli (DPPH)-radikaaleja poistava aktiivisuus mitattiin Blois'n menetelmällä [21]. Lisää kuhunkin näyteliuokseen 50 μL DPPH-liuosta laimennettuna 0,02 mM:lla 100 µl:ssa, sekoita ja anna vaikuttaa 10 minuuttia ja mittaa sitten absorbanssi aallonpituudella 517 nm käyttämällä mikrolevylukijaa (Sunrise TM, Tecan Group Ltd. , Männedorf, Sveitsi). teki Tänä aikana kontrollimateriaalina käytettiin butyloitua hydroksianisolia (BHA), ja DPPH-radikaaleja poistava aktiivisuus laskettiin ryhmän absorbanssisuhteesta näyteliuoksen lisäyksen kanssa ja ilman.
ABTS plus radikaalin puhdistusaktiivisuuden mittaus
Bupyeongcho-uutteiden ja -fraktioiden 2,2'-atsinobis-3-etyylibentsotiatsoliini-6-sulfonihapon (ABTS) radikaaleja poistava aktiivisuus mitattiin seuraavasti modifioimalla Re et ai. [22]. Kun oli sekoitettu yhtä suuret määrät 7 mM ABTS:a (vedessä) ja 2,4 mM K208S2:ta, seos jätettiin huoneenlämpötilaan ja pimeään paikkaan 12 tunniksi radikaalien muodostumisen indusoimiseksi. Sitten absorbanssiarvo aallonpituudella 734 nm oli 0.6- laimentamalla ABTS plus -radikaaliliuosta. Se laimennettiin arvoon noin 0,7 ja käytettiin. 100 µl laimennettua ABTS plus radikaaliliuosta ja 50 µl yrttiuutetta sekoitettiin ja saatettiin reagoimaan huoneenlämmössä 7 minuuttia, ja absorbanssi mitattiin aallonpituudella 734 nm. Tässä tapauksessa BHA:ta käytettiin kontrollimateriaalina ja tulos laskettiin absorbanssisuhteesta ryhmälle, jota ei käsitelty näytteellä.
Soluviljely ja solujen elinkyvyn mittaus
Jokaista tässä kokeessa käytettyä solua viljeltiin Dulbeccon modifioidussa kotkaelatusaineessa (DMEM) (Invitrogen Carlsbad, CA, USA), johon oli lisätty 1 0 prosenttia naudan sikiön seerumia ja 1 prosenttia penisilliiniä (100 U/ml), 37 °C:ssa. aste, 5 prosenttia CO 2 Mukautettu inkubaattoriin ja jatkoviljelty. Solujen elinkelpoisuus mitattiin Park et ai. [23]. Jokainen solulinja [melanooma (B16F10) (ATCC, Rockville, MD, USA), fibroblasti (CCD-986sk) (ATCC, Rockville, MD, USA)] asetettiin 96-kuoppaiselle levylle 0,6-8× 10 3 soluja/kuoppa 180 μL:n erien jakamisen jälkeen 20 μL näytteitä valmistettiin väkevöimällä ja inkuboitiin 37 °C:ssa, 5 % CO 2:ssa inkubaattorissa 24 tuntia. Kontrolliryhmää inkuboitiin samoissa olosuhteissa lisäämällä sama määrä tislattua vettä kuin näytettä. 20 µl MTT-liuosta, joka oli valmistettu pitoisuudella 5 mg/ml, lisättiin siihen, inkuboitiin 4 tuntia, viljelyväliaine poistettiin, 200 µl DMSO:ta lisättiin kuhunkin kuoppaan ja annettiin reagoida huoneenlämpötilassa 15 minuuttia, minkä jälkeen mikrolevylukija (Sunrise TM, Tecan Group Ltd.), Männedorf, Sveitsi) absorbanssin mittaamiseksi aallonpituudella 540 nm.
Prokollageenin tyypin I biosynteesi ja MMP{0}}-inhibiittoreiden mittaus
CCD-986sk-solut ympättiin 12-kuoppaiselle levylle pitoisuudella 5×10 4 solua/kuoppa, säteilytettiin UVB:llä (20mJ/cm2), ja näytteet käsiteltiin konsentroimalla ja inkuboitiin CO:ssa. 2 inkubaattoria 48 tuntia. Tällä tavalla testattujen solujen supernatantti kerättiin ja käytettiin kokeeseen. Soluviljelmän kollageenin biosynteesin asteen määrittämiseksi propeptidin määrä mitattiin käyttämällä prokollageenityyppi-IC-peptidi (PIP) EIA-kittiä (Takara, Shiga, Japani) ja MMP{9}}-inhiboiva aktiivisuus mitattiin matrix metalloproteinase{10}} ELISA-pakkausta (Abcam, Cambridge, MA, USA).
Melaniinin biosynteesin ja solujen tyrosinaasia estävän aktiivisuuden mittaus
Melaniinin biosynteesin esto ihon melanoomasoluista mitattiin Hosoin et ai. menetelmän mukaisesti. [24]. DMEM-elatusaineessa viljellyt melanoomasolut jaettiin 2×10 6 soluun/malja 1{{10}}0 mm:n viljelymaljalla, viljeltiin 24 tuntia ja käsiteltiin MSH, valmistettu konsentroimalla, ja 2 ml näytteitä lisättiin, ja 48 tunnin kuluttua se pestiin fosfaattipuskurilla (pH 7,4). Sen jälkeen, kun solut oli irrotettu 0,25 M trypsiini-EDTA-liuoksella, kerätyt solut käsiteltiin 1 ml:lla 5-prosenttista TCA:ta 1 × 10 6 solua kohti, sentrifugoitiin kahdesti nopeudella 2 500 rpm, ja erotettua melaniinia käytettiin fosfaattipuskuri. Pesun jälkeen lisää 1 ml eetteri:etanolia (1:3), sentrifugoi kahdesti ja pese ja kuivaa 1 ml:lla eetteriä. Kuivattuun melaniiniin lisättiin 1 ml 1 N NaOH:ta, annettiin reagoida 80 asteessa 1 tunnin ajan ja absorbanssi mitattiin 405 nm:ssä spektrofotometrillä. Solujen tyrosinaasia estävä aktiivisuus mitattiin 5 x 10 B16F10-melanoomasolussa 6 kuoppassa.4 Solut siirrostettiin ja viljeltiin, ja 24 tunnin kuluttua näytteitä käsiteltiin kussakin kuopassa 48 tunnin ajan. Käsittelyn jälkeen, kun oli pesty kahdesti PBS:llä, lyysipuskuria (1 % Triton X-100, 0,1 M natriumfosfaattipuskuri, 50 mM PMSF, pH 6,8) lisättiin soluihin kussakin kuoppassa. Solut rikottiin jäillä, sentrifugoitiin ja vain supernatantti kerättiin ja käytettiin entsyymiliuoksena. Valmista substraatti liuottamalla L-DOPA 0,1 M natriumfosfaattipuskuriin (pH 6,8) pitoisuutena 2 mg/ml. Lisää 40 µl entsyymiliuosta 160 µl:aan substraattia ja kuumenna 37 asteessa 1 tunti. Mitattu nm. Melaniinin biosynteesin esto ja solun tyrosinaasiaktiivisuus laskettiin näyteliuoksen ja ei-additioryhmän absorbanssisuhteesta.
Proteiinin ilmentymisen mittaaminen Western blot -menetelmällä
MMP{0}}, MMP-9, tyrosinaasin, TRP-1, TRP-2 ja mikroftalmian transkriptiotekijän estoaktiivisuuden tarkistamiseksi jokainen solu kylvettiin 60 mm kudosviljelymaljalla ja viljeltiin 24 tuntia solujen stabiloimiseksi. Elatusaineen poistamisen jälkeen sitä säteilytettiin UVB:llä (20 mJ/cm2), ja uutetta inkuboitiin 24 - 48 tuntia alustassa, joka oli käsitelty kullakin konsentraatiolla, sitten väliaine poistettiin uudelleen ja pestiin kahdesti PBS:llä. Täydellinen mini 1 tab lisättiin 10 ml:aan RIPA-puskuria, liuotettiin 100 µl:aan ja sentrifugoitiin 4 astetta 12, 000 rpm 20 minuuttia. Sentrifugoimalla saatu supernatantti kvantifioitiin Bradford-määrityksellä, ja 20 µl proteiinia erotettiin elektroforeesilla käyttäen 10 % SDS-PAGE:ta. Erotettu proteiini siirrettiin PVDF-kalvolle (EMD Millipore, Billerica, MA, USA) käyttämällä puolikuivaa siirtosolulaitetta (Hofer, Holliston, MA, USA) ja sitten huoneenlämpötilassa 1 tunnin ajan estopuskurissa (5 % rasvatonta maitoa TBST:ssä) inkuboitiin Laimenna primäärinen vasta-aine ja yön yli 4 asteessa, sitten pestiin 3 kertaa TBST:llä 10-minuutin välein, hiiren anti-kanin IgG HRP (Santa Cruz Biotechnology Inc, Dallas, TX). , USA), naudan anti-vuohen IgG HRP Kukin (Santa Cruz Biotechnology Inc.) sekundäärinen vasta-aine laimennettiin 1:1, 000 ja inkuboitiin huoneenlämmössä 2 tuntia.
Tilastollinen käsittely
Kaikki kokeet toistettiin kolme tai useampia kertoja ja ilmaistiin keskiarvona ja standardipoikkeamana. Merkittävyyden todentamiseksi suoritettiin Duncanin usean alueen testi ja t-testi käyttämällä SPSS Statistics 20 (IBM, Armonk, NY, USA) ohjelmistopakettia. Tilastollinen merkitsevyystaso s<0.05, 0.01="" was="">
mistä ostaa cistancheavartenihonhoito
Tulokset ja keskustelu
DPPH:n ja ABTS:n sekä radikaalinpoistoaktiivisuuden mittaustulos
Kuva DPPH:n radikaalinpoistoaktiivisuuden mittaustulokset Bupyeongchon kuumavesiuutteelle (SW), etanoliuutteelle (SE) ja etanoliuutteen liuotinspesifisille fraktioille. 1 näytetään. SE osoitti 36,1 prosentin puhdistusaktiivisuutta pitoisuudessa 100 ug/ml, ja SW:n puhdistusaktiivisuus oli 24,7 prosenttia pitoisuudessa 100 ug/ml, joten SE:llä oli DPPH-radikaaleja parempi puhdistusaktiivisuus kuin SW:llä. Bupyeongchon 70-prosenttisen etanoliuutteen liuotinspesifisten fraktioiden tapauksessa SE-E ja SE-B 100 ug/ml pitoisuuksilla osoittivat vastaavasti 44,2 ja 42,6 prosenttia DPPH-radikaaleja poistavaa aktiivisuutta. Nämä tulokset vahvistivat, että EtOAc- ja BuOH-fraktioiden korkeat DPPH-radikaaleja poistavat tulokset vahvistettiin kunkin liuottimen fraktioissa perikarpissa [25] ja Seonhakchossa [26].
Tulokset ABTS:stä plus Bupyeongcho-uutteiden radikaaleja poistavasta aktiivisuudesta on esitetty kuviossa 2. Vahvistettiin. SE:n tapauksessa ABTS plus radikaaleja poistava aktiivisuus oli parempi kuin kuumavesiuutteen pitoisuudella 100 ug/ml 91,0 prosentissa. SE-E:n kunkin liuottimen fraktioiden joukossa SE-E osoitti 74,3 prosentin puhdistusaktiivisuutta pitoisuudessa 100 ug/ml, mikä osoitti parhaan ABTS:n plus radikaalinpoistoaktiivisuuden fraktioiden joukossa. Tämä on tulos, jota voidaan verrata korkeaan ABTS- ja 99,2 prosentin radikaaleja poistavaan aktiivisuuteen pitoisuudessa 500 ug/ml EtOAc-fraktiossa piparjuuren liuotinfraktioiden joukossa [27].
Kuva 1.DPPH ja ABTSplusuutteiden ja fraktioiden radikaali puhdistusaktiivisuus
MTT-mittaustulokset CCD{0}}sk fibroblastisoluille
Kun mitattiin Bupyeongchon solujen elinkelpoisuus CCD-986sk-soluja vastaan, vertailuryhmään verrattuna Bupyeongcho-etanoli, kuumavesiuute ja liuotinfraktiot osoittivat yli 80 prosentin solujen elinkelpoisuuden pitoisuudella 25 ug/ ml tai vähemmän. Siihen verrattuna vahvistettiin, että niiden kaikkien eloonjäämisaste oli 80 prosenttia tai korkeampi pitoisuudella 25 ug/ml tai vähemmän (kuvio 2). Siksi kunkin liuottimen SW:n, SE:n ja 70-prosenttisen etanolin fraktiot varmistettiin prokollageenin biosynteesin, MMP-1:n estävän aktiivisuuden, melaniinin biosynteesiä estävän aktiivisuuden ja tyrosinaasia estävän aktiivisuuden suhteen pitoisuudella 25 ug/ml perustuen tuloksena on solujen elinkelpoisuus.
Prokollageenin tyypin I biosynteesisarjan mittaustulos ja MMP{0}} estävän aktiivisuuden mittaustulos
Prokollageeni sisältää peptidisekvenssin, jota kutsutaan propeptidiksi aminopäässä ja karboksipäässä. Tiedetään, että propeptidi auttaa prokollageenimolekyylien laskostumista endoplasmisessa retikulumissa ja lohkeaa ja erottuu kollageenimolekyyleistä, kun kollageenin polymeroituminen tapahtuu samaan aikaan. Siksi propeptidin määrää mittaamalla voidaan ymmärtää kollageenin biosynteesin aste solussa [28]. Kuviossa 6 esitetään tulos kollageenin biosynteesin määrän mittaamisesta prokollageenityypin I C-peptidientsyymi-immunomäärityksellä fibroblasteille. SW ja SE osoittivat 35,4 ja 48,5 prosenttia prokollageenin biosynteesiä pitoisuudella 25 ug/ml, vastaavasti. Jokaiselle Bupyeongchon liuotinfraktiolle prokollageenin biosynteesiaktiivisuus osoitettiin järjestyksessä SE-E (57,8 prosenttia) > SE-W (43,8 prosenttia) > SE-B (41,5 prosenttia) > SE-H (32,3 prosenttia). Koon et al. [29], kunkin liuottimen fraktioiden tapauksessa kollageenin biosynteesin lisääntyminen vahvistettiin BuOH > EtOAC > vesi > heksaanifraktio järjestyksessä. Tämän kokeen tuloksissa SE-W osoitti hieman korkeampaa aktiivisuutta kuin SE-B, mutta ero ei ollut suuri, joten EtOAC- ja BuOH-fraktioiden yleinen prokollageenibiosynteesiaktiivisuus säilyi.
Useista kehossa tuotetuista MMP:istä MMP{0}} on proteaasi, joka vaikuttaa erityisesti kollageeniin. Estämällä MMP:n-1 toimintaa ja vähentämällä kollageenin hajoamista on mahdollista ylläpitää ihokudoksen kimmoisuutta ja estää ryppyjen muodostumista. Se tunnetaan [30]. Bupyeongchon MMP-1-inhiboivan aktiivisuuden mittaustulokset esitetään kuviossa 3. Esitetään. Tuloksena SE osoitti 13,4 prosenttia pitoisuudessa 25 ug/ml, mikä oli parempi kuin SW, joka osoitti 2,3 prosenttia estävää aktiivisuutta. SE-E:n tapauksessa estoaste oli 28,5 prosenttia vertailuryhmään verrattuna, ja MMP-1:n estoaktiivisuus oli fraktioiden joukossa paras. Vahvistettiin, että SE-E:llä oli erinomainen MMP{15}}-inhiboiva vaikutus verrattuna Koon et al. tutkimuksen tuloksiin. [29], joka osoittaa kuolleen EtOAC-fraktion MMP-1-inhibiittorin 3-12 prosentin verran vertailuryhmään verrattuna. Yhteenvetona voidaan todeta, että SE ja sen fraktiot osoittivat positiivista aktiivisuutta verrokkiin verrattuna sekä Prokollageenin tyypin I biosynteesin mittaustuloksissa että MMP{20}}:n estävän aktiivisuuden mittaustuloksissa, mikä osoitti potentiaalia ihon ryppyjen parantamiseen. Erityisesti SE-E osoitti parasta aktiivisuutta.
Kuva 2.CCD{0}}sk- ja B16F10-solujen solujen elinkelpoisuus S. polyrhiza -uutteilla ja -fraktioilla käsittelyn jälkeen.
MMP{0}} ja MMP-9 proteiinin ilmentymistä estävän aktiivisuuden mittaustulos
Ikääntymiseen liittyvän MAPK:n vaikuttavin tekijä on c-fos, johon p38 vaikuttaa. Kun nämä tekijät aktivoituvat, ne säätelevät voimakkaasti MMP:iden ilmentymistä [31]. Tässä tutkimuksessa mitattiin MMP-perheen MMP-1 ja MMP-9 proteiiniekspressio. SE-E-käsittelyryhmässä MMP{6}}:n ja MMP{7}}:n proteiiniekspressio estyi pitoisuudesta riippuvaisella tavalla pitoisuuksilla 5, 10 ja 25 ug/ml (kuvio 4). Erityisesti, kun mitattiin MMP-1-proteiinia, sen ilmentymistä estävä aktiivisuus oli 58,2 prosenttia pitoisuudella 25 ug/ml. Tämä tulos osoittaa samanlaista suuntausta verrattuna vuoripeiliuutteen EtOAc-fraktioon [32], ja vuoripeilin EtOAc-fraktiolla oli 60 prosenttia MMP{19}}-ekspressiota estävää aktiivisuutta pitoisuudella 100 ug/ml. SE-E:llä vahvistettiin olevan erinomainen estoaktiivisuus.
Melaniinin biosynteesiä estävän aktiivisuuden mittaustulos ja solujen tyrosinaasin aktiivisuuden mittaustulos
Ihon tummuminen johtuu siitä, että ihossa olevat melanosyytit lisäävät melaniinin tuotantoa vasteena ulkoisille ympäristöille, kuten UV-altistukselle. Raaka-aineiden ja aineiden valkaisutehokkuuden vahvistamiseksi on pääosin etsitty melaniinia tuottavan entsyymin tyrosinaasin entsyymiaktiivisuuden estoa. On ollut monia raportteja sellaisten mekanismien tutkimuksesta, jotka häiritsevät SW:n ja SE:n melaniinin biosynteesiä estävän aktiivisuuden mittaustuloksia. Kuvassa 5 on esitetty. SE:n tapauksessa estoaktiivisuus oli 9,6 prosenttia pitoisuudella 25 ug/ml, ja SE-E:n tapauksessa melaniinin biosynteesiä estävä aktiivisuus oli fraktioista paras pitoisuudella 25 ug/ml. 15,4 prosentilla. Chon tutkimusraportin [35] mukaan EtOAc-fraktio oli fraktioiden joukossa paras osoittamalla 15 prosentin vähennystä melaniinin biosynteesissä kokeellisella pitoisuudella 100 ug/ml vihreän merileväuutteen EtOAc-fraktiota. Tämä on kokeellinen tulos, joka on samanlainen kuin EtOAc-fraktiolla, jolla on paras aktiivisuus Bupyeongcho-fraktioiden joukossa.
Kuva 3.Prokollageenisynteesi ja MMP{0}} estoaktiivisuus ihmisen ihon fibroblasteissa, jotka on käsitelty uutteilla ja fraktioilla
Tyrosinaasi on tärkein entsyymi melaniinin tuottamiseksi tyrosiinista, kun iho altistuu ultraviolettivalolle. Tiedetään, että melaniinin tuotantoa voidaan estää estämällä tyrosinaasiaktiivisuutta, mikä estää täplien, pisamioiden ja ikääntymiseen liittyvän eryteeman induktion [36]. Solunsisäisen tyrosinaasiaktiivisuuden mittaamiseksi B16F10-melanoomasoluja käsiteltiin Bupyeongcho-etanolilla ja kuumavesiuutteella tyrosinaasiaktiivisuuden mittaamiseksi. 13 näytetään. SW ja SE osoittivat 2,7 ja 13,8 prosenttia solunsisäistä tyrosinaasia estävää aktiivisuutta pitoisuudella 25 ug/ml, vastaavasti. Fraktion tapauksessa SW-E oli 22,0 prosenttia, mikä osoitti parasta estävää aktiivisuutta.
MITF:n, TRP-1, TRP-2 ja tyrosinaasin proteiinin ilmentymistä estävän aktiivisuuden mittaustulos
B16F10-melanoomasolujen tiedetään indusoivan melaniinin synteesiä melanosyyttisolukalvossa olevan melanokortiini 1 -reseptorin (Mc1R) kautta [37]. Tässä prosessissa mikroftalmian transkriptiotekijä (MITF) siirtyy ytimeen ja sitoutuu tyrosinaasin, TRP-1 ja TRP-2 DNA-promoottoreihin, ja sen tiedetään indusoivan melanogeneesiä lisäämällä kunkin niistä ilmentymistä. geeni [7]. Niistä TRP-1 ja TRP-2 ovat proteiineja, jotka tunnetaan tyrosinaaseihin liittyvinä proteiineina ja jotka hapettavat 5,6-dihydroksi-indoli-2-karboksyylihapon (DHICA) indoliksi{{14} },6-kinoni-2-karboksyylihappo, joka on tummanruskea. TRP-2, jota kutsutaan myös DCT:ksi, on entsyymi, joka isomeroi DOPA-kromin DHICA:ksi [38]. MITF:n esto voi tukahduttaa melaniinipigmentin tuotannon estämällä tyrosinaasin, TRP-1 ja TRP-2 ilmentymistä. SE-E:n vaikutukset melaniinin synteesiin liittyvien MITF-, tyrosinaasi-, TRP-1- ja TRP-2-proteiinien ilmentymiseen mitattiin pitoisuuksilla 5, 10 ja 25 ug/ml, ja kuva 1e. Erityisesti MITF:n tapauksessa vahvistettiin, että SE-E inhiboitui 18,0 prosenttia verrattuna kontrolliin pitoisuudella 25 ug/ml. Myös pitoisuudella 25 ug/ml tyrosinaasin, TRP-1:n ja TRP-2:n ilmentyminen väheni 21,6 prosenttia, 6,3 prosenttia ja 10,4 prosenttia. Nämä tulokset osoittavat, että SE-E:tä voidaan kehittää valkaisuaineena, joka estää tyrosinaasin, TRP-1 ja TRP-2 ilmentymisen MITF:n eston kautta ja sen seurauksena tukahduttaa melaniinipigmenttiä muodostus.
Vaikka köyhässä ympäristössä elävää vesikasvi Bupyeongchoa on käytetty yrttilääkkeenä yksityisellä sektorilla, tutkimusta ei ole toistaiseksi tehty riittävästi. Tässä tutkimuksessa arvioitiin antioksidanttisia, ryppyjä ehkäiseviä ja valkaisevia vaikutuksia Bupyeongcho-uutteen ja Bupyeongcho-fraktion tehokkuuden mittaamiseksi toiminnallisena kosmeettisena materiaalina. Tämän seurauksena Bupyeongchon 70-prosenttinen etanoliuute (SE) ja sen etyyliasetaattifraktio (SE-E) olivat DPPH:ta ja ABTS:ää sekä radikaaleja poistavaa aktiivisuutta, solunsisäistä prokollageenibiosynteesiaktiivisuutta, MMP-1-inhibiittoriaktiivisuutta, melaniinin biosynteesiä estävää aktiivisuutta, solunsisäisellä tyrosinaasia estävällä aktiivisuudella jne. todettiin olevan erinomaiset fysiologiset aktiivisuudet. Erityisesti SE-E:ssä vahvistettiin korkea ryppyjä ehkäisevä ja valkaiseva aktiivisuus, mikä lisäsi mahdollisuuksia kehittyä erinomaiseksi toiminnalliseksi materiaaliksi.
