Tutkimus Cistanche Deserticolasta peräisin olevien fenyylietanoidiglykosidien antioksidanttivaikutuksista

Yhteystiedot: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Sähköposti:audrey.hu@wecistanche.com

LI Li et al (Changchun Normal Universityn keskuslaboratorio, Changchun, Jilin 130032)

Abstrakti[ Tavoite ] Tutkimuksen tavoitteena oli tutkia systemaattisesti fenyylietanoidiglykosidien antioksidanttisia vaikutuksiaCistanchedeserticola. [Menetelmä ] C. deserticola -uutteen antioksidanttiaktiivisuuden mittaamiseen käytettiin kahta mallijärjestelmää, vapaaradikaali-2,2-difenyyli-l-pikryylihydratsyyli (DPPH') -määritystä ja fotokemiluminesenssi (PCL) -määritystä, akteosidi, isoakteosidi ja ekinakosidi. [ Tulos] Tulokset osoittivat, että kokonaisfenolipitoisuudet (TPC:t) C. deserticolan ekinakosidissa, akteosidissa, isoakteosidissa ja 80-prosenttisessa etanoliuutteessa olivat 753,95, 659,94, 356,14 ja 14,73 mg gallushappoa/g näytettä. C. deserticola -uute osoitti voimakasta antioksidanttiaktiivisuutta PCL-kokeessa, mitä seurasi ekinakosidi, akteosidi ja isoakteosidi. Ekinakosidilla oli kuitenkin voimakasta antioksidanttiaktiivisuutta DPPH-kokeessa, jota seurasivat akteosidi, isoakteosidi ja C. deserticola -uute.

[ Johtopäätös ]Tämä tutkimus voisi tarjota viitteitä C. deserticolan fenyylietanoidiglykosidien farmakologiseen ja biologisen aktiivisuuden tutkimukseen.

Avainsanat Cistanche deserticola ; akteosidi; Isoakteosidi; ekinakosidi; Antioksidanttiaktiivisuus ; DPPH ; PCL

Cistanche (Cistanche deserticolaYC Ma.) on kasviCistanchesuvun (Oro-banehaeeeae)Cistanchesuku (Cistanche). Cistanchen kuivattu mehevä varsi, jossa on hilseileviä lehtiä. Useat tutkimukset ovat osoittaneet, että Cistanche-kasvien tärkeimmät vaikuttavat aineet ovat fenetyylialkoholiglykosidiyhdisteitä. . Fenyylietanoliglykosidiyhdiste kuuluu eräänlaiseen polyfenoliyhdisteeseen, jota on laajalti levinnyt monenlaisiin kasveihin. Farmakologiset testitutkimukset ovat osoittaneet, että näillä yhdisteillä on laaja valikoima farmakologisia ja biologisia aktiivisuuksia, kuten hepatotoksiinia, anti-inflammatorisia, analgeettisia ja antioksidanttisia vaikutuksia. Näistä silmiinpistävin asia on, että fenoksietanoliglykosidiyhdisteellä on erittäin hyvä antioksidanttiaktiivisuus. Kirjoittaja suoritti pääasiassa systemaattisen analyysin fenetyylialkoholiglykosidiyhdisteiden antioksidanttisesta vaikutuksestaCistanche, käyttämällä kahta antioksidanttia in vitro -arviointimenetelmää, nimittäin fotoehemiluminesenssiä (PCL) ja 2,2-difenyyli-1-pierylhydroksyyliä (DPPH'). Kahta erilaista järjestelmää käytettiin mittaamaan 80:n antioksidanttiaktiivisuutta prosentin etanoliuuteCistanche, ergosterosidi, isoergosidi, jaekinakosidi.

1 Materiaali ja menetelmät

1.1 Näytteet ja reagenssit

Cistanche (Cistanche deserticola)lääkeaineet ostettiin Beijing Tongrentang Pharmacylta.Ergosterosidi, isoergosidi,ekinakosidi, Folin. Ciocalteu-reagenssi, gallushappo, 2,2-difenyyli-1-pikryylihydratsyyli (DPPH) jne. ostettiin SigmaChemicalCo:lta. Yritys (St. Louis, Mo). PCL-analyysiin käytetyn liuottimen toimitti Analytik Jena AG (Berliini, Saksa). Muut reagenssit ovat kaikki analyyttisiä reagensseja (tuottaja Beijing Chemical Plant). Vesi on ultrapuhdasta vettä (18,2 nPa).

1.2 Näytteenotto

Punnitse tarkasti 2,0005 gCistanchenäytejauhe, käytä 50rnl 80-prosenttista etanolia ultraääniuuttoon huoneenlämpötilassa 0,5 tunnin ajan, uuta kahdesti, suodata näyteliuos, pyöröhaihduta kuivaksi (<40oc), use="" 100ml="" of="" distilled="" water="" dissolve,="" degrease="" twice="" with="" 100ml="" n-hexane,="" discard="" the="" n-hexane="" solution,="" extract="" the="" water="" part="" with="" 100="" ml="" of="" water-saturated="" n-butanol="" 3="" times,="" combine="" the="" n-butanol="" extracts,="" rotary="" evaporate="" to=""><40oc), and="" use="" 4ml="" for="" the="" residue="" the="" volume="" of="" absolute="" ethanol="" is="" fixed="" to="" obtain="" a="" sample="" of="">Cistanche deserticola.

1.3 Näytteen kokonaispolyfenolipitoisuuden määrittäminen

Näytteen fenolin kokonaispitoisuus määritetään F{{0}}lin-Ciocaheu-menetelmällä, ja tulos ilmaistaan ​​milligrammoina gallushappoa grammaa uutetta kohti. Ota näyteliuos, jonka pitoisuus on tietty 0,2rnI (jotta absorbanssi putoaa standardikäyrään), lisää 1 ml Folin-Ciocaheu-reagenssia, jonka pitoisuus on 0,5 mol/L, ja lisää sitten 0,8 ml natriumkarbonaattiliuosta, jonka pitoisuus on 7,5 prosenttia, jotta se sekoittuu hyvin, sijoitettiin huoneenlämpötilaan 0,5 tunniksi ja mitattiin sitten absorbanssi 765 nm:ssä (ultraviolettinäkyvä spektrofotometri: DU800, Beckman Couher, Inc. USA). Käytä gallushappoliuosta (massakonsentraatioalue on 0.02-0.20 me,/m1) standardikäyrän luomiseen, ja kaikki testit toistetaan kahdesti.

1.4 Antioksidanttiaktiivisuus in vitro -analyysi

1.4.1 PCL-menetelmän määritys.

Testissä käytettiin Photochem@ (Berliini, Saksa) ultranopeaa antioksidantti- ja vapaiden radikaalien automaattista analysaattoria. Periaatteena on tuottaa vapaita radikaaleja fotokemiallisella menetelmällä ja käyttää kemiluminesenssimenetelmää vapaiden radikaalien havaitsemiseen. Kokeessa käytettiin valolle herkistävää ainetta, jolla oli fotokemiallinen viritysvaikutus reaktiomolekyylien virittämiseen siten, että ultraviolettilampun vaikutuksesta hapetusreaktio tapahtui 1000 kertaa. normaalia nopeammin, ja vapaat radikaalit muodostuivat nopeasti." Valitse PCL-ACW-Kit -menetelmä Mittaa psyllium-alanäytteiden vesiliukoisten komponenttien antioksidanttiaktiivisuus. Pipetoi 1.0ml reaktiopuskuria (mukaan lukien pitoisuus 0,1 mol/l natriumkarbonaattia, pH-arvo 10,5 ja pitoisuus 0,1 mmol/LNA, yksi EDTA, 1,5 ml ACW-laimennusaine (vesi) ), pitoisuus 1mmol/LLumino1) toimii valoherkistäjänä reaktiomolekyylien virityksessä, jolloin vapaita radikaaleja syntyy nopeasti, ja samalla fotokemiluminoivana aineena. Sekä näyte että standardi ovat 10 "l. Mittaamalla L:n eri pitoisuudet (0,5, 1,0, 2,0 ja 3,0 nmol/L). Askorbiinihapon standardikäyräyhtälö on Y=24,640Ox plus 2,9311, R²=0,9969. Näyte tai standardiliuos on laimennettava testissä siten, että viiveaika on standardikäyrän lineaarisen alueen sisällä. Photochem luo standardikäyrän ja testaa näytteen antioksidanttiaktiivisuuden automaattisesti, ja näytteen antioksidanttiaktiivisuus on yhtä suuri kuin L. Laskettu askorbiinihapon nanomoolien lukumäärällä.

1.4.2 DPPH-menetelmän määritys.

Difenyylipikryylihydratsinoradikaali [DPPH ·] on stabiili typpikeskeinen radikaali, jonka suurin absorptio aallonpituudella 515 nm. [DPPH ·]-metanoliliuos on violetti, ja sen pitoisuudella on lineaarinen suhde absorbanssiin." Kun [DPPH ·]-metanoliliuokseen on lisätty antioksidantteja, antioksidantit voivat yhdistyä [DPPH ·]-vapaiden radikaalien kanssa tai korvata ne muodostaen [DPPH ·] ] Vapaiden radikaalien määrä vähenee ja liuoksen väri vaalenee, mikä ilmenee absorbanssin jatkuvana vähenemisenä aallonpituudella 515 nm, kunnes se saavuttaa stabiilisuuden." Testissä käytettiin metanolin sijasta etanolia. Punnitse [DPPH ·] tarkasti ja määritä konsentraatioksi 0. [DPPH ·]:n 0.040 76mg/ml etanoliliuos saadaan [DPPH ·]:n standardikäyrä: Y: 18.032x-0.0016 , R=0.9993. Menetelmä vapaiden radikaalien jäännösnopeuden mittaamiseksi viittaa kirjallisuuteen [16]. Käytä etanolia liuottimena, valmista eri konsentraatiot näytettä ja standardiliuosta, ota vastaavasti 0,1 ml näytettä tai standardiliuosta ja lisää 3,9 ml [DPPH·]-standardiliuosta, jonka massapitoisuus on 2,5 mg/l (tällä hetkellä käytössä) korvaa näyteliuos etanolilla nollanäytteenä. Ravista sekoitettua liuosta, käytä kyvettiä sen absorbanssin mittaamiseen eri aikoina aallonpituudella 515 nm ja muunna se [DPPH·]:n massapitoisuudeksi standardikäyrän mukaisesti [DPPH·]:n jäännösnopeuden laskemiseksi. [DPPH ·]:n jäännösnopeuden ja vastaavan lisätyn näytemäärän mukaan voidaan piirtää käyrä [DPPH -] vapaiden radikaalien poistamiseksi näytteestä. [DPPH ·]:n massapitoisuuden ja absorbanssin välisen suhdekäyrän mukaan vapaiden radikaalien sieppaajan lisäämisen jälkeen mitattu absorbanssi voidaan muuntaa [DPPH ·]:n massapitoisuudeksi [DPPH ·]:n laskemiseksi. vapaiden radikaalien sieppaajan lisäys. Jäännösnopeuden laskentakaava on seuraava: [DPPH ·]REM=[DPPH·]/[DPPH·]r=0×100 prosenttia missä [DPPH·] on DPPH:n massapitoisuus · tietyllä hetkellä vapaiden radikaalien poistoprosessissa, [DPPH·]:. Onko DPPH·:n alkuperäinen massapitoisuus. Lisättyjen antioksidanttien lukumäärän ja [DPPH ·]:n jäännösnopeuden mukaan muodostetaan näiden kahden välinen suhdekäyrä, ja regressioyhtälö voidaan saada lineaarisen regressioanalyysin avulla. Regressioyhtälön mukaan voidaan laskea antioksidanttiannos, kun [DPPH ·]:n jäännösnopeus on 50 prosenttia. Puoli esto. [DPPH·]:n vapaiden radikaalien poistokäyrän mukaan näytteiden tai standardien eri pitoisuuksista lasketaan näytteen määrä EC, kun [DPPH·]:n alkuperäinen massapitoisuus pienenee 50 prosenttiin (stabiili tila). Mitä pienempi EC, sitä vahvempi kyky poistaa vapaita radikaaleja." Testaa 3 kertaa rinnakkain.

cistanche

2 Tulokset ja analyysi

2.1 Näytteen kokonaispolyfenolipitoisuuden määritys Polyfenolin kokonaispitoisuuden määrittämisessä otetaan huomioon näytteen kokonaispolyfenolipitoisuus.ekinakosidion korkein, mikä on 753,95 mg gallushappoa/g. Sen jälkeen ergosteroidiglykosidit, isoergosteroidiglykosidit ja raakauutteetCistanche, jotka olivat 468,3, 356,14 ja 14,73 mg gallushappoa/g, tässä järjestyksessä.

2.2 Näytteen antioksidanttiaktiivisuuden määrittäminen

2.2.1 PCL-ACW-menetelmän määritystulokset. PCL-ACW-antioksidanttitestissä antioksidanttikapasiteetti on 1txgCistanchelääkeaine vastaa 15,68 nmol L-askorbiinihapon antioksidanttikapasiteettia; 1 gekinakosidivastaa 14,03 nmol askorbiinihapon antioksidanttikapasiteettia Aktiivisuus: 1txgergosterosidivastaa 11,44 nmolL askorbiinihapon antioksidanttikapasiteettia; 1xg isomergosterosidia vastaa 8,24 nmol askorbiinihapon antioksidanttista aktiivisuutta.

2.2.2 DPPH-menetelmän mittaustulokset. Taulukosta 1 voidaan nähdä, että se on tyhjennetty. Vapaiden radikaalien kyvyn järjestys onergosterosidi, ekinakosidi, isoergosidi ja raakauuteCistanche, joiden joukossa ergo puoli jaekinakosidiniillä on periaatteessa sama antioksidanttikapasiteetti DPPH-testissä. Sen näkee tästä. Koska näytteiden mittaamiseen käytetään erilaisia ​​in vitro antioksidanttitestijärjestelmiä, antioksidanttivaikutusten mekanismi on erilainen ja tulokset voivat olla epäjohdonmukaisia. Tämä on myös testissä todettu. Siksi on tarpeen valita muita antioksidanttianalyysijärjestelmiä lisävarmennusta varten.

echinacosie

viittauksia

[1] Yang Cuiping, Su Weiwei. Lihakeiton tutkimuksen edistyminen[J]·Chinese Medicinal Materials, 2001, 24(12): 907-909.

[2]Lei Li, Song Zhihong, Tu Pengfei Cistanchen kasvien kemiallisten aineosien tutkimuksen edistyminen[J].Chinese Herbal Medicine, 2003, 34(5):473 -476.

[3]HIROMI KOBAYASHI, HIROKO KARASAWA JOSHIO MIYASE. Tutkimukset aineosista Cistanchis Herba. HEI. Uusien fenyylipropanoidiglykosidien, Cistanosides A ja B[ J], eristäminen ja rakenteet. Chem. Pharm Bull, 19^,32(10):3009 -3014.

[4]LI LI, RONG TSAO, RAYMOND YANG ym. Fenyylietanoidiglykosidien eristäminen ja puhdistaminenCistanche deserticolanopealla vastavirtakromatografialla[ J ]. Food Chemistry, 2008,1(^:702-710.

[5]LI LI, RONG TSAO, LIU ZQ ym. Aktek^idin ja isoakteosidin eristäminen ja puhdistaminen Plantago psyllium L.:stä suuren nopeuden vastavirtakromatografialla [J]. Journal of Chromatography A, 2005, 1063: 161-169.

[6]RAVN H, NISHIBE S, SASAHARA M et al. Fenoliyhdisteet Plantago Asiaticasta[ J]. Phytochemistry, 1990, 29: 3627-3631.

[7]TOYAMA Y, MATSUMOTO M, NISHIOKA I. Fenoliglykosidit Rehmannia gluiinosa var. purpurea [J]. Phytochemistry, 1987, 26: 983-986.

[8] Wang Xiaowen, Jiang Xiaoyan, Wu Ji J Ya, et ai. Cistanche cistanche -kokonaisglykosidit in vitro poistavat vapaita radikaaleja ja suojaavat vaikutukset OH:n aiheuttamiin DNA-vaurioihin [J]. Chinese Pharmaceutical Journal, 2001, 36(1): 29-31.

[9]XIONG Q, HASE K, TEZUKA Y ym. Fenyylietanoidien hepatosuojaava vaikutusCistanche deserticola[J]. Planta Med, 1998, 64:120.

[10]SCHAPOVAL EES, WINTER DE VARGAS MR, CHAVES CG, et al. Stachytarpheta cayeunensis -bakteerin uutteiden ja eristettyjen yhdisteiden anti-inflammatoriset ja antinosiseptiiviset vaikutukset [J]. J Ethnopharmacol, 1998, 60: 53.

[11] LI J, WANG PF, ZHENG RL, et ai. Fenyylipropanoidiglykosidien suojaaminen Pediculariesilta oksidatiivista hemolyysiä vastaan ​​in vitro [J]. Planta Med, 1993, 59:315-317.

[12] HE ZD, LAU KM, Xu HX, et ai. Brandisia-syövän fenyylietanoidiglykosidien antioksidanttivaikutus [J]. Ethnopharmacology, 2000, 71:483-486.

[13]XIONG Q, KADOTA S, TANI T et ai. Fenyylietanolin antioksidanttiset vaikutuksetCistanche deserticola[J]. Biol Pharm Bull, 1996, 19: 1580-1585.

[14]TSAO R, YANG R, XIE S et al. Mitkä polyfenoliyhdisteet vaikuttavat omenan antioksidanttivaikutukseen? [J]. J Agric Food Chem, 2005, 53:4989-4995.

[15] POPOV IN, LEWIN G. Antiradikaalisen aktiivisuuden hiotokemiluminesenssi havaitseminen: U. Ei-entsyymien vesiliukoisten antioksidanttien testaus [J]. Free Rad Biol Med, 1994, 17: 267-271.

[16]BRAND-WILLIAMS W, CUVEHER ME, BERGET C. Vapaiden radikaalien menetelmän käyttö antioksidanttiaktiivisuuden arvioinnissa [J ]. Lebensm Wiss Technol, 1995, 28:25-30.

[17] Li Chunyang, Xu Shiying, Wang Zhang. DPPH-menetelmä, jolla määritetään rypäleen siemenen proantosyanidiinien kyky poistaa vapaita radikaaleja [J]. Journal of Food and Biotechnology, 2006, 25(2)" 02-106.

SCHLESIER K, HARWICH M, BOHM V, et ai. Antioksidanttiaktiivisuuden arviointi erilaisilla in vitro -menetelmillä [J ]. Free Radical Research, 2002, 36(2):177-187.