Floridsiinille herkkä ekinakosidin ja akteosidin kuljetus ja muuttunut imeytymisreitti suolistosta Cistanche Tubulosa -uutteen levittämisen jälkeen

Lisätietoja:ali.ma@wecistanche.com

Tadatoshi Tanino et ai

Abstract Objectives

Tämän tutkimuksen tavoitteena oli tarkastella hyödyllisiä vaikutuksiaCistanche tubulosa -uuteekinakosidin (ECH) ja akteosidin (ACT) alhaisen suolen läpäisevyyden parantamiseksi.

menetelmät

ECH:n ja ACT:n imeytyminen sisäänCistanche tubulosa -uuteluonnehdittiin ihmisen suoliston Caco{0}}-solujen yksikerroksisilla aineilla, joissa oli ehjiä yhdisteitä. Glukoosinkuljettajasta riippuvainen ECH:n ja ACT:n absorptio varmistettiin in situintestinal -perfuusiotekniikalla.

Avainlöydökset

Näennäinen läpäisevyys (Papp) ei eronnut merkittävästi ehjän ECH:n ja ehjän ACT:n välillä. Floridsiinin läsnäollessa theECH:n ja ACT:n Papp suurella annoksella pieneni 20 prosenttiin vastaavasta ei-hoidosta, mutta floretiini ja verapamiili eivät muuttaneet sitä.Cistanche tubulosa -uutepienillä ja suurilla annoksilla paransivat ECH:n ja ACT:n Papp-arvoa (molemmat kolminkertaisesti), mikä johti niiden suureen osallistumiseen natriumista riippuvaiseen glukoosin kuljettajasta riippumattomaan imeytymiseen. Pienellä pitoisuudella floridsiini suppressoi merkittävästi portaaliveren ECH- ja ACT-tasoja.

Johtopäätös

Ruokavalio ja lääkeCistanche tubulosa -uuteECH:n ja ACT:n suolistosta tapahtuvan imeytymisen tehostaminen voi auttaa parantamaan ihmisten terveyden hallintaa, vaikka floridsiinille herkän kuljetuksen osallistumista tulisikin vähentää.

Avainsanatakteosidi; Caco{0}}-solujen yksikerrokset;Cistanchetubulosa-uute; ekinakosidi; floridsiinille herkkä glukoosin kuljettaja

Cistanche tubulosa -uute

Napsauta Cistanche tubulosa -jauheeseen

Johdanto

Cistanche tubulosan juuria on perinteisesti käytetty lääketieteessä ja ruoassa.Cistanche tubulosa -uutetiedetään olevan farmakologisia vaikutuksia erilaisiin aivosairauksiin, ikääntymisen estotoimintoihin, rasva-aineenvaihduntaan ja hiusten kasvuun.[1–4]Viime aikoina on eristetty iridoideja, monoterpenoideja, fenyylietanoidiglykosideja ja lignaaneja.Cistanche tubulosa[5,6] Fenyylietanoidiglykosidit, polyfenoliyhdisteiden luokka, ovat tärkeimmät kemialliset ainesosat Cistanche-lajeissa[7], vaikka niiden määrät vaihtelevat eri lajien välillä. Ekinakosidi (ECH; kuva 1) on yksi HerbaCistanchiksen tärkeimmistä fenyylietanoidiglykosideista. Bakteerialkuperää olevat entsyymit suolistossa hydrolysoivat sen akteosidiksi (ACT; kutsutaan myös verbaskosidiksi). [8,9] ECH:lla ja ACT:llä on jyrsijäeläinten maksansuojaus[10] ja tulehdusta ehkäisevä vaikutus[11]. Yllättäen erittäin vesiliukoinen ECH parantaa käyttäytymis- ja neurokemiallisia tuloksia Parkinsonin taudin hiirimallissa ja estää kaspaasin{10}} ja kaspaasin-8 aktivaatiota pikkuaivojen jyväshermosoluissa.[9] Tiedetään hyvin, että veri-aivoeste rajoittaa tiukasti ksenobioottien pääsyä ja jakautumista aivoihin verestä. Wu et al.[12] osoittivat myös, että vesiliukoinen ACT jakautui nopeasti rottien aivokudoksiin. Siksi ECH ja ACT voidaan kuljettaa aivoihin, suolistoon ja maksaan tietyn järjestelmän (eli järjestelmien) avulla.

Vaikka on vahvaa näyttöä siitä, että kulutusCistanche tubulosa -uuteon hyödyllistä ihmisten terveydelle, puhtaan ECH:n läpäisevyys Caco{{0}}-solumonokerrosten läpi apikaalisella pitoisuudella 8,4 ± 1,6 ug/ml on yhtä suuri tai pienempi kuin parasellulaarisen kuljetusmarkkermannitolin pitoisuus.[13] Kun puhdasta ECH:ta annetaan rotille suun kautta (annos, 1{{10}}0 mg/kg), imeytyminen on erittäin nopeaa (Tmax, 15 min) ja seerumin maksimipitoisuus on hyvin pieni (Cmax, 0,61 ± 0,32 ug/ml).[14] ECH:n absoluuttinen biologinen hyötyosuus on vain 0,83 prosenttia. Vastaavasti kun Caco-2-soluja inkuboidaan fenolihakeen kanssa, joka on osittain puhdistettu oliivitehtaan jätevedestä, puhdas ACT:n otto on nopeaa, huippukertymä tapahtuu 30 minuutin kuluttua ja kertymisen kokonaistehokkuus on 0,1 prosenttia, jolloin solunsisäinen taso on 130 pmol/mg soluproteiinia.[15] Rotilla puhtaan ACT:n maksimipitoisuus (0,13 ± 0,03 ug/ml) saavutettiin 30 minuutin sisällä 100 mg/kg:n oraalisen annostelun jälkeen[12], mikä tarkoittaa nopeaa imeytymistä suolistosta. ACT:n sekä ECH:n oraalinen biologinen hyötyosuus on melko alhainen (0,12 ± 0,04 prosenttia), mikä viittaa ensikierron mahdollisiin vaikutuksiin suolistossa ja maksaassa. Rotan sapessa ECH:n metylaatio- ja glukuronidaatiokonjugaatit ovat tärkeimpiä metaboliitteja[16], vaikka maksametabolian laajuus on edelleen epäselvä. Havaitsimme alustavasti, että ECH ja ACT olivat melko stabiileja rotan suolen limakalvon ja keinotekoisen mahahapon homogenaateissa (tietoja ei esitetty). Najar et al.[17] osoitti, että ACT inhiboi P-glykoproteiini (P-gp)-ATPaasi-aktiivisuutta samalla tavalla kuin verapamiili (edustava P-gp:n estäjä), mikä viittaa P-gp:n modulaattoriin; on kuitenkin epävarmaa, onko ACT:tä saatavilla P-gp-substraattina. Mielenkiintoista on, että viimeaikaiset havainnot ravinnon flavonoidi-D-glukosideista osoittivat, että monilääkeresistenssiproteiini (MRP2) peitti natriumista riippuvaisen glukoosinkuljettajan (SGLT){45}}välitteisen kversetiini-4'-O- -glukoosin sisäänoton,[18]. ,19], joka on vastuussa erittäin huonosta imeytymisestä. Kuitenkin hyvin vähän tiedetään polyfenoliglukosidien herkkyydestä imeytyville kuljettajille, mukaan lukien glukoosinkuljettajat. Tieto kversetiini4'-glukosidin ja nopeasti veri-aivoesteen läpäisevän ECH:n absorptioominaisuuksista sai meidät tutkimaan kuljettajalle herkkien Cglyhenyideslettakein tubulosa.

Tässä tutkimuksessa tutkimme glukoosinkuljettajavälitteistä ehjän ECH:n ja ACT:n imeytymistä käyttämällä ihmisen suoliston Caco-2-solujen yksikerroksia. Samanaikaisesti ECH:n ja ACT:n absorptiokuljetus rinnakkainCistanche tubulosa -uuteoli ominaista in vitro -mallilla ja in situ -suolen perfuusiojärjestelmällä portaaliverinäytteiden ottamiseksi, mikä erottaa helposti imeytymisen laajuuden ja maksan ensikierron välttämisen.

Materiaalit ja menetelmät

Materiaalit

Intact ECH ja ACT olivat anteliaita lahjoja EishinTrading Co., Ltd:ltä (Osaka, Japani). Floridsiini ja floretiini ostettiin yhtiöltä Tokyo Kasei Co., Ltd. (Tokio, Japani). Verapamiili ja p-kumariinihappo, joita käytettiin sisäisinä standardeina korkean suorituskyvyn nestekromatografiassa (HPLC) määrityksessä, hankittiin Sigma-Aldrichilta (St Louis, MO). ,USA). Kaikki muut käytetyt kemikaalit olivat analyyttistä laatua ja kaupallisesti saatavilla.

Kasvimateriaali ja metanoliuutteen valmistus

C. tubulosa (SCHRENK) R. WIGHT (Orobanchaceae) on yksivuotinen loiskasvi, joka kasvaa Salvadoraor Calotropis -lajin juurissa ja on levinnyt Pohjois-Afrikan, Arabian ja Aasian maihin. Kuivatut C. tubulosa -varret jauhettiin ja uutettiin kolme kertaa metanolilla refluksoiden 3 tunnin ajan. Liuottimen haihdutus alipaineessa antoi metanoliuutteen. Metanoliuute (kaupallinen laatu, eränro 20070130; kauppanimi, Sabaku Ninnjinn Kanka) oli runsas lahja Eishin Trading Co., Ltd:ltä Muraokan ja Morikawan (Kinkin yliopisto, Japani) kautta, ja kasvitieteellisen tunnistamisen teki professori Jia Xiaoguang vuonna Xinjiangin perinteisen kiinan ja etnologisen lääketieteen instituutti.

Kasviuutteen analyysi: kromatografia

Määritimme ECH- ja ACT-sisällötCistanche tubulosa -uute(erä nro 20070130) alla kuvatulla HPLC-analyysillä. Saadut tiedot on esitetty taulukossa 1.

Soluviljely

Caco{{0}}-soluja, jotka ostettiin American Type CultureCollectionista (ATCC, Rockville, MD, USA), käytettiin kohdissa 38–53. Niitä kasvatettiin viljelyalustassa, joka koostui Dulbeccon modifioidusta Eagle's-elatusaineesta (DMEM, Nacalai Tesque Co., Kioto, Japani), jota oli täydennetty 0,1 mM ei-välttämättömillä aminohapoilla, 10 % lämmöllä inaktivoitua naudan sikiön seerumia, 100 ui U/ml penisilliini G:tä ja 0,1 mg/ml streptomysiinisulfaattia.

Liikennetutkimukset

Caco-2-solut maljattiin tiheydellä 6,4 × 103 solua/cm2 polykarbonaattisuodattimille. Yksikerroksisia kerroksia käytettiin kuljetuskokeissa 21–25 päivää kylvön jälkeen. Ehjä ECH ja ACT, jotka vastasivat niiden sisältöäCistanche tubulosa -uute (4.5 and 13.5 mg/ml) were mixed with DMEM medium containing 0.5% dimethylsulfoxide to maintain the integrity of the cell monolayer over the periods of the experiments. Intact ACT equivalent to ECH content in the extract was also dosed in the incubation medium. The extract was suspended in a DMEM medium and was centrifuged to remove insoluble components. Supernatants were loaded to the apical side. At the indicated times, an aliquot of the incubation medium was withdrawn from the basolateral side and was mixed with acetonitrile containing an internal standard for the assay. In separate experiments, phloridzin (final concentration, 1 mM) and verapamil (final concentration, 0.2 mM) was added to the apical side of the monolayer; however, phloretin (final concentration, 0.3 mM) was treated on both sides of the monolayer. The integrity of monolayers was monitored by transepithelial electrical resistance (TEER) using Millicell-ERS (Millipore, Bedford, MA, USA) before and after transport experiments. TEER values of monolayers used were >300 Ω·cm2.

Ekinakosidi sisälläCistanche tubulosa -uute

In situ suoliston perfuusio

Urospuoliset Wistar-rotat (230–250 g) saatiin SLCJapanista (Hamamatsu, Japani). Eläimiä pidettiin ilmastoiduissa huoneissa 12 tunnin valo/pimeyssyklissä 1 viikko ennen käyttöä. Rotille syötettiin tavanomaista laboratorioruokaa (Oriental Yeast Co., Ltd., Tokio, Japani) vedellä ad libitum ja niitä paastottiin yön yli ennen testiä. In-siturecirculating -perfuusiotutkimus suoritettiin Miharan et al. kuvaaman modifioidun menettelyn mukaisesti.[20] Lyhyesti sanottuna rotat nukutettiin 25-prosenttisella uretaaniliuoksella (1 mg/kg) verenpaineen laskun välttämiseksi. Keskilinjaan tehtiin vatsan viilto ja ohutsuoli paljastettiin. Sappitie sidottiin, jotta vältetään sapen erittyminen perfusaattiin. Koko ohutsuolen yhtenä osana (pohjukaissuolesta sykkyräsuoleen) huuhdeltiin normaalilla suolaliuoksella 37 asteessa 10 minuuttia, kunnes pesu näytti kirkkaalta. Silikoniletkuihin yhdistetyt lasiputket kanyloitiin sitten ohutsuolen molempiin päihin ja kiinnitettiin ompelulangalla. Sitten ohutsuolet vaihdettiin vatsaan ja kanyylit yhdistettiin peristalttiseen pumppuun. Porttilaskimo kanyloitiin polyeteeniletkulla (PE10).Cistanche tubulosa -uutekaupallisesti saatavilla oleva, suspendoitiin Krebs-Henseleit-bikarbonaattipuskuriin (pH 7,4), jolloin saatiin 4,5 mg/ml lopullinen pitoisuus, ja sentrifugoitiin 1 0 min 8000 rpm liukenemattomien komponenttien poistamiseksi. Supernatantti ilman floridsiiniä (1 mM) tai sen läsnäolo otettiin talteen säiliöön, jota pidettiin 37 ± 0,5 asteen lämpötilassa koko kokeen ajan. Ilmoitettuina aikoina verta otettiin porttilaskimokanyylin läpi. Verinäytteiden sentrifugoinnin jälkeen saadun plasman proteiini poistettiin asetonitriilillä, joka sisälsi sisäisen standardin, ja sentrifugoitiin nopeudella 3000 rpm. Supernatantit haihdutettiin ja jäännös erotettiin liikkuvalla faasilla, joka koostui asetonitriilistä ja 0,5 % etikkahaposta. Sekoitettu liuos ladattiin HPLC-kolonniin. Rottia käytettiin eettisten menettelytapojen mukaisesti Japanin hallituksen ja Kinki-yliopiston laboratorioeläinten hoitoa ja käyttöä koskevien ohjeiden mukaisesti.

HPLC-analyysi

HPLC-analyysi suoritettiin järjestelmällä, joka oli varustettu aShimadzu SPD{{0}}A, UV-detektorilla, Shimadzu LC-10A -pumpulla ja Shimadzu C-R4A kromatopakkiintegraattorilla (Kioto, Japani). ECH ja ACT erotettiin käyttämällä Inertsil ODS -pylvästä (5 μm, 4,6 × 15 0 mm, GL Sciences Inc., Osaka, Japani). Asetonitriilin ja 0,5-prosenttisen etikkahapon liikkuvaa faasia suhteessa 15:85 (tilavuus/tilavuus) käytettiin virtausnopeudella 1,0 ml/min. Havaitseminen suoritettiin aallonpituudella 334 nm

Kineettinen analyysi

Näennäiset permeabiliteettikertoimet (Papp) arvioitiin Caco-2-solujen yksikerrosten poikki tapahtuvan yhdisteen kuljetuksen lineaarisen osuuden kaltevuuden perusteella seuraavasti: P dQ dt AC app=( ) ( )

missä dQ/dt on läpäisynopeus, C0 on liuenneen aineen alkupitoisuus luovuttajakammiossa ja A on kalvon pinta-ala (4,7 cm2).

Rotan in situ -suoliperfuusiotutkimuksessa portaalilaskimossa plasman pitoisuus-aikakäyrän alla oleva alue (AUC0–90) ajankohdasta nolla viimeiseen mittaukseen laskettiin lineaarisen puolisuunnikkaan säännön mukaisesti.

Akteosidi sisälläCistanche tubulosa -uute

Fysikaalis-kemialliset ominaisuudet

Yhdisteiden polaarinen pinta-ala ja ei-polaarinen pinta-ala laskettiin käyttämällä SAS-ohjelmaa (versio 0.8, Olsson, T.; Sherbukhin, V., Synthesis and Structure Administration, 1997–2001, AstraZeneca, Cary , NC, USA). Kokeellisesti määritetyt log P- ja pKa-arvot saatiin kirjallisuudesta.

Tilastollinen analyysi

Tiedot analysoitiin yksisuuntaisella varianssianalyysillä, jota seurasi Tukeyn post-hoc-testi. Alle 5 prosentin todennäköisyysarvoja pidettiin merkittävinä.

Tulokset

Ekinakosidin ja akteosidin absorptiivinen kuljetus Caco-2-solujen yksikerrosten läpi

Hiirille ja rotille intaktia ECH[10,14] ja ACT[12,21] annetaan suun kautta annoksina 100–1000 mg/kg. TheCistanche tubulosa -uutekäytetty sisälsi noin 30 prosenttia ECH:ta ja 15 prosenttia ACT:tä annosta kohti. Koska uute muutti osmoottista painetta ja pH-arvoa inkubointiväliaineessa, pitoisuudet 4,5 ja 13,5 mg/ml määritettiin suun kautta otetun annoksen perusteella (saamattomat yhdisteet: 2–20 mg/2{{2{{31} }}} g ruumiinpainoa) hiirillä. Uute pieninä (4,5 mg/ml) ja suurina annoksina (13,5 mg/ml) sisälsi 2.0 ja 6,1 mg ECH:lle ja 1.0 ja 3.0 mg forACT, vastaavasti. Käytimme C. tubulosa -uutemääriä, jotka olivat paljon pienempiä kuin ihmisillä raportoitu ECH:n ja ACT:n oraalinen annos (uutteen suositeltu ravintomäärä: 15{41}} mg, joka sisältää noin 45 mg forECH:ta ja 22,5 mg ACT:tä). Pienillä ja suurilla koskemattomien yhdisteiden annoksilla absorptioprofiilit (kuvio 2) ja Papp eivät eronneet merkittävästi ECH:n ja ACT:n välillä ECH-ekvivalenttina (taulukko 2). Kun C. tubulosa -uutetta lisättiin suurella annoksella 13,5 mg/ml elatusaineeseen, Pappvalues ​​(1,27 ± 0,13 ja 0,34 ± 0,03 × 10-6 cm/s, vastaavasti) ECH:n ja ACT:n samanaikaisten ECH- ja ACT-arvojen olivat kolminkertaiset (0,38 ± 0,09 ja 0,10 ± 0,03 × 10-6 cm/s) koskemattomien ECH- ja ACT-arvojen (taulukko 2). Uute, toisin kuin ehjät yhdisteet, paransi merkittävästi ECH:n ja ACT:n absorptiokuljetusta.

Floridsiinin, floretiinin ja verapamiilin estävä vaikutus

To characterize the intestinal absorption of ECH and ACT, Caco-2 cell monolayers were incubated with representative inhibitors. Apical glucose transporter 1-sensitive phloridzin dramatically reduced the Papp of intact ECH and ACT to 20% of non-treatment at the high dose (Table 2). Basolateral glucose transporter (GLUT) 2-sensitive phloretin did not decrease the transport of intact ECH and ACT (Figure 3). In this study, higher concentrations (>0,3 mM) floretiinia ei voitu käyttää havaittavan solutoksisuuden vuoksi. Lisäksi P-gp on tunnistettu tärkeäksi toimijaksi, joka on vastuussa kasviperäisten lääkkeiden ja kliinisesti tärkeiden P-gps-substraattien välisestä vuorovaikutuksesta. Verapamiili ei tehostanut ehjien yhdisteiden absorptiokuljetusta (kuvio 3).

Floridsiini esti merkittävästi ECH:n ja ACT:n absorptiokuljetusta uutteessa (pieni annos) (taulukko 2 ja kuvio 4). Uute suurella annoksella tukahdutti floridsiinille herkän inhibition, vaikka ehjän ECH:n ja ACT:n kuljetus oli herkempää floridsiinille (taulukko 2).

In situ suolen perfuusiotutkimus

In situ -tutkimuksessa testasimme, olivatko ECH ja ACT inCistanche tubulosa -uutene kuljetettiin SGLT1:llä, joka sijaitsee ohutsuolen apikaalisella puolella. Kun ruokavaliouute pienellä annoksella (4,5 mg/ml) perfusoitiin, ECH ja ACT ilmestyivät nopeasti portaalivereen (kuvio 5). AUC määritettiin arvoksi 2702,8 ± 384,1 μm·min ECH:lle ja 698,3 ± 197,2 μm·min ACT:lle. Sen jälkeen kun AUC normalisoitiin sisällöllä alkaenCistanche tubulosa -uute, absorboitunut määrä ei eronnut merkittävästi ECH:n ja ACT:n välillä. SGLT1-herkkä floridsiini, toisin kuin floretiini, tukahdutti merkittävästi samanaikaisen ECH:n (AUC, 649,4 ± 248,2 μm·min) ja ACT:n (ei havaittu) absorptiokuljetusta.

Keskustelu

Jotkut kasviperäiset ainesosat ovat P-gp:n substraatteja, jotka ilmentyvät voimakkaasti maksassa, suolistossa, aivoissa ja munuaisissa. P-gp on määräävä tekijä yrttilääkkeiden, mukaan lukien mäkikuisma, kurkumiini, echinacea, ginseng, ginkgo ja inkivääri, in vivo biologiselle hyötyosuudelle, jakautumiselle ja jakelulle.[22,23]Genisteinin biologinen hyötyosuus{{5} }glukosidia, flavonoidijohdannaista, rajoitti myös suolen MRP2-kuljettaja.[24] Siksi tämä tutkimus oli suunniteltu tutkimaan ECH:n ja ACT:n samanaikaisten ravinto- ja lääkevalmisteiden absorptioominaisuuksia.Cistanche tubulosa -uute.

Polarisoidut Caco{0}}-solujen yksikerroksiset kerrokset sekä suoli[25] ekspressoivat tärkeimpiä suoliston lääkkeiden ulosvirtauksen kuljettajia, kuten P-gp:tä, MRP:itä ja rintasyöpäresistenssiproteiinia.[26]Ruoan flavonoidit kversetiinin[27] ja myrisetiinin[28] on osoitettu estävän P-gp-välitteistä ulosvirtausta sekä solulinjoissa että eläinmalleissa. Verapamiili, P-gp:n estäjä, ei muuttanut ACT:n ja ECH:n läpäisevyyttä Caco-2-solujen yksikerroksisissa kerroksissa (kuva 3), mikä osoittaa, että P-gp:n ulosvirtauspumppu ei rajoita ehjää ECH:ta ja ACT:tä. Aiemmat tutkimuksemme osoittivat, että MRP2-proteiineja ei ilmennyt Caco{13}}-solujen yksikerroksisissa kerroksissa.[29] P-gp- ja MRP{16}}välitteinen effluksi voitiin sulkea pois ECH- ja ACT-kuljetuksessa. Jotkut kversetiinin glykosidit, joilla on alhainen lipofiilisyys, imeytyivät tehokkaammin kuin kversetiini itse.[30] On myös tärkeää huomata, että ACT, jossa on sokeriosa, jakautuu nopeasti aivokudoksiin. Huomiomme on keskittynyt kahden glukoosin kuljettajan inenterosyytin yhteisvaikutukseen: SGLT:n siveltimen reunakalvossa ja helpotettuun diffuusioglukoosin kuljetukseen (GLUT) basolateraalisessa kalvossa. Caco-2-soluviljelmää voidaan käyttää mallina tutkittaessa floretiinille herkkiä GLUT2-, andphloridzin-herkkiä SGLT1- ja 2-kuljettajia.[31–34]Glukoosi kuljetetaan Caco-2-yksikerrosten apikaalista basolateraalipuolelle. suurella nopeudella Pappofilla 36,8 ± 1,1 × 10−6 cm/s.[35] Sillä on korkeampi pappt kuin solunvälisellä kuljetusmarkkerilla propranololi (23,4 ± 2,8 × 10−6 cm/s). Kuten taulukosta 2 näkyy, ehjällä ECH:lla ja ACT:llä oli paljon pienempi Papp kuin glukoosissa ja passiivisessa propranololissa raportoidulla. Laskimme jakaantumiskertoimen (oktanoli-vesi) logaritmin log P:ksi -2,32 ja 0,077 ECH:lle ja ACT:lle, vastaavasti. Polaaristen hydrofiilisten yhdisteiden uskotaan kulkeutuvan parasellulaarista reittiä pitkin (tiukkojen liitoskohtien poikki). Kaksi fenyylietanoidiglykosidia, kuten mannitoli, näyttävät kulkeutuvan solunulkoista reittiä pitkin. Floridsiini kuitenkin vähensi dramaattisesti ehjän ECH:n ja ACT:n absorptioläpäisevyyttä (taulukko 2), mikä viittaa siihen, että apicalSGLT1:llä on tärkeä rooli ehjän ECH:n ja ACT:n imeytymisessä suolistosta. Vastaavalla annoksella korkeampi hydrofobinen ACT-läpäisevyys oli lähellä ECH-läpäisevyyttä (kuva 2 ja taulukko 2). Yoshikawa et al.[36] ovat osoittaneet, että helpottavat kuljettajat (GLUT 1 ja 2) sekä floridsiinille herkkä SGLT1 ekspressoituvat intensiivisesti ohutsuolessa. Koska imeytyneet yhdisteiden määrät perustuvat sisäänoton ja eliminaation väliseen massatasapainoon, arvioimme GLUT2:n osallistumisen. Glukoosi läpäisee enterosyyttien apikaaliset kalvot SGLT1:n avulla suurella affiniteetilla ja pienellä kapasiteetilla ja poistuu basolateraalisen kalvon läpi GLUT2:n kautta alhaisella affiniteetilla ja suurella kapasiteetilla. Floretiini (spesifinen GLUT2:n estäjä) ei poistanut ehjän ECH:n ja ACT:n kuljetusta (kuva 3). Funes et al.[37] osoitti, että ACT oli vahvasti vuorovaikutuksessa fosfolipidikalvojen fosfaattiryhmien kanssa. Koska hydroksyyliryhmiä on runsaasti ACT-rakenteessa, vetysidokset näiden ryhmien ja fosfolipidien glyserolin polaaristen päiden tai fosfaattiryhmien välillä ovat todennäköisimpiä tapahtuvia vuorovaikutuksia. Kun koskematonta ECH:ta ja sitä vastaavaa ACT:tä inkuboitiin Caco-2-yksikerrosten kanssa 11 tuntia, ACT:n (0,24 ± 0,04 nmol/cm2) solukertymä oli kolminkertainen verrattuna ECH:n (0,07 ± 0,01 nmol/cm2). Ajattelimme, että SGLT{74}}herkkä ECH ja ACT siirtyivät hitaasti enterosyyteistä verenkiertoon, mikä mahdollisesti johti havaittuun matalaan Pappiin. Verrattuna erittäin hydrofiiliseen ECH:hen, ACT:n alhainen läpäisevyys voi johtua interkalaatiosta solukalvoihin.

Cistanche tubulosa -uute

Polyfenoliyhdisteitä kulutetaan yrttiseoksissa niiden kliinisen käytön aikana, ja niitä on kaupallisesti saatavilla ravintolisinä. In vitro -tutkimuksessa osoitettiin, että juoma-elintarvikkeiden ainesosien koostumus ei vaikuttanut fenolisen epikatekiinin imeytymiseen.[38] Sitä vastoin Hypericum perforatumL. tuotematriisit vaikuttavat kvertsetinglukosidien (rutiini ja isokersitriini) ja hyperosidien kulkeutumiseen Caco-2-solujen poikki, mikä johtuu eroista matriksifytokemiallisessa koostumuksessa ja kuljetusominaisuuksissa, eli soluvälitteisessä siirrossa ja kantajavälitteisessä tai aktiivisessa kuljetuksessa.[39] Tässä tutkimuksessa C. tubulosa tarjosi kolminkertaisesti suuremman transepiteliaalisen kuljetuksen kuin ehjä ECH ja ACT (kuvio 2 ja taulukko 2). Arvelemme, että komponentit sisälläCistanche tubulosa -uuteaktivoi floridsiinille herkän kuljettajan ja/tai nopeuttaa solunsisäisen ECH:n ja ACT:n eliminaatiota.Cistanche tubulosa -uutesuurella annoksella näytti peittävän suuresti floridsiinille herkän kuljetuksen tehoa (taulukko 2). Ruokavalion hiilihydraatit[40] ja proteiinit[41] ovat vuorovaikutuksessa joidenkin polyfenolien kanssa ruoansulatuskanavassa.Morikawa et al.[10] osoitti, että viisi iridoidia, kankanosidi AD ja kankanoli, monoterpeeniglykosidi, kankanosidi E, kaksi fenyylietanoidioligoglykosidia, kankanosidi F ja G sekä asyloitu oligosokeri, kankanoosi, voidaan eristääCistanche tubulosa -uute

tällä hetkellä käytössä. Muut aineosat, mukaan lukien proteiinitCistanche tubulosa -uute, jää epäselväksi. Yhdessä yllä olevien spekulaatioiden kanssa olemme suunniteltu tutkimaan, ovatko muut komponentit vuorovaikutuksessa SGLT1:n kanssa ja estävätkö ECH:n ja ACT:n absorptiota.

In vivo -kokeissa ei voida helposti erottaa imeytymisen laajuutta ja maksan läpi tapahtuvan ensikierron välttämistä. In situ -suolen perfuusiomallilla on etu in vivo- ja in vitro -malleihin verrattuna, koska koeparametreja on helppo hallita ja muiden elinten vaikutukset suljetaan pois ja suoliston verenkierto pysyy ehjänä.[22] Floridsiinille herkän glukoosinkuljettajan osallistuminen arvioitiin in situ suoliston perfuusiojärjestelmässä. Kuten kuvasta 5 näkyy, imeytyneet määrät ECH- ja ACT-yhteiskuntaaCistanche tubulosa -uute (low dose) were greatly abolished by phloridzin, which agrees with our in-vitro data (Figure 4). Using peptides and 20 drugs passively absorbed, a good correlation is obtained between in-vivo drug absorption and the drug permeability of Caco-2 monolayers.[42] Drugs with a Papp of >1 × 10-6 cm/s imeytyvät täysin ihmisiin, kun taas huonosti imeytyneet lääkkeet ja peptidit (<1% of="" dose)="" have="" papp="" values="" of=""><1 ×="" 10−7="" cm/s.="" surprisingly,="" the="" papp="" of="" the="" ech="" concomitant="" (high="" dose)="" was="">1 × 10–6 cm/s (taulukko 2), mikä viittaa korkeaan oraaliseen hyötyosuuteen eläimillä ja ihmisillä. Crespy et al.[43] osoittivat, että ulosvirtaus in situ suoliston perfuusiotutkimuksessa ei eronnut merkittävästi floridsiinin ja floretiinin välillä. He [44] osoittivat myös, että SGLT1:lle herkän floridsiinin oraalinen biologinen hyötyosuus oli vain 10 prosenttia rotilla. Tulevissa tutkimuksissa on arvioitava ECH:n biosaatavuus ja maksan ensikierron vaikutus sen jälkeen, kun ravintouute on annettu suun kautta suurella annoksella. In situ -tulokset tarkoittavat, että saantiCistanche tubulosa -uutevoi parantaa ehjän ECH:n ja ACT:n alhaista oralabsorptiota.

Johtopäätös

Ruokavalio ja lääkeCistanche tubulosa -uuteECH:n ja ACT:n suolistossa tapahtuvan imeytymisen tehostaminen voi auttaa parantamaan ihmisten terveyden hallintaa, vaikka floridsiinille herkän kuljetuksen osallistumista tulisi vähentää.

julistukset

Eturistiriita

Tekijä(t) vakuuttaa(t), että heillä ei ole eturistiriitoja paljastaa

Rahoitus

Tätä työtä tuki osittain Kinkin yliopiston High-Tech ResearchCenter.

Kiitokset

Kirjoittajat haluavat kiittää Osamu Muraokaa (Kinki University, Osaka, Japani) ja Toshio Morikawaa (Kinki University, Osaka, Japani)Cistanche tubulosa -uuteja puhtaat ainesosat. Olemme erittäin kiitollisia Masahiro Iwakille (Kinki University) opintotuesta.

Cistanche tubulosa -uuteTuotteet

Lähde: Ekinakosidin ja akteosidin floridsiinille herkkä kuljetus ja muuttunut imeytymisreitti suolistostaCistanche tubulosa -uute' tekijältäTadatoshi Tanino et ai

---© 2015 Royal Pharmaceutical Society, Journal of Pharmacy and Pharmacology, 67, s. 1457–1465,SGLT1:n kuljettamat fenyylietanoliglukosidit

Viitteet

1. Tanaka J et ai. VaikutusCistanche tubulosa -uuteerilaisiin aivosairauksiin. Ruokatyyli 21 2008; 12: 24-26.

2. Tanaka J et ai. Anti-aging toiminnotCistanche tubulosa -uute. Ruokatyyli 21 2008; 12: 27–29.
3. Tanaka J et ai. Kauneuden ja hiusten kasvun toiminnotCistanche tubulosa -uute. Ruokatyyli 21 2008; 12: 29–32.
4. Tanaka J et ai. Rasvaa metaboloiva vaikutusCistanche tubulosa -uute. Ruokatyyli 21 2008; 12:30-33.
5. Yoshizawa F et ai. Cistanche tubulosa Schrenk (Koukku) f.II aineosat. uuden fenyylietanoidiglykosidin ja uuden neolignaaniglykosidin eristäminen ja rakenne. Chem Pharm Bull 1990; 38: 1927–1930.
6. Yoshikawa M et ai. Cistanche tubulosasta peräisin olevat fenyylietanolioligoglykosidit ja asyloidut oligosokerit, joilla on vasorelaksoivaa aktiivisuutta. Bioorg Med Chem 2006; 14: 7468–7475.
7. Tu PF et ai. Herba cistancesin fenyylietanoidiglykosidien analyysi RP-HPLC:llä. Yao Xue Xue Bao 1997; 32: 294–300.
8. Lei L et ai. Fenyylietanoidiglykosidien metabolinen säätely Herba cistanchesista koiran maha-suolikanavassa. Yao Xue Xue Bao 2001; 36: 432-435.
9. Geng X et ai. Ekinakosidin neuroprotektiiviset vaikutukset Parkinsonin taudin hiiren MPTP-mallissa. Eur J Pharmacol 2007; 564: 66-74.
10. Morikawa T et ai. Asyloidut fenyylietanolioligoglykosidit, joilla on hepatosuojaavaa vaikutusta aavikkokasvista Cistanche tubulosa. Bioorg Med Chem 2010; 18: 1882–1890.
11. Paola RD et ai. Syringa Vulgaris -kasvien soluviljelmillä bioteknisesti puhdistetun verbaskosidin vaikutukset parodontiitin jyrsijämallissa. J Pharm Pharmacol 2011; 63: 707-717.
12. Wu YT et ai. Akteosidin määritys Cistanche deserticolassa ja Boschniakia rossicassa ja sen farmakokinetiikka vapaasti liikkuvissa rotissa käyttäen LC-MS/MS:ää. J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci 2006; 844: 89-95.
13. Matthias A et ai. Echinaceasta peräisin olevien alkyyliamidien ja kofeiinihappokonjugaattien läpäisevyyttä koskevat tutkimukset caco-2-solujen yksikerrosmallilla. J Clin Pharm Therapeut 2004; 29: 7-13.
14. Jia C et ai. Ekinakosidin määritys rotan seerumista käänteisfaasin korkean suorituskyvyn nestekromatografialla ultraviolettidetektiolla ja sen soveltaminen farmakokinetiikkaan ja biologiseen hyötyosuuteen. J Chromatogr 2006; 844: 308-313.
15. Cardinali A et ai. Oliivimyllyvedestä peräisin olevat verbaskosidit: niiden biologisen saavutettavuuden ja suolistosta imeytymisen arviointi käyttämällä in vitro -sulatus/caco{1}}-mallijärjestelmää. J Food Sci 2011; 176: H48–H54.
16. Jia C et ai. Ekinakosidin, hyvän antioksidantin, aineenvaihdunta rotilla: sen sapen metaboliittien eristäminen ja tunnistaminen. Drug Metab Dispos 2009; 37: 431-438.
17. Najar IA et ai. P-glykoproteiinin ATPaasiaktiivisuuden modulaatio joidenkin fytoainesosien toimesta. Phytother Res 2009; 24: 454–458.
18. Walgren RA et ai. Ruokavalion flavonoidi kversetiini 4'-beeta-glukosidin virtaus ihmisen suoliston caco-2-solujen yksikerroksisten kerrosten läpi apikaalisella monilääkeresistenssiin liittyvällä proteiinilla-2. J Pharmacol Exp Ther 2000a; 294: 830-836.
19. Walgren RA et ai. Ruokavalion flavonoidikversetiini-4'-beeta-glukosidaasin soluunotto natriumista riippuvaisen glukoosinkuljettajan SGLT1 avulla. J Pharmacol Exp Ther 2000b; 294: 837-843.
20. Mihara K et ai. Eperisonin ensikierron metabolia suolistossa rotalla. Pharm Res 2001; 18: 1131–1137.
21. Isacchi B et ai. Verbaskosidin antihyperalgeettinen vaikutus kahdessa neuropaattisen kivun mallissa. J Pharm Pharmacol 2011; 63: 594-601.

22. Cook TJ et ai. Klooripyrifossin suoliston läpäisevyys käyttämällä yhden kierron suoliston perfuusiomenetelmää rotalla. Toxicology 2003; 184: 125-133.

23. Kumar YS et ai. P-glykoproteiinin ja sytokromi P-450-välitteinen kasviperäisten lääkeaineiden yhteisvaikutus. Drug Metabol Drug Interact 2010; 25: 3-16.
24. Walle UK et ai. Genisteiini-7-glukosidin kuljetus ihmisen suoliston CACO-2-solujen toimesta: MRP2:n mahdollinen rooli. Res Commun Mol Pathol Pharmacol 1999; 103: 45–56.
25. Ito K et ai. Lääkekuljettajien apikaalinen/basolateraalinen pintaekspressio ja sen rooli vektoriaalisessa lääkekuljetuksessa. Pharm Res 2005; 22: 1559–1577.
26. Laitinen L et ai. Caco-2-soluviljelmät suolistosta imeytymisen arvioinnissa: joidenkin samanaikaisesti annettujen lääkkeiden ja luonnollisten yhdisteiden vaikutukset biologisissa matriiseissa. (Helsingin yliopisto, 2006) Väitöskirja, s. 1–66.
27. Scambia G et ai. Kvertsetiini voimistaa adriamysiinin vaikutusta monilääkeresistenssissä ihmisen MCF-7-rintasyöpäsolulinjassa: P-glykoproteiini mahdollisena kohteena. Cancer Chemother Pharmacol 1994; 34: 459-464.
28. Choi DH et ai. Myrisetiinin, antioksidantin, vaikutus losartaanin ja sen aktiivisen metaboliitin, EXP-3174, farmakokinetiikkaan rotilla: sytokromi P450 3A4, sytokromi P450 2C9 ja P- myrisetiinin aiheuttama glykoproteiinin esto. J Pharm Pharmacol 2010; 62: 908-914.
29. Tanino T et ai. Paklitakseli-2′-etyylikarbonaattiaihiolääke voi kiertää P-glykoproteiinivälitteisen solun ulosvirtauksen lisätäkseen lääkkeen sytotoksisuutta. Pharm Res 2007; 24: 555–565.
30. Hollman PC et ai. Ruokavalion kversetiiniglykosidien ja kversetiinin imeytyminen terveillä ileostomiasta saaneilla vapaaehtoisilla. Am J. Clin Nutr 1995; 62: 1276–1282.
31. Kellett GL et ai. Suoliston glukoosin imeytymisen diffuusiokomponentti välittyy glukoosin aiheuttaman GLUT2:n kerääntymisestä harjalevyn kalvoon. Biochem J 2000; 350: 155–162.
32. Matter K et ai. Endogeenisten plasmamembraaniproteiinien lajittelu tapahtuu kahdesta kohdasta viljellyissä ihmisen suoliston epiteelisoluissa (Caco-2). Cell 1990; 60: 429–437.
33. Mahraoui L et ai. SGLT1-, GLUT1-, GLUT2-, GLUT3- ja GLUT5-heksoosikuljettaja-mRNA:iden läsnäolo ja erilainen ilmentyminen Caco-2-soluklooneissa suhteessa solujen kasvuun ja glukoosin kulutukseen. Biochem J 1994; 298: 629-633.

34. Mesonero J et ai. Fruktoosikuljettajan GLUT 5:n sokeririippuvainen ilmentyminen Cac-2-soluissa. Biochem J 1995; 312: 757-762.

35. Walgren RA et ai. Kversetiinin ja sen glukosidien kuljetus ihmisen suoliston epiteelisolujen Caco-2-solujen läpi. Biochem Pharmacol 1998; 55: 1721–1727.
36. Yoshikawa T et ai. Heksoosikuljettajien (SGLT1, GLUT1, GLUT2 ja GLUT5) vertaileva ilmentyminen koko hiiren maha-suolikanavassa. Histochem Cell Biol 2011; 135: 183-194.
37. Funes L et ai. Verbaskosidin, sitruunaverbenan fenyylipropanoidiglykosidin, vaikutukset fosfolipidimallien kalvoihin. Chem Phys Lipids 2010; 163: 190-199.
38. Neilson AP et ai. Suklaamatriisikoostumuksen vaikutus kaakaoflavan{1}olin biologiseen saavutettavuuteen in vitro ja biologiseen hyötyosuuteen ihmisillä. J Agric Food Chem 2009; 57: 9418–9426.
39. Gao S et ai. Mäkikuismatuotteissa olevien fenolien erittäin vaihtelevat pitoisuudet vaikuttavat niiden kulkeutumiseen ihmisen suoliston Caco-2-solumallissa: farmaseuttinen ja biofarmaseuttinen perustelu tuotteiden standardoinnille. J Agric Food Chem 2010; 58: 6650–6659.
40. Schramm DD et ai. Ruoan vaikutukset kaakaoflavanolien imeytymiseen ja farmakokinetiikkaan. Life Sci 2003; 73: 857–869.
41. Laurent C et ai. Etanoli ja polyfenoliton viinimatriisi stimuloivat ihmisen suoliston Caco-2-solujen erilaistumista. Vaikutus niiden yhdistymiselle prosyanidiinipitoiseen rypäleen siemenuutteeseen. J Agric Food Chem 2005; 53: 5541–5548.
42. Artursson P et ai. Ihmisten oraalisen lääkkeen imeytymisen ja ihmisen sisäisten epiteelisolujen (Caco-2) näennäisten lääkkeiden läpäisevyyskertoimien välinen korrelaatio. Biochem Biophys Res Commun 1991; 175: 880-885.
43. Crespy V et ai. Kversetiinin, floretiinin ja niiden glukosidien suolistosta imeytymisen vertailu rotilla. J Nutr 2001a; 131: 2109–2114.
44. Crespy V et ai. Floretiinin ja floridsiinin biologinen hyötyosuus rotilla. J Nutr 2001b; 131: 3227–3230.