Cistanche-fenyylietanoli-glykosidien farmakodynamiikkatutkimus gentamysiinin aiheuttamassa akuutissa munuaisvauriossa rotilla

Yhteystiedot: Audrey Huaudrey.hu@wecistanche.com

Abstrakti

Tavoite Tutkia suojavaikutustafenyylietanoidiglykosidit(phGs) on gentamysiini-indusoituakuutti munuaisvauriorotissa. Menetelmät Yhteensä 54 urospuolista SD-rottaa jaettiin satunnaisesti kontrolliryhmään (10 d, 15 d, normaali suolaliuos 10 ml/kg), malliryhmä (10 d, 15 d, normaali suolaliuos 10 ml/kg), phGs500 mg/ kg ryhmä (10 d, 15 d), phGs 250 mg/kg ryhmä (10 d, 15 d) ja simuloitu kliininen ryhmä (21 d, normaali suolaliuos 10 ml/kg), jokaisessa ryhmässä oli kuusi rottaa. Akuutin munuaisvaurion rotan malli määritettiin antamalla gentamysiiniä vatsaontelonsisäisesti 75 mg/kg 10 päivän ajan. Kokeen lopussa kerättiin rottien 24 tunnin virtsa, otettiin rottien veri vatsa-aortasta, otettiin rottien bilateraaliset munuaiset ja laskettiin munuaisindeksi. Seerumin kreatiniini (Scr), veren ureatyppi (BUN) mitattiin auto-analysaattorilla. Superoksididismutaasin (SOD), glutationiperoksidaasin (GSH-Px), katalaasin (CAT) ja malonaldehydin (MDA) tasot havaittiin munuaiskudoksessa. Tulokset Verrattuna nollakontrolliryhmään Scr, BUN, 24 tunnin virtsan tilavuus ja MDA-ekspressio taso munuaiskudoksessa nousi 10 d ja 15 d malliryhmässä, ja SOD:n, CAT:n ja GSH-PX:n aktiivisuus munuaiskudoksessa väheni merkittävästi (P<0.01). compared="" with="" the="" model="" group,="" the="" serum="" scr,="" bun,24="" h="" urine="" volume,="" and="" the="" expression="" of="" mda="" in="" kidney="" tissue="" were="" decreased="" in="" 10="" d="" and="" 15="" d="" phgs="" high="" and="" low="" dose=""><0.05), while="" the="" activities="" of="" sod,="" cat,="" and="" gsh-px="" in="" kidney="" tissue="" were=""><0.05). conclusion="" phgs="" had="" a="" protective="" effect="" on="" gentamicin-induced="">akuutti munuaisvauriorotissa.

Avainsanat:Cistanche Herba; fenyylietanoidiglykosidis; gentamysiini;akuutti munuaisvaurio

Cistanche Herba

Akuutti munuaisvaurio (AKI)on kliininen oireyhtymä, jossa munuaisten suodatustoiminto heikkenee tai häviää eri syistä [1]. Tällä hetkellä AKI:n ilmaantuvuus lisääntyy vuosi vuodelta. Sen syyt ovat moninaiset ja voivat johtaa erilaisiin komplikaatioihin, ja kliinisen hoidon interventiomenetelmät ovat hyvin rajalliset [2·3]. Tutkimukset ovat osoittaneet, että jatkuva hoito aminoglykosidiantibiooteilla on itsenäinen riskitekijä AKI:lle [4], ja sen indusoiva mekanismi liittyy lääkevälitteiseen vapaiden radikaalien tuotantoon, fosfolipidikertymään, heikentyneeseen munuaisten verenkiertoon ja paikalliseen tulehdukseen [5]. Kliinisesti terapeuttisia lääkkeiden seurantamenetelmiä käytetään usein aminoglykosidiantibioottien aiheuttaman akuutin munuaisten toimintavaurion hoitoon, mutta ne eivät voi parantaa tai kääntää tällaisten antibioottien aiheuttaman munuaisvaurion riskiä perimmäisestä syystä [6]. Aminoglykosidiantibioottien nefrotoksisuuden varhainen puuttuminen on kuuma paikka aminoglykosidiantibioottien järkevän käytön tutkimuksessa. Perinteinen kiinalainen lääketiedeCistanchesHerba on kuiva, mehevä varsi, jossa on hilseileviä lehtiäCistanchesOrobanchaceae-heimoon kuuluva kasviCistanches. Sillä on ravitseva munuaisyang ja ravitseva esanssi ja verta [7]. Se on luonteeltaan lämmin, maultaan makea ja palaa munuaismeridiaaniin.fenyylietanoidiglykosiditovat tärkeimmät kemialliset komponentitCistanche, joka voi lisätä seerumin superoksididismutaasin aktiivisuutta, estää malondialdehydin ilmentymistä, parantaa kehon kykyä poistaa hapen vapaita radikaaleja, vähentää vapaiden radikaalien kertymistä kehoon ja suojata kehoa liialliselta stressiltä. Oksidatiivinen vauriovaikutus [8]. Tässä tutkimuksessa gentamysiiniä käytettiin akuutin munuaisvaurion rotan mallin rakentamiseen citronellan ehkäisevien ja terapeuttisten vaikutusten tutkimiseksi.fenyylietanoidiglykosiditgentamysiinin aiheuttamaan akuuttiin munuaisvaurioon. Raportti on seuraava.

1 Materiaali ja menetelmät

1.1 Koeeläimet

54 SD-rotta, uros, paino (200 ± 20) g, ostettu Xinjiangin lääketieteellisen yliopiston eläinkoekeskuksesta, eläintuotantoluvan numero: SCXK (uusi) 2016-0003, kaikki eläimet on kasvatettu Xinjiangin lääketieteellisen yliopiston SPF:ssä Eläinkoekeskuksen esteympäristö, lupanumero: SYXK (uusi) 2016-0002, ympäristön lämpötila 24-26 astetta, vakiolämpötila ja kosteus, suhteellinen kosteus 40 prosenttia -70 prosenttia, rotat syövät ja juovat vapaasti .

1.2 Testilääke

Cistanche-fenetyyliglykosidit (tämä tutkimusryhmä on rikastettu ja puhdistettu Cistanche tubulosasta, fenetyylialkoholiglykosidin kokonaispitoisuus on 89,5 prosenttia, ekinakosidipitoisuus yli 40 prosenttia ja verbaskosidipitoisuus yli 16,0 prosenttia) ; Gentamysiini-injektio (Henan Furen Huaiqingtang Pharmaceutical Co., Ltd., eränumero 16122411), malondialdehydin (MDA) havaitsemispakkaus (Wuhan Elite Biotechnology Co., Ltd., eränumero VAAAK6S286), superoksidin disproportionaalisen entsyymin (SOD) ilmaisupakkaus (SOD) Biotechnology Co., Ltd., eränumero WSH27SS9GB), katalaasi (CAT) -tunnistuspakkaus (Wuhan Elite Biotechnology Co., Ltd., eränumero FGS3J66D2K), Valley Glutatione Peroxidase (GSH-PX) -tunnistussarja (Wuhan Elite Biotechnology Co., Ltd., eränumero DK8A622XZP), BCA-proteiinin kvantifiointipakkaus (Beijing Soleibao Technology Co., Ltd., eränumero 20190622).

1.3 Kokeellinen instrumentti

TD50002A elektroninen vaaka (Yuyao Jinnuo Balance Instrument Co., Ltd.), Multiskan täyden aallonpituuden mikrolevylukija (US Thermo Fisher Company), BS-320 automaattinen biokemiallinen analysaattori (Shenzhen Mindray Biomedical Electronics Co., Ltd.), Biofugeprimo pöytäkoneen jäähdytetty sentrifugi (Thermo Fisher Company, USA).

1.4 Mallinnus-, ryhmittely- ja hallintomenetelmät

Yhden viikon mukautuvan ruokinnan jälkeen 54 urospuolista SD-rottaa jaettiin satunnaisesti 10 d, 15 d nollakoekontrolliryhmään, 10 d, 15 d malliryhmään, 10 d, 15 d Cistanche cistanche fenetyylialkoholin suuren annoksen ryhmään, 10 d, 15 d Cistanche fenyylietanolia sisältävään ryhmään. Annosryhmä ja 21 päivän simuloitu kliininen hoitoryhmä, jokaisessa ryhmässä on 6 eläintä. Lukuun ottamatta 10d ja 15d nollakontrolliryhmiä, kunkin ryhmän rotille injektoitiin intraperitoneaalisesti gentamisiinia (75 mg/kg ruumiinpainoa) 10 peräkkäisenä päivänä akuutin munuaisvaurion mallin luomiseksi. Antomenetelmä: (1) 10 d ja 15 d nollakoekontrollirotille annettiin vatsaontelonsisäinen injektio normaalia suolaliuosta (10 ml/kg ruumiinpainoa) ja letkuletku 10 vuorokauden ja vastaavasti 15 vuorokauden ajan; (2) 10d- ja 15d-mallirotat ovat mallintaneet samanaikaisesti. Rotille suuriannoksisten ryhmien 10d ja 15d annettiin normaalia suolaliuosta (10 ml/kg ruumiinmassaa) letkuruokinnalla 10d ja 15d vastaavasti; Vatsa 10d ja 15d; (4) 10. ja 15. päivän pieniannoksisten ryhmien rotat mallinnettiin päivittäin ja niille annettiin Cistanche-fenelyetanolin kokonaisglykosideja (250 mg/kg ruumiinpainoa) letkuruokinnalla 10 päivän ja 15 päivän ajan; (5) 21 päivää simuloitu kliininen ryhmä Samaan aikaan rotille annettiin normaalia suolaliuosta (10 ml/kg ruumiinpainoa) letkuruokinnalla 21 päivän ajan. Rotat punnitaan viikoittain ja lääkkeen annostus säädetään ruumiinpainon mukaan.

1.5 Näytteenotto

Jokaisen ryhmän rotat kerättiin 24 tunnin virtsaa 1., 15. ja 21. päivänä (eläin sijoitettiin aineenvaihduntahäkkiin edellisenä päivänä ja yksi eläin kussakin aineenvaihduntahäkissä, poistettiin 24 tunnin kuluttua). sentrifugoidaan nopeudella 3000 r/min 20 minuuttia 4 asteessa. Kerää supernatantti ja jäädytä -20 asteeseen myöhempää käyttöä varten. Kokeen jälkeen kunkin ryhmän rotat paastottiin ilman ruokaa ja nukutettiin 10-prosenttisella kloraalihydraatilla vatsaonteloon. Veri otettiin vatsa-aortasta ja sen annettiin seistä huoneenlämmössä 1 tunti 4 asteessa, sentrifugoitiin nopeudella 3500 r/min 15 minuuttia, ja ylempi kerros vaaleankeltaista kirkasta nestettä jaettiin eriin. Säilytä pakastettuna 20 asteessa myöhempää käyttöä varten. Kunkin ryhmän rotat nukutettiin, vatsaontelo paljastettiin kokonaan, munuaiskudosten distaalisten ja proksimaalisten päiden valtimot ja suonet kiinnitettiin hemostaattisilla pihdeillä, munuaislaskimot leikattiin ja 4 asteen isotonista normaalia suolaliuosta ruiskutettiin läpi. vatsa-aortta ja munuaisten väri perfusoitiin. Kun olet kalpea, poista nopeasti molemmat munuaiset ja aseta ne suodatinpaperille imemään vettä ja punnitse ne elinindeksin laskemiseksi. Ota 0,4 g tuoretta rotan oikean munuaisen aivokuorta, lisää esijäähdytetty normaali suolaliuos suhteessa 1:9, homogenoi 10 prosenttia munuaiskudosta matalassa lämpötilassa, pakasta ja varaa myöhempää käyttöä varten. Elinindeksin laskentakaava on seuraava: Munuaisindeksi=molemminpuolinen munuaisten massa × 103/rotan ruumiinpaino.

1.6 Seerumin kreatiniini- ja ureatyppipitoisuuksien toteaminen rotilla

Ota testattavat seeruminäytteet ja laita ne automaattiseen biokemialliseen analysaattoriin määritystä varten. Määritä pakkauksen ohjeiden mukaan rotan seerumin kreatiniini- ja ureatypen pitoisuudet.

1.7 SOD:n, CAT:n, GSH-PX:n ja MDA:n havaitseminen rotan munuaiskudoksissa

Ota rotan munuaishomogenaatti sulamaan huoneenlämpötilaan, sentrifugoi nopeudella 3{7}}00 r/min 20 minuuttia 4 asteessa, kerää supernatantti ja testaa rotan munuaiset BCA-sarjan avulla kussakin ryhmässä Kudosproteiinipitoisuus. Noudata pakkauksen ohjeita määrittääksesi superoksididismutaasin (SOD), katalaasin (CAT), glutationiperoksidaasin (GSH-Px) ja malondialdehydin (MDA) aktiivisuuden munuaiskudoksessa. 1.8 Tilastollinen analyysi Tilastolliseen analyysiin käytettiin SPSS21.0 tilastoohjelmistoa. Mittaustiedot ilmaistiin keskiarvona ± standardipoikkeama (-x ± s). Kahden ryhmän välinen vertailu tehtiin t-testillä, testitasolla =0.05.

cistanche-uute

2 tulosta

2.1 Cistanche-fenetyylialkoholin kokonaisglykosidien vaikutukset rottien painoon, munuaisindeksiin ja 24 tunnin virtsan eritykseen kussakin ryhmässä

There was no significant difference in the body mass of rats in each group before modeling (P>0.05). Mallintamisen jälkeen verrattuna nollakontrolliryhmään kunkin malliryhmän ruumiinmassa pieneni ja munuaisindeksi ja 24 tunnin virtsan eritys lisääntyivät, ero oli tilastollisesti merkitsevä (P<0.01); compared="" with="" the="" model="" group,="" 10d="" and="" 15d="" cistanche="" phenethyl="" alcohol="" the="" body="" mass="" of="" rats="" in="" the="" high="" and="" low="" dose="" groups="" of="" total="" glycosides="" increased,="" and="" the="" renal="" index="" and="" 24h="" urine="" output="" decreased,="" the="" difference="" was="" statistically="" significant="" (p=""><0.05); the="" body="" mass="" of="" the="" simulated="" clinical="" group="" increased,="" and="" the="" difference="" was="" statistically="" significant="" (p=""><0.05), there="" was="" no="" statistically="" significant="" difference="" in="" the="" renal="" index="" and="" 24h="" urine="" volume="" (p="">0.05)

2.2 Cistanche-fenyylietanoidiglykosidien vaikutus rottien seerumin kreatiniinipitoisuuteen kussakin ryhmässä

Verrattuna nollakontrolliryhmään rottien seerumin kreatiniinipitoisuus nousi kussakin malliryhmässä ja ero oli tilastollisesti merkitsevä (P<0.01); compared="" with="" the="" model="" group,="" the="" serum="" creatinine="" of="" rats="" in="" the="" high="" and="" low="" dose="" groups="" of="" cistanche="" cistanche="" phenethyl="" alcohol="" total="" glycosides="" was="" compared="" with="" that="" of="" the="" model="" group.="" the="" content="" decreased,="" and="" the="" difference="" was="" statistically="" significant="" (p=""><0.05); the="" difference="" in="" serum="" creatinine="" content="" of="" rats="" in="" the="" simulated="" clinical="" group="" was="" not="" statistically="" significant="" (p="">0.05).

2.3 Cistanche-fenyylietanoidiglykosidien vaikutus rottien seerumin ureatyppipitoisuuteen kussakin ryhmässä

Verrattuna nollakontrolliryhmään rottien seerumin ureatyppipitoisuus nousi kussakin malliryhmässä ja ero oli tilastollisesti merkitsevä (P<0.01). compared="" with="" the="" model="" group,="" the="" serum="" urea="" of="" rats="" in="" the="" high="" and="" low="" doses="" of="" cistanche="" cistanche="" phenethyl="" alcohol="" total="" glycosides="" was="" 10d="" and="" 15d.="" nitrogen="" content="" is="" reduced,="" and="" the="" difference="" is="" statistically="" significant="" (p="" difference="" is="" not="" statistically="">lähellä {{0}} sänkyä. 0 ryhmä 5)

2.4 Cistanche-fenyylietanoidiglykosidien vaikutus SOD-aktiivisuuteen kunkin rottaryhmän munuaiskudoksessa

Verrattuna nollakontrolliryhmään SOD-aktiivisuus kunkin malliryhmän munuaiskudoksessa väheni ja ero oli tilastollisesti merkitsevä (P<0.01); compared="" with="" the="" model="" group,="" rats="" in="" the="" high="" and="" low="" doses="" of="" cistanche="" phenethyl="" alcohol="" total="" glycosides="" on="" 10d="" and="" 15d="" the="" sod="" activity="" in="" the="" kidney="" tissue="" increased,="" and="" the="" difference="" was="" statistically="" significant="" (p=""><0.01); the="" sod="" activity="" in="" the="" kidney="" tissue="" of="" the="" simulated="" clinical="" group="" increased,="" and="" the="" difference="" was="" statistically="" significant="" (p=""><>

2.5 Cistanche-fenyylietanoidiglykosidien vaikutus CAT:n aktiivisuuteen kunkin rottaryhmän munuaiskudoksessa

Verrattuna nollakontrolliryhmään CAT:n aktiivisuus munuaiskudoksessa pieneni kussakin malliryhmässä ja ero oli tilastollisesti merkitsevä (P<0.01); compared="" with="" the="" model="" group,="" the="" rats="" in="" the="" high="" and="" low="" doses="" of="" cistanche="" cistanche="" phenethyl="" alcohol="" total="" glycosides="" group="" the="" activity="" of="" cat="" in="" the="" kidney="" tissue="" increased,="" and="" the="" difference="" was="" statistically="" significant="" (p=""><0.01); the="" activity="" of="" cat="" in="" the="" kidney="" tissue="" of="" the="" simulated="" clinical="" group="" was="" not="" statistically="" significant="" (p=""> 0.05)

2.6 Cistanche-fenyylietanoidiglykosidien vaikutukset GSH-PX-aktiivisuuteen rottien munuaiskudoksissa kussakin ryhmässä

Verrattuna nollakontrolliryhmään GSH-PX-aktiivisuus kunkin malliryhmän munuaiskudoksessa väheni, ja ero oli tilastollisesti merkitsevä (P<0.01); compared="" with="" the="" model="" group,="" the="" 10d="" and="" 15d="" cistanche="" phenethyl="" alcohol="" total="" glycosides="" high="" and="" low="" dose="" groups="" the="" activity="" of="" gsh-px="" in="" the="" kidney="" tissue="" of="" rats="" increased,="" and="" the="" difference="" was="" statistically="" significant="" (p=""><0.05); the="" activity="" of="" gsh-px="" in="" the="" kidney="" tissue="" of="" rats="" in="" the="" simulated="" clinical="" group="" was="" not="" statistically="" significant="" (p=""> 0.05).

2.7 Cistanche-fenyylietanoidiglykosidien vaikutukset MDA-pitoisuuteen rottien munuaiskudoksissa kussakin ryhmässä

Verrattuna nollakontrolliryhmään kunkin malliryhmän munuaiskudoksen MDA-pitoisuus kasvoi ja ero oli tilastollisesti merkitsevä (P<0.01); compared="" with="" the="" model="" group,="" the="" high="" and="" low="" dose="" groups="" of="" cistanche="" cistanche="" phenethyl="" alcohol="" total="" glycosides="" were="" larger="" than="" those="" of="" the="" model="" group.="" the="" content="" of="" mda="" in="" rat="" kidney="" tissue="" decreased,="" and="" the="" difference="" was="" statistically="" significant="" (p=""><0.01). there="" was="" no="" statistically="" significant="" difference="" in="" the="" content="" of="" mda="" in="" the="" kidney="" tissue="" of="" rats="" in="" the="" simulated="" clinical="" group="" (p="">0.05)

cistanche suojaa munuaisten toimintaa

3 Keskustelu

Aminoglykosidiantibioottien yleinen vakava haittavaikutus on nefrotoksisuus [9]. Tämäntyyppiset lääkkeet suodattuvat helposti glomeruluksen läpi prototyyppilääkkeenä, ja jotkut lääkkeet erittyvät virtsaan, ja suurin osa lääkkeistä kertyy selektiivisesti munuaiskuoreen, jolloin pitoisuus tässä kohdassa on useita kertoja korkeampi kuin lääkeaine seerumissa (10) ], tämäntyyppisen lääkkeen kertyminen aiheuttaa väistämättä soluvaurioita ja heikentää munuaisten toimintaa. Aminoglykosidilääkkeiden aiheuttaman AKI:n kliinisessä hoidossa on pitkään noudatettu oireenmukaisen ja tukihoidon periaatetta lääkkeen vieroitushoidosta ja rutiininomaisesta nestehukasta. vahingoittaa. Siksi tässä tutkimuksessa perustettiin 21-päiväsimuloitu kliininen hoitoryhmä simuloimaan rutiininomaista kliinistä hoitoa ja kehon kuntoutusta mahdollisimman paljon, jotta Cistanchen fenyylietanoidiglykosidien terapeuttista vaikutusta voitaisiin edelleen tutkia objektiivisesti. Kliinisessä hoidossa Scr ja BUN käytetään usein indikaattoreina munuaisten toiminnan arvioinnissa. Mitä korkeampi Scr- ja BUN-taso on, sitä vakavampi munuaistoiminnan vaurio näkyy [11]. Tässä tutkimuksessa AKI-malli luotiin injektoimalla gentamysiiniä 75 mg/kg vatsaonteloon rotille 10 peräkkäisenä päivänä. Verrattuna tyhjään kontrolliryhmään Scr- ja BUN-tasot malliryhmässä nousivat, mikä osoittaa, että malli oli onnistunut. Cistanche-fenyylietanoidiglykosidien 10 ja 15 vuorokauden hoidon jälkeen rottien Scr- ja BUN-arvot pienenivät kussakin hoitoryhmässä, mikä osoittaa, että cistanche-fenyylietanoidiglykosideilla oli hyvä vaikutus gentamysiinin aiheuttaman AKI:n parantamiseen.

Tutkimukset ovat osoittaneet, että reaktiivisten happilajien (ROS) lisääntymisellä on tärkeä rooli gentamysiinin aiheuttaman munuaisten tubulusvaurion patologisessa prosessissa [12]. MDA on yksi tärkeimmistä aineista, jotka kuvastavat kehon ROS-tasoa [13-14]. Kehon antioksidanttien (antioksidanttien) suojajärjestelmään ROS:ää vastaan ​​kuuluvat SOD, CAT, GSH-PX ja niin edelleen. Cistanche deserticolan pääasiallisena tehokkaana komponenttina fenyylietanoidiglykosidit voivat aiheuttaa merkittävää antioksidanttivaikutusta eläimissä [15]. Cistanchen fenetyylialkoholin kokonaisglykosidien puuttumisen jälkeen MDA-pitoisuus rottien munuaiskudoksessa laski merkittävästi annosteluryhmässä ja SOD-, CAT- ja GSH-PX-aktiivisuudet lisääntyivät merkittävästi, mikä viittaa siihen, että Cistanchen fenetyylialkoholin kokonaisglykosidit voi parantaa munuaisten oksidatiivista stressivauriota ja lievittää munuaisvaurioita.

Yhteenvetona voidaan todeta, että cistanche-fenetyylialkoholin kokonaisglykosideilla on suojaava vaikutus gentamysiinin aiheuttamaan akuuttiin munuaisvaurioon. Sillä on antioksidanttisia vaikutuksia estämällä vapaiden radikaalien tuotantoa ja aktivoimalla vapaita radikaaleja poistavia entsyymejä, parantaen kehon oksidatiivista stressitilaa ja tehostamalla kehon antioksidanttivaikutusta. Hapetuskyky, vähentää munuaisvaurioita.

cistanche suojaa munuaisten toimintaa