Toinen osa DsbA-L on vuorovaikutuksessa VDAC1:n kanssa mitokondriovälitteisessä tubulussoluapoptoosissa ja edistää akuutin munuaissairauden etenemistä

Tulokset

1. Iskeeminen vaurio indusoi DsbA-L:n ilmentymistä BUMPT-soluissa ja hiirten ja potilaiden munuaisissa

Tutkiaksemme, aiheuttiko iskeeminen vaurio DsbA-L:n ilmentymisen, tyhjensimme BUMPT-soluista ATP:tä 2 tunnin ajan ja annoimme niiden toipua yhteensä 4 tunnin ajan. RT-qPCR- ja immunoblottaustulokset osoittivat, että DsbA-L:n ilmentyminen indusoitui I/R:ssä 2-0, saavutti huippunsa I/R:ssä 2-2 ja väheni sitten vähitellen I/R:ssä havaituille tasoille. 2-0 (kuvat 1a, e ja i). DsbA-L:n immunofluoresenssivärjäys vahvisti edelleen nämä havainnot ja osoitti, että DsbA-L ilmentyy pääasiassa BUMPT-solujen sytoplasmassa (kuvio 1 m ja n). Lisäksi havaitsimme DsbA-L:n ilmentymisen C57BL/6-hiirissä, joita hoidettiin iskemialla (28 min) ja reperfuusiovauriolla (24 h ja 48 h). RT-PCR- ja immunoblottaustulokset osoittivat, että DsbA-L:n ilmentyminen indusoitui sekä hiiren munuaisen aivokuoressa että ulkoytimessä 24 tunnin reperfuusion jälkeen ja saavutti huippunsa 48 tuntia reperfuusion jälkeen (kuvio 1b, c, f, g , j ja k). Nämä havainnot vahvistivat edelleen DsbAL:n immunohistokemiallinen värjäys (kuvio 1o ja p). Lopuksi tutkimme, indusoituivatko DsbA-L:n ilmentymistasot potilailla, joilla on iskemian aiheuttama AKI. Nämä tulokset osoittivat, että DsbA-L-mRNA:n ja -proteiinin tasot kasvoivat merkittävästi potilailla, joilla oli iskemian aiheuttama AKI verrattuna MCD-potilaisiin (kuvio 1. d, h ja l). Nämä tulokset vahvistettiin edelleen DsbA-L:n immunofluoresenssivärjäyksellä (kuvio 1. q ja r).

Kuvio 1. DsbA-L indusoitiin I/R:llä hiirten ja potilaiden BUMPT-soluissa ja munuaisissa. I/R-malli BUMPT-soluissa indusoitiin 10 mM antimysiini A:lla ja 1,5 mM kalsiumionoforilla 2 tunnin ajan ja otettiin talteen 0, 2 ja 4 tunnin ajan. I/R-hiirimalli indusoitiin kahdenvälisellä munuaisiskemialla 28 minuutin ajan ja reperfuusiolla 24 ja 48 tunnin ajan. Munuaisbiopsianäytteet kerättiin I/R-indusoiduilta AKI-potilailta ja Minimal Change Disease (MCD) -potilailta. (ad) DsbA-L-ekspression RT-qPCR-detektio BUMPT-soluissa, hiirten munuaisten aivokuoren kudoksessa ja ydin- ja munuaispotilailla, joilla on tai ei ole I/R-tilaa. (e-h) DsbA-L:n ja b-tubuliinin immunoblot-analyysi BUMPT-soluissa I/R-mallilla BUMPT-soluissa, aivokuoren kudoksessa ydin- ja munuaispotilaiden ulkopuolella. (i-l) DsbA-L- ja b-tubuliiniproteiinin ilmentymisen densitometrinen analyysi. (m, o ja q) DsbA-L:n immunofluoresenssi ja immunohistokemiallinen värjäys BUMPT-soluissa ja hiirten munuaisissa ja potilailla, joilla on tai ei ole I/R-tila, vastaavasti. (n, p ja r) DsbA-L-värjäyksen kvantifiointianalyysi. Alkuperäinen suurennus x 400. Scar Bar: 10 µM m100 µM o:ssa ja q:ssa. Jokainen koe (e-h, m, o ja q) toistettiin 6 kertaa itsenäisesti samanlaisilla tuloksilla. Kaksisuuntaisia ​​Studentin t-testejä käytettiin kahdessa ryhmävertailussa. (a-d, i-l, n, p ja r). # p<0.05: versus saline group, sham group, or MCD group.

Napsauta tätä saadaksesi tietää Cistanchen edut

2. IR-indusoitu munuaisvaurio, tubulussolujen apoptoosi ja mitokondriovauriot heikkenivät PT-DsbA-LKO-hiirissä

PT-DsbA-L-WT- ja PT-DsbA-L-KO-hiirten poikuevia käsiteltiin iskemialla (28 min) ja reperfuusiovauriolla (24 h ja 48 h) tai ilman niitä. Tämän hoidon jälkeen otimme verinäytteitä ja näytteitä munuaiskudoksesta lisätutkimuksia varten. Funktionaalisesti I/R-indusoidulle munuaisten toiminnan huononemiselle oli tunnusomaista kohonneet veren ureatypen (BUN) ja kreatiniinin tasot PT-DsbA-L-WT-hiirissä; tämä vaikutus heikkeni merkittävästi PT-DsbA-L-KO-hiirissä (kuvio 2a ja b). Histologia- ja TUNEL-analyysit vahvistivat myös, että I/R-indusoi merkittäviä kudosvaurioita ja apoptoosia PT-DsbA-L-WT-hiirissä, vaikka tämä parani PT-DsbA-L-KO-hiirillä (kuva 2c, d, f, ja g). Mielenkiintoista on, että elektronimikroskopia (EM) -analyysit osoittivat, että PT-DsbA-L-KO-hiiret osoittivat I/R-indusoidun mitokondriovaurion huomattavaa heikkenemistä (kuvio 2 e ja h). Immunoblottaus vahvisti lisäksi, että PT-DsbA-LKO-hiiret ilmensivät myös pienempiä tasoja katkaistua kaspaasia-3, pienempiä Baxin kertymisnopeuksia mitokondrioissa ja vähentynyttä sytokromi c:n (Cyt-c) vapautumista sytosoliin (kuva 2). I-o). RT-qPCR-analyysitulokset osoittivat, että PT-DsbA-L-KO kumosi I/R:n aiheuttaman NRF1:n ja PCG{41}}a:n vähenemisen (kuvio 2 p ja q), mikä vahvistettiin edelleen immunoblottausanalyysillä ( Kuva 2 r-t). Nämä tiedot osoittivat, että DsbA-L:llä oli keskeinen rooli I/R-indusoidussa AKI:ssa.

Kuva 2. IR-indusoidun munuaisvaurion, tubulussolujen apoptoosin, mitokondriovaurion ja Bax-, Cytc- ja pilkkoutuneen kaspaasi3:n ilmentymisen vaimeneminen PT-DsbA-L-KO-hiirissä. PT-DsbA-L-KO- ja PT-DsbA-L-WT-hiirten kahdenväliset munuaisvaltimot puristettiin 28 minuutiksi ja vapautettiin sitten 48 tunnin ajan IR-mallin luomiseksi. (a) BUN (b) Seerumin kreatiniini (c) Hematoksyliini- ja eosiinivärjäys. (d) TUNEL-positiivisten solujen edustavat osat. (e) Mitokondrioiden morfologian havaitseminen elektronimikroskoopilla. (f) Putkivauriopisteet. (g) TUNEL-positiivisten solujen lukumäärä. (h) Mitokondrioiden vauriopisteet. (i) Immunoblot-analyysi pilkkoneen kaspaasi3:n ja DsbA-L:n ilmentymisestä sekä BAX:n ja Cyt-c:n ilmentymisestä mitokondrio- ja sytosolifraktioissa. b-tubuliinia ja GAPDH:ta käytettiin koko lysaatti- tai sytosolisen kuormituksen kontrollina, vastaavasti. COX IV:tä käytettiin mitokondrioiden kuormituksen kontrollina. (j-o) Niiden välisen harmaasävykuvan analyysi. (p ja q) NRF1:n ja PCG:n ilmentymisen RT-qPCR-detektio-1a. (r) NRF1:n ja PCG-1a:n ilmentymisen immunoblot-analyysi. (s ja t) Niiden välisen harmaasävykuvan analyysi. Alkuperäinen suurennus x 400 tai x 6000. Scar Bar: 100 µM in c&d 20 µM in e. Jokainen koe (ce, I ja r) toistettiin 6 kertaa itsenäisesti samanlaisilla tuloksilla. Yksisuuntaista ANOVAa käytettiin useiden ryhmien vertailuihin. (a, b,f-h, jo, pq&s-t). # p<0.05: versus saline group, sham group, or MCD group. # P<0.05 versus sham group. * P<0.05 versus PT-DsbA-L-WT with IR group.

Cistanche tubulosa

3. DsbA-L-välitteinen I/R-indusoitu apoptoosi BUMPT-soluissa

Tutkiaksemme edelleen, välittääkö DsbA-L apoptoosia I/R:n indusoimissa BUMPT-soluissa, transfektoimme BUMPT-solut DsbA-L-siRNA:lla ja tyhjensimme sitten nämä solut ATP:stä 2 tunnin ajan; solujen annettiin sitten toipua 2 tuntia. FCM-analyysit havaitsivat, että DsbA-L siRNA heikensi merkittävästi I/R-indusoitua apoptoosia BUMPT-soluissa (kuvio 3a). Immunoblottausanalyysit vahvistivat lisäksi, että DsbA-L siRNA vaimenti huomattavasti I/R-indusoitua lisääntymistä pilkkoutuneen kaspaasin-3 ilmentymisessä, Baxin lisääntynyttä kertymistä mitokondrioihin ja Cyt-c:n lisääntynyttä vapautumista sytosoliin (kuva 3 b-h). RT-qPCR-analyysitulokset osoittivat, että I/R suppressoi NRF1:n ja PCG-1a:n ilmentymistä, minkä DsbA-L siRNA käänsi (kuvat 3 i ja j). Immunoblottaustulokset olivat yhdenmukaisia ​​RT-qPCR:n havaintojen kanssa (kuvio 3 km). Sitä vastoin DsbA-L-plasmidi tehosti I/R-indusoitua apoptoosia BUMPT-soluissa, lisäsi pilkkoneen kaspaasin ilmentymistä-3, lisäsi Baxin kertymistä ja lisäsi Cyt-c:n vapautumista sytosoliin (kuva 3 o-u). RT-qPCR-analyysitulokset osoittivat, että I/R suppressoi NRF1:n ja PCG{28}}a:n ilmentymistä, jota DsbA-L-plasmidi tehosti (kuvio 3 v ja w). Immunoblottaustulokset vahvistivat edelleen RT-qPCR:n havainnot (kuvio 3 x-z). Nämä tiedot vahvistivat edelleen, että DsbA-L-välitti apoptoosiprosessia sekä mitokondrioiden toimintahäiriöitä iskeemisen vaurion aikana.

Kuvio 3. DsbA-L-välitteinen katkaistun kaspaasi3:n, BAX:n ja Cyt-c:n IR-indusoitu ilmentyminen BUMPT-soluissa. DsbA-L:n plasmidi ja siRNA transfektoitiin BUMPT-soluihin ja altistettiin sitten ATP-depletiolle 2 tunnin ajaksi ja talteenotto 2 tunniksi. (a&n) BUMPT-solujen apoptoosin virtaussytometrinen analyysi. (b&o) Immunoblotit analysoivat katkaistun kaspaasi3:n ja DsbA-L:n ilmentymisen sekä BAX:n ja Cyt-c:n ilmentymisen mitokondrio- ja sytosolifraktioissa. b-tubuliinia ja GAPDH:ta käytettiin koko lysaatti- tai sytosolisen kuormituksen kontrollina, vastaavasti. COX IV:tä käytettiin mitokondrioiden kuormituksen kontrollina. (c-h ja q-u) Niiden välisen harmaasävykuvan analyysi. (i,j ja v, w) RT-qPCR havaitsee NRF1:n ja PCG-1a:n ilmentymisen. (k ja x) NRF1:n ja PCG-1a:n ilmentymisen immunoblot-analyysi. (l, m ja y,z) Niiden välisen harmaasävykuvan analyysi. Jokainen koe (a, b, k, n, o ja x) toistettiin 6 kertaa itsenäisesti samanlaisilla tuloksilla. Yksisuuntaista ANOVAa käytettiin useiden ryhmien vertailuihin. (c-j,c-m, p-w & y, z). # p<0.05: versus saline group, sham group, or MCD group. # P<0.05 versus scramble with the saline group. * P<0.05 versus scramble with IR group.

Cistanche-lisä

4. DsbA-L oli vuorovaikutuksessa VDAC1:n kanssa BUMPT-soluissa, jotka olivat altistuneet ATP:n ehtymiselle, sekä hiirten ja AKI-potilaiden munuaisissa

Aiemmat tulokset viittaavat siihen, että jänniteriippuvainen anionikanava -1 (VDAC1), mitokondrioiden ulkokalvon tärkeä proteiini, osallistuu solujen apoptoosiin36 Äskettäinen tutkimuksemme raportoi, että DsbA-L ilmentyy myös mitokondrioissa. Siksi oletimme, että DsbA-L oli vuorovaikutuksessa VDAC1: n kanssa säädelläkseen AKI: n etenemistä. Immunosaostuksen (IP) tulokset osoittivat, että anti-VDAC1-vasta-aine veti alas sekä VDAC1- että DsbA-L-proteiineja, kun taas anti-DsbA-L saosti sekä DsbA-L:n että VDAC1:n BUMPT-solujen kontrolli- ja I/R-ryhmien kokonaisissa lysaateissa, ja hiirten munuaiset ja potilaiden munuaiset (kuva 4a). Lisäksi BUMPT-solujen hiirten munuaisten mitokondriolysaatteja ja potilaiden munuaisia ​​käytettiin myös DsbA-L:n ja VDAC1:n yhteis-IP:hen; löydökset olivat yhdenmukaisia ​​koko lysaatin tulosten kanssa (kuva 4b). DsbA-L:n rakenne sisältää nukleotideja sitovan domeenin/ATPaasidomeenin (aminohapot 1-51), aminoterminaalisen domeenin (NTD), kierteisen alueen dimerisaatiota varten (aminohapot 56-178) ja karboksyyliterminaalinen domeeni (CTD; aminohapot 185-216) (kuvio 4c). VDAC1:n rakenteen perusteella ohjelmistoennuste osoitti, että VDAC1:n N-terminaalinen domeeni (aminohapot 1-25) voi olla vuorovaikutuksessa DsbA-L:n kanssa (kuvio 4d). Selventääksemme, mitkä VDAC1:n domeenit voivat olla vuorovaikutuksessa DsbA-L:n kanssa, rakensimme HA-VDAC1:lle kolme plasmidia, jotka sisältävät aminohapot 1- 75, aminohapot 76-1098 ja koko geenin (kuva 4e). Anti-HA-vasta-aine saosti DsbA-L:n ryhmissä, joissa oli VDAC1 aminohapoilla 1-75 ja koko geeni, mutta ei VDAC1:n ja aminohappoja sisältävän plasmidin 76-1098 kanssa. Tämä osoitti, että DsbA-L oli vuorovaikutuksessa VDAC1:n alueen kanssa, jossa on aminohappoja 1-75 (kuvio 4f). Jotta voitaisiin edelleen tutkia, mitkä VDAC1:n tietyt alueet olivat vuorovaikutuksessa DsbA-L:n kanssa, transfektoimme BUMPT-solut VDAC1-plasmidien HA-tagilla D9-13, 22-27, D39-45, {{59 }}, D9-13, 22-27, 39-45, 55-57. IP-tulokset osoittivat, että anti-HA-vasta-aine saosti vain DsbA-L:n D39-45- ja 55-57-plasmideilla, ei D9-13- ja 22-27-plasmideilla (katso kuva 4g ). Tämä osoitti lisäksi, että DsbA-L oli vuorovaikutuksessa VDAC1:n aminohappojen 9-13 ja 22-27 kanssa. Kuvassa 4g on malli, joka näyttää kuinka DsbA-L on vuorovaikutuksessa VDAC1:n aminohappojen 9-13 ja 22-27 kanssa (kuva 4g). Nämä tiedot osoittavat yhdessä, että DsbA-L on vuorovaikutuksessa VDAC1:n aminohappojen 9-13 ja 22-27 kanssa.

Kuva 4. Vuorovaikutus DsbA-L:n ja VDAC1:n välillä BUMPT-soluissa ATP:n ehtymisen kanssa tai ilman sitä ja munuaisten I/R-hiirten ja potilaiden munuaisissa. (a&b n=3 ryhmää kohden) Kokonainen tai mitokondriaalinen lysaatti uutettiin DsbA-L:n ja VDAC1:n vastavuoroista yhteisimmunosaostumista varten BUMPT-soluissa, joita käsiteltiin ATP:n ehtymisellä ja palautumisella, sekä I/R-indusoitujen AKI-hiirten ja potilaiden munuaisissa. (cn=3 ryhmää kohti) DsbA-L:n toiminnalliset alueet ja rakenne. (dn=3 ryhmää kohti) DsbA-L- ja VDAC1-vuorovaikutuksen ennustemalli. (e-gn=3 per ryhmä) Anti-HA-immunosaostumat analysoitiin HA:n varalta ja havaittiin sitten DsbA-L:n suhteen käyttämällä immunoblottausta.

Herba Cistanche

5. DsbA-L:n tai VDAC1:n samanaikainen lokalisointi mitokondrioissa ja DsbA-L:n ja VDAC1:n samanaikainen lokalisointi (i) BUMPT-soluissa, joista on tyhjentynyt ATP, ja (ii) hiirten ja potilaiden munuaisissa

Vahvistaaksemme IP-tuloksemme, teimme yhteispaikannusmäärityksen. Immunofluoresenssikonfokaalimikroskopia osoitti, että DsbA-L tai VDAC1 lokalisoitui BUMPT-solujen mitokondrioihin ja sekä valehiirten että MCD-potilaiden munuaisiin ja että tämä vaikutus vahvistui entisestään BUMPT-soluissa, joista oli poistettu ATP, ja hiirten munuaisissa. ja AKI-potilaat (kuvio 5 a, b, d, e, g ja h). Mielenkiintoista on, että immunofluoresenssikonfokaalinen mikroskopia varmisti, että DsbA-L:n ja VDAC1:n yhteispaikannussignaali BUMPT-soluissa ja valehiirten ja MCD-potilaiden munuaisissa oli suhteellisen heikko. Yhteislokalisaatiosignaali lisääntyi kuitenkin huomattavasti BUMPT-soluissa, joista oli poistettu ATP, sekä hiirten munuaisissa ja potilailla, joilla oli AKI (kuvio 5 c, f ja i). Yhdessä nämä tiedot tarjoavat lisätodisteita DsbA-L:n ja VDAC1:n vuorovaikutuksen tukemiseksi mitokondrioissa.

Kuva 5. DsbA-L:n ja VDAC1:n kolokalisaatio AKI-hiirten ja -potilaiden BUMPT-solujen ja munuaisten mitokondrioissa. (a, d&g n=4 ryhmää kohti) DsbA-L:n lokalisointi mitokondrioissa BUMPT-soluissa ATP:n ehtymisen ja palautumisen kanssa tai ilman, hiirten munuaisten malli vale- ja I/R-ryhmissä sekä MCD ja I/R-potilaat. (b, e&h n=4 ryhmää kohden) VDAC1:n lokalisointi mitokondrioissa BUMPT-soluissa ATP:n ehtymisen ja palautumisen kanssa tai ilman, hiirten munuaiset mallina vale- ja I/R-ryhmissä sekä MCD ja I/ R. (c, f&i n=4 ryhmää kohden) DsbA-L:n ja VDAC1:n samanaikainen lokalisointi mitokondrioissa BUMPT-soluissa ATP:n ehtymisen ja palautumisen kanssa tai ilman, hiirten munuaiset mallina vale- ja I/R-ryhmissä sekä MCD- ja I/R-potilaat.

6. VDAC1-välitteinen BUMPT-solujen apoptoosi, jonka aiheuttaa iskemia-reperfuusio

Seuraavaksi yritimme määrittää, oliko VDAC1 osallisena I/R-indusoidun apoptoosin prosessissa BUMPT-soluissa. Immunoblottaustulokset osoittivat, että VDAC1:n ilmentyminen indusoitui I/R:ssä 2-0 ja saavutti huippunsa I/R:ssä 2-2, minkä jälkeen se väheni vähitellen I/R:ssä 2-0 ( Kuva 6 a ja b). FCM-analyysi osoitti, että I/R indusoi apoptoosia BUMPT-soluissa; tätä vaikutusta heikensi VDAC1 siRNA:n käyttö (kuvio 6c). Immunoblottaustulokset vahvistivat edelleen, että VDAC1 siRNA paransi merkittävästi I/R-indusoitua lisääntymistä pilkkoutuneen kaspaasin-3 ilmentymisessä, Baxin lisääntynyttä kertymistä mitokondrioihin ja Cyt-c:n lisääntynyttä vapautumista sytosoliin (kuva 6d- k). Sitä vastoin VDAC1-plasmidin yli-ilmentyminen tehosti yllä olevia muutoksia (kuvio 6 l-s). Yhdessä nämä tiedot osoittivat, että VDAC{18}}välitti I/R-indusoitua apoptoosia BUMPT-soluissa.

Kuva 6. Pilkotun kaspaasi3:n, BAX:n ja Cyt-c:n IR-indusoitu ilmentyminen BUMPT-soluissa välitti VDAC1:n. VDAC1:n siRNA tai plasmidi transfektoitiin BUMPT-soluihin ja altistettiin sitten ATP-depletiolle 2 tunnin ajan ja talteenotto 2 tunnin ajan. (a) VDAC1:n ja b-tubuliinin immunoblottianalyysi BUMPT-soluissa. (b) Niiden välisen harmaasävykuvan analyysi (c) BUMPT-solujen apoptoosin virtaussytometrinen analyysi. (d) Immunoblotit analysoivat pilkotun kaspaasi3:n, VDAC1:n ja DsbA-L:n ilmentymisen sekä BAX:n ja Cyt-c:n ilmentymisen mitokondrio- ja sytosolifraktioissa. b-tubuliinia ja GAPDH:ta käytettiin koko lysaatti- tai sytosolisen kuormituksen kontrollina, vastaavasti. COX IV:tä käytettiin mitokondrioiden kuormituksen kontrollina. (ek) Niiden välisen harmaasävykuvan analyysi. (i) BUMPT-solujen apoptoosin virtaussytometrinen analyysi. (m) Immunoblotit analysoivat pilkotun kaspaasi3:n, VDAC1:n ja DsbAL:n ilmentymisen sekä BAX:n ja Cyt-c:n ilmentymisen mitokondrio- ja sytosolifraktioissa. b-tubuliinia ja GAPDH:ta käytettiin koko lysaatti- tai sytosolisen kuormituksen kontrollina, vastaavasti. COX IV:tä käytettiin mitokondrioiden kuormituksen kontrollina. (ns) Niiden välisen harmaasävykuvan analyysi. Jokainen koe (a, c, d, l & m) toistettiin 6 kertaa itsenäisesti samanlaisilla tuloksilla. Kaksisuuntaisia ​​Studentin t-testejä käytettiin kahdessa ryhmävertailussa. (b), Yksisuuntaista ANOVAa käytettiin useiden ryhmien vertailuihin. (e-k ja n-s). # p<0.05: versus saline group, sham group, or MCD group.# P<0.05 versus scramble with the saline group. * P<0.05 versus scramble with IR group.

Cistanche-uute

Xiaozhou Li,a,b,1 Jian Pan,a,b,1 Huiling Li,c Guangdi Li,g Bohao Liu,a,b Xianming Tang,a,b Xiangfeng Liu,f Zhibiao He,a,b Zhenyu Peng,a ,b Hongliang Zhang,a,b Luxiang Wang,a,b Yijian Li,d Xudong Xiang,a,b Xiangping Chai,a,b Yunchang Yuan,e Peilin Zheng,h ja Dongshan Zhang a,b *

hätälääketieteen osasto, Kiinan kansantasavalta

b Emergency Medicine and Difficult Diseases Institute, Toinen Xiangyan sairaala, Central South University, Changsha, Hunan 410011, Kiinan kansantasavalta

c Oftalmologian laitos, Kiinan kansantasavalta

d Virtsakirurgian osasto, Kiinan kansantasavalta

e Rintakirurgian laitos, Kiinan kansantasavalta

f Yleiskirurgian osasto, toinen Xiangyan sairaala, Kiinan kansantasavalta

g Kansanterveyden laitos, Central South University, Changsha, Hunan, Kiinan kansantasavalta

h Endokrinologian laitos, Shenzhenin kansansairaala, Jinanin yliopiston toinen kliininen lääketieteellinen korkeakoulu, Eteläisen tiede- ja teknologiayliopiston ensimmäinen osasairaala, Shenzhen, Kiinan kansantasavalta

1 Xiaozhou Li ja Jian Pan osallistuivat yhtä paljon tähän tutkimukseen