Monoterpeeniaineosat Cistanche Tubulosasta – Kankanosides A–E:n ja kankanolin kemialliset rakenteet –

Cistanche tubulosa (SCHRENK) R. WOIKEA(Orobanchaceae) on monivuotinen loistavi, joka kasvaa juurissaSalvadorataiCalotropislajeja ja levinnyt Pohjois-Afrikassa, Arabiassa ja Aasian maissa.1) Tämän kasvin varsia (japaniksi Kanka-nikujuyou) on käytetty perinteisesti impotenssin, hedelmättömyyden, lumbagon ja kehon heikkouden hoitoon.2) Aikaisemmin useita iridoideja, monoterpenoideja,fenyylietanoidit, ja lignaanit eristettiin Kiinasta ja PakistanistaC. tubulosa. 1,3–7) Kiinalaisten luonnonlääkkeiden bioaktiivisia ainesosia koskevien sarjatutkimustemme aikana8–18) neljä uutta iridoidiglykosidia, kankanosidit A (1), B (2), C (3), ja D (4), kloorattu iridoidi, kankanoli (5) ja asyklinen monoterpeeniglykosidi, kankanosidi E (6), eristettiin tämän yrttilääkkeen metanoliuutteesta yhdessä 16 tunnetun yhdisteen kanssa, mukaan lukien 12 monoterpeeniä (7-18). Tämä artikkeli käsittelee uusien monoterpeeniaineosien eristämistä ja rakenteen selvittämistä (1-6). 

LUONNOLLINEN CISTANCHE TUBULOSA SEKSUAALISTEN TOIMINTOJEN PARANTAMISEEN PHGS75% ECH 30% ACT 12%

C. tubulosan kuivatuista varresta saatu metanoliuute (26,8 % tästä yrttilääkkeestä) altistettiin normaalifaasi- ja käänteisfaasisilikageelipylväskromatografialle ja toistettu HPLC, jolloin saatiin kankanosidit A (1, 0.{{7} }{{10}}54 %), B (2, 0.030 %), C (3, 0.{101} {32}}027 %) ja D (4, {{40}.0015 %), kankanoli (5, {{57) }}.0034 %) ja kankanosidi E (6, 0.027 %) yhdessä mussaenosidiinihapon kanssa19) (7, 0 .020 %), geniposidiinihappo19) (8, 0,030 %), 8-epilogaanihappo7) (9, 0,033 %), glurosidi19) (10, 0,14 %), antirrhidi20) (11, 0,0079) %), ajugol19) (12, 0,011 %), bartsiosidi 19) (13, 0,21 %), 6-deoksikatalpol19) (14, 0,11 %), argyoli21) (15, 0,0030 %), cistaniini 22, 23) (16) , 0,0040 %), kistakloori22) (17, 0,0035 %), (2E,6Z)-8-bD-glukopyranosyylioksi-2, 6-dimetyyli-2,6- oktadieenihappo24) (18, 0,0028 %), Dmannitoli25) (4,19 %), uridiini25) (0,0069 %), (3R)-3-hydroksi-2- pyrrolidinoni26,27) (0,0020 %) ja (3R) )-3-hydroksi-1-metyyli- 2-pyrrolidinoni27) (0,0059 %).

Kankanoside A:n rakenne (1)

Kankanosidi A (1) saatiin amorfisena jauheena ja sen optinen rotaatio oli negatiivinen ([a]D 25 - 107,4 astetta MeOH:ssa). IR-spektri 1 osoitti absorptiovyöhykkeen 1647 cm- 1:ssa, joka voidaan osoittaa olefiinifunktiolle, lisäksi voimakkaat absorptiovyöhykkeet kohdissa 3410 ja 1076 cm- 1, jotka viittaavat glykosidiosaan. Positiivisen ja negatiivisen ionin nopean atomin pommituksessa (FAB)-MS, joka oli 1, kvasimolekylaariset ionihuiput havaittiin m/z:ssä 369

(M Na) ja 345 (M-H)- ja korkearesoluutioinen FAB-MS-analyysi paljasti 1:n molekyylikaavan olevan C16H26O8. Yhdisteen 1 happohydrolyysi 1.0 M suolahapolla (HCl) vapautti D-glukoosia, joka tunnistettiin HPLC-analyysillä käyttämällä optista rotaatiodetektoria.8,10-12,15-18) 1 H- (CD3OD, taulukko 1) ja 13C-NMR (taulukko 2) spektrit 1, jotka osoitettiin useilla NMR-kokeilla,28 osoittivat signaalit, jotka voidaan osoittaa kahdelle metyylille [d 1,31 (s, 10-H3) , 1,51 (br s, 11-H3)], kaksi metyleeniä [d 1,49, 2,02 (molemmat m, 6a- ja 6b-H), 1,64, 1,67 (molemmat m, 7b- ja 7a-H)], kaksi metiiniä [d 2,21 (dd, J= 2.7, 9,5 Hz, 9-H), 2,71 (m, 5-H)] ja a,b-tyydyttymätön asetaaliryhmä [d 5,33 (d, J= 2,7 Hz, 1-H), 5,95 (br s, 3-H)] yhdessä b-glukopyranosyyliosan kanssa [d 4,62 (d, J= 7,9 Hz, 1'-H)]. Kuten kuvasta 1 näkyy, 1 H-1 H -korrelaatiospektroskopia (1 H-1 H COSY) -koe 1:llä osoitti lihavoituilla viivoilla kirjoitettujen osittaisten rakenteiden läsnäolon. Heteronukleaaristen monisidoskorrelaatioiden (HMBC) kokeessa 1:llä havaittiin pitkän kantaman korrelaatioita seuraavien protonien ja hiilen välillä (3-H, 1' -H ja 1-C; {{88}). }H3 ja 3-C 3-H, 5-H, 6-H2, 9-H, 11-H3 ja 4- C 11-H3 ja 5-C 7-H, 7-H2, 9-H , 10-H3 ja 8-C; 10-H3 ja 9-C 7-H2 ja 10-C) kuvassa 1. Yhdisteen 1 entsymaattinen hydrolyysi b-glukosidaasilla antoi aglykonin, kankageniini a:n (1a), kuten kuvassa 3 on esitetty. 13CNMR-spektrin vertailu 1a:n spektreihin paljasti glykosylaatiosiirtymän 1--aseman ympärillä kohdassa 1 [ 1: d C 94,1 (1-C), 134,6 (3-C), 53,3 (9-C); 1a: d C 92,9 (1-C), 135,3 (3-C), 54,7 (9-C)]. Siten myös bD-glukopyranosyyliosan liitettävyys kohdassa 1 selvitettiin olevan 1a:n 1-asemassa. Seuraavaksi 1:n suhteellinen stereorakenne karakterisoitiin ydin-Overhauser-parannusspektroskopia (NOESY) -kokeella, joka osoitti NOE-korrelaatioita seuraavien välillä.

matalat protoniparit ({{0}}H ja 10-H3; 3-H ja 11-H3; 5-H ja 6b-H, {{9 }}H ja 7b-H; 7a-H ja 9-H3, kuten kuvassa 2 on esitetty. 22}}-asema kohdassa 1 määritettiin soveltamalla 1,1'-disakkaridin 13CNMR-glykosylaatiosiirtymäsääntöä29), jonka havaittiin pätevän hemiasetaaliyhdisteisiin.30,31) Aseman 1- stereorakenne 1:ssä vahvistettiin säilyvän kohdassa 1a vertaamalla1H-NMR-analyysiä, mukaan lukien NOESY-koe. Glykosylaatiosiirtymäarvojen [Dd 1,2 ppm (1' -C) ja 0,9 ppm (1- C), pyridiini-d5:ssä] havaittiin olevan tunnusomaisia ​​R, Rdihemiasetaali -yhdistelmälle, joka vastasi absoluuttista stereorakennetta. 1, kuten on esitetty kuvassa 3. Tämän seurauksena absoluuttinen konfiguraatio 1--asemassa 1 määritettiin S-konfiguraatioksi ja 1:n absoluuttinen stereorakenne selvitettiin esitetyllä tavalla.

LUONNOLLINEN CISTANCHE TUBULOSA KIINALAISET PERINTEISET LÄÄKKEET PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Kankanosidien B (2) ja C (3) rakenteet

Kankanosidi B (2) eristettiin myös amorfisena jauheena, jolla oli negatiivinen optinen rotaatio ([a]D 26 - 118,7 astetta MeOH:ssa). IR-spektri 2 osoitti absorptiovyöhykkeitä kohdilla 3410, 1647 ja 1085 cm- 1, jotka johtuvat hydroksyyli-, olefiini- ja eetterifunktioista. Molekyylikaava C15H24O10 2 määritettiin kvasimolekulaaristen ionihuippujen perusteella positiivisen ionin FABMS:ssä ja korkearesoluutioisella FAB-MS:llä. Yhdisteen 2 happohydrolyysi 1.0 M HCl:lla vapautunut D-glukoosi, joka tunnistettiin HPLC-analyysillä käyttämällä optista rotaatiodetektoria.8,10-12,15-18) 1 H- ( CD3OD, taulukko 1) ja 13C-NMR (taulukko 2) spektrit28) 2:sta osoittivat signaalit, jotka voidaan osoittaa kahdelle metyleenille [d 1,40 (ddd, J= 5.2, 7,3, 13,5 Hz, 6a-H), 2,52 ( ddd, J= 7,0, 9,2, 13,5 Hz, 6b-H), 3,85, 3,99 (molemmat d, J= 11,9 Hz, 10-H2)], neljä metiiniä [ d 2,21 (dd, J= 6,4, 8,6 Hz, 9-H), 2,83 (m, 5-H), 4,02 (dd, J= 5,2, 7,0 Hz, 7-H), 5,49 (d, J= 6,4 Hz, 1-H)] ja cis-olefiinipari [d 4,95 (dd, J{{84) }},0, 6,1 Hz, 4-H), 6,22 (dd, J= 1,8, 6,1 Hz, 3-H)] yhdessä b-glukopyranosyyliosan kanssa [d 4,72 (d, J{99},9 Hz, 1'-H)]. Protoni- ja hiilisignaalit 2:n 1H- ja 13C-NMR-tiedoissa olivat samanlaiset kuin 6-deoksikatalpolin (14), lukuun ottamatta signaaleja, jotka johtuivat 7-- ja 8- asemat. Kuten kuvasta 1 näkyy, 1 H–1 H COZY -koe 2:lla osoitti lihavoituilla viivoilla kirjoitettuja osittaisia ​​rakenteita, ja HMBC-kokeessa havaittiin pitkän kantaman korrelaatioita seuraavien protoni- ja hiiliparien välillä ({ {117}}H, 1' -H ja 1-H ja 3-C; 7- C; }H, 7-H, 9-H, 10-H2 ja 8-C 7-H, 10-H2 ja 9-; C; 7-H ja 10-C). 2:n suhteellinen stereorakenne karakterisoitiin NOESY-kokeella, joka osoitti NOE-korrelaatioita seuraavien protoniparien välillä (1-H ja 10-H2; 3- H ja 4-H; { {144}}H ja 6b-H, 9-H; 7-H ja 9-H), kuten kuvassa 2. Lopuksi 14:n alkalinen käsittely 5-prosenttisella vesipitoisella kaliumhydroksidilla (KOH) tuotti yhdisteen 2 ja 19, 32), jolloin yhdisteen 2 stereorakenne selkiytyi.

KankanosideC (3) eristettiin amorfisena jauheena, jolla oli negatiivinen optinen rotaatio ([a]D 26 - 34.0 aste MeOH:ssa). Negatiivisen ionin FAB-MS:ssä 3 havaittiin pari isotooppikvasimolekulaarista ionihuippua m/z:ssä 399 ja 401 (M-H)-. Yhdisteen 3 molekyylikaavaksi määritettiin C15H25ClO10 korkean erotuskyvyn FAB-MS-mittauksella. Yhdisteen 3 happohydrolyysi 1,0 M HCl:lla vapauttamalla D-glukoosilla, joka tunnistettiin HPLC-analyysillä käyttämällä optista rotaatiodetektoria.8,10-12,15-18) 1 H- (CD3OD, taulukko 1) ja 13C-NMR (taulukko 2) spektrit28) kolmesta osoittivat kolmelle metyleenille osoitettavia signaaleja [d 1,70 (br dd, J= noin 3, 13 Hz, 4a-H), 2,70 (br dd, J{{ 41}} noin 6, 13 Hz, 4b-H), 1,68 (br d, J= noin 13 Hz, 6aH), 2,44 (m, 6b-H), 4,01, 4,04 (molemmat d, J= 11.3 Hz, 10-H2)], viisi metiiniä [d 2,47 (dd, J= 2,5, 7,9 Hz, 9-H), 2,61 (m) , 5- H), 3,94 (leveä s, 7-H), 5,10 (leveä d, J= noin 3 Hz, 3-H), 5,48 (d, J= 2,5 Hz, 1-H)] ja b-glukopyranosyyliosa [d 4,60 (d, J= 8,0 Hz, 1'-H)]. Protoni- ja hiilisignaalit 3:n 1H- ja 13C-NMR-spektreissä olivat päällekkäisiä 2:n vastaavien kanssa, paitsi 3-- ja 4--asennoista johtuvia signaaleja. BD-glukopyranosyylin ja kloorifunktion asemat 3:ssa selvitettiin H-H COZY- ja HMBC-kokeista, kuten kuvassa 1 on esitetty. Näin ollen 3:n tasorakenne rakennettiin esitetyn kaltaiseksi. 3:n suhteellinen stereorakenne määritettiin NOESY-kokeella, jossa havaittiin NOE-korrelaatioita seuraavien protoniparien välillä (1-H ja 3-H, 10-H2; 3- H ja 4b-H ja 5- H ja 9- 6b-H ja 7-; }H ja 9-H) kuvan 2 mukaisesti.

LUONNOLLINEN CISTANCHE TUBULOSA SEKSUAALISTEN TOIMINTOJEN PARANTAMISEEN PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Kankanoside D (4) ja Kankanol (5) rakenteet

Kankanosidi D (4) eristettiin amorfisena jauheena, jolla oli negatiivinen optinen rotaatio ([a]D 25 - 30,6 astetta MeOH:ssa). IR-spektri 4 osoitti absorptiokaistan 1655 cm- 1 kohdalla, mikä johtui olefiinitoiminnasta, ja voimakkaita absorptiovyöhykkeitä kohdilla 3410 ja 1078 cm- 1, mikä viittaa sen glykosidiseen vaikutukseen. rakenne. Positiivisessa ionissa FAB-MS:ssä 4 kvasimolekylaarinen ionihuippu havaittiin m/z:ssä 341 (M Na). Molekyylikaava C15H26O7 4 määritettiin korkean erotuskyvyn FAB-MS-mittauksella. Yhdisteen 4 happohydrolyysi 1,0 M HCl:lla vapauttamalla D-glukoosilla,8,10-12,15-18), kun taas (R)-rotundioli (4a) 33,34) saatiin 4:n entsymaattisella hydrolyysillä b- glukosidaasi. 1H-NMR (taulukko 3, CD3OD) ja 13C-NMR (taulukko 4) spektrit28) 4:stä osoittivat signaalit, jotka voidaan osoittaa metyylille [d 1,69 (s, 10-H3)], kolmelle metyleenille [d 1,41, 2,06 (molemmat m, 4-H2), 1,51, 2,01 (molemmat m, 6a- ja 6b-H), 2,23 (br dd, J= noin 8, 15 Hz, 7a-H) , 2,37 (br dd, J= noin 8, 15 Hz, 7b-H)], metiini [d 2,90 (m, 5-H)] ja kaksi metyleeniä, joissa on happifunktio { d [3,56 (ddd, J= 2,8, 7,4, 13,2 Hz), 3,97 (ddd, J= 4,9, 8,0, 13,2 Hz), 3-H2], 4,04, 4,18 (molemmat d, J= 12,2 Hz, 1-H2)} yhdessä b-glukopyranosyyliosan kanssa [d 4,25 (d, J= 7,7 Hz, 1' -H) )]. bD-glukopyranosyyliosan asema kohdassa 4 selvitettiin HMBC-kokeella 3--asemaksi (kuvio 1). Tämän todisteen perusteella 4:n absoluuttisen stereorakenteen määritettiin olevan kuvan mukainen.

Kankanoli (5) saatiin amorfisena jauheena, jolla oli positiivinen optinen rotaatio ([a]D 25 11,1 aste). Kemiallinen ionisaatio (CI)-MS 5 osoitti isotooppi-ionihuippujen parin m/z:ssä 221 ja 223 johtuen kvasimolekyyli-ionista (MH). Korkean resoluution CI-MS-mittaus 5 paljasti molekyylikaavan olevan C9H13ClO4. 1H-NMR (taulukko 1, CD3OD) ja 13C-NMR (taulukko 2) spektrit28) numerolla 5 osoittivat seuraavien funktioiden läsnäolon: kolme metyleeniä [d 1,60 (ddd, J= 2 .5, 5,5, 13,1 Hz, 4a-H), 1,80 (leveä dd, J= noin 3, 13 Hz, 4bH), 1,83 (leveä d, J= noin 12 Hz, 6a-H), 2,57 (m, 6b-H), 3,75, 3,88 (molemmat d, J= 9,2 Hz, 10-H2)], viisi metiiniä [d 2,76 (dd, J{) {58}},3, 8,0 Hz, 9-H), 2,50 (m, 5-H), 3,80 (br s, 7-H), 5,17 (br d, J{ {71}} noin 3 Hz, 3-H), 5,26 (d, J= 4,3 Hz, 1-H)]. 5:n tasorakenne vahvistettiin 1 H–1 H COZY- ja HMBC-kokeilla. Toisin sanoen 1 H–1 H COZY -koe 5:llä osoitti lihavoituilla viivoilla kirjoitettujen osittaisten rakenteiden olemassaolon, ja HMBC-kokeessa havaittiin pitkän kantaman korrelaatioita, kuten kuvassa 1. Suhteellinen stereorakenne 5 oli määritettiin NOESY-kokeella, jossa havaittiin NOE-korrelaatiot seuraavien protoniparien välillä (1-H ja 9-H; 3-H ja 4a-H; 4b-H ja {{95). }} H; 5-H ja 6b-H, 7-H ja 9-H) kuvassa Kuva 2. Vertaamalla yhdisteen 51H- ja 13C-NMR-tietoja yhdisteen 14a tietoihin, jotka saatiin käsittelemällä yhdistettä 14 5-prosenttisella vesipitoisella HCl:lla, kuten kaaviossa 1 on esitetty, 35) klooriryhmän sijainti kohdassa 5 tuettiin olevan 3-sijainti. Lisäksi yhdisteen 5 asetylointi etikkahappoanhydridillä (Ac2O) ja pyridiinillä tuotti 3,{121}}oksidin (5a), kun taas yhdisteestä 14a saatiin diasetaatti (14b) samoissa asetylointiolosuhteissa. Tämä todiste sai meidät myös vahvistamaan, että kloorifunktion asema on 3b-asema (kaavio 3). Tämän seurauksena yhdisteen 5 stereorakenne määritettiin esitetyn kaltaiseksi.

Kankanosidi E (6) rakenne Kankanosidi E (6) eristettiin amorfisena jauheena, jolla oli negatiivinen optinen rotaatio ([a]D 25 - 20.0 aste MeOH:ssa). IR-spektri 6 osoitti absorptiovyöhykkeitä kohdilla 3410, 1647 ja 1085 cm- 1, jotka johtuivat glykosidi- ja karbonyylifunktioista, kun taas sen UV-spektri osoitti absorptiomaksimin aallonpituudella 211 nm (log e 4,63), mikä osoittaa a,b-tyydyttymättömän karboksyylihapon läsnäolo. Molekyylikaava C16H28O8 6 karakterisoitiin positiivisten ja negatiivisten ionien FAB-MS:llä ja korkearesoluutioisella MS-mittauksella. 6 vapautuneen D-glukoosin,8,10-12,15-18) happohydrolyysi, kun taas (2E,6R)-8-hydroksi-2,6-dimetyyli{{31 }}oktaanihappo (6a) 36) saatiin yhdisteen 6 entsymaattisella hydrolyysillä b-glukosidaasilla. 1H-NMR (taulukko 3, CD3OD) ja 13C-NMR (taulukko 4) spektrit28) numerosta 6 osoittivat (2E,6R)-8-hydroksi-2,6- dimetyyli-2-okteenihappoosa [d 0,95 (d, J= 6,4 Hz, 10-H3), 1,30, 1,48 (molemmat m, 5-H2), 1,45, 1,70 (molemmat m, 7-H2), 1,65 (m, 6-H), 1,81 (s, 9-H3), 2,22 (2H, m, 4-H2) , 3,61, 3,94 (molemmat m, 8-H2), 6,78 (dd, J= 1,2, 7,3 Hz, 3-H)] yhdessä bD-glukopyranosyyliosan kanssa [d 4,26 (d, J= 7,6 Hz, 1'-H)]. Vertaamalla 13C-NMR-spektrin 6 hiilisignaaleja 6a:n signaaleihin, havaittiin glykosylaatiosiirtymä 8-aseman 6 ympärillä. Glukosidisidoksen sijainti vahvistettiin myös HMBC-kokeilla, kuten kuvassa on esitetty. Kuva 1. Näin ollen 6:n absoluuttinen stereorakenne selvennettiin olevan (2E,6R)-8-bD-glukopyranosyylioksi-2,6-dimetyyli-2-okteenihappo.

LUONNOLLINEN CISTANCHE TUBULOSA SEKSUAALISTEN TOIMINTOJEN PARANTAMISEEN PHGS75% ECH 30% ACT 12%