Kiinalainen lääketiede Cistanche kemiallinen koostumus ja kehon komponenttien analyysi Ⅲ

Luku 3 Cistanche deserticolan monikomponenttisten komponenttien kvantitatiivinen analyysi RPLC-HILIC-MS/MS:n perusteella

Perinteisen kiinalaisen lääketieteen kemiallinen koostumus on monimutkainen ja sisältää erilaisia ​​yhdisteitä, kuten primaarisia ja sekundaarisia metaboliitteja [55-561. Perinteisen kiinalaisen lääketieteen kemiallisten komponenttien (mukaan lukien hydrofiiliset ja hydrofobiset komponentit) kattavan ja luotettavan analyysin saavuttaminen on edelleen suuri tekninen ongelma. Lisäksi kunkin komponentin pitoisuus perinteisessä kiinalaisessa lääketieteessä vaihtelee suuresti, ja tavanomaisilla nestemassaspektrometriamenetelmillä on vaikea määrittää tarkasti sekä pää- että jälkikomponentteja samanaikaisesti. 1571 Perinteinen yhden sarakkeen erotus ei riitä, ja hivenyhdisteiden analyysiä perinteisessä kiinalaisessa lääketieteessä rajoittavat vakiot. Yhdisteiden interferenssistä johtuen huippujen päällekkäisyysilmiö on vakava. Vaikka monia kehittyneitä kromatografiatekniikoita on käytetty parantamaan monimutkaisten matriisien, kuten ydin-kuori- ja submikronihiukkaskromatografiakolonnit, hydrofiilisen vuorovaikutuksen kromatografiakolonnit jne., erottamista, on silti haastavaa saada aikaan kattava eri yhdisteiden erottaminen käyttämällä yksi sarake [58 -59. Monipylväskromatografiaa, jossa yhdistyvät vähintään kaksi ortogonaalista kromatografista mekanismia, kuten kaksiulotteinen LC, pylväskytkentäinen LC ja tandem-kaksipylväinen LC, on pidetty käyttökelpoisena työkaluna, joka voi merkittävästi laajentaa metaboliittien kattavuutta. Ei ole epäilystäkään siitä, että sekä kaksiulotteinen LC että sarakekytkentäinen LC voivat merkittävästi lisätä huippukapasiteettia 160). Molemmat menetelmät ovat kuitenkin venttiiliriippuvaisia, instrumentointi on monimutkaista ja aikaa vievää, ja liitosputket ja säätimet on helppo asentaa. Jäämiä on olemassa, ja nämä kaksi menetelmää ovat taipuvaisia ​​tuomaan esiin sarjan epävarmuustekijöitä, jotka johtavat kvantitatiiviseen uusittamattomuuteen1571. Vaikka käänteisen faasin hydrofiilinen vuorovaikutuskromatografia-tandem (RPLC-HILIC) ei pysty merkittävästi lisäämään huippukapasiteettia, instrumenttilaitteisto on yksinkertainen, liitosputkissa ja säätimissä ei ole jäämiä, ja se voi silti toteuttaa muutoksen hydrofiilisestä hydrofobiseksi. Suuren määrän laajasti polaarisia yhdisteitä kattava säilytys [61-66. Lisäksi kolminkertaisen kvadrupolin (QgQ) massaspektrometrin ainutlaatuista monireaktionvalvontatilaa (MRM) voidaan käyttää toisena erotusulottuvuutena RPLC-HILICin erotuskyvyn parantamiseksi. Lyhyesti sanottuna RPLC-HILIC-MRM yhdistää RPLC:n, HILIC:n ja MRM:n luontaiset edut, ja siitä odotetaan muodostuvan luotettava analyyttinen menetelmä.

KUINKA KAUVAN KESTÄÄ, ETTÄ CISTANCHE TOIMII?

Perinteisen kiinalaisen lääketieteen kunkin komponentin sisältö vaihtelee suuresti. Pääkomponentteihin verrattuna ihmiset kiinnittävät enemmän huomiota herkempien menetelmien kehittämiseen näiden jäämien tai jopa ultrahiven yhdisteiden havaitsemisen loppuunsaattamiseksi. MRM-tilaa suositellaan usein sen erinomaisen herkkyyden ja hyvän lineaarisen dynaamisen alueen vuoksi167. QqQ-massaspektrometrin Q3-kammion terminaalisen elektronikertoimen kyllästymisen vuoksi lineaarinen alue on kuitenkin yleensä kapeampi, eikä kvantifioinnin yläraja (ULOQ) voi täysin kattaa joidenkin tärkeimpien yhdisteiden sisältöä ilman luotettavaa seurantaa. nämä jälkikomponentit. Siksi tuote-ionien tuotannon estäminen voi laajentaa ULOO:ta. Käyttämällä heikennettyjä yhdisteparametreja, kuten ionipareja,potentiaalinen(DP) jatörmäysenergiaa(CE) voi vähentää kohdetuotteen ionien määrää ja siten laajentaa ULOQ:ta[68-69]

Perinteinen kiinalainen lääketiedeCistanches Herbaon kuivattu mehevä varsi ja hilseilevät lehdetCistanches kasvi. Se on yksi yleisesti käytetyistä perinteisistä kiinalaisista lääkkeistä ja tunnetaan nimellä "aavikon ginseng". Fenyylietanoidiglykosidit ovat aina olleet kuuma tutkimusaihe Cistanche deserticolassa, mutta viime vuosina myös muiden hydrofiilisten komponenttien, kuten mannitolin, farmakologiset vaikutukset on tunnistettu hyvin! 70-721. Kuitenkin rutiininomaisessa CH-kvantitatiivisessa analyysissämme tärkeimpien komponenttien sisältö, kutenechinaceaside,verbascoside, ja mannitoli olivat joskus liian korkeita ylittääkseen UV-ilmaisimen tai haihtuvan valonsirontadetektorin (ELSD) mittausalueen. Siksi yleisen laadun arvioinnin kannalta on tärkeää luoda analyyttinen menetelmä, jolla voidaan samanaikaisesti seurata hydrofiilisiä ja hydrofobisia komponentteja ja määrittää tarkasti sekä pää- että jälkikomponentit.

Tämän luvun kokeessa luotiin luotettava menetelmä, joka soveltuu monimutkaisten matriisien analysointiin - RPLC-HILIC-MS/MS nestemassaspektrometria (sarjakytkentäinen käänteisfaasi-hydrofiilinen vuorovaikutuskromatografia-tandem-massaspektrometria), jolla saatiin 23 polariteetin havaitseminen Cistanche deserticolassa. . Useiden yhdisteiden (mukaan lukien hydrofiiliset ja hydrofobiset komponentit) samanaikainen erotus, analyysi ja sisällön määritys; kun käytetään SMRM-tilaa tämän menetelmän toistettavuuden varmistamiseksi, käyttämällä asianmukaisia ​​CE-arvoja ja erilaisia ​​ionipareja männynkäpyn laajentamiseen. Pääkomponenttien, kuten inuliinin ja verbaskosidin, ULOQ mahdollistaa Cistanche deserticolan tärkeimpien komponenttien ja hivenaineosien samanaikaisen kvantifioinnin. toteuttamiskelpoinen työkalu Cistanche deserticolan laadunvalvonnan parantamiseksi ja kasvien laajan kohdistetun aineenvaihdunnan saavuttamiseksi. Genomiikka.

Osa 1 Koemateriaalit

1. Instrumentti

HPLC-Qtap-MS nestemassaspektrometri on varustettu Shimadzu HPLC:llä (varustettu 2 LC-20ADxR-pumpulla, SIL-20ACxR automaattisella näytteenottimella, SPD-M20A UV-detektorilla, CTO-20AC termostaatti, DGU-20A3R online-kaasunpoisto Se koostuu koneesta, CBM-20A Controller, Shimadzu Corporation, Japani) ja SCIEX5500 Qtrap-massaspektrometri (ESI-ionilähde, SCIEX, Foster City, CA, USA) . Tiedonkeruu ja laskenta suoritettiin Analyst Software 1.6.2 -ohjelmistolla. Mili-Q ultrapuhdas vedenpuhdistusjärjestelmä (Milipore Company, USA), Mettler ME204 elektroninen analyyttinen vaaka (Mettler Toledo Company, Sveitsi), ultraääniimuri (230V, Bransonmodel 5510, Danburry, CT, USA).

2. Materiaalit ja reagenssit

Waters Acquity UPLC HSS T3 -kolonni (2,1 x 100 mm, 1,8 μm), Waters XBridge Amide -kolonni (4,6 mm x 150 mm, 3,5 μm).Polyeetterieetteriketoni(PEEK) putki (Agilent Company, USA). Kromatografialaatuinen ja massaspektrometrialaatuinen metanoli, asetonitriili ja massaspektrometrialaatuinen muurahaishappo ostettiin ThermoFisheriltä (Pittsburgh, PA, USA), ja vesi oli laboratoriossa valmistettua Milli-Q-ultrapuhdasta vettä (Millipore, Bedford, MA, USA). . Niasiini (nikotiinihappo, cLogP, 0.799), meripihkahappo (cLogP, -0.526) ostettiin Sigma-Aldrich Companylta (St. Louis, MO, USA): uridiini (cLogP, -2.219), adenoidi-adenosiini (cLogP, -2.158), inosiini (cLogP, {{10}.106) ja guanosiini (cLogP) , -3.326) ostettiin yhtiöltä Beijing Xinjingke Biotechnology Co., Ltd. Salidroside (cLogP -0.296), 6-deoksikatalpoli (cLogP, -3.071), fenyylialaniini (cLogP, -1.556), 8-epilogaanihappo (cLogP , -2.366), mannitoli (cLogP, -2.046), sakkaroosi (cLogP) , -3.087), glurosidi (cLogP, -1.757), alaskaniosidi A (alaskaniosidi A, cLogP -0.971 ), ekinakosidi (ekinakosidi, cLogP, -1 .811), ferulihappo (cLogP, 1.421), akteosidi (cLogP, -0.890), isoakteosidi (cLogP, -0.057) ja pinoresinoli- -D-glukopyranosidi (cLogP, -0.384) toimitti Pekingin yliopiston Key Laboratory of Natural and Biomimetic Drugs, cistanosidi F (cistanosidi F, cLogP, -2.211), ostettu Chengdu Mansite Biotechnology Co., Ltd.:ltä, Tistanosidi A (cistanosidi A, cLogP, -1.365), 2'-asetyylilakteosidi (cLogP, -0.040) ja liquiritiiniapiosidi (cLogP, -0.267) ostettiin Shanghaista Shidande Biotechnology Co., Ltd. ja tubulosidi A (tubulosideA, cLogP, 0,287) ostettiin Chengdu Weiqi Biotechnology Co., Ltd:ltä. Kaikkien vertailuaineiden puhtaus testattiin HPLC-DAD-IT-TOF-MS:llä ja puhtaus oli yli 98 %. Kaikki kontrolliaineen cLogP-arvot laskettiin ChemBioDraw Ultra14.0 -ohjelmistolla (CambridgeSoftCambridge, MA, USA).