Kuinka ehkäistä ja vähentää munuaiskivien muodostumista?

lisätietoja:ali.ma@wecistanche.com

Osa Ⅰ Ⅱ: TGF-1/Smad-signaloinnin aktivoiman fosfolipidiskramblaasin säätelemä fosfatidyyliseriiniversio munuaiskivien muodostumisen varhaisessa vaiheessa

Xiu Guo Gan1 · Hai Tao Xu1 · Zhi Hao Wang

lisätietoja:ali.ma@wecistanche.com

Johdanto

Virtsakivitauti on yksi yleisimmistä ihmisten taudeista, ja siihen liittyy useita urologisia komplikaatioita [1]. Kalsiumoksalaatti (CaOx) vaurioittaa viljeltyjä munuaisten tubulussoluja, minkä jälkeen solukalvon fosfatidyyliseriini (PS) siirtyy sisäkerroksesta ulkokerrokseen in vitro toimiakseen tärkeässä roolissamunuaiskivetmuodostumista [2]. Samanlaisia ​​löydöksiä on raportoitu useissa solutasolla tehdyissä tutkimuksissa [3-6]. CaOx-välitteisen vaurion aiheuttaman PS:n ulkoistumisen taustalla oleva mekanismi jää kuitenkin epäselväksi. Aiemmat tutkimukset ovat osoittaneet, että korkea kalsiumoksalaattipitoisuus johtaa reaktiivisten happilajien (ROS) ylituotantoon[7], mikä myötävaikuttaa PS:n ulkoistumiseen munuaisten tubulussoluissa, mikä johtaa CaOx-kiteiden tumaan muodostumiseen ja kasvuun [8]. ROS ja lipidiperoksidaatio aktivoivat voimakkaasti fosfolipidiskramblaasin (PLSCR)[9], kun taas altistuminen ROS:n poistajille, kuten glutationille, koentsyymi Q10:lle tai idebenonille (synteettinen koentsyymi Q10:n homologi), vähentää PLSCR:n aktivaatiota monirakkulassa munuaissairaudessa [10]. . PLSCR, joka on ankkuroitu solukalvoon[11], toimii yhtenä kolmesta fosfolipidiä kääntävästä entsyymistä, jotka kykenevät katalysoimaan PS:n nopeaa kaksisuuntaista liikettä kalvon molemmilla puolilla pitoisuusgradienttia pitkin [12]. Fysiologisissa olosuhteissa solukalvo on epäsymmetrisessä tilassa, eikä PLSCR:llä ole vaikutusta kalvoon [13]. Eukaryoottisolujen vaurioitumisen jälkeen PLSCR kuitenkin aktivoituu ja siirtää PS:n sisäkerroksesta ulompaan kerrokseen [14,15]. Lisäksi PLSCRin kiinanhamsterin munasarjan K1-solujen yli-ilmentymisen kerrotaan stimuloivan PS:n ulkoistumista, mikä tehostaa PS:n liikkumista ulospäin solun pintaan apoptoosin aikana [16]. Siksi oletimme, että PLSCR osallistuu myös PS:n ulkoistamiseen munuaistiehyiden solukalvossa ROS:n aktivoinnin kautta.

Potentiaalinen oksalaatti-indusoidun ROS-tuotannon molekyylimekanismi tapahtuu TGF- 1/Smad-signaloinnin induktion kautta, jolla voi olla roolia ROS:n tuotannossa [17,18]. Itse asiassa TGF- 1/Smad-signaloinnin kerrotaan olevan osallisena lukuisissa munuaissairauksissa, kuten munuaiskerästulehduksessa, munuaisten interstitiaalisessa fibroosissa ja munuaiskivitaudissa[19]. Lisäksi TGF- 1:lla käsitellyt mononukleaariset solut ilmentävät PS-ulkoistumista solukalvossa aiheuttamalla PS:n siirtymisen sisäkerroksesta ulompaan kerrokseen [20]. Tietojemme mukaan TGF- 1/Smad-signaloinnin ja PSeversion välinen suhde munuaistiehyiden solukalvoissa on kuitenkin edelleen tuntematon. Oletimme, että TGF{10}} osallistuu PS-versioon munuaisten tubulussolukalvoissa aktivoimalla PLSCR:n rotan varhaisessa vaiheessa.munuaiskivetROS:n välittämä muodostuminen.

Siksi tutkimme, stimuloiko TGF- 1/Smad-signalointi PS:n ulkoistamista ROS-aktivoinnin kautta ja aktivoiko TGF PLSCR:n munuaistiehyiden solukalvossa taudin alkuvaiheessa.munuaiskivetkehittäminen in vitro ja in vivo, mikä luo teoreettisen perustan etiologiallemunuaiskivetmuodostus.

Napsauta Cistanche DHT:ta munuaissairautta varten

Materiaalit ja menetelmät

Rotan malli varhaisen vaiheen CaOx-munuaiskivien muodostumisesta

Kuusikymmentä puhdasta 3-kuukauden ikäistä urospuolista Wistar-rottaa, jotka painoivat 200 ± 20 g, toimitti Harbinin lääketieteellisen yliopiston Experimental Animal Center, ja niitä pidettiin huoneenlämpötilassa (22 ± 2 astetta) ja 50-70 prosentin kosteudessa. Kolmen päivän mukautuvan jalostuksen jälkeen ne jaettiin satunnaisesti kolmeen ryhmään (20 rottaa/ryhmä) – kontrolli,munuaiskivet, jamunuaiskivetplus SB431542 (TGF- 1/Smad-signalointireitin estäjä).

Munuaiskivetmuodostuminen alkaa varhaisena patologisena muutoksena munuaisten tubulussoluvaurion jälkeen [21,22]. Tämän vaurion prosessin tutkimiseksi varhaisen vaiheen rotan mallimunuaiskivetperustettiin, koska standardoitua lähestymistapaa ei ole vielä raportoitu. Varhaisten muutosten havaitsemiseksi munuaisten tubulussoluvaurion jälkeen käytimme menetelmää, jonka ovat raportoineet Liet al. [23]. Lyhyesti sanottuna kontrolliryhmän rotille annettiin 2 ml tislattua vettä päivittäin suun kautta letkuletkulla, kun taas rotillemunuaiskivetryhmälle annettiin 2 ml 1-prosenttista etyleeniglykoliliuosta ja 1-prosenttista NHCl-liuosta päivittäin suun kautta letkulla. Rotat sisällämunuaiskivetplus SB431542-ryhmälle injektoitiin intraperitoneaalisesti SB431542-lisuliuotinta (5 mg/kg, S1067; Selleckchem, Shanghai, Kiina) 7 päivän välein [24]. Ruokaa ja vettä tarjottiin ad libitum. Päivänä 14 rotat lopetettiin nukutusaineen yliannostuksella (pentobarbitaalinatrium, 200 mg/kg, intraperitoneaalisella injektiolla) ja heidän munuaiset leikattiin pois. Vasemmat munuaiset säilöttiin välittömästi nestetypessä myöhempää proteiinin havaitsemista varten. Oikeat munuaiset kiinnitettiin ja sitten kuivattiin ja upotettiin parafiinivahaan. Kaikki eläintutkimukset suoritettiin National Institutes of Health Guide for the Care and Use of Laboratory Animals -oppaan mukaisesti. Koemenettelyt hyväksyi Harbinin lääketieteellisen yliopiston ensimmäisen sidossairaalan Animal Experiment Use Ethics Committee (hyväksyntänumero: 2020005, Harbin, Kiina).

Kiteen muodostuminen munuaiskudoksessa

Kudosnäytteet värjättiin käyttäen Pizzolato-menetelmää [23] ja CaOx-kiteitä tarkkailtiin polarisoidun valon optisella mikroskoopilla (Sinico Optical Instrument Co., Shenzhen, Kiina). Pizzolato-positiiviset alueet mitattiin ja ilmaistiin poikkileikkausten kudosten kokonaispinta-alan permilli-ikään käyttämällä ImageJ 1.49v (National Institutes of Health, USA).

PS:n havaitseminen munuaistiehyissä olevasta solukalvosta in vivo virtaussytometrialla

Munuaisten epiteelisolujen PS-altistus arvioitiin käyttämällä fluoreseiini-isotiosyanaatilla (FITC) leimattua anneksiini V -värjäysmääritystä, kuten aiemmin on kuvattu [2]. Soluja tarkkailtiin (jossakin ryhmässä) konfokaalisen lasermikroskoopin alla (Olympus, Tokio, Japani). PS:n ulkoistumisen määrä määritettiin anneksiini V-positiivisten solujen prosenttiosuutena. Näytteiden anneksiini V -fluoresenssi mitattiin käyttämällä virtaussytometriä (488 nm viritys/530 nm emissio; Beckman Coulter, Brea, CA, USA).

TGF{0}}- ja Smad7-tasojen mittaus munuaisten tubulussolukalvossa Western blot -menetelmällä

Jäädytettyjen kudosnäytteiden talteenoton jälkeen proteiini uutettiin käyttämällä luonnollista kalvoproteiinien uuttosarjaa ProteoExtract(M-PEK) (MERCK Co., Kenilworth, NJ, USA), ja proteiinipitoisuus määritettiin käyttämällä Bio-Rad-proteiinimääritystä. sarja (Hercules, CA, USA) valmistajan ohjeiden mukaan. Sen jälkeen 4{28}}ug proteiinia ladattiin 8-prosenttiselle SDS-polyakryyliamidigeelille (pinogeeli 100 V, erotusgeeli 200 V) 1 tunnin ajaksi 300 mA:n elektrodin vakiovirralla. Geelissä olevat proteiinit siirrettiin nitroselluloosakalvolle (Kexing Co., Peking, Kiina), blokattiin 1 tunti 37 asteessa 5-prosenttisessa rasvattomassa maitojauheessa ja inkuboitiin yön yli 4 celsiusasteessa lampaan anti-rotta TGF 1:n kanssa ( ab208466; Abcam, Cambridge, UK) ja Smad7 (66 478; Proteintech, Wuhan, Kiina) vasta-aineet [25]. Piparjuuriperoksidaasilla leimattua kanin anti-lammasvasta-ainetta lisättiin (1:400; Nakasugi Jinqiao Co., Peking, Kiina) ja inkuboitiin 37 asteessa 1 tunti. Signaali havaittiin käyttämällä tehostettua kemiluminesenssireagenssia (Abcam). Positiiviset vyöhykkeet analysoitiin Gel-Pro 4.0 -geelioptisen tiheyden analyysiohjelmistolla, ja kumulatiivinen optinen tiheys (IOD-arvo) mitattiin, jolloin R-arvo edustaa suhteellista proteiinipitoisuutta seuraavasti: R=referenssi IOD-arvo PLSCR(kohde)/GAPDH:n (referenssiproteiini) IOD-viitearvo.

Soluviljely ja RNA-häiriöt

Munuaisten epiteelisolulinjaa (MDCK-solut, CCL34, siirrostukset 53-90; ATCC, Manassas, VA, USA) kasvatettiin Dulbeccon modifioidussa Eagle-elatusaineessa, jota oli täydennetty antibiooteilla (10{{1{{14} }}} U/ml penisilliiniä, 100 mg/ml streptomysiiniä; Life Technologies, Carlsbad, CA, USA) ja 10 prosenttia naudan sikiön seerumia (Life Technologies Co.) 37 asteessa 5 prosentin CO:n ilmakehässä ja jatkoviljelty 0,25 prosentin kanssa trypsiini ja 1 mM etyleenidiamiinitetraetikkahappo (Life Technologies Co., CA, USA). Soluja käsiteltiin CaOx:lla (0,5 mM; Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) 2 tuntia ja 0,5 mM CaOx:lla ja 100 ug/ml neutraloivalla anti-TGF- 1-vasta-aineella (R&D Systems, Minneapolis). , MN, USA) 2 tunnin ajan. Kaikki kokeet suoritettiin kolmena rinnakkaisena.

PLSCRin PS -version roolin määrittämiseksi munuaisten tubulusepiteelisoluja transfektoitiin PLSCR siRNA:lla [26]. siRNA:n suunnitteli ja syntetisoi Anhui General Biological System (Anhui, Kiina; katso taulukko 1). LipofectamineTM 2000 (Sunshine Biotechnology Co., Ltd., Shanghai, Kiina) käytettiin transfektioon valmistajan ohjeiden mukaisesti. . 24 tunnin transfektion jälkeen solut digestoitiin trypsiinillä, sentrifugoitiin 1000 x g 5 minuuttia, pestiin kahdesti PBS:llä ja sentrifugoitiin uudelleen. Supernatantti heitettiin pois ja pelletti suspendoitiin PBS:ään, jolloin muodostui yksisoluinen suspensio, jonka tiheys oli 1 x 10 astetta soluja/ml. FAM:n (karboksifluoreseiinin) ilmentymisen positiivinen nopeus oli 93 prosenttia ± 5 prosenttia virtaussytometrialla määritettynä. TGF 1:n ja PLSCR:n välisen suhteen arvioimiseksi edelleen soluja käsiteltiin 0,5 mM CaOx:lla tai 10 ng/ml TGF- 1:lla 2 tunnin ajan ja transfektoitiin sen jälkeen PLSCR siRNA:lla.

PLSCR-tason mittaus munuaisten tubulussolukalvoissa Western blot -menetelmällä

Proteiini uutettiin käyttämällä luonnollista kalvoproteiinien uuttosarjaa ProteoExtract (Chemical Book Co., Beijing, Kiina), ja proteiinipitoisuus määritettiin käyttämällä Bio-Rad-proteiinimäärityssarjaa (Noble-Ryder Co., Peking, Kiina). Sen jälkeen 40 ug proteiinia ladattiin 8-prosenttiselle SDS-polyakryyliamidigeelille (pinoamisgeeli 100 V, erotusgeeli 200 V) 1 tunnin ajaksi vakiovirralla 300 mA. Geelissä olevat proteiinit siirrettiin nitroselluloosakalvolle (Kexing Co., Shenzhen, Kiina) ja blokattiin 5-prosenttisella rasvattomalla maidolla 1 tunnin ajan 37 °C:ssa ja inkuboitiin yön yli 4 asteessa lampaan monoklonaalisella PLSCR-vasta-aineella (1:200, PAB781HuO1; Abcam, Guangzhou, Kiina). Sitten lisättiin piparjuuriperoksidaasilla leimattua kanin anti-lammasvasta-ainetta (1:400) ja seosta inkuboitiin 37 °C:ssa 1 tunti. Kalvon pesun jälkeen signaali havaittiin tehostetulla kemiluminesenssireagenssilla (Abcam, Guang-zhou, Kiina). Positiiviset vyöhykkeet analysoitiin käyttämällä Gel-Pro 4.0gel optista tiheysanalyysiohjelmistoa ja IOD-arvo mitattiin, jolloin R-arvo edusti suhteellista proteiinipitoisuutta, kuten edellä on kuvattu.

Taulukko 1 siRNA-sekvenssit PLSCR:lle

Kalvofosfatidyyliseriinin jakautumisen mittaus

Solukalvon PS-version määrä määritettiin käyttämällä Kimin et al. kuvaamaa fluoresenssin sammutusmenetelmää.[27] ja tutkimusryhmämme [2], nitrobentseeni-2-oksa-1,3-diatsoli (NBD, Shanghai, Kiina) fluoresenssianturina. Sen jälkeen kun solukalvon ulkokerroksessa oleva PS oli leimattu NBD:llä, soluja viljeltiin PBS:ssä, joka sisälsi 5 mM di-isopropyylifluorifosfaattia. Sen jälkeen lisättiin kalsiumoksalaattia (10 mM) sisältävää PBS:ää ja soluja inkuboitiin 37 °C:ssa. Sama määrä solususpensiota poistettiin 10 minuutin välein, ja fluoresenssin intensiteetti rekisteröitiin käyttämällä RF-5000-spektrofluorometriä (Shimadzu, Kioto, Japani). Spektrofluorometrin asetukset olivat seuraavat: 10 nm raon leveys emissioaallonpituudella 530 nm; ja 5 nm raon leveys viritysaallonpituudella 470 nm. Seuraavaksi keskimääräinen fluoresenssiarvo (FT) tallennettiin 50 s aikana. Keskimääräinen alentunut fluoresenssin intensiteetti (FD) rekisteröitiin myös sen jälkeen, kun oli käytetty ditioniittiliuosta NBD-fluoresenssin sammuttamiseen solun ulkokerroksesta. Sen jälkeen lisättiin 1 % (w/v) Triton X-100 solukalvon läpäisemiseksi. Sitten NBD-fluoresenssi solukalvon sisäkerroksesta sammutettiin ja fluoresenssin intensiteetti (FO) rekisteröitiin. NBD-PS:n prosenttiosuus sisälohkoissa laskettiin myöhemmin käyttämällä seuraavaa yhtälöä: Internalisoidun NBD-PS:n ikäprosentti=100×[(FD-FO)/(FT-FO)].

PS:n ulkoistumisen prosenttiosuus määritettiin NBD-PS-internalisoinnin mittauksessa käytetyn periaatteen mukaisesti. NBD-PS:n prosenttiosuus uloimmissa lobuleissa laskettiin myös käyttämällä seuraavaa yhtälöä: NBD-PS:n prosenttiosuus uloimmissa lobuleissa =100×[(FT-FD)/(FT-FO)].

Tilastollinen analyysi

Jatkuvat muuttujat ilmaistaan ​​keskiarvona ± keskihajonta. Käytettiin ei-parametrista parillista rank-summatestiä, t-testiä ja khin neliötestiä. Kaikki analyysit suoritettiin käyttämällä SPSS-ohjelmistoa 19.0(SPSS, Inc., Chicago, IL, USA). Tulokset P:llä<0.05 were="" considered="" statistically="">

Tulokset

TGF- 1/Smad-signalointi stimuloi PS:n ulkoistamista in vivo

Kiteen muodostuminen rottamallin munuaiskudokseen

Luoda varhaisen vaiheen rottamallimunuaiskivetEtyleeniglykolia ja ammoniumkloridia annettiin rottien vatsaan 2 viikon ajan, ja sitten jokainen munuaisleikkaus tutkittiin digitaalisella mikroskoopilla. Kontrolliryhmän näytteissä havaittiin normaaleja munuaisten tubulusrakenteita ilman kiteen muodostumista päivänä 14 (kuvio 1A). Kun munuaiskudostamunuaiskivetryhmää tarkkailtiin mikroskoopilla, munuaistiehyet näyttivät laajentuneilta näkyvillä mikrokiteillä; CaOx-kiteiden satunnaista kertymistä havaittiin joissakin munuaistiehyissä, mikä osoitti varhaisen vaiheen rottamallin onnistuneen perustamisenmunuaiskivetmunuaistiehyiden soluvaurion muodostuminen ja syntyminen.

PS:n esiintyminen munuaisten tubulussolukalvossa

Anneksiin V-FITC:tä, fluoresoivaa molekyyliä, joka sitoutuu PS:ään solun pinnalla, käytetään laajalti PS:n uudelleenjakautumisen havaitsemiseen. Tutkimuksessamme MDCK-solut normaalissa kontrollissa,munuaiskivet, jamunuaiskivetplus SB431542-ryhmiä tarkkailtiin konfokaalisen lasermikroskoopin alla (kuvio 1B). PS-versioiden määrä kasvoi vuonnamunuaiskivetryhmässä verrattuna kontrolliryhmään (P<0.05, fig.1c,="" d),="" whereas="" cells="" in="" the="">munuaiskivetplus SB431542-ryhmä osoitti alhaisempaa PS-ulkoistamisen perustasoa kuin ryhmässämunuainenkiviryhmä (s<0.05, fig.="" 1c,="">

TGF{0}}- ja Smad7-tasojen mittaus

TGF{0}}-tasomunuaiskivetryhmä kvantifioitiin Western blot -menetelmällä. Tyypillinen Western blot on esitetty kuviossa 2A yhdessä TGF- 1-tason densitometrisen analyysin kanssa. Arvot normalisoitiin kontrollin arvoihin ja ilmaistiin TGF- 1:n ja tubuliinin suhteena. Etyleeniglykolin ja NH Cl:n lisääminen lisäsi merkittävästi TGF- 1-tasoa ja alensi Smad7-tasoa verrattuna kontrollisolujen tasoihin (kuvio 2A); hoito SB431542:lla plus etyleeniglykolilla ja NH:lla kuitenkin alensi merkittävästi TGF- 1-tasoa ja nosti Smad7-tasoa verrattuna etyleeniglykolilla ja NH:lla, Cl:lla käsitellyihin soluihin.

TGF aktivoi PLSCR-aktiivisuuden munuaistiehyiden solukalvossa in vitro

PLSCR

PLSCR:n taso arvioitiin Western blot -menetelmällä. Soluja käsiteltiin CaOx:lla 2 tunnin ajan. PLSCR-taso oli mitätön kontrollisoluissa, mutta nousi merkittävästi CaOx-ryhmässä (P<0.05, fig.2b).plscr="" overexpression="" was="" inhibited="" following="" treatment="" with="" the="" anti-tgf-β1="" antibody.="" after="" the="" transfection="" of="" cells="" in="" the="" tgf-β1="" and="" caox="" groups="" with="" plscr="" sirna,="" plscr="" expression="" significantly="" reduced=""><0.05,>

Heikentynyt NBD-PS sisäänpäin suuntautuva liike

Määritimme PS:n sisään- ja ulospäin liikkeet munuaisten tubulusepiteelisolukalvossa PLSCR-aktiivisuuden arvioimiseksi. Arvioidaksemme, vaikuttaako PLSCR PS:n liikkumiseen ulommasta lehtisestä plasmakalvon sisälehteen, integroimme fluoresoivasti leimatun PS:n (NBD-PS) plasmakalvon ulkolehteen ja seurasimme sen sisäistämistä (kuva 3). MDCK-solujen sisäistämän NBD-PS:n määrä kontrolli- ja CaOx-ryhmissä oli vastaavasti noin 46,2 prosenttia ja 17,8 prosenttia. Täten PS:n sisäistämisnopeus CaOx-ryhmän soluissa oli merkittävästi alhaisempi kuin kontrolliryhmän soluissa (P<0.01, fig.3a).="" however,="" the="" level="" of="" internalized="" nbd-ps="" in="" the="" anti-tgf-β1+caox="" group="" increased="" to="" 34.2%,="" which="" was="" significantly="" higher="" than="" that="" in="" the="" caox="" group=""><0.01, fig.3a).="" after="" the="" transfection="" of="" cells="" in="" the="" tgf-β1="" and="" caox="" groups="" with="" plscr="" sirna,="" the="" level="" of="" internalized="" nbd-ps="" significantly=""><0.05, fig.3b,="">

Kuva 1 Kiteen muodostumista ja PS:n ulkoistumista havaittiin kontrolli-, munuaiskivi- ja munuaiskivi plus SB431542-ryhmissä.

(A) Kiteiden muodostuminen munuaiskudokseen päivänä 14; nuoli osoittaa mikrokiteisiä rakenteita. (B) MDCK-soluja tarkkailtiin konfokaalisella lasermikroskopialla.

(C) Virtaussytometriset käyrät versionopeudesta. (D) Käännösprosentti (prosenttia). Kolmio osoittaa P<0.05 vs.="" control.="" asterisk="" indicates=""><0.05 vs.="">munuaiskivetryhmä

Parannettu NBD-PS ulospäin liike

Sen määrittämiseksi, vaikuttaako oksalaatti PS:n ulospäin tapahtuvaan kuljetukseen, MDCK-solut leimattiin solunsisäisesti NBD-PS:llä ja määritettiin sen liikkeen laajuus esimerkkimikrofoniin. Inkubointialusta sisälsi naudan seerumin albumiinia (1 % w/v), joka uutti nopeasti pinnalla ilmennetyn NBD-PS:n. Noin 34,5 prosenttia NBD-PS:stä siirtyi ulompaan esitteeseen kontrollisoluissa, kun taas ulospäin tapahtuvan PS-siirron nopeus CaOx-ryhmän soluissa nousi 75,3 prosenttiin verrattuna koko sisäiseen leimatun NBD-PS:ään, joka oli merkittävästi suurempi kuin että kontrolliryhmän soluissa (P<0.01, fig.3a).to="" determine="" whether="" tgf-β1="" causes="" ps="" eversion="" in="" renal="" tubule="" cell="" membranes="" by="" activating="" plscr,="" cells="" in="" the="" tgf-β1="" and="" caox="" groups="" were="" transfected="" with="" plscr="" sirna.="" after="" plscr="" sirna="" transfection,="" the="" externalization="" rate="" was="" lower="" than="" that="" in="" the="" tgf-β1="" and="" caox=""><0.01 for="" both,="" fig.3b,="">

Kuva 2 TGF- 1/Smad-ekspressio kontrolli-, munuaiskivi- ja munuaiskivi- ja SB431542-ryhmissä sekä PLSCR-ilmentyminen munuaistiehyiden solukalvossa.

(A)TGF- 1/Smad-lauseke. (B) Suhteelliset fosfolipidiskramblaasin (PLSCR) tasot ja edustava blotti, jonka ekspressio normalisoitui GAPDH.P:n ekspressiolle<>

Kolmio osoittaa P<0.05 vs.control.="" the="" round="" dot="" indicates=""><0.05 vs.="" the="" caox="" group.="" pound="" sign="" indicates=""><0.05 vs.="" tgf-β1="">

NAPSAUTA TÄSTÄ OSASIAKSI Ⅱ