Erot Cistanches Herban raakatuotteiden ja viinin höyryllä käsiteltyjen tuotteiden koostumuksessa ja lääketehokkuudessa

Abstrakti:

TavoiteVertaa Roucongrongin (Cistanches Herba) kemiallisen koostumuksen ja lääketehokkuuden muutoksia ennen ja jälkeen prosessoinnin, jotta selvennetään viinin kanssa haudutuksen periaatetta.

Menetelmät LC-MS:ää sovellettiin kemiallisten koostumustyyppien tunnistamiseen ennen ja jälkeen Cistanches Herban keittämistä, yhdistettynä monimuuttujaiseen tilastolliseen analyysiin komponenttien erojen löytämiseksi ennen ja jälkeen viinin kanssa hauduttamisen. Tehokkuuseron todettiin hydratun kortisonekidney-yangin puutteen rottamallilla.

TuloksetYhteensä 45 kemiallista komponenttia tunnistettiinCistanches Herba näytteitä; Yhdisteet vaikuttivat eroihinCistanches Herba ja viinihaudutettu Cistanches Herbaovatekinakosidi, verbaskosidi, isoakteosidi ja tubulosidi B; Cistanches Herban fenyylietanoidiglykosidien kokonaisuutteella on parempi vaikutus munuaisten yangin puutteesta kärsivän rotan mallin parantamiseen kuin viinihaudutettu Cistanches Herba. Johtopäätös Cistanchen koostumus muuttuu viinin kanssa haudutuksen jälkeen ja vaikutus munuaisten yangin puutteeseen on voimistunut. Cistanches Herbato -viinissä haudutettua Cistanches Herbaa muuttavat ainesosat voivat olla aktiivisia aineita, jotka vahvistavat munuaista ja tukevat yangia.

Avainsanat: Cistanches Herba; viinihaudutettua Cistanches Herbaa;munuaisten yangin puutos;ekinakosidi;verbascoside; isoakteosidi; tubulosidi B

MYYNNISSÄ LAADUKKAAT CISTANCHE YRTIT

Wecistanchen tukipalvelu

Sähköposti:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/Puhelin:+86 15292862950

Se tunnetaan nimellä "ginseng", ja sitä levitetään pääasiassa Sisä-Mongoliassa, Ningxiassa (Azuqi), Gansussa (Changma), Xinjiangissa ja muilla alueilla [1]. Cistanche on luonteeltaan lämmin, maultaan makea ja suolainen, ja se kulkeutuu munuaisten ja paksusuolen meridiaaneihin. Se ravitsee maksaa ja munuaisia, hyödyttää esanssia ja verta sekä kostuttaa suolistoa ja lievittää ummetusta. Sitä voidaan käyttää munuaisten yangin puutteeseen, impotenssiin ja hedelmättömyyteen, vyötärön ja polvien arkuuteen, lihasten ja luuston heikkouteen, kuiviin suolisiin ja ummetukseen [2]. Nykyaikaiset tutkimukset osoittavat, että Cistanchen mehevät varret, joissa on suomulehtiä, sisältävät pääasiassa erilaisia ​​kemiallisia komponentteja, kuten fenyylietanoliglykosideja, syklopentaanieetteriterpeenejä ja niiden glykosideja, lignaaneja, sokereita jne. [3], ja niillä on useita farmakologisia vaikutuksia, kuten esim.ikääntymistä estävä,antioksidantti,anti-dementia,väsymystä vastaan, ja kostuttaa suolistoa ja lievittää ummetusta [4].

Viinin kanssa haudutuksen jälkeen Cistanchen munuaisia ​​tonisoiva ja yangia vahvistava vaikutus voimistuu. Käsittelyperiaatetta ei ole selitetty selkeästi. Fan Yanan et ai. [5-7] tutki Cistanchen vaikutuksia rotan ulostukseen, immuunitoimintaan, enteerisiin välittäjäaineisiin ja niihin liittyviin geeniekspressioihin ennen ja jälkeen käsittelyn. Da et ai. käytti fenyylietanoliglykosidien vaikutusta ennen ja jälkeen käsittelyn selittääkseen sen käsittelyperiaatetta; Zhang Chao et ai. [8] käytti fenyylietanoliglykosidien pitoisuuden muutoksia ennen ja jälkeen käsittelyn selittääkseen käsittelyn periaatteen; Zhang Shuyun et ai. [9] käytti betaiinipitoisuuden muutoksia ennen ja jälkeen käsittelyn selittääkseen käsittelyn vaikutuksen Cistancheen. Nykyinen Cistanchen prosessoinnin kirjallisuus keskittyy pääasiassa farmakologiaan, ja komponenttien tutkimuksessa keskitytään myös yksittäisten ainesosien sisällön muutoksiin, mutta ainesosien erojen systemaattinen tutkimus puuttuu. Tässä kokeessa käytettiin nestekromatografia-massaspektrometria (LC-MS) tekniikkaa yhdistettynä monimuuttujaiseen tilastolliseen analyysiin Cistanchen kemiallisten komponenttien tunnistamiseen, raaka-Cistanchen ja viinihaudutettujen tuotteiden välisten erojen selvittämiseen ja tehokkuuden tutkimiseen. raaka Cistanche ja viinihaudutettuja tuotteita hydrokortisonin aiheuttaman munuaisten yangin puutteen rottamallin avulla, jotta voidaan selittääCistanche vahvistaa munuaisia ​​ja edistää yangiaja viinihaudutetun Cistanchen käsittelyperiaate.

MYYNNISSÄ LAADUKKAAT CISTANCHE YRTIT

1 Materiaalit

1.1 Laitteet

Ultimate 3000 UPLC-LTQ Orbitrap XL sähköstaattisen kentän tandem-ioniloukun korkearesoluutioinen massaspektrometri (Thermo Fisher Scientific, USA), Theraio Xcaliber -työasema; BT125D 1/100000 elektroninen vaaka (Sartorius Instrument System, Saksa); KQ500DE CNC-ultraäänipuhdistin (Kunshan Ultrasonic Instrument Co., Ltd.); Nopea XHF-D-hajottaja (Guangzhou Hu Ruiming Instrument Co., Ltd.); Multiskan FC -mikrolevylukija (Thermo Scientific); HC-3518 nopea sentrifugi (Anhui Zhongke Zhongjia Scientific Instrument Co., Ltd.); BW-YLS-1B monitoiminen rotan vapaaehtoistoiminnan tallennin (Shanghai Ruanlong Technology Development Co., Ltd.).

1.2 Huumeet

Massaspektrometrialaatuinen metanoli (Fisher); massaspektrometrialaatuinen muurahaishappo (massaosuus 99 %, Sigma Aldrich); vesi (Watsonin tislattu vesi); Jinkui Shenqi Pills (Beijing Tongrentang Technology Development Co., Ltd. Pharmaceutical Factory, eränumero 1701653); hydrokortisonisukkinaattinatriumsuola (Tianjin Biochemical Pharmaceutical Co., Ltd., eränumero 011705067); superoksididismutaasi (SOD) -pakkaus (eränumero 20170115) ja malondialdehydi (MDA) -pakkaus (eränumero 20170117) ostettiin yhtiöltä Nanjing Jiancheng Biotechnology Co., Ltd.; testosteroni (T) ja estradioli (E2) määritettiin Qingdao Kechuang Quality Inspection Centerissä ja kreatiniini (CREA) ja veren ureatyppi (BUN) määritettiin Sisä-Mongolian lääketieteellisen yliopiston analyysi- ja testauskeskuksessa.

1.3 Eläimet

100 urospuolista SD-rottaa, jotka painoivat 180-200 g, ostettiin Xinglong Experimental Animal Farmilta Haidianin alueelta Pekingistä, lisenssinumero: SCXK (Peking) 2016-0003. Tämän eläinkokeen on hyväksynyt Pekingin kiinalaisen lääketieteen yliopiston eettinen komitea, eettinen numero: BUCM-4-2022091301-3095.

1.4 Näytteet

Professori Li Xiangri Pekingin kiinalaisen lääketieteen yliopiston kiinalaisen lääketieteen koulusta totesi kuusi erää Cistanche deserticolaa aidoksi, ja ne saatiin Orobanchaceae-heimoon kuuluvan Cistanche deserticola YC Ma -kasvin kuivatuista mehevistä varreista, joissa on suomulehtiä. Yksityiskohtaiset tiedot näytteistä on esitetty taulukossa 1.

Taulukko 1 Cistanches Herba -näytteiden tietolomake

2 menetelmät

2.1 Näytteen valmistelu

2.1.1 Raakatuotteiden valmistus Ota puhdas Cistanche deserticola, pehmennä se, leikkaa paksuiksi viipaleiksi ja kuivaa.

2.1.2 Viinihaudutettujen tuotteiden valmistus

Ota 100 g Cistanche deserticola -viipaleita, lisää 30 ml riisiviiniä, sekoita hyvin ja hauduta, kunnes viini on imeytynyt. Hauduta vedessä 12 tuntia, ota pois ja anna jäähtyä hieman ja kuivaa. Katso kuvasta 1 raaka-Cistanche deserticola- ja viinihaudutettu Cistanche deserticola -näytteet.

2.2 Tutkimus Cistanche deserticolan ainesosien eroista ennen ja jälkeen haudutuksen viinissä

2.2.1 Liuoksen valmistus

Ota noin {{0}},2 g kuivaa näytejauhetta (siirretty 65-verkkoseulan läpi), punnita tarkasti, laita 50 ml:n ruskeaan mittapulloon, lisää 25 ml 50-prosenttista metanolia. vesiliuos, sulje tiiviisti, punnita massa, liota 30 minuuttia, käsittele ultraäänellä 40 minuuttia (teho 250 W, taajuus 35 kHz), jäähdytä, punnita uudelleen, lisää 50 % metanolin vesiliuosta hävinneen massan korvaamiseksi, ravista hyvin, anna seistä, suodata supernatantti 0,22 μm:n mikrohuokoisen suodatinkalvon läpi ja aseta suodos ruskeaan nestefaasipulloon liuoksen saamiseksi.

MYYNNISSÄ LAADUKKAAT CISTANCHE YRTIT

2.2.2 Kromatografiset olosuhteet

Waters ACQUITY UPLCTM BEH C18 -kromatografinen kolonni (100 mm × 2,1 mm, 1,7 μm), kolonnin lämpötila 35 astetta; näytekammion lämpötila 10 astetta, näytteen injektiotilavuus 3 μL, metanoli (A)-0,1 % muurahaishapon vesiliuos (B) liikkuvana faasina, gradienttieluointi: 0-4 min, 10 %{ {13}} % metanolia; 4-18 min, 26 %-40 % metanolia; 18-24 min, 40 %-100 % metanolia; 24-28 min, 100 % metanolia. Tilavuusvirtausnopeus oli 0,3 ml/min ja detektioaallonpituus oli 330 nm.

2.2.3 Massaspektrometriaolosuhteet

Käytettiin sähkösumutusionisaatiolähdettä (ESI), negatiivinen ionimoodin skannaus, kapillaarilämpötila oli 350 astetta, vaippakaasun tilavuusvirtausnopeus oli 30 arb, apukaasun tilavuusvirtausnopeus 10 arb, suihkutusjännite oli 3

KV, kapillaarijännite oli −35 V, putkilinssin jännite −110 V, skannausalue m/z 100-1 000, tiedonkeruujärjestelmä Xcalibur 2.1.

2.2.4 Pääkomponenttien analyysi (PCA)

Kun tarkkojen massa-retentioaikatietoparien kaksiulotteinen matriisi on saatu, kojetaulu näyttää kaikki automaattisesti tuodut tarkat retentioaikatiedot ja laajennetun tilastomoduulin PCA-menetelmää käytetään analysointiin.

2.2.5 Ortogonaalinen osittaisten pienimmän neliösumman erotteluanalyysi (OPLS-DA) LCMS yhdistää nestekromatografian korkean erotuksen massaspektrometrian korkeaan herkkyyteen. Kerätty data on melko suuri, ja tietojen käsittelyyn tarvitaan monimuuttujatilastoanalyysi. OPLS-DA jakaa tiedot kahteen ryhmään ja käyttää valvottua tilastollista mallia saadakseen suuren määrän ortogonalisoituja spektrejä, jotka osoittavat selvästi erot näiden kahden näyteryhmän välillä. Lisäkuvan S-Plot-muodossa jokainen piste edustaa tarkkaa massan retentioajan dataparia, X-akseli edustaa muuttujaa, mitä kauempana datapiste on nollapisteestä, sitä suurempi pisteen osuus näyteerosta on ; Y-akseli edustaa saman näyteryhmän näytteiden välistä korrelaatiota, mitä kauempana tarkka massan ja retentioajan datapari on nollapisteestä, sitä vahvempi korrelaatio on. Siksi massan tarkat retentioaikatietoparit S-muotoisen käyrän molemmissa päissä edustavat luotettavimpia ominaisioneja kustakin näyteryhmästä.

MYYNNISSÄ LAADUKKAAT CISTANCHE YRTIT

2.2.6 Massaspektrometrinen rakenneanalyysi

Kun tunnusomaiset ionit oli saatu, alkuainekoostumus ja yhdisteiden sovitus suoritettiin laskemalla tarkka suhteellinen molekyylimassa ja yhdistämällä olemassa oleva tietokanta ja asiaankuuluva kirjallisuus differentiaalikomponenttien tunnistamiseksi.

2.3 Tutkimus tehokkuuden eroista ennen ja jälkeen haudutuksen viinin kanssa

2.3.1 Cistanche deserticola -uutteen valmistus

Cistanche deserticola (eränumero 160901) ja vastaava viinihaudutettu Cistanche deserticola -jauhe uutettiin kohdan "2.2.1" olosuhteiden mukaisesti, suodatettiin ultraäänikäsittelyn jälkeen, toistettiin kahdesti, suodos yhdistettiin, väkevöitiin tyhjötislauksella ja jäädytettiin. kuivattu.

2.3.2 Eläinkokeiden ryhmittely ja lääkkeiden antaminen

Kuva 1 Cistanches Herba A ja viinihaudutettu Cistanches Herba B

(1) Ryhmittely: Rotille annettiin vapaa pääsy veteen ja ruokavalioon. Yhden viikon mukautuvan ruokinnan jälkeen ne jaettiin satunnaisesti 5 ryhmään (taulukko 2), joissa kussakin ryhmässä oli 10 rottaa, eli normaaliryhmä, malliryhmä, raaka Cistanche deserticola -ryhmä (PR), viinihaudutettu Cistanche deserticola -ryhmä (PW) ja positiivinen kontrolli Jinkui Shenqi Pill -ryhmä (JK). (2) Mallintaminen: Normaalia ryhmää lukuun ottamatta kaikkiin neljään muuhun ryhmään injektoitiin hydrokortisoni-natriumsukkinaatti-injektio im, annoksella 20 mg/kg, 14 peräkkäisenä päivänä. Normaalille ryhmälle injektoitiin sama annos normaalia suolaliuosta. Jokaisen ryhmän rottien yleistilaa tarkkailtiin sen määrittämiseksi, ilmenikö niillä oireita, kuten kylmän pelkoa, lämmön mieltymystä, kylmiä raajoja, kirkasta ja pitkää virtsaa, käpristyneitä ja kaarevia selkänoja, tylsiä ja sotkuisia hiuksia ja henkistä masennusta. Samanaikaisesti mitattiin kunkin ryhmän rottien ruumiinpaino, spontaanien toimintojen lukumäärä, ruoan saanti, veden saanti, virtsan eritys ja muut indikaattorit.

(3) Anto: Rottien annostus laskettiin Jinkui Shenqi Pillsin ja Cistanche deserticolan kliinisen annoksen perusteella. Jokaisen Cistanche deserticola -ryhmän annostus oli 1,80 g/kg raakalääkemääränä mitattuna. Spesifinen annostus on esitetty taulukossa 2. Kukin Cistanche deserticola- ja Jinkui Shenqi Pills -uute valmistettiin liuoksiksi, joilla oli tietty pitoisuus deionisoidulla vedellä. Liuos annettiin mahalaukunsisäisesti joka päivä mahalaukunsisäisenä tilavuutena 10 ml/kg 30 peräkkäisen päivän ajan. Normaalille ryhmälle ja malliryhmälle annettiin mahansisäisesti yhtä suuri määrä deionisoitua vettä joka päivä. Ruumiinpaino mitattiin viikoittain ja mahalaukunsisäinen tilavuus säädettiin rottien ruumiinpainon mukaan. Annon jälkeen rotat pidettiin paastossa 12 tuntia. Pentobarbitaalipuudutuksen jälkeen veri kerättiin vatsa-aortasta seerumiindeksin havaitsemiseksi. Munuaiset, kivekset, lisäkives, siemenrakkulat ja eturauhanen poistettiin asiaankuuluvan indeksin havaitsemiseksi.