Cistanche Deserticola -polysakkarideilla on hermostoa suojaava vaikutus

lisätietoja:Ali.ma@wecistanche.com

Yue Liu, et ai

Abstrakti:

Iskemia aivohalvaus on sairaus, jolla on korkea sairastuvuus ja kuolleisuus.Cistanchedeserticolapolysakkarideja(CDP) omaa laajan valikoiman hyödyllisiä vaikutuksia, mukaan lukien hepatosuojaus ja immuunihomeostaasi. Sikäli kuin tiedämme, CDP:n suojaava vaikutus(Cistanchedeserticolapolysakkaridit)happiglukoosivajeen/reperfuusion (OGD/RP) vaurioituneita hermosoluja ei ole tutkittu. Tässä tutkimuksessa OGD/RP vahingoitti PC12-solumallia. Lyhyesti, CDP(Cistanchedeserticolapolysakkaridit)({0}},05, 0,5 ja 5 ug/ml) annettiin ennen reperfuusiota. CDP:n suojaava vaikutus(Cistanchedeserticolapolysakkaridit)Sitten arvioitiin solujen elinkelpoisuuden, laktaattidehydrogenaasin (LDH) vuodon, [Ca2 plus] I:n, mitokondriaalisen kalvopotentiaalin (MMP) ja solujen apoptoosin perusteella, andredox-tila reperfuusion jälkeen arvioitiin määrittämällä reaktiiviset happilajit (ROS), katalaasi ( CAT), glutationiperoksidaasi (GSH-Px) ja kokonaisantioksidanttikapasiteetti. Perustuu siihen tosiasiaan, että Parkinsonin tautiin liittyvä proteiini DJ-1 osallistuu endogeeniseen antioksidanttiin ja suorittaahermoja suojaavavaikutuksia iskemian jälkeen, tutkimme CDP:n välistä vuorovaikutusta(Cistanchedeserticolapolysakkaridit)ja DJ{{0}}. DJ-1:n ilmentyminen havaittiin ELISA- ja Western blot -analyysillä, ja DJ-1:n translokaatio arvioitiin immunofluoresenssin avulla. Tulokset osoittivat, että CDP (0,05, 0,5 ja 5 ug/ml) heikensi PC12-solukuolemaa, säilytti MMP:n ja kalsiumin homeostaasia; esti oksidatiivista stressiä ja vähensi solujen apoptoosia. Lisäksi CDP (5 ug/ml) stimuloi huomattavasti DJ{10}}-eritystä ja ilmentymistä. Kaiken kaikkiaan tulokset viittaavat siihen, että CDP(Cistanchedeserticolapolysakkaridit)tekee ahermoja suojaavavaikutus OGD/RP-indusoituja vaurioita vastaan ​​estämällä oksidatiivista stressiä ja säätelemällä DJ-1-reittiä

Avainsanat:Cistanche deserticola, polysakkaridit, hermostoa suojaava, happiglukoosivaje/reperfuusio, oksidatiivinen stressiDJ-1

Klikkaa Cistanche UK -tuotteisiin

1. Esittely

Iskeeminen aivohalvaus on toiseksi yleisin kuolinsyy ja pitkäaikaisen työkyvyttömyyden ensisijainen syy maailmanlaajuisesti [1]. Aivohalvauksen aiheuttamien kuolemien odotetaan nousevan 7,8 miljoonaan vuonna 2030 [2]. Kiinassa 58–142 ihmistä 100:ta kohden000 kuolee aivohalvaukseen vuosittain. Siten on kehitettävä tehokkaita strategioita, jotka kääntävät iskemia-reperfuusiovaurion. Laaja näyttö tukee sitä, että oksidatiivinen stressi on tärkeä tekijä, joka edistää aivoinfarktin kehittymistä ja etenemistä reperfuusion aikana [3,4]. Siksi löytää tehokashermoja suojaavaaineet, jotka pystyvät vähentämään ROS:ää ja estämään oksidatiivista stressiä, ovat herättäneet huomattavaa kiinnostusta tutkimuksessa. Parkinsonin tautiin liittyvä proteiiniDJ-1 välittää hermosolujen suojausta stimuloimalla anti-apoptoottista ja antioksidatiivista geeniekspressiota [4,5]. DJ-1 voi siirtyä mitokondrioihin oksidatiivisen stressin ja mitogeeni-stimulaation avulla, ja sitä voidaan erittää solunulkoiseen matriisiin patologisissa olosuhteissa, kuten rintasyövän, melanooman ja OGD/RP-vaurion yhteydessä [6]. Lisäksi DJ-1 on hyödyllinen iskeemisen hermoston rappeutumisen terapeuttisessa kohdentamisessa, koska sillä on kriittinen rooli antioksidanttina [4,7]. Viimeisten 10 vuoden aikana useat yhtyeet ovat vahvistaneet, että DJ{12}} onhermoja suojaavavaikutukset in vivofokaalisiin aivoiskemiamalleihin ja in vitro OGD/RP-malleihin [6–9]. Samaan aikaan jotkin lääkkeet, mukaan lukien syklosporiini A ja natriumfenyylibutyraatti, kumoavat hermosolujen kuoleman DJ-1-inskemian aivohalvauksen avulla [9,10] ].

Cistanchedeserticola, kiinteä kuivattu kasviCistanchedeserticolaYCMa ja Cistanche tubulosa Wight, tuotetaan pääasiassa Pohjois- ja Luoteis-Kiinan autiomaa-alueilla [11]. C. deserticola on syötävää ja sitä on kunnioitettu "aavioiden ginsenginä". Akupistereseptissä sitä käytetään kroonisen munuaissairauden, seksuaalisen impotenssin, naisten hedelmättömyyden, leukorrhean, metrorragian ja seniilin ummetuksen hoitoon [12].C. deserticola-polysakkarideja, joista on eristetty pääasiallinen aktiivinen komponenttiCistanche deserticola. CDP, säätelee immuunitoimintaa ja lipiditasapainoa ja suojaa ikääntymistä, hapettumista ja maksavaurioita vastaan. Lisäksi CDP(Cistanchedeserticolapolysakkaridit)estää iskemia-reperfuusiovaurioita sydämessä ja maksassa [13,14]. Viimeaikaiset tutkimukset kertoivat, että CDP(Cistanchedeserticolapolysakkaridit)ovat myrkyttömiä[12,15,16], ja muita C. Deserticolasta uutettuja fytokemikaalit, mukaan lukien ekinakosidi, isoakteosidi, akteosidi ja salidrosidi, sisältäväthermoja suojaavavaikutukset [11,12]. CDP:n mahdollista käyttöä iskeemisen aivohalvausvaurion parantamiseen ei kuitenkaan ole toistaiseksi raportoitu.

Tässä tutkimuksessa oletamme, että CDP(Cistanchedeserticolapolysakkaridit)estää oksidatiivista stressiä hermosolujen suojaamiseksi. CDP:n mahdolliset suojaavat vaikutukset(Cistanchedeserticolapolysakkaridit)iskemia aivohalvausvaurioita tutkittiin käyttämällä OGD/RP-vaurioituneita PC12-soluja. Sitten tutkittiin taustalla olevia DJ-1-vuorovaikutuksia.

2. Menetelmät

2.1. Soluviljely ja OGD/RP-malli

PC12-soluja viljeltiin RPMI 1640 -elatusaineessa, joka sisälsi 10 % FBS:ää, 37 asteessa normoksisessa inkubaattorissa, joka sisälsi 5 % C02:ta. Väliaine vaihdettiin 48 tunnin välein. OGD/RP malli valmistettiin. PC12-solut pestiin ja altistettiin Earlen tasapainotetulle suolaliuokselle. Sitten solut siirrettiin anaerobiseen kammioon, joka sisälsi 5 % C02:ta ja 95 % N2:ta 37 asteessa 4 tunnin ajaksi, ja annettiin sitten käydä läpi hapettumisen. Tämän vaiheen aikana soluihin lisättiin sama tilavuus elatusainetta. Uudelleenhapetuksen jälkeen solut asetettiin normoksiseen inkubaattoriin 24 tunniksi.

2.2. Lääkkeiden hallinto

CDP(Cistanchedeserticolapolysakkaridit)ostettiin Yuanye Biological Technology Co.:lta, Shanghaista, Kiinasta (C23J7Y18405, > 98 prosentin puhtaus). Positiivisena kontrolliyhdisteenä käytettiin nimodipiinia, ensilinjan ehkäisevää lääkettä iskemian aivohalvaukseen [17–19]. Nimodipiini-injektio oli Bayer Companylta. Solut jaettiin satunnaisesti kuuteen ryhmään, nimittäin kontrolli, vehicle (OGD/RP), Nimo (5 ug/ml), CDP.(Cistanchedeserticolapolysakkaridit)(0,05 ug/ml), CDP(Cistanchedeserticolapolysakkaridit)(0,5 ug/ml) ja CDP (5 ug/ml). Nimodipiini ja CDP(Cistanchedeserticolapolysakkaridit)lisättiin ennen reperfuusiota. Kontrolliryhmää viljeltiin normaalissa alustassa ja inkuboitiin normoksisissa olosuhteissa.

2.3. Solujen elinkelpoisuus: MTT- ja NRU-määritykset

PC12-soluja (6 x 103 per kuoppa) kylvettiin 96-kuoppaviljelylevylle. Solut käsiteltiin kunkin ryhmän vaatimusten mukaisesti. MTT:tä (Solarbio, Kiina) lisättiin soluihin pitoisuutena 5 mg/ml ja inkuboitiin 4 tuntia 37 °C:ssa. Formatsaani on sukkinaattidehydrogenaasin pelkistystuote elävissä soluissa [20]. DMSO:ta lisättiin muodostuneen sinisen formatsaanin liuottamiseksi. Absorbanssi aallonpituudella 490 nm havaittiin Microplate Readerilla (Thermo, USA) sen jälkeen, kun soluja ravisteltiin 10 minuuttia 25°C:ssa. Solujen elinkelpoisuustulokset ilmenivät prosenttiosuutena kontrolliryhmästä [21].

Neutraalipunaisen oton (NRU) määritys suoritettiin aiemmin julkaistun protokollan mukaisesti [22]. Kun reperfuusiojaksot olivat päättyneet, soluihin lisättiin neutraalia punaista (Solarbio, Kiina) konsentraatiolla 50 ug/ml. Seosta inkuboitiin 3 tuntia. Sitten solut pestiin nopeasti pois liuoksella, joka sisälsi 0,5 prosenttia formaldehydiä ja 1 prosenttia kalsiumkloridia. Sen jälkeen solut lisättiin seokseen, joka sisälsi 1 % etyylihappoa ja 50 % vedetöntä etanolia. Levyt luettiin 540 nm:n absorbanssilla sen jälkeen, kun soluja oli ravistettu 20 minuuttia 37 asteessa. Solujen elinkelpoisuuden tulokset ilmenivät prosenttiosuutena kontrolliryhmästä.

Cistanche deserticola polysakkariditon aNeuroprotektiivinen vaikutus

2.4. Sytotoksisuuden arviointi

LDH on sytoplasminen entsyymi, joka katalysoi laktaattitopyruvaatin hapettumista. LDH vapautuu nopeasti solunulkoiseen nesteeseen, kun solukalvo vaurioituu. Siksi LDH-detektio suoritetaan yleensä sytotoksisuuden arviointia varten. [23]. Kokeellinen menettely noudatti kaupallisia pakkauksen ohjeita, jotka toimitti LDH-määrityssarja (Jiancheng, Kiina). Kunkin näytteen absorbanssi havaittiin 440 nm:ssä mikrolevylukijalla. Solukuoleman prosenttiosuus laskettiin käyttämällä seuraavaa kaavaa: Elinkyky (prosentti)=(OD-hoito - ODTreatment blank)/(OD Max LDH-aktiivisuus - OD Max LDH-aktiivisuus nolla) × 100 prosenttia.

2.5. Intrasellulaarisen Ca2 plus -pitoisuuden havaitseminen

Solunsisäinen Ca2 plus -pitoisuus mitattiin Fluo-3/AM:lla [15]. PC12-solut pestiin PBS:llä kolme kertaa ja inkuboitiin sitten 2 µM Fluo-3/AM:lla (Beyotime, Kiina) 30 minuuttia 37 asteessa pimeässä. Sitten solut pestiin PBS:llä kolme kertaa solunulkoisen väriaineen poistamiseksi. Fluo-3/AM:n fluoresenssin intensiteetti määritettiin laserpyyhkäisykonfokaalimikroskoopilla (Olympus, Japani). Ohjelmistopaketti Olympus FV10-ASW 4.1 Viewer ja ImageJ käytettiin harmaasävyarvojen laskemiseen

2.6. MMP:n mittaus

JC-1 (5,5',6,6'-tetrakloori-1,1',3,3'-tetraetyyli-imidakarbosyaniini; Beyotime, Kiina) on kätevä jänniteherkkä anturi, jota käytetään yleisesti värjäykseen solut ja arvioida MMP [24]. PC12-solut pestiin kahdesti kylmällä PBS:llä ja inkuboitiin sitten seoksen kanssa, joka sisälsi 50 prosenttia alustaa ja 50 prosenttia työnestettä, 15 minuuttia 37 asteessa pimeässä. Sitten seos heitettiin pois ja korvattiin tuoreella alustalla. Punaiset ja vihreät fluoresenssikuvat otettiin laserpyyhkäisykonfokaalimikroskopialla. MMP-mittauksessa käytettiin punaisten ja vihreiden fluoresenssisignaalien suhteellista osuutta [25]. Harmaasävyarvojen laskemiseen käytettiin ohjelmistopakettiaOlympus FV10-ASW 4.1 Viewer ja ImageJ.

2.7. Apoptoosin havaitsemismääritys, Hoechest33342 ja virtaussytometria-analyysi

Hoechst33342, DNA:ta sitova väriaine, käytettiin solujen apoptoosin tutkimiseen [26]. Uudelleenperfuusion jälkeen PC12-solut pestiin PBS:llä kolme kertaa ja inkuboitiin Hoechst33342:lla (Beyotime, Kiina) konsentraatiolla 5 ug/ml 15 minuuttia 37 asteessa pimeässä. Sitten soluja tarkkailtiin laserpyyhkäisykonfokaalimikroskoopilla. Apoptoottiset solut osoittivat voimakasta sinistä fluoresenssia ja tuman kondensaatiota. Jokaisessa värjäyskokeessa vangittiin kolme satunnaista kenttää ja määritettiin niiden määrä. Olympus FV10-ASW 4.1 Viewer ja ImageJ käytettiin harmaasävyarvojen laskemiseen. Apoptoottisten solujen prosenttiosuudet laskettiin seuraavan kaavan avulla: apoptoottinen määrä/kokonaismäärä × 100 prosenttia [27].

2.8. ROS-tuoton mittaus

Fluoresoiva koetin 2',7'-dikloorifluoreseiinidiasetaatti (DCFH-DA; Jiancheng, Kiina) voi tunkeutua solukalvoihin ja se voidaan hydrolysoida ei-fluoresoivaksi DCFH:ksi. Solunsisäinen ROS hapettaa DCFH:n fluoresoivaksi DCF:ksi [29]. Uudelleenperfuusion jälkeen solut pestiin kahdesti PBS:llä ja inkuboitiin sitten DCFH-DA:n kanssa lopullisessa pitoisuudessa 10 μM 45 minuuttia 37 asteessa pimeässä. Fluoresenssi havaittiin afluoresenssispektrofotometrillä, jonka viritysaallonpituus oli 485 nm ja emissioaallonpituus 535 nm.

Cistanche deserticola polysakkariditon aNeuroprotektiivinen vaikutus

2.9. Oksidatiivisen stressin indikaattoreiden määrittäminen: CAT-, GSH-Px- ja T-AOC-tasot

Solut kaavittiin ja suspendoitiin uudelleen PBS:ään. Saatuja solususpensioita sonikoitiin 45 kertaa jäillä ja sentrifugoitiin 1000 r/min 10 minuuttia 4 asteessa. Supernatantit säilytettiin ja niitä käytettiin havaitsemiseen [24]. Solusupernatantin kokonaisproteiinipitoisuus mitattiin BCA-proteiinimääritysreagenssipakkauksella (KeyGEN, Kiina). CAT-, GSH-Px- ja T-AOC-tasojen aktiivisuudet mitattiin valmistajien ohjeiden mukaisesti (Jiancheng, Kiina). Kunkin näytteen absorbanssi havaittiin mikrolevylukijalla.

2.10. Solunulkoisen DJ-1-pitoisuuden mittaus

PC12-soluja (6 × 103 per kuoppa) kylvettiin 96-kuoppaviljelylevyille. Uudelleenperfuusion jälkeen solusupernatantti kerättiin ja analysoitiin DJ-1/PARK-7 ELISA Kitillä (Raybio, USA) ) valmistajan ohjeiden mukaisesti [9]. Kunkin näytteen absorbanssi havaittiin Microplate Reader -laitteella kaksoisaallonpituudella 450 nm tai 540 nm.

2.11. Western blot -analyysi

Soluproteiinit uutettiin jääkylmällä lyysipuskurilla valmistajien ohjeiden mukaisesti (KeyGEN, Kiina). Proteiinipitoisuus määritettiin BCA-proteiinimääritysreagenssipakkauksella. Yhtä suuret määrät proteiinilysaatteja (20 ug) kustakin ryhmästä erotettiin 12-prosenttisessa natriumdodekyylisulfaatti-polyakryyliamidigeelielektroforeesissa ja siirrettiin sen jälkeen nitroselluloosakalvolle. Kalvoa inkuboitiin PBS:n kanssa, joka sisälsi 5 prosenttia rasvatonta maitoa, 2 tuntia huoneenlämpötilassa ja sitten tutkittiin anti-PARK7/DJ-1-vasta-aineilla (ab76008, Abcam; laimennus 1:1000) yön yli 4 °C:ssa. Sitten kalvo pestiin kolme kertaa PBST:llä ja inkuboitiin sekundaarisen vasta-aineen kanssa vuohen anti-kanin IgG:llä (SA00001-2, Proteintech Group; laimennus 1:5000) huoneenlämpötilassa 2 tuntia. Vasta-aine-anti- -Tubuliini (10759-1-AP, Proteintech Group; laimennus 1:1000) pidettiin kontrollina. Proteiinijuovat visualisoitiin tehostetulla kemiluminesenssireaktioreagensseilla (ECL). Kaistan tiheydet mitattiin QuantityOne Analysis -ohjelmistolla v.4.6.9.

2.12. Immunosytokemiallinen analyysi

PC12-solut kiinnitettiin 4-prosenttisessa paraformaldehydissä 15 minuutin ajan huoneenlämpötilassa reperfuusiokäsittelyn jälkeen [9]. Sen jälkeen kun liiallinen paraformaldehydi oli poistettu, soluja inkuboitiin PBS:ssä, joka sisälsi 0,3 prosenttia Triton X-100 10 minuutin ajan huoneenlämpötilassa. Sitten solut pestiin PBS:llä kolme kertaa ennen kuin niitä inkuboitiin 5 prosentin normaalin vuohen seerumin kanssa 1 tunnin ajan. Sitten soluja inkuboitiin kanin hiiren monoklonaalisen anti-ATP-syntaasiketjun (MABS1304, EMD Millipore, laimennus 1:200) kanssa mitokondrioiden värjäystä varten ja sen jälkeen inkuboitiin anti-PARK7/DJ{17}}-vasta-aineen kanssa (laimennus 1: 100) proteiini-DJ:n-1 tutkimiseen. Solut pestiin ja inkuboitiin vuohen anti-kanin IgG-Alexa 488:lla (vihreä; A11034, Invitrogen; laimennus 1:1000) ja vuohen anti-hiiri-IgG-Alexa 594:llä (punainen; A11032; Invitrogen; laimennus 1:19000) min. Lopuksi solut pestiin kolme kertaa PBS:llä ja kiinnitettiin lasilevyille DAPI:tä sisältävän asennusväliaineen kanssa. Immunofluoresoivat kuvat visualisoitiin käyttämällä laserpyyhkäisykonfokaalimikroskooppia.

Cistanche deserticola polysakkariditon aNeuroprotektiivinen vaikutus

2.13. Data/tilastollinen analyysi

Kaikki arvot esitettiin keskiarvona ± SD. Merkittävyys määritettiin One-Way varianssianalyysillä (ANOVA), jota seurasi Dunnettin monivertailutesti. p < .05="" katsottiin="" tilastolliseksi="" merkitsevyydeksi.="" kokeelliset="" tiedot="" analysoitiin="" spss="" 17.0="">

3. Tulokset

3.1. CDP(Cistanchedeserticolapolysakkaridit)inhiboi OGD/RP-indusoitua soluvauriota

OGD/RP:lle altistettujen PC12-solujen määrä väheni merkittävästi. Solun muoto muuttui ja solukalvo rikkoutui. MTT-määrityksessä solujen elinkelpoisuus CDP:ssä(Cistanchedeserticolapolysakkaridit)ryhmät ({{0}},05, 0,5 ja 5 ug/ml) olivat 58,91 prosenttia ± 5,40 prosenttia, 61,13 prosenttia ± 3,81 prosenttia ja 68,57 prosenttia ± 3,24 prosenttia, p < 0,05="" (kuva="" 1a)="" ,="" ja="" ajoneuvolla="" oli="" 51,68="" prosenttia="" ±="" 3,89="" prosenttia="" .="" nämä="" arvot="" osoittivat,="" että="">(Cistanchedeserticolapolysakkaridit)suojasi soluja OGD/RP-vauriolta ja vähensi solukuolemaa. Lisäksi solujen elinkelpoisuus Nimo-ryhmässä oli 77,02 prosenttia ± 5,22 prosenttia, mikä on lähes yhtä suuri kuin 5 ug/ml CDP:ssä.(Cistanchedeserticolapolysakkaridit)hoidettu ryhmä.

NRU-määrityksessä solujen elinkelpoisuus CDP:ssä(Cistanchedeserticolapolysakkaridit)ryhmät ({{0}},05, 0,5 ja 5 ug/ml) olivat 52,03 prosenttia ± 4,72 prosenttia, 58,49 prosenttia ± 2,50 prosenttia ja 69,17 prosenttia ± 3,91 prosenttia (kuvio 1B) ja että ajoneuvolla oli 47,14 prosenttia ± 2,88 prosenttia. Arvot osoittivat CDP:n konsentraatiosta riippuvan suojaavan vaikutuksen.

Toisin kuin vehikkelissä (44,73 prosenttia ± 3,30 prosenttia), LDH:n vapautuminen väheni merkittävästi CDP:ssä(Cistanchedeserticolapolysakkaridit)ryhmiä. CDP:ssä(Cistanchedeserticolapolysakkaridit)ryhmissä ({{0}},05, 0,5 ja 5 ug/ml), LDH-vuotonopeudet olivat 32,41 prosenttia ± 3,70 prosenttia, 27,13 ± 2,79 prosenttia ja 23,13 prosenttia ± 4,59 prosenttia, p < ,01="" (kuvio="" 1c).="" lisäksi="" ldh:n="" vuotoluvut="" nimo-ryhmässä="" olivat="" 21,99="" prosenttia="" ±="" 4,02="" prosenttia,="" mikä="" oli="" lähes="" yhtä="" suuri="" kuin="" 5="" ug/ml="" cdp-käsitellyssä="">

3.2. CDP(Cistanchedeserticolapolysakkaridit)heikennetty OGD/RP-indusoitu [Ca2 plus]i:n lisääntyminen

Solunsisäiset Ca2 plus -tasot PC12-soluissa nousivat arvoon 4146,60 ± 195,97 OGD/RP-vaurion jälkeen, toisin kuin kontrolliryhmässä (373,62 ± 75,69). CDP(Cistanchedeserticolapolysakkaridit)ryhmät ({{0}},05, 0,5 ja 5 ug/ml) voivat alentaa solunsisäistä Ca2 plus -tasoa annosriippuvaisesti arvoihin 2921,25 ± 222,19, 2015,85 ± 230,53 ja 1768,43 ± 426,12 CA (C26,12). ). Lisäksi Ca2 plus -taso 5 ug/ml CDP:llä käsitellyssä ryhmässä laski tasolle, joka oli verrattavissa Nimo-ryhmän tasoon (1591,19 ± 213,21).

3.3. CDP(Cistanchedeserticolapolysakkaridit)heikentää OGD/RP-indusoitua MMP:n hajoamista

Verrattuna kontrolliryhmään (1,67 ± 0,89), vehikkeliryhmä (0,48 ± 0,10) osoitti enemmän vihreää FL-fluoresenssia kuin punainen FL fluoresenssi (kuvio 2B ja D). Punaisen ja vihreän FL-fluoresenssin väliset suhteet laskivat arvoihin 1,11 ± 0,26 ja 1,18 ± 0,16 0,5 ja 5 ug/ml CDP:ssä(Cistanchedeserticolapolysakkaridit)käsitellyt ryhmät, vastaavasti, p < 0,01.="" vihreän="" fl-fluoresenssi="" väheni="">

3.4. CDP(Cistanchedeserticolapolysakkaridit)esti OGD/RP-indusoidun soluapoptoosin

Solut, joissa oli kondensoituneita kromatiineja tai fragmentoituneita tumia, pisteytettiin apoptoottisiksi soluiksi [30]. Hoechst33342-määritystulokset paljastivat kondensoituneiden ytimien ilmestymisen OGD/RP:n jälkeen (kuvat 3A ja C). Korkea FL-fluoresenssin intensiteetti havaittiin ytimissä vehikkeliryhmässä. Tumien FL-fluoresenssin intensiteetti heikkeni 5 ug/ml CDP:ssä(Cistanchedeserticolapolysakkaridit)hoidettu ryhmä. Analysoimme apoptoottisen nopeuden PC12-soluissa muiden sytometrialla käyttämällä FITC-Annexin V/PI-kaksoisvärjäystä (kuvio 3B ja D). Kontrolliryhmän solujen apoptoottinen määrä oli 4,16 prosenttia ± 0,24 prosenttia, kun taas vehikkeliryhmässä 22,98 prosenttia ± 0,66 prosenttia. 5 ug/ml CDP:llä käsitellyssä ryhmässä solujen apoptoosinopeus oli 7.86 prosenttia ± 1,16 prosenttia.

3.5. CDP(Cistanchedeserticolapolysakkaridit)heikennetty OGD/RP-indusoitu solunsisäinen ROS-kertymä ja säilynyt redox-tila

CDP:n vaikutukset(Cistanchedeserticolapolysakkaridit)Oksidatiivisen stressin suhteen osoitettiin ROS-kehityksen, GSH-Px:n, CAT-aktiivisuuksien ja T-AOC-tasojen perusteella. ROS-tasot OGD/RP-vaurioituneissa PC12-soluissa nousivat ja tulivat merkittävästi korkeammiksi kuin kontrolliryhmässä (p < 0,01).="" samaan="" aikaan="" ros-tasot="">(Cistanchedeserticolapolysakkaridit)ryhmät ({{0}},05, 0,5 ja 5 ug/ml) vähenivät annoksesta riippuvalla tavalla (p < 0,01;="" kuvio="" 4a).="" lisäksi="" cdp="" lisäsi="" merkittävästi="" myös="" t-aoc="" (p="">< 0,05;="" kuva="" 4b),="" cat="" (p="">< 0,05;="" kuva="" 4c)="" ja="" gsh-px="" (p="">< 0,05;="" kuva="" 4d)="" tasoja="" ajoneuvoon="" verrattuna.="" ryhmä.="" endogeenisten="" antioksidanttien="" aktiivisuus="">(Cistanchedeserticolapolysakkaridit)ryhmät lisääntyivät.

3.6. CDP(Cistanchedeserticolapolysakkaridit)stimuloi DJ-1 eritystä ja tehosti DJ-1

DJ-1-konsentraatiomuutokset solusupernatantissa havaittiin, ja ne paljastivat mahdollisen suhteen DJ-1:n ja CDP:n välillä(Cistanchedeserticolapolysakkaridit). DJ-1:n vapautuminen havaittiin OGD/RP-vaurioituneista PC12-soluista (kuvio 5). DJ-1 oli huomattavasti korkeammalla tasolla 5 ug/ml CDP:ssä(Cistanchedeserticolapolysakkaridit)-käsitellyssä ryhmässä (38,66 ± 8,44 pg/ml) ja se kasvoi merkittävästi kuin vehikkeliryhmässä (18,33 ± 3,80 pg/ml, p < 0,01) ja kontrolliryhmässä (9,67 ± 3,96 pg/ml, p < 0,01) .

CDP:n vaikutusten tutkiminen(Cistanchedeserticolapolysakkaridit)DJ-1:n solunsisäisestä ilmentymisestä mittasimme DJ-1-proteiinitasot Western blot -menetelmällä. DJ-1-proteiinin ilmentymistasot kasvoivat merkittävästi 24 tuntia reperfuusion jälkeen. Sitä vastoin 5 ug/ml CDP:n jälkikäsittely lisäsi merkittävästi DJ-1:n yli-ilmentymistä vehikkeliryhmään verrattuna (p < 0,01,="" kuva="">

3.7. CDP(Cistanchedeserticolapolysakkaridit)parannettu DJ{0}}-translokaatio mitokondrioihin

PC12-solut värjättiin anti-PARK7/DJ-1- ja anti-ATP-syntaasiketjuvasta-aineilla (kuviot 7 ja 8). Anti-ATP-syntaasi - ketju vasta-aine linkittyy mitokondriokompleksiin I ja sitova antigeeni lokalisoitiin mitokondrion sisäkalvoon. Tulokset paljastivat, että DJ{10}} siirtyi mitokondrioiden sisäkalvoon OGD/RP-infarktin jälkeen (kuva 8). Sillä välin DJ-1 ja mitokondrioiden kaksoisvärjäystulokset paljastivat, että CDP(Cistanchedeserticolapolysakkaridit)helpottunut DJ- 1 mitokondrioiden translokaatio ja yhteislokalisaatio (kuva 8). Nämä tulokset osoittivat suoraa vuorovaikutusta DJ-1 jahermoja suojaavaCDP:n vaikutus(Cistanchedeserticolapolysakkaridit)(Kuva 9).

4. Keskustelu

Tässä tutkimuksessa raportoimme omakohtaisesti, että CDP(Cistanchedeserticolapolysakkaridit)vähentää tehokkaasti OGD/RP-indusoitua PC12-soluvauriota DJ-1-proteiinin lisääntymisen kautta. CDP(Cistanchedeserticolapolysakkaridit)parantunut solujen elinkelpoisuus, vähentynyt solukalvovaurio, säilynyt solunsisäinen Ca2 plus homeostaasi, estänyt MMP:n häviämisen, vähentynyt solujen apoptoosi, tukahduttanut oksidatiivisen stressin, edistänyt DJ-1:n ilmentymistä ja tehostunutta DJ-1-translokaatiota mitokondrioihin. DJ-1 on äskettäin osallisena kohteen säätelyssähermoja suojaavavaikutus ja mitokondrioiden eheys. Nämä tulokset antoivat vakuuttavan todisteen siitähermoja suojaavaCDP:n vaikutuksia(Cistanchedeserticolapolysakkaridit)iskemiaa vastaan. Lisäksi CDP:n ja DJ{0}} välinen vuorovaikutus toistaa ahermoja suojaavarooli OGD/RP-indusoidussa PC12-soluvauriossa. Yllä olevat tulokset voivat kehittää ymmärrystämme CDP:n hyödyllisistä vaikutuksista ja voivat tarjota hyödyllistä tietoa aivohalvauksen hoidossa tulevaisuudessa.

Iskemian aivohalvauksen on katsottu johtuvan monimutkaisesta sarjasta biokemiallisia ja molekyylisiä mekanismeja, mukaan lukien eksitotoksisuus, kalsiumin ylikuormitus ja oksidatiivinen stressi [31]. OGD/RP:tä käytetään laajasti iskemia-reperfuusion in vitro -mallina ja sitä käytetään neurologisten ja biokemiallisten muutosten tutkimiseen. PC12-solulinja on herkkä OGD/RP-vauriolle [2]. Sillä on useita sympaattisten hermosolujen ominaisuuksia ja ominaisuuksia [32] ja siten laajalti käytettyjä hermosolusolulinjoja aivohalvauksen aiheuttamien neurologisten vaurioiden mekanismeihin liittyvässä tutkimuksessa [33,34]. Lukuisat tutkimukset ovat osoittaneet, että oksidatiivisella stressillä on tärkeä rooli aivohalvauksessa ja aivoiskemiavaurioissa [35–37]. Parkinsonin tautiin liittyvä proteiini DJ-1 voi estää iskeemistä hermoston rappeutumista ja käyttäytymishäiriöitä vähentämällä ROS-välitteistä hermosoluvauriota [7]. Siksi käytimme OGD/RP-vaurion PC12-solumallia tutkiaksemmehermoja suojaavaCDP:n vaikutus(Cistanchedeserticolapolysakkaridit).

OGD/RP:n aiheuttaman vaurion astetta PC12-soluissa arvioitiin MTT-, NRU- ja LDH-vapautumismäärityksillä. CDP:n hallinto(Cistanchedeserticolapolysakkaridit)({0}},05, 0,5 ja 5 ug/ml) paransi solujen eloonjäämistä ja vähensi LDH:n vapautumista. CDP-hoidon hyödyllisiä vaikutuksia olivat myös solunsisäisen kalsiumin ylikuormituksen väheneminen ja MMP:n säilyminen. Solunsisäisen Ca2 plus -pitoisuuden poikkeavuudet, erityisesti mitokondrioiden kalsiumin ylikuormitus, on yhdistetty hermosolujen apoptoosiin ja iskemian aivohalvauksen aiheuttamaan kuolemaan [38]. MMP voi heijastaa elektronien kuljetusketjun tehokkuutta, ja sen on osoitettu olevan tämän järjestelmän patologinen häiriöindeksi [39]. Sekä solunsisäisen Ca2 plus -pitoisuuden nousu että MMP-häviö voivat johtaa hermosolujen rakenteen epävakauteen ja lopulta johtaa soluvaurioon tai solukuolemaan [21,40]. Tässä tutkimuksessa tulokset osoittivat, että CDP esti merkittävästi solunsisäistä Ca2- ja ylikuormitusta ja lisäsi MMP-tasoja OGD/RP-vaurio PC12-soluissa. Apoptoosilla on tärkeä rooli aivoiskemia-reperfuusiovaurion monimutkaisessa patofysiologiassa. Kasvavat tiedot viittasivat siihen, että apoptoosi on osallisena mitokondrioiden toimintahäiriöissä; MMP:n hajoaminen on varhainen tapahtuma, joka johtaa solujen apoptoosiin [8,39]. Apoptoosi on energiariippuvaisen ohjelmoidun solukuoleman prosessi ylimääräisten solujen hävittämiseksi. Monet iskeemisen aivohalvauksen neuronit käyvät läpi apoptoosin [41]. Tässä tutkimuksessa suoritimme Hoechst33342- ja anneksiini V-FITC/PI-värjäyksen tutkiaksemme CDP:n vaikutusta apoptoosiin [23,28]. Tulokset osoittivat, että CDP säilyttää ytimen eheyden ja vähentää solujen apoptoosin nopeutta. Kaikki nämä tulokset osoittivat, että CDP:n anti-apoptoottinen aktiivisuus vaikutti edulliseen vaikutukseen neuronaalisessa vauriossa PC12-soluissa.

Solut kärsivät iskemiavauriosta, joka johtuu liiallisesta ROS:n kertymisestä, mikä voi johtaa lipidien peroksidaatioon, solukalvovaurioon, kalsiumin ylikuormitukseen ja mitokondrioiden toimintahäiriöihin, mikä lopulta johtaa solujen apoptoosiin ja kuolemaan [42]. Endogeenisten antioksidanttien, kuten SOD:n, CAT:n ja GSH-Px:n, kulutus osoitti myös esiintymisen. Kuva 9. Mahdollisia CDP:n suojaavien vaikutusten mekanismeja(Cistanchedeserticolapolysakkaridit)OGD/RP-indusoitua PC12-soluvauriota vastaan. CDP:n hoito vaimentaa oksidatiivista stressiä, stabiloi Ca2 plus -pitoisuutta ja MMP:tä, tehostaa DJ-1:n ilmentymistä ja lokalisaatiota mitokondrioissa. Y. Liu et ai. Biomedicine & Pharmacotherapy 99 (2018) 671–680 678oksidatiivisesta stressistä iskemia-reperfuusion aikana. Tässä tutkimuksessa OGD/RP-ryhmä osoitti merkittävää ROS:n nousua ja CAT:n, GSH-Px:n ja T-AOC:n laskua verrattuna 5 ug/ml CDP:llä käsiteltyyn ryhmään. Havaitsimme kuitenkin huomattavan laskun ROS:n muodostumisessa ja endogeenisten antioksidanttien (CAT, GSH-Px ja T-AOC) kulutuksessa CDP-ryhmissä. Myönteiset vaikutukset 5 ug/ml CDP-ryhmässä olivat lähellä Nimo-ryhmän suotuisat vaikutukset. Tulokset viittasivat siihen, että CDP estää ROS:n muodostumista ja palauttaa entsymaattisen antioksidanttipuolustuksen.

DJ-1 on avain-redox-reaktiivinenhermoja suojaavaproteiini, joka on osallisena aivohalvauksen oksidatiivisen stressin säätelyssä. DJ-1-yli-ilmentymisen hyödyllisiä vaikutuksia ovat solujen eloonjääminen iskemia-reperfuusion seurauksena sekä mitokondrioiden toiminnan ja morfologian säilyttäminen, kuten mitokondrioiden läpäisevyyden siirtymähuokosten avaaminen [39,43]. Aiemmat tutkimukset ovat osoittaneet, että DJ-1:n suojaava vaikutus OGD/RP:lle altistuvissa soluissa liittyy sen antioksidanttisiin ominaisuuksiin ja mitokondrioiden translokaatioon [43–45]. DJ-1 suorittaa tehokkaan endogeenisen hermosuojan lieventäessään mitokondriovaurioita translokaation kautta [46]. Useat tutkimukset ovat osoittaneet, että DJ{10}}-translokaatiolla voi olla vaikutusta mitokondrioiden liikkeisiin, lisätä solujen välistä vuorovaikutusta ja edistää muita solujen selviytymistä edistäviä prosesseja.

DJ-1 vaikuttaa useisiin prosesseihin, kuten solujen migraatioon ja adheesioon, kemotaksikseen, proliferaatioon ja apoptoosiin sekä in vitro- että in vivo -malleissa [6,9,47,48]. Käyttämällä OGD/RP-vaurioituneiden PC12-solujen aivohalvausmallia tutkimme mahdollista suhdetta CDP:n välillä(Cistanchedeserticolapolysakkaridit)ja DJ-1. DJ- 1-yli-ilmentyminen tunnistettiin ELISA- ja Western-blottauksella. Tämän toiminnon ohella kokeiden merkittävä löydös osoitti, että DJ-1 yli-ilmentyi merkittävästi, kun CDP(Cistanchedeserticolapolysakkaridit)(5 ug/ml) annettiin ennen reperfuusiota. Tämä ehdotti mahdollistahermoja suojaavavaikutus CDP:n ja DJ:n suhteeseen-1. Lisäksi olemme havainneet, että mitokondrioissa sijaitseva DJ-1 OGD/RP-olosuhteissa ja DJ-1:n runsas ilmentyminen vähensi solujen herkkyyttä ROS:lle ja esti oksidatiivista stressiä [45]. Tulokset osoittivat, että CDP säätelee ja tehostaa DJ:tä-1, joka toimii molekyylilinkkinä mitokondrioiden toimintahäiriön ja oksidatiivisen stressin välillä ja edistää aivohalvaukseen liittyvää sekundaarista solukuolemaa [5,47,49–51]. Samalla kun DJ-1 stabiloituu mitokondrioissa, CDP(Cistanchedeserticolapolysakkaridit)hoito lisäsi solujen eloonjäämistä, stabiloi Ca2- ja homeostaasia, paransi MMP:n hajoamista ja ehkäisee mitokondrioihin liittyvää apoptoosia [43]. Kaiken kaikkiaan tuloksemme osoittivat, että CDP on uusihermoja suojaavamekanismi iskeemisen aivohalvauksen hoidossa.

5. Päätelmät

Tuloksemme osoittivat, että CDP(Cistanchedeserticolapolysakkaridit)suojaa PC12-soluja OGD/RP:n aiheuttamalta vauriolta antioksidanttivaikutuksillaan, jotka johtuvat osittain DJ-1-välitteisestä reitistä. Näihin vaikutuksiin kuuluvat solukalvovaurioiden nopeuden väheneminen, [Ca2 plus] I -homeostaasin säilyminen, MMP:n hajoamisen paraneminen, solun apoptoosin estäminen, solunsisäisen ROS:n heikkeneminen ja DJ-1-tasojen modulaatio. Tulokset osoittivat myös, että CDP:n ja DJ-1 väliset vuorovaikutukset vahvistavat hermosolujen suojausta ja ylläpitävät mitokondrioiden eheyttä. Siksi haavoittuvat neuronit voidaan suojata CDP:llä(Cistanchedeserticolapolysakkaridit)parantamalla DJ{0}}-ilmentymistä iskemian aivohalvauksen aikana.

Kiitokset

Tätä tutkimusta tukivat Kiinan kansallinen luonnontieteellinen säätiö (apuraha 81360649), kansallinen tieteen ja teknologian avainohjelma (apuraha 2015BAK45B01) ja Ningxia Huin autonomisen alueen tieteen ja teknologian tukiohjelma (apuraha 2016BZ07).

Cistanche deserticola polysakkariditon a Neuroprotektiivinen vaikutus

Viitteet

[1] HD Tsai, JS Wu, MH Kao, JJ Chen, GY Sun, WY Ong, TN Lin, Clinacanthus nutans suojaavat aivokuoren hermosoluja hypoksian aiheuttamalta toksisuudelta vähentämällä HDAC1/6:ta, Neuromolia. Med. 18 (2016) 274–282.

[2] J. Zhao, R. Liu, Aivohalvaus 1-2-0: nopea aivohalvausohjelma Kiinassa, Lancet Neurol. 16 (2017) 27–28.

[3] PM George, GK Steinberg, Uudet aivohalvauksen terapiat: aivohalvauksen patofysiologian selvittäminen ja sen vaikutus kliinisiin hoitoihin, Neuron 87 (2015) 297–309.

[4] H. Yao, T. Ago, T. Kitazono, T. Nabika, NADPH oksidaasiin liittyvä patofysiologia kokeellisissa aivohalvausmalleissa, Int. J. Mol. Sci. (2017) 18.

[5] J. Cao, M. Ying, N. Xie, G. Lin, R. Dong, J. Zhang, H. Yan, X. Yang, Q. He, B. Yang, The oxidation states of DJ{{ 1}} sanelevat solun kohtalon vastauksena 4-hpr:n laukaisemaan oksidatiiviseen stressiin: autofagia vai apoptoosi? Antioxid Redox -merkki. 21 (2014) 1443–1459.

[6] Y. Kaneko, H. Shojo, J. Burns, M. Staples, N. Tajiri, CV Borlongan, DJ-1 parantaa iskeemistä solukuolemaa in vitro mahdollisesti mitokondrioreitin kautta, Neurobiol, Dis. 62 (2014) 56–61.

[7] D. Yanagisawa, Y. Kitamura, M. Indian, K. Takata, T. Taniguchi, S. Morikawa, M. Morita, T. Inubushi, I. Tooyama, T. Taira ym., DJ{{ 1}} suojaa rottien fokaalisen aivoiskemian ja reperfuusion aiheuttamalta neurodegeneraatiolta, J. Cereb. Verenkiertoa. Tavannut. 28 (2008) 563–578.

[8] Y. Kaneko, N. Tajiri, H. Shojo, CV Borlongan, Happi-glukoosipuutteiset rotan primaariset hermosolut osoittavat DJ-1-translokaatiota terveisiin mitokondrioihin: voimakas aivohalvauksen terapeuttinen kohde, CNS Neurosci. Siellä. 20 (2014) 275–281.

[9] N. Tajiri, CV Borlongan, Y. Kaneko, Syklosporiini A -hoito kumoaa iskemian aiheuttaman hermosolujen kuoleman säilyttämällä mitokondrioiden eheyden Parkinsonin tautiin liittyvän proteiinin DJ-1, CNS Neurosci, säätelyn avulla. Siellä. 22 (2016) 602–610.

[10] RX Yang, J. Lei, BD Wang, DY Feng, L. Huang, YQ Li, T. Li, G. Zhu, C. Li, FF Lu, et ai., Esikäsittely natriumfenyylibutyraatilla lievittää aivoiskemiaa/ reperfuusiovaurio DJ-1-proteiinin lisääntyessä, Front. Neurol. 8 (2017) 256.

[11] C. Gu, X. Yang, L. Huang, Cistanches Herba. Neurofarmakologian katsaus, Front. Pharmacol. 7 (2016) 289.

[12] Z. Li, H. Lin, L. Gu, J. Gao, CM Tzeng, Herba Cistanche (Rou Cong-Rong): Yksi perinteisen kiinalaisen lääketieteen parhaista farmaseuttisista lahjoista, Front. Pharmacol. 7 (2016) 41.

[13] Q. Liu, J. Li, J. Wang, J. Li, JS Janicki, D. Fan, Kiinan kasviperäisen lääketieteen vaikutukset ja mekanismit sydänlihaksen iskemia-reperfuusiovaurion parantamisessa, Evid.- Based Compl. Alt. (2013) (2013) 925625.

[14] HS Wong, KM Ko, Herba Cistanches stimuloi solujen glutationin redox-kiertoa H9c2-kardiomyosyyttien mitokondrioiden hengityksestä syntyneiden reaktiivisten happilajien avulla, Pharm. Biol. 51 (2013) 64–73.

[15] T. Wang, X. Zhang, W. Xie,Cistanchedeserticola YC Ma, "Desert ginseng": arvostelu, Am. J. Chin. Med. 40 (2012) 1123–1141.

[16] L. Gu, WT Xiong, C. Wang, HX Sun, GF Li, X. Liu,Cistanchedeserticolakeittäminen lievittää hydroksiurean aiheuttamaa kivestoksisuutta uroshiirillä, aasialainen J. Androl. 15 (2013) 838–840.

[17] E. Herzfeld, C. Strauss, S. Simmermacher, K. Bork, R. Horstkorte, F. Dehghani, C. Scheller, Investigation of thehermoja suojaavanimodipiinin vaikutus Neuro2a-soluihin leikkauksen kaltaisen stressimallin avulla, Int. J. Mol. Sci. 15 (2014) 18453–18465.

[18] G. Vahabzadeh, N. Rahbar-Roshandel, SA Ebrahimi, M. Mahmoudian,Neuroprotektiivinennoskapiinin vaikutus aivojen happi-glukoosivammaan, Pharmacol. Rep. 67 (2015) 281–288.

[19] CP Wang, LZ Zhang, GC Li, YW Shi, JL Li, XC Zhang, ZW Wang, F. Ding, XM Liang, Mulberroside A suojaa iskeemiseltä heikentymiseltä rotan aivokuoren hermosolujen primaariviljelmässä sen jälkeen, kun happi-glukoosivajetta on seurattu reperfuusiolla, J. Neurosci. Res. 92 (2014) 944–954.

[20] X. Qi, R. Zhou, Y. Liu, J. Wang, WN Zhang, HR Tan, Y. Niu, T. Sun, YX Li, JQ Yu, trans-cinnamaldehydi suojasi PC12-soluja hapen ja glukoosin puutteelta /reperfuusion (OGD/R) aiheuttama vaurio anti-apoptoosin ja antioksidatiivisen stressin kautta, Mol. Cell Biochem. 421 (2016) 67–74.

[21] R. Chang, R. Zhou, X. Qi, J. Wang, F. Wu, W. Yang, W. Zhang, T. Sun, Y. Li, J. Yu, Aloitin suojaavat vaikutukset happea ja glukoosin puutteen aiheuttama vahinko PC12-soluissa, Brain Res. Sonni. 121 (2016) 75–83.

[22] M. Agrawal, V. Kumar, AK Singh, MP Kashyap, VK Khanna, MA Siddiqui, AB Pant, Trans-resveratroli suojaa iskeemisiä PC12-soluja estämällä hypoksiaan liittyviä transkriptiotekijöitä ja lisäämällä antioksidanttipuolustusentsyymien, ACS, tasoja Chem. Neurosci. 4 (2013) 285–294.

[23] KW Zeng, LX Liao, MB Zhao, FJ Song, Q. Yu, Y. Jiang, PF Tu, Protosappaniini B suojaa PC12-soluja happiglukoosin puutteen aiheuttamalta hermosolujen kuolemalta ylläpitämällä mitokondrioiden homeostaasia indusoimalla ubikvitiiniriippuvaista. p53-proteiinin hajoaminen, Eur. J. Pharmacol. 751 (2015) 13–23.

[24] NT Ma, R. Zhou, RY Chang, YJ Hao, L. Ma, SJ Jin, J. Du, J. Zheng, CJ Zhao, Y. Niu et ai., Protective effffects of aloperine on neonatal rot primaar viljellyt aivotursohermosolut, jotka ovat vaurioituneet happi-glukoosivajeen ja reperfuusion vuoksi, J. Nat. Med. 69 (2015) 575–583.

[25] Y. Wang, W. Ma, A. Jia, Q. Guo, Parekoksibi suojaa hiiren aivokuoren hermosoluja OGD/R:n aiheuttamalta hermotoksisuudelta säätelemällä Bcl-2, Neurochem. Res. 40 (2015) 1294–1302.

[26] MP Ponnusamy, P. Seshacharyulu, A. Vaz, P. Dey, SK Batra, MUC4 stabiloi HER2:n ilmentymistä ja ylläpitää syövän kantasolupopulaatiota munasarjasyöpäsoluissa, J. Ovarian Res. 4 (2011) 7.

[27] R. Wang, L. Peng, J. Zhao, L. Zhang, C. Guo, W. Zheng, H. Chen, A. Gardenamide, Suojaa RGC-5 soluja H(2)O( 2) indusoimat oksidatiiviset stressihäiriöt aktivoimalla PI3K/Akt/eNOS-signalointireitti, Int. J. Mol. Sci. 16 (2015) 22350–22367.

[28] LP Sun, X. Xu, HH Hwang, X. Wang, KY Su, YL Chen, Propolisin dikloorimetaaniuutteet suojaavat solua happi-glukoosin puutteen aiheuttamalta oksidatiiviselta stressiltä Y. Liu et al. Biomedicine & Pharmacotherapy 99 (2018) 671–680 679apoptoosin vähentämisen kautta, Food Nutr. Res. 60 (2016) 30081.

[29] L. Wang, Y. Zhang, T. Asakawa, W. Li, S. Han, Q. Li, B. Xiao, H. Namba, C. Lu, Q. Dong,Neuroprotektiivinenneuroserpiinin vaikutus happiglukoosin puutteella ja uudelleenhapetuksella käsiteltyihin rotan astrosyytteihin in vitro, PLoS One. 10 (2015) e0123932.

[30] Z. Zhiwen, W. Haitao, S. Fu, Z. Lihua, JL Peter, Q. Remi, Z. Wenhua, Lithium-ionit heikentävät seerumin puutteen aiheuttamaa apoptoosia PC12-soluissa säätelemällä Akt/FoxO1-signalointia polut, Psychopharmacology (Berl) 12 (2015) 625–633.

[31] EJB Dariush Mozaffffarian, S. Alan, et ai., Sydäntautien ja aivohalvauksen tilastojen yhteenveto 2016 päivitys. American Heart Associationin raportti, Circulation 133 (2016) 447–454.

[32] JE Jumblatt, TA, Muskariiniligandin sitoutumiskohtien säätely hermokasvutekijällä PC12-feokromosytoomasoluissa, Nature 297 (1982) 152–154.

[33] S. Afrazi, S. Esmaeili-Mahani, V. Sheibani, M. Abbasnejad, Neurosteroidi allopregnanoloni heikentää korkean glukoosin aiheuttamaa apoptoosia ja ehkäisee kokeellista diabeettista neuropaattista kipua: in vitro ja in vivo -tutkimukset, J. Steroid Biochem. Mol. Biol. 139 (2014) 98–103.

[34] X. Liu, X. Zhu, M. Chen, Q. Ge, Y. Shen, S. Pan, Resveratrol suojaa PC12-soluja OGD/R-indusoidulta apoptoosilta mitokondriovälitteisen signalointireitin kautta, Acta Biochem Biophys Sin . 48 (2016) 342–353.

[35] PW Kleikers, K. Wingler, JJ Hermans, I. Diebold, S. Altenhofer, KA Radermacher, B. Janssen, A. Gorlach, HH Schmidt, NADPH-oksidaasit oksidatiivisen stressin lähteenä ja molekyylikohteena iskemiassa/reperfuusiossa vamma, J. Mol. Med. (Berl) 90 (2012) 1391–1406.

[36] FC Liu, HI Tsai, HP Yu, Punaviiniuutteen, resveratrolin, elimiä suojaavat vaikutukset oksidatiivisen stressin aiheuttamassa reperfuusiovauriossa, Oxid. Med. Solu Longev. (2015) 568634.

[37] LK Seidlmayer, V. V. Juettner, S. Kettlewell, EV Pavlov, LA Blatter, EN Dedkova, Selkeät mPTP:n aktivaatiomekanismit iskemia-reperfuusiossa: Ca2 plus plus, ROS, pH ja epäorgaaninen polyfosfaatti, Cardiovasc. Res. 106 (2015) 237–248.

[38] F. Su, AC Guo, WW Li, YL Zhao, ZY Qu, YJ Wang, Q. Wang, YL Zhu, Pienen annoksen etanolin esikäsittely suojaa happiglukoosin puutteelta / uudelleenhapetuksen aiheuttamalta hermosoluvauriolta aktivoimalla suuren johtavuuden , Ca2 plus plus -aktivoitu K plus plus Kanavat In vitro, Neurosci. Sonni. 33 (2017) 28–40.

[39] Y. Li, M. Wang, S. Wang, Effect of inhiboiva mitokondriaalinen fissio energian aineenvaihduntaan rotan hippokampuksen hermosoluissa iskemian/reperfuusiovaurion aikana, Neurol. Res. (2016) 1–8.

[40] C. Rui, L. Yuxiang, H. Yinju, Z. Qingluan, W. Yang, Z. Qipeng, W. Hao, M. Lin, L. Juan, Z. Chengjun ym., Protective effffects of Lycium barbarum -polysakkaridi vastasyntyneen rotan primaarisesti viljellyillä hippokampuksen hermosoluilla, jotka ovat vaurioituneet happi-glukoosipuutteesta ja reperfuusion seurauksena, J. Mol. Histol. 43 (2012) 535–542.

[41] BR Broughton, DC Reutens, CG Sobey, Apoptoottiset mekanismit aivoiskemian jälkeen, Stroke 40 (2009) e331–339.

[42] Jordan M. Willcox, AJS Summerlee, Relaxin suojaa astrosyyttejä hypoksialta in vitro, PLoS One. 9 (3) (2014) e90864.

[43] X. Zhang, D. Yuan, Q. Sun, L. Xu, E. Lee, AJ Lewis, BS Zuckerbraun, MR Rosengart, kalsium/kalmoduliiniriippuvainen proteiinikinaasi säätelee PINK1/Parkin ja DJ{{3} } mitofagian reitit sepsiksen aikana, FASEB J. 31 (2017) 4382–4395.

[44] S. Vasseur, S. Afzal, J. Tardivel-Lacombe, DS Park, JL Iovanna, TW Mak, DJ-1/ PARK7 on hypoksian aiheuttamien soluvasteiden tärkeä välittäjä, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 106 (2009) 1111–1116.

[45] Z. Xianghong, Y. Du, S. Qian, X. Li, L. Emma, ​​J. Anthony, Brian Lewis, S. Zuckerbraun, Matthew R. Rosengart, kalsium/kalmoduliinista riippuvainen proteiinikinaasi säätelee PINK1/ Parkinin ja DJ-1 mitofagian reitit sepsiksen aikana, FASEB J. (2017). [

46] MS Choi, T. Nakamura, SJ Cho, X. Han, EA Holland, J. Qu, GA Petsko, JR Yates 3., RC Liddington, SA Lipton, Transnitrosylaatio DJ-1:sta PTEN:iin heikentää hermosolujen kuolemaa Parkinsonin taudin malleissa, J. Neurosci. 34 (2014) 15123–15131.

[47] RK Dongworth, UA Mukherjee, AR Hall, R. Astin, SB Ong, Z. Yao, A. Dyson, G. Szabadkai, SM Davidson, DM Yellon, DJ Hausenloy, DJ-1 suojaa solukuolemaa vastaan akuutin sydämen iskemia-reperfuusiovaurion jälkeen, Cell Death Dis. 5 (2014) e1082.

[48] ​​A. Di Cello, M. Di Sanzo, FM Perrone, G. Santamaria, E. Rania, E. Angotti, R. Venturella, S. Mancuso, F. Zullo, G. Cuda, F. Costanzo, DJ{ {1}} on luotettava seerumin biomarkkeri korkean riskin kohdun limakalvosyövän erottamiseen, Tumor Biol. 39 (2017) 1010428317705746.

[49] H. Aleyasin, MW Rousseaux, PC Marcogliese, SJ Hewitt, I. Irrcher, AP Joselin, M. Parsanejad, RH Kim, P. Rizzo, SM Callaghan ym., DJ-1 suojaa nigrostriataa akselista neurotoksiini MPTP:stä moduloimalla AKT-reittiä, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 107 (2010) 3186–3191.

[50] RM Canet-Aviles, MA Wilson, DW Miller, R. Ahmad, C. McLendon, S. Bandyopadhyay, MJ Baptista, D. Ringe, GA Petsko, MR Cookson, Parkinsonin taudin proteiini DJ-1 onhermoja suojaavakysteiini-sulfiinihapon ohjaaman mitokondriaalisen lokalisoinnin vuoksi, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 101 (2004) 9103–9108.

[51] M. Liu, B. Zhou, ZY Xia, B. Zhao, SQ Lei, QJ Yang, R. Xue, Y. Leng, JJ Xu, Z. Xia, Hyperglykemian aiheuttama DJ:n esto-1 ilmentyminen vaaransi iskeemisen hoidon jälkeisen sydänsuojauksen tehokkuuden rotilla, Oxid. Med. Solu Longev. (2013) (2013) 564902.