Cistanche Tubulosan pitkäikäisyyden edistämiseen ja kognitiiviseen parantamiseen liittyvät molekyylireitit Drosophilassa

lisätietoja:ali.ma@wecistanche.com

Wei-Yong Lin et ai

Abstrakti:

Tausta:Ikääntymisprosessin, mukaan lukien fyysisen toimintahäiriön ja ikääntymiseen liittyvän muistin heikkenemisen (AMI), katsotaan korreloivan kumulatiivisten oksidatiivisten vaurioiden ja insuliini/IGF-1-signalointireittien kanssa. Tarkoitus: Tämän tutkimuksen tarkoituksena oli selvittää in vivo vaikutukset ikääntymisen viivästymiseen ja AMI:n parantamiseen ja taustalla oleviin molekyylimekanismeihinCistanche tubulosa(CT), yrtti, jota käytetään perinteisessä kiinalaisessa lääketieteessä parantamaan seksuaalista toimintaa ja hoitamaan munuaisten vajaatoimintaa

Menetelmät:CT:llä käsitellyt ja käsittelemättömät kärpäset(IVYtanche Tubulosa), havaittiin eliniän suhteen, vastustuskykyä oksidatiiviselle stressille H2O2:lla tai parakvatilla, nälkätestiä, kognitiivista käyttäytymistä T-sokkelolla ja kohdegeenien transkriptitasoja kvantitatiivisella RT-PCR:llä.

Tulokset:CT:n hallinnointi(IVYtanche Tubulosa)pidensi keskimääräistä ja maksimiikää ja lisäsi kärpästen vastustuskykyä oksidatiiviselle stressille. CT(IVYtanche Tubulosa)lisäravinteet lisäsivät myös muistin muodostumista nuorilla kärpäsillä ja hillitsivät AMI:n ikääntymistä. Useiden geenien ja signalointireittien, mukaan lukien rapamysiini- (mTOR)- ja Notch-verkkojen mekaaninen kohde, on tunnistettu aiheuttavan näitä farmakologisia vaikutuksia ja muutoksia glutamaattireseptorien geeniekspressiossa.

Johtopäätös:Tuloksemme osoittavat, että CT(IVYtanche Tubulosa)lisäravinteet voivat osaltaan hidastaa ikääntymisen fenotyyppejä ja lievittää kärpästen kognitiivis-käyttäytymisen heikkenemistä, mikä osoittaa mahdollista soveltuvuutta ihmisten terveyden parantamiseen ja ikääntymiseen liittyvien sairauksien herkkyyden vähentämiseen.

Avainsanat:Ikääntyminen,Cistanche tubulosa,Kognitiivinen käyttäytyminen, Herb

Klikkaa Cistanche-varren tuotteisiin

Johdanto

Kun ikääntyvä väestö kasvaa maailmanlaajuisesti, terveenä ikääntymisen ja pitkäikäisyyden edistäminen on yhä tärkeämpi kansanterveyshuole tieteen, yhteiskunnan ja sairaanhoidon alalla. Vanhenemisprosessia on ehdotettu säätelevän monimutkaisia ​​mekanismeja, joita ohjaavat geneettisten ja ympäristötekijöiden laaja vuorovaikutus. Asteittaisten solu- ja kudosten vaurioiden vuoksi ikä on riskitekijä kroonisille sairauksille, kuten syöpään sekä sydän- ja verisuonisairauksille ja hermostoa rappeutuville sairauksille, ja korreloi vahvasti sen kanssa (Kenyon, 2005). Ikääntyminen vähentää myös synaptista aktiivisuutta, uusien proteiinien synteesiä ja kognitiivisia toimintoja. Nämä toiminnalliset muutokset vaikuttavat ikääntymiseen liittyvään muistin heikkenemiseen (AMI) (Burke ja Barnes, 2010; Schimanski ja Barnes, 2010). Siksi ikään liittyvän patologian ja kognitiivisen ikääntymisen hidastamiseen tarkoitettujen lääkkeiden kehittäminen saattaa olla hyödyllistä ihmisen elämänlaadulle. Tässä tutkimuksessa käytimme Drosophila melanogasteria, joka on ihanteellinen organismi in vivo ikääntymistutkimuksiin sen lyhyen elinkaaren vuoksi, arvioidaksemme lääkkeiden tehokkuutta ja tutkiaksemme ikääntymisen ja AMI:n paranemisen taustalla olevia molekyylimekanismeja.

Herbacistanche, joka tunnetaan myös kiinalaisella nimellä Rou CongRong, on loiskasvi, jota esiintyy pääasiassa Luoteis-Kiinan autiomaissa. Kaksi Cistanche-lajia, Cistanche deserticolaY. C. Ma jaCistanchetubulosa(Schrenk) Wight on sisällytetty Kiinan farmakopeaan (2005 painos) samankaltaisten kemiallisten aineosien ja farmakologisten toimintojensa vuoksi. Niiden varsiuutetta on käytetty laajalti tuhansia vuosia tonic-lääkkeenä, pääasiassa erilaisten oireiden, kuten munuaisten vajaatoiminnan, impotenssin, hedelmättömyyden, hoitoon ja katarsisin helpottamiseen, kuten muinaisissa kiinalaisissa lääketieteellisissä kirjoissa kuvataan. Lukuisia kemiallisia ainesosia, mukaan lukien eteeriset öljyt, fenyylietanoidiglykosidit (PhG), iridoidit, lignaanit ja sakkaridit, on eristettyCistanchelajit ja kaksi pääasiallista PhG-komponenttia, akteosidi ja andekinakosidi, valitaan tyypillisesti merkkiaineiksi Herba cistanchen laadun arvioinnissa niiden merkittävien farmakologisten vaikutusten vuoksi (Wang et al., 2012).

Cistanche tubulosa(CT)-uutteilla on erilaisia ​​biologisia toimintoja, joihin kuuluvat muun muassa immuunitoiminnan modulointi, seksuaalisen toiminnan tehostaminen, hiusten kasvun edistäminen ja muut hyödyt antioksidanttisessa, maksansuojassa, osteoporoottisessa aktiivisuudessa ja kasvainten vastaisessa toiminnassa (Li et al., 2016; Seok et al., 2015). Wang et ai., 2012). Lisäksi in vitro -tutkimus paljasti, että Herbacistancheuute voi suojata dopamiinin kaltaisia ​​hermosoluja H2O2--indusoidulta oksidatiiviselta vauriolta ja lisätä merkittävästi hermokasvutekijän ja aivoista peräisin olevan neurotrofisen tekijän tasoa (Lin et al., 2013). Ekinakosidi esti dopamiinihermosolujen kuoleman Parkinsonin taudin MPTP-vaurioituneessa hiirimallissa (Zhao et al., 2010). Lisäksi CT(IVYtanche Tubulosa)uute paransi kognitiivisia toimintahäiriöitä vähentämällä amyloidin kertymistä ja lisäämällä asetyylikoliini- ja dopamiinitasoja Alzheimerin taudin (AD) rottamallissa (Wu et al., 2014). Vaikka Herban terapeuttinen vaikutuscistancheon edelleen tarpeen vahvistaa, pienikokoinen, ei-plasebokontrolloitu kliininen TT-tutkimus(IVYtanche Tubulosa)glykosidiuutteet osoittivat, että lääkkeellä on potentiaalia hoitaa potilaita, joilla on lievä tai kohtalainen AD, ja sillä on suhteellisen lieviä haittavaikutuksia, jopa pitkäaikaisen annon jälkeen (Guo et al., 2013). Nämä tiedot viittaavat siihen, että Herbassa on glykosidiuutteitacistancheniillä on hermostoa suojaavia ja dementiaa estäviä vaikutuksia. CT:n erilaisista eduista huolimatta(IVYtanche Tubulosa)Sen molekyylimekanismeja ja vaikutuksia ikääntymisen hidastamiseen ja AMI:n parantamiseen ei ole selvitetty. Tässä tutkimuksessa CT:n vaikutukset(IVYtanche Tubulosa)TT:n mahdollisen kliinisen hyödyn määrittämiseksi tutkittiin eliniän merkittävän pidentämisen myötä parantunut vastustuskyky ympäristön stressille ja tukahdutettu ikään liittyvä kognitiivinen toimintahäiriö(IVYtanche Tubulosa)ikääntymisprosessin hidastamisessa.

Materiaalit ja menetelmä

Kasviperäinen lääke

AlkuperätunnisteCistanche tubulosa(Schrenk) Wight (Orobanchaceae) (CT) varmennettiin Ko Da PharmaceuticalCo:ssa. Ltd. (Taoyuan, Taiwan), jossa setelinäytteitä (10 603 205) on säilytetty ja CT-tiivisteistä yrttivalmistetta valmistetaan. Lyhyesti sanottuna kuivattua, mehevää CT:n vartta uutettiin 12-kertaisesti keitettyyn veteen 1 tunnin ajan, minkä jälkeen se suodatettiin. Suodokset otettiin talteen ja alistettiin tyhjiöön ja alipaineväkevöintiin 1 tunnin ajan uutteiden saamiseksi. CT-uutteet sekoitettiin tärkkelyksen kanssa suhteessa 1:1 (w/w) ja alistettiin suihkerakeistukseen CT-jauheen saamiseksi.

Perhojen huolto ja eliniän mittaus

Tässä tutkimuksessa käytetty villityypin perhosiima oli CantonS:stä, joka saatiin Bloomington Drosophila Stock Centeristä. Kärpäsiä kasvatettiin ja pidettiin maissijauhojen vakioväliaineessa 25 asteessa 50–60 prosentin suhteellisessa kosteudessa 12-h valo-pimeä-jaksolla. Nousevat aikuiset kärpäset kerättiin 24 tunnin sisällä ja erotettiin sukupuolen mukaan. Varhaisesta aikuisuudesta lähtien kärpäsiä täydennettiin TT:llä. CT(IVYtanche Tubulosa)jauhe liuotettiin veteen ja lisättiin maissijauhoalustalle pitoisuuksina 5,4, 10,8 ja 21,6 mg/ml, jotka olivat verrannollisia ihmisen oraalisen antamisen tehokkaaseen päivittäiseen annokseen. Elinikäanalyysissä 2-30 kärpästä kasvatettiin ruokapullossa CT:llä tai ilman sitä(IVYtanche Tubulosa); jokaista hoitoa kohden suoritettiin vähintään 250 kärpästä. Ruokapullot vaihdettiin 3-4 päivän välein, ja kuolleet kärpäset laskettiin tuolloin

Stressiresistenssitestit

Aikuiset kärpäset kerättiin ja esikäsiteltiin sitten kontrolliruokavaliolla ilman CT:tä(IVYtanche Tubulosa)ja kokeelliset ruokavaliot, joihin on lisätty 5,4, 10,8 ja 21,6 mg/ml CT:tä 20 päivän ajan 25 asteessa. Nälkäanalyysiä varten kärpäsiä pidettiin pulloissa, joissa oli vain märkiä papereita, ja niiden kestävyyttä arvioitiin nälänhädän aiheuttamaa oksidatiivista stressiä vastaan. Hapettumisstressimäärityksiä varten kärpäset siirrettiin ruokaa sisältämättömiin pulloihin, joissa oli suodatinpaperi, jossa oli vetyperoksidia (H2O2) (Sigma Aldrich) 5-prosenttisessa glukoosiliuoksessa, jotta voidaan mitata kärpästen vastustuskykyä H2O2--indusoitua hydroksyyliradikaalia (OH) vastaan. −) stressi. Samoin kärpäsiä siirrettiin pulloihin, jotka sisälsivät suodatinpaperia, joka oli kyllästetty 10 mM parakvatilla (Sigma-Aldrich), joka tuottaa superoksidianioneja (O2 −), jotka aiheuttavat hapettumisvaurioita eläimille. Kärpästen kuolleisuus pisteytettiin vähintään kolme kertaa päivässä, kunnes kaikki olivat kuolleet. Käsittelyä kohden suoritettiin vähintään 250 kärpästä. Kiipeilyä varten 0 ja 16 tunnin ajan parakvatille altistetut kärpäset laitettiin muovipulloon ja koputettiin varovasti pohjaan. Pullon yläosassa olevien kärpästen määrä laskettiin 18 sekunnin kiipeämisen jälkeen.

Hedelmällisyysarviointi

Sekä neitseellisiä miehiä että naisia ​​ruokittiin 5,4 ja 10,8 mg/ml CT:tä(IVYtanche Tubulosa)20 päivää toimi koeryhminä. Kymmenen kokeellista narttua paritettiin yhtä suuren määrän neitsyitä uroksia, jotka olivat 9-päivän ikäisiä eivätkä olleet saaneet TT:tä. Samoin kokeelliset urokset paritettiin samassa tilassa olevien neitseiden naaraiden kanssa. Pariutuneet naaraskärpäset siirrettiin sitten uuteen pulloon munimista varten 24 tunnin ajaksi, ja pulloihin munittujen munien kokonaismäärä laskettiin manuaalisesti. Hedelmällisyyden anindeksi laskettiin keskimääräisenä päivittäisenä munantuotannona naaraspuolta kohti. Ainakin viisi injektiopulloa hoitoa kohden suoritettiin ja kärpäsiä yhteensä n=50–80.

Hajuassosiatiivinen oppiminen ja muisti

Kärpäset kerättiin eklosion jälkeen ja esikäsiteltiin 5,4, 10,8 ja 21,6 mg/ml CT:llä(IVYtanche Tubulosa)toimivat koeryhminä, ja kontrollikärpäset eivät olleet saaneet CT:tä(IVYtanche Tubulosa)5 ja 20 päivää 25 asteessa. Yksi harjoituskoe suoritettiin aikaisemman tutkimuksen mukaan (Dubnau et al., 2001). Lyhyesti sanottuna noin 100 kärpästä altistui peräkkäin kahdelle hajulle, joko 3-oktanolille (OCT, Sigma-Aldrich) tai 4-metyylisykloheksanolille (MCH, Sigma-Aldrich). Ensimmäiselle hajulle altistuneet kärpäset (ehdollinen ärsyke, CS plus) yhdistettiin 80 V:n sähköiskuilla ja saivat sitten toisen hajun (CS-) ilman iskuja. Oppimiskyky määritettiin välittömästi harjoittelun jälkeen ja 3- ja {{ kyvyt 12}}h muisti on suorittanut testien jälkiharjoittelumenettelyn 3 ja 24 tunnin ajan. Testin suorittamista varten koulutetut kärpäset vangittiin T-sokkelon valintapisteeseen, jossa ne altistettiin samanaikaisesti OCT:lle ja MCH:lle. Suorituskykyindeksi (PI) laskettiin edustamaan ehdollista hajun välttämistä. Nollan PI osoitti jakautumista 50:50 ja 100 aPI osoitti 0:100 jakautumista poispäin CS:stä plus hajusta.

Transkriptitasojen mittaukset reaaliaikaisella kvantitatiivisella PCR:llä (qPCR)

Kärpäset kerättiin eklosion jälkeen ja esikäsiteltiin 5,4 ja 10,8 mg/ml CT:llä(IVYtanche Tubulosa)20 päivää 25 asteessa toimi koeryhminä, ja kontrollikärpäset eivät olleet saaneet CT:tä. Kokonais-RNA uutettiin käyttämällä RNeasy Mini -pakkausta (Qiagen), ja cDNA syntetisoitiin kokonais-RNA:sta käänteistranskriptioreaktion avulla käyttämällä suuren kapasiteetin cDNA-käänteistranskriptiota (Thermo Fisher Scientific). Kohdegeenien transkriptitasot kvantifioitiin reaaliaikaisella kvantitatiivisella polymeraasiketjureaktiolla (Applied Biosystems ViiATM 7 Real-Time PCR System) käyttämällä FastStart SYBR Green Master -ohjelmaa (Roche) valmistajan ohjeiden mukaisesti. Suhteellinen transkriptimäärä normalisoitiin käyttämällä vertailevaa syklin kynnysmenetelmää ahousekeeping-geenillä, RpLP0:lla, sisäisenä standardina. Suhteelliset ilmentymiserot koeryhmien kohdegeeneissä normalisoitiin kontrolliryhmän vastaaviksi ja esitettiin kertamuutoksena. Kohdegeenien alukkeet on lueteltu lisätaulukossa 1.

Verkon rakentaminen ja analysointi

Analysoidaksemme toiminnallisia tulkintoja ja biologisia prosesseja, joita tunnistimme differentiaalisesti ilmentyneiden geenien välittämän, DAVID-tietokantaa (Dabase for Annotation, Visualization and Integrated Discovery) käytettiin annotoimaan ja analysoimaan Kyoto Encyclopedia of Genes and Genome (KEGG) -polun ja geenin rikastuminen. Näiden geenien ontologia (Jiao et al., 2012). Erilaisesti ilmentyneiden geenien suorien ja epäsuorien vuorovaikutusten analysoimiseksi geeniluettelo ladattiin myös Search Tool for theRetrieval of Interacting Genes/Proteins (STRING) -palveluun vuorovaikutustietojen hakemiseksi ja proteiinien vuorovaikutusverkostojen luomiseksi (Franceschini et al., 2013).

Tilastollinen analyysi

Kaikki kokeet suoritettiin vähintään kolmella riippumattomalla toistolla, ja tilastolliset analyysit suoritettiin SigmaStat v3.5 -ohjelmistolla (Systat Software, Inc., IL). Tiedot eliniän pidentämisestä ja oksidatiivisen stressin haasteista tehtiin kärpästen kokonaismäärällä 250–350, ja log-rank-testi arvioitiin eri analyyseja varten. Ryhmävertailut hedelmällisyyden arvioimiseksi ja kognitiiviset testit arvioitiin yksisuuntaisella varianssianalyysillä (ANOVA), jota seurasi Dunnettin post-hoc-testi. Muut kokeelliset vertailut tehtiin suorittamalla Studentin t-testi verrokkiryhmään verrattuna. Tiedot on esitetty keskiarvona ± SEM, ja p-arvoa < 0,05="" pidettiin="">

Tulokset

CT (Cistanche Tubulosa) -lisä pidentää kärpästen elinikää

Sen tutkimiseksi, onko CT(IVYtanche Tubulosa)lisäys voi pidentää kärpästen elinikää, kärpäsiin lisättiin 5,4, 10,8 ja 21,6 mg/ml CT:tä välittömästi 25 asteen eklosion jälkeen koko kokeellisen menettelyn ajan. Tietomme osoittivat, että CT(IVYtanche Tubulosa)lisäravinteet voivat pidentää sekä uros- että naaraskärpästen elinikää. Kuten kuvasta Fig. Kuvassa 1A uroskärpästen elinikää pidennettiin kaikilla CT-annoksilla(IVYtanche Tubulosa). Ryhmien keskimääräinen elinikä, jota täydennettiin 5,4, 10,8 ja 21,6 mg/ml TT:llä, kasvoi merkittävästi 18,9 prosenttia, 10,3 prosenttia ja 9,9 prosenttia. CT(IVYtanche Tubulosa)lisäsi myös merkitsevästi kaikkien TT-ryhmien enimmäiselinaikaa verrokkiryhmään verrattuna 88 päivästä 102, 98 ja 102 päivään 5,4, 10,8 ja 21,6 mg/ml TT:n hoidossa.(IVYtanche Tubulosa), vastaavasti. Naisilla CT(IVYtanche Tubulosa)lisäsi merkittävästi CT-ryhmien keskimääräistä elinikää verrattuna kontrolliryhmään (kuvio 1B). Keskimääräinen elinikä kasvoi 18,8 prosenttiin 5,4 mg/ml CT:llä(IVYtanche Tubulosa)ja 5,5 prosenttia ja 6,7 ​​prosenttia 10,8 ja 21,6 mg/ml CT:llä, vastaavasti. Havaitsimme myös, että enimmäiselinikä piteni merkittävästi 91 päivästä (kontrollit) 109, 98 ja 102 päivään 5,4, 10,8 ja 21,6 mg/ml TT:n hoidossa.(IVYtanche Tubulosa), vastaavasti; maksimielinajan nousu oli 19,8 prosenttia 5,4 mg/ml CT:llä(IVYtanche Tubulosa). Tuloksemme viittaavat siihen, että CT(IVYtanche Tubulosa)ravintolisä pidentää merkittävästi sekä uros- että naaraskärpästen elinikää. Kurkumiinia (10 μM) käytettiin positiivisena kontrollina ja se pidensi elinikää tehokkaasti, kuten lisäkuvassa 1 on esitetty.

CT-lisäys lisää vastustuskykyä nälänhätää ja oksidatiivista stressiä vastaan

Elinajan pidentyminen liittyy usein lisääntyneeseen vastustuskykyyn oksidatiivista stressiä vastaan ​​ikääntymisprosessin aikana. Arvioimme, onko CT(IVYtanche Tubulosa)lisäravinteet lisäävät vastustuskykyä oksidatiiviselle stressille. Uros- ja naaraskärpäsiä esikäsiteltiin eri annoksilla CT:tä(IVYtanche Tubulosa)20 päivän ajan ja arvioitiin niiden eloonjääminen nälänhädän jälkeen (kuva 2A). Molempien sukupuolten keskimääräinen eloonjäämisaika ja enimmäiselinikä vertailuryhmään verrattuna lisääntyivät merkittävästi 5,4 ja 10,8 mg/ml TT-ryhmissä, mutta ei 21:ssä. .6 mg/ml CT(IVYtanche Tubulosa)ryhmä. Esikäsitellyistä kärpäsistä arvioitiin myös niiden eloonjääminen H2O2:lla ja parakvatilla, jotka tuottavat reaktiivisia happilajeja (ROS) laukaistaen solujen vanhenemisen ja solukuoleman. Löysimme, että CT(IVYtanche Tubulosa)suojeli sekä uros- että naaraskärpäsiä H2O2-myrkyllisyydeltä ja pidensi niiden keskimääräistä ja maksimiikää (kuva 2B, p < 0.01 ja 0,001, 5,4 ja 10,8 mg/ml CT:tä)(IVYtanche Tubulosa), vastaavasti). Samanlainen suuntaus, joka osoitti lisääntynyttä vastustuskykyä parakvattihaastetta kohtaan, havaittiin myös. Urosperhoja ruokittiin kaikilla TT-annoksilla ja naaraat, erityisesti ne, joihin on lisätty 5,4 mg/ml TT:tä(IVYtanche Tubulosa) (IVYtanche Tubulosa), säilyivät pidempään kuin kontrollit (kuvio 3A, p < 0.001).="" mitä="" tulee="" kiipeämiskykyyn,="" sekä="" uros-="" että="" naarasperhoille="" annettiin="" 10,8="" mg/ml="">(IVYtanche Tubulosa)osoitti heikentynyttä parakvatin aiheuttamaa liikkumishäiriötä 16 tuntia parakvatsan jälkeen (kuvio 3B, kaikki p < 0,05).="" nämä="" tulokset="" paljastavat,="" että="" tt-lisä="" parantaa="" vastustuskykyä="" jollekin="" oksidatiiviselle="" stressille,="" mikä="" viittaa="" siihen,="" että="">(IVYtanche Tubulosa)-Indusoitu eliniän pidentyminen liittyy lisääntyneeseen antioksidanttiseen puolustuskykyyn.

CT:n (Cistanche Tubulosa) vaikutukset lisääntymiskykyyn

Koska ikääntymisen teoria osoittaa, että ikääntymisprosessi vaikuttaa negatiivisesti lisääntymiseen, tutkimme, onko CT(IVYtanche Tubulosa)vaikuttaa lisääntymiskykyyn analysoimalla täysikasvuisten kärpästen munimiskykyä. Aikuiset kärpäset kerättiin eklosion jälkeen, eroteltiin sukupuolen mukaan ja niille annettiin 5,4 ja 10,8 mg/ml CT:tä(IVYtanche Tubulosa)20 päivän ajan. Neitsyt urosperhoset tai naarasperhot TT:llä(IVYtanche Tubulosa)paritettiin 9-päiväkärpästen kanssa, joille ei annettu TT:tä(IVYtanche Tubulosa). Havaitsimme annoksesta riippuvan lisäyksen naaraspuolta kohti munivien munien määrässä päivittäin, nimittäin 30,3 prosenttia ja 57,2 prosenttia vaurioituneita kärpäsiä, joita käsiteltiin 5,4 ja 10,8 mg/ml CT:llä.(IVYtanche Tubulosa), vastaavasti verrokkeihin verrattuna (kuva 4, p < 0.05).="" nämä="" tiedot="" viittaavat="" siihen,="" että="">(IVYtanche Tubulosa)lisäravinteet voisivat helpottaa iäkkäiden naisten lisääntymiskykyä, mutta ei todennäköisesti iäkkäillä miehillä.

CT (Cistanche Tubulosa) -lisä parantaa kognitiivista kykyä

Selvitimme onko CT(IVYtanche Tubulosa)täydennyksellä on suotuisia vaikutuksia oppimis- ja muistikykyyn, suoritettiin yksi hajuassosiatiivisen harjoittelun sykli. Arvioimme oppimissuorituskykyä sekä 3- ja 24-h muistia, joita on pidetty välimuistina ja pitkäkestoisena muistina. Ensin kärpäsiä täydennettiin eri annoksilla CT:tä(IVYtanche Tubulosa)5 päivän ajan. Oppimiskyky oli samanlainen sekä TT- että kontrolliryhmissä (kuva 5A). Mitä tulee 3-h muistiin, 10,8 mg/ml CT(IVYtanche Tubulosa)ryhmällä oli yleensä korkeampi suorituskykyindeksi (PI) kuin kontrolleilla (kuvio 5B, 51,5 ± 3,2 vs. 42,6 ± 2,1), vaikka merkittävää eroa ei ole. Lisäksi 5,4 ja 10,8 mg/ml CT:tä(IVYtanche Tubulosa)paransi merkittävästi kärpästen {{0}}h-muistia verrokkeihin verrattuna (kuva 5C, PI=41,6 ± 3,6 ja 45,9 ± 3,6.0 vs. 29,6 ± 2,9). , p < 0,05="" ja="" 0,01).="" nämä="" tulokset="" osoittivat,="" että="" ct-lisäys="" parantaa="" muistin="" muodostumista="" nuorilla="" kärpäsillä.="" toiseksi,="" kun="" taas="">(IVYtanche Tubulosa)lisäravinteet lisäsivät kärpästen pitkäikäisyyttä ja hapettumisresistenssiä, määritimme edelleen, voisiko lisäravinto myös parantaa ikääntyneiden kärpästen kognitiivista käyttäytymistä. Perhoille annettiin standardiruokaa 5,4, 10,8 ja 21,6 mg/ml CT:n kanssa tai ilman niitä.(IVYtanche Tubulosa)20 päivän ajan ikääntymisen jäljittelemiseksi; kärpäsiä täydennettynä näillä CT-annoksilla(IVYtanche Tubulosa)oppimisen PI:t olivat huomattavasti korkeammat (67,6 ± 1,9, 72,5 ± 0,5 ja 75,2 ± 1,3, vastaavasti) kuin verrokeilla (58.0 ± 2.0; Kuva 5D , p < 0.001), mikä viittaa siihen, että CT(IVYtanche Tubulosa)sillä on myönteinen vaikutus ikääntymiseen liittyvän oppimisen heikkenemisen viivyttämiseen. Samankaltaiset tulokset paljastivat myös, että 5,4 mg/ml TT(IVYtanche Tubulosa)ryhmällä oli tehokkaampi muistin säilyttäminen {{0}}tunnissa (kuva 5E, 47,5 ± 1,9 vs. kontrolli37.{{10}} ± 2,9, p < 0,05)="" ja="" 24-="" h="" muistitestit="" (kuvio="" 5f,="" 31,8="" ±="" 3,8="" vs.="" kontrolli="" 19,3="" ±="" 2,4,="" p="">< 0,01).="" nämä="" tulokset="" osoittavat,="" että="">(IVYtanche Tubulosa)ravintolisä ei ainoastaan ​​lisää nuorten kärpästen muistin muodostumista, vaan myös viivästyttää kognitiivisen käyttäytymisen heikkenemistä ja ylläpitää tehokkaampaa oppimis- ja muistikykyä iän myötä.

Molekyylireitit, jotka liittyvät pitkäikäisyyden edistämiseen ja CT-lisäyksen kognitiiviseen parantamiseen

CT(IVYtanche Tubulosa)lisäravinteet sekä tukahduttaa AMI:tä että pidentää elinikää. Siksi päätimme, että AMI- ja pitkäikäisyyteen liittyvät geenit voidaan määrittää arvioimalla erilaista ekspressiota kontrolli- ja 5,4 ja 10,8 mg/ml CT-ryhmien välillä qPCR:n avulla. CT-käsiteltyjen kärpästen geeniekspression muutoksia verrattiin kontrolliryhmän vastaaviin, jotka esitettiin kuviossa 6A. Useiden kohdegeenien, mukaan lukien Sirt6, Sir2, Sod, p38b ja Sirt2, lisääntynyt ilmentyminen saattaa olla osallisena ikääntymisprosessissa. Myös S6k:n, raptorin, Psn:n, Rpd3:n ja N:n transkriptitasot nousivat, mikä viittaa siihen, että CT(IVYtanche Tubulosa)täydentäminen muuttaa niiden TOR- ja Notch-polkujen signaalinsiirtoa. Lisäksi CT-lisäys vaikutti merkittävästi Nmdar1:n, Nmdar2:n jaSkpA:n mRNA-ilmentymiseen. CT:n kannalta merkityksellisten proteiinivuorovaikutusten korostamiseksi, jotka pidentävät elinikää ja parantavat oppimista ja muistia, luotiin kirjallisuuteen perustuva qPCR-seulottujen geenien proteiinivuorovaikutusverkosto (kuva 6B). Jokainen solmu edustaa yhtä proteiinia, kun taas jokainen reuna merkitsee yhtä kirjallisuuteen perustuvaa vuorovaikutusta. Solmut on ryhmitelty KEGG-polun ja geeniontologian biologisen prosessin (GOBP) mukaan. Kuten kuviossa 6B esitetään, GOBP:n neuroaktiivinen ligandi-reseptorivuorovaikutus, joka vaikuttaa oppimiseen ja muistiin, ja toinen GOBPof-ikääntyminen, joka korreloi eliniän kanssa, ovat molemmat yhteydessä Notch-signalointireittiin. Lisäksi mTOR-signalointireitti vaikuttaa ikääntymisen GOBP:hen. CT-indusoidun geenin yli-ilmentymisen merkitys näille GOBP:ille ja reiteille on kuvattu Keskustelu-osiossa.

Kuva 6. Erilaisesti ilmentyneiden geenien verkkoanalyysi. Perhot, jotka on esikäsitelty 5,4 ja 10,8 mg/ml CT:llä(IVYtanche Tubulosa)ja kontrolliruokavaliot 25 asteessa 20 päivän ajan kerättiin differentiaalisen geeniekspression kvantifioimiseksi. (A) Kohdegeenien suhteelliset transkriptitasot kontrolleihin mitattiin qPCR:llä. n=4 jokaiselle ryhmälle. (B) Solusignaalin transduktioon osallistuvat geenit ja niiden vuorovaikutusverkosto. Solmut edustavat geenejä. Geenit, joilla on yli-ilmentymistä, on ympyröity vihreällä. Reunat edustavat geenituotteiden välisiä vuorovaikutuksia. Vuorovaikutustyypit on merkitty kuvassa eri väreillä. (Tämän kuvan selitteen väriviittausten tulkitsemiseksi lukijalle viitataan tämän artikkelin verkkoversioon.)

Keskustelu

Epätasapaino endogeenisten antioksidanttipuolustusjärjestelmien aiheuttamien vapaiden radikaalien muodostumisen ja eliminoinnin välillä voi aiheuttaa oksidatiivisia vaurioita kudoksiin iän myötä; näin ollen vapailla radikaaleilla oletetaan olevan kriittinen rooli vanhenemisessa (Dato et al., 2013). Tässä näytimme sen CT:n(IVYtanche Tubulosa)lisäravinteet kärpäsissä pidentää elinikää ja johtaa korkeaan sietokykyyn H2O2:n ja parakvatin aiheuttamille oksidatiivisille vaurioille molemmilla sukupuolilla. Tutkimukset korreloivat CT: n kanssa(IVYtanche Tubulosa)ja ikääntymistä estävät aineet ovat vähemmän tutkittuja, mutta C. deserticolan uutteet voivat pidentää ikääntymiskiihtyneisyyteen alttiiden hiiri8 (SAM-P8)hiirten elinikää (Zhang et al., 2014) ja ekinakosidia, joka on yksi tärkeimmistä CT:n yhdisteistä. , vaikuttaa myönteisesti C. elegansin eliniän pidentämiseen ja stressinsietokykyyn (Wang et al., 2015).

Viimeaikaiset eläintutkimukset osoittivat, että ekinakosidilla on suojaavia vaikutuksia bisfenoli A:n aiheuttamaa kivestoksisuutta vastaan ​​ja se tehostaa testosteronin biosynteesiä indusoimalla kivesten steroidogeenisiä entsyymejä, mukaan lukien CYP11A1, 3 -HSD ja CYP17A1 (Jiang et al., 2016). CT(IVYtanche Tubulosa)etanoliuute edistää myös rottien siittiöiden elinkelpoisuutta ja laatua (Wang et al., 2016). Vaikka korrelaatio CT(IVYtanche Tubulosa)ja estrogeenia on vielä tutkittava, eräs tutkimus raportoi, että ekinakosidi lisää merkittävästi estrogeenireseptorien ilmentymistä, samalla tavalla kuin estradiolilla hoidetut ryhmät rotilla, joilta on poistettu munasarjat (Li et al., 2013). Koska lisääntymiskyky korreloi negatiivisesti iän kanssa (Kenyon, 2005), tutkimme, onko TT:stä hyötyä vanhoissa kärpäsissä. CT vaikuttaa lisääntymiskykyyn(IVYtanche Tubulosa)havaittiin vain naarailla, mikä viittaa siihen, että naaraskärpäset saattavat olla herkempiä TT:lle(IVYtanche Tubulosa)täydennystä. Nämä tulokset paljastavat, että TT:llä saattaa olla sukupuolihormonia muistuttavaa vaikutusta ja se voi viivästyttää lisääntymiskykyä, mikä on yhdenmukainen CT:n kliinisen käytön kanssa.(IVYtanche Tubulosa)ihmisten seksuaalisen toimintahäiriön hoitoon.

Akteosidi voi selventää suojaavia vaikutuksia hermosolujen apoptoosin ja muistin menetyksen vähentämiseksi D-galaktoosin ja AlCl3:n yhdistelmän indusoimassa vanhenevassa hiirimallissa, mikä viittaa siihen, että CT:llä saattaa olla hermoja suojaavia ja muistia parantavia ominaisuuksia (Gao et al., 2015; Peng et ai., 2015). Tietomme osoittivat, että muistin muodostuminen parani CT-täytetyillä nuorilla kärpäsillä. Siksi arvioimme, onko CT(IVYtanche Tubulosa)lisäravinteet ovat hyödyllisiä muistin säilyttämiselle ikääntyessä, koska kognitiivisten toimintojen tiedetään heikkenevän normaalissa ikääntymisessä. Tuloksemme osoittivat, että usean tyyppisiä AMI-häiriöitä, mukaan lukien oppiminen, 3- ja 24-hmuisti, voidaan parantaa TT:llä(IVYtanche Tubulosa)täydennys 20 päivän ajan. Edellä mainittujen tulosten mukaan CT(IVYtanche Tubulosa)lisäravinteilla voi olla suotuisia vaikutuksia pitkäikäisyyteen ja muistinmuodostuksen parantamiseen sekä riittävän viivyttää AMI:tä.

Eläinmallien käyttö helpottaa TT:n mahdollisten mekanismien ja polkuriippuvuuden tunnistamista(IVYtanche Tubulosa)hidastaa aivojen ikääntymistä ja lykätä AMI:tä solutasolla. Keskityimme ikääntymisen, hermosolujen välittymisen ja oksidatiivisen stressin taustalla oleviin molekyylimekanismeihin ja päätimme, että AMI- ja pitkäikäisyyteen liittyvät geenit voidaan tunnistaa tutkimalla erilaista ekspressiota kontrolli- ja CT-ryhmien välillä qPCR:n avulla. Notch-signalointireitti on erittäin konservoitunut lajien keskuudessa Drosophilasta ihmisiin; se ilmentyy aikuisen keskushermostossa hermojen plastisuuden vuoksi ja säätelee hermojen erilaistumista yhdessä sen estohäiriön kanssa kehityksen aikana (Presente et al., 2001). Hiirillä, joilla on heterotsygoottinen Notchin mutaatio, on puutteita avaruudellisessa oppimisessa ja muistissa (Costa et al., 2003). Preseniliiniä (Psn) tarvitaan aktivoimaan Notch:n pilkkoutuminen Notch-solunsisäiseen verkkoalueeseen ja Psn:n poisto aiheuttaa synaptisen plastisuuden ja muistin muodostumisen heikkenemistä (Saura et al., 2004). Tietomme paljasti annosriippuvaisen Notch- ja Psn-säätelyn CT:ssä(IVYtanche Tubulosa)täydennetyt kärpäset, joiden ilmentymistaso on muuttumaton tunnottomana, mikä tarkoittaa, että Notch-signalointireitti on tehokas mekanismi muistin parantamiseksi CT-lisäyksellä. Notch-signaloinnin lisäksi N-metyyli-D-aspartaattireseptori (NMDAR), glutamaatti- ja D-seriiniohjattu ionikanava neuroneissa, säätelee synaptista plastisuutta ja muistitoimintoa (Furukawa et al., 2005). Drosophilan genomi sisältää kaksi NMDAR-alayksiköt, Nmdar1 ja Nmdar2, ja molemmat ovat tärkeitä muistitoiminnassa. Nmdar1-knockdown Drosophilassa heikentää oppimista ja muistia (Xia et al., 2005), kun taas Nmdar2:n yli-ilmentyminen hiirillä parantaa oppimista ja muistia (Tang et al., 2001). Tietomme osoittivat annoksesta riippuvan Nmdar1- ja Nmdar2-säätelyn lisääntymisen CT-täytetyillä kärpäsillä, mikä viittaa toiseen mahdolliseen muistin parantamismekanismiin TT:n avulla.(IVYtanche Tubulosa)täydennystä.

Forkhead box -transkriptiotekijäreitin (FoxO) luokka O on konservoitunut lajien kesken ja kriittinen aineenvaihdunnan, stressinsietokyvyn ja eliniän pidentämisen kannalta (Lehtinen et al., 2006). Posttranslationaaliset modifikaatiot, mukaan lukien fosforylaatio, asetylaatio ja ubiquitylaatio, säätelevät FoxOs:n aktiivisuutta (van der Horst ja Burgering, 2007). Hiljainen informaatiosäätelijä 2 (Sir2; nisäkkäiden homologi tunnetaan nimellä SIRT1) säätelee FoxO:n aktiivisuutta deasetyloinnin kautta ja vaikuttaa eläinten elinikään liittyen insuliinin kaltaisen kasvutekijän (IGF) reittiin (Lemieux et al., 2005). Sirt6 defosforyloi FoxO:n pidentäen uroshiirten elinikää (Kanfi et al., 2012). Tietomme paljastivat Sir2- ja Sirt6-sääntelyn CT-täytetyissä kärpäsissä, mikä viittaa siihen, että paitojen FoxO-säätely voi olla tehokas mekanismi CT:n eliniän pidentämiseen.(IVYtanche Tubulosa)täydennystä. Aineenvaihduntaprosessien aikana syntyvät vapaat radikaalit vaurioittavat DNA:ta ja proteiineja, mikä lyhentää elinikää. Sir2 on myös oksidatiivinen stressivastegeeni (Whitaker et al., 2013), ja yli-ilmentyneen superoksididismutaasin (SOD), joka muuttaa O2−:n H2O2:ksi ja lopulta H2O:ksi käyttämällä katalaasia ja glutationiperoksidaasia, on raportoitu pidentävän kärpästen elinikää ( Le Bourg, 2001). Tietomme paljastivat annoksesta riippuvan Sodin ja Sir2:n lisääntymisen CT-täytetyissä kärpäsissä, mikä viittaa siihen, että antioksidanttireitit voivat olla voimakas mekanismi eliniän pidentämiseen CT:llä(IVYtanche Tubulosa)täydennystä.

Toista keskeistä ikääntymisreittiä säätelevät mTOR-kompleksit mTORC1 ja mTORC2, jotka molemmat edistävät organismin kehittymistä evolutionaarisesti konservatiivisella tavalla. Insuliinireseptorin signaalit aktivoivat mTORC1:n fosfoinositidi3-kinaasi–Akt-reitin kautta edistämään proteiinisynteesiä ja tulehdusta sekä estämään autofagiaa ja glykolyysiä käyttämällä erillisiä alavirran proteiineja (Johnson et al., 2013). Proteiinisynteesiä aktivoi ribosomin proteiini S6 -kinaasi (S6K), joka muodostaa negatiivisen palautesilmukan insuliinireseptorin signaalin estämiseksi (Hands et al., 2009). mTORC1:n inhiboiva kohde on samanlainen Drosophila-proteiini (sima), jonka homologi nisäkkäissä tunnetaan hypoksialla indusoituvana tekijä 1 alfana (HIF1). HIF1:llä on suojaava rooli verisuonten ja motoristen neuronien iästä riippuvaisia ​​vaurioita vastaan ​​(Oosthuyse et al., 2001; Rivard et al., 2000). Tietomme paljastivat, että mTOR-kompleksialayksiköiden ekspressiotaso on muuttumaton, mukaan lukien Tor, rictor ja raptor, kun taas CT(IVYtanche Tubulosa)täydennysannoksesta riippuvainen S6K:n ja siman säätely, mikä tarkoittaa CT:n suojaavaa roolia(IVYtanche Tubulosa)mTOR-toimintaa vastaan.

Johtopäätökset

Huolimatta siitä, että joitain asiaan liittyviä polkuja on tunnistettu, pitkäikäisyys ja korkea älykkyys edistävät CT:tä(IVYtanche Tubulosa)interventio voi olla epäpolygeeninen piirre, johon useiden geenien vuorovaikutus vaikuttaa, ja muut geneettiset tekijät, joita emme ole selvittäneet, voivat myös muokata ikääntymisprosessia. Vanhuksille halutun fyysisen kunnon ja kognitiivisten kykyjen ylläpitämisen dementian ja kroonisten sairauksien lykkäämiseksi tai ehkäisemiseksi pitäisi olla keskeinen saavutus ikääntymistä koskevissa tutkimuksissa. Koska CT(IVYtanche Tubulosa), joka tunnetaan nimellä "aavikon ginseng", jolla on huomattava parantava vaikutus munuaisten vahvistamiseen yangilla, joka ravitsee kaikkia elimiä ja täydentää perinteisen kiinalaisen lääketieteen elintärkeää olemusta. Uskomme, että tutkimuksemme tarjoaa näyttöä, joka tukee TT:n kliinistä hoitoa.(IVYtanche Tubulosa)ja saattaa tarjota arvokasta tietoa uusien lääkkeiden tai elintarvikelisäaineiden kehittämiseen, jotka eivät ainoastaan ​​hidasta ikääntymistä ja ikääntymiseen liittyviä sairauksia, vaan myös parantavat ihmisten elämänlaatua.

Eturistiriita

Kirjoittajat ilmoittavat, että heillä ei ole eturistiriitoja.

Kiitokset

Tätä työtä tuki Kiinan lääketieteellinen yliopisto (CMU103-S-25); China Medical University Hospital (DMR-101-065, DMR-103-099); Taiwanin tiede- ja teknologiaministeriö (NSC 102-2632-B-039-001-MY3, MOST 104-2632-B-039-002) ​​ja osittain Taiwanin terveys- ja hyvinvointiministeriön kliininen tutkimus- ja tutkimuskeskus huippuosaamista (MOHW105-TDU-B-212-133019).

Täydentävät materiaalit

Tähän artikkeliin liittyvää lisämateriaalia löytyy verkkoversiosta osoitteesta doi:10.1016/j.phymed.2017.01.006.

Lähettäjä: "Molekulaariset reitit, jotka liittyvät pitkäikäisyyden edistämiseen ja kognitiiviseen parantamiseenCistanche tubulosaDrosophilassa, kirjoittanutWei-Yong Lin et ai

--W.-Y. Lin et ai. / Phytomedicine 26 (2017) 37–44

Viitteet

Burke, SN, Barnes, CA, 2010. Vanhenevat synapsit ja hippokampuksen piirin dynamiikka. Trends Neurosci. 33, 153–161.

Costa, RM, Honjo, T., Silva, AJ, 2003. Oppimis- ja muistivajeet Notch-mutanttihiirillä. Curr. Biol. 13, 1348–1354.

Dato, S., Crocco, P., D'Aquila, P., de Rango, F., Bellizzi, D., Rose, G., Passarino, G., 2013. Exploring the role of genetic variaability and lifestyle in oksidative stressireaktio terveelle ikääntymiselle ja pitkäikäisyydelle. Int. J. Mol. Sci. 14, 16443–16472.

Dubnau, J., Grady, L., Kitamoto, T., Tully, T., 2001. Häiriö neurotransmission in Drosophila sieni kehon estää hakua, mutta ei hankkia muistia. Nature 411, 476–480.

Franceschini, A., Szklarczyk, D., Frankild, S., Kuhn, M., Simonovic, M., Roth, A., Lin, J., Minguez, P., Bork, P., von Mering, C. , Jensen, LJ, 2013. STRING v9.1: proteiini-proteiini-vuorovaikutusverkot, laajempi kattavuus ja integraatio. Nucleic Acids Res. 41, D808–D815.

Furukawa, H., Singh, SK, Mancusso, R., Gouaux, E., 2005. Alayksiköiden järjestely ja toiminta NMDA-reseptoreissa. Nature 438, 185–192.
Gao, L., Peng, XM, Huo, SX, Liu, XM, Yan, M., 2015. Acteoside (Verbascoside) muistin parantaminen vanhenevassa hiirmallissa D-gal:n ja AlCl3:n yhdistelmän indusoimana. Phytother. Res. 29, 1131–1136.
Guo, Q., Zhou, Y., Wang, CJ, Huang, YM, Lee, YT, Su, MH, Lu, J., 2013. Avoin, ei-plasebokontrolloitu tutkimusCistanche tubulosaglykosidikapselit (Memoregain((R))) keskivaikean Alzheimerin taudin hoitoon. Olen. J. Alzheimer's Dis. Muut Demen. 28, 363–370.
Hands, SL, Proud, CG, Wyttenbach, A., 2009. mTOR:n rooli ikääntymisessä: proteiinisynteesi vai autofagia? Aging (Albany NY) 1, 586–597.
Jiang, Z., Wang, J., Li, X., Zhang, X., 2016. Echinacoside andCistanche tubulosa(Schenk) R. Wight paransi bisfenoli A:n aiheuttamia kivesten ja siittiöiden vaurioita rotilla sukurauhasen akselin säätelemien steroidogeenisten entsyymien kautta. J. Ethnopharmacol 193, 321-328.
Jiao, X., Sherman, BT, Huang da, W., Stephens, R., Baseler, MW, Lane, HC, Lempicki, RA, 2012. DAVID-WS: tilallinen verkkopalvelu geeni-/proteiiniluettelo-analyysin helpottamiseksi. Bioinformatiikka 28, 1805–1806.
Johnson, SC, Rabinovitch, PS, Kaeberlein, M., 2013. mTOR on keskeinen ikääntymisen ja ikääntymiseen liittyvien sairauksien modulaattori. Nature 493, 338–345.
Kanfi, Y., Naiman, S., Amir, G., Peshti, V., Zinman, G., Nahum, L., Bar-Joseph, Z., Cohen, HY, 2012. Sirtuiini SIRT6 säätelee elinikää miehillä hiiret. Nature 483, 218–221.
Kenyon, C., 2005. Ikääntymisen plastisuus: oivalluksia pitkäikäisistä mutanteista. Cell 120, 449-460.
Le Bourg, E., 2001. Oksidatiivinen stressi, ikääntyminen ja pitkäikäisyys Drosophila melanogasterissa. FEBS Lett. 498, 183–186.
Lehtinen, MK, Yuan, Z., Boag, PR, Yang, Y., Villen, J., Becker, EB, DiBacco, S., de la Iglesia, N., Gygi, S., Blackwell, TK, Bonni, A., 2006. Konservoitunut MST-FOXO-signalointireitti välittää oksidatiivisia stressireaktioita ja pidentää elinikää. Cell 125, 987-1001.
Lemieux, ME, Yang, X., Jardine, K., He, X., Jacobsen, KX, Staines, WA, Harper, ME, McBurney, MW, 2005. Sirt1-deasetylaasi moduloi insuliinin kaltaista kasvutekijän signalointireittiä nisäkkäät. Mech. Aging Dev. 126, 1097–1105.
Li, F., Yang, X., Yang, Y., Guo, C., Zhang, C., Yang, Z., Li, P., 2013. The antiosteoporotic activity of echinacosid in ovariectomized rotts. Phytomedicine 20, 549–557.
Li, Z., Lin, H., Gu, L., Gao, J., Tzeng, CM, 2016. Herba Cistanche (Rou Cong-Rong): yksi perinteisen kiinalaisen lääketieteen parhaista farmaseuttisista lahjoista. Front Pharmacol. 7, 41.
Lin, S., Ye, S., Huang, J., Tian, ​​Y., Xu, Y., Wu, M., Wang, J., Wu, S., Cai, J., 2013. How do Chinese munuaista vahvistavat lääkkeet estävät dopaminergisen hermosolujen apoptoosin? Neuraalinen Regen. Res. 8, 2820–2826.

Oosthuyse, B., Moons, L., Storkebaum, E., Beck, H., Nuyens, D., Brusselmans, K., Van Dorpe, J., Hellings, P., Gorselink, M., Heymans, S. , Theilmeier, G., Dewerchin, M., Laudenbach, V., Vermylen, P., Raat, H., Acker, T., Vleminckx, V., Van Den Bosch, L., Cashman, N., Fujisawa, H., Drost, MR, Sciot, R., Bruyninckx, F., Hicklin, DJ, Ince, C., Gressens, P., Lupu, F., Plate, KH, Robberecht, W., Herbert, JM, Collen , D., Carmeliet, P., 2001. Hypoksia-vaste-elementin poistaminen verisuonten endoteelin kasvutekijäpromoottorista aiheuttaa motoristen hermosolujen rappeutumista. Nat. Genet. 28, 131–138.

Peng, XM, Gao, L., Huo, SX, Liu, XM, Yan, M., 2015. D-gal:n ja AlCl3:n yhdistelmän indusoima akteosidin (Verbascoside) muistin parantamisen mekanismi Senescent Mouse Model -mallissa. Phytother, Res. 29, 1137–1144.
Presente, A., Andres, A., Nye, JS, 2001. Requirement of Notch in aikuisiässä neurologisen toiminnan ja pitkäikäisyyden kannalta. Neuroreport 12, 3321–3325.
Rivard, A., Berthou-Soulie, L., Principe, N., Kearney, M., Curry, C., Branellec, D., Semenza, GL, Isner, JM, 2000. Ikäriippuva vika verisuonten endoteelin kasvussa tekijän ilmentyminen liittyy vähentyneeseen hypoksian aiheuttamaan tekijä 1 -aktiivisuuteen. J. Biol. Chem. 275, 29643–29647.
Saura, CA, Choi, SY, Beglopoulos, V., Malkani, S., Zhang, D., Rao, Shankaranarayana, Chattarji, BS, Kelleher, S., 3., RJ, Kandel, ER, Duff, K., Kirkwood , A., Shen, J., 2004. Preseniliinitoiminnan menetys aiheuttaa muistin ja synaptisen plastisuuden heikkenemistä, mitä seuraa iästä riippuvainen hermoston rappeutuminen. Neuron 42, 23-36.
Schimanski, LA, Barnes, CA, 2010. Hermoproteiinisynteesi ikääntymisen aikana: vaikutukset plastisuuteen ja muistiin. Edessä Aging Neurosci. 2. Seok, J., Kim, TS, Kwon, HJ, Lee, SP, Kang, MH, Kim, BJ, Kim, MN, 2015. TehokkuusCistanche Tubulosaja Laminaria Japonica -uutteet (MK-R7) estävät kuvioitua hiustenlähtöä ja edistävät päänahan terveyttä. Clin. Nutr. Res. 4, 124–131.
Tang, YP, Wang, H., Feng, R., Kyin, M., Tsien, JZ, 2001. Rikastuksen erovaikutukset oppimiseen ja muistitoimintoihin NR2B-siirtogeenisissä hiirissä. Neuropharmacology 41, 779–790.
van der Horst, A, Burgering, BM, 2007. FoxO-proteiinien roolin korostaminen eliniässä ja taudeissa. Nat. Rev. Mol. Cell. Biol. 8, 440–450.
Wang, T., Chen, C., Yang, M., Deng, B., Kirby, GM, Zhang, X., 2016.Cistanche tubulosaetanoliuute välittää rotan sukupuolihormonitasoja indusoimalla kivesten steroidgeenisiä entsyymejä. Pharm. Biol. 54, 481–487.
Wang, T., Zhang, X., Xie, W., 2012.Cistanche deserticolaYC Ma, "Desert ginseng": arvostelu. Olen. J. Chin. Med. 40, 1123–1141.
Wang, X., Zhang, J., Lu, L., Zhou, L., 2015. Ekinakosidin pitkäikäisyysvaikutus Caenorhabditis elegansissa daf-16-välitteisenä. Biosci. Biotechnol. Biochem. 79, 1676–1683.
Whitaker, R., Faulkner, S., Miyokawa, R., Burhenn, L., Henriksen, M., Wood, JG, Helfand, SL, 2013. Drosophila Sir2:n lisääntynyt ilmentyminen pidentää elinikää annoksesta riippuvalla tavalla. Aging (Albany NY) 5, 682–691.
Wu, CR, Lin, HC, Su, MH, 2014. Kääntäminen vesipitoisilla uutteillaCistanche tubulosakäyttäytymispuutteista Alzheimerin taudin kaltaisessa rottamallissa: merkitys amyloidin kertymisen ja keskushermoston välittäjäaineiden toiminnan kannalta. BMC-täydennys. Altern. Med. 14, 202.
Xia, S., Miyashita, T., Fu, TF, Lin, WY, Wu, CL, Pyzocha, L., Lin, IR, Saitoe, M., Tully, T., Chiang, AS, 2005. NMDA-reseptorit välittävät hajuoppiminen ja muisti Drosophilassa. Curr. Biol. 15, 603–615.
Zhang, K., Ma, X., He, W., Li, H., Han, S., Jiang, Y., Wu, H., Han, L., Ohno, T., Uotsu, N., Yamaguchi, K., Ma, Z., Tu, P., 2014. Cistanche deserticola -uutteet voivat vastustaa immunosensenssia ja pidentää elinikää vanhenemiskiihdytetyssä hiiressä
Altis 8 (SAM-P8) hiiret. Evid. Perustuu täydennys. Vaihtoehto. Med. 2014, 601383.
Zhao, Q., Gao, J., Li, W., Cai, D., 2010. Echinacosidin neurotrofiset ja neurorescue-vaikutukset Parkinsonin taudin subakuutissa MPTP-hiirimallissa. Brain Res. 1346, 224–236.