Bioaktiiviset aineosat kiinalaisista luonnollisista lääkkeistä. XXXVI.1) Neljä uutta asyloitua fenyylietanolioligoglykosidia, kankanosideja J1, J2, K1 ja K2, Cistanche Tubulosan varresta

Yingni PAN, Toshio MORIKAWA, Kiyofumi NINOMIYA, Katsuya IMURA, Dan YUAN, Masayuki YOSHIKAWA ja Osamu MURAOKA

Farmaseuttinen tutkimus- ja teknologiainstituutti, Kinki-yliopisto; 3–4–1 Kowakae, Higashi-Osaka, Osaka 577–8502, Japani: School of Traditional Chinese Medicine, Shenyang Pharmaceutical University; 103 Wenhua Rd., Shenyang 110016, Kiinan kansantasavalta: ja Kyoto Pharmaceutical University; Misasagi, Yamashina-Ku, Kioto 607-8412, Japani. Vastaanotettu 28. marraskuuta 2009; hyväksytty 2. helmikuuta 2010; julkaistu verkossa 4.2.2010

Ottaa yhteyttä:joanna.jia@wecistanche.com

Abstrakti

Neljä uutta asyloitua fenyylietanoidiaminoglykosidia, kankanosideja J1 (1), J2 (2), K1 (3) ja K2 (4), eristettiin varresta.Cistanchetubulosa(Orobanchaceae) yhdessä isokampneosidi I:n kanssa (5). Niiden rakenteet selvitettiin kemiallisten ja fysikaalis-kemiallisten todisteiden perusteella. Niistä 3-5 havaittiin estävän D-galaktosamiinin aiheuttamaa sytotoksisuutta primääriviljeltyissä hiiren maksasoluissa.

Cistanchetubulosalla on monia vaikutuksia, napsauta tästä saadaksesi lisätietoja

Avainsanat:Cistanchetubulosa; Lankan puolella; fenyylietanoidiglykosidi; Orobanchaceae; hepatoprotektiivinen aktiivisuus.

Tutkimuksissamme kiinalaisten luonnonlääkkeiden bioaktiivisista ainesosista 1–3) havaitsimme, että metanoliuutte kuivatuista varreistaCistanchetubulosa(SCHRENK) R. WIGHT (Orobanchaceae) osoitti vasorelaksanttia4) ja hepatoprotektiivista aktiivisuutta.1) C.tubulosa, viisi iridoidia, kankanosidi A–D ja kankanoli, monoterpeeniglykosidi, kankanosidi E, kaksi fenyylietanoidiaminoglykosidia, kankanosidi F ja G, sekä asyloitu oligosokeri, kankanoosi, eristettiin yhdessä 30 tunnetun aineosan kanssa.4,5) Äskettäin olemme lisäksi eristettiin 19 fenyylietanoidiaminoglykosidia, mukaan lukien kankanosidit H1, H2 ja I 1) ja kaksi asyloitua oligosokeria C. tubulosan tuoreista varresta. 1) Lisäksi tärkeimpien fenyylietanoidiglykosidien, ekinakosidin, akteosidin ja isoakteosidin havaittiin estävän D-galaktosamiinin (D-GalN) aiheuttamaa seerumin aspartaattiaminotransferaasin (sAST) ja alaniiniaminotransferaasin (sALT) tasojen nousua maksavaurioituneilla hiirillä. lipopolysakkaridi annoksina 25-100 mg/kg per os (po) ja fenyylietanoidiglykosidien rakenteelliset vaatimukset hepatoprotektiiviselle aktiivisuudelle selvitettiin.1) Jatkuvana tutkimuksena C:n tuoreista varresta peräisin olevista ainesosista.tubulosa, eristimme lisäksi neljä uutta asyloitua fenyylietanolioligoglykosidia, kankanosidit J1 (1), J2 (2), K1 (3) ja K2 (4). Tämä artikkeli käsittelee 1-4 eristämistä ja rakenteen selventämistä.

C:n tuoreet varret.tubulosa(viljelty Urumqissa, Xinjiangin maakunnassa, Kiinassa) uutettiin metanolilla palautusjäähdyttäen, jolloin saatiin metanoliuute (8,36 prosenttia tuoreista varresta). Metanoliuutteesta saatiin H2O- ja MeOH-eluoidut fraktiot (5,63 prosenttia ja 2,73 prosenttia vastaavasti) Diaion HP-20 -pylväskromatografialla (H2O→MeOH), kuten aiemmin on kuvattu.1) Intensiivisillä kromatografioilla MeOH-eluoitu fraktio, neljä uutta fenyylietanolioligoglykosidia, kankanosidit J1 (1, 0.0002 prosenttia), J2 (2, 0 0,0002 prosenttia), K1 (3, 0,0002 prosenttia) ja K2 (4, 0,0005 prosenttia) yhdessä isokampneosidin I6) kanssa (5, 0,0006 prosenttia) eristettiin.

Kankanosidien J1 (1) ja J2 (2) rakenteet Kankanosidi J1 (1) saatiin valkoisena jauheena, jolla oli negatiivinen optinen rotaatio ([a]D 25 - 6,5 astetta MeOH:ssa). IR-spektri 1 osoitti absorptiovyöhykkeitä kohdissa 3414, 1734, 1719, 1701, 1638, 1508, 1159, 1067 ja 1046 cm{18}} hydroksyyli, joka voidaan luokitella esteriksi karbonyylit, eetterifunktiot ja aromaattiset renkaat. Positiivisten ja negatiivisten ionien FAB-MS-spektrit 1 osoittivat kvasimolekylaariset ionihuiput arvoilla m/z 719 (M-Na) ja m/z 695 (MH), ja molekyylikaavaksi määritettiin C32H40O17 korkearesoluutioisella positiivisella ioni FAB-MS-mittaus. 1:n 1 H- ja 13C-NMR-spektrit (CD3OD, taulukot 1, 2), jotka määritettiin useilla NMR-kokeilla, 7 osoittivat signaaleja, jotka voidaan määrittää metoksiryhmälle [d 3,21 (3H, s, 7-). OCH3)], metyleeni ja metiini, jossa on happifunktio [d 3,58, 4.00 (1H kumpikin, molemmat m, 8-H2), 4,18 (1H, dd-kaltainen, J ca. 4, 8 Hz, 7-H)], orto- ja metakytketyt ABC-tyyppiset aromaattiset protonit [d 6,63 (1H, dd, J 1,8, 8,2 Hz, 6-H), 6,74 (1H) d, J 1,8 Hz, 2-H), 6,74 (1 H, d, J 8,2 Hz, 5- H)], bD-glukopyranosyyliosa [d 4,54 (1 H, d, J 7,8 Hz) , Glc-1-H)] ja aL-ramnopyranosyyliosa [d 1,07 (3H, d, J 6,4 Hz, Rha-6-H3), 4,80 (1H, br s, Rha{103} }H)] yhdessä asetyyliryhmän [d 2.{105}} (3H, s)] ja trans-kofeoyyliryhmän kanssa {trans-olefifiini [d 6,26, 7,59 (1H kumpikin, molemmat d, J{{ 114}},0 Hz, 8-, 7-H)] ja orto- ja meta-kytketyt ABC-tyyppiset aromaattiset protonit [d 6,77 (1H, d, J 8,2 Hz, 5- H), 6,95 (1H, dd, J{130}},8, 8,2 Hz, 6-H), 7,04 (1H, d, J 1,8 Hz, 2-H)]}. 1H- ja 13C-NMR-spektrit 1 olivat päällekkäisiä kampneosidin 11,8-10) (6) spektrien kanssa, lukuun ottamatta asetyyliryhmästä johtuvia signaaleja. Aminoglykosidi- ja asyyliosien yhteydet 1:ssä vahvistettiin heteronukleaarisella monisidoskorrelaatiokokeella (HMBC), joka osoitti pitkän kantaman korrelaatioita seuraavien protoni- ja hiiliparien välillä: 7-OCH3 ja 7-C ( dC 83,3); Glc-1-H ja 8-C (dC 74,1); Glc-2-H [d 4,91 (1H, dd, J- 7,8, 9,2 Hz)] ja asetyylikarbonyylihiili (dC 171,4); Glc-4-H [d 4,99 (1H, dd, J 9,2, 9,6 Hz)] ja trans-kofeoyylikarbonyylihiili (dC 168,1); ja Rha-1-H ja Glc-3-C (dC 80,5) (kuva 1). Lopuksi 1:n alkalinen hydrolyysi 5-prosenttisella kaliumhydroksidilla (KOH) vapautti trans-kahvihappoa, joka tunnistettiin HPLC-analyysillä, yhdessä deasyloidun tuotteen kanssa. Deasyloitua tuotetta käsiteltiin peräkkäin 1,0 M suolahapolla (HCl) L-ramnoosin ja D-glukoosin vapauttamiseksi, jotka tunnistettiin HPLC-analyysillä optista rotaatiodetektoria käyttäen.1-5) Siten kankanosidi J1:n rakenne selvitettiin. olla 2-metoksi-2-(3,4-dihydroksifenyyli)etyyli OaL-ramnopyranosyyli-(1→3)-2-O-asetyyli-4-O-trans- kofeoyyli-bD-glukopyranosidi (1).

Kankanosidi J2 (2) eristettiin valkoisena jauheena negatiivisella optisella rotaatiolla ([a]D 25 - 18,1 astetta MeOH:ssa). Korkean erotuskyvyn positiivisten ionien FAB-MS-mittauksella 2:n molekyylikaavan havaittiin olevan sama kuin 1:n. 1H- ja 13C-NMR-tiedot 2:sta (CD3OD, taulukot 1, 2) olivat erittäin samanlaisia ​​kuin 1, paitsi aglykoniosan etyylisillasta johtuvat signaalit {a metoksiryhmä [d 3,24 (3H, s, 7-OCH3)], metyleeni [d 3,63 (1H, m) , 3,83 (1H, dd, J- 3,2, 110 Hz), 8-H2] ja metiini, jossa on happifunktio [d 4,22 (1H, dd, J{) {38}},2, 8,2 Hz, 7-H)]}. Yhdisteen 2 alkalinen hydrolyysi 5-prosenttisella KOH:lla vapautti trans-kahvihapon yhdessä deasyloidun tuotteen kanssa, ja deasyloitua tuotetta käsiteltiin peräkkäin 10 M HCl:lla L-ramnoosin ja D-glukoosin vapauttamiseksi. Kuten kuviossa 1 esitetään, HMBC-kokeessa havaittiin samat pitkän kantaman korrelaatiot kuin 1:n tapauksessa. Tämän seurauksena kankanosidin J2 (2) tasomaisen rakenteen paljastui olevan sama kuin 1:n, ja sen selvitettiin olevan 1:n 7-isomeeri. 11)

Kankanosidien K1 (3) ja K2 (4) rakenteet Kankanosidien K1 (3) ja K2 (4), C36H48O21, rakenteet saatiin myös valkoisina jauheina negatiivisilla optisilla rotaatioilla (3: [a]D 25 - 75,3 astetta). 4: [a]D 25 - 7,4 astetta molemmat MeOH:ssa). 3:n ja 4:n1H- ja 13C-NMR-spektrit (CD3OD, taulukot 1, 2) osoittivat metoksiryhmälle osoitettavia signaaleja [3:d 3,23 (3H, s, {{30}} OCH3) ; 4: d 3,25 (3H, s, 7-OCH3)], metyleeni ja metiini, jossa on happifunktio {3: d [3,62 (1H, dd, J- 3.4,11.{{ 52}} Hz), 4.{{70}}2 (1H, dd, J- 8.1, 11.0 Hz), 8-H2] 4,34 (1H, dd, J- 3,4, 8,1 Hz, 7-H); 4: d [3,72 (1H, dd, J- 9.1, 11.{110}} Hz), 3,84 (1H, dd, J- 3.1, 11,0 Hz), 8-H2], 4,37 (1H, dd, J- 3.1, 9,1 Hz, 7-H)}, orto- ja metakytketyt ABC-tyyppiset aromaattiset protonit [ 3: d 6,68 (1H, dd, J- 2,0, 8,1 Hz, 6-H), 6,76 (1H, d, J{103}},1 Hz, 5- H), 6,80 (1 H, d, J{109}},0 Hz, 2-H); 4: d 6,67 (1H, dd, J{116}},9, 8,2 Hz, 6-H), 6,76 (1H, d, J{124}},2 Hz, 5- H), 6,78 (1H, d, J- 1,9 Hz, 2-H)], kaksi bD-glukopyranosyyliosaa [3: d 4,31 (1H, d, J- 7). 9 Hz, pääte-Glc-1-H), 4,40 (1H, d, J- 7,9 Hz, sisempi-Glc-1-H); 4: d 4,26 (1H, d, J- 7,7 Hz, terminaali-Glc-1-H), 4,44 (1H, d, J- 7,9 Hz, sisä-Glc{ {164}}H)], ja aL-ramnopyranosyyliosa [3: d 1,08 (3H, d, J 6,4 Hz, Rha-6-H3), 5,19 (1 H, d, J- 1). 7 Hz, Rha{180}}H); 4: d 1,08 (3H, d, J- 6,2 Hz, Rha-6-H3), 5,20 (1H, d, J- 1,6 Hz, Rha{194}} H)] yhdessä trans-kofeoyyliryhmän kanssa {trans-olefifiini [3: d 6,27, 7,60 (1H kumpikin, molemmat d, J- 15.8 Hz, 8-, 7- H); 4: d 6,28, 7,60 (1H kumpikin, molemmat d, J- 15.8 Hz, 8-, 7-H)] ja orto- ja metakytketyt ABC-tyyppiset aromaattiset protonit [ 3: d 6,78 (1H, d, J- 8,3 Hz, 5-H), 6,96 (1H, dd, J{230}},9, 8,3 Hz, 6- H), 7,05 (1 H, d, J- 1,9 Hz, 2-H)]; 4: d 6,78 (1H, d, J{245}},4 Hz, 5-H), 6,96 (1H, dd, J{251}},9, 8,4 Hz, 6- H), 7,05 (1 H, d, J- 1,9 Hz, 2-H)}. Protoni- ja hiilisignaalit 1H- ja 13C-NMR-spektreissä 3 ja 4 olivat päällekkäisiä ekinakosidin 1,4,12) kanssa lukuun ottamatta 7-metoksiryhmästä johtuvia signaaleja. Trans-kofeoyyliryhmän ja 3:n ja 4:n glykosyyliosien kytkennät selvitettiin HMBC-kokeiden perusteella, kuten kuvassa 1 on esitetty. Lopuksi yhdisteiden 3 ja 4 alkalinen hydrolyysi 5-prosenttisella KOH:lla antoi deasyloidut tuotteet yhdessä trans:n kanssa. -kahvihappo. Näitä deasyloituja tuotteita käsiteltiin peräkkäin 1,0 M HCl:lla L-ramnoosin ja D-glukoosin vapauttamiseksi, vastaavasti. Tämän seurauksena kankanosidien K1 ja K2 rakenteen määritettiin olevan 2-metoksi-2-(3,4-dihydroksifenyyli)etyyli OaL-ramnopy-ranosyyli-(1→3)-[bD -glukopyranosyyli-(1→6)]-4-O-trans-caf-feel-bD-glukopyranosidi (3 ja 4).11,13)

akteosidisisääncistanchesillä on monia vaikutuksia muistiin

Aikaisemmin metanoliuute C:n varresta.tubulosaja useita fenyylietanoliaineosia, kuten ekinakosidi,akteosidi, jaisoakteosidihavaittiin osoittavan hepatoprotektiivisia vaikutuksia D-galaktosamiinin (D-GalN)/lipopolysakkaridin aiheuttamaan maksavaurioon hiirillä ja estävän vaikutuksen D-GalN:n aiheuttamaan sytotoksisuuteen primaarisesti viljellyissä hiiren maksasoluissa.1) Tutkimme edelleen kankanosidien K1 () estäviä vaikutuksia ( 3) ja K2 (4) ja isokampneosidi I (5) D-GalN:n aiheuttamaan sytotoksisuuteen primaarisissa viljellyissä hepatosyyteissä. Vaikka niiden aktiivisuus oli heikompaa kuin ekinakosidin (IC50 10,2 mM),akteosidi(4,6 mM) ja isoakteosidi (5,3 mM), pääasialliset fenyylietanoidiaineosat C. tubulosan varresta, 1) 3-5 osoittivat kohtalaista aktiivisuutta.14)

Kokeellinen

Seuraavia laitteita käytettiin spektri- ja fysikaalisten tietojen saamiseksi: spesifiset kierrokset, Horiba SEPA-300 digitaalinen polarimetri (l- 5 cm); UV-spektrit, Shimadzu UV-1600 -spektrometri; IR-spektrit, Shimadzu FTIR-8100 -spektrometri; 1H- ja 13C-NMR-spektrit, JEOL JNM-ECA600 (600, 150 MHz) ja JEOL JNM-ECS400 (400, 100 MHz) spektrometrit, joissa sisäisenä standardina on tetrametyylisilaani; FAB-MS ja korkearesoluutioinen FAB-MS, JEOL JMS-SX 102A massaspektrometri; HPLC-detektori, Shimadzu RID-10A taitekerroin, Shimadzu SPD-10A UV-VIS ja Shodex OR-2 optiset kiertoilmaisimet. HPLC-kolonnia, Cosmosil 5C18-MS-II-kolonnia ja pNAP-kolonnia (Nacalai Tesque Inc., 250 4,6 mm id) ja (250 x 20 mm id) -kolonnia käytettiin vastaavasti analyyttisiin ja preparatiivisiin tarkoituksiin.

akteosidisisääncistancheniillä on hyvä vaikutus munuaisiin

Kromatografiassa käytettiin seuraavia koeolosuhteita: normaalifaasisilikageelipylväskromatografia (CC), silikageeli 60N (Kanto Chemical Co., Ltd., 63-210 mesh, pallomainen, neutraali); käänteisfaasisilikageeli CC, Diaion HP-20 (Nippon Rensui) ja Chromatorex ODS DM1020T (Fuji Silesia Chemical, Ltd., 100-200 mesh); normaalifaasi TLC, esipäällystetyt TLC-levyt silikageelillä 60F254 (Merck, 0,25 mm); käänteisfaasi-TLC, esipäällystetyt TLC-levyt silikageelillä RP-18 F254S (Merck, 0,25 mm); käänteisfaasi-HPTLC, esipinnoitetut TLC-levyt silikageelillä RP-18 WF254S (Merck, 0,25 mm), havaitseminen suoritettiin ruiskuttamalla 1 % Ce(SO4)2-10 % vesipitoista H2SO4, mitä seurasi kuumennus .

Kasvimateriaali

Tämä kohta on kuvattu edellisessä raportissa.1)

Poisto ja eristäminen

C:n tuoreet varret.tubulosa(2,98 kg) leikattiin hienoksi ja uutettiin kolme kertaa metanolilla palautusjäähdyttäen 3 tunnin ajan. Liuottimen haihdutus alennetussa paineessa antoi metanolipitoisen uutteen (249,1 g, 8,36 %). Metanoliuute altistettiin Diaion HP- 20 CC:lle (50 kg, H2O → MeOH), jolloin saatiin H2O- ja MeOH-eluoituja fraktioita (167,84 g, 5,63 prosenttia ja 81,21 g, 2,73 prosenttia, vastaavasti). MeOH-eluoitu fraktio (61.00 g) altistettiin normaalifaasin silikageeli-CC:lle [1,8 kg, CHCl3-MeOH-H2O (15 : 3 : 0.4→1{{36) }} : 3 : 0.5 → 6 : 4 : 1, v/v/v) → MeOH], jolloin saadaan seitsemän fraktiota [Fr. 1 (1,12 g), 2 (9,56 g), 3 ({{1{{109}}4}},89 g), 4 (1{{12{{130 }}}},69 g), 5 (8,84 g), 6 (12,52 g) ja 7 (4,60 g)], kuten aiemmin kuvattiin.1) Fraktio 4 (1{{167} },69 g) erotettiin käänteisfaasisilikageelillä CC [500 g, MeOH-H2O (30 : 70, v/v) →MeOH→asetoni], jolloin saadaan neljä fraktiota [Fr. 4-1 (878,2 mg), 4-2 (7.06 g), 4-3 (1,57 g) ja {{8{{2{{2{{251 }}7}}2}}}} (792,8 mg)]. Fraktio 4-3 (1,57 g) puhdistettiin HPLC:llä [Cosmosil 5C18-MS-II, CH3CN – 1 % vesipitoinen AcOH (20 : 80, v/ v)], jolloin saadaan 11 fraktiota {Fr. 4-3-1 (30,4 mg), 4-3-2 (55,2 mg), 4-3- 3 [kampneosidi I (6, 22,1 mg, 0,0010 prosenttia )], 4-3-4 [ akteosidi (224,6 mg, 0,010 prosenttia )], 4-3-5 (27,4 mg), 4-3-6 (43,6 mg), 4-3-7 [isoakteosidi (825,0 mg, 0,037 prosenttia )], 4-3-8 [ syringalidi A 3 -OaL-ramnopyranosidi (37,6 mg, 0,0017 prosenttia )], 4-3-9 (39,8 mg), 4-3-10 [2 -asetyylilakteosidi (85,4 mg, 0,0038 prosenttia )] ja 4-3-11 (64,6 mg)}, kuten aiemmin kuvattiin.1) Fraktio 4-3-5 (27,4 mg) puhdistettiin edelleen HPLC:llä [Cosmosil pNAP, CH3CN - 1 % vesipitoinen AcOH (18 : 82, v/v)]. antaa isokampneosidi I:tä (5, 8,5 mg, 0,0004 prosenttia). Fraktio 4-3-6 (43,6 mg) puhdistettiin edelleen HPLC:llä [Cosmosil pNAP, CH3CN – 1 % vesipitoinen AcOH (18:82, tilavuus/tilavuus)], jolloin saatiin yhdiste 5 (3,7 mg, 0,0002 %) yhdessä kankanosidien H kanssa. 1 1) (17,0 mg, 0,0008 prosenttia) ja H2 1) (3,3 mg, 0,0001 prosenttia). Fraktio 4-3-9 (39,8 mg) puhdistettiin edelleen HPLC:llä [Cosmosil pNAP, CH3CN – 1 % vesipitoinen AcOH (18:82, tilavuus/tilavuus)], jolloin saatiin kankanosideja J1 (1, 3,7 mg, 0,0002 %). ) ja J2 (2, 3,5 mg, 0,0002 prosenttia) yhdessä kankanosidin I1) (15,4 mg, 0,0007 prosenttia) ja isoakteosidin 1) (3,1 mg, 0,0001 prosenttia) kanssa. Fraktio 5 (8,84 g) erotettiin käänteisfaasisilikageelillä CC [400 g, MeOH-H2O (20 : 80 → 30 : 70, v/v) → MeOH → asetoni], jolloin saatiin seitsemän fraktiota [Fr. 5-1 (870,2 mg), 5-2 (478,9 mg), 5-3 (3,72 g), 5-4 (979,9 mg), 5-5 (1,19 g), 5-6 (1,27 g) ja 5-7 (130,1 mg)]. Fraktio 5-3- 4 (72,3 mg) puhdistettiin edelleen HPLC:llä [Cosmosil pNAP, CH3CN – 1 % vesipitoinen AcOH (10:90, tilavuus/tilavuus)], jolloin saatiin kankanosideja K1 (3, 5,1 mg, 0,0002 %) ja K2 (4, 10,6 mg, 0,0005 prosenttia) yhdessä kampneosidi II1:n kanssa (7, 10,6 mg, 0,0005 prosenttia).

akteosidisisääncistanchevoi hoitaamunuainensairaus paraneemunuaistentoiminto

Kankanosidien J1 (1), J2 (2), K1 (3) ja K2 (4) alkalinen ja happohydrolyysi

Liuoksia 1-4 (kukin 1.0 mg) 5-prosenttisessa vesipitoisessa kaliumhydroksidissa (KOH, 0,5 ml) sekoitettiin 40 asteessa 1 tunti. Kukin liuos neutraloitiin Dowex HCR W2:lla (H-muoto) ja hartsi poistettiin suodattamalla. Liuottimen haihdutus suodoksista alennetussa paineessa tuotti vastaavat deasyloidut tuotteet, joille suoritettiin HPLC-analyysi [sarake: Cosmosil pNAP, 250-4,6 mm id; liikkuva faasi: CH3CN - 1 % vesipitoinen AcOH (15:85, v/v); havaitseminen: UV (254 nm); vastaava nopeus: 1.0 ml/min], jolloin saadaan trans-kahvihappoa (tR 9,9 min arvosta 1-4). Sitten kukin liuotettiin 1.0 M HCl:aan (1.0 ml) ja kuumennettiin 80 asteessa 3 tuntia. Jäähdytyksen jälkeen reaktioseos neutraloitiin Amberlite IRA-400:lla (OH-muoto) ja hartsit poistettiin suodattamalla. Kun liuotin oli poistettu alennetussa paineessa, jäännös erotettiin Sep-Pak C18 -patruunakolonnilla (H20->MeOH). H2O-eluoitu fraktio altistettiin HPLC-analyysille seuraavissa olosuhteissa: HPLC-pylväs, Kaseisorb LC NH2-60-5, 4,6 mm id- 250 mm (Tokyo Kasei Co., Ltd., Tokio, Japani); tunnistus, optinen kierto [Shodex OR-2 (Showa Denko Co., Ltd., Tokio, Japani); liikkuva faasi, CH3CN-H20 (85:15, tilavuus/tilavuus); 0,8 ml/min]. L-ramnoosin (i) ja D-glukoosin (ii) tunnistaminen 1-4:stä H2O-eluoiduissa fraktioissa suoritettiin vertaamalla niiden retentioaikoja ja optista rotaatiota autenttisten näytteiden [i, tR 9,9 min ( negatiivinen)] ja [ii, tR 17,9 min (positiivinen)].

Kiitokset

TM, KN ja OM saivat tukea "High tech Research Center" -projektista yksityisille yliopistoille: vastaava rahastotuki Japanin opetus-, kulttuuri-, urheilu-, tiede- ja teknologiaministeriöltä (MEXT) vuosina 2007–2011, ja sitä tuki myös MEXT:n apuraha tieteelliseen tutkimukseen. MY:tä ja HM:ää tuki 21. COE -ohjelma, Academic Frontier Project ja MEXT:n tieteellisen tutkimuksen apuraha.

Viitteet ja huomautukset

1) Osa XXXV: Morikawa T., Pan Y., Ninomiya K., Imura K., Matsuda H., Yoshikawa M., Yuan D., Muraoka O., Bioorg. Med. Chem., 18, 1882-1890 (2010).

2) Morikawa T., Xie H., Wang T., Matsuda H., Yoshikawa M., Chem. Biodiv., 6, 411-420 (2009).

3) Muraoka O., Morikawa T., Zhang Y., Ninomiya K., Nakamura S., Ma tsuda H., Yoshikawa M., Tetrahedron, 65, 4142-4148 (2009).

4) Yoshikawa M., Matsuda H., Morikawa T., Xie H., Nakamura S., Mu raoka O., Bioorg. Med. Chem., 14, 7468-7475 (2006).

5) Xie H., Morikawa T., Matsuda H., Nakamura S., Muraoka O., Yoshikawa M., Chem. Pharm. Bull., 54, 669-675 (2006).

6) Si C.-L., Liu Z., Kim J.-K., Bae Y.-S., Holzforschung, 62, 197-200 (2008).

7) 1-4:n 1H- ja 13C-NMR-spektrit määritettiin polarisaatiosiirron (DEPT), kaksoiskvanttisuodattimen korrelaatiospektroskopian (DQF COSY), heteronukleaarisen monikvanttikoherenssin (HMQC) ja heteronukleaarisen häiriöttömän parannuksen avulla. monisidoskorrelaatiokokeet (HMBC).

8) Imakura Y., Kobayashi S., Mima A., Phytochemistry, 24, 139-146 (1985).

9) Wu J., Huang J., Xiao Q., Zhang S., Xiao Z., Li Q., ​​Long L., Huang L., Magn. Res. Chem., 42, 659-662 (2004).

10) Kitagawa S., Tsukamoto H., Hisada S., Nishibe S., Chem. Pharm. Bull., 32, 1209-1213 (1984).

11) 7--aseman stereokemiaa kohdissa 1-4 ei ole määritetty.

12) Kobayashi H., Oguchi H., Takizawa N., Miyase T., Ueno A., Usmanghani K., Ahmad M., Chem. Pharm. Bull., 35, 3309-3314 (1987).