Uudet fenyylietanoidiglykosidit Cistanche Tubulosa (SCHRENK) HOOKILTA. F. I.

HIROMI KOBAYASHI. HIROKO OGUCHI, NOBUO TAKIZAWA, TOSHIO MIYASE, AKIRA UENO, KHAN USMANGHANI JA MANSOOR AHMAD

Keskustutkimuslaboratoriot, Yomeishu Seizo Co., Ltd., 2132-37 Nakaminowa, Minowa-machi, Kamiina-gun, Nagano 399-46, Japani, Shizuoka College of Pharmacy,2-2-1 Oshika, Shizuoka-shi 422, Japani ja department of Farmakognosia, Farmasian tiedekunta, Yliopisto Karachi,c Karachi-32, Pakistan

Kontakti:joanna.jia@wecistanche.com

Abstrakti

Neljä uuttafenyylietanoidiGlykosidit, tubulosideissa A(II), B(VI), C(VII) ja D(VIII) on on eristettyCistanchetubulosa(SCHRENK) KOUKKU. f. (Orobanchaceae) yhdessä neljän kanssa tunnettufenyylietanoidiGlykosidit, ekinakosidi (I), akteosidi (III), akteosidi-isomeeri (IV) ja 2'- asetyyliasteosidi (V). II: n, VI: n, VII: n ja VIII: n rakenteet perustettiin kemiallisen perusteella todisteet ja spektritiedot. Yhdisteillä VII ja VIII on triasetyyliramnosyylilaji, joka terminaalinen sokeri.

Cistanchefenyylietanoidi glykosidiOn monia terveyshyötyjä

Avainsanat:Cistanchetubulosa;Orobanchaceae-kasvit; loiskasvi;fenyylietanoidi glykosidi; tubulosidi A; tubuloside B; tubulosidi C; tubulosidi D

Cistanche spp:n kemiallisia ainesosia koskevissa tutkimuksissamme. (Orobanchaceae),fenyylietanoidiglykosidit1-3) ja iridoidi4) Cistanche-salsasta (C. A. MEY.) G. BECK on raportoitu. Tässä artikkelissa käsitellään fenyylietanoidia Glykosidit Cistanche tubulosasta (SCHRENK) HOOK. f. kerätty Pakistanista. Cistanche tubulosa (SCHRENK) KOUKKU. f.5) on loiskasvi, joka kasvaa Salvadoran juurilla ja Calotropis spp., ja sitä esiintyy laajalti Pohjois-Afrikassa, Arabiassa, Länsi-Aasiassa Pakistaniin ja Intiaan. Koko kasvia käytetään Pakistanissa lääketieteellisesti ripulin ja haavaumien korjaamiseksi.6)

Haluamme nyt raportoida neljän uuden eristämisestä.fenyylietanoidiGlykosiditnimetty tubulosidit A (II), B (VI), C (VII) ja D (VIII) sekä neljä tunnettua fenyylietanoidia glykosidit, ekinakosidi (I), akteosidi (III), akteosidi-isomeeri (IV) ja 2'-asetyyliasoididi (V). Näiden yhdisteiden rakenteet määritettiin kemiallisten todisteiden perusteella ja spektroskooppiset tutkimukset.

FenyylietanoidiGlykosiditINcistanchevoi anti-inflammatorinen

Koko kasvin etanoliuute suspendoitiin veteen. Tämä keskeytys oli uutetaan etyyliasetaatilla ja sitten vedellä kyllästetyllä n-butanolilla. N-butanoli liukeneva fraktio kromatografioitiin polyamidi- ja silikageelikolonneilla ja altistettiin korkean suorituskyvyn nestekromatografia (HPLC) peräkkäin, jolloin saadaan kahdeksanfenyylietanoidiGlykosidit(I-VIII).

Yhdisteet I, III, IV ja V eristettiin amorfisina jauheina, jotka osoittivat samanlaisia spektrit echinakoside,1) akteoside,1) akteosidis-isomeeri7) ja 2'-asetyyliasteosidin spektreihin,2) vastaavasti, ja ne tunnistettiin vertaamalla niitä suoraan aitoihin näytteisiin [ohut kerros kromatografia (TLC), infrapuna (IR), protonin ydinmagneettinen resonanssi (1H-NMR) ja hiili-13 ydinmagneettinen resonanssi (13C-NMR) -spektrit].

Tubulosidi A (II) eristettiin amorfiseksi jauheeksi, [ƒ¿]D-103.7•‹ (MeOH), C37H48O21.3/2 H2O. IR-spektri ehdotti hydroksyyliryhmien (3440 cm-1), konjugoidun esterin (1705 cm-1), kaksoissidoksen (1634 cm-1) ja aromaattisten renkaiden läsnäoloa (1608, 1522 cm-1), ja ultraviolettispektri (UV) osoitti absorptiomaksimia 220: ssä, 250 sh, 292 sh ja 334 nm. II: n 1H-NMR-spektri osoitti signaaleja metyyliryhmästä rhamnoosi [6 1,07 (3H, d, J= 6 Hz)], asetoksyyliryhmän metyylisignaali [6 1,98 (3H, s)], bentsyylimetyleeniprotonit [6 2,70 (2H, t, J= 7 Hz)], kaksi glukoosi-anomeeristä protonia [6 4,32, 4,54 (kukin 1H, d, J= 8 Hz)], ramnoosi-anomeerinen protoni [6 5,11 (1H, br s)], kaksi trans olefiiniset protonit [6 6,25, 7,64 (kukin 1H, d, J= 16 Hz)] ja aromaattiset protonit [6 6,5 7 ,2 (6H)]. Asetyyliaatiossa II tarjosi underasetaattia (IIa), joka oli identtinen echinakosidin dodeka-asetaatin (I) kanssa. II: n 13C-NMR-spektri oli lähes identtinen I, lukuun ottamatta signaaleja, jotka johtuvat glukoosista, joka on sitoutunut suoraan aglykoniin ja asetoksyyliin ryhmä [6 20,9 (CH3), 171,5 (C =0)], mikä viittaa siihen, että asetoksyyliryhmä on kiinnittynyt glukoosin määrä. II:n 13C-NMR-spektrissä asylaatio siirtyy81 [-2,3 (C-1),-0,9 (C-2) ja-1,0 (C-3)] havaittiin sisäisen glukoosin C-1: ssä, C-2: ssa ja C-3: ssa yksityiskohtaisesti vertailu I:n spektriin, mikä osoittaa, että asetoksyyliryhmä on sidoksissa C-2:een glukoosilajin hydroksyyliryhmä II: ssa. II:n metanolyysissä asetyylikloridin kanssa metanoli, metyylikafeaatti ja 3,4-dihydroksifenetyylialkoholi havaittiin TLC:llä ja HPLC:tä. II: n happohydrolyysi 10%: n rikkihapolla tarjosi glukoosia ja ramnoosia suhteessa 2:sta 1:een.

Edellä mainittujen todisteiden perusteella tubulosidin A rakenne oli määritetty 2-(3,4-dihydroksifenyyli)etyyli-0-a-L-rhamnopyranosyyli-(1• ̈3)-[ƒÀ-D-glukopyranosyyli-(1-6)]-(4-O-caffeoy1)-2-O-asetyyli-fl-D-glukopyrranosidi (II).

Tubulosidi B (VI) eristettiin amorfiseksi jauheeksi, [a]D,- 39,0•‹ (MeOH), C31 H38016, jonka 1H-NMR-spektri osoitti alifaattisen asetoksyyliryhmän läsnäolon [6 1,98 (3H, s)]. VI:n 13C-NMR-spektri oli hyvin samanlainen kuin akteosidis-isomeerin (IV) spektri, mutta se poikkesi signaaleissa hieman glukoosin ja asetoksyylin läsnäolon vuoksi ryhmä [6 20,9 (CH3), 171,6 (C =0)]. Asetoksyyliryhmän sijainti glukoosilajissa VI: stä määritettiin sen 13C-NMR-spektristä vertaamalla sitä yksityiskohtaisesti IV: n spektriin.

Glukoosimäärän C-1: n, C-2: n ja C-3: n signaalit osoittivat asylaatiomuutoksia (-2,5 (C-1), -0 ,6 (C-2) ja-1,4 (C-3)], kuten II: n tapauksessa, mikä osoittaa, että asetoksiryhmä on yhteydessä VI: n glukoosiryhmän C-2 hydroksyyliryhmään. Asetylaatiossa VI tarjosi oktasetaatti (VIa), joka oli identtinen IV: n ei-asetaatin kanssa. VI: n metanolyysistä asetyylikloridin kanssa metanolissa, metyylikafeaatissa ja 3,4-dihydroksifenetyylialkoholissa olivat TLC:n ja HPLC:n havaitsema. VI:n happohydrolyysi 10-prosenttisella rikkihapolla tarjosi glukoosia ja ramnoosi suhteessa 1: 1. Nämä tulokset saivat meidät päättelemään, että tubulosidi B on 2-(3,4-dihydroksifenyyli)etyyli-0-a-L-rhamnopyranosyyli-(1-3)-(6-0-caffeoy1)- 2-0-ässä143-D-glukopyranosidi (VI).

Vaikuttava aineCistancheonsyövän vastainenvaikutus

Tubulosidi C (VII) eristettiin amorfisena jauheena, [a], -104.8•‹ (MeOH), C43H54024 H20, jonka 1H-NMR-spektri osoitti neljän alifaattisen asetoksyylin läsnäolon ryhmät [6 1,80, 1,92, 1,95 ja 2,08 (kukin 3H, s)]. VII: n C-NMR-spektri oli melkein identtinen tubulosidin A (II) kanssa, jolla on alifaattinen asetoksyyliryhmä sisäinen glukoosi, lukuun ottamatta rhamnoosin moietysta johtuvia signaaleja. Lisäksi VII: n 13CNMR-spektrissä havaittiin asylaatiosiirtymiä') C-2: n, C-3: n ja C-4: n aiheuttamissa signaaleissa rhamnoosin moietysta vertaamalla sitä yksityiskohtaisesti II: n tietoihin. Näin ollen neljän asetoksyyliryhmän sijainnit määritettiin sisäglukoosin C-2:ksi ja C-2:ksi, C-3, C-4 rhamnose-osasta VII: ssä. Asetyylioinnissa VII tarjosi oktasetaattia, joka oli identtinen tubulosidin A kanssa asetaatin (IIa) alla. VII: n metanolyysissä asetyylillä metanolissa, metyylikafeaatissa ja 3,4-dihydroksifenetyylialkoholissa oleva kloridi havaittiin TLC ja HPLC. VII: n happohydrolyysi 10%: lla rikkihapolla tarjosi glukoosia ja ramnoosi suhteessa 2: 1.

Edellä esitettyjen tulosten perusteella tubulosidi C:n rakenteeksi määritettiin 2-(3,4- dihydroksifenyyli)etyyli-2,3,4-tri-O-asetyyli-a-L-thamnopyranosyyli-(1 -+ 3)-[/9-D-glukopyranosyyli-(1 -+ 6)]-(4-0-caffeoy1)-2-0-asetyyli-fl-D-glukopyranosidi (VII).

Tubulosidi D (VIII) eristettiin amorfiseksi jauheeksi, [oc], -91,4° (MeOH), C43H54023. H2O, jonka 1H-NMR-spektri osoitti neljän alifaattisen asetoksyylin läsnäolon ryhmät [6 1,81, 1,93, 1,96 ja 2,09 (kukin 3H, s)]. Asetylaatiossa VIII tarjosi heptaasetaatti (VIIa), jonka 1H-NMR-spektri osoitti kahdeksan alifaattia [6 1,87, 1,94, 1,96, 1,99, 2,10 (kukin 3H, s) ja 2,02 (9H, s)] ja kolme aromaattista ainetta [6 2,27, 2,30 ja 2,32 (kukin 3H, s)] asetoksyylimetyylisignaalit. VIII: n 13C-NMR-spektri oli lähes identtinen tubulosidi C (VII), lukuun ottamatta p-kumariinihapon moietysta johtuvia signaaleja. Metanolyysistä VIII: sta asetyylikloridin kanssa metanolissa, metyyli-p-kumaraatissa ja 3,4-dihydroksifenetyylissä TLC ja HPLC havaitsivat alkoholia. VIII:n happohydrolyysi 10-prosenttisella rikkihapolla tarjosi glukoosia ja ramnoosia suhteessa 2: 1.

Näiden tulosten perusteella tubulosidi D:n rakenteeksi määritettiin 2-(3,4-dihydroksifenyyli)etyyli-2,3,4-tri-O-asetyyli-a-Lrhamnopyranosyyli-(1• ̈3)-[ƒÀ-D-glukopyranosy-](1→6)} (4-0-p-coumary1)-2-0-asetyyli-fl-D-glukopyrranosidi (VIII).

MontafenyylietanoidiGlykosiditkuten forsytoside A,'°) leukosseptosidi A,7 isomartynosidell) ja niin edelleen, ja niin edelleen, joilla on rhamnoosimoiety, koska terminaalisokeria on raportoitu. IN näissä tapauksissa ramnoosin moiety ei ole asetyylioitu. Tubulosidit C (VII) ja D (VIII) sisältävät asetyloitunut ramnoosiluku ja ovat ensimmäisiä luonnossa esiintyviä yhdisteitä, joilla on triasetyyliramnoosipitoisuus, joka on raportoitava.

Vaikuttava aineCistancheOnneuroprotektiivinenvaikutus

Kokeellinen

Sulamispisteet määritettiin Mitamuran mikrosulatuspistelaitteella ja ne ovat korjaamattomia. Optinen kierrosluvut mitattiin digitaalisella JASCO DIP-140 -polarimetrillä. IR-spektrit nauhoitettiin Hitachin kanssa 270-30 infrapunaspektrofotometri ja UV-spektrit Hitachi 200-20 -spektrometrillä. ' H-NMR ja 'C-N MR-spektrit tallennettiin JEOL FX-90Q -koneella (vastaavasti 89,55 ja 22,5 MHz). Kemialliset siirtymät annetaan 6: lle (ppm) asteikko, jonka sisäisenä standardina on tetrametyylisilaani (TMS) (s, singlet; d, doublet; t, triplet; br, leveä). Kaasu-nestekromatografia (GC) suoritettiin Shimadzu GC-4CM -laitteella, jossa oli liekki-ionisaatiodetektori. HPLC-koodi suoritettiin Hitachi 655A-11 -koneella. Silikageeliä (Wako-geeli C-300, Wako Pure Chemical) käytettiin kolonnikromatografia. KIEselgel 60 F254 (Merck) -esipinnoitettuja levyjä käytettiin TLC: hen ja havaitseminen kuljetettiin ulos ruiskuttamalla 10% H2SO4 ja sen jälkeen lämmitys.

Eristys

Tuoreet kokonaiset C. tubulosa -kasvit (22 kg), jotka kerättiin joulukuussa 1984 Karachissa, Pakistanissa, olivat uutettu EtOH: lla. Etanoliuute suspendoitiin H2O:ssa ja uutetaan EtOAc:lla ja sitten n-BuOH:lla kyllästetty H20: lla. N-BuOH-uute (99,1 g) imeytyi Diaion HP-20 (Nippon Rensui Co.) -kolonniin ja hartsi eluotiin Me0H:lla H20-pesun jälkeen. Me0H-eluaatti (15.4g) oli kromatografioitu a polyamidi C-200 (Wako Pure Chemical) -kolonni käyttäen H20: ta ja sitten Me0H: ta. Me0H:lla eluoitu fraktio oli konsentroidaan antamaan jäännös (fenoliset raakaglykosidit) (8,0 g). Jäännöksen toistuvan kromatografian jälkeen silikageeli, jossa on CHC13-Me0H-H20 (70: 30: 5) ja HPLC H2O-CH3CN- tai H2O-MeOH-liuotinjärjestelmällä, kahdeksan glykosidit (I---VIII) eristettiin. I, 230 mg; II, 200 mg; III, 240 mg; IV, 60 mg; V, 210 mg; VI, 100 mg; VII, 60 mg; VIII, 65 mg. HPLC: n ehdot: pylväs, Develosil ODS-10 (20 x 250 mm); liuotin, I, II (17 % CH3CN), III, IV (20% CH3CN), V (22% CH3CN), VI (25% CH3CN), VII (53% Me0H), VIII (55% Me0H); detektori (UV), 220 nm; virtausnopeus, 6,9 ml/min.

Echinacoside (I)

Amorfinen jauhe. IR 0,;,Eas,r, cm-1: 3400, 1690, 1625, 1600, 1518. 11-I-NMR (metanoli-d4) 6: 1,09 (3H, d, J= 6 Hz, CH3 ramnoosia), 2,79 (2H, t, J= 7 Hz, Ar-CH2-), 4,29, 4,37 (kukin 1H, d, J=8 Hz, H-1 glukoosi), 5,16 (1H, d, J=1 Hz, ramnoosin H-1), 6,26 (1H, d, J=16 Hz, Ar-CH=CH-), 6,4-7,1 (6H, aromaattinen H), 7,59 (1H, d, J=16 Hz, Ar-CH=CH-). 13C-NMR: Taulukko I.

Tubulosidi A (H)

Amorfinen jauhe, [a]3 -103,7 (c = 1,08, Me0H). Anaali. Calcd for C371-14021 3/2 H20: C, 51,93; H, 6.01. Löydetty: C, 51.80; H, 5.81. IR vrtr, cm': 3440, 1732, 1705, 1634, 1608, 1522. UV An?" nm (log e): 220 (4,14), 250 sh (3,85), 292 sh (3,95), 334 (4,13). 1H-NMR (metanoli-d4): katso teksti. 13C-NMR: Taulukko I.

Acteoside (III)

Amorfinen jauhe. IR v cm-1: 3420, 1696, 1634, 1606, 1520. 1H-NMR (metanoli-d4) 5: 1,10 (3H, d, J=6 Hz, CH3 ramnoosia), 2,78 (2H, t, J= 7 Hz, Ar-CH2-), 4,36 (1H, d, J= 8 Hz, H-1 glukoosia), 5,17 (1H, d, J=1 Hz, Rhamnoosin H-1), 6,25 (1H, d, J=16 Hz, Ar-CH =CH-), 6,4-7,1 (6H, aromaattinen H), 7,58 (1H, d, J=16 Hz, Ar-CH =CH-). 13C-NMR: Taulukko I.

Acteoside-isomeeri (IV)

Amorfinen jauhe. IR v cm-1: 3280, 1686, 1624, 1602, 1512. 11-I-NMR (metanoli-d4) 6: 1,26 (3H, d, J=6 Hz, CH3 ramnoosia), 2,77 (2H, t, J= 7 Hz, Ar-Cl.2-I.2 4,33 (3H, d, J=8 Hz, H-1 glukoosia), 5,18 (1H, br s, rhamnoosin H-1), 6,28 (1H, d, 1=16 Hz, Ar-CH =CH-), 6,4-7,1 (6H, aromaattinen H), 7,54 (1H, d, J=16 Hz, Ar-CH =CH-). 13C-NMR: Taulukko I.

2'-Asetyyliasteosidi (V)

Amorfinen jauhe. IR vT cm-1: 3450, 1735, 1705, 1640, 1610, 1535. 1H-NMR (metanoli-d4) 6: 1,07 (3H, d, 1= 6 Hz, CH3 ramnoosia), 1,99 (3H, s, OAc), 2,69 (2H, t, J=7 Hz, Ar-CH2-), 4,50 (1H, d, J=8 Hz, H-1 glukoosia), 5,16 (1H, br s, H-1 ramnoosia), 6,25 (1H, d, J=16 Hz, Ar-CH=CH-), 6,5-7,2 (6H, aromaattinen H), 7,59 (1H, d, J= 16 Hz, Ar-CH =CH-). 13C-NMR: Taulukko I.

Tubulosidit B (VI)

Amorfinen jauhe, [43 -39,0° (c= 1,05, Me0H). Peräaukon kalkinpoisto cm:lle H38016: C, 55,85; H, 5.75. Löydetty: C, 55.91; H, 6.00. IR v:,111 cm-1: 3420, 1734, 1696, 1634, 1608, 1522. UV 4ear nm (log e): 220 (4.32), 246 sh (4,09), 292 sh (4,21), 340 (4,31). 1H-NMR (metanoli-d4) 6: 1,24 (3H, d, J=6 Hz, CH3 ramnoosia), 1,98 (3H, s, OAc), 2,69 (2H, t, J= 7 Hz, Ar-CH2-), 4,48 (1H, d, J=8 Hz, H-1 glukoosia), 6,32 (1H, d, J=16 Hz, Ar-CH - CH-), 6,5-7,2 (6H, aromaattinen H), 7,61 (1H, d, J=16 Hz, Ar-CH =CH-). 13C-NMR: Taulukko I.

Tubulosidit C (VII)

Amorfinen jauhe, [a] - iO4,8© (c = 1,86, Me0H). Kalkki C43H54024 ' H20: lle: C, 53.08; H, 5.80. Löydetty: C, 53,28; H, 5.68. IR v. cm': 3440, 1748, 1634, 1608, 1522. UV 2" nm (log c): 220 sh (4,06), 250 sh (3,7), 292 sh (3,88), 333 (4,04). 1H-NMR (metanoli-d4) 6: 1,02 (3H, d, J=6 Hz, CH3 ramnoosia), 1,80, 1,92, 1,95, 2,08 (kukin 3H, s, OAc), 2,70 (2H, t, J=7 Hz, Ar-CH2-), 4,32, 4,56 (kukin 1H, d, J=8 Hz, H-1 glukoosi), 5,02 (1H, br s, rhamnoosin H-1), 6,30 (1H, d, J=16 Hz, Ar-CH =CH-), 6,5-7,2 (6H, aromaattinen H), 7,66 (1H, d, J=16 Hz, Ar-CH =CH-). 13C-NMR: Taulukko I.

Tubulosidi D (VIII)

Amorfinen jauhe, [a]P5 - 91,4° (c= 1,85, Me0H). Kalkki C43H54023 ' H20: lle: C, 54.00; H, 5.90. Löydetty: C, 54.10; H, 5.75. IR v:,111 cm-1: 3440, 1750, 1634, 1608, 1518. UV 2,',1,2" nm (log a): 228 (4,16), 292 sh (4,21), 302 sh (4,26), 318 (4,35). 11-I-NMR (metanoli-d4) 6: 1,00 (3H, d, J= 6 Hz, CH3 ramnoosia), 1,81, 1,93, 1,96, 2,09 (kukin 3H, s, OAc), 2,70 (2H, t, J=7 Hz, Ar-CH2-), 4,32, 4,53 (kukin 1H, d, J=8 Hz, H-1 glukoosi), 5,03 (1H, br s, rhamnoosin H-1), 6,38 (1H, d, J=16 Hz, Ar-CH =CH-), 6,52-6,75 (3H, aromaattinen H), 6,84 (2H, d, J= 9 Hz, H-3, H-3, P-kumariinihapon H-5), 7,54 (2H, d, J=9 Hz, H-2, P-kumariinihapon H-6), 7,74 (1H, d, J=16 Hz, Ar-CH =CH-). 13C-NMR: Taulukko I.

II:n ja VII:n asetyyliaatio

II: n tai VII: n (30 mg) käsittely Ac20: lla (1 ml) ja pyridiinillä (1 ml) huoneen päällä lämpötila yön yli, jota seurasi tavanomainen työ, joka tarjosi raaka-asetaataatin, joka puhdistettiin kromatografisesti silikageelillä bentseeniasetonilla (5: 1), jotta saadaan subasetaatti (IIa) (25 mg) II: sta tai oktasetaatista (22 mg) VII:stä, värittöminä neuloina Me0H:sta, mp 130-131 C. IR v cm': 1775, 1660, 1523, 1450. 1H-NMR (CDC13) 6: 1,05 (3H, d, J= 6 Hz, CH3 ramnoosia), 1,89, 1,96, 1,97, 2,01, 2,11 (kukin 3H, s, OAc), 2,03 (9H, s, OAc x 3), 2,29 (3H, s, Ar-OAc), 2,31 (9H, s, Ar-OAc x 3), 2,88 (2H, t, J= 7 Hz, Ar-CH2-), 6,35 (1H, d, J= 16 Hz, Ar-CH = CH-), 7,0-7,4 (6H, aromaattinen H), 7,66 (1H, d, J=16 Hz, Ar-CH =CH-). Näiden tuotteiden todettiin olevan identtinen echinakosidin (I) dodeka-asetaatin kanssa suoralla vertailulla (TLC, sekoitettu mp, IR ja 1H-NMR).

VI: n asetyyliointi

Yhdiste VI (40 mg) asetyloitiin samalla tavalla kuin II:lle ja reaktiotuote puhdistettiin kromatografisesti silikageelillä bentseeniasetonilla (9: 1) oktasetaatin aikaansaamiseksi (VIIa) (30 mg) amorfisena jauheena. IR v. cm': 1742, 1630, 1498. 1H-NMR (CDC13) 6: 1,14 (3H, d, J = 6 Hz, CH3 ramnoosia), 1,95, 2,03, 2,05, 2,09, 2,13 (kukin 3H, s, OAc), 2,27, 2,31 (kukin 6H, s, Ar-OAc x 2), 2,87 (2H, t, J=7 Hz, Ar-CH2-), 6,42 (1H, d, J=16 Hz, Ar-CH = CH-), 6,9-7,5 (6H, aromaattinen H), 7,64 (1H, d, J= 16 Hz, ArCH = CH-). VIa:n todettiin olevan identtinen akteosidi-isomeerin (IV) ei-asetaatin kanssa suorassa vertailussa (TLC, IR ja 11-1-NMR.

VIII: n asetyyliointi

Yhdiste VIII (35 mg) asetyloitiin samalla tavalla kuin II:lle on kuvattu, jotta saadaan heptasetaatti (VIIIa) (30 mg) amorfisena jauheena. IR v cm': 1760, 1638, 1604, 1510. 1H-NMR (CDC13) 6: 1,03 (3H; d, J= 6 Hz, ch3 ramnoosia), 1,87, 1,94, 1,96, 1,99, 2,10 (kukin 3H, s, OAc), 2,02 (9H, s, OAc x 3), 2,27, 2,30, 2,32 (kukin 3H, s, Ar-OAc), 2,88 (2H, t, J=7 Hz, Ar-CH2-), 6,36 (1H, d, J=16 Hz, Ar-CH =CH-), 7,0-7,2(3H, aromaattinen H), 7,25 (2H, d, J=9 Hz, H-3, H-5 p-kumariinihappoa), 7,57 (2H, d, J=9 Hz, H-2, H-6 p-kumararihappoa happo), 7,72 (1H, d, J= 16 Hz, Ar-CH =CH-).

II: n, VI: n, VII: n ja VIII: n metanolyysi

Yhdiste II, VI, VII tai VIII (n. 1 mg) refluksittiin metanolisella 5% CH3COCl (2 ml) 30 minuutin ajan, ja sitten reagenssit haihdutettiin pois. Metyylikafeaatin ja 3,4- dihydroksifenetyylialkoholi II:n, VI:n ja VII:n jäännöksessä sekä metyyli-p-kumaraatti ja 3,4-dihydroksifenetyyli VIII: n alkoholi osoitti TLC [CHC13-MeOH (20: 1)] ja HPLC [sarake, TSK GEL LS-410AK (4 x 300 mm); liuotin, H20-Me0H (4: 6); detektori (UV), 250 nm; virtausnopeus, 1,0 ml/min]. Metyylikafeaatti [R•¬ 0,20, tR (min) 10,8], metyyli-p-kumaraatti [R•¬ 0,40, tR (min) 15,6], 3,4-dihydroksifenetyylialkoholi [R•¬ 0,06, tR (min) 2,8].

II: n, VI: n, VII: n ja VIII: n happohydrolyysi

Glykosidiliuos (n. 2 mg) 10-prosenttisessa H2SO4:ssä (1 ml) kuumennettiin kiehuvassa vesihauteessa 30 minuutin ajan. Liuos johdettiin Amberlite IR-45 -pylvään läpi ja eluaatti oli konsentroidaan antamaan jäännös, jota vähennettiin natriumborohydridillä (n. 3 mg) 1 tunnin ajan. Reaktioseos johdettiin Amberlite IR-120 -pylvään läpi ja tiivistettiin kuivuuteen. Boorihappo poistettiin tislaamalla MeOH:n kanssa ja jäännös asetyloitiin Ac2O:lla (1 tippa) ja pyridiinillä (1 tippa) 100•Ž:ssa 1 tunnin ajan. Reagenssit haihdutettiin pois. Glusitoliasetaatti ja ramnitoliasetaatti havaittiin suhteessa 2: 1 II: sta, VII: stä ja VIII: sta, ja 1-1 VI: stä GC: llä. tR (min): 2,0 (ramnitoliasetaatti), 5,5 (glusitoliasetaatti). GC:n ehdot: sarake, 1,5 % OV-17 (3 mm x 1,5 m); sarake temp., 180•Ž; kantokaasu, N2 (30 ml/min).

Tunnustus

Olemme kiitollisia professori dr. S. I. Alille, kasvitieteen laitokselle, Karachin yliopistolle, siitä, että hänen tunnistamisensa laitoksesta.

Viitteet ja huomautukset

1) H. Kobayashi, H. Karasawa, T. Miyase ja S. Fukushima, Chem. Pharm. Bull., 32, 3009 (1984).

2) H. Kobayashi, H. Karasawa, T. Miyase ja S. Fukushima, Chem. Pharm. Bull., 32, 3880 (1984).

3) a) H. Kobayashi, H. Karasawa, T. Miyase ja S. Fukushima, Chem. Pharm. Bull., 33, 1452 (1985); b) H. Karasawa, H. Kobayashi, N. Takizawa, T. Miyase ja S. Fukushima, Yakugaku Zasshi, 106, 562 (1986); c) Idem, ibid., 106, 721 (1986).

4) a) H. Kobayashi ja J. Komatsu, Yakugaku Zasshi, 103, 508 (1983); b) H. Kobayashi, H. Karasawa, T. Miyase, ja S. Fukushima, Chem. Pharm. Bull., 32, 1729 (1984); c) Idem, ibid., 33, 3645 (1985).

5) E. Nasir ja S. I. Ali, "Länsi -Pakistanin kasvisto", osa 98, Shamin Printing Press, Karachi, 1976, s. 4.

6) S. R. Baquar ja M. Tasnif, "Etelä-Länsi-Pakistanin lääkekasvit", osa 3, Pakistanin neuvosto Tieteellinen ja teollinen tutkimustiedote/monografia, Karachi, 1967, s. 56.

7) T. Miyase, A. Koizumi, A. Ueno, T. Noro, M. Kuroyanagi, S. Fukushima, Y. Akiyama ja T. Takemoto, Chem. Pharm. Bull., 30, 2732 (1982).

8) K. Yoshimoto, Y. Itatani ja Y. Tsuda, Chem. Pharm. Bull., 28, 2065 (1980).

9) I. Kitagawa, H. K. Wang, M. Saito, A. Takagi ja M. Yoshikawa, Chem. Pharm. Bull., 31, 698 (1983).

10) K. Endo, K. Takahashi, T. Abe ja H. Hikino, Heterocycles, 16, 1311 (1981). 11) I. Calis, M. F. Lahloub, E. Rogenmoser ja O. Sticher, Fytokemia, 23, 2313 (1984).