Virtsan aineenvaihdunta paljastaa epänormaalin toipumisen maksimaalisen rasituksen jälkeen naispuolisilla ME/CFS-potilailla, osa 3

Miksi olemme väsyneitä? Miten voimme ratkaista väsymysongelmat?

【Ota yhteyttä】Sähköposti: george.deng@wecistanche.com / WhatsApp:008613632399501/Wechat:13632399501

3. Keskustelu

Tämä on ensimmäinen kerta, kun ME/CFS-potilaiden virtsan metabolomia on karakterisoitu ennen ja jälkeen rasitushaasteen, kun ME/CFS-potilailla on PEM. Monia näistä metaboliiteista ei ole koskaan aiemmin mitattu ME/CFS-potilailla, koska aiemmat virtsan metabolomiikkatutkimukset ME/CFS-potilailla on rajoitettu alle 50:een metaboliittiin ja nykyisessä tutkimuksessa mitattiin 1403. Lisäksi istuvan terveiden kontrollien käyttö huomioimaan fyysisen aktiivisuuden tasot, jotka voivat vaikuttaa lähtötilanteeseen ja harjoituksen jälkeiseen metaboliittitasoon, on nykyisen tutkimussuunnitelman keskeinen etu, jota ei ole käytetty aiemmissa tutkimuksissa. Tuloksemme osoittivat laajalle levinnyt aineenvaihduntatuotteiden pitoisuuden nousu verrokkien virtsassa 24 tuntia harjoituksen jälkeen, mitä ei havaittu ME/CFS-potilailla, ja 110:llä näistä yhdisteistä oli merkittävä vuorovaikutus sairauden tilan (ME/CFS tai kontrolli) välillä. ) ja aika (perustila vs. harjoituksen jälkeinen) (lisäkuva S2). Lukuisten virtsan metaboliittitasojen analyysien lisäksi virtsan ja plasman metaboliittitasojen korrelaatio toi lisätodisteita aineenvaihdunnan häiriöistä ME/CFS-potilailla harjoituksen jälkeen. Tämä analyysi tarjosi lisätodisteita patofysiologisista muutoksista useissa osareiteissä sekä todisteita eroista muissa osareiteissä, joilla ei ollut monia merkittäviä eroja ME/CFS-potilaiden ja kontrollien välillä, kun tarkastellaan virtsan metaboliittitasoja erikseen.

Cistanche voi toimia väsymystä ja kestävyyttä lisäävänä aineena, ja kokeelliset tutkimukset ovat osoittaneet, että Cistanche tubulosan keite voi tehokkaasti suojata maksan maksasoluja ja endoteelisoluja, jotka ovat vaurioituneet painoa kantavissa uimahiirissä, säätelemään NOS3:n ekspressiota ja edistämään maksan glykogeenia. synteesiä, jolloin se tehostaa väsymystä. Fenyylietanoli-glykosideja sisältävä Cistanche tubulosa -uute voi merkittävästi vähentää seerumin kreatiinikinaasi-, laktaattidehydrogenaasi- ja laktaattitasoja ja lisätä hemoglobiini- (HB)- ja glukoositasoja ICR-hiirillä, ja tällä voi olla väsymystä ehkäisevä rooli vähentämällä lihasvaurioita. ja maitohapon rikastamisen viivyttäminen energian varastointia varten hiirillä. Yhdiste Cistanche Tubulosa Tablets pidensi merkittävästi painoa kantavaa uintiaikaa, lisäsi maksan glykogeenivarastoa ja alensi seerumin ureatasoa harjoituksen jälkeen hiirillä, mikä osoittaa sen väsymystä ehkäisevän vaikutuksen. Cistanchis-keite voi parantaa hiirten kestävyyttä ja nopeuttaa väsymyksen poistumista harjoitushiirissä, ja se voi myös vähentää seerumin kreatiinikinaasin nousua rasituksen jälkeen ja pitää hiirten luustolihasten ultrarakenteen normaalina harjoituksen jälkeen, mikä viittaa siihen, että sillä on vaikutuksia. fyysisen voiman lisäämiseen ja väsymyksen torjuntaan. Cistanchis myös pidensi merkittävästi nitriitimyrkytettyjen hiirten eloonjäämisaikaa ja paransi sietokykyä hypoksiaa ja väsymystä vastaan.

Napsauta väsymyksen tunnetta koko ajan

3.1. Vertailu aiempiin virtsan metaboliatutkimuksiin ME/CFS-potilailla

Kaiken kaikkiaan tuloksemme eivät ole yhdenmukaisia ​​muutamien aikaisempien tutkimusten kanssa, joissa mitattiin virtsan metaboliitteja ME/CFS-potilailla verrattuna kontrolliin ei-ME/CFS-potilaisiin. Vertaaksemme tuloksiamme paremmin aikaisempiin tutkimuksiin, joissa mitattiin vähemmän metaboliitteja, verrasimme lähtötilanteen tuloksia p < 0.05 LMM:ssä aikaisempiin tutkimuksiin. Ainoa yhdiste, jonka todettiin merkitseväksi toisessa ja meidän tutkimuksessamme, oli alaniini, vaikka edellisessä tutkimuksessa alaniinin todettiin olevan pienempi naispotilailla kuin kontrolleilla (BH-säätö p-arvo < 0,05) ja tutkimuksessamme keskimääräinen normalisoitu pitoisuus oli korkeampi ME/CFS-potilailla kuin kontrolleilla [20]. Useissa tutkimuksissa havaittiin kuitenkin lähtötilanteessa eroja yhdisteissä, joiden havaitsimme muuttuvan eri tavalla ME/CFS-potilailla ja verrokkeilla harjoituksen palautumisen aikana, mukaan lukien fenyylialaniini (alempi ME/CFS-potilailla [23,24]) ja valiinissa (alempi ME/CFS-potilaat [20]). Sekä fenyylialaniinin että valiinin määrä lisääntyi merkittävästi myös istumiskontrollissa tämän tutkimuksen jälkeen, joten on mahdollista, että muiden tutkimusten kontrollit olivat aktiivisempia ja niillä oli jo korkeammat virtsan fenyylialaniinitasot. Muihin tutkimuksiin ei erityisesti palkattu istuvia ei-ME/CFS-henkilöitä, vaikka yksi tutkimus pyrkikin vastaamaan "yleistä elämäntapaa" [23]. Armstrong et ai. tarkasteli Pearsonin korrelaatioita virtsan ja plasman metaboliittien välillä ME/CFS-potilailla ja verrokeilla lähtötilanteessa ja havaitsi eroja asetaatissa, laktaatissa ja fenyylialaniinissa kynnysarvolla |R| > 0,4 ​​kummassakin ryhmässä [20]. Asetaatti on liian pientä havaittavaksi määrityksessämme, emmekä havainneet eroja plasman ja virtsan korrelaatioissa laktaatin tai fenyylialaniinin suhteen.

McGregor ja kollegat tutkivat myös muutoksia virtsan ja plasman metabolomeissa ME/CFS-potilailla, joilla oli PEM [19]. He käyttivät kyselyä erottaakseen ME/CFS-potilaat, joilla oli tällä hetkellä PEM viimeisten seitsemän päivän aikana, ja havaitsivat, että kahdeksalla kolmestakymmenestä mitatusta virtsan metaboliitista oli merkittävästi alhaisemmat pitoisuudet ME/CFS-ryhmässä verrokkeihin verrattuna. Näistä vain seriinillä oli merkittäviä eroja analyyseissämme; se kasvoi harjoituksen jälkeen kontrolliryhmässä (Supplementary Data File S2 – LMM Results). Kahden virtsan metaboliitin, asetaatin ja metyylihistidiinin, tasot olivat myös merkitsevästi erilaiset PEM-ryhmässä ja ei-PEM-ryhmässä [19]. Tässä tutkimuksessa määritettyjen metyylihistidiinien tasot eivät eronneet merkittävästi LMM-analyysissä, mutta havaitsimme eroja 1-metyylihistidiinin ja N-asetyyli-3-metyylihistidiinin plasman ja virtsan korrelaatioissa (kuva 9). McGregor et ai. havaitsivat myös yhteyksiä seitsemän päivän PEM-pisteisiin useiden plasman ja virtsan metaboliittien kanssa [19].

3.2. Harjoittelun jälkeinen virtsan aineenvaihduntatasojen nousu istuma-asteen hallinnassa on yhdenmukainen aiempien tutkimusten kanssa

Naisten virtsan metabolomia 24 tuntia harjoituksen jälkeen ei ole kuvattu hyvin. Tietojemme mukaan missään tutkimuksessa ei ole mitattu virtsan aineenvaihduntaa lähtötilanteessa verrattuna naisilla 24 tuntia harjoituksen jälkeen. Yhdessä tutkimuksessa mitattiin 32 metaboliittia virtsasta ennen harjoittelua ja 24 tuntia harjoituksen jälkeen miehillä, ja verrattiin yhdeksää kilpailevaa pyöräilijää kahdeksaan terveeseen, mutta kouluttamattomaan samanikäiseen mieheen (50–60-vuotiaat) [48]. Vaikka heidän tutkimuksessaan keskityttiin vertaamaan urheilijoita kouluttamattomiin koehenkilöihin, he näkivät, että kontrollihenkilöiden laktaatti-, asetaatti- ja hypoksantiinipitoisuudet lisääntyivät harjoituksen jälkeen voimakkaammin (merkittävämmin kuin kaksinkertaisesti). Asetaattia ei mitattu tutkimuksessamme, eikä laktaatti tai hypoksantiini eronnut lähtötasosta harjoituksen jälkeen naispuolisessa kontrolliryhmässämme. Mukherjee et ai. havaitsivat merkittäviä eroja urheilija- ja kontrolliryhmien välillä kahdeksassa mitatussa metaboliitissa, jotka liittyivät useisiin biokemiallisiin reitteihin [48]. Siksi nykyisen tutkimuksen vahvuus on istuvien terveiden kontrollien valinta verrattuna aktiivisempiin yksilöihin, joilla voi olla muuttunut virtsan aineenvaihdunta säännöllisen harjoituksen vuoksi.

Vaikka virtsan metabolomista 24 tuntia harjoituksen jälkeen on niukasti julkaistua kirjallisuutta, on olemassa useita tutkimuksia, joissa mitataan virtsan metaboliitteja sekä miehillä että naisilla aikaisemmilla harjoituksen jälkeisillä aikapisteillä (katso [49]). Yksi havainnoista, joka oli johdonmukainen tutkimusten välillä, on, että useimpien lipidien pitoisuus kasvaa bionesteissä harjoituksen jälkeen, myös virtsassa. Erityisesti asyylikarnitiinipitoisuuksien on osoitettu nousevan veressä ja virtsassa vasteena harjoitukselle. Tämä on yhdenmukainen tutkimuksemme tulosten kanssa, jossa useiden asyylikarnitiiniyhdisteiden määrä lisääntyi merkittävästi harjoituksen jälkeen kontrollien virtsassa (kuvio 7A).

Suurimmassa tutkimuksessa, johon osallistui naisia ​​(yhteensä 255 koehenkilöä, 107 naista), havaittiin myös laajoja metabolisia muutoksia virtsassa harjoituksen jälkeen. 37 mitatusta metaboliitista 47:stä muuttui merkittävästi FDR-korjauksen jälkeen, ja 33:lla niistä lisääntyi harjoituksen jälkeen [50] . Tämä on yhdenmukainen havaintomme kanssa laajamittaisesta aineenvaihdunnan muutoksesta harjoituksen jälkeen kontrollihenkilöiden virtsassa, ja suurimman osan muunnetuista yhdisteistä havaittiin kohonneen pitoisuudet. Tässä tutkimuksessa saatiin myös päätökseen sukupuolijaostettu vertaileva analyysi, mutta löydettiin vain kaksi metaboliittia, joilla oli merkittävästi erilaiset harjoituksen jälkeiset/perustilanteen suhteet naisilla ja miehillä.

Julkaisussa Schranner et ai. Tarkastelun perusteella havainnot aminohapoista eivät ole yhtä yhdenmukaisia ​​kuin lipideistä saadut havainnot, jotka yleensä lisäävät harjoituksen jälkeen [49]. Jotkin virtsassa havaitut löydökset olivat kuitenkin yhdenmukaisia ​​ainakin kahdessa tutkimuksessa (vaikka kaikki harjoituksen jälkeiset ajankohdat on yhdistetty), mukaan lukien se, että seuraavat yhdisteet lisääntyivät virtsassa harjoituksen jälkeen: alaniini, O-asetyylihomoseriini, 5- hydroksi-indolipyruvaatti, ksanturenaatti, L-metanefriini, N-asetyylivanilalaniini ja N-(karboksietyyli)arginiini. Seuraavien yhdisteiden todettiin vähentyneen virtsassa harjoituksen jälkeen ainakin kahdessa tutkimuksessa: glysiini, histidiini, trimetyyliamiini-n-oksidi. Kun näitä tuloksia verrataan tutkimukseemme, suurin osa metaboliiteista ei joko ollut merkittävästi erilaisia ​​ennen harjoittelua ja sen jälkeen tai niitä ei mitattu tutkimuksessamme. Havaitsimme kuitenkin myös merkittävän kohoamisen alaniinitasoissa kontrolleissa, mikä on yhdenmukaista tarkasteltujen tutkimusten kanssa. Tutkimuksessamme glysiinitasot nousivat myös harjoituksen jälkeen kontrolleissa sen sijaan, että ne laskivat. Kuitenkin Kistner et ai. Tutkimus, johon osallistui monia naisia, havaitsi myös glysiinipitoisuuksien nousseen merkittävästi harjoituksen jälkeen [50].

3.3. Erot istumiskontrollien ja ME/CFS-potilaiden välillä lipidien superpolussa

Monet lipidien alareitit olivat merkittävästi erilaisia ​​​​potilaiden ja kontrollien virtsassa tässä tutkimuksessa, mukaan lukien asyylikarnitiinin rasvahappometabolia. Asyylikarnitiinin metaboliitit lisääntyivät harjoituksen jälkeen virtsassa terveillä kontrolleilla, ja liikunnan aiheuttamat muutokset olivat merkitsevästi erilaisia ​​kontrollien ja ME/CFS-potilaiden välillä (kuvat 3, 7 ja S4). Lisäksi, vaikka deoksikarnitiini ei ole asyylikarnitiini, karnitiinin aineenvaihdunnan lipidialareitissä korreloi plasman ja virtsan välillä eri tavalla ME/CFS-potilailla verrattuna kontrolleihin (kuvio 9). Asyylikarnitiinit ovat erittäin tärkeitä energia-aineenvaihdunnassa, koska niitä tarvitaan kuljettamaan rasvahappoja mitokondrioihin hapettumista varten. Pitkäketjuinen rasvahappohapetus on ensisijainen energia-aineenvaihdunnan muoto aerobisen harjoituksen aikana. Rasituksen aikana häiriintynyt asyylikarnitiinin aineenvaihdunta voi myötävaikuttaa rasitusintoleranssiin ja PEM:iin ME/CFS-potilailla. Eräässä toisessa tutkimuksessa, jossa tarkasteltiin vain koehenkilöitä lähtötilanteessa ja johon ei erityisesti palkattu istuvia kontrolleja, asyylikarnitiinin alareitti havaittiin merkitsevästi erilaiseksi ME/CFS-potilailla verrattuna kontrolleihin, ja viidellä kahdeksasta yhdisteestä havaittiin olevan alhaisempi pitoisuus potilailla. [11]. Kun vain lähtötilanteen koehenkilöitä analysoitiin, seerumin asyylikarnitiinin spesifiset mittaukset osoittivat, että yhdiste oli alhaisempi ME/CFS-potilailla kuin kontrollit yhdessä raportissa [51], mutta toisessa tutkimuksessa ei havaittu eroja virtsan tai plasman tasoissa [52]. Suuremman kohortin plasmassa, josta tämän tutkimuksen kohteet ovat osajoukkoa, karnitiinin kemiallinen klusteri muuttui myös merkittävästi istuvat kontrollit toipumisen aikana (määritelty erona 24 tunnin harjoituksen ja 15 minuutin välillä harjoituksen jälkeen) ), kun suurin osa yhdisteistä lisääntyy harjoituksen jälkeen [25]. Karnitiinin kemikaaliklusterin ei havaittu muuttuneen merkittävästi harjoituksen palautumisen aikana ME/CFS-potilailla. Vaikka tämä klusteri sisältää enemmän kuin vain asyylikarnitiineja, asyylikarnitiinit ovat jäseniä ja edistävät sen merkitystä kemiallisen samankaltaisuuden rikastusanalyysissä myös nykyisessä tutkimuksessa (lisäkuva S4). Ex vivo on myös osoitettu, että palmitoyylikarnitiini, joka lisääntyy lihaksissa ohimenevästi harjoituksen jälkeen, voi toimia rasitussignaalina lihaksesta hermosolujen alajoukolle [53].

Asyyliglysiinirasvahappometaboliitit ovat ainoita yhdisteitä, joita löydettiin virtsasta merkittävästi erilaisina pitoisuuksina ME/CFS:ssä verrattuna kontrolliin yhdellä hetkellä (24 tuntia harjoituksen jälkeen) ja eri asyyliglysiiniyhdiste, 3-hydroksibutyroyyliglysiini , oli merkittävä negatiivinen korrelaatio ME/CFS-potilailla, kun se korreloi U3/U1:tä P3/P1:n kanssa (kuviot 5 ja 9). Lisäksi cis-3,4-metyleeniheptanoyyliglysiini muuttui eri tavalla harjoituksen palautumisen aikana ME/CFS-potilailla verrattuna kontrolliin (LMM, täydentävä kuva S2). Vaikka asyyliglysiinin aineenvaihdunta ei ole yksi niistä osareiteistä, jotka lisääntyivät merkittävästi harjoituksen jälkeen pelkästään kontrolleilla, se oli merkittävästi erilainen ME/CFS-potilailla verrattuna kontrolleihin sekä 24 tuntia harjoituksen jälkeen että eroa analysoitaessa. harjoituksen jälkeisissä/perustason suhteissa (kuva 3). Tiettyjen asyyliglysiinien erittymistä virtsaan muuttavat myös häiriöt, jotka liittyvät rasvahappojen hapettumiseen mitokondrioissa, mukaan lukien keskipitkäketjuisen asyylikoentsyymi A (CoA) dehydrogenaasin (MCAD) puutos [54]. Ryhmämme on havainnut, että rasvahappojen hapettuminen eroaa immuunisoluissa ME/CFS-potilaista verrattuna kontrolliin [55].

3.4. Erot istumiskontrollien ja ME/CFS-potilaiden välillä aminohappojen superpolussa

Löysimme myös monia eroja virtsan aminohapoissa ME/CFS-potilailla ja kontrolleissa harjoituksen jälkeen. Kaksi näistä reiteistä erottui, koska niissä oli merkittäviä muutoksia ME/CFS-potilaissa verrattuna kontrolliin kaikissa analyyseissämme, mukaan lukien KEGG-reittianalyysi, ja niitä käsitellään tarkemmin alla.

Maksan ureakierto on tärkeä osa harjoituksen aineenvaihduntaa, koska sitä tarvitaan poistamaan korkeat ammoniakkipitoisuudet, joita harjoituksen aikana syntyy [56,57]. Germain ja kollegat havaitsivat myös, että ureasykli ja ammoniakin kierrätyksen SMPDB-reitit muuttuivat merkittävästi plasmassa ME/CFS-naispotilaiden ja kontrollien välillä reittianalyysissä, kun verrattiin metaboliittitasojen välistä eroa 24 tunnin kuluttua CPET:stä (P3) ja 15 minuuttia CPET:n jälkeen (P2) [25]. Ammoniakin kertyminen on aiemmin liitetty hermotoksisuuteen ja harjoituksen aiheuttamaan väsymykseen [56,57]. Virtsan ureakierron ja plasman metabolomien säätelyn epäsäännöllisyys harjoituksen jälkeen ME/CFS-potilailla saattaa aiheuttaa ammoniakin kertymistä, mutta Metabolon®:n virtsasta mittaamat 1403 yhdistettä eivät sisältäneet ammoniakkia, koska se on haihtuva yhdiste ja myös pienempi kuin Metabolon®-alustan havaitsemisraja.

Kysteiini, metioniini, SAM ja tauriini ovat tärkeitä aminohappoja, koska ne ovat ainoita, jotka sisältävät rikkiä, ja kysteiinillä on ainutlaatuinen kyky muodostaa disulfidisidoksia. Kysteiini voidaan myös muuttaa glutationiksi ja tauriiniksi. Kysteiinillä ja metioniinilla on lukuisia rooleja solujen aineenvaihdunnassa, mutta ne ovat myös keskeisiä proteiinien rakennuspalikoita [37]. Tioliryhmänsä ansiosta kysteiini osallistuu monien entsymaattisten reaktioiden katalysoimiseen ja redox-homeostaasin ylläpitämiseen. Muutoksia kysteiinin aineenvaihdunnassa esiintyy monissa hermoston rappeutumissairauksissa, mukaan lukien Alzheimerin tauti, Huntingtonin tauti ja Parkinsonin tauti [58]. Vaikka kysteiinin, metioniinin, SAM:n ja tauriinin aineenvaihdunta osoitti monia eroja potilaiden ja kontrollien välillä virtsan metabolomianalyyseissämme, virtsan ja plasman korrelaatiot paljastivat lisäyhdisteitä, joilla oli merkittäviä eroja ME/CFS-potilaiden ja kontrollien välillä, mukaan lukien kysteiini, joka on syntyy, kun kaksi kysteiiniä hapetetaan muodostaen disulfidisidoksen, ja kystationiini, joka on välituote kysteiinin tuotannossa metioniinikierrossa [37].

3.5. Rajoitukset

Tutkimuksemme sisältää useita tärkeitä rajoituksia. Ensinnäkin koehenkilöiden ruokavaliota ei valvottu, ja aineenvaihduntatuotteiden saanti ruokavaliosta voi vaikuttaa niiden erittymiseen virtsaan. Toiseksi myönnämme, että BMI-sovituksen puute ei ole ihanteellinen ja se on tämän tutkimuksen rajoitus. Suurempi ryhmämme ME/CFS-potilaita ja terveitä istuvia kontrolleja on BMI-sovitettu, joten jos tätä pilottitutkimusta laajennetaan, tämä ei ole ongelma tulevaisuudessa. Kolmanneksi, tuloksemme rajoittuvat naispuolisiin ME/CFS-potilaisiin. Vaikka on erittäin tärkeää tutkia molempia sukupuolia ME/CFS:ssä ja sukupuolten patofysiologiassa havaitaan yhä enemmän eroja [25,59,60], päätimme keskittyä pilottitutkimuksemme naisiin ME:n suuremman sairaustaakan vuoksi. /CFS naisilla (60–65 % naisilla) [2]. Lisäksi, koska saimme virtsan metabolomin vain kahdessa ajankohtana, lähtötilanteessa ja 24 tuntia harjoituksen jälkeen, emme voi sanoa, ovatko ME/CFS-potilaat muuttaneet joidenkin näiden metaboliittien erittymistasoja joko aikaisemmin tai myöhemmin. pistettä kuin säätimet. Näitä erittymistuotteiden lisääntymistä saattaa tapahtua potilailla, mutta suuremmalla viiveellä, samalla tavalla kuin ME/CFS-potilaiden yleinen palautuminen harjoitteluun viivästyy. On kuitenkin myös mahdollista, että tämä muuttuneen metabolisen erittymisen puute on osa terveen metabolisen vasteen yleistä puutetta harjoitteluun.

4. Materiaalit ja menetelmät

4.1. Opiskeluaineet

Tähän tutkimukseen osallistui kahdeksan tervettä istuvaa kontrollia ja kymmenen ME/CFS-potilasta. ME/CFS-potilailla diagnosoitiin Canadian Consensus Criteria [3]. Tässä tutkimuksessa mukana olleet 18 kohorttia kuuluivat 173 osallistujan suureen kohorttiin (ClinicalTrials.gov Identifier: NCT04026425) [61]. Tässä pilottitutkimuksessa kaikki mukana olevat kohteet olivat naisia. Koehenkilöt rekrytoitiin seuraavilla kriteereillä. Kaikkien osallistujien tulee olla 18–70-vuotiaita. Koehenkilöt suljettiin pois kummastakaan ryhmästä, jos he olivat tupakoitsija, raskaana tai imettävät, olivat diabeetikkoja, käyttivät liikaa alkoholia tai heillä oli ortopedinen rajoitus, joka esti heitä tekemästä CPET:tä. Skitsofrenian, vakavan masennushäiriön, kaksisuuntaisen mielialahäiriön tai ahdistuneisuushäiriön diagnoosit olivat myös poissulkemiskriteereitä molemmissa ryhmissä. Lisäksi terveet istuvat kontrollit suljettiin pois, jos heillä oli diagnosoitu autoimmuunisairaus. Munuaisten toiminta oli normaali kaikilla tämän tutkimuksen koehenkilöillä, mikä arvioitiin seuraavilla Quest Diagnostics -standardilaboratorioverikokeilla: seerumin kreatiniini, veren ureatyppi ja arvioitu glomerulussuodatusnopeus (eGFR).

Seitsemäntoista koehenkilöä suoritti harjoitustestin Ithaca Collegessa Ithacassa, New Yorkissa, ja yksi koehenkilö suoritti harjoitustestin ID Medissä Torrancessa, Kaliforniassa. Kaikkia osallistujia pyydettiin lopettamaan ravintolisien, mukaan lukien probioottien, käyttö kahdeksi viikoksi ennen harjoitustestiä. Osallistujia pyydettiin lopettamaan kipu- ja stimulanttilääkkeet kahdeksi päiväksi ennen rasitustestiä. Kaikki potilaat antoivat kirjallisen suostumuksensa, ja Ithaca Collegen IRB #1017-12Dx2 hyväksyi kaikki protokollat. Kaikki osallistujat täyttivät Bell Disability Scale [26], Short Form-36 terveyskyselyn [62] ja mukautetut kyselylomakkeet. ME/CFS-potilaat täydensivät lisäksi moniulotteisen väsymyskartoituksen [63].

4.2. Kardiopulmonaaliharjoitustesti ja virtsanäytteiden kerääminen

CPET suoritettiin kiinteällä sykliergometrillä seuraavalla protokollalla: 3 min lepoa, jota seurasi jatkuva pyöräily, jossa inkrementaalinen työkuorma kasvaa 15 wattia/minuutti harjoittelussa tahdonvoimaiseen uupumukseen asti (n. 8-10 min). Hengityksen vaihtosuhde (RER), joka on hiilidioksidin tuotannon nopeus jaettuna hapenkulutusnopeudella, mitattiin sen varmistamiseksi, että osallistujat suorittivat testin riittävällä vaivalla (RER > 1,1 tarkoittaa maksimaalista ponnistusta).

Kaikki virtsanäytteet otettiin aamulla: (1) 15–20 min ennen CPET:tä ja (2) 24 h myöhemmin. Virtsa kerättiin kesken virran steriileihin virtsankerääjiin, jaettiin eriin, sentrifugoitiin nopeudella 10,000 × g 10 minuuttia solujätteen poistamiseksi ja säilytettiin -80 ◦C:ssa. Virtsanäytteille tehtiin yksi jäädytys/sulatussykli lisäeriin jakamista varten ja erät lähetettiin yön yli Metabolon®iin kuivajäällä.

4.3. Metabolomics Assay

Metaboliitit mitattiin käyttämällä Precision Metabolomics™ nestekromatografia-tandem-massaspektrometria (LC-MS/MS) globaalia metabolomiikan alustaa Metabolonissa®. Yksityiskohtaiset menetelmät on kuvattu aiemmin [64]. Lyhyesti sanottuna näytteet uutettiin metanoliin (5:1 metanoli: näyte) ja sitten haihdutettiin. Metaboliitit havaittiin kussakin näytteessä käyttämällä neljää erilaista LC-MS/MS-alustaa, jotka oli optimoitu hydrofiilisille ja hydrofobisille yhdisteille ja käyttäen sekä positiivista että negatiivista ionisaatiota. Kaikessa kromatografiassa käytettiin Waters Acquity ultra-high performance (UP)LC:tä ja 5 µl:n injektiotilavuutta (näytteet rekonstituoitiin sopiviin liuottimiin kullekin alustalle). Kaikki massaspektrometria suoritettiin ThermoScientific Q-Exactivella korkearesoluutioisilla/tarkoilla massaspektrometreillä lämmitetyillä sähkösumutusionisaatiolähteillä (HESI-II) ja Orbitrap-massaanalysaattoreilla, jotka toimivat 35,{10}} massaresoluutiolla skannausalueella 70–1000 m/ z. Metabolon®-ohjelmistoa käytettiin sovittamaan kokeelliset näytteet tason 1 tunnistusstandardien viitekirjastoon Metabolomics Standards Initiativen määrittelemällä tavalla, ja käyrän alla olevaa pinta-alaa käytettiin huippujen kvantifiointiin. Arvot normalisoidaan raakapinta-alojen määrällä, ja kaikki näytteet ajettiin yhdessä erässä, joten eräkorjaus ei ollut tarpeen. Tuntemattomilla yhdisteillä ei ole standardia, ja osittain karakterisoidut molekyylit ovat sellaisia, joita ei ole virallisesti vahvistettu standardin perusteella tai joille ei ole standardia saatavilla, mutta Metabolon® on kohtuullisen varma identiteetistään.

4.4 Tietojenkäsittely

Raakatiedot normalisoitiin osmolaliteetilla jokaiselle näytteelle ja kunkin metaboliitin tiedot keskitettiin mediaanikeskiarvoon 1 (raakatiedot, mukaan lukien osmolaliteetti, ovat saatavilla lisätiedostossa S1). Puuttuvat arvot laskettiin vähimmäisarvolla, lukuun ottamatta lääkkeitä, joiden laskettiin olevan 0. Tiedot muunnettiin log10 varianssia stabiloivalla muunnolla (MetaboanalystR) [65,66]. Alun perin mitattiin yhteensä 1 403 metaboliittia. Metaboliitit suodatettiin modifioidun 80 % säännön mukaisesti: yhdiste otettiin mukaan, jos se havaittiin vähintään 80 %:ssa näytteistä joko ME/CFS- tai kontrolliryhmässä [27]. Kaiken kaikkiaan 1154 metaboliittia täytti kriteerit ja sisällytettiin seuraaviin analyyseihin. Ainoa ilman suodatusta suoritettu analyysi koski korrelaatioita plasman metaboliittien kanssa. Harjoituksen jälkeiset/perusviivasuhteet kullekin metaboliitille laskettiin log base 10:nä harjoituksen jälkeisenä arvona vähennettynä kunkin koehenkilön lähtötason arvolla. Tulivuorikuvaajan piirtämistä varten keskimääräiset log-kertaiset muutokset (ME/CFS-potilaat vs. kontrollit) muunnettiin log-kanta-2:ksi käyttämällä peruskaavan muutosta.

4.5. Tietojen analyysi ja tilastot

Yksimuuttujainen tilastollinen analyysi kullekin metaboliitille suoritettiin käyttämällä lineaarista sekamallia, jossa oli kiinteät sairauden tilan, ajankohdan, iän ja BMI:n vaikutukset sekä kohteen satunnainen vaikutus (älykkäin [67] ja keskiarvo [68] R-paketit). Benjamini-Hochberg (BH) -menetelmää käytettiin korjaamaan vääriä löytöjä, ja q < 0.1 käytettiin merkitsevyyden kynnyksenä. EnhancedVolcano R -pakettia käytettiin tulivuoren tonteille [69].

ChemRICH in R:ssä käytettiin suorittamaan ei-päällekkäinen reittianalyysi Metabolon®:n määrittämien osareittien ja reittijärjestyksen kanssa [29]. ChemRICH-verkkotyökalua käytettiin kemiallisen samankaltaisuuden klusterointianalyysin suorittamiseen [30]. Tähän analyysiin voitiin sisällyttää vain yhdisteitä, joilla oli tunnettu SMILES-koodi, yhteensä 516 yhdistettä. Molemmissa ChemRICH-analyyseissä rikastustilastot tehtiin Kolmogorov–Smirnov-testillä, joka ei käytä p-arvon merkitsevyyden rajaa, vaan vertaa todennäköisyysjakaumaa nollahypoteesin todennäköisyysjakaumaan [70]. Metabolon®-alareiteille q < 0,05 valittiin merkitsevyyden kynnysarvoksi ja q < 0,15 valittiin kemiallisille klustereille (BH FDR-korjaus). Molemmilla kaikilla q-kynnysten alapuolella valituilla klustereilla oli myös p < 0,05.

Reitin rikastus ja topologia-analyysi suoritettiin Metaboanalyst 5.{1}} -verkkotyökalulla [65] sekä KEGG- että SMPDB-ihmisen referenssimetaboomeille seuraavilla parametreilla valittuna: globaali testi tilastotestille ja suhteellinen keskinäisyys solmun tärkeysmittari. Yhdisteet sisällytettiin tähän analyysiin, jos Metabolon®:n tarjoama HMDB ID vastasi Metaboanalystin HMDB ID:tä. Yhden HMDB-tunnuksen kaksoiskappaleille vain ensimmäinen sisällytettiin. Tämä johti 453 sisällytettyyn yhdisteeseen.

Koehenkilöiden klusterointi käyttäen neljää yhdistettä, jotka erosivat merkittävästi potilaiden ja kontrollien välillä harjoituksen jälkeen, suoritettiin käyttämällä hierarkkista klusterointia, jossa etäisyysmittarina oli euklidinen etäisyys, ja menetelmää "Ward.D2" (heatmap R -paketti [71) ]).

Virtsan ja plasman Pearson-korrelaatiot 727 metaboliitille, jotka mitattiin molemmissa bionesteissä, suoritettiin R:ssä (hmisc-paketti). p-arvot laskettiin kullekin korrelaatiolle käyttämällä t-testiä nollahypoteesilla, että korrelaatiokerroin on yhtä suuri kuin 0, mitä seurasi BH FDR -korjaus q < 0.15 merkitsevyyden kynnyksenä. Kuvaa 8 varten yhdisteet seulottiin niiden poistamiseksi, joilla oli äärimmäisiä poikkeavuuksia käyttämällä modifioitua z-pistemäärää, joka laskee z-pisteen käyttämällä mediaani- ja mediaaniabsoluuttista poikkeamaa (outliers R-paketti, z-kynnys=6).

Ellei toisin mainita, kaikki tietojen visualisoinnit suoritettiin käyttämällä ggplot2 R -pakettia. BH FDR-korjaus valittiin kaikkiin analyyseihin tiukemman Benjamini ja Yekutieli FDR-korjauksen sijaan, koska erittäin pienen määrän yhdisteitä havaittiin olevan kolineaarisia (0,75 % kohteista oli absoluuttisen arvon Pearsonin korrelaatiokerroin > { {3}}.7).

5. Johtopäätökset

Kaiken kaikkiaan virtsan metabolomissa oli merkittäviä eroja terveiden istuvien kontrollien ja ME/CFS-potilaiden vasteena CPET-haasteeseen useilla aineenvaihdunnan super- ja alareiteillä, jotka kattavat aminohapot, lipidit, hiilihydraatit, nukleotidit, ksenobiootit ja tuntemattomia. Nämä reitit ovat mukana monissa fysiologisissa toiminnoissa, mukaan lukien, mutta ei rajoittuen, energia-aineenvaihduntaan. Tämä viittaa siihen, että ME/CFS-potilailla on yleinen aineenvaihduntahäiriö, joka on osa heidän rasitus-intoleranssiaan ja PEM-häiriöään, jossa muuttunut metabolinen erittyminen on myötävaikuttava tekijä. Tietomme viittaavat siihen, että istuvien henkilöiden, joilla ei ole ME/CFS:ää, aineenvaihduntaan tapahtuu suuria muutoksia, joiden ansiosta he voivat toipua rasituksesta, kun taas ME/CFS-potilaat eivät pysty tekemään samanlaisia ​​adaptiivisia vasteita. Tulevaan työhön kuuluu tämän tutkimuksen laajentaminen paljon suurempaan kohorttiin, joka sisältää molemmat sukupuolet näiden tulosten validoimiseksi, sukupuolierojen tutkimiseksi virtsan metabolomissa ja sen selvittämiseksi, onko ME/CFS-potilaiden virtsan metaboliiteissa lähtötilanteessa hienovaraisempia eroja, jotka voisivat mahdollisesti olla osallistua taudin diagnostiseen testiin tulevaisuudessa.

Tekijän panokset:Käsitteellistäminen, AG, KAG ja MRH; metodologia, AG, KAG, YVH ja MRH; muodollinen analyysi, KAG, AG ja YVH; tutkinta, KAG, AG ja YVH; kirjoittaminen – alkuperäisen luonnoksen valmistelu, KAG, AG ja MRH; kirjoittaminen – arvostelu ja editointi, kaikki kirjoittajat; visualisointi, KAG ja AG; projektin hallinto, MRH; rahoituksen hankinta, MRH Kaikki kirjoittajat ovat lukeneet käsikirjoituksen julkaistun version ja hyväksyneet sen.

Rahoitus:Tätä tutkimusta tukivat National Institute of Neurological Disorders and Stroke (NINDS), NIH (U54NS105541) ja Amar Foundation. National Center for Advancing Translational Sciences of NIH myönsi rahoituksen Weill Cornell Medicine Clinical and Translational Science Centerille (CTSC) REDCap-tietokannan ylläpitämiseksi numeron UL1 TR 002384 kautta.

Institutionaalisen tarkastuslautakunnan lausunto:Tutkimus suoritettiin Helsingin julistuksen ohjeiden mukaisesti, ja sen hyväksyivät Ithaca College Institutional Review Board, Ithaca, New York, USA (protokolla 1017-12Dx2) ja Weill Cornell Medical College Institutional Review Board ( protokolla 1708018518).

Ilmoitettu suostumus:Tietoinen suostumus saatiin kaikilta tutkimukseen osallistuneilta koehenkilöiltä.

Tietojen saatavuusilmoitus:Kaikki kunkin kohteen metaboliittitiedot ovat saatavilla toimitetuissa lisätietotiedostoissa.

Kiitokset:Carl Franconi hallinnoi tietokantaa ja biopankkia Cornellin yliopistossa. Verinäytteet fraktioivat David Wang EVMED Researchissa Workwell Foundationin tuella sekä Ivan Falsztyn, Carl Franconi, Ludovic Giloteaux, Madeline McCanne, Jineet Patel, Adam O'Neal, Alexandra Mandarano, Jessica Maya ja Shannon Appelquist Cornellin yliopistosta. Kiitämme seuraavia henkilöitä, jotka osallistuivat osallistujien seulomiseen, harjoitustestien suorittamiseen ja/tai veren ja virtsan keräämiseen: Betsy Keller, John Chia, Jared Stevens, Tiffany Ong ja Maria Russell.

Eturistiriidat:Kirjoittajat ilmoittavat, että ne eivät ole eturistiriitoja. Rahoittajalla ei ollut roolia tutkimuksen suunnittelussa; tietojen keräämisessä, analysoinnissa tai tulkinnassa; käsikirjoituksen kirjoittamisessa; tai päätöksessä julkaista tulokset.

Viitteet

1. Jason, LA; Mirin, AA päivittää National Academy of Medicine ME/CFS:n esiintyvyyttä ja taloudellisia vaikutuksia koskevia lukuja väestönkasvun ja inflaation huomioon ottamiseksi. Väsymys Biomed. Health Behav. 2021, 9, 9–13. [CrossRef]

2. Valdez, AR; Hancock, EE; Adebayo, S.; Kiernicki, DJ; Proskauer, D.; Attewell, JR; Bateman, L.; DeMaria, A., Jr.; Lapp, CW; Rowe, PC; et ai. ME/CFS:n levinneisyyden, demografisten tietojen ja kustannusten arvioiminen laajamittaisten lääketieteellisten väitetietojen ja koneoppimisen avulla. Edessä. Pediatr. 2018, 6, 412. [CrossRef] [PubMed]

3. Carruthers, BM; Jain, AK; De Meirleir, KL; Peterson, DL; Klimas, NG; Lerner, AM; Bested, AC; Flor-Henry, P.; Joshi, P.; Powles, AP; et ai. Myalginen enkefalomyeliitti/krooninen väsymysoireyhtymä: kliinisen työtapauksen määritelmä, diagnostiset ja hoitokäytännöt. J. Chronic Fatigue Syndr. 2003, 11, 7–115. [CrossRef]

4. Chu, L.; Valencia, IJ; Garvert, DW; Montoya, JG Potilaskeskeinen poikkileikkaustutkimus. PLoS ONE 2018, 13, e0197811. [CrossRef]

5. Stussman, B.; Williams, A.; Snow, J.; Gavin, A.; Scott, R.; Nath, A.; Walitt, B. Potilaiden rasituksen jälkeisen huonovointisuuden karakterisointi myalgista enkefalomyeliittiä/kroonista väsymysoireyhtymää sairastavilla potilailla. Edessä. Neurol. 2020, 11, 1025. [CrossRef]

6. Stevens, S.; Snell, C.; Stevens, J.; Keller, B.; VanNess, JM Cardiopulmonary Exercise Test Metodologia rasitusintoleranssin arvioimiseksi myalgisessa enkefalomyeliitissä/kroonisessa väsymysoireyhtymässä. Edessä. Pediatr. 2018, 6, 242. [CrossRef]

7. Vanness, JM; Snell, CR; Stevens, SR Vähentynyt sydän- ja keuhkokapasiteetti rasituksen jälkeisen huonovointisuuden aikana. J. Chronic Fatigue Syndr. 2007, 14, 77–85. [CrossRef]

8. Keller, BA; Pryor, JL; Giloteaux, L. Myalgista enkefalomyeliittiä/kroonista väsymysoireyhtymää sairastavien potilaiden kyvyttömyys tuottaa VO(2)-huippua viittaa toiminnalliseen heikkenemiseen. J. Transl. Med. 2014, 12, 104. [CrossRef]

9. Missailidis, D.; Annesley, SJ; Fisher, PR Myalgisen enkefalomyeliitin/kroonisen väsymysoireyhtymän taustalla olevat patologiset mekanismit. Diagnostiikka 2019, 9, 80. [CrossRef]

10. Huth, TK; Eaton-Fitch, N.; Staines, D.; Marshall-Gradisnik, S. Järjestelmällinen katsaus metabolomiseen dysregulaatioon kroonisessa väsymysoireyhtymässä/myalgiassa enkefalomyeliittissä/systeemisessä rasitusintoleranssisairaudessa (CFS/ME/SEID). J. Transl. Med. 2020, 18, 198. [CrossRef]

11. Germain, A.; Barupal, DK; Levine, SM; Hanson, MR Kattava verenkierron aineenvaihdunta ME/CFS:ssä paljastaa asyylilipidien ja steroidien häiriintyneen aineenvaihdunnan. Aineenvaihdunta 2020, 10, 34. [CrossRef]

12. Germain, A.; Ruppert, D.; Levine, SM; Hanson, MR Myalgisen enkefalomyeliitin/kroonisen väsymysoireyhtymän löytökohortin metabolinen profilointi paljastaa häiriöitä rasvahappojen ja lipidiaineenvaihdunnassa. Mol. Biosyst. 2017, 13, 371–379. [CrossRef]

13. Germain, A.; Ruppert, D.; Levine, SM; Hanson, MR Myalgisen enkefalomyeliitin/kroonisen väsymysoireyhtymän plasmametabolomian mahdolliset biomarkkerit aiheuttavat redox-epätasapainon sairauden oireyhtymässä. Metabolites 2018, 8, 90. [CrossRef]

14. Yamano, E.; Sugimoto, M.; Hirayama, A.; Kume, S.; Yamato, M.; Jin, G.; Tajima, S.; Goda, N.; Iwai, K.; Fukuda, S.; et ai. Kroonisen väsymysoireyhtymän indeksimerkit, joissa on TCA- ja ureasyklien toimintahäiriö. Sci. Rep. 2016, 6, 34990. [CrossRef]

15. Armstrong, CW; McGregor, NR; Sheedy, JR; Buttfield, I.; Butt, HL; Gooley, PR NMR seerumin metabolinen profilointi tunnistaa aminohappohäiriöt kroonisessa väsymysoireyhtymässä. Clin. Chim. Acta 2012, 413, 1525–1531. [CrossRef]

16. Armstrong, CW; McGregor, NR; Lewis, DP; Butt, HL; Gooley, PR Ulosteen mikrobiotan ja ulosteen, veren seerumin ja virtsan metaboliittien yhteys myalgisessa enkefalomyeliitissä/kroonisessa väsymysoireyhtymässä. Metabolmics 2016, 13, 8. [CrossRef]

17. Hoel, F.; Hoel, A.; Pettersen, IK; Rekeland, IG; Risa, K.; Alme, K.; Sorland, K.; Fossa, A.; Lien, K.; Herder, I.; et ai. Kartta metabolisista fenotyypeistä potilailla, joilla on myalginen enkefalomyeliitti / krooninen väsymysoireyhtymä. JCI Insight 2021, 6, e149217. [CrossRef]

18. Nagy-Szakal, D.; Barupal, DK; Lee, B.; Che, X.; Williams, BL; Kahn, EJR; Ukaigwe, JE; Bateman, L.; Klimas, NG; Komaroff, AL; et ai. Näkemyksiä myalgisen enkefalomyeliitin/kroonisen väsymysoireyhtymän fenotyypistä kattavan metabolomiikan kautta. Sci. Rep. 2018, 8, 10056. [CrossRef]

19. McGregor, NR; Armstrong, CW; Lewis, DP; Gooley, PR Rasituksen jälkeinen huonovointisuus liittyy hypermetabolismiin, hypoasetylaatioon ja puriiniaineenvaihdunnan deregulaatioon ME/CFS-tapauksissa. Diagnostiikka 2019, 9, 70. [CrossRef]

20. Armstrong, CW; McGregor, NR; Lewis, DP; Butt, HL; Gooley, PR Metabolinen profilointi paljastaa poikkeavia energia-aineenvaihduntaa ja oksidatiivisia stressireittejä kroonista väsymysoireyhtymää sairastavilla potilailla. Metabolomics 2015, 11, 1626–1639. [CrossRef]

21. Fluge, O.; Mella, O.; Bruland, O.; Risa, K.; Dyrstad, SE; Alme, K.; Rekeland, IG; Sapkota, D.; Rosland, GV; Fossa, A.; et ai. Metabolinen profilointi osoittaa heikentyneen pyruvaattidehydrogenaasin toiminnan myalgisessa enkefalopatiassa/kroonisessa väsymysoireyhtymässä. JCI Insight 2016, 1, e89376. [CrossRef] [PubMed]

22. Naviaux, RK; Naviaux, JC; Li, K.; Kirkas, AT; Alaynick, WA; Wang, L.; Baxter, A.; Nathan, N.; Anderson, W.; Gordon, E. Kroonisen väsymysoireyhtymän metaboliset ominaisuudet. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 2016, 113, E5472–E5480. [CrossRef] [PubMed]

23. Jones, MG; Cooper, E.; Amjad, S.; Goodwin, CS; Barron, JL; Chalmers, RA Virtsan ja plasman orgaaniset hapot ja aminohapot kroonisessa väsymysoireyhtymässä. Clin. Chim. Acta 2005, 361, 150–158. [CrossRef] [PubMed]

24. Niblett, SH; King, KE; Dunstan, RH; Clifton-Bligh, P.; Hoskin, LA; Roberts, TK; Fulcher, GR; McGregor, NR; Dunsmore, JC; Butt, HL; et ai. Hematologiset ja virtsan erittymishäiriöt potilailla, joilla on krooninen väsymysoireyhtymä. Exp. Biol. Med. 2007, 232, 1041–1049. [CrossRef] [PubMed]

25. Germain, A.; Giloteaux, L.; Moore, GE; Levine, SM; Chia, JK; Keller, BA; Stevens, J.; Franconi, CJ; Mao, X.; Shungu, DC; et ai. Plasman metabolomiikka paljastaa häiriintyneen vasteen ja palautumisen maksimaalisen rasituksen jälkeen myalgisessa enkefalomyeliitissä/kroonisessa väsymysoireyhtymässä. JCI Insight 2022, 7, e157621. [CrossRef]

26. Bell, DS Lääkärin opas krooniseen väsymysoireyhtymään. CFIDS:n ymmärtäminen, hoito ja elämä sen kanssa; Addison-Wesley Publishing Company: Reading, MA, USA, 1994.

27. Yang, J.; Zhao, X.; Lu, X.; Lin, X.; Xu, G. Metabolomiikan tietojen esikäsittelystrategia data-analyysin peittovaikutuksen vähentämiseksi. Edessä. Mol. Biosci. 2015, 2, 4. [CrossRef]

28. Benjamini, Y.; Hochberg, Y. Väärän havaitsemisnopeuden hallinta: käytännöllinen ja tehokas lähestymistapa useisiin testauksiin. JR Stat. Soc. Ser. B 1995, 57, 289-300. [CrossRef]

29. Barupal, DK; Fan, S.; Fiehn, O. Bioinformatiikan lähestymistapojen integrointi metabolomiikan tietoaineistojen kattavaan tulkintaan. Curr. Opin. Biotechnol. 2018, 54, 1–9. [CrossRef]

30. Barupal, DK; Fiehn, O. Chemical samankaltaisuuden rikastusanalyysi (ChemRICH) vaihtoehtona biokemiallisten reittien kartoitukselle metabolomista tietojoukkoja varten. Sci. Rep. 2017, 7, 14567. [CrossRef]

31. Goeman, JJ; van de Geer, SA; de Kort, F.; van Houwelingen, HC Globaali testi geeniryhmille: Testausyhteys kliiniseen tulokseen. Bioinformatiikka 2004, 20, 93–99. [CrossRef]

32. Rosato, A.; Tenori, L.; Cascante, M.; De Atauri Carulla, PR; Martins Dos Santos, VAP; Saccenti, E. Korrelaatiosta syy-yhteyteen: Metabolomiikkatietojen analyysi systeemibiologian lähestymistapojen avulla. Metabolmics 2018, 14, 37. [CrossRef]

33. Cardounel, AJ; Cui, H.; Samouilov, A.; Johnson, W.; Kearns, P.; Tsai, AL; Berka, V.; Zweier, JL Todisteita endogeenisten metyyliarginiinien patofysiologisesta roolista endoteelin NO-tuotannon ja verisuonten toiminnan säätelyssä. J. Biol. Chem. 2007, 282, 879–887. [CrossRef]

34. Chandrasekharan, UM; Wang, Z.; Wu, Y.; Wilson Tang, WH; Hazen, SL; Wang, S.; Elaine Husni, M. Plasman symmetrisen dimetyyliarginiinin kohonneet tasot ja lisääntynyt arginaasiaktiivisuus mahdollisina sydän- ja verisuonisairauksien indikaattoreina nivelreumassa. Arthritis Res. Siellä. 2018, 20, 123. [CrossRef]

35. Siroen, kansanedustaja; Teerlink, T.; Nijveldt, RJ; Prins, HA; Richir, MC; van Leeuwen, PA Asymmetrisen dimetyyliarginiinin kliininen merkitys. Annu. Rev. Nutr. 2006, 26, 203–228. [CrossRef]

36. Bertinat, R.; Villalobos-Labra, R.; Hofmann, L.; Blauensteiner, J.; Sepulveda, N.; Westermeier, F. Vähentynyt NO-tuotanto endoteelisoluissa, jotka altistettiin ME/CFS-potilaiden plasmalle. Vasc. Pharmacol. 2022, 143, 106953. [CrossRef]

37. Brosnan, JT; Brosnan, ME Rikkiä sisältävät aminohapot: Yleiskatsaus. J. Nutr. 2006, 136, 1636S–1640S. [CrossRef]

38. Fernández-García, JC; Martínez-Sánchez, MA; Bernal-López, MR; Muñoz-Garach, A.; Martínez-González, MA; Fitó, M.; Salas-Salvadó, J.; Tinahones, FJ; Ramos-Molina, B. Elämäntapainterventio-ohjelman vaikutus energiarajoitteisella Välimeren ruokavaliolla ja liikunnalla seerumin polyamiinimetaboliiniin henkilöillä, joilla on korkea sydän- ja verisuonitautiriski: satunnaistettu kliininen tutkimus. Olen. J. Clin. Nutr. 2020, 111, 975–982. [CrossRef]

39. Wang, W.; Zhang, H.; Xue, G.; Zhang, L.; Zhang, W.; Wang, L.; Lu, F.; Li, H.; Bai, S.; Lin, Y.; et ai. Liikuntaharjoittelu säilyttää iskeemisen esiehkäisyn ikääntyneissä rotan sydämissä palauttamalla sydänlihaksen polyamiinipoolin. Oksid. Med. Cell. Longev. 2014, 2014, 457429. [CrossRef]

40. Blomstrand, E.; Eliasson, J.; Karlsson, HK; Kohnke, R. Haaraketjuiset aminohapot aktivoivat proteiinisynteesin avainentsyymejä liikunnan jälkeen. J. Nutr. 2006, 136, 269S–273S. [CrossRef]

41. Newsholme, P.; Stenson, L.; Sulvucci, M.; Sumayao, R.; Krause, M. 1.02-Aminohappoaineenvaihdunta. julkaisussa Comprehensive Biotechnology, 2. painos; Moo-Young, M., toim.; Academic Press: Burlington, ON, Kanada, 2011; s. 3–14. [CrossRef]

42. Li, S.; Gao, D.; Jiang, Y. Asyylikarnitiinin aineenvaihdunnan toiminta, havaitseminen ja muuttaminen hepatosellulaarisessa karsinoomassa. Metabolites 2019, 9, 36. [CrossRef]

43. Braun, TP; Marks, DL Lihasmassan säätely endogeenisten glukokortikoidien avulla. Edessä. Physiol. 2015, 6, 12. [CrossRef] [PubMed]

44. Furman, BL Mineralokortikoidit. Julkaisussa xPharm: The Comprehensive Pharmacology Reference; Enna, SJ, Bylund, DB, toim.; Elsevier: New York, NY, USA, 2007; s. 1. [CrossRef]

45. Kavyani, B.; Lidbury, BA; Schloeffel, R.; Fisher, PR; Missailidis, D.; Annesley, SJ; Dehhaghi, M.; Heng, B.; Guillemin, GJ Voisiko kinureniinireitti olla tärkein puuttuva pala myalgista enkefalomyeliittiä/kroonista väsymysoireyhtymää (ME/CFS) koskevassa monimutkaisessa palapelissä? Cell. Mol. Life Sci. 2022, 79, 412. [CrossRef] [PubMed]

46. ​​Kossman, DA; Williams, NI; Domchek, SM; Kurzer, MS; Stopfer, JE; Schmitz, KH Harjoitus alentaa estrogeeni- ja progesteronitasoja premenopausaalisilla naisilla, joilla on korkea rintasyövän riski. J. Appl. Physiol. 2011, 111, 1687–1693. [CrossRef] [PubMed]

47. De Souza, MJ; Van Heest, J.; Demers, LM; Lasley, BL Luteaalivaiheen puutos virkistysjuoksijoilla: todisteita hypometabolisesta tilasta. J. Clin. Endokrinol. Metab. 2003, 88, 337–346. [CrossRef]

48. Mukherjee, K.; Edgett, BA; Burrows, HW; Castro, C.; Griffin, JL; Schwertani, AG; Gurd, BJ; Funk, CD Kokoveren transkriptomiikka ja virtsan metabolomiikka 50–60--vuotiaiden huippu-urheilijoiden korkean intensiteetin harjoittamisen adaptiivisten biokemiallisten reittien määrittämiseksi. PLoS ONE 2014, 9, e92031. [CrossRef]

49. Schranner, D.; Kastenmuller, G.; Schonfelder, M.; Romisch-Margl, W.; Wackerhage, H. Metaboliittien pitoisuuden muutokset ihmisissä harjoituksen jälkeen: Systemaattinen katsaus harjoituksen aineenvaihduntatutkimuksiin. Urheilu Med. Avoinna 2020, 6, 11. [CrossRef]

50. Kistner, S.; Rist, MJ; Doring, M.; Dorr, C.; Neumann, R.; Hartel, S.; Bub, A. NMR-pohjainen lähestymistapa akuuttiin fyysiseen harjoitteluun ja sydän- ja hengityselimistön kuntoon liittyvien virtsan aineenvaihduntatuotteiden tunnistamiseksi terveillä ihmisillä - KarMeN-tutkimuksen tulokset. Aineenvaihdunta 2020, 10, 212. [CrossRef]

51. Kuratsune, H.; Yamaguti, K.; Takahashi, M.; Misaki, H.; Tagawa, S.; Kitani, T. Asyylikarnitiinin puutos kroonisessa väsymysoireyhtymässä. Clin. Tartuttaa. Dis. 1994, 18 (lisäosa 1), S62-S67. [CrossRef]

52. Jones, MG; Goodwin, CS; Amjad, S.; Chalmers, RA Plasma ja virtsan karnitiini ja asyylikarnitiinit kroonisessa väsymysoireyhtymässä. Clin. Chim. Acta 2005, 360, 173–177. [CrossRef]

53. Zhang, J.; valo, AR; Hoppel, CL; Campbell, C.; Chandler, CJ; Burnett, DJ; Souza, EC; Casazza, GA; Hughen, RW; Keim, NL; et ai. Asyylikarnitiinit harjoitukseen liittyvän polttoaineen jakautumisen, ksenometabolismin ja mahdollisten signaalien merkkiaineina lihasten afferenteille neuroneille. Exp. Physiol. 2017, 102, 48–69. [CrossRef]

54. Costa, CG; Guerand, WS; Struys, EA; Holwerda, U.; kymmenen Brink, HJ; Tavares de Almeida, I.; Duran, M.; Jakobs, C. Virtsan asyyliglysiinien kvantitatiivinen analyysi beetahapetusvirheiden diagnosoimiseksi käyttäen GC-NCI-MS:ää. J. Pharm. Biomed. Anaali. 2000, 21, 1215–1224. [CrossRef]

55. Maya, J.; Leddy, SM; Gottschalk, CG; Peterson, DL; Hanson, MR Altered Fatty Acid Oksidation in Lymfosyyttipopulaatiot myalgic enkefalomyeliit / krooninen väsymysoireyhtymä. Int. J. Mol. Sci. 2023, 24, 2010. [CrossRef]

56. Wilkinson, DJ; Smeeton, NJ; Watt, PW Ammoniakin aineenvaihdunta, aivot ja väsymys; katsomalla linkkiä uudelleen. Prog. Neurobiol. 2010, 91, 200–219. [CrossRef]

57. Chen, S.; Minegishi, Y.; Hasumura, T.; Shimotoyodome, A.; Ota, N. Ammoniakin aineenvaihdunnan osallistuminen teekatekiinien kestävyyden parantamiseen hiirillä. Sci. Rep. 2020, 10, 6065. [CrossRef]

58. Paul, BD; Sbodio, JI; Snyder, SH Kysteiiniaineenvaihdunta neuronaalisessa redox-homeostaasissa. Trends Pharmacol. Sci. 2018, 39, 513–524. [CrossRef]

59. Nkiliza, A.; Parks, M.; Cseresznye, A.; Oberlin, S.; Evans, JE; Darcey, T.; Aenlle, K.; Niedospial, D.; Mullan, M.; Crawford, F.; et ai. ME/CFS-potilaiden sukupuolispesifiset plasman lipidiprofiilit ja niiden yhteys kipuun, väsymykseen ja kognitiivisiin oireisiin. J. Transl. Med. 2021, 19, 370. [CrossRef]

60. O'Neal, AJ; Lasi, KA; Emig, CJ; Vitug, AA; Henry, SJ; Shungu, DC; Mao, X.; Levine, SM; Hanson, MR-tutkimus patogeenien vasta-ainetasoista myalgisessa enkefalomyeliitissä/kroonisessa väsymysoireyhtymässä. Proteomes 2022, 10, 21. [CrossRef]

61. Analyysi rasituksen jälkeisestä huonovointisuudesta kahden päivän CPET:n avulla ihmisillä, joilla on ME/CFS.

62. Ware, JE, Jr.; Sherbourne, CD MOS 36-kohteen lyhytmuotoinen terveyskysely (SF-36). I. Käsitteellinen viitekehys ja kohteen valinta. Med. Care 1992, 30, 473–483. [CrossRef]

63. Smets, EM; Garssen, B.; Bonke, B.; De Haes, JC Väsymysmittarin (MFI) psykometriset ominaisuudet väsymyksen arvioimiseksi. J. Psychosom. Res. 1995, 39, 315-325. [CrossRef]

64. Ford, L.; Kennedy, AD; Goodman, KD; Pappan, KL; Evans, AM; Miller, LAD; Wulff, JE; Wiggs, BR; Lennon, JJ; Elsea, S.; et ai. Kliinisen metabolomiikan profilointialustan tarkkuus käytettäväksi synnynnäisten aineenvaihduntavirheiden tunnistamisessa. J. Appl. Lab. Med. 2020, 5, 342–356. [CrossRef]

65. Pang, Z.; Chong, J.; Zhou, G.; de Lima Morais, DA; Chang, L.; Barrette, M.; Gauthier, C.; Jacques, PE; Li, S.; Xia, J. MetaboAnalyst 5.0: Raakaspektrien ja toiminnallisten oivallusten välisen kuilun kaventaminen. Nucleic Acids Res. 2021, 49, W388–W396. [CrossRef] [PubMed]

66. Durbin, BP; Hardin, JS; Hawkins, DM; Rocke, DM Varianssia stabiloiva muunnos geenin ilmentymisen mikrosirudatalle. Bioinformatics 2002, 18 (liite 1), S105–S110. [CrossRef] [PubMed]

67. Kuznetsova, A.; Brockhoff, PB; Christensen, RHB lmerTest Package: Testit lineaarisissa sekatehostemalleissa. J. Stat. Softw. 2017, 82, 1–26. [CrossRef]

68. Lenth, R. Emmeans: Estimated Marginal Means, alias Least-Squares Means, 1.8.2; R-paketti. 2022.

69. Blighe, K.; Rana, S.; Lewis, M. EnhancedVolcano: Julkaisuvalmiit tulivuoripiirrokset tehostetulla värityksellä ja merkinnöillä, versio 1.16.0; R-paketti. 2022.

70. Smirnov, NV Kahden riippumattoman näytteen empiiristen jakaumakäyrien välisen eron arvioinnista. Sonni. Matematiikka. Univ. Moscou 1939, 2, 3–14.

71. Kolde, R. Pheatmap: Pretty Heatmaps, 1.0.12; R-paketti. 2019

Vastuuvapauslauseke/julkaisijan huomautus:Kaikkiin julkaisuihin sisältyvät lausunnot, mielipiteet ja tiedot ovat yksinomaan yksittäisten kirjoittajien ja avustajien, eivät MDPI:n ja/tai toimittajan (toimittajien) lausuntoja. MDPI ja/tai toimittaja(t) eivät ole vastuussa ihmisille tai omaisuudelle aiheutuvista vahingoista, jotka johtuvat sisällössä mainituista ideoista, menetelmistä, ohjeista tai tuotteista.

【Ota yhteyttä】Sähköposti: george.deng@wecistanche.com / WhatsApp:008613632399501/Wechat:13632399501