Virtsan eksosomit tunnistavat tulehdusreittejä vankomysiiniin liittyvässä akuutissa munuaisvauriossa

Ottaa yhteyttä:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Linda Awdishu 1,*, Amy Le 1, Jordan Amato 1, Vidhyut Jani 1, Soma Bal 2, Robert H. Mills 1, Marvic Carrillo-Terrazas 1, David J. Gonzalez 1, Ashita Tolwani 3, Anjali Acharya 4, Jorge Cerda 5, Melanie S. Joy 6,7, Paola Nicoletti 8, Etienne Macedo 2, Sucheta Vaingankar 2, Ravindra Mehta 2, Satish P. Ramachandra Rao 9 ja Direct Investigatorsin puolesta †

1 Skaggs School of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences, University of California, San Diego, CA 92093, USA;a6le@ucsd.edu (AL); jegilmor@ucsd.edu (JA); vgjani@ucsd.edu (VJ); rhmills@health.ucsd.edu (RHM);mac215@health.ucsd.edu (MC-T.); djgonzalez@ucsd.edu (DJG)

2 School of Medicine, University of California, San Diego, CA 92093, USA; sobal@ucsd.edu (SB);emacedo@ucsd.edu (EM); svaingankar@health.ucsd.edu (SV); rmehta@ucsd.edu (RM)

3 School of Medicine, University of Alabama, Birmingham, AL 35233, USA; atolwani@uab.edu

4 Albert Einstein College of Medicine, The Bronx, NY 10461, USA; anjali2526@gmail.com

5 Albany Medical College, Albany, NY 12208, USA; jorge.cerda82@gmail.com

6 Division of Rennal Diseases and Hypertension, Skaggs School of Pharmacy and Pharmaceutical, Aurora, CO 80045, USA; MELANIE.JOY@cuanschutz.edu

7 School of Medicine, University of Colorado, Aurora, CO 80045, USA

8 Mount Sinai School of Medicine, New York, NY 10029, USA; paola.nicoletti@mssm.edu

9 Solu- ja molekyylilääketieteen laitos, University of Michigan Medical System, Ann Arbor, MI 48109, USA; satishpr@med.umich.edu

* Kirjeenvaihto: lawdishu@ucsd.edu; Puh.: plus 858-534-3919

† Suorien tutkijoiden jäsenyys on kerrottu kiitoksessa.

Abstrakti:

Tausta:Vankomysiiniä käytetään yleisesti ensilinjan hoitona grampositiivisille organismeille, kuten metisilliiniresistentille Staphylococcus aureukselle. Vankomysiinin aiheuttama akuuttimunuainenvahinkoa(V-AKI) on raportoitu jopa 43 prosentilla potilaista, erityisesti niillä, joilla on korkeammat tavoitepitoisuudet. Tarkka vauriomekanismi ihmisillä on edelleen vaikeaselkoinen, ja viimeaikaiset todisteet kohdistuvat proksimaalisiin tubulussolujen apoptoosiin. Tässä tutkimuksessa tutkimme virtsan eksosomien proteiinipitoisuutta potilailla, joilla on V-AKI, selvittääksemme edelleen vauriomekanismien ja mahdollisten vasteiden biomarkkereita. Menetelmät: Virtsanäytteet potilailta, joilla oli V-AKI, jotka oli otettu mukaan DIRECT-tutkimukseen ja jotka vastasivat terveitä kontrolleja UAB-UCSD O'Brien Centerin biovarastosta, otettiin mukaan analyysiin. Eksosomit uutettiin käyttämällä liuottimen poissulkemisperiaatetta ja polyetyleeniglykolin aiheuttamaa saostusta. Proteiinin identiteetti ja kvantifiointi määritettiin leimattomalla nestekromatografia-massaspektrometrialla (LC/MS). Seerumin kreatiniinin keskimääräinen huippuarvo oli 3,7 ± 1,4 mg/dl ja aikamunuainenvahinkoaoli 4.0 ± 3.0 päivää. Kotiutuksen yhteydessä 90 prosenttia potilaista toipui osittain; 33 prosenttia toipui täydellisesti 28. päivään mennessä. Viiden V-AKI- ja 7 kontrollinäytteen proteomianalyysit paljastivat 2009 proteiinia kaikissa näytteissä ja 251 proteiinia, jotka liittyivät merkittävästi V-AKI:hen (Pi-pisteet > 1). Tärkeimmät erottelevat proteiinit olivat komplementtiC3, komplementti C4, galektiinia-3-sitova proteiini, fibrinogeeni, alfa-2-makroglobuliini, immunoglobuliinin raskas vakiomu ja serotransferriini.

Johtopäätös:Virtsan eksosomit paljastavat tulehduksellisten proteiinien lisääntymisen V-AKI:n nefrotoksisen vaurion jälkeen. Lisätutkimukset ovat tarpeen suurelle potilasnäytteelle näiden löydösten vahvistamiseksi patofysiologisten mekanismien selvittämiseksi ja mahdollisten vaurioiden biomarkkerien validoimiseksi.

Avainsanat:vankomysiini; AKI; munuaistoksisuus; eksosomit; tulehdus; täydentää; immuunireittejä

Cistanche herbavoi hoitaa munuaisvaurioita

Chengdu Wecistanchella oncistanchetuotteet munuaisvamman hoitoon

1. Esittely

Vankomysiini on glykopeptidiantibiootti, jota käytetään metisilliiniresistenttien Staphylococcus aureus -infektioiden hoitoon kriittisesti sairailla potilailla. Nefrotoksisuus on vakava haittatapahtuma, joka vaikuttaa 10–20 prosenttiin hoidetuista potilaista, ja se liittyy pidentyneeseen sairaalahoidon kestoon, 30-päiväsairaalaan takaisinottoasteeseen ja kaikista syistä johtuvaan 30-päiväkuolleisuuteen [1]. Vankomysiiniin liittyvä akuuttimunuainenvahinkoa(V-AKI) on annosriippuvainen, ja se alkaa 4–17 päivän kuluttua hoidon aloittamisesta. Vaikka V-AKI on pitkään tunnustettu vankomysiinin suureksi sivuvaikutukseksi, munuaistoksisuuden mekanismit ovat jääneet huonosti ymmärretyiksi. Vankomysiinin laukaisemien solu- ja molekyylivasteiden ymmärtäminen on avainasemassa mekanismien ymmärtämisessä ja strategioiden kehittämisessä V AKI:n riskin ja siihen liittyvien kustannusten minimoimiseksi ja samalla maksimoimalla sen tehokkuus infektioiden hoidossa. Myrkyllinen munuaisvaste näyttää johtuvan vankomysiinin suorasta vaikutuksesta proksimaalisten tubulusten epiteeliin [2]. Tähän mennessä V-AKI:n tutkimiseen hiirimalleissa on sovellettu tavanomaisia ​​toksikogenomilaisia ​​lähestymistapoja, mutta ihmisillä tehdyt tutkimukset puuttuvat [3–5]. Eläinmallit osoittavat, että vankomysiinin antaminen indusoi oksidatiivista stressiä, joka voi edistää munuaisvaurioita [6,7]. Eräs mahdollinen vauriomekanismi on lääkkeen vangitseminen proksimaalisiin tubulussoluihin, koska orgaaniset kationinkuljettajat (OCT) kuljettavat sen basolateraalisen kalvon läpi proksimaaliseen tubulussoluun, mutta aktiivisia ulosvirtauskuljetusmekanismeja ei ole tunnistettu [6 –8].

Eksosomit ovat kalvoperäisiä mikrosyyttisiä rakkuloita, joilla on keskeinen rooli solujen välisessä viestinnässä ja proteiinien/nukleiinihappojen toimittamisessa ja jotka tarjoavat mahdollisuuden löytää uusia biomarkkereita, jotka auttavat kliinisessä diagnoosissa.munuainenvahinkoa[9]. On ehdotettu, että eksosomeilla on suurempi spesifisyys ja herkkyys biomarkkerien löytämiselle, mikä johtuu näytteiden stabiilisuudesta verrattuna transkriptomiseen ja proteomiseen menetelmiin, joissa käytetään tavanomaisia ​​seerumi- ja virtsanäytteitä [9]. Tässä tutkimuksessa testasimme hypoteesia, että virtsan eksosomien proteiinien muutos vasteena V-AKI:lle auttaa selvittämään vaurion mekanismeja ja tunnistamaan uusia biomarkkereita potilailla, joilla on vahvistettu lääkkeiden aiheuttama munuaisvaurio. Tätä varten käytimme koehenkilöitä Drug-Induced Renal Injury Consortium (DIRECT) -tutkimuksesta, joka on kansainvälinen, usean keskuksen kohortti kliinisesti arvioiduista lääkkeiden aiheuttamista akuuteista tapauksista.munuainenvahinkoaja populaatiopohjaiset kontrollit farmakogenomiikan ennustajien tutkimiseksi käyttämällä genominlaajuista assosiaatiota. DIRECT-tutkimuksen yksityiskohdat on kuvattu Methods-osiossa ja laboratoriomme tuoreessa julkaisussa [10].

2. Tulokset

Analyyseihin otettiin mukaan virtsanäytteitä 22 koehenkilöltä, 10 V-AKI-tapauksesta ja 12 kontrollista. Potilaiden demografiset tiedot olivat samankaltaisia ​​V-AKI-tapausten ja kontrollien välillä, ja niistä on yhteenveto taulukossa 1. Kuten odotettiin, verenpainetaudin, diabeteksen ja sydämen vajaatoiminnan esiintyvyys oli korkeampi V-AKI-tapauksissa verrattuna kontrolleihin (taulukko 1).

Kaikille V-AKI-tapauksille kehittyi AKI-aste 2 tai korkeampi munuaistautia parantavien maailmanlaajuisten tulosten (KDIGO) kriteerien mukaisesti (kuva 1) [11]. V-AKI puhkesi 4.0 ± 3.0 päivää vankomysiinin aloittamisen jälkeen. Kuvassa 1 on seerumin kreatiniinin (Scr) muutosten aikakulku sairaalahoitoon pääsyn jälkeen ja sen jälkeen.

Kuva 1. Seerumin kreatiniinin muutokset V-AKI-kurssin aikana. Tämä kuva kuvaa seerumin kreatiniinin muutoksia 10 tapauksessa vankomysiiniin liittyvän akuutin taudin aikana.munuainenvahinkoasairaalahoidosta 90 päivään vamman jälkeen. Aikapisteet vastaavat Drug-Induced Renal InjuryConsortium (DIRECT) -tutkimuksen aikapisteitä. Lyhenteet: SCr=seerumin kreatiniini, Sairaala=sairaalahoito, Predrug=ennen lääkkeelle altistumista, DIRI=lääkkeen aiheuttaman munuaisvaurion määritelmä täyttyy, DrugDC {{8} } lääkkeen käytön lopettaminen tai annoksen pienentäminen, Nadir Scr=alhaisin seerumi V-AKI:n jälkeen, Hospital Disch= sairaalasta kotiutumisen jälkeen

V-AKI-tapausten perusriskitekijöitä olivat sepsis (30 prosenttia), sydänsairaus (30 prosenttia), diabetes mellitus (30 prosenttia), anemia (20 prosenttia), radiokontrastialtistus (10 prosenttia), maksasairaus (10 prosenttia) ja hypoalbuminemia (10 prosenttia) (kuva 2).

Korkeintaan V-AKI-tapaukset olivat saaneet kolmen lääkkeen vankomysiinin annostelujaksoja. Vankomysiinin päivittäiset annokset vaihtelivat välillä 1000 - 4000 mg. Kussakin annostelujaksossa käytettyjen päivien keskimääräinen (neljännesten välinen vaihteluväli (IQR)) on esitetty kuvassa 3. Keskimääräiset (keskipoikkeama (SD)) vankomysiinin alhaisimmat plasmapitoisuudet, jotka liittyvät annostelujaksoihin 1–3, olivat koholla 20,6 ± 8,1, 29,6 ± 16,3, 38,0 ± 13 mg/l, vastaavasti. Ero pitoisuuksissa kunkin jakson välillä ei kuitenkaan ollut tilastollisesti merkitsevä (jakso 1 vs. 2 p=0.5, jakso 2 vs. 3 p=0.41)

Muut tulostiedot on esitetty taulukossa 2. Vamman vakavuuden vuoksi 20 prosenttia potilaista tarvitsi munuaiskorvaushoitoa. Sairaalakuolleisuus oli 10 prosenttia. Sairaalasta poistuttuaan 90 prosenttia potilaista ei toipunut V-AKI:sta. Kuudella potilaalla Scr mitattiin päivänä 28 vaurion jälkeen ja neljällä päivänä 90. Päivään 28 mennessä kahdella kuudesta (33 prosenttia) potilaasta oli AKD, mutta yhdelläkään neljästä jäljellä olevasta potilaasta ei ollut AKD päivään 90 mennessä.Munuainenbiopsiat suoritettiin 20 prosentissa V-AKI-tapauksista (taulukko 2).

Ne 12 näytettä, jotka kelpuutettiin analyyseihin sen jälkeen, kun suodatin asetettiin peptidien yhteensovittamiseksi niiden sukulaisspektrien kanssa, sisälsivät yhteensä 2009 proteiinia. Näitä proteiineja analysoitiin edelleen. Ensin suoritettiin pääkoordinaattianalyysi (PCoA) kunkin näytteen kokonaisproteomin vertaamiseksi. Tämä analyysi paljasti merkittävän eron (PERMANOVA p-arvo=0.037) AKI- ja kontrollinäytteiden välillä (kuva 4), mikä toi yhteen systeemisen tason fenotyypin myös eksosomiproteiinitasolla, mikä lisäsi luottamustamme näihin tietokokonaisuuksiin. . Kunkin proteiinin ja V-AKI-statuksen välisen assosiaatioiden vahvuus luokiteltiin käyttämällä pi-arvon metriikkaa, joka yhdistää p-arvon merkityksen kertamuutoksen kanssa [12].

Kuva 4. Proteomikoostumus erottaa V-AKI-potilaiden ja kontrollien virtsan eksosomit. (A) Näytteen proteomien pääkoordinaattianalyysi. Bray-Curtisin etäisyysmetriikkaa käytettiin näyteproteomin välisten erojen laskemiseen, ja pääkoordinaattikaavio esitetään. AKI-näytteiden (punainen) ja kontrollinäytteiden (sininen) välillä havaittiin erottelu akseleilla 1 ja 3. (B) Boxplot, joka tekee yhteenvedon Bray-Curtisin etäisyydestä kontrolli- ja AKI-näytteiden välillä. Kohdassa (A) esitetty AKI- ja kontrollinäytteiden välinen tilastollinen erotus testattiin käyttämällä permutaatioanalyysiä varianssitestillä (PERMANOVA). Boxplotit esitetään yhteenvetona tuloksista, kun verrataan kontrolli- tai AKI-näytteiden etäisyyksiä kontrollinäytteisiin.

Seuraavaksi V-AKI- ja kontrollinäytteiden väliset binäärivertailut tuottivat 42 proteiinia, jotka liittyivät merkittävästi AKI-fenotyyppiin, ja 26 proteiinia, jotka liittyivät kontrollifenotyyppiin (Pi-pisteet > 1) (lisätaulukko S1). Tulivuorikaavio, joka havainnollistaa kuhunkin proteiiniin liittyvää merkitystä ja laskostumismuutosta, on esitetty kuviossa 5A. Tärkeimmät V-AKI-tapausten erottavat proteiinit olivat fibrinogeeni, komplementti C3, komplementti C4, galektiinia{10}}sitova proteiini, alfa{11}}-makroglobuliini, immunoglobuliinin raskas vakiomu ja serotransferriini (kuva 5B). Geenijoukon rikastusanalyysi suoritettiin merkittävien proteiinien kesken V-AKI-potilailla muuttuneiden proteiiniluokkien tunnistamiseksi, ja tulokset on koottu lisätaulukkoon S1. Useilla AKI-fenotyyppiin liittyneillä proteiineilla osoitettiin olevan tulehdukseen sidottuja ja/tai tulehduksellisen fenotyypin välittäjiä. Sen testaamiseksi, voisivatko nämä proteiinimuutokset liittyä taustalla oleviin sytokiinisignaalien muutoksiin, suoritettiin sytokiinipäätelmä, joka osoitti vahvan yhteyden AKI:hen liittyvien proteiinien ja sytokiinien IL10, IL6 ja TNF välillä. Nämä sytokiinit sisälsivät vastaavasti 2,8, 2,3 ja 2{24}}kertaisesti enemmän yhteyksiä AKI:hen liittyviin proteiineihin kuin kontrolliin liittyviin proteiineihin, kuten kuvassa 5C on yhteenveto. AKI-assosioituneiden proteiinien ja pääteltyjen sytokiinien proteiini-proteiini-vuorovaikutusverkostot osoittivat pääasiassa proinflammatorisia yhteyksiä AKI-assosioituneiden proteiinien välillä, kuten on esitetty yhteenvetona kuviossa 5D.

Kuva 5. Proteiinitason assosiaatiot V-AKI:hen. (A) Tulivuorikaavio, joka näyttää kunkin proteiinin kerta-muutoksen ja t-testin merkityksen V-AKI-tilan suhteen. Kymmenen parasta AKI:hen ja kontrollitilaan liittyvää proteiinia on esitetty sinisenä ja punaisena. Muut liittyvät proteiinit, jotka perustuvat Pi-arvoon > 1, on esitetty keltaisina. (B) Jokaiselle proteiinille laskettiin Pi-pisteet, jotka vastaavat sekä kerta-muutoksen että t-testin merkityksestä, ja proteiinit, joilla on vahvimmat assosiaatiot, piirretään kuvaajalle. (C) AKI- tai kontrolliproteiineihin liittyvät topsytokiinit. Käytettiin verkkopohjaista sytokiinien päättelytapaa ja esitetään sytokiinit, jotka osoittavat voimakkaimmat rikastumispisteet joko AKI:n tai kontrolliin liittyvien proteiinien suhteen. Punaiset pylväät edustavat sytokiinejä, jotka liittyvät AKI:hen liittyviin proteiineihin, siniset pylväät edustavat kontrolliin liittyviin proteiineihin liittyviä sytokiinejä. (D) AKI-assosioituneiden proteiinien ja AKI-rikastettujen sytokiinien proteiini-proteiini-vuorovaikutusverkosto. Proteiinisolmujen ulkoreuna on värillinen riippuen assosiaatioista pro- tai anti-inflammatorisiin sytokiineihin. Kunkin solmun koko edustaa kunkin proteiinin tilastollisen yhteyden vahvuutta AKI-tilaan.

Cistanche tubulosavoi hoitaa munuaisvaurioita

3. Keskustelu

Raportoimme uudesta lähestymistavasta virtsan eksosomien käyttämiseksi tiedottamaan patofysiologisista mekanismeista, jotka liittyvät lääkkeiden aiheuttamiinmunuainenvahinkoakäyttäen vankomysiiniä prototyyppisenä munuaistoksisena aineena. Yksi tämän tutkimuksen vahvuuksista on hyvin karakterisoitujen potilastason tietojen sisällyttäminen DIRECT-tutkimuksesta [10], joka on kehitetty selvittämään mekanismeja, mukaan lukien lääkkeiden aiheuttaman genomiikka.munuainenvahinkoa. Koehenkilöt, joilla oli vaihe 2 tai korkeampi AKI, altistettiin tavanomaisille riskitekijöille lähtötilanteessa. Kaikilla koehenkilöillä oli merkittävästi kohonneet vankomysiinin plasmapitoisuudet, vaikka he saivat päivittäisiä annoksia, jotka olivat pienempiä kuin yleisesti hyväksytty munuaistoksisuuskynnys 4 g päivässä [13]. Monet koehenkilöt eivät täysin toipuneet V-AKI:sta sairaalasta poistuessaan, ja heillä oli akuutti munuaissairaus vamman jälkeisen kuukauden ajan. Kuten odotettiin, harvat potilaat saivat munuaisbiopsian.

Virtsan eksosomi/solunulkoinen vesikkeli (EV) proteomiikka osoitti, että V-AKI-tapauksissa kohdennetut erottelevat proteiinit sisälsivät C3-komplementin, C4-komplementin, galektiinia-3-sitovan proteiinin, fibrinogeenin, alfa-2-makroglobuliinin, immunoglobuliinin raskas vakiomuu. ja serotransferriini. Nämä eksosomilöydöt kertovat vauriomekanismeista subsellulaarisella/supramolekyylitasolla V-AKI:lle ja voivat toimia biomarkkereina lääkkeiden aiheuttaman sairausprosessin jatkumossa.

Eksosomeilla, joita esiintyy veressä ja virtsassa, on tärkeä rooli solujen välisessä viestinnässä, koagulaatiossa ja jätehuollossa [14]. Toksiiniin liittyvän akuutin jälkeenmunuainenvahinkoa, tubulaarisista epiteelisoluista vapautuvat eksosomit voivat välittää vauriosignaaleja makrofagien infiltraatioon ja edistää tubulointerstitiaalista tulehdusta [15]. Arvelimme, että eksosomien proteiinipitoisuudet vaihtelevat V-AKI-tapausten ja terveiden kontrollien välillä. Kaksisataaviisikymmentäyksi proteiinia oli säädellyt V-AKI:ssa, ja nämä näyttivät olevan pääasiassa osallisena tulehdus- ja hyytymisreitteissä. Näistä 251 proteiinista analyysimme osoitti, että C3-komplementti, C4-komplementti, galektiinia{7}} sitova proteiini, fibrinogeeni, alfa-2-makroglobuliini, immunoglobuliinin raskas vakiomu ja serotransferriini liittyivät merkittävästi V-AKI-tapauksiin.

Perustuen tuloksiimme, joiden mukaan C3 ja C4 olivat tärkeimpiä erottelevia V-AKI-eksosomiproteiineja, ehdotamme, että komplementtijärjestelmän aktivaatio liittyy vankomysiinin aiheuttamaan munuaistiehyiden vaurioon. Tämä on myös hyvin sopusoinnussa julkaistun kirjallisuuden kanssa, jonka mukaan komplementtijärjestelmän aktivaatiolla on rooli immuunikompleksiglomerulonefriitissä ja monissa munuaissairauksissa [16]. Komplementin aktivaatiovälitteinen munuaisvaurio AKI:ssa iskemian tai nefrotoksiinialtistuksen vuoksi on yhdistetty systeemisiin tulehdustapahtumiin, jotka laukaisevat ja myötävaikuttavat etäiseen elinvaurioon ja potilaiden kuolleisuuteen [17]. Iskemia-reperfuusiovauriomalleissa hypoksia, ATP:n ehtyminen ja mitokondriovaurio johtavat vapaiden happiradikaalien muodostumiseen reperfuusion yhteydessä [18]. Sytokiinit, kemokiinit ja komplementin aktivaatio voimistavat tulehdusta, mikä johtaa akuuttiin tubulusvaurioon. Lisäksi C3a- ja C5a-reseptorin puutteelliset hiiret ovat suojattuja IR-vauriolta [19,20]. IR-vaurion on osoitettu lisäävän komplementin komponenttien paikallista tuotantoamunuainenendoteelisolut ja tubulussolut [16,21]. Useat eläinmalleilla ja ihmisillä tehdyt tutkimukset ovat tunnistaneet komplementtiproteiinituotteiden, kuten C3:n ja C4:n, lisääntyneen kertymisen tubulaariseen tyvikalvoon trauman tai vamman jälkeen.munuainen. Näitä lisääntyneitä kerrostumia ei ole havaittu esiintyvän merkittävästi peritubulaari- tai glomerulusalueella, vaan ne ovat keskittyneet voimakkaasti tubulaariseen kalvoon, kuten ihmisten ja eläinmallimunuaisten biopsioista havaitaan [17]. Eksosomit ja EV:t voivat kuljettaa verenkierron komplementtikomponentteja, kun komplementin aktivaatio ei ole säädelty [22,23]. Useat solukokeet ja kliiniset havainnot ovat vahvistaneet, että vapautuneet EV:t kantavat ja moduloivat komplementtiproteiineja ja samanaikaisesti niiden tuotanto tulehdustilassa pystyy myös vaikuttamaan verenkierron rakkuloiden määrään [23]. Tämä näiden kahden prosessin keskinäinen riippuvuus johtaa johtopäätökseen, että EV:t voivat olla biomarkkerilähteitä, kohteita ja terapeuttisia kuljetusaineita kohti komplementteja ja immunomoduloivia yhdisteitä, jotka ovat erittäin tärkeitä AKI:n tulehdusmekanismien puitteissa. Havaintomme, jonka mukaan V-AKI-näytteet verrattuna terveisiin kontrolleihin, osoittaa immuunivasteiden roolin vankomysiinin suoralle toksisuudelle munuaistiehyissä. Kaiken edellä mainitun proteiinipitoisuuden lisäksi virtsasta peräisin olevat eksosomit/EV:t edustavat myös mahdollisia ei-invasiivisia biomarkkereita vaihtoehtoina munuaisbiopsialle komplementtijärjestelmän roolin havaitsemiseksi ja tiedottamiseksi lääkkeiden aiheuttamissa sairauksissa.munuainenvahinkoa.

Vaikka monet aiemmat tutkimukset (katso tarkempia viittauksia seuraavissa lauseissa) ovat keskittyneet galektiinin-3 (Gal-3) rooliinmunuainenvahinkoa, galektiinia-3 sitovasta proteiinista (Gal-3-bp) on vähän tietoa. Gal-3 ilmentyy munuaisten keräystiehyissä ja toimii edistäen nefrogeneesiä, moduloimaan solu-solu- ja solu-matriisivuorovaikutuksia ja säätelemään tulehdusta [24–26]. Henderson et ai. tarkasteli Gal-3:n roolia tulehduksessa ja havaitsi, että Gal-3 on avaintekijä kroonisessa tulehduksessa ja jos kudosvaurio uusiutuu. Se helpottaa kudosvaurion "eristymistä" ja hidastaa vamman leviämistä [27]. Lisäksi Nishiyama et ai. osoitti rotilla, joilla oli iskeeminen AKI, että Gal-3-mRNA:n säätely oli voimistunut, ja seuraava reperfuusio, immunohistokemia paljasti lisääntyneen Gal{11}}:n nefronisegmenttien välillä [25]. Tsuchiyama et ai. havaitsi, että Gal-3:n antaminen rotille, joilla oli nefrotoksinen seerumin nefriitti, johti virtsan proteiinien erittymisen vähenemiseen, puolikuun muodostumiseen ja makrofagien vähentymiseen glomeruluksiin [28]. Tämä viittaa siihen, että iskeemisen tai immuunivälitteisen vaurion jälkeen Gal{16}} osallistuu regeneraatioon. Gal-3:n sukulaiskumppanina Gal-3-bp:n perustavanlaatuinen rooli ja syy sen lisääntymiseen vankomysiinin ja muiden aineiden aiheuttamassa munuaistoksisessa vauriossa olisivat ehdottoman huomion kohteena tulevissa tutkimuksissa.

Tutkimuksemme havaitsi myös, että fibrinogeenin kaikki kolme alayksikköä ovat säätelemättömiä, mikä on hyvin sopusoinnussa aiemmin julkaistujen tietojen kanssa. Fibrinogeeni on liukoinen dimeerinen plasmamolekyyli, ja jokainen dimeeri koostuu kolmesta polypeptidistä: alfa, beeta ja gamma [29]. Sillä on keskeinen rooli hemostaasissa ja koagulaatiossa, mutta sen on myös osoitettu olevan tärkeä tulehdusvälitteisten tilojen säätelyssä [30–32]. Ajay et ai. osoitti, että fibrinogeenin saatavuus on tärkeää munuaisten toiminnalle, tulehdukselle ja eloonjäämiselle [33]. Lisäksi fibrinogeenilla saattaa olla tarttumista estävä vaikutus munuaisten epiteelisoluihin, mikä voi olla hyödyllistä auttamalla estämään tubulaarista tukkeutumista [34]. Fibrinogeeni lisääntyy ja säätelee merkittävästi AKI:ssa, ja sitä on aiemmin arvioitu mahdolliseksi biomarkkeriksi AKI:n varhaisessa havaitsemisessa [29]. Hoffman ym. tutkivat fibrinogeenin muutosta iskemian/reperfuusion ja sisplatiinin antamisen jälkeen rotilla, ja mRNA:n säätely voimistui 30 minuuttia kahdenvälisen IR-vaurion jälkeen ja saavutti huippunsa 48–72 tunnin kohdalla, kun taas sisplatiinin annossa fibrinogeenin mRNA-ekspressio oli havaittiin 24 tunnin kuluttua [29]. Virtsan fibrinogeeni havaittiin jo 3 tuntia iskeemisen reperfuusiovaurion jälkeen ja 24 tuntia sisplatiinin annon jälkeen, mikä vastaa suurtamunuainenvahinkoamolekyyli 1 (KIM-1) [29].

Cistanchen edut: voi hoitaamunuaisvaurio

Historiallisesti kaksi erilaista V-AKI:n patofysiologista mekanismia on yleisesti hyväksytty, akuutti tubulusnekroosi suorista toksisista vaikutuksista ja akuutti interstitiaalinen nefriitti. Munuaisten proksimaalinen tubulaarinen epiteeli menettää sytoskeletaalisen eheyden, nekroosin ja apoptoosin akuutissa tubulusnekroosissa [35]. Nekroottiset solut vapauttavat molekyylejä, jotka säätelevät luontaista immuunijärjestelmää ja aiheuttavat tulehduksia ja kiihdyttäen tubulusvaurioita [35]. Tässä tutkimuksessa osoitimme tulehdusmarkkereita V-AKI-potilaiden virtsan EV:issä. Lisäksi havaitsimme proinflammatorisen suhteen sytokiinien IL10, IL6 ja TNF ja AKI:tä erottavien proteiinien välillä. Yhdessä nämä tiedot viittaavat siihen, että V-AKI:n patofysiologia johtuu tubulaarisesta toksisuudesta ja tulehduksen lisääntymisestä 24–72 tunnin aikana vaurion jälkeen.

Tutkimuksessamme on useita rajoituksia. Pieni otoskoko, jossa oli 22 potilasta, jotka olivat miehiä ja pääosin valkoihoisia, rajoittaa löydöstemme yleistettävyyttä muihin sukupuoliin, rotuun ja etnisiin ryhmiin. Toinen rajoitus tutkimuksellemme oli, että jokaisen potilaan virtsan eksosominäytteessä oli vaihtelevia määriä kokonaisproteiinia, mikä vaikeutti spesifisten proteiinien mittaamista, etenkin pienempien absoluuttisten määrien osalta. Vaikka tämä ei välttämättä ole tämän tutkimuksen rajoitus sinänsä, koska jokaisen yksilön kyky pakata proteiineja virtsan eksosomeihin on luonnollisesti vaihteleva, joidenkin yksilöiden pienemmät proteiinimäärät rajoittavat kykyämme tehdä lisäanalyysejä ja tehdä merkityksellisiä johtopäätöksiä, jotka ovat yleistettävissä. suurempia populaatioita. Kolmas rajoitus on yksittäisen ajankohdan näyte, joka rajoittaa ymmärrystämme solumuutoksista, jotka tapahtuvat AKI-jatkuvuuden eri vaiheissa, esim. välittömässä vammautumisvaiheessa, korjausvaiheessa jne. Jaksottainen näytteenotto lisää ymmärrystämme eksosomien sisällön aikakulusta. muutokset, lääkkeiden kertymisen aiheuttama oksidatiivinen stressi ja immuunireittien lisääntyminen korjauksessa. Nykyiseen tutkimukseen osallistui potilaita Scr-kynnysten mukaan. Seerumin kreatiniini on epätäydellinen munuaisten toiminnallinen biomarkkeri, koska Scr:n nousut jäävät usein vamman jälkeen [36]. Tämä rajoittaa Scr:n herkkyyttä ja spesifisyyttä havaita varhaisessa vaiheessamunuainenvahinkoa[36], ja tutkimuksia on tullut tunnistamaanmunuainenvahinkoabiomarkkerit, kutenmunuainen vahinkoamolekyyli 1 (KIM1) ja neutrofiiligelatinaaseihin liittyvä lipokaliini (NGAL) munuaistoksisuuden varhaiseen havaitsemiseen [37,38]. Kuten aiemmin on raportoitu, biomarkkereilla on potentiaalia havaita sekä avoimia että subkliinisiä lääkkeiden aiheuttamia tasoja.munuainenvahinkoa[39,40].

4. Materiaalit ja menetelmät

4.1. Potilaan valinta

Virtsanäytteet 10 V-AKI-potilaalta, jotka oli otettu mukaan DIRECT-tutkimukseen [10], ja 12 tervettä kontrollivirtsanäytettä UAB-UCSD O'Brien Centerin biovarastosta, otettiin mukaan analyysiin. Kontrollihenkilöt sovitettiin sukupuolen, rodun ja iän mukaan tutkimushenkilöihin, eikä heillä ollut altistumista vankomysiinille tai tiedossa.munuainenvahinkoa. DIRECT-tutkimus on kansainvälinen tutkimus, jossa tarkastellaan lääkkeiden aiheuttaman farmakogeneettisiä ennustajiamunuainenvahinkoakäyttäen genominlaajuista assosiaatiotutkimusta tapauksista ja populaatiopohjaisista kontrolleista [10]. DIRECT-tutkimuksen hyväksyi institutionaalinen tutkimuslautakunta (IRB #121651), ja kaikilta osallistujilta hankittiin kirjallinen tietoinen suostumus ennen ilmoittautumista, mikä sisälsi tallennettujen näytteiden hyödyntämisen tulevia analyysejä varten. AKI määriteltiin DIRECTissä äkillisesti heikentyneeksi munuaisten toiminnassa, joka osoitettiin jollakin seuraavista kriteereistä: (1) seerumin kreatiniinin (Scr) absoluuttinen nousu (suurempi tai yhtä suuri kuin 0,3 mg/dl tai suurempi tai yhtä suuri kuin 26,4 µmol/ L) (48- tunnin sisällä) Scr-viitearvosta, (2) Scr:n prosentuaalinen nousu 50 prosenttia tai yhtä suuri kuin 50 prosenttia (1,5-kertainen vertailuarvosta) seitsemän päivän sisällä, (3) virtsan väheneminen tulos (dokumentoitu oliguria<0.5 ml/kg/h="" for="">6 h) riittävästä nesteen elvytyksestä huolimatta (4) absoluuttinen Scr:n lasku, joka on suurempi tai yhtä suuri kuin 0,3 mg/dL tai suurempi tai yhtä suuri kuin 26,4 µmol/L (48- sisällä). h aikaikkuna) viite-Scr:stä ja (5) Scr:n suhteellinen lasku 50 prosenttia tai yhtä suuri (1,5-kertainen vertailuarvosta) seitsemän päivän sisällä. Potilaat, joilla oli vaiheen 2 AKI tai korkeampi vankomysiinialtistuksen jälkeen, otettiin mukaan tutkimukseen. Kliiniset tiedot, mukaan lukien väestötiedot, sairaushistoria, fyysisen kokeen löydökset, elintoiminnot, veren ja virtsan kemiat, biopsiatulokset ja lääkeannostustiedot, kerättiin seuraavina ajankohtina: (1) sairaalahoito, (2) vankomysiinihoidon aloitus, ( 3) vamman huippu, (4) lääkkeen lopettaminen tai annoksen pienentäminen, (5) vamman ratkaiseminen, (6) sairaalasta kotiuttaminen, (7) 28 päivää ja (8) 90 päivää vamman jälkeen. Vankomysiinin annostelujakso määriteltiin annoksen tai tiheyden muutokseksi. Akuutti munuaissairaus (AKD) määritellään vaiheen 1 AKI:n tai sitä suuremman jatkumisena, joka on vähintään 7 päivää altistumisen jälkeen [41]. Potilaat, joilla oli AKD, luokiteltiin sairaalasta kotiutumisen yhteydessä, jos AKI-vaihe 1 tai suurempi jatkui ja aika altistumisesta sairaalasta kotiutumiseen oli yli seitsemän päivää. Kaikilta osallistujilta otettiin virtsa- ja kokoverinäytteet. Kaikki V-AKI-tapaukset arvioivat kaksi riippumatonta nefrologia (EM, JC, RL) syy-yhteyden määrittämiseksi. Täydellinen kuvaus menetelmistä on julkaistu aiemmin [10].

4.2. Eksosomien valmistelu ja proteominen tiedonkeruu

Virtsa- ja verinäytteet kerättiin DIRECT-tutkimuksen osallistujilta ja näytteet pakastettiin -80 ◦C:een ennen eksosomin valmistusta. Tässä analyysissä käytetyt virtsanäytteet valittiin aikajaksolta, joka oli lähinnä munuaisvauriota ja vaihteli 24–72 tuntiamunuainenvahinkoa. Eksosomit uutettiin jäädytetyistä AKI-virtsanäytteistä käyttämällä talon sisäistä protokollaa, joka oli kehitetty liuottimen poissulkemisperiaatteen perusteella käyttämällä polyetyleeniglykolin (PEG) indusoimaa saostumista, kuten on kuvattu julkaisussa Rao et ai. äskettäin julkaistu julkaisu [42] -sivu eksosomaalisista proteiineista tehtiin ennen geelitrypsinointia käyttäen NuPAGE bisTris10 % akryyliamidi 12-kuoppageelejä 40 µl:n proteiinin erottamiseksi kontrolli- ja AKI-virtsanäytteiden eksosomeista.

Geeliuutteet yhdistettiin proteolyysin estämiseksi puskuriin, joka sisälsi 75 mM NaCl (Sigma, St. Louis, MO, USA), 3 % natriumdodekyylisulfaattia (SDS, Fischer, Arnold AFB, Tullahoma, TN, USA), 1 mM NaF (Sigma, St. Louis, MO, USA), 1 mM beetaglyserofosfaatti (Sigma, St. Louis, MO, USA), 1 mM beetaglyserofosfaatti (Sigma, Sigma, St. Louis, MO, USA), 1 mM natriumia ortovanadaatti (Sigma, St. Louis, MO, USA), 10 mM natriumpyrofosfaattia (Sigma, St. Louis, MO, USA), 1 mM fenyylimetyylisulfonyylifluoridia (PMSF, Sigma) ja 1 × Complete Mini EDTA vapaa proteaasi-inhibiittoritabletti kaikki 50 mM HEPES:ssä (Sigma, St. Louis, MO, USA), pH 8,5. Proteiinien denaturoimiseksi lisättiin yhtä suuri tilavuus 8 M Ureaa 50 mM HEPES:ssä, pH 8,5, ja koettimen sonikointi suoritettiin käyttämällä kahta 10- s intervallia 25 prosentin amplitudilla. Proteiinit pelkistettiin, alkyloitiin ja sammutettiin käyttämällä ditiotreitolia ja jodiasetamidia, kuten aiemmin on kuvattu [43]. Proteiinit saostettiin lisäämällä trikloorietikkahappoa (Sigma, St. Louis, MO, USA) näytteisiin jäällä ja pelletointi proteiinit sentrifugoimalla 4 ◦C:ssa. Proteiinipelletit pestiin kahdesti jääkylmällä asetonilla. Proteiinipelletit kuivattiin 56 ◦C:ssa 30 minuuttia, sitten suspendoitiin uudelleen 1 M ureaan 50 mM HEPES:ssä, sitten pilkottiin yön yli huoneenlämpötilassa 6 µg:lla LysC:tä (Wako, Richmond, Commonwealth of Virginia, USA), mitä seurasi {{27} }h digestio sekvensointiluokan trypsiinillä (Promega, Fitchburg, WI, USA) 37 ◦C:ssa. Näytteistä poistettiin suola C18 Sep-Paksin kautta ja proteiinit kvantifioitiin [44]. Yhteensä 1,0 ug proteiinia näytettä kohden analysoitiin nestekromatografia-tandem-massaspektrometrialla (LC-MS [2]) käyttämällä 85 minuutin nestekromatografiagradienttia Easy-nLC 1000:lla (Thermo Fischer Scientific, Waltham, MA, USA) kytketty linjaan Orbitrap Fusion -massaspektrometriin (Thermo Fischer Scientific).

Kromatografia suoritettiin kotivedetyllä ja pakatulla 30 cm:n kolonnilla, joka oli kolminkertaisesti pakattu 0,5 cm:llä, 0,5 cm:llä ja 30 cm:llä 5 µm C4, 3 µm C18 ja 1,8 µm C18, vastaavasti, ja lämmitetään 60 ◦C:seen. Peptidit ladattiin ensin 500 baarissa, mitä seurasi kromatografinen gradientti, joka vaihteli 6 - 25 prosentin asetonitriiliä 70 minuutin aikana, mitä seurasi 5-min gradientti 100 prosenttiin asetonitriiliin, jota pidettiin 10 minuuttia. Sähkösumutusionisaatio suoritettiin syöttämällä 2000 V jännite ruostumattomasta teräksestä valmistetun T-liitoksen kautta, joka yhdistää analyysikolonnin ja Easy-nLC-järjestelmän. Jokaista näytettä seurasi kaksi pesua alkaen gradientilla 3 - 100 % asetonitriiliä 15 minuutin aikana ja vielä 10 minuuttia 100 % asetonitriilillä. Varausmassan (m/z) alueella 375–1500 skannattiin peptidejä, joiden varaustilat olivat välillä 2–6. Keskitettyä dataa käytettiin piikkien kvantifiointiin. Hankinta suoritettiin tiedoista riippuvaisessa positiivisen ionin tilassa. Raakaspektrit etsittiin Proteome Discoverer -versiossa 2.1 Homo sapiensin UniProt (www.uniprot.org (käytetty 5. marraskuuta 2017)) -viitetietokantaa vastaan ​​käyttämällä Sequest-algoritmia [18] sekä käänteistä tietokantalähestymistapaa, jota käytettiin peptidien ja väärien löydösten ohjaamiseen. korot (FDR) 1 prosenttiin [17]. In silico trypsiinidigesti hakuparametreissa määritellyllä tavalla kuuden aminohapon peptidin vähimmäispituuden rinnalla. Hakuasetukset sisälsivät myös metioniinien hapetuksen dynaamisen modifikoinnin ja kysteiinien karbamidometylaation staattisen muuntamisen. Esiastemassan toleranssiksi asetettiin 50 ppm ja fragmentin massatoleranssiksi 0,6 Da.

Sen lisäksi, että spektrivastaavat ja proteiinit on rajoitettu<1% fdr,="" peptide="" matches="" were="" further="" screened="" to="" only="" include="" peptide="" spectral="" matches="" (psms)="" identified="" with="" high="" confidence.="" the="" summed="" abundance="" of="" the="" area="" under="" the="" curve="" of="" ms1="" peaks="" associated="" with="" psms="" was="" used="" to="" represent="" protein="" abundances.="" to="" help="" account="" for="" run-to-run="" variation="" in="" lc-ms2="" experiments,="" the="" raw="" protein="" abundances="" were="" next="" normalized="" by="" a="" two-step="" process.="" in="" the="" first="" step,="" protein="" abundances="" were="" divided="" by="" the="" average="" abundance="" of="" a="" given="" protein="" throughout="" the="" experiment="" divided="" by="" the="" median="" of="" the="" protein="" averages="" observed="" throughout="" the="" experiment.="" in="" the="" second="" step,="" the="" adjusted="" protein="" abundances="" were="" divided="" by="" the="" median="" protein="" abundances="" observed="" within="" their="" respective="" samples="" divided="" by="" the="" median="" protein="" abundance="" observed="" in="" the="" entire="" experiment.="" records="" of="" the="" normalization="" and="" analysis="" of="" proteomics="" data="" are="" available="" in="" a="" jupyter="" notebook="" form="" at="">

4.3. Proteomiikkatietojen analyysi

Proteomiikan data-analyysin tietueet ladattiin jupyter-muistikirjamuodossa Githubin arkistoon (käytetty 3.3.2021)). Periaatekoordinaattianalyysi (PCoA) suoritettiin käyttämällä Qiime2:ta (versio 2019-7) [45]. Time diversity core-metrics -komentoa käytettiin näytteiden välisten etäisyyksien laskemiseen käyttämällä Bray-Curtis -metriikkaa ja visualisoimiseen PCoA:ta. Kontrolli- ja V-AKI-näytteiden välisten etäisyyksien tilastollinen analyysi suoritettiin käyttämällä parikohtaista PERMANOVA-testiä komennolla "qiime diversity beta-group significance". Näistä tuloksista luotiin boxplot-visualisaatio seaborn-paketin kautta (käytetty 3.3.2021)). V-AKI-tapausten ja kontrollihenkilöiden binaariset vertailut suoritettiin käyttämällä scipy-pakettia ((saatu 3. maaliskuuta 2021)) käyttämällä riippumatonta t-testiä, jonka varianssi oli epätasainen. Kunkin proteiinin ja V-AKI-statuksen välisen assosiaatioiden vahvuus luokiteltiin käyttämällä pi-arvon metriikkaa, joka yhdistää p-arvon merkityksen kertamuutoksen kanssa [12]. Kuten aiemmin kuvattiin [46] korkeimmalle, merkittäville assosiaatioille määriteltiin pi-arvo > |1|. Jokainen proteiinin assosiaatio V-AKI-statukseen piirrettiin tulivuoren kuvaajaan, jotta korostettiin edelleen parhaiden-10 proteiinien sijaintia. Geenijoukon rikastusanalyysi suoritettiin käyttämällä DAVID-palvelinta [47], jossa verrattiin merkittäviä proteiineja (pi-arvo > |1|) kaikkien tietojoukossa tunnistettujen proteiinien taustaan. Liittyvien toiminnallisten rikastusten klusterit on raportoitu lisätaulukossa S1.

To test for a relationship between V-AKI-associated proteins and inflflammatory cytokines, a recently developed network-based cytokine inference approach was utilized [48]. Briefly, a list of cytokines (TGFb, TNF, IFN, IL1-40, CXCL1-16, CCL1-27) was submitted alongside signifificantly altered proteins (pi-value > |1|) to the STRING-db tool [49]. Connections between proteins were determined using all interaction sources and a minimum interaction score >0.4. Sytokiinit suodatettiin ensin, jotta niillä oli vähintään viisi yhteyttä merkittävästi muuttuneisiin proteiineihin. Sitten kunkin sytokiinin ja V-AKI:hen liittyvien tai kontrolliin liittyvien proteiinien välisten yhteyksien osuutta verrattiin V-AKI:n tai kontrolliin liittyvien proteiinien välisten yhteyksien kokonaismäärään. Jotta voitaisiin ottaa huomioon erot kunkin sytokiinin ja muiden proteiinien välisten yhteyksien lukumäärässä, tätä arvoa verrattiin seuraavaksi kunkin sytokiinin yhteyksien lukumäärään kaikkiin merkittävästi muuttuneisiin proteiineihin. Valittujen sytokiinien rikastumispisteet piirrettiin niiden assosiaatioiden perusteella joko V-AKI- tai kontrolliin liittyvien proteiinien kanssa. Lopuksi, tarkennettu haku V-AKI-assosioituneista proteiineista ja sytokiineista, joilla on rikastettuja yhteyksiä V-AKI:hen liittyviin proteiineihin, visualisoitiin niiden vuorovaikutuksille käyttämällä Cytoscape-versiota 3.5.1 [50]. Proteiini-proteiini-vuorovaikutusverkostot koristeltiin kokoamalla kukin V-AKI-assosioitunut proteiini sen pi-pistemäärän mukaan, joka liittyi V-AKI-statukseen, ja värjättiin siten, että niillä oli päätelty yhteys rikastettuihin sytokiineihin, joilla oli tulehdusta edistäviä tai anti-inflammatorisia vaikutuksia.

lohikäärmeyrtit cistanchevoi hoitaamunuaisvaurio

5. Johtopäätökset

Pyrimme ymmärtämään paremmin V-AKI:n vauriomekanismia kliinisesti arvioiduista tapauksista, ja mielenkiintoisella tavalla havaitsimme komplementin, galektiinia -3 sitovan proteiinin ja fibrinogeenin liittyvän merkittävästi V-AKI:hen. Aiempien ja meidän tutkimusten tulokset viittaavat komplementtijärjestelmän ja tulehdusreittien rooliin V-AKI:ssa. Vaikka tarvitaan suurempia tutkimuksia vankomysiinin aiheuttamien vaurioiden molekyyliprosessien ja sitä seuranneiden korjausreittien validoimiseksi, tulokset osoittavat, että virtsan eksosomit voivat antaa tärkeää tietoa patofysiologisista mekanismeista ja toimia biomarkkereina lääkkeiden aiheuttamille vaurioille.munuainenvahinkoa.

Tekijän panokset:

Käsitteellistäminen, LA ja SPR, metodologia, SV, SPR, DJG, RM; ohjelmistot, DJG, RHM, muodollinen analyysi, LA, AL, RHM; tutkinta, AL, JA, VJ, SB, MC-T., PN; kirjoittaminen – alkuperäisen luonnoksen valmistelu, AL, JA, VJ, LA; kirjoittaminen – arvostelu ja editointi, RHM, DJG, MC-T., AT, AA, JC, MSJ, EM, RM, PN; valvonta, SV, SPR; projektin hallinto, LA; rahoituksen hankinta, LA Kaikki kirjoittajat ovat lukeneet käsikirjoituksen julkaistun version ja hyväksyneet sen.

Rahoitus:

Tämän tutkimuksen rahoitti International Serious Adverse Events Consortium. MCT:tä tuki T32-koulutusapuraha DK007202.

Institutional Review Boardin lausunto: Tutkimus suoritettiin Helsingin julistuksen ohjeiden mukaisesti ja Kalifornian yliopiston Institutional Review Boardin (tai Ethics Committeen) hyväksymä San Diego Human Subjects Research Protections Program (IRB#121651).

Ilmoitettu suostumus: Tietoinen suostumus saatiin kaikilta tutkimukseen osallistuneilta koehenkilöiltä

Kiitokset:

Haluamme kiittää SUORIEN tutkijoiden panoksesta: Dinna Cruz, Stuart Goldstein, Patrick Murray, Andrew Davenport, Andrew Lewington, DavidSelewski, Michael Zappitelli, Marlies Ostermann, Li Yang, Bhavna Pandya, Patrick Brophy, DanielaPonce, Julia Steinke, Josee Bouchard, Carlos Irarrazabal, David Askenazi, Nitin Kolhe, RolandoClaure-Del Granado, Nadine Benador, Clare Castledine, Jonathan Barratt, Sunil Bhandari, AlyssaRiley, Ayse Akcan-Arikan, TK Davis, Christopher Farmer, Mark Thomas, Fred Pang , Hansjoerg Rothe.

Eturistiriitoja:

Kirjoittajat ilmoittavat, että ne eivät ole eturistiriitoja.

Lähde: " Virtsan eksosomit tunnistavat tulehdusreittejä vankomysiiniin liittyvässä akuutissa munuaisvauriossa", Linda Awdishu

---Int. J. Mol. Sci. 2021, 22, 2784