Tieteellinen perusta Cistanchen uudelle sovellukselle

Yhteystiedot: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Sähköposti:audrey.hu@wecistanche.com

Sun Weidong1, Chen fei2, Sun yun2

(1. Yangzhou Hospital of Traditional Chinese Medicine, Yangzhou 225009, Jiangsu; 2. School of Medicine, Yangzhou University, Yangzhou 225001, Jiangsu)

TIIVISTELMÄ: Eturauhasen liikakasvun (BPH) rottamalli perustettiin, ja kolmea akteosidiannosryhmää annettiin suun kautta 4 viikon ajan, jotta tutkittiin tislatun akteosidin vaikutusta.Cistanche tubulosaapoptoosista ja ultramikrorakenteen eturauhasesta rotilla, joilla on BPH. Eturauhasen ultrarakenteen muutos havaittiin transmissioelektronimikroskoopilla. Tulokset osoittivat, että rotan normaalin eturauhasen apoptoosi ei ollut ilmeinen, se oli alhainen

eturauhasen apoptoosin määrä malliryhmässä, suuren annoksen akteosidistaCistanche tubulosaHoidossa rotan eturauhasen apoptoosi oli merkittävästi korkeampi kuin mallissa.

AVAINSANAT:Cistanche, Cistanche tubulosa, akteosidi; rotta; alkaa eturauhasen liikakasvu; apoptoosi; ultrarakenteinen

Yrtti Cistanche

Hyvänlaatuisen eturauhasen liikakasvun (BPH) prosessissa solujen apoptoosi on yksi mekanismeista, jotka tällä hetkellä herättävät huomiota. Geenikoodaus määrittää sen ja antaa soluille mahdollisuuden hallita ohjelmoitua solukuolemaa reagoimalla tiettyihin signaaleihin.

Kun eturauhanen kehittyy aikuisen kokoiseksi, eturauhassolujen proliferaationopeus pidetään 1-2 prosentissa apoptoosin keskimääräisen nopeuden tasapainon avulla. Kun tasapaino on rikki, sen katsotaan olevan BPH:n syy. Normaaleissa olosuhteissa estrogeenin ja androgeenin tasot ja normaali verenkierto eturauhasessa ovat eräänlainen itsetasapainotila, joka esiintyy lisääntymis- ja apoptoosin prosessissa. Kun proliferaation ja apoptoosin välinen tasapaino on epätasapainossa, se johtaa rauhasen lisäkasvuun ja laajenemiseen, mikä pääasiassa aiheuttaa epiteelisoluosaston laajenemisen [1].

Tässä kokeessa loimme rotan eturauhasen liikakasvun mallin havainnoimaan ja analysoimaan akteosidin (yhteiskuntaa muistuttavan glykosidin) vaikutusta, joka on yksi kemiallisista komponenteista.Cistancherotan eturauhassolujen apoptoosiin ja ultrarakenteellisiin muutoksiin, akteosidin vaikutuksen arvioimiseksi Eturauhasen liikakasvua estävä vaikutus tarjoaa tieteellisen perustan kiinalaisen lääketieteen Cistanchen uusien käyttömuotojen kehittämiselle ja hyödyntämiselle.

Cistancheottaa talteen

1 Materiaali ja menetelmät

1. 1 koe-eläin

Viisikymmentä urospuolista SD-rottaa, joiden ikä on 6-7 viikkoa, puhdas, paino 80-100 g, on saatu Yangzhoun yliopiston vertailevan lääketieteen keskukselta.

1. 2 Reagenssit ja lääkkeet

Testosteronipropionaatti-injektio on Shanghai General Pharmaceutical Co., Ltd.:ltä, erittely on 25 mg·mL-1 ja eränumero on 060708. PI-väriaineliuos on Yangzhoun yliopiston testauskeskuksesta. Aktisiden pitoisuus on 945 g·kg^-1, jonka on laatinut Kiinan lääketieteellisen yliopiston kiinalaisen lääketieteen analyysin laitos.

1. 3 Koelaitteisto

Philips Tecnai 12 transmissioelektronimikroskooppi on Philipsiltä Alankomaista; FACSAria-virtaussytometri on BD:stä Yhdysvalloista.

1. 4 Ryhmittelyt ja mallintaminen

Kirjallisuuden menetelmän [3] mukaisen kastraation jälkeen rotille injektoitiin 5 mg·(kg·d)^-1testosteronipropionaattia rottien selkään 4 viikon ajan eturauhasen liikakasvun mallin luomiseksi. Mallirotat jaettiin satunnaisesti malliryhmiin: malli plus akteosidi suuren annoksen ryhmä, malli plus akteosidi keskiannoksen ryhmä, malli plus akteosidi pieniannoksinen ryhmä, kymmenen rottaa kussakin ryhmässä; toiset kymmenen normaalia rottaa olivat kontrolliryhmänä.

1. 5 Antotapa

Viikko mallintamisen jälkeen akteosidia saaneille suuri-, keski- ja pieniannoksisille ryhmille annettiin 60, 30, 15 mg·(kg·d)-1 letkuruokinnalla, vastaavasti. Malliryhmälle ja kontrolliryhmälle laitettiin yhtä suuri määrä normaalia suolaliuosta kerran päivässä neljän viikon ajan, punnittiin kerran viikossa ja annosta säädettiin kehon painon mukaan.

1. 6 Näytteenotto ja käsittely

1) Materiaalin ja näytteen valmistus: 24 tuntia viimeisen annon jälkeen punnitaan paastorotat ja tapetaan rotat kaulasijoilla. Avaa heti alavatsa, kuori irti eturauhasen ympärillä olevat kudokset, vapauta eturauhanen ja ota osa eturauhasesta käytettäväksi jääkylvyssä. Kudoshomogenisaattori homogenisoitu, valmistettu eturauhasen yksisolususpensio ja värjätty propidiumjodidin yksivaiheisella menetelmällä [4]; toinen osa eturauhaskudosta kiinnitettiin 25 g·l-1 glutaraldehydissä ultraohuiden leikkeiden valmistamiseksi.

2) Valmista yksisolususpensio: Poista aseptisissa olosuhteissa rotan eturauhanen kokonaan ja siirrä se petrimaljaan, pese veri ja verihyytymät eturauhaskudoksen pinnalla PBS:llä ja poista ympäröivä rasva, ylimääräiset kuidut, ja solukalvot. Samasta rotan eturauhasesta tuoretta eturauhaskudosta, jonka koko on noin 0,5 cm³otettiin ja leikattiin paloiksi eturauhassolususpension valmistamiseksi [5]. Aseta eturauhasen kudoslohko petrimaljaan ja lisää pieni määrä PBS:ää; leikkaa kudos silmäsaksilla jäähauteessa, jauha homogenisaattori suspensioksi, lisää 10 ml PBS, pipetoi kudoshomogenaatti ja käytä 0,074 mm:n huokoskoon nylonverkkoa, suodatettiin koeputkeen, sentrifugoitiin klo 1 500 r min^-13 minuuttia, ja sakka pestiin kolme kertaa PBS:llä, joka kerta nopeudella 500 r min.^-1lyhytaikainen hidas sentrifugointi solujätteen poistamiseksi, huokoskoon 0,037 mm nylonverkkosuodattimeen solupaakkujen poistamiseksi. Laske solut ja säädä solukonsentraatioksi 2 × 109 solua × litraa^-1. Värjää 1 ml:lla PI-värjäysliuosta, suojaa valolta 4 asteessa 10 min.

3) Ultraohutleikkeen valmistelu: Katso ultraohuen kudosleikkeen valmistelusta kirjallisuus [6].

2 Tulokset ja analyysi

Kuva 1 BPH-rottamallin apoptoosi ja akteosidin indusoitu vaikutus

a. Normaali ryhmä; b. Malliryhmä; c. Akteosidi suuren annoksen ryhmä; d. Pienen annoksen akteosidiryhmä

2. 1 Akteosidin vaikutus rotan eturauhasen apoptoosiin

Kuvio 1 esittää virtaussytometrillä havaittua apoptoosin huippua, joka osoittaa, että akteosidilla on pro-apoptoottinen vaikutus. Soluapoptoosin tulosten tilastollinen analyysi osoitti, että rotan solujen apoptoosinopeus kasvoi merkittävästi (24,7 ± 1,85) prosenttia ja (16,1 ± 1,{12}}4) prosenttia käsittelyn jälkeen suurilla, keskisuurilla ja pienillä annoksilla. akteosidi. , (14,5±0,68) prosenttia ja normaaliryhmä (1,1±{{20}},06) prosenttia , malliryhmä (9,5±0,5) prosenttia , positiivinen ryhmä (9,83±) 0,76) Ero prosenttivertailussa on merkittävä (P<0.01), indicating="" that="" aktidine="" can="" induce="" cell="" apoptosis,="" the="" effect="" is="" stronger="" than="" that="" of="" the="" positive="" control="" drug="" qianliekang="" (figure="">

Kuva 2 Apoptoosin radioaktiivisuus BPH-rottamallissa ja akteosidin vaikutus

2.2 Akteosidin vaikutus eturauhasen liikakasvun solujen ultrarakenteeseen.

Elektronimikroskoopilla tehdyt havainnot osoittavat, että normaalissa rotan eturauhasessa on täydelliset ytimet, ilmeisesti nukleolit ​​ja tasainen tumakromatiinijakauma; karkea endoplasminen verkkokalvo on samankokoinen, siististi järjestetty eikä siinä ole tyhjiötä. Epiteelin pinnalla ei ole sormimaisia ​​mikrovilloja, mitokondrioiden turvotusta ei ole, ja ontelossa on vähän eritteitä. Malliryhmän eturauhassolujen tumat olivat epämuodostuneita ja kutistuneet, ja sytoplasma oli runsas. Karkea endoplasminen retikulumi laajennettiin kystamaiseen muotoon ja kysta täytettiin tiheästi proteiinihiukkasilla. Mitokondriot olivat hieman turvonneet (myös tyhjiä oli), Ontelossa on keskitiheyksiä eritteitä ja joistakin soluista löytyi tiiviitä pyöreitä eritteen rakeita. Akteosidilla hoidetuilla rotilla tuma oli ehjä verrattuna malliryhmään. Ydin konsentroitiin, tuman tiheys lisääntyi, heterokromatiini kerääntyi, sytoplasmassa oli tyhjiöitä ja karkeat endoplasmisen retikulumin vakuolit vähenivät. Pienen annoksen akteosidiryhmässä oli hieman ryppyisiä ytimiä Kutistuminen, epäsäännöllinen, rikkaampi sytoplasma ja vähentynyt karkea endoplasminen verkkokalvo (kuva 3).

Cistanchen edut: anti-Apoptoosi

3 Keskustelu

Apoptoosi on ohjelmoitu solukuolema monisoluisissa organismeissa, joka säätelee kehon kehitystä ja ylläpitää sisäisen ympäristön vakautta, ja geneettiset koodit määräävät sen.

Apoptoottisilla soluilla on ainutlaatuiset morfologiset ja biologiset ominaisuutensa: tuman kromatiinin kutistuminen, DNA:n laaja hajoaminen ja fragmentoituminen, solujen täysimittainen kutistuminen, solukalvojen kutistuminen ja organelleja (kuten mitokondrioita ja ribosomeja) peittävien ulkonemien kutistuminen sekä tyypillisten tumakalvojen muodostuminen fragmentit Apoptoottiset kappaleet, apoptoottiset solut eivät ainoastaan ​​säilytä täydellisen solukalvorakenteen ja toiminnan, vaan niillä on myös täydellinen organellien rakenne, joka eroaa solunekroosista.

Soluapoptoosin molekyylimekanismia ei ole toistaiseksi täysin selvitetty. Tutkimukset [7] ovat osoittaneet, että solujen apoptoosin geenisäätelyyn osallistuu monia geenejä.

Apoptoosi on prosessi BPH herättää tällä hetkellä enemmän huomiota. Se määräytyy geenin koodauksen perusteella, ja sen avulla solut voivat hallita solukuolemaa reagoimalla tiettyihin signaaleihin [1]. Kun eturauhanen kehittyy aikuisen kokoiseksi, eturauhasen solujen lisääntymisnopeus pysyy 1-2 prosentissa apoptoosinopeuden tasapainon avulla. Tämän tasapainon tuhoamista on aina pidetty BPH:n syynä [8]. Normaaleissa olosuhteissa estrogeenin ja androgeenin taso ja säännöllinen verenkierto eturauhasessa ovat eräänlainen itsetasapainotila, joka esiintyy lisääntymis- ja apoptoosin prosessissa. Kun proliferaatio ja apoptoosi ovat epätasapainossa, se saa rauhaset kasvamaan ja laajenemaan edelleen, pääasiassa epiteelisoluosaston laajenemisen vuoksi [9]. Tämän tasapainon katkeaminen voi johtua muutoksista androgeenitasoissa tai toiminnoissa; se voi myös johtua DHT:n AR-stimulaation tuottamasta vasteesta tai DHT-välitteisen kasvutekijätason muutoksista [2]. Tässä tutkimuksessa FCM havaitsi solujen apoptoosin ja havaitsi, että eturauhassolujen apoptoosinopeus rotilla, joille annettiin suuria annoksia akteosidia, kasvoi merkittävästi. Elektronimikroskopiatulokset osoittivat, että malliryhmän eturauhassolujen tumat olivat epämuodostuneita, karkea endoplasminen verkkokalvo oli voimakkaasti laajentunut kystamaiseen muotoon ja kysta oli täynnä tiheitä proteiinipartikkeleita ja havaittiin vakuolaatiota. Mitokondriot olivat lievästi turvonneet, ja niihin liittyvät tutkimukset[ 10-11 ] Raportti on johdonmukainen.

Rottien eturauhasen liikakasvun aste oli akteosidihoidon jälkeen pienempi. Suuren annoksen saaneessa ryhmässä ilmeni myös varhaisia ​​merkkejä apoptoosista: eturauhassolujen tuma säilyi ehjänä ja endoplasmisen retikulumin vakuolit olivat merkittävästi pienempiä. Tumien kondensaatio, lisääntynyt tuman tiheys, heterokromatiinin kertyminen, samanlainen kuin eturauhaskudossolujen karakterisointi rotilla kastraation jälkeen [12-13]. Se osoittaa, että akteosidi alkaencistanchevoi indusoida solujen apoptoosia rotilla, joilla on eturauhasen liikakasvu, säätelee ja palauttaa eturauhasen solujen apoptoosin ja proliferaation tasapainoa ja vaikuttaa eturauhassolujen lisääntymisen estämiseen. Tämän tutkimuksen ja aiempien tutkimusten [14] tulokset osoittavat, että akteosidin, joka on kemiallinen komponentti, estävä vaikutus.Cistanche tubulosaEturauhasen liikakasvu voi liittyä sen soluapoptoosin edistämiseen, AR:n ja TGF-UR1:n yli-ilmentymisen vähentämiseen. Yksityiskohtaista vaikutusmekanismia on vielä tutkittava.

Cistanchen hyöty: parantaa vastustuskykyä

Viitteet:

[1] Giacomo N, Antonio G, Ra fa el BB, et ai. Tulehdus, apoptoosi ja BPH, mikä on todiste [J]. European Urology Supplements, 2006(5): 401-408.

[2] Auton poika IC, Rittmaster R. Dihydrotestosteronin rooli hyvänlaatuisessa eturauhasen liikakasvussa [J]. Urology, 2003, 61: 2-7.

[3] Xu Shuyun, Bian Julian, Chen Yuxiu. Farmakologisen kokeen metodologia[M]. 3. painos. Peking: People's Medical Publishing House, 2002: 1552-1553.

[4] Zhai Qiwei, Ji Hongbin, Yan Mingda et ai. Tet-off-indusoituvan ekspressiojärjestelmän käyttäminen Akt[J]:n toiminnan tutkimiseen. Chinese Science Bulletin, 2000, 45( 16): 1738-1741.

[5] Xia Anzhou, Xing Shuhua, Zhu Xuewen et ai. Vertaileva tutkimus munuaiskudoksen yksisolususpension valmistusmenetelmistä [J]. Journal of Xuzhou Medical College, 2004, 24(1):50-53.

[6] Sun Yun, Wang Dejun, Liu Xiaomei et ai. Keuhkojen ultrarakenteen muutokset kokeellisissa ikääntymishiirissä ja Cistanche deserticola -polysakkaridin vaikutus [J]. Chinese Pharmacological Bulletin, 2002, 18(1): 84-87.

[7] Liu Qingming, Lu Mingzhi. Eturauhasen hyvänlaatuisen liikakasvun soluproliferaation ja apoptoosin patogeneesin tutkimus on edistynyt [J]. Jiangxi Medical Laboratory Science, 2005, 23(2): 141-143.

[8] Sharia t SF, Ashfaq R, Roehrborn CG, et al. Surviviinin ja apoptoottisten biomarkkerien ilmentyminen hyvänlaatuisessa eturauhasen hyperplasmassa [J]. J Urol, 2005, 174: 2046-2050.

[9] Unter G, Madersbacher S, Berg er P. Eturauhasen hyvänlaatuinen liikakasvu: ikään liittyvä kudosremodeling [J]. Exp Gerontol, 2005, 40: 121-128.

[10] Zheng Heng, Shao Chunli, Qian Jiaqing. Hydrokloridin estävä vaikutus eturauhasen liikakasvuun rotilla [J]. Journal of Tongji Medical University, 1999, 28(3):227-229.

[11] Zhong Wei, Qiu Shudong, Jiang Sailing. Hyvänlaatuisen eturauhasen liikakasvun morfologiset muutokset ja ARmRN A:n ilmentymisen ero [J]. Journal of Xi'an Medical University, 1999, 20(2): 145-149.

[12] Niu Yuanjie, Dong Kequan, Bai Jingwen ym. Dynaamiset patologiset muutokset koiran eturauhasessa kastraation jälkeen [J]. Chinese Journal of Urology, 1998, 19(7): 429-433.

[13] Ye Zhangqun, Lan Ruzhu, Zhou Yusheng et al. Dynaamiset muutokset rotan vatsan eturauhasen mikrorakenteessa kastraation jälkeen[ J]. Chinese Journal of Urology, 2001, 22(8): 468-472.

[14] Sun Weidong, Chen fei, Sun Yun. Aktisiden estovaikutus kokeellisessa hyvänlaatuisen eturauhasen liikakasvun mallissa [J]. Yangzhoun yliopiston lehti: Maatalous ja biotieteet

Painos, 2008, 29(3): 55-58.