Onko cistanche-kokonaisglykosidilla vaikutuksia hajuaistiin?

Ottaa yhteyttä:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Cistanche-kokonaisglykosidien vaikutus rotan hajua suojaaviin soluihin ja niiden neurotrofisten tekijöiden erittymiseen

Li Chuangfeng, Guo Jinyu, Zhang Xu, Liu Yunnan

Selkäydinvamma (SCI) on vakava keskushermoston vammahermosto, mikä vastaa {{0}},2 prosenttia –0,5 prosenttia kokonaistraumasta. Selkäydinmurtumista 16–40 prosenttia monimutkaistaa selkäydinvamma, joka usein aiheuttaa vakavan vamman, mikä johtaa jokapäiväisen elämän vaikeuksiin, jotka vaikuttavat potilaiden elämänlaatuun ja aiheuttavat suuren taakan perheelle ja yhteiskunnalle.HajuEnsheathing solut (OEC) ovat erityinen hermoliima. Plasmasolut voivat siirtyä aivoihinhaju-hermoaksonit ja voivat erittää monia kasvutekijöitä, kuten NGF, GDNF, BDNF, NT-3, neuropeptidi-Y ja S-100. Näiden ominaisuuksien vuoksihaju-ensheaching soluja, OEC:itä pidetään yhtenä lupaavista siemensoluista solunsiirtoon SCI:n korjaamiseksi. Tällä hetkellä SCI:n hoito kuntoutuslääketieteen alalla perustuu pääosin kokonaisvaltaiseen kuntoutukseen. Tehokkaamman menetelmän löytämiseksi on tehty seuraava tutkimus vaikutuksestacistanchekaikki yhteensäglykosiditOEC:issä:

Cistanche-kokonaisglykosidi hajua suojaaville soluille

1 Materiaali ja menetelmät

1.1 Kokeellinen materiaali

Wistar-rotta (Sisä-Mongolian yliopiston Animal Centerin tarjoama);cistanchekaikki yhteensäglykosidit, DMEM/F12-elatusaine, sikiön vasikan seerumi (FCS), poly-D-lysiini, arabinosidi (Ara-C), trypsiini, D-Hanks-liuos, kanin anti-p75NGFR (Santa Cruz), ELISA-pakkaus (Promega), soluinkubaattori (Thermo-HEPA Class 100), käänteinen vaihekontrastimikroskooppi (Olympus CKX41, Japani), erittäin puhdas työpöytä (Suzhou Antai Air Technology Co., Ltd.) Yritys, SW-CJ-2FD), entsyymi etikettianalysaattori (Wellscan MKH), virtaussytometri jne.

1.2 Tutkimusmenetelmät

1.2.1 OEC:n viljely, puhdistus ja tunnistaminen: Wistar-rotat lopetettiin katkaisemalla ja liotettiin viinissä 5 minuuttia. Etukallo avattiin paljastamaanhaju-polttimo. Kaksihaju-sipulit poistettiin kokonaan dissektoivalla mikroskoopilla. Pese D-Hanks-liuoksessa; leikkaahaju-sipuli mikrokirurgisilla saksilla, lisää 2 ml 0,25 prosenttia pankreatiinia ja inkuboi 37 asteessa 20 minuuttia; lisää 2 ml:n sentrifugiputkeen D MEM/F12-viljelyelatusainetta, joka sisältää 10 prosenttia vasikan seerumia. Digestointi lopetettiin keskeltä; väyläpipetti aspiroi epätäydellisesti digestoituneen kudoksen nopeudella 800 rpm ja sentrifugoitiin 5 minuuttia, supernatantti heitettiin pois; Lopuksi käytetty käsitelty väliaine (20 % FCS plus 20|i, mol/LForskolin plus 20|ig/mlBPE plus DMEM/F12) Tee siitä lx 107 ml yksisolususpensio, ymppää se polylysiinillä päällystettyyn soluviljelypulloon, aseta se 37-asteisessa, 5-prosenttisessa CO2-inkubaattorissa ja lisää sitten Arac Puhdistus suoritettiin 36 tunnin kohdalla. Käytä kanin anti-p75E- ja FITC-leimattua vuohen anti-kanin IgG-sekundaarista vasta-ainetta immunohistokemialliseen solutunnistukseen ja fluoresenssimikroskooppitarkkailuun.

1.2.2 Käytä MTT:tä ja virtaussytometriaa määrittääksesi vaikutuksencistanche yhteensä glykosiditpäällähaju-solujen suojaaminen: siirrosta viljellyt ja puhdistetuthaju-vaippaa solut 96-kuoppalevyyn koolla 1X106 ja lisääcistanche yhteensä glykosidit(vaikutuspitoisuudet ovat Ijig/ml, 10 mg/ml, 100 mg/ml), mittaa OD-arvo ja mittaa solun virtaussytometria 24 tunnin vaikutuksen jälkeen. Määritä ohjausryhmä jaCistanche-glykosiditeri konsentraatioryhmät: Ryhmä A (kontrolliryhmä): Seerumia sisältävää viljelyalustaa käytetään negatiivisena kontrollina; Ryhmä B (cistanche yhteensä glykosiditalhainen konsentraatioryhmä: llig/ml); Ryhmä C (Cistanche-glykosidien kokonaisglykosidiväliainepitoisuus Ryhmä: L10jxg/MK); Ryhmä D (cistanche yhteensä glykosiditkorkean pitoisuuden ryhmä: 100|xg/ml): 15 rottaa kussakin ryhmässä.

1.2.3 Neurotrofisen tekijän pitoisuuden määrittäminen supernatantista ELISA:lla: siirrosta viljelty ja puhdistettuhaju-solujen suojaaminen 6-kuoppalevyllä 1x106, lisääcistanche yhteensä glykosidit(sama pitoisuus kuin yllä) 24 tunnin kuluttua ja toimi 24 tuntia ja kerää supernatantti erikseen, tallennettu -80 Long. Nesteen hermokasvutekijöiden pitoisuus määritettiin ELISA-menetelmällä.

1.3 Tilastollinen analyysi

Tämän tutkimuksen tietoja käsitellään mittaustietoina ja saadut tiedot ilmaistaan ​​keskiarvona ± keskihajonna, ja tilastolliseen analyysiin käytetään SPSS 11.{1}} tilastollista ohjelmistoa. Saadut tiedot analysoidaan varianssianalyysillä ja P<0.05 indicates="" that="" there="" is="" a="" significant="">

2 tulosta

2.1 Vaikutuscistancheglykosidit yhteensä päällähaju-vaippaavat solut

2.1.1 Metyylioksatsolyylitetratsolimenetelmän (MT) määritystulokset: Ryhmä A: 0.617±0.149; Ryhmä B: 0.589±0.147; Ryhmä C: 0.761±0.138; Ryhmä D: 0.732±0.234. Vertailu välilläCistanche-glykosidit group (B) and Control group (A), P>0.05, ero ei ollut merkittävä;Cistanche-glykosidit10 mg/ml, 100 mg/ml pitoisuusryhmä (C, D) verrattuna kontrolliryhmään (A) P<0.05, the="" difference="" is="">

2.1.2 Virtaussytometrisen määrityksen tulos on esitetty kuvassa 1. Verrattuna kontrolliryhmään,cistanche yhteensä glykosiditryhmä oli korkeampi kuin kontrolliryhmä, ja apoptoottisten solujen prosenttiosuus oli pienempi kuin kontrolliryhmä.

2.2 Entsyymi-immunosorbenttimäärityksen (ELISA) tulokset

Testitulokset osoittivat, että gliasolulinjasta peräisin olevan neurotrofisen tekijän (GDNF) pitoisuus: ennen annostusta: 302,1±16,6 pg/ml, ryhmä A: 340,5±13,2pg/ml; ryhmä B: 333,2 ± 23,6 pg/ml; Ryhmä C: 355,2 ± 17,6 pg/ml; ryhmä D; 379,2±15,3 pg/ml. Verrattuna esiantoon GDNF-pitoisuus kasvoi merkittävästi; verrokkiryhmään (A) verrattuna GDNF-sisältöönCistanche-glykosidit100 mg/ml konsentraatioryhmä (D) kasvoi merkittävästi.

3 Keskustelu

Aksonien regeneraation vaikeus on yksi tärkeimmistä syistä, miksi selkäydinvamman jälkeen on vaikea toipua. OEC:illä on rooli keskushermosolujen aksonien regeneroinnissa, joita muun tyyppisiä soluja on vaikea korvata. Viime vuosina on tutkittuhaju-vaippasoluista on tullut kuuma piste.Hajuvaippasolut ovat erityinen gliasolujen tyyppi, jolla on Schwann-solujen ja astrosyyttien ominaisuudet. Ne ovat peräisinhaju-tyvikalvo ja ovat laajalti levinneet pintaanhaju-limakalvo,haju-hermo jahaju-polttimo. Sillä on kyky jakautua ja uudistua koko elämän ajan ja se voi olla mukanahaju-hermoaksonit siirtymään aivoihin. Aksonithaju-hermo voi kulkea ääreishermoston ja keskushermoston välisen liitoksen läpi 30-60 päivän välein, kasvaa uudelleenhaju-suojata ja muodostaa synaptisia yhteyksiä4.Hajuvaippasolut voivat erittää monia kasvutekijöitä, kuten NGF, BDNF, GDNF, NT-3, neuropeptidi-Y ja S-100. Tutkimukset ovat osoittaneet, että hermokasvutekijä (NGF) voi estää selkäytimen punaisen tuman hermosolujen surkastumista ja vahvistaa kortikospinaalista kanavaa. sekä aivoista peräisin oleva neurotrofinen tekijä (BDNF) että neurotrofiini-3 (NT-3) voivat estää punatuman selkäydinsolujen apoptoosia aikuisilla rotilla, joilla on aksotomisoitu vamma, ja pelastaa kuolevia hermosoluja ja edistää aksonien regeneraatiota P. Lisäksi,haju-vaippaavat solut ilmentävät solukalvoillaan myös muita tekijöitä, kuten hermosolujen adheesiotekijää (N-CAM), jotka osallistuvat solujen tarttumiseen ja aksonien kasvuun. Näiden ominaisuuksien vuoksihaju-ensheaching soluja, OEC:itä pidetään yhtenä lupaavista siemensoluista solunsiirtoon SCI:n korjaamiseksi.

Kemialliset komponentitCistanchesisältävät pääasiassa fenyylietanoidiglykosidit, iridoidit, haihtuvat komponentit, lignaanit, polysakkaridit ja alkaloidit. Tutkimus totesi senCistancheja sen kemiallisilla komponenteilla on hermostoa suojaavia vaikutuksia. Deng et ai. tutki tubulosa B:n vaikutusta tuumorinekroositekijän (TNF ) indusoimaan SH-SY5Y-neuronien apoptoosiin. Tulokset osoittivat, että 100 ug:n jälkeen SH-SY5Y-neuronit 36 ​​tunnin TNF-käsittelyn jälkeen L:llä osoittivat tyypillisiä apoptoosin ominaisuuksia, kun taas tubuliini B:n käsittely 2 tunnin ajan saattoi merkittävästi vähentää TNF:n indusoimaa apoptoosia. Lisäksi tutkimukset ovat osoittaneet, että fenyylietanoidiglykosidit voivat estää rotan pikkuaivojen jyvässolujen apoptoosia estämällä kaspaasia-3 ja kaspaasia-8 sekä metyylifenyylitetrahydropyridiinin (MPTP) aiheuttamaa hiiren C57-mustaa vastaan. Laadukkaiden dopaminergisten hermosolujen vaurioilla on suojaava vaikutus. Ei vain sitä, vaanCistanchevoi myös lievittää erilaisia ​​vaurioita, kuten hermoston iskemia-reperfuusiota. Hiiren aivoiskemiavauriokoe osoittaa, että infarktialue 24 ja 48 tunnin kuluttua iskemiasta aivoiskemia-reperfuusioryhmässä on keskimäärin 72,98 prosenttia ja 60,45 prosenttia. Sitä vastoincistancheGlykosidien kokonaismäärä suuret, keskisuuret ja pieniannoksiset ryhmät (250.0mg·kg/d; 125,0mg·kg/d; 62,5 mg·kg/d) voivat tehdä hiirten aivoista. aivoiskemia-reperfuusion jälkeen 24 tuntia Infarktin koko pieneni 25,94 prosenttiin, 25,81 prosenttiin ja 31,13 prosenttiin ja aivoinfarktin koko pieneni 22,14 prosenttiin, 20,06 prosenttiin ja 22,27 prosenttiin 48 tunnin kuluttua. Näiden kahden välillä oli merkittävä ero, mikä osoitti merkittävää inhiboivaa vaikutusta hermosolujen apoptoosiin.

Tässä tutkimuksessa erilaisia ​​pitoisuuksiacistanche yhteensä glykosiditsovellettiin OEC:iin. MTT-menetelmä ja virtaussytometrinen mittaus vahvistivat, että 10mg/ml100mg/mlcistanche yhteensä glykosiditvoi edistää leviämistähaju-vaippaavat solut. Virtaussytometrian tulokset osoittivat sencistanche yhteensä glykosiditvoi edistää leviämistähaju-ensheathing soluja Se edistää pääasiassa G1-syklin lisääntymistähaju-siittiösoluja ja vähentää merkittävästi apoptoottisia soluja. Siksi,Cistanche-glykosiditei voi vain edistää leviämistähaju-suojaavat soluja, mutta myös lisäävät solujen aktiivisuutta ja estävät niiden apoptoosia. Entsyymi-immunosorbenttimääritys todistaa tämänCistanche-glykosiditvoivat merkittävästi edistää GDNF:n eritystähaju-vaippaavat solut. Yllä olevat tulokset tarjoavat kokeellisen perustan kliiniselle sovellukselleCistanche-glykosidit.

Viitteet

[1] Qiu Weihong, Zhu Hongxiang, Zhang Baixiang ym. Selkäydinvammapotilaiden elämänlaatuun vaikuttavat tekijät kuntoutuksen aikana [J]. Chinese Journal of Rehabilitation Medicine, 2009, 4(24): 313.

[2] Richter MW, Fletcher PA, Liu J, et ai. Lamina propria jahaju-sonnien vaippasolut osoittavat erilaista integraatiota ja migraatiota ja edistävät deferentiaalista aksonien itämistä vaurioituneessa selkäytimessä [J]. J Neurosci, 2005.25(46):10700 -10711.

[3] Fairless R, Bamet SC. hajua suojaavat solut: niiden rooli keskushermoston korjaamisessa [J.Int. J. Biochem. Cell Biol. 2005, 37(4):693-699.

[4] Chen X, Fang H. Schwob JE. Monitehoinen puhdistettu. siirretyt glukoosin tyvisoluthaju-epiteeli [J]. J Comp Neurol, 2004, 46914):457-474.

[5] La P, Jones LL. Tuszynski MH. BDNF:ää ilmentävä marostromaalisolu; tukevat laajaa aksonien kasvua selkäydinvauriokohdissa [J]. Exp Neurol, 2005, 191(2):344-360.

[6] Deng M, Zhao JY, Ju XD et ai. Tubulosa B:n suojaava vaikutus TNF:n aiheuttamaan apoptoosiin hermosoluissa [J]. Acta Pharmacol Sin, 2004, 25(102 1276

[7] TianXue-Fei, PuXiao-Ping.FenyylietanoliglykosiditalkaenCistanchessalsa estää 1-metyyli-4-fenyylipyridinium-ionin indusoimaa apoptoosia hermosoluissa[J]. J Ethnopharmacol, 2005, 97 (1):59.

[8] Geng X, Song L.Pu X, et ai. Neuroprotektiivinen vaikutus