Cistanche Deserticolan mekanismi, joka edistää suoliston toimintaa

Yuan Gao, Chuanjie Zong, Fen Liu, Lei Fang, Runlan Cai, Yue Shi, Xi Chen, Yun Qi

Abstrakti

Fenyylietanoliglykosidit(PhG:t), polyfenoliyhdisteiden luokka, pidetään yhtenä tärkeimmistä bioaktiivisista ainesosista.CistanchedeserticolaYC Ma (CD), jonka uutetta käytetään suun kautta perinteisessä kiinalaisessa lääketieteessä. Vaikka aiemmat farmakologiset tutkimukset ovat raportoineet, että PhG:t vaikuttavat moniin, niiden suoliston kuljetusprofiileja ei ole selvitetty. Tässä tutkimuksessa tutkimme PhG-rikkaan uutteen (PRE) suoliston läpäisevyyttäCistancheDeserticolaintegroituna järjestelmänä Caco{0}}-solujen yksikerroksisessa mallissa käyttämällä biomääritysjärjestelmää. Tulokset osoittivat, että PRE kulkeutuu ensisijaisesti huonosti imeytyneen passiivisen diffuusion kautta alas pitoisuusgradienttia pitkin ilman ulosvirtausta, mikä tarjoaa farmakokineettisen perustan PhG:iden kliiniselle käytölleCistanche Deserticola. Määritimme myös kolmen suuren suoliston läpäisevyydenPhGs[akteosidi (AC), isoakteosidi (IS) ja ekinakosidi (EC)]HLPC:ltä. Lisäksi kehitimme uuden HPLC-fluoresenssin havaitsemismenetelmän AC:n ja IS:n vuomäärän tarkkaan määrittämiseen. Kuten odotettiin, kuljetusominaisuudet kolmePhGsovat yhdenmukaisia ​​PRE:n kanssa, mikä osoittaa, että nykyinen biotestijärjestelmä on sopiva ja luotettava aktiivisten ainesosien ryhmien (AIG) kuljetusominaisuuksien arviointiin PRE:ssä. Lisäksi tämä järjestelmä voi olla sopiva myös muille kasviuutteille, joille on annettu sopiva bioaktiivisuus.

Ottaa yhteyttä:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Cistanche deserticolalla on monia vaikutuksia, napsauta tästä saadaksesi lisätietoja

Johdanto

Caco{0}}-solulinjalla, joka oli peräisin ihmisen paksusuolen adenokarsinoomista, on enterosyyttien kaltaisia ​​ominaisuuksia. Normaaleissa olosuhteissa Caco-2-solut erilaistuvat spontaanisti kypsistä soluista ja muodostavat ehjiä yksikerroksisia kerroksia [1]. Viereiset solut kiinnittyvät yksikerroksen apikaaliselle puolelle muodostuneiden tiukkojen liitoskohtien kautta, mikä voi erottaa passiivisesti ja aktiivisesti kuljetetut lääkkeet epiteelikerroksen läpi [2]. Johtuen morfologisesta ja biokemiallisesta samankaltaisuudesta normaaleiden enterosyyttien kanssa, Caco{5}}-solujen yksikerroksiset kerrokset toimivat hyvin hyväksyttynä in vitro -mallina tutkittaessa lääkkeiden imeytymispotentiaalia ja kuljetusominaisuuksia suolistossa [3, 4].

Toisin kuin kemikaalit, kasviuutteet (PE) ovat seoksia, joiden biologista aktiivisuutta ja aktiivisia ainesosia ei usein tunnisteta hyvin [5]. Lisäksi PE:n suoliston kuljetusominaisuudet, toisin kuin sen aineosien ominaisuudet, liittyvät läheisesti kliiniseen käyttöön. Caco-2-solun yksikerroksisen koenäytteen vuomittaukset sisältävät yleensä kemiallisia menetelmiä, kuten HPLC, LC/MS jne. Vaikka nämä menetelmät ovat tehokkaita työkaluja, ne ovat monimutkaisia, aikaa vieviä, kalliita ja toisinaan vaativat kehittyneitä laitteita. Vielä tärkeämpää on, että yksittäinen tai vähemmistökomponentti ei voi kuvastaa PE kokonaisuutena. Siten on luotava uusi, ainesosien määrittämisestä riippumaton lähestymistapa PE:n kuljetusominaisuuksien tunnistamiseksi ja arvioimiseksi.

CistanchedeserticolaYC Ma (CD), holoparasiittikasvi, on yleinen perinteinen kiinalainen lääketiede, jota käytetään pääasiassa munuaisten vajaatoiminnan, kehon heikkouden ja ummetuksen hoitoon, ja nämä käyttötavat on kirjattu virallisesti Kiinan farmakopeaan [6]. Fenyylietanoidiglykosidit (PhG:t), mukaan lukien ekinakosidi (EC), akteosidi (AC), isoakteosidi (IS) jne., ovat polyfenoliyhdisteiden luokka [7]. Niitä pidetään yhtenä tärkeimmistä bioaktiivisista ainesosistaCistanchelaji [8]. Farmakologiset tutkimukset ovat osoittaneet, että bioaktiivisuusPhGson monipuolinen ja sisältää antioksidanttisia [9], väsymystä [10], maksaa suojaavia [11], immunomoduloivia [12], anti-inflammatorisia [7, 13] ja neuroprotektiivisia vaikutuksia [14]. Kuitenkin suoliston kuljetusominaisuudetPhGsei ole tutkittu. Tässä tutkimuksessa tutkimme CD:stä peräisin olevan PhG-rikkaan uutteen (PRE) suoliston läpäisevyyttä integroituna järjestelmänä ja kolmen suuren PhG:n (AC, IS ja EC) läpäisevyyttä erilaistuneissa Caco-2-soluissa. Tuloksemme osoittivat, että PRE kuljetetaan ensisijaisesti huonosti imeytyneen passiivisen diffuusion kautta alas pitoisuusgradienttia pitkin ilman ulosvirtausta, mikä tarjoaa farmakokineettisen perustan PhG:iden kliiniselle käytölle CD:ssä.

Materiaalit ja menetelmät

Materiaalit

The human intestinal Caco-2 cell line was obtained from the American Type Culture Collection (ATCC, Rockville, MD, USA). AC, IS and EC (>98 prosenttia ) ostettiin Must Biotechnology Co:lta (Chengdu, Kiina). Dulbeccon modifioidun Eagle-alustan (DMEM), sikiön naudan seerumin (FBS) ja ei-välttämättömät aminohapot (NEAA) tuotti Gibco BRL (Grand Island, NY, USA). 6-kuoppa TranswellTM-levyt (inserttikalvon kasvuala 4,67 cm2) hankittiin yhtiöltä Corning (Costar) Inc. (Tewksbury, MA, USA). Rotan hännän kollageeni saatiin Sigma-Aldrichilta (St. Louis, MO, USA). Kaikki reagenssit ja kemikaalit HPLC-analyysiä varten olivat analyyttistä laatua.

PRE:n valmistus Cistanche deserticolasta

Ilmakuivattu CD-materiaali jauhettiin ja uutettiin perkolaatiolla 70-prosenttisella etanolilla. PhG-rikas fraktio valmistettiin aiemmin kuvatulla tavalla [10] ja uutettiin vedellä kyllästetyllä n-butyylialkoholilla. Uuteliuos konsentroitiin ja kuivattiin alipaineessa. Makrohuokoinen hartsi-UV-spektrofotometria [15] mittasi PhG-pitoisuuden 78,4 prosenttia. Lopullinen näyte edusti 1,75 prosentin raaka-aineen saantoa kuivapainosta. Saatu näyte säilytettiin -20 asteessa jatkokäyttöön asti.

AC:n, IS:n ja EC:n määritys HPLC:llä

LC-liuosohjelmistolla varustettua Shimadzu HPLC -järjestelmää käytettiin AC:n, IS:n ja EC:n sisällön määrittämiseen PRE:ssä. Käänteisfaasista Intersil C18 -kolonnia (4,6 mm × 250 mm, 5 μm) käytettiin ja pidettiin huoneenlämpötilassa. Liikkuvat faasit olivat asetonitriiliä ja vettä, joka sisälsi 0,1 % fosforihappoa (v/v) gradienttieluoimalla (taulukko 1) virtausnopeudella 1,0 ml/min. UV-spektrofotometrin detektori asetettiin 334 nm:iin. AC- ja IS-virran määrittämiseksi tarkasti kehitimme uuden HPLC-fluoresenssin havaitsemismenetelmän (HPLC-FLD). Rakenneanalyysin ja fluoresenssin aallonpituusskannauksen (tietoja ei näy) jälkeen saimme optimaaliset fluoresenssin havaitsemisolosuhteet AC:lle (esim. 338 nm, Em: 448 nm) ja IS:lle (esim. 320 nm, Em: 434 nm)

HPLC-analyysimenetelmä validoitiin käyttämällä seuraavia suorituskykyominaisuuksia: stabiilisuus, lineaarisuus, herkkyys, tarkkuus (päivien sisäinen ja välinen vaihtelu) ja tarkkuus. Kuljetuspuskurissa olevia analyyttejä säilytettiin 25 asteessa pimeässä 24 tuntia ja niiden stabiilisuus mitattiin. Analyytit olivat erittäin stabiileja C-vitamiinin läsnä ollessa (0,4 prosenttia), koska suhteellinen standardipoikkeama (RSD) piikin alueilla oli < 3,5="" prosenttia.="" lineaarinen="" regressioyhtälö,="" korrelaatiokerroin,="" lineaarisuusalue,="" lod="" ja="" loq="" ac:lle,="" is:lle="" ja="" ec:lle="" on="" esitetty="" taulukossa="" 2.="" lod-arvot="" (18–3{20}}="" nm)="" ja="" loq-arvot="" (60–100="" nm)="" arvot="" osoittavat,="" että="" hplc-fld-="" ja="" hplc-uv-menetelmät="" ovat="" erittäin="" herkkiä.="" menetelmän="" tarkkuutta="" ilmaisevat="" rsd-arvot="" olivat="" kaikki="">< 2="" prosenttia="" päivän="" sisäiselle="" ja="" väliselle="" vaihtelulle,="" mikä="" osoittaa="" hyvää="" tarkkuutta.="" palautumisen="" arviointia="" varten="" ac,="" is="" ja="" ec="" lisättiin="" kuljetuspuskuriin="" kolmen="" (korkean,="" keskisuuren="" ja="" matalan)="" konsentraatiotason="" tuottamiseksi.="" analyyttien="" menetelmän="" saantoarvot="" on="" koottu="" taulukkoon="" 3.="" keskimääräiset="" saannot="" vaihtelivat="" 90,0="" prosentista="" 96,4="" prosenttiin,="" mikä="" osoittaa="" hyvää="" tarkkuutta.="" yhteenvetona="" voidaan="" todeta,="" että="" vakiintuneet="" hplc-menetelmät="" ovat="" tyydyttäviä="" lineaarisuuden,="" herkkyyden,="" tarkkuuden="" ja="" tarkkuuden="" suhteen="" ac:n,="" is:n="" ja="" ec:n="" kvantifiointiin="">

PRE:n määritys biomääritysjärjestelmällä

Biologinen määritys (kokonaisantioksidanttikapasiteetti) perustui aiemmin kuvaamaan FRAP-määritykseen (ferric pelkistävä/antioksidanttivoima) [16] ja validoitu lineaarisuuden ja tarkkuuden suhteen (päivien sisäinen ja välinen vaihtelu). Biomääritysmenetelmän lineaarisuus määritettiin kalibrointikäyrien perusteella. Lineaarisuuden pitoisuusalue oli 0.0625 − 40 ug/ml (y=0.0258x plus 0.0968, R2=0.996). Vakiintuneen biomääritysmenetelmän tarkkuus määritettiin päivänsisäisen ja päivän välisen vaihtelun suhteen PRE-analyysiä varten (10,0 ug/ml). Menetelmän päivänsisäinen toistettavuus määritettiin viiden peräkkäisen saman päivän määrityksen perusteella. Päivien välinen toistettavuus mitattiin viiden peräkkäisen määrityksen perusteella kolmena eri päivänä. Menetelmän tarkkuuden RSD-arvot olivat 1,014 prosenttia ja 4,72 prosenttia päivien väliselle vaihtelulle, mikä viittaa hyvään tarkkuuteen. Näin ollen vakiintunut biomääritysmenetelmä on tyydyttävä lineaarisuuden, tarkkuuden ja tarkkuuden suhteen PRE:n kvantifiointiin kuljetuspuskurissa.

Soluviljely

Caco{{0}}-soluja viljeltiin 37 asteessa ja 95 prosentin suhteellisessa kosteudessa ilmakehässä, joka sisälsi 5 prosenttia CO2:ta ja väliainetta, joka koostui DMEM:stä, 10 prosenttia FBS:stä, 1 prosentista NEAA:sta, 1 prosentista L-glutamiinista, penisilliinistä ( 100 U/ml) ja streptomysiini (100 ug/ml). Elatusaine vaihdettiin joka toinen päivä solujen kasvun ja erilaistumisen aikana. Soluja kasvatettiin 75-cm2:n muovipulloissa ja kerättiin 3–5 päivän välein 0,05-prosenttisella EDTA-trypsiinillä. Kuljetuskokeita varten solut kylvettiin tiheydellä 1 x 105 solua/cm2 Transwell-inserteille, jotka oli päällystetty kollageenilla. Noin 21 päivää kylvön jälkeen yksikerroksia käytettiin kuljetuskokeissa. Niiden eheys määritettiin mittaamalla trans-epiteliaalinen sähkövastus (TEER) yksikerroksisten kerrosten poikki EVOM:lla, joka oli varustettu ENDOHM-SNAP:lla (World Precision Instruments, Inc., USA). Caco-2-solujen yksikerroksen TEER-arvojen piti ylittää 500 O∙cm2.

Kuljetuskokeita

Yksikerros pestiin kuljetuspuskurilla (P-puskuri, joka sisälsi 10 mM HEPES, 1 mM natriumpyruvaatti, 10 mM glukoosi, 3 mM CaCl2 ja 145 mM NaCl, pH 7,4) ja esi-inkuboitiin sitten 20 minuuttia 37 astetta. Kuljetuspuskurin poistamisen jälkeen tuoretta kuljetuspuskuria, joka sisälsi testinäytteitä, lisättiin apikaaliseen (AP) kammioon (1,5 ml) AP:ssa basolateraalisiin (BL) suuntatutkimuksiin tai BL-kammioon (2,5 ml) BL-AP-suuntatutkimuksiin. AC-, IS- ja EC-määrityksissä, joissa käytettiin HPLC:tä, kustakin vastaanottokammiosta poistettiin erä (300 ul) eri aikavälein (30, 60, 90 ja 120 min). Vastaanottokammio täytettiin samalla määrällä tuoretta esilämmitettyä (37 astetta) kuljetuspuskuria jokaisen näytteenoton jälkeen. Kerätyt näytteet säilytettiin -20 asteessa jatkokäyttöä varten. PRE-määritykseen käyttämällä biomääritystä otettiin vain näytteet 120 minuutin kohdalla. PRE:n, AC:n, IS:n ja EC:n epävakauden vuoksi näytteiden stabiloimiseksi lisättiin 0,4 % (w/v) C-vitamiinia AC-, IS- ja EC-pitoisuuksien määrittämiseksi HPLC:llä ja näytteet PRE:tä varten. Biotestit määritettiin välittömästi näytteenoton jälkeen. Jokaisen näytteen näennäinen läpäisevyyskerroin (Papp tai 'Papp) laskettiin.

Tietojen analysointi

Papp-arvot AC:n, IS:n ja EC:n AP BL- tai BLAP-suunnissa laskettiin seuraavan yhtälön perusteella: Papp {{0}} (4Q/4t)/(AC0), jossa Papp on näennäinen läpäisevyyskerroin (cm/s), joka on määritetty HPLC:llä. (4Q/4t) on testiyhdisteen (AC, IS tai EC) esiintymisnopeus vastaanottimen puolella (μmol/s); A on insertin pinta-ala (cm2); C0 on testiyhdisteen alkuperäinen pitoisuus luovuttajan puolella (μmol/ml). Tarkemmin sanottuna massayksikköä "ug" käytettiin "μmol":n sijaan, kun 'Papp-arvot laskettiin. Tiedot ilmaistaan ​​keskiarvoina ± SD.

Tulokset

Akteosidin, isoakteosidin ja ekinakosidin koostumus Cistanche Deserticolan PRE:ssä

Koska AC:tä, IS:tä ja EC:tä pidetään Cistanche-lajien tärkeimpinä bioaktiivisina PhG-yhdisteinä [8], analysoimme niiden sisällön PRE:ssä HPLC-UV:n avulla. Edustava kromatogrammi on esitetty kuvassa 1. Näiden aineosien tunnistaminen perustui retentioaikojen ja UV-spektrin vertailuun autenttisten standardien vastaaviin aallonpituudella 334 nm. PRE:n AC-, IS- ja EC-pitoisuudet olivat vastaavasti 26,60 prosenttia, 1,84 prosenttia ja 32,83 prosenttia. Siten nämä kolme yhdistettä muodostavat 61,27 prosenttia PRE:stä; lisäksi yllä olevat tulokset osoittavat, että PRE:n PhG-pitoisuus on 78,4 prosenttia. Siksi AC, IS ja EC muodostavat noin 80 prosenttia PRE:n PhG:istä.

PRE:n, AC:n, IS:n ja EC:n hapettumisenestokyky yhteensä

CD:stä peräisin olevien PhG:iden antioksidanttiaktiivisuutta koskevia tutkimuksia on raportoitu [9], ja AC, IS ja EC muodostavat noin 80 prosenttia PRE:n PhG:istä. Siten PRE:n, AC:n, IS:n ja EC:n antioksidanttiset kokonaiskapasiteetit määritettiin ja ilmaistaan ​​käyttämällä FRAP-arvoja (× 10–6 mmol). Kuten kuvasta 2 näkyy, kun FRAP-arvo oli 8 × 10–6 mmol, PRE:n, AC:n, IS:n ja EC:n lopulliset pitoisuudet olivat 6,20 ug/ml, 3,14 ug/ml, 22,92 ug/ml ja 4,89 ug/ml. ml, vastaavasti, mikä osoittaa, että näiden neljän näytteen antioksidanttikapasiteetti oli seuraava: AC > EC > PRE > IS. PRE:n bioaktiivisuus johtuu sen aktiivisten ainesosien ryhmistä (AIG). Noin 60 prosentilla PRE:stä AC ja EC osoittivat voimakkaampaa antioksidanttivaikutusta kuin PRE ja IS. Koska IS (1,84 prosenttia) muodostaa hyvin pienen osan PRE:stä, myös muut komponentit, kuten heikosti hapettumista estävä IS, ovat selvästi aktiivisia PRE:ssä. Yllättäen antioksidanttiaktiivisuus poikkesi lähes 7--kertaisesti AC:n ja sen isomeerin IS:n välillä, mikä osoitti fenolisten hydroksyyliryhmien lukumäärän [9] lisäksi myös fenolisten hydroksyyliryhmien aseman molekyylissä, joka vaikutti anti- - oksidatiivinen vaikutus.

Caco-2-yksikerrosten validointi

Caco-2-solujen yksikerrosjärjestelmän validoimiseksi propranololin (hyvin kulkeutuva markkeri) ja Lucifer-keltaisen (huonosti kulkeutuva markkeri) Papp-arvot AP:sta BL:hen Caco-2-yksikerrosten poikki. määritettiin arvoiksi 1,51 × 10–5 cm/s ja 2,8 × 10–7 cm/s, ja nämä arvot olivat yhtäpitäviä aiemmissa raporteissa julkaistujen [17, 18] kanssa. Alkalisen fosfataasin aktiivisuusmääritys vahvisti myös, että Caco-2-solujen yksikerroksiset kerrokset olivat laadullisesti verrattavissa ohutsuolen epiteelin kanssa [19]

Akteosidin, isoakteosidin ja ekinakosidin läpäisevyys

In general, the Papp values of well-absorbed drugs were high (>1.0 × 10–5 cm/s), kun taas huonosti imeytyneiden lääkkeiden arvot olivat alhaiset (< 1.0="" ×="" 10–6="" cm/s)="" [3].="" as="" shown="" in="" table="" 4,="" the="" papp="" values="" of="" ac,="" is="" and="" ec="" was="" nearly="" on="" the="" order="" of="" 10–7="" cm/s,="" indicating="" that="" these="" compounds="" were="" poorly="" permeable.="" furthermore,="" efflux="" or="" active="" transport="" were="" not="" observed="" because="" the="" ratios="" of="" papp="" bl="" to="" ap="" papp="" ap="" to="" bl="" for="" ac,="" is="" and="" ec="" was="" between="" 0.90="" ~="" 1.55,="" and="" the="" criterion="" of="" net="" efflux="" proposed="" by="" the="" fda="" guidance="" is="" a="" ratio="" less="" than="" 2="" [20].="" based="" on="" the="" kinetic="" curves="" presented="" in="" fig.="" 3,="" the="" bidirectional="" transport="" percentages="" of="" ac,="" is="" and="" ec="" at="" 200="" μm="" increased="" linearly="" with="" time.="" the="" transport="" rate="" (tr)="" values="" of="" the="" three="" compounds="" increased="" linearly="" in="" both="" directions="" between="" approximately="" 100="" and="" 300="" μm="" (fig.="" 4).="" these="" results="" indicate="" that="" the="" main="" transport="" mechanism="" of="" ac,="" is="" and="" ec="" is="" also="" passive="">

PRE:n läpäisevyys

Yllä olevat tulokset osoittavat, että PRE:n kokonaisantioksidanttikapasiteetti johtuu ainakin 61,27 prosentista PRE:n AIG:stä. Näin ollen arvioimme PRE:n TR:n sen antioksidanttikapasiteetin pitoisuus-vaikutuskäyrän perusteella ja laskemme 'Papp-arvot PRE:n kuljetusominaisuuksien heijastamiseksi. AP!BL:n ja BL!AP:n PRE:n Papp-arvot olivat (2,16 ± 0,26) × 10–7 cm/s ja (3,13 ± 0,29) × 10–7 cm/ s, vastaavasti, mikä osoittaa, että tämä yhdiste oli huonosti läpäisevä. Lisäksi ulosvirtaus tai aktiivinen kuljetus ei ollut ilmeistä, koska 'Papp BL:n suhde AP:hen / 'Papp AP:n suhde BL:hen PRE:lle oli 1,45 [20]. Lisäksi PRE:n kaksisuuntainen TR kasvoi lineaarisesti välillä noin 300 ja 900 ug/ml (kuvio 5). Tulosten suuntapreferenssin puute viittaa siihen, että passiivinen diffuusio on PRE:n tärkein kuljetusmekanismi.

Keskustelu

Verrattuna erittäin puhtaisiin lääketuotteisiin PE on yleensä seos, joka koostuu sadoista ainesosista, joilla on hyvin erilaisia ​​fysiokemiallisia ominaisuuksia. Siksi PE:llä on systemaattinen, monikohde ja monikanavainen synergistinen vaikutus monimutkaisen AIG:nsä vuoksi [21], mikä estää PE:n kuljetusominaisuuksien analysointia. PE:n kuljetusominaisuuksien arvioimiseksi tieteellisemmin jotkut tutkijat ovat tunnistaneet PE:stä useita komponentteja yhden komponentin sijaan [22–24]. Rajoitettu määrä aineosia ei kuitenkaan voi kuvastaa PE:tä kokonaisuutena. Kaikkien komponenttien määrittäminen PE:ssä on kuitenkin mahdotonta. Lisäksi, jos PE:n eri komponenteilla on täysin erilaiset kuljetusominaisuudet, PE:n kokonaisvaltaisia ​​kuljetusominaisuuksia on vaikea tunnistaa.

1990-luvulla biomääritysjärjestelmiä käytettiin antimikrobisten aineiden TR:n arvioimiseen [25]. Vuoteen 2005 mennessä Eguchi ja hänen kollegansa [26] olivat arvioineet porkkanauutteen hapettumista estävän aktiivisuuden käyttämällä erilaistuneista Caco{5}}-soluista peräisin olevaa BL-elatusainetta; tämä lähestymistapa sopii paremmin in vivo -tilanteisiin.

Aiemman PhG:iden aktiivisuuden raportin [9] ja tuloksiemme (kuva 2) perusteella AIG:n TR PRE:ssä voidaan arvioida määrittämällä väliaineen kokonaisantioksidanttikapasiteetti vastaanottokammiossa. Kuljetuskokeiden jälkeen havaitsimme, että PRE:n TR oli samanlainen molempiin suuntiin, ja tämä kuljetus oli tyydyttymätöntä ja huonosti absorboitunut ('Papp < ​​1.0="" ×="" 10–6="" cm/s)="" [3]="" ja="" se="" ei="" osoittanut="" ulosvirtausta,="" mikä="" viittaa="" siihen,="" että="" passiivinen="" diffuusio="" alas="" pitoisuusgradienttia="" pitkin="" on="" pre:n="" pääkuljetusmekanismi="" (kuvio="" 5).="" lisäksi="" pre:n="" kuljetusominaisuudet="" ovat="" yhdenmukaisia="" ​​ac:n,="" is:n="" ja="" ec:n,="" tehokkaiden="" komponenttien,="" joilla="" on="" antioksidanttivaikutus="" pre:ssä,="" kanssa="" (kuvio="" 4="" ja="" taulukko="" 4).="" tämä="" tulos="" oli="" odotettu="" ja="" osoitti,="" että="" nykyinen="" biomääritysjärjestelmä="" on="" sopiva="" ja="" luotettava="" aig:n="" kuljetusominaisuuksien="" arvioimiseen="" pre:ssä="" erilaistuneissa="">

Toisin kuin kanoninen Papp-arvo, jota käytetään yleisesti kuvaamaan yksittäisen yhdisteen kulkua, pitoisuus-vaikutuskäyrään perustuva TR:stä saatu 'Papp-arvo ei välttämättä heijasta vain komponentteja, jotka tunkeutuvat ehjärakenteisiin yksikerroksisiin kerroksiin. Niihin liittyy myös muita kohdeaktiivisuuteen liittyviä tekijöitä, kuten komponenttien aineenvaihduntatuotteita, kemiallisesti hajotettuja tuotteita ja jopa joitain sytokiineja, jotka erittyvät Caco-2-soluista vasteena stimulaatiolle, joka voi vaikuttaa kohteen bioaktiivisuuteen. Siten edellä mainittu monitekijä, ei vain kuljetetut ehjät komponentit, määrää 'Papp-arvon. Siksi 'Papp voi korreloida voimakkaammin Vivo-tilanteissa kuin kanoninen Papp-arvo [26]. Tässä tutkimuksessa selvensimme PRE:n passiivisesti diffuusiota ja huonosti imeytyvää luonnetta sen Papp-arvon perusteella, ja tämä luonne saattaa liittyä CD:n korkeaan annokseen ja pitkään kliiniseen hoitojaksoon [27]. Tästä huolimatta nämä havainnot tarjoavat kliinikoille järjestelmällisempää ohjausta CD:n soveltamisessa, kun vain useimpien CD:n AIG:iden kuljetusominaisuudet on tunnistettu, ei vain PhG:itä.

Valitun bioaktiivisuuskohteen on kuitenkin oltava riittävän herkkä, jotta se voidaan havaita vastaanottokammion väliaineessa, mikä on haaste PE:n kuljetusominaisuuksien arvioimiseksi käytettävän biomääritysjärjestelmän perustamiselle. Lisäksi bioaktiivisuuden tulisi myös riippua mahdollisimman monesta komponentista. Tutkimuksessamme kokonaisantioksidanttikapasiteetin määritys oli sopivampi kuin useat muut menetelmät (S1 kuva). Mutta silti analyysimme voi havaita PRE:n TR:n vain 120 minuutin kohdalla.

Tämä tutkimus loi kollektiivisesti uuden biomääritysjärjestelmän PRE:n suoliston läpäisevyyden arvioimiseksi erilaistuneissa Caco{0}}-soluissa. Saadut tulokset osoittivat, että huonosti imeytynyt passiivinen diffuusio alas pitoisuusgradienttia pitkin ilman ulosvirtausta on PRE:n pääkuljetusmekanismi (kuvio 5), joka tarjoaa farmakokineettisen perustan PhG:iden kliiniselle käytölle CD:ssä. Uuden biomääritysjärjestelmän käyttö TR:n arvioimiseksi ja sitä kautta Papp-arvojen laskemiseksi AIG:n suoliston kuljetusominaisuuksien arvioimiseksi PE:ssä on selvästi mahdollista. Tämä lähestymistapa voi sopia myös muulle PE:lle, jos sillä on sopiva bioaktiivisuus

tuki informaatio

S1 Kuva. PRE:n vaikutukset (A) superoksidianioniin, (B) hydroksyyliradikaaliin, (C) lipidiperoksidaatiotuotteeseen ja (D) DPPH-radikaaliin. Määritysmenettelyt suoritettiin aikaisempien raporttien mukaisesti [1, 2] ilman kuljetuspuskuria. IC50 (50 prosentin estopitoisuus) ja SC50 (50 prosentin huuhtelupitoisuus) -arvot laskettiin perustuen standardikonsentraatio-vastekäyriin. (DOCX)

Tekijän panokset

Suunnitteli ja suunnitteli kokeet: YG XC YQ. Suoritti kokeet: YG CZ FL LF RC YS. Analysoidut tiedot: CZ YG YQ. Mukana olleet reagenssit/materiaalit/analyysityökalut: RC. Kirjoitti paperin: YG YQ

Farmakologian ja toksikologian tutkimuskeskuksen laitos, Lääkekasvien kehittämisen instituutti, Kiinan lääketieteen akatemia & Peking Union Medical College, Peking, PR Kiina,

Heilongjiangin kiinalaisen lääketieteen yliopisto, Harbin, Heilongjiang, PR Kiina