Xiaoyaosanin vaikutukset CAMP-signaalireitille masentuneiden rottien aivokuoressa
Nov 26, 2025
Abstrakti
Tavoite:Arvioida muutoksia seerumin prostaglandiini E2:ssa (PGE2) ja substanssissa P (SP) sekä syklisen adenosiinimonofosfaatin (cAMP) ja cAMP-vasteelementtiä sitovan proteiinin 1 (CREB1) mRNA:ssa ilmentymisessä masentuneiden rottien aivokuoressa ja tutkia molekyylimekanismia, jolla Xiaoyaosan vaikuttaa masennusta ehkäiseviin vaikutuksiin.
Menetelmät: 48 urospuolista SD-rottaa jaettiin satunnaisesti neljään ryhmään (kukin n=12): normaali, malli, Xiaoyaosan ja fluoksetiini. Masennusmalli perustettiin käyttämällä kroonista immobilisaatiostressiä (CIS). Xiaoyaosan annettiin letkulla 30 minuuttia ennen päivittäistä mallintamista 21 päivän ajan. Masennuslääkkeiden kaltaiset vaikutukset arvioitiin makroskooppisella käyttäytymishavainnolla, sakkaroosin mieltymystestillä, avokenttätestillä ja pakkouintitestillä. Kortikaaliset cAMP- ja CREB1-mRNA-tasot kvantifioitiin reaaliaikaisella fluoresenssi-qPCR:llä. Seerumin PGE2 ja SP mitattiin entsyymi-immunosorbenttimäärityksellä (ELISA).
Tulokset: Malliryhmään verrattuna sekä Xiaoyaosan että fluoksetiini heikensivät merkittävästi masennuksen kaltaista käyttäytymistä; lisääntynyt sakkaroosin kulutus, pystysuorat kasvatusmäärät, vaakasuorat risteykset ja hoito avokenttätestissä; ja lyhennetty kumulatiivinen liikkumattomuusaika pakkouintitestissä. Molemmat hoidot paransivat aivokuoren histopatologiaa, kohosivat cAMP- ja CREB1-mRNA-ilmentymistä aivokuoressa ja alensivat seerumin PGE2- ja SP-tasoja (P < 0,01).
Johtopäätös:Xiaoyaosanilla on selkeitä masennuslääkkeitä masentuneilla rotilla, mahdollisesti aivokuoren cAMP-signalointireitin säätelyn kautta.
Avainsanat: Xiaoyaosan; Masennus; leiri; CREB1; prostaglandiini E2 (PGE2); Aine P (SP)
Johdanto
Masennus on johtava sairastuvuuden ja vamman aiheuttaja maailmanlaajuisesti, ja se heikentää syvästi elämänlaatua. Xiaoyaosan, klassinen moniyrttiperinteisen kiinalaisen lääketieteen (TCM) kaava, on osoittanut kliinistä käyttökelpoisuutta yleisissä masennuksessa, mikä tukee sen jatkuvaa kehitystä kasvitieteellisenä hoitona.
Mekaanisesti cAMP-proteiinikinaasi A (PKA)-CREB-signalointikaskadi on keskeinen mielialan ja affektiivisen käyttäytymisen säätelyssä. Tämän reitin säätely voi aiheuttaa masennusfenotyyppejä. CREB liittyy masennuksen patofysiologiaan, ja cAMP-aktivaatio tehostaa alavirran geenien transkriptiota; Tämän akselin polymorfismeja ja toiminnallisia vähentymiä on pidetty masennuksen herkkyystekijöinä.
Tulehduksen välittäjät vaikuttavat myös masennukseen. Prostaglandiini E2 (PGE2) välittää tulehdusvasteita, ja kohonnut PGE2 voi aiheuttaa masennusta. P-aine (SP), stressiin ja vaikutuksiin liittyvä neuropeptidi, on usein kohonnut masennuspotilaiden seerumissa. Siten muuttunut aivokuoren cAMP- ja CREB1-mRNA-ilmentyminen yhdessä kohonneen seerumin PGE2:n ja SP:n kanssa voivat edustaa molekyylimekanismia, joka on aivokuoren vaurion taustalla masennuksessa.
Vaikka lukuisia TCM-yhdistekaavoja on tutkittu masennuslääkemekanismeja varten, useimpien kaavojen vaikutus cAMP-reittiin on edelleen epäselvä. Tässä tutkimuksessa käytetään kroonisen immobilisaatiostressin (CIS) paradigmaa indusoimaan masennuksen kaltaista käyttäytymistä rotilla, ja tämä tutkimus tutkii edelleen Xiaoyaosanin masennuslääkemekanismia ja vertaa sitä fluoksetiiniin tavoitteenaan antaa tietoa kasvitieteellisten lääkkeiden tulevasta kehityksestä ja tarjota käytännöllisiä näkemyksiä masennukseen apua hakeville.
MITEN TCM YRTTILISÄT LEVITTÄVÄT eturauhastulehduksen OIREET
Materiaalit
Eläimet
Neljäkymmentäkahdeksan SPF-luokan tervettä aikuista urospuolista Sprague–Dawley-rottaa (8 viikkoa vanhoja, 200–220 g) ostettiin Beijing Viton Lihua Experimental Animal Technology Co., Ltd.:ltä [lisenssinro: SCXK (Beijing) 2016-0006]. Rotat pidettiin Guizhoun perinteisen kiinalaisen lääketieteen yliopiston esteeläintiloissa lämpötilassa 22 ± 2 astetta, suhteellinen kosteus 35–55 %, 12 tuntia valoa/12 tuntia pimeä (7.00–19.00), neljä rottaa häkkiä kohden, 7 päivän sopeutumisaika. Eettinen hyväksyntä: Guizhou University of TCM (No. 20210142).
MITEN TCM YRTTILISÄT LEVITTÄVÄT eturauhastulehduksen OIREET
MYYNNISSÄ TCM YRTTILISÄÄ
Huumeet
Xiaoyaosan-kaava seurasi Taiping Huimin Heji Ju Fangin mittasuhteita. Raakayrtit ostettiin yhtiöltä Beijing Tongrentang (Bozhou) Decoction Pieces Co., Ltd.: Bupleurum (Chaihu), Valkoinen pioni (Baishao), Angelica sinensis (Danggui), Sekoitettuna paistettu Atractylodes (Baizhu), Poria (Fuling), Hunajapaistettu lakritsi (Zhi) (Zhi ja FregancaBo) (Shengjiang), yhdistetty suhteessa 5:5:5:5:5:4:1:5. Keitteen ja tiivisteen valmisti Kiinan kansantasavallan farmakopean vuoden 2020 painoksen mukaisesti Hunan Jiuzhitang, joka toimii TCM-interventioon. Annokset muunnettiin rotille, liuotettiin deionisoituun veteen ja valmistettiin suspensiona.
Fluoksetiinihydrokloridikapseleita (Patheon France; pakkaa Eli Lilly Suzhou Pharmaceutical Co., Ltd.; erä nro . 6663B; 20 mg/kapseli) käytettiin vertailumasennuslääkkeenä.
Reagenssit
ExTaq (TAKARA, luettelo DRR100A); SYBR Green/Fluorescein qPCR Master Mix (2×) (Fermentas, luettelonro K0242); alukkeet (Qingke Bio); Rotan PGE2- ja SP ELISA -sarjat (Shanghai Yuanju Biotechnology Center, Cat. CK-E30697 ja CK-E30122).
Instrumentit
7900 reaaliaikainen fluoresenssi qPCR-järjestelmä (Applied Biosystems, USA); mikropipetit (Eppendorf); parafiinimikrotomi (HY1508, Jinhua Huiyou); Aquapro ultrapuhdas vesijärjestelmä (AJY-0501, Aikepu).
menetelmät
Ryhmittely ja mallinnus
Rotat jaettiin satunnaisesti normaaleihin, malli-, Xiaoyaosan- ja fluoksetiiniryhmiin (kukin n=12). Normaalia ryhmää lukuun ottamatta kaikille ryhmille tehtiin CIS 3 tuntia päivässä satunnaistettuina aikoina 21 päivän ajan. Normaalit rotat eivät olleet rajoittuneita, mutta niiltä puuttuivat ravinto ja vesi samaan aikaan käsittelyä vastaavasti.
Lääkkeiden hallinto
Aiempien tutkimusten perusteella Xiaoyaosan annettiin letkuruokinnalla 2,22 g raakalääke·kg-1·day-1; fluoksetiinia 2,0 mg·kg–1·päivä–1. Lääkkeet liuotettiin deionisoituun veteen. Annokset laskettiin kehon pinta-alan muuntamalla; letkutilavuus oli 10 ml/kg annettuna 30 minuuttia ennen jokaista päivittäistä pidätyskertaa. Normaali- ja malliryhmät saivat yhtä suuret määrät deionisoitua vettä.
Tulostoimenpiteet ja menettelyt
3.1 Makroskooppiset havainnot
Päivittäiset havainnot kirjasivat mielentilan, liikkumisen ja yleisen ulkonäön.
3.2 Sakkaroosin mieltymystesti
Rottia koulutettiin 3 päivää. Päivä 1: kaksi pulloa 1 % sakkaroosia häkkiä kohti. Päivä 2: yksi pullo korvataan yhtä suurella kahdesti tislatulla vedellä. 24 tunnin ruoan ja veden puutteen jälkeen jokainen rotta sai yhden pullon 1 % sakkaroosia ja yhden kahdesti tislattua vettä 1 tunnin ajan. Pullot punnittiin laskemaan sakkaroosin mieltymys (%): sakkaroosin saanti / (sakkaroosi + veden saanti) × 100%.
3.3 Avokenttätesti
Hiljaisessa huoneessa käytettiin mustaseinäistä avointa kenttää (125 cm × 125 cm × 50 cm). Rotat sijoitettiin keskelle; yli 5 minuuttia, pystysuorat kasvatuslaskelmat, vaakasuorat ristikon ylitykset ja hoitotapahtumat kirjattiin. Areena puhdistettiin kokeiden välillä 75-prosenttisella etanolilla ja vedellä.
3.4 Pakkouintikoe
Rotat asetettiin yksittäin lasisylintereihin, joissa oli 35 cm vettä 20 ± 2 asteessa. Upotuksesta lähtien käyttäytymistä tallennettiin 5 minuutin ajan korkearesoluutioisella kameralla. Kumulatiivinen liikkumattomuusaika yli 5 minuuttia mitattiin (liikkumattomuus määriteltiin minimaaliseksi liikkeeksi nenän pitämiseksi veden yläpuolella, vartalon lievänä taivutuksena tasapainon saavuttamiseksi). Vettä vaihdettiin eläinten välillä.
3.5 Histopatologia
Rotat nukutettiin 3 % natriumpentobarbitaalilla (0,15 ml/100 g). Kuudelle rotalle ryhmää kohden tehtiin transkardiaalinen perfuusio 4-prosenttisella paraformaldehydillä ja sen jälkeen 0,9-prosenttisella suolaliuoksella kiinnitystä, pään poistamista ja aivojen uuttamista varten. Aivot upotettiin 4-prosenttiseen paraformaldehydiin (4 astetta) 72 tunniksi, upotettiin parafiiniin, leikattiin ja leikattiin noin 5 μm:n kohdalla. Leikkeet kellutettiin 48 asteessa, kiinnitettiin, paistettiin 60 asteessa 4 tuntia, parafiini poistettiin ja rehydratoitiin, värjättiin hematoksyliinilla, erotettiin, huuhdeltiin, vastavärjättiin eosiinilla, kuivattiin, kirkastettiin ja peitettiin mikroskooppista tutkimusta varten. Loput kuusi rottaa ryhmää kohden lopetettiin; aivokuori leikattiin nopeasti jäällä ja säilytettiin -80 asteessa RNA:n uuttamista varten.
3,6 mRNA:n kvantifiointi
Kohdesekvenssit haettiin NCBI:sta ja alukkeet suunniteltiin Primer 6.0:lla.
cAMP: eteenpäin 5'-CCGTGCTGTGGATGACTTCAACC-3'; Käänteinen 5′-AGTCTCCTTCACTCGGAACCTCA-3′; 133 bp.
CREB1: Eteenpäin 5′-GGAGCAGACAACCAGCAGAGTG-3′; Käänteinen 5′-GGATACCTGGGCTAATGTGGCA-3′; 105 bp.
GAPDH: eteenpäin 5′-AAGGGCTCATGACCACAGTC-3′; Käänteinen 5′-GGATGCAGGGATGATGTTCT-3′; 116 bp.
qPCR-olosuhteet: esidenaturointi 90 astetta 30 s; 45 sykliä 95 astetta 10 s, 60 astetta 30 s, 72 astetta 30 s. Sulakäyräanalyysi: 95 astetta 1 min, 55 astetta 1 min, 95 astetta 1 min.
3.7 Seerumin tulehdustekijät
ELISA: i) aseta standardit ja näytteet; lisää 50 µl standardeja asteittaisina pitoisuuksina standardikuoppiin; (ii) lisää 40 µl näytelaimentinta nolla- ja näytekuoppiin, sitten 10 µl näytettä ja sekoita; (iii) lisää 100 µl entsyymikonjugaattia kaikkiin paitsi nollakokeisiin; (iv) sulje ja inkuboi 37 asteessa 1 tunti; (v) laimea konsentroitu pesupuskuri 1:20; (vi) pese 5 kertaa ja taputtele kuivaksi; (vii) lisää 50 µl substraattia A ja sitten 50 µl substraattia B, inkuboi 37 asteessa valolta suojattuna 15 minuuttia; (viii) lisätään pysäytysliuos; (ix) lue absorbanssi aallonpituudella 450 nm nollanäytteiden ollessa asetettuna.
Tilastollinen analyysi
Tiedot analysoitiin SPSS 26.0:ssa ja ilmaistiin keskiarvona ± SD. Normaaliuden ja varianssin homogeenisuuden vahvistamisen jälkeen käytettiin yksisuuntaista ANOVAa. P < 0,05 katsottiin tilastollisesti merkitseväksi.
Lukijahuomautus harjoittajille ja apua hakeville
Kasvitieteellisten/TCM-masennuslääkkeiden kehittäjille: Tutkimus yhdistää klassisen kaavan tiettyyn neurobiologiseen reittiin (cAMP–CREB) ja tulehdusvälittäjiin (PGE2, SP). Tällainen kaksoismodulaatio-neuroplastisuus-signalointi ja tulehdus sopivat yhteen nykyajan masennuksen biologian kanssa ja voivat ohjata kaavan optimointia, biomarkkerien valintaa ja yhdistelmästrategioita SSRI-lääkkeiden, kuten fluoksetiinin, kanssa.
Henkilöille, jotka etsivät apua masennukseen: Prekliiniset tulokset eivät voi korvata lääketieteellistä hoitoa, mutta ne viittaavat siihen, että Xiaoyaosan voi parantaa masennuskäyttäytymistä normalisoimalla aivojen signalointia ja vähentämällä tulehdussignaaleja. Jos harkitset kasviperäisiä vaihtoehtoja, ota yhteyttä pätevään kliinikon puoleen, varsinkin jos käytät masennuslääkkeitä, välttääksesi yhteisvaikutuksia ja varmistaaksesi annostelun ja laadunvalvonnan.
Siirtymävaiheen takeaway
Xiaoyaosan paransi käyttäytymistä, aivojen histologiaa ja molekyylimarkkereita CIS-indusoiduissa masentuneissa rotissa, todennäköisesti säätelemällä aivokuoren cAMP/CREB-signalointia ja alentaen samalla perifeeristä PGE2:ta ja SP:tä. Tämän pohjalta seuraava tutkimus erittelee cAMP:n ylävirran säätelijät (esim. adenylyylisyklaasin isoformit ja fosfodiesteraasit) ja määrittää, moduloiko Xiaoyaosan suoraan näitä kohteita vai toimiiko ensisijaisesti CREB:hen lähentyvien anti-inflammatoristen reittien kautta.
