Synergistinen anti-ihon pigmentaatiovaikutus fenyylietanoidien glykosidit ja glabridiini
Jan 14, 2025
Tiivistelmä tutkimaan synergististäCistancheFenyylietanolipuoli (PHG) ja glabridiini (GLA) ihopigmentaatiota vastaan, PHG: n ja GLA: n massasuhde seulottiin in vitro tyrosinaasin estämiskokeella, 1, 1- difenyyli ({2}} trinitrofenyylihydratsiini (DPPH) ja 2, 2- diazo-bis (3- etyyli-bentsotiatsoli {-6- sulfonihappoa Diammonium-kationi (ABTS+) vapaan radikaalin radikaalin poistokokeet. B16F10: n UVB: n aiheuttama hypopigmentaatiomalli arvioitiin ja Melaniinin inhibition. hakemistoina.
SetulehduksellinenLipopolysakkaridin (LPS) indusoimien HACAT-solujen malli määritettiin, ja lääkkeen anti-inflammatorinen vaikutus arvioitiin estämällä interleukinin -6 (IL -6) ja tuumorinekroositekijä- (TNF-) vapautumista. Azodiisobuamidiinihydrokloridin (AAPH) indusoiman HACAT -solujen hapettumisstressimalli vahvistettiin edelleen, ja superoksididismutaasin (SOD) ja katalaasia (CAT) tehostettua aktiivisuutta käytettiin indekseinä lääkkeen antioksidanttivaikutuksen arvioimiseksi. PHG: ien ja GLA: n optimaalinen massasuhde määritettiin edellä mainituilla kolmella solumallilla. Tulokset osoittivat, että PHGS/GLA: n (1∶1), PHGS/GLA: n (5∶1) ja PHGS/GLA (10∶1) vesiliuokset, jotka on valmistettu M (PHGS) ∶M (GLA) =1 ∶1, 5∶1, 10∶1, osoittivat hyvää estävää ja synergististä vaikutusta tyrosinaasiaktiivisuuteen ja antioksidiseen aktiivisuuteen. PHGS/GLA: n (1∶1) estoasteet,
PHGS/GLA (5∶1) ja PHGS/GLA (1 0 ∶1) vesiliuokset, joiden massapitoisuus oli 0,4 g/l, olivat vastaavasti 94,37%, 92,93%ja 88,06%. DPPH -vapaiden radikaalien poistosuhteet olivat vastaavasti 89,44%, 88,72,%ja 88,10%.
ABTS+ -radikaalien poistosuhteet olivat vastaavasti 1 0 0,13%, 100,0,1%ja 99,87%. Kun PHG: n/GLA: n massapitoisuus oli 25 ug/ml, PHGS/GLA (1∶1), PHGS/GLA (5∶1) ja PHGS/GLA (10∶1) vesiliuokset eivät osoittaneet sytotoksisuutta B16F10- ja HACAT -soluihin. Tyrosinaasiaktiivisuuden estäminen PHGS/GLA: ssa (1 ∶1) vesiliuoksessa oli vahvempi (tyrosinaasiaktiivisuus 23,80%) ja melaniinipitoisuus (30,90%) laski merkittävästi. PHGS/GLA (1∶1) vesiliuos osoitti parhaan estovaikutuksen IL -6 ja TNF-vapautumiseen ja kykyyn parantaa SOD: n ja CAT: n aktiivisuutta. PHGS: n ja GLA: n yhdistelmä osoitti hyvää synergististä suorituskykyä, ylivoimainen A yksittäinen lääke ja korkeampi kuin PHGS/ GLA (5∶1) ja PHGS/ GLA (10∶1) vesiliuos. PHG: ien ja GLA: n yhdistelmällä oli synergistinen rooli ihon pigmentaation parantamisessa estämällä melaniinin tuotantoa ja anti-inflammatorisia ja antioksidanttivaikutuksia.
Avainsanat cistanche fenyylietanoidinen glykosidit; glabridiini; synergistiset vaikutukset; Anti-ihon pigmentaatio; hapettuminen; tulehduksen vastainen; huumemateriaalit
Cistanche -fenyyli -etanolin puoli valkaisua varten
Wecistache-tukeva palvelu-Kiinan suurin Cistanche-viejä:
Sähköposti: wallence.suen@wecistanche.com
Whatsapp/tel: +86 15292862950
Lisätietoja mahdollisista alennuksista ei epäröi ottaa yhteyttä asiakaspalveluhuoneeseemme. He auttavat sinua mielellään!
Ihopigmentaatio on ihosairaus, joka aiheuttaa tekijät, kuten vammat, ihon tulehdukset ja ultraviolettisäteily [1-2]. Nämä tekijät voivat johtaa melaniinin epänormaaliin lisääntymiseen, mikä puolestaan aiheuttaa ongelmia, kuten chloasma, pisamia ja tulehduksen jälkeistä hyperpigmentaatiota (PIH) [3-4], vaikuttavat ihmisten henkiseen tilaan ja elämänlaatuun. Tällä hetkellä ihopigmentaation hoito keskittyy pääasiassa tyrosinaasin estämiseen, keskeiseen entsyymiin melaniinin [5-6] muodostumisessa.
Viimeisin tutkimus [7-8] osoittaa, että ihopigmentaatio riippuu keratinosyyttien ja melanosyyttien välisestä yhteydestä epidermissä. Kun keratinosyyttien vapauttamat vapaat radikaalit ja tulehdukselliset tekijät ovat kosketuksissa melanosyyttien kanssa, ne aiheuttavat tyrosinaasiaktiivisuuden lisääntymisen, mikä johtaa melaniinipitoisuuden lisääntymiseen. Ne kiihdyttävät myös melaniinin kuljetusta ja aiheuttavat melaniinin keräämisen ihon pinnalle. Siksi ihon pigmentoinnin hoito vaatii erilaisia toimenpiteitä, kuten melaniinin tuotantoa, anti-inflammatorisia ja hapettumista.
Tällä hetkellä, vaikka perinteisillä lääkeainevalmisteilla, kuten hydrokinonilla ja hydrokinonilla, on tiettyjä vaikutuksia ihopigmentaation hoidossa, niiden toimintatavat ovat suhteellisen yksittäisiä ja ne voivat tuottaa haittavaikutuksia [9-10]. Vertailun vuoksi luonnolliset lääkkeet ovat luonnollisia ja lievää käytännössä, ja kuluttajat tunnustavat ne yhä enemmän [11-12]. Erityisesti useiden kasviuutteiden [13-14] yhdistelmä ei voi vain estää melaniinin tuotantoa, vaan sillä on myös useita vaikutuksia, kuten anti-inflammatorisia ja antioksidanttivaikutuksia, jotka tarjoavat uusia ideoita ja menetelmiä ihopigmentaation hoitoon.
Cistanche Deserticola MA: lla on ainutlaatuinen lääkearvo ja se tunnetaan nimellä "aavikon ginseng". Tutkimuksissa on havaittu, että tyypillisellä ainesosan fenyylietanoidiglykosidilla, joka sisältyy Cistanche-alueella, on hyvä antioksidanttivaikutus [15] ja anti-inflammatorisia vaikutuksia [16], ja sillä on myös tietty tyrosinaasin estävä vaikutus [17]. Glycyrrhizin on flavonoidikomponentti Glycyrrhiza Glabra L., jolla on voimakas valkaisuvaikutus ja jota kutsutaan "valkaiseva kulta" [18]. Perinteinen kiinalainen lääketiede ihon pigmentoinnin hoito alkaa yleensä pernan ja munuaisten fbystrughting, lämmön ja vieroitusten puhdistamisen sekä QI: n ja veren täydentämisen [19].
Cistanche Deserticolan fenyylietanoliset glykosidit voivat täydentää munuaisten yangia ja hyötyä olemuksesta ja verestä, kun taas glycyrrhiza glabra voi täydentää pernaa ja Qi: tä, puhdistaa lämpöä ja detoksifioida. Nämä kaksi voivat toimia yhdessä pigmentaation vastustamiseksi. Cistanche Deserticolan ja glabridiinin fhenyylietanoidi -glykosidien yhdistelmä voi vastustaa ihopigmentaatiota monista ulottuvuuksista ja kohteista, suojata ultraviolettisäteiltä koko bandissa, synergistisesti estää tyrosinaasiaktiivisuutta ja vähentää melaniinin tuotantoa ja vähentää myös melaniinin tuotantoa ja säätää melaniinin tuotantoa ja säätää melaniinin tuotantoa ja säätää melaniinin tuotantoa ja hapettua stressiä ja hapettua stressiä. Kirjallisuudessa on kuitenkin vähän raportteja ihon pigmentaation synergistisestä estämisestä Cistanche Deserticolan ja glabridiinin fenyylietanoidien glykosidien avulla.
Tämän artikkelin tarkoituksena on selvittää, onko Cistanche deserticolan (PHGS) ja glabridiinin (GLA) pfenyylietanoidglykosidien synergistinen vaikutus in vitro biokemiallisten kokeiden ja 3 -solumallin muodostumisen kautta. Sen odotetaan tarjoavan teoreettista tukea ja käytännöllistä ohjausta kasvien luonnollisten ihonhoitotuotteiden kehittämiselle ja ihonhoitoteollisuuden edistämiseksi kehittymään luonnollisempaan, terveellisempaan ja tehokkaampaan suuntaan.
Missä: Reaktio on näyteliuoksen, L-tyrosiiniliuoksen, PBS: n ja tyrosinaasiliuoksen absorbanssi; Reaktion kontrolli on näyteliuoksen, L-tyrosiiniliuoksen, N- ja PBS-liuoksen absorbanssi; Tyhjä on L-tyrosiiniliuoksen, PBS-liuoksen ja tyrosinaasiliuoksen absorbanssi; Tyhjä kontrolli on L-tyrosiini- ja PBS-ratkaisujen absorbanssi.
'
1.3.2 DPPH: n vapaan radikaalin poistokyvyn määrittäminen
Ensinnäkin, punnitse tarkasti {{0}}. 0 197 g (0. 0 5 mmol) ja liuota se 25 0 ml: een anhydrous -etanolin valmistukseen {13}. mmol/l. Sitten PHG: t ja GLA: n valmistettiin PHGS -etanoliliuokseen ja GLA -etanoliliuokseen 0. 0 01, 0,01, 0,1, 0,4, 0,8, 1,2, 1,6, 2,0 mg/ml. Sitten PHGS -etanoliliuos ja GLA -etanoliliuos sekoitettiin tasaisesti M (PHGS -liuos) ∶ M (GLA -liuos)=40 ∶1, 20∶1, 10∶1, 5∶1, 1∶1, 1∶5, 1∶10, 1∶20, 1∶40, jotta saadaan 9 tyyppistä PHGS/GLA -etanoliliuoksia, jotka olivat PHGS/GLA: n eri lajit/GLA: n gLA: n astiat. (40∶1) ~ PHGS/GLA (1∶40) etanoliliuokset. Lisää lopuksi 100 μl erilaisia näytesuojauksia ja 100 μl DPPH -työliuosta 96- kaivolevyyn, sekoita hyvin ja pidä poissa valosta huoneenlämpötilassa 30 minuutin ajan. Mittaa absorbanssi aallonpituudella 517 nm entsyymimarkkerilla. VC: tä käytettiin positiivisena kontrollina, ja jokainen koe toistettiin 3 kertaa. Laske DPPH: n vapaan radikaalin poistoaste (%) kaavan (2) mukaisesti.
DPPH vapaan radikaalin poistonopeus/%=(1 −1 - 𝐴3𝐴2) × 100 (2) missä: A1 on näytteen liuoksen absorbanssi + DPPH -työratkaisu; A2 on 50% etanolin absorbanssi tilavuudella + DPPH -työliuoksella; A3 on näytteen liuoksen + 50% etanolin absorbanssi tilavuuden mukaan.
1.3.3 ABTS: n määrittäminen+ vapaiden radikaalien poistokyky
Ensinnäkin punnitse 1 g (1,82 mmol) ABT: tä ja liuottaa se deionisoidussa vedessä ABTS: n työliuoksen valmistelemiseksi lopullisella konsentraatiolla 7,4 mmol/l; punnitse 0. 5 g kaliumpersulfaattia ja liuottaa se deionisoidussa vedessä kaliumpersulfaatti -työliuosta valmistelemaan lopullinen pitoisuus 2,6 mmol/l; Sekoita ABTS -työliuos ja kaliumpersulfaattityöliuos yhtä suurina määrinä ja reagoi 12 tunnin ajan pimeässä ABTS+ -työliuoksen valmistamiseksi. Sitten, osion 1.3.2 menetelmän mukaan valmistele PHGS -etanoliliuos, GLA -etanoliliuos, N ja VC -etanoliliuos, samoin kuin PHGS/GLA (40∶1) ~ PHGS/GLA (1∶40) etanoliliuos.
Lisää lopuksi 40 μl erilaisia näytelatkaisuja ja 160 μl ABTS+ -työliuosta 96- kaivolevyyn, sekoita hyvin, reagoi huoneenlämpötilassa pimeässä 6 minuutin ajan ja mittaa liuoksen absorbanssi 734 nm: n nopeudella ELISA -lukijalla. Laske ABTS+ vapaan radikaalin poistoaste (%) kaavan (3) mukaisesti.
Missä: A1 on näytteen liuoksen + ABTS + työliuosta; A2 on deionisoidun veden + ABTS + -työliuoksen absorbanssi; A3 on näytteen liuoksen + deionisoidun veden absorbanssi.
1.4 Solukoe
1.4.1 Soluviljelmä
Kun B16F10- ja HACAT-solut on elvytetty, ne siirretään DMEM-korkean glukoosin väliaineeseen (joka sisältää 10%: n naudan sikiön seosin ja 1% penisilliini-streptomysiinin massajakeen avulla) ja viljelty inkubaattorissa 37 asteessa, 5% CO2-tilavuuden fraktiossa ja 70%: n koskunnassa 24 tunnin ajan. Solujen kasvutila havaitaan mikroskoopilla ja väliaine korvataan tai subkuloitiin solujen kasvutilan mukaan.
1.4.2 Kokeellinen ryhmittely
B16F10- ja HACAT -solut logaritmisessa kasvuvaiheessa ympätään 96- kaivolevyillä sopivilla solumäärillä ja viljelty 24 tunnin ajan, jotta solut voivat tarttua seinään. Eri massapitoisuuksien näytteen liuokset valmistetaan käyttämällä DMEM -viljelyalusta. Normaali ryhmä, malliryhmä, pieniannoksinen PHGS (125 ug/ml) ryhmä, keskipitkän annoksen PHGS (250 ug/ml) ryhmä, suuriannoksiset PHG: t (500 ug/ml) ryhmä, pieniannoksinen GLA (6,25 ug/ml) ryhmä, keskipitkän annos GLA (12,5 UG/ml) -ryhmä, suuriannos GLA (25 UG/ML) ja PHGS/PHGS/GLA) ja PHGS/GLA), GLA (1 ') GLA (25) GLA (25) GLA (25) GLA (25) GLA (25 PHGS/GLA (5∶1) -ryhmä ja PHGS/GLA (10∶1) viljelyalusryhmä perustettiin.
UVB: n indusoimassa B16F10-pigmentointimallissa malliryhmäsolut lisättiin 30 μl: lla PBS: ää (pH =7. 4) ja sijoitettiin 3 cm suoraan UVB-säteilijän alle 110 s; Koemisryhmä esikäsiteltiin 100 μl: lla eri massapitoisuuksien näytteen liuoksia 1 tunnin ajan, sitten lisättiin 30 μl PBS: ää ja sijoitettiin 3 cm suoraan UVB -säteilijän alapuolelle 110 sekunnin ajan; Normaali ryhmä käytti aina korkean glukoosin DMEM-viljelyalusta; Tyhjä ryhmää ei ympätä soluilla, vaan yhtä suurella määrällä viljelyalusta.
LPS: n indusoimassa HACAT-solun tulehduksen mallissa malliryhmää viljeltiin LPS: n PBS-liuoksella pitoisuutena 20 ug/ml 24 tunnin ajan; Koemisryhmä esikäsiteltiin 100 μl: n näytteen liuoksilla, joissa oli erilaisia massapitoisuuksia 24 tunnin ajan, ja sitten lisättiin 20 ug/ml LPS -liuoksella 24 tunnin ajan; Normaali ryhmä käytti aina korkea-glukoosin DMEM-elatusainetta; Tyhjä ryhmää ei ympätä soluihin, vaan yhtä suurella määrällä viljelyalusta.
AAPH: n indusoidussa HACAT-solu-oksidatiivisessa stressimallissa malliryhmää viljeltiin 100 ml AAPH (2,5 mmol) liuoksella pitoisuutena 25 mmol/l 24 tunnin ajan; Koemisryhmä esikäsiteltiin 100 μl: n näytteen liuoksilla, joissa oli erilaisia massapitoisuuksia 24 tunnin ajan, ja sitten lisättiin AAPAh -liuoksella pitoisuutena 25 mmol/l 24 tunnin ajan; Normaali ryhmä käytti aina korkea-glukoosin DMEM-elatusainetta; Tyhjä ryhmää ei ympätä soluihin, vaan yhtä suurella määrällä viljelyalusta.
Jokainen ryhmä asetettiin 3 replikoitua kaivoa ja viljeltiin inkubaattorissa 37 asteessa, 5% CO2 -tilavuusosuuteen ja 70% kosteuteen.
1.4.3 sytotoksisuusmääritys
CCK8 -menetelmää käytettiin sytotoksisuuden määrittämiseen. B16F1 0 ja HACAT -solut logaritmisessa kasvuvaiheessa pilkottiin 0,25% trypsiinillä 3 minuutin ajan. Kun ruuansula oli lopetettu, viljelyalusta puhallettiin toistuvasti solususpension tekemiseksi tiheydellä 1 x 104 solua/ml. Solut ympättiin tasaisesti 96- kaivolevyyn, 100 μl kuoppaa kohti ja PBS lisättiin solujen ympärillä oleviin kaivoihin. Sen jälkeen kun solut tarttuivat seinämään, lisättiin erilaisia näyte liuoksen massapitoisuuksia, 3 replikoitua kaivoa ryhmää kohti ja viljeltiin inkubaattorissa 37 asteessa, 5% CO2 Kaikkia ryhmiä lisättiin 100 μl: lla täydellistä viljelyalusta, joka sisälsi 10% CCK8 -tilavuusosaa ja inkuboitiin 60 minuutin ajan. Liuoksen absorbanssi 450 nm: ssä mitattiin ELISA -lukijalla. Solujen elinkyky (%) laskettiin kaavan (4) mukaisesti.
Missä: Koeryhmä on solujen sisältävien kaivojen absorbanssi ja näyteliuos UVB -säteilytyksessä; Normaali ryhmä on solujen sisältävien kaivojen absorbanssi ja näyteliuos ilman UVB -säteilytystä; Tyhjä ryhmä on viljelyalustan sisältävien kaivojen absorbanssi, mutta ei soluja.
1.4.5 melaniinipitoisuuden määrittäminen
Melaniinipitoisuus määritettiin NaOH -hajotusmenetelmällä. Sen jälkeen kun soluja oli käsitelty 72 tunnin ajan kohdassa 1.4.2 olevan menetelmän mukaisesti, supernatantti hylättiin ja pestiin kahdesti PBS: llä ja lisättiin 100 μl NaOH -vesiliuosta, joka sisälsi 10% DMSO: ta tilavuudella (pitoisuus 1 mol/l). Sen jälkeen kun se oli asetettu 90 asteen uuniin 1 tunnin ajan, liuoksen absorbanssi 490 nm määritettiin entsyymimarkkerilla. Koe toistettiin 3 kertaa. Melaniinipitoisuus (%) laskettiin kaavan (5) mukaisesti.
1.5 Tulehduksellisen tekijäpitoisuuden ja oksidatiivisen stressiindeksin määrittäminen
Sen jälkeen kun solut on käsitelty 48 tunnin ajan kohdassa 1.4.2 olevan menetelmän mukaisesti, kunkin ryhmän HACAT -solut kerättiin solujen kaavin kanssa, sentrifugoitiin ja supernatantti kerättiin. IL: n -6 ja Tnf-sisältö määritettiin ELISA-pakkauksen ohjeiden mukaisesti.
Sen jälkeen kun solut on käsitelty 48 tunnin ajan kohdassa 1.4.2 olevan menetelmän mukaisesti, kunkin ryhmän HACAT -solut kerättiin solukalvolla, ja solut rikkoutuivat toistuvalla jäätymisellä ja sulattamalla. Solut sentrifugoitiin nopeudella 12000 r/min 4 asteessa 10 minuutin ajan, ja supernatantti kerättiin. SOD -aktiivisuus ja CAT -pitoisuus määritettiin ELISA -pakkauksen ohjeiden mukaisesti.
1.6 Yhdistetyn indeksin määrittäminen
Yhdistettyä indeksi (CI) -menetelmää [20] käytettiin määrittämään, oliko PHG: llä ja GLA: lla eri massasuhteissa synergistinen vaikutus estämään tyrosinaasiaktiivisuutta ja antioksidaatiota. Yhdistelmäindeksi laskettiin kaavan (6) mukaisesti:
Wherein: D1 and D2 are the mass concentrations (mg/mL) of the two drugs when the activity reaches x% in the combined treatment; DX is the mass concentration (mg/mL) required for the activity to reach x% when the two substances are used alone. Compusyn software was used for calculation. CI>1 osoittaa antagonistisen vaikutuksen, CI =1 ilmaisee lisäaineen ja CI<1 indicates a synergistic effect.
1.7 Tietoanalyysi
Kaikki tiedot ilmaistaan "aritmeettinen keskiarvo ± keskihajonta (𝑥̅ ± 𝑠)". Kaavioprisma 9.5. 0 -ohjelmistoa käytettiin tilastolliseen analyysiin. Yksisuuntaista varianssianalyysiä käytettiin vertailuun useiden ryhmien välillä. P<0.05 was considered statistically significant.
