Tutkimus Cistanche Deserticolan ja sen riisiviinin höyrytystuotteiden neuroendokriinis-immuunitoiminnasta glukokortikoidi-indusoidussa rottamallissa -Ⅱ

3.2.4. Immunohistokemia

Neuronaalista apoptoosia säätelevät monet apoptoottiset ja antiapoptoottiset geenit, pääasiassa apoptoosia edistävä geeni Bax ja Bcl-2-geeniperheen antiapoptoottiset geenit. Bcl-2 sijaitsee reaktiivisissa happea tuottavissa organelleissa, kuten mitokondrioissa, endoplasmisessa retikulumissa ja tumakalvoissa. Bcl-2 vaikuttaa vain vähän happivapaisiin radikaaleihin, mutta voiehkäisee solujen oksidatiivisia vaurioita. Bax kuljettaa sytoplasmasta mitokondrioiden kalvolle, muuttaa mitokondrioiden kalvorakennetta ja edistää sytokromi c:n vapautumista ja apoptoosin induktiota.

LUONNOLLINEN CISTANCHE TUBULOSA SEKSUAALITOIMINNON PARANTAMISEEN PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Lisämunuaisen sytoplasmassa ilmeni Bax- ja Bcl{0}}-proteiini. Värjäys osoitti kaikki keltaiset hiukkaset. Verrattuna BC-ryhmään Bax-proteiinin keskimääräinen optinen tiheys MC-ryhmässä kasvoi merkittävästi (P< 0.01). Compared to that of the MC group, the average optical density in the CD-LD and WCD-LD groups decreased significantly (P < 0.01) (Figure 5(a)).

Kuva 5(b) osoittaa, että verrattuna BC-ryhmään Bcl-2-proteiinin keskimääräinen optinen tiheys laski merkittävästi MC-ryhmässä (P< 0.05). Compared to that of the MC group, the average optical density in the WCD-HD and CD-HD groups increased significantly (P < 0.01), while those of the WCD-MD and CD-MD groups increased (P < 0.05).

Kaspaasi-3-proteiini sijaitsee pääasiassa sytoplasmassa alkuperäisessä muodossaan normaaleissa kudoksissa, ja sen ilmentyminen on vähäistä. Positiiviset signaalit ovat vaaleankeltaisia tai ruskeankeltaisia. Verrattuna BC-ryhmään kaspaasin-3 ilmentyminen MC-ryhmässä lisääntyi merkittävästi (P< 0.05). Compared to that of the MC group, the expression of caspase-3 in the WCD-HD and WCD-MD groups increased (P < 0.05) (Figure 5(c)).

Normaaleissa kudoksissa Fas-geenin ilmentyminen väheni, ja positiivinen signaali in situ -hybridisaatiolle oli ruskeankeltainen. Kuten kuvasta 5(d) näkyy, verrattuna BC-ryhmään, Fas-proteiinin keskimääräinen optinen tiheys MC-ryhmässä kasvoi (P< 0.05). Compared to that of the MC group, the average optical density in the WCD-HD and WCD-LD groups improved (P < 0.05) (Figure 5(d)).

FasL-proteiini sijaitsee pääasiassa solukalvossa tai sytoplasmassa, ja sen positiiviset signaalit ovat ruskeita. Verrattuna BC-ryhmään FasL-geenin keskimääräinen optinen tiheys MC-ryhmässä kasvoi merkittävästi (P< 0.05). Compared to that of the MC group, the average optical density of the FasL gene in the WCD-HD, WCD-MD, CDHD, and CD-MD groups increased significantly (P < 0.01) (Figure 5(e)).

Tulokset osoittivat, että CD ja WCD voivatindusoivat apoptoosia tulehdussoluissaja vähentää lisämunuaisten vaurioita edistämällä FasL-proteiinin ilmentymistä ja sitoutumista Fas-proteiiniin, aktivoimalla kaspaasi-3-proteiinia ja käynnistämällä kaspaasikaskadin. WCD-HD-ryhmän vaikutus oli paras.

3.3. Immuunitoiminnan määritys

3.3.1. Immuunielinten indeksi

Verrattuna BC-ryhmään kateenkorvakerroin ja MC-ryhmän pernaindeksi laskivat merkittävästi (P< 0.01). Compared to the MC group, the WCD-MD group had the greatest difference (P < 0.05). The thymus coefficient was almost back to the normal level. For the spleen index, the WCDMD, WCD-LD, and CD-MD groups showed significant differences compared with that of the MC group (P < 0.01) (see Figure 6). Therefore, WCD and CD treatment could protect the immune organs, and the effects of WCD were better.

LUONNOLLINEN CISTANCHE TUBULOSA SEKSUAALITOIMINNON PARANTAMISEEN PHGS75% ECH 30% ACT 12%

3.3.2. T-lymfosyyttien alaryhmien havaitseminen ääreisveressä

CD{0}}-solujen prosenttiosuus vasemmassa yläkvadrantissa ja CD8+-solujen prosenttiosuus oikeanpuoleisessa alemmassa neljänneksessä BC:ssä ja jokaisessa lääkeryhmässä oli suurempi kuin MC-ryhmässä. Verrattuna BC-ryhmään CD4+ThCD8+-suhde laski merkittävästi MC-ryhmässä (P< 0.01). Compared to that of the MC group, the ratio of CD4+ThCD8+ increased significantly in the PC group, the WCD group, and the CD-HD group (P < 0.01) (Figure 7).

3.3.3. IL-10, IL-6, IL-2, TNF-Α ja IFN-C tason määrittäminen seerumissa

Kuva 8 osoittaa, että verrattuna BC-ryhmään IL-6, TNF- ja IFN-c nousi merkittävästi (P< 0.01). The level of IL-10 and IL-2 decreased in the MC group. Compared to that of the MC group, the level of IL-6, TNF-α, and IFN-c decreased and IL-10 and IL-2 increased in serum in each of the drug groups. The effect of WCD was better than the effect of CD, especially in the WCD-MD group, in which the effect was close to that of the PC group.

3.3.4. Lymus-kudosmikroskoopin havainnointikokeen tulokset

Kuvio 9 osoittaa, että BC-ryhmässä oli suuri määrä lymfosyyttejä. Lymfosyytit ja retikulosyytit asetettiin löyhästi keskelle hajallaan pyöreillä tai soikeilla tymosyyteillä. Ei ollut nekroosia, ei tulehduksellisten solujen infiltraatiota eikä epänormaaleja muutoksia.

MC-ryhmä osoitti suuren määrän lymfoidinekroosikudosta, jonka keskellä oli lymfosyyttien ja retikulosyyttien epäjärjestys. Pyöreät tai soikeat tymosyytit katosivat, massiivinen solujen rappeutuminen tai nekroosi oli ilmeistä ja tulehdussolujen infiltraatio ja epänormaalit patologiset muutokset.

CD-ryhmissä lymfosyyttien morfologiset ominaisuudet olivat palautuneet normaaliksi ja keskuslymfosyyttien ja retikulosyyttien järjestys oli lähes normaali. Pyöreät tai soikeat tymosyytit olivat toipuneet, mutta jäljelle jäi pieni määrä degeneratiivisia tai nekroottisia lymfosyyttejä ja tunkeutuvia tulehdussoluja.

WCD- ja PC-ryhmissä lymfosyyttien morfologiset ominaisuudet korjaantuivat paremmin. Keskellä olevat lymfosyytit ja retikulosyytit olivat hyvin linjassa, pyöreät tai soikeat tymosyytit olivat lähes normaaleja, mutta jäljelle jäi pieni määrä tunkeutuvia ja rappeutuvia lymfosyyttejä.

3.4. CaM-proteiinin geeniekspressio

RQ-arvon (CaM-mRNA-aktiini-mRNA) katsottiin tutkivan CaM-mRNA:n ilmentymistä. BC-ryhmän RQ oli 1. CaM-mRNA:n ilmentyminen hypotalamuksessa MC-ryhmässä lisääntyi merkittävästi (P< 0.01), while the value decreased in the WCD-HD, WCD-MD, WCDLD, and CD-HD groups (P < 0.05) (Figure 10). The expression of CaM mRNA in the hypophysis in the MC group was lower than that in the BC group (P < 0.01). The expression in the WCD-HD, WCD-MD, WCD-LD, CD-HD, and CD-LD groups increased (P < 0.05), and the effect in the WCD groups was better than the effect in the CD groups.

4. Keskustelu

Kiinan farmakopeassa [2] on kirjattu, että CD- ja WCD-levyjä voidaan käyttää klinikalla pääasiallisina keittokappaleina. Riisiviinin kanssa höyrytyksen jälkeenikääntymistä estäviä ja tonisoivia munuais-yang-vaikutuksiatehostettiin. UPLC-QqQ-MS:n avulla havaitsimme kemiallisen materiaalipohjan kvantitatiiviset muutokset riisiviinin höyrytysprosessin aikana. Iridoidiglykosidit olivat epästabiileja ja näiden glykosidien pitoisuus laski, jopa havaitsemattomiksi. Myös fenyylietanoliglykosidien pitoisuus muuttui, mikä saattoi aiheuttaa muutoksia farmakodynamiikassa ja kliinisessä vaikutuksessa.

LUONNOLLINEN CISTANCHE TUBULOSA SEKSUAALITOIMINNON PARANTAMISEEN PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Klassinen munuais-yangin puutosmalli toistettiin kortikosteroniinjektiolla ihon alle [19]. Kortikosteronin yliannostus saattaa estää CRH:n erittymistä hypotalamuksessa. Samaan aikaan ACTH:n salaisuus myös estettiin. Lisämunuaiskuoren hormonin taso laski ja siten HPA-akselin toiminta heikkeni. HPA-akselin vajaatoiminta on munuais-yangin puutteen yleinen ominaisuus [20]. Sitten rotilla esiintyy "tyhjennys"-ilmiöitä ja oireet ovat sopusoinnussa klinikan munuais-yangin puutteen kanssa.

MC-ryhmässä CRH-, ACTH-, T- ja CORT-tasot rotan seerumissa laskivat merkittävästi (P< 0.01). After being treated by CD and WCD, the content of CRH, ACTH, T, CORT, and cortisol all increased to some degree, and the effect of WCD-MD was the best, almost equal to that in the PC group. These results indicated that the relative hormone balance in the HPA axis had been destroyed in the MC group, CD and WCD could improve the functional recovery of abnormal adrenal axis hormone levels, but the effect of WCD was better.

Bcl{0}}-perheen jäsenten osuuden muokkaaminen on yksi ydinmekanismeista, joilla FasThFasL välittää kuolemanreseptorireittiä ja Bcl-2-perhe säätelee mitokondrioreittiä [21]. Apoptoosia estävä tekijä Bcl-2 ja apoptoosia indusoivat tekijät, kuten Bax, kuuluvat kaikki Bcl-2-perheeseen [22]. Solujen apoptoosi voidaan määrittää apoptoosia inhiboivien tekijöiden ja apoptoosia indusoivien tekijöiden suhteellisella suhteella [23]. Mitokondrioilla on keskeisten tarkistuspisteiden tehtävä monille apoptoosin muodoille [24]. Tämä tutkimus osoitti, että CD-MD ja WCD:t voivat päätellä Baxin ilmentymisen ja lisätä Bcl{13}}parantaa munuais-yangin puutetta. Fas on tärkein kuolemanreseptori, joka indusoi apoptoosia ligaatiolla Fas-ligandin (FasL) kanssa [25]. Fas:n ja FasL:n ilmentyminen MC-ryhmässä lisääntyi, kun taas tämä ilmentyminen lisääntyi merkittävästi WCD-MD-ryhmässä (P< 0.01) compared with the MC group. Both FasThFasL and BaxThBcl-2 systems transduce apoptotic signals to the caspase family [26]. Caspase-3 is one of the pivotal proteinases that initiate cell apoptosis. The activation of caspase-3 indicates that apoptosis enters an irreversible stage [27]. The expression of caspase-3 in the MC group increased and increased significantly in the WCD-HD and WCD-MD groups (P < 0.05).

Immuunitoiminnan puute on yksi munuais-yangin puutteen tärkeimmistä ilmenemismuodoista [28]. Tässä tutkimuksessa havaitsimme, että WCD-MD-ryhmän pernan ja kateenkorvan indeksi parani merkittävästi (P< 0.01, P < 0.05). The immune response of the immune system is regulated mainly by the Th subgroups [29]. IL-2 is the growth factor for T cells, secreted by T cells and macrophages, participates in inflammatory regulation, regulates immunity, and increases infection resistance [30]. The level of IL-2 in the MC group decreased (P < 0.01), and after treatment with CD and WCD, the level of IL-2 recovered. IL-6 and TNF-α are proinflammatory cytokines. Increased levels of IL-6 and TNF-α cytokines cause cytokine imbalances and exacerbate inflammation. The levels of IL-6 and TNF-α increased in the MC group, while after treatment, the levels of IL-6 and TNF-α decreased. T cells are divided into CD4 cells and CD8 cells, and the CD4+ThCD8+ ratio can be used as an important index of immune regulation [31]. CD4+ThCD8+ in the MC group decreased (P < 0.01), while in the WCD and CDHD groups increased (P < 0.01).

HPA-akseli on tärkein säätelyjärjestelmä, koska se säätelee glukokortikoidien eritystä ja endokriinistä järjestelmää lisämunuaiskuoren eritystoiminnan ylläpitämiseksi [32]. CaM-mRNA:n yli-ilmentyminen hypotalamuskudoksessa liittyi munuaisten yangin puutteeseen. CD ja WCD voivat estää kalsiumkanavia, estää CaM-mRNA:n ilmentymisen hypotalamuksessa ja vähentää kalsiumin sisäänvirtausta, mikä vähentää Ca2+·CaM-kompleksin aktiivisuutta.

Munuais-yang-puutoksen muodostuminen on krooninen sairauden kehittymisprosessi. Munuainen ei ole enää puhtaasti anatominen käsite, vaan se on yleinen termi neuroendokriiniselle immuniteetille ja urogenitaalisille järjestelmille. Neuroendokriini-immuuniverkko (NEI) on tärkeä integroitu sääntelyjärjestelmä [33]. CD ja WCD voivat säädellä HPAT-akselin toimintaa ja parantaa munuais-yang-puutoksen paranemista. Tämä tulos tarjoaa kokeellisen perustan munuais-yangin puutteen kliiniselle ehkäisylle ja hoidolle.