Spontaani granulosyyttinen leukemia NOD/Shi-scid IL-2R null -hiiressä

Abstrakti:Tässä raportoimme tapauksesta spontaanista granulosyyttisestä leukemiasta 51-viikon ikäisellä miehellä NOD/Shi-SCIDIL-2R null (NOG) hiiri. Hiiri näyttiprogressiivinen anemiajakarkea hengitysliike. Makroskooppisesti perna oli värjääntynyt ja laajentunut. Histologisesti luuydinrintalastanja reisiluu oli erittäin solumainen ja lähes yksinomaan täynnäneoplastiset solut. Neoplastisten solujen tumat olivat suuria, soikeita tai hieman epäsäännöllisen muotoisia, ja pienellä määrällä soluja olimunuainen- tai renkaan muotoisia ytimiä.Neoplastiset solutsoluttautuivat laajasti elimiin, ja perna ja maksa olivat näkyvästi mukana. Immunohistokemiallisesti suuri neoplastisten solujen populaatio pernan punaisessa massassa ja maksan sinusoidissa oli positiivinenmyeloperoksidaasi. Histologisten ominaisuuksien perusteella tämä tapaus diagnosoitiingranulosyyttinen leukemia. Tämä uusi tieto aiheestaspontaanit kasvaimetvoi olla hyödyllistä tämän hiirikannan asianmukaisessa käytössä jatkotutkimuksissa. (DOI: 10.1293/tox.{2}}; J Toxicol Pathol 2021; 34: 241–244)

Avainsanat: granulosyyttinen leukemia, NOG-hiiri, spontaani kasvain

NAPSAUTA TÄSTÄ SAADAksesi LUONNOLLISTA ORGAANIISTA CISTANKSIUUTEtta, JOKA SISÄLTÄ 25 % KINAKOOSIDEA JA 9 % AKTEOSIDIA MUUNAISTEN TOIMINTAAN

Wecistanchen tukipalvelu - Kiinan suurin vesisäiliön viejä:

Sähköposti:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/Puhelin:+86 15292862950

Osta lisätietoja teknisistä tiedoista:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop

Spontaani granulosyyttinen leukemiaon harvoin raportoitu useissa hiirissä, vaikka kemialliset aineet ja ionisoiva säteily voivat lisätä esiintyvyyttä joissakin hiirikannoissa1, 2. NOD/Shi-scid IL-2R null (NOG) -hiiret ovat vakaviaimmuunipuutoseläimetja esittelevät vikoja T-, B- ja luonnollisissa tappajasoluissa sekä huonosti toimivissa makrofageissa ja dendriittisoluissa IL-2-reseptoriketjun (IL2R c) poistamisen vuoksi NOD-scid-kantaan3. Tätä hiirikantaa käytetään ei-kliinisissä testeissä, kuten tuumorigeenisyystestissä, jotta voidaan arvioida ihmisperäistä solua/kudosta käyttävien regeneratiivisen lääketieteen biologisten tuotteiden laatua ja turvallisuutta, koska ksenogeeniset solut ovat huomattavasti paremmat 4–6. Vaikka immuunipuutostilaa ja sen vaikutuksia ksenografteihin on tutkittu hyvin, on saatavilla vain vähän tietoa spontaaneista kasvaimista, joita esiintyy tässä hiirikannassa, kuten kateenkorvan lymfoomasta,rintarauhanenrauhanen adenooma/adenokarsinooma, bronkioloalveolaarinen syöpä, rabdomyosarkoomaja teratoma7. Tässä raportoimme granulosyyttisen leukemian tapauksesta 51-viikon ikäisessä NOG-uroshiiressä.

Eläin hankittiin yhtiöltä In-Vivo Science Inc. (Kanagawa, Japani) 6 viikon iässä ja pidettiin hoitamattomana. Eläin pidettiin yksittäin muovihäkissä, jossa oli yksilöllisesti tuuletettu häkkijärjestelmä (Maxi Miser Caging System; Oriental Giken Inc., Tokio, Japani) ympäristöllisesti kontrolloidussa estejärjestelmähuoneessa, jonka lämpötila pidettiin 22 ± 2 asteen lämpötilassa. kosteus 50 ± 20 % ja 12-h valo/pimeä-jakso. Hiirelle annettiin autoklavoitua pelletoitua ruokavaliota (CRF-1; Charles River Japan, Inc., Tokio, Japani) autoklavoidulla vesijohtovedellä ja libitumilla. Eläintä käsiteltiin AAALAC Internationalin akkreditoiman CMIC Pharma Science Co., Ltd.:n Institutional Animal Care and Use Committeen hyväksymän protokollan mukaisesti.

Tällä hiirellä oli kliinisiä heikkenemisen merkkejä, kuten anemiaa, karkeaa hengitysliikettä ja painon laskua 49–51 viikon iässä. Eläin lopetettiin 51 viikon iässä. Ruumiinavauksessa perna värjäytyi ja suureni. Muissa elimissä ei havaittu ilmeisiä poikkeavia löydöksiä. Kateenkorva ja imusolmuke olivat atrofisia, samanlaisia ​​kuin normaaleilla NOG-hiirillä.

Kaikki elimet ja kudosnäytteet kerättiin rutiininomaisesti, kiinnitettiin 10-prosenttisessa neutraalissa puskuroidussa formaliinissa, upotettiin parafiiniin ja leikattiin noin 3 μm:n pituiseksi. Hänen patologista tutkimustaan ​​varten leikkeet värjättiin hematoksyliinilla ja eosiinilla (HE). Leikkeet pernasta ja maksasta värjättiin immunohistokemiallisesti kanin anti-ihmisen myeloperoksidaasin (MPO) polyklonaaliselle vasta-aineelle (Dako Japan, Tokio, Japani) myeloidisolumarkkeriksi, kanin anti-ihmisen CD3 monoklonaaliselle vasta-aineelle (Nichirei Biosciences Inc., Tokio, Japani) ) T-solumarkkerina ja kanin anti-ihmisen Pax{6}} monoklonaalinen vasta-aine (Abcam Inc., Cambridge, UK) B-solumarkkerina8. Leikkeitä inkuboitiin vasta-aineiden kanssa huoneenlämmössä 1 tunti, ja immunodetektio suoritettiin käyttämällä Histofine® MOUSESTAIN KIT (Nichirei Biosciences Inc.) 3,3'-diaminobentsidiini/H202 kromogeenina. Immunovärjätyt leikkeet olivat silloinvastavärjätty hematoksyliinillä.

Histopatologisesti rintalastan ja reisiluun luuydin oli erittäin solumainen ja lähes yksinomaan täynnä neoplastisia soluja (kuvio 1A). Rasvakudos syrjäytettiin kokonaan. Ytimessä oli ajoittain erytroidisista ja megakaryosyyttisistä elementeistä koostuvia solupesäkkeitä, joiden katsottiin olevan jäänteitänormaali hematopoieesi. Useimmilla neoplastisilla soluilla oli blastinen ulkonäkö, jolle oli tunnusomaista suuret, soikeat tai hieman epäsäännöllisen muotoiset tumat ja verkkomainen kromatiini, joka sisälsi yhden tai useamman näkyvän nukleolin. Siellä oli pieni määrä soluja, joissa oli munuaisen tai renkaan muotoisia ytimiä, ja muutamia soluja, joissa oli liuskaisia ​​ytimiä, oli myös läsnä (kuvio 1B). Neoplastisten solujen sytoplasmassa olevat rakeet eivät olleet ilmeisiä HE:llä värjätyissä osissa. Ytimestä löydettiin lukuisia mitoottisia hahmoja, ja myös satunnaisia ​​apoptoottisia kappaleita havaittiin. Neoplastiset solut tunkeutuivat selvästi periosteumiin ja ympäröivään luustolihakseen. Neoplastisia soluja tunkeutui laajasti muihin elimiin ja kudoksiin, ja perna ja maksa olivat näkyvästi mukana. Pernassa neoplastisia soluja havaittiin läpi punaisen massan (kuvio 2). Neoplastisten solujen kapselin tunkeutuminen oli ilmeistä. Muutamia kehittyviä erytroidisarjoja ja megakaryosyyttejä havaittiin. Ajoittain havaittiin megakaryosyyttejä, jotka sisälsivät yhden tai joitain myeloidisia soluja sytoplasmassa, mikä viittaa emperipoleesiin. Maksassa neoplastiset solut tunkeutuivat Glissonin kapseliin ja maksan sinusoideihin diffuusisesti (kuvio 3). Neoplastisia soluja, joissa oli munuaisen tai renkaan muotoisia ytimiä, havaittiin myös joissakin verisuonissa. Jotkut periportaalialueen maksasolut, joissa oli näkyvä neoplastisten solujen infiltraatio, osoittivat rappeutumista tai nekroosia, kun taas maksalohkon normaali rakenne pysyi ehjänä. Neoplastisten solujen infiltraatiota havaittiin myös muissa elimissä, mukaan lukien keuhkojen keuhkorakkulaarinen seinämä ja perivaskulaarinen alue, munuaisten välialue, lisämunuaisten sinusoidi sekä mahalaukun limakalvo ja submukoosi (vatsa ja suolet). Immunohistokemiallisesti suuri neoplastisten solujen populaatio pernan punaisessa massassa (kuvio 4) ja maksan sinusoidissa oli positiivinen MPO:lle. CD3- ja Pax-5-positiivisia soluja ei havaittu. CD3- ja Pax-5-immunovärjäyksen tulokset olivat samankaltaisia ​​kuin normaalien NOG-hiirten pernassa, jotka olivat histologisesti hypoplastisia eivätkä osoittaneet CD3- tai Pax{13}}-positiivisia soluja.

Immunohistokemiallinen tutkimus paljasti, että neoplastiset solut olivat peräisin myeloidisista solulinjoista. Joillakin asiaan liittyvillä alueilla, erityisesti pernassa ja maksassa, pienellä määrällä soluja oli munuais-, rengas- tai lohkomuotoja, jotka viittaavat erilaistuviin myeloidisarjoihin. Nämä havainnot viittaavat siihen, että neoplastiset solut ovat peräisin epäkypsistä granulosyyteistä. Vaikean myelopoieesin tapaus voi olla ilmeistä kaikentyyppisten kehittyvien myeloidisarjojen läsnäolona, ​​toisin kuin epäkypsät solut hallitsevat leukemiaa. Lisäksi etenevä anemia on granulosyyttisen leukemian yleinen kliininen merkki, ja erytroidi- ja megakaryosyyttisolujen lisääntyminen on vähäistä1. Pieni granulosyyttipopulaatio, jossa on lohkotumat ytimet vaurioituneella alueella ilman ilmeistä tulehdusta, osoittaa, että esillä olevan tapauksen löydökset ovat neoplastisia eikä reaktiivisia myelopoieesia.

Granulosyyttisessä leukemiassa luuydin voi korvautua epäkypsillä ja kypsillä myeloidisoluilla. Aiemmassa muita hiirikantoja koskevassa raportissa nämä neoplastiset solut tunkeutuivat täysin maksaan, pernaan, imusolmukkeisiin jne.2, ja nämä pernassa ja maksassa olevat solut sijaitsivat pääasiassa punaisessa massassa ja Glissonin kapselin ympärillä1. Siten leukeemisten solujen jakautuminen esillä olevassa tapauksessa oli identtinen edellisen tapauksen kanssa. Solujen morfologian perusteella hiirten granulosyyttinen leukemia luokitellaan kahteen tyyppiin: nuorten tyyppi, joka on verrattavissa ihmisen akuuttiin myelooiseen leukemiaan, ja kypsä tyyppi ihmisen krooniseen myelooiseen leukemiaan1. Nuorten tapauksessa luuytimessä, pernassa ja maksassa kasvainsoluja hallitsivat huonosti erilaistuneet solut, kun taas eri kypsymisasteita edustavia myeloidisia elementtejä voidaan nähdä ja myeloblastien prosenttiosuus oli joissakin kypsissä tapauksissa alhainen2, 9. Tässä tapauksessa leukemiasoluja hallitsi epäkypsä muoto, jossa oli suuria, soikeita tai hieman epäsäännöllisen muotoisia ytimiä. Lisäksi, kun otetaan huomioon kliiniset havainnot, joiden mukaan yleinen terveydentilan heikkeneminen, mukaan lukien etenevä anemia ja karkea hengityselimistö, kehittyi akuutisti; tämän vuoksi tämän tapauksen oletetaan olevan nuorisotyyppi.

Kuva 1. Histologiset kuvat reisiluun luuytimestä. V: Neoplastiset solut lisääntyvät diffuusisesti ja korvaavat siten luuytimen. B: Tumat ovat suuria, soikeat tai hieman epäsäännölliset. Pienellä määrällä soluja on munuaisen (keltainen nuolenpää), renkaan (vihreä nuolenpää) tai lohkon (valkoinen nuolenpää) muotoisia ytimiä. Mitoottinen luku on osoitettu valkoisella nuolella. HE tahraa. Musta palkki=50 μm (A), 10 μm (B).

Aiemmassa NOG-hiiriä koskevassa julkaisussa neoplastiset leesiot olivat yleensä harvinaisia; kateenkorvan lymfoomaa on kuitenkin raportoitu 0,82 % ikäryhmässä 16–40 viikkoa7, 10. Tietojemme mukaan spontaania granulosyyttistä leukemiaa ei ole aiemmin raportoitu NOG-hiirillä. Useissa hiirkannoissa, mukaan lukien B6C3F1 ja BALB/c, granulosyyttistä leukemiaa esiintyi harvoin2, 11, eikä sitä ole raportoitu näiden 12 kuukauden ikäisten tai sitä nuorempien hiirten tapauksessa. Tässä tapauksessa granulosyyttinen leukemia kehittyi 51 viikon iässä, mikä oli suhteellisen nuori ikä. Nämä uudet tiedot spontaaneista kasvaimista voivat olla hyödyllisiä tämän hiirikannan asianmukaisessa käytössä jatkotutkimuksissa.