Seerumin ja ulosteen aminohappoprofiilit kissoilla, joilla on krooninen munuaistauti

Abstrakti

Tutkimuksen tarkoituksena oli määrittää seerumin ja ulosteen aminohapot (AA) kissoilla, joilla on krooninen munuaissairaus (CKD) ja verrata niitä terveisiin kissoihin. Tähän poikkileikkaustutkimukseen sisällytettiin 35 kissaa, joilla oli International Renal Interest Society -vaiheen 1–4 krooninen munuaistauti ja 16 tervettä kypsää aikuista ja senioriasiakkaan omistamaa kissaa. Seerumeista analysoitiin 25 AA-konsentraatiota käyttämällä ioninvaihtokromatografista AA-analysaattoria, jossa oli kolonnin jälkeinen ninhydriinijohdannainen. Tyhjät ulostenäytteet analysoitiin 22 AA-pitoisuuden suhteen käyttämällä nestekromatografiaa tandem-massaspektrometrialla. CKD-kissoilla oli alhaisemmat seerumin fenyylialaniinipitoisuudet (keskiarvoero ± keskiarvon standardivirhe: 12,7 ± 4,3 µM; p=0.03), treoniinin (29,6 ± 9,2 µM; p {{19}) },03), tryptofaani (18,4 ± 5,4 µM; p=0,005), seriini (29,8 ± 12,6 µM; p=0,03) ja tyrosiini (11,6 ± 3,8 µM; p {{ 37}},01) ja korkeammat seerumipitoisuudet asparagiinihappoa (4,7 ± 2,0 µM; p=0,01), -alaniinia (3,4 ± 1,2 µM; p=0,01), sitrulliinia (5,7) ± 1,6 µM; p=0,01) ja tauriini (109,9 ± 29,6 µM; p=0,01) terveisiin kissoihin verrattuna. Ulosteen AA-pitoisuudet eivät eronneet terveiden kissojen ja CKD-kissojen välillä. 3-Metyylihistidiinin ja kreatiniinin välinen suhde ei eronnut terveiden kissojen välillä, joilla oli lihasten menetystä tai ei. Kissoilla, joilla on CKD IRIS vaiheet 1–4, seerumin aminohappoprofiili on häiriintynyt terveisiin kissoihin verrattuna.

Avainsanat

kissat; krooninen munuaissairaus; aminohappo; tryptofaani.

Napsauta tätä saadaksesi tietää, mitkä ovat Cistanchen vaikutukset

Johdanto

Lihasten menetystä, joko samanaikaisesti rasvavarastojen häviämisen kanssa tai ilman, esiintyy kissoilla, joilla on krooninen munuaissairaus (CKD), ja se voi edistää painonpudotusta [1,2]. Kakeksia on vähärasvaisen kehon massan menetys akuuteissa ja kroonisissa sairauksissa, ja se johtuu lihasten aminohappojen (AA) käytöstä ensisijaisena energialähteenä [3]. CKD:n sekundaarinen kakeksia on parhaiten määritelty ihmisillä ekstrapoloimalla eläinlajeihin. Ihmisillä ja rottamalleilla tehtyjen tutkimusten mukaan kakeksia johtuu negatiivisesta energian saannista ja lisääntyneestä proteiinikatabolismista, joka johtuu metabolisesta asidoosista, systeemisestä tulehduksesta ja insuliiniresistenssistä [4]. Lisäksi CKD voi aiheuttaa proteiinien malassimilaatiota proteiinien pilkkomisen tehokkuuden ja heikentyneen AA:n imeytymisen seurauksena ohutsuolessa [5,6]. Heikentynyt proteiinien pilkkoutuminen lisää proteolyyttisten bakteerien määrää ja AA:iden fermentaatiota ureemisten toksiinien esiasteiksi [4,7,8].

Aminohappoja tarvitaan proteiinien syntetisoimiseen. Proteiinigeenisiä AA:ita on 20, joista 11 on välttämättömiä kissoille. Verrattuna ei-välttämättömiin AA-yhdisteisiin, organismi ei pysty syntetisoimaan välttämättömiä AA:ita, ja ne edellyttävät ravinnon saantia. Ihmisillä, koirilla ja kissoilla, joilla on munuaissairaus, jopa niillä, joilla on varhainen sairaus, on aiemmin raportoitu olevan verenkierrossa olevien AA:iden huonontunut profiili [9–14]. Lisäksi ulosteen AA-profiilien osoitettiin muuttuneen hemodialyysihoitoa saavilla ihmisillä ja jyrsijän CKD-mallissa verrattuna terveisiin kontrolleihin [6,15]. Tähän mennessä ulosteen AA-pitoisuuksia ja korrelaatiota seerumin ja ulosteen AA-pitoisuuksien välillä ei ole dokumentoitu CKD-kissoilla.

Aminohappo voi läpikäydä translaation jälkeisiä modifikaatioita, kuten fosforylaatiota tai metylaatiota, läheisesti sukua olevien bioaktiivisten molekyylien muodostamiseksi. Yksi tällainen aminohappo on 3--metyylihistidiini (3-MH), jota luustolihakset syntetisoivat, vapautuu verenkiertoon lihasten hajoamisen aikana ja erittyy muuttumattomana virtsaan [16]. Aikaisemmassa tutkimuksessa kerrottiin, että plasman 3-MH-pitoisuudet olivat korkeampia kroonisesta taudista kärsivillä kissoilla verrattuna terveiden kontrollikissojen pitoisuuksiin ja myös ruokahaluttomat CKD-kissoihin verrattuna niihin, joilla on normaali ruokahalu [9]. Ikä liittyy kissojen vähärasvaisen painon menettämiseen ilman sairautta (eli sarkopeniaa), ja vanhemmilla kissoilla on sarkopeniaa yleisemmin kuin nuorilla kissoilla [17,18]. Koska seerumin kreatiniini on luuston lihasmassan korvikemarkkeri, 3-MH:n normalisoimista kreatiniinipitoisuuksiksi (3-MH/Crea) on käytetty lihasproteiinien vaihtuvuuden biomarkkerina vanhuksilla [19,20] . Eläinlääketieteessä mahdollista yhteyttä kiertävän 3-MH-pitoisuuksien ja kissojen lihasten menetyksen välillä ei ole aiemmin arvioitu.

Oletimme, että CKD-kissojen seerumin ja ulosteen AA-profiili on häiriintynyt terveisiin kissoihin verrattuna. Erityisesti oletimme, että CKD-kissat olisivat vähentäneet välttämättömien AA:iden pitoisuuksia seerumissa ja samanaikaisesti kohonneet näiden AA:iden pitoisuudet ulosteessa, mikä tuki proteiinien epätasapainoa ohutsuolessa. Lisäksi oletimme, että 3-MH/Crea-suhde auttaisi arvioimaan lihasten menetystä terveillä aikuisilla ja iäkkäillä kissoilla. Näiden hypoteesien testaamiseksi tutkimuksen ensisijaisena tavoitteena oli kvantifioida seerumin ja ulosteen AA-pitoisuudet CKD:tä sairastavilla kissoilla ja verrata niitä terveiden kissojen ryhmään. Toissijaisena tavoitteena oli tutkia 3-MH/Crea:n poikkileikkaussuhdetta lihaskuntopisteisiin (MCS) terveillä aikuisilla ja iäkkäillä kissoilla.

Cistanche tubulosa

Materiaalit ja menetelmät

1. Tutkimussuunnittelu ja kissojen valinta

Tässä prospektiivisessa poikkileikkaustutkimuksessa terveitä aikuisia ja iäkkäitä kissoja (yli 8 vuotta) ja kissat, joilla on diagnosoitu krooninen sairaus, rekrytoitiin Colorado State University Veterinary Teaching Hospitalin asiakkaista vuosina 2018–2020. , kissoille tehtiin perusteellinen arviointi, joka sisälsi asiakkaan historian ja aiempien sairauskertomusten tarkastelun, yhden hallituksen hyväksymän sisätautien asiantuntijan tekemän täydellisen fyysisen tutkimuksen, CBC, seerumin biokemian profiilin, virtsan, seerumin kokonaistyroksiinin pitoisuuden, verenpaineen Doppler ja virtsan proteiini-kreatiniinisuhde (jos virtsan proteiinimittatikku on suurempi tai yhtä suuri kuin 1 plus). Fyysinen tarkastus sisälsi 9-pisteen kehon kuntopisteen (BCS; Nestle Purina, St. Louis, MO, USA) ja lihaskuntopisteet (MCS) [21,22]. Kissat, joilla on krooninen munuaistauti, järjestettiin International Renal Interest Societyn (IRIS) ohjeiden mukaisesti [23]. Kissat sijoitettiin IRIS CKD Stage 1:ksi seerumin kreatiniinin perusteella<1.6 mg/dL with an inadequate urinary concentrating ability (urine specific gravity (USG) ≤1.035) and either abnormal renal palpation or renal imaging findings consistent with chronic renal degenerative disease. Cats were diagnosed as IRIS CKD Stage 2–4 based on a serum creatinine >1.6 mg/dL with an inadequate urinary concentrating ability. Cats were considered healthy based on an unremarkable client history, physical examination, and normal laboratory testing including a serum creatinine ≤1.8 mg/dL and urine specific gravity (USG) >1.035. Rekisteröitymisen yhteydessä omistajia pyydettiin arvioimaan subjektiivisesti kissansa ruokahalu 5-pisteasteikolla (0 prosenttia, 25 prosenttia, 50 prosenttia, 75 prosenttia tai 100 prosenttia syödystä annoksesta).

Poissulkemiskriteereinä olivat kroonisen taudin komplikaatiot, kuten akuutti obstruktiivinen virtsatietulehdus, virtsatieinfektio tai äskettäinen sairaalahoito, ja systeemisen sairauden, mukaan lukien diabetes mellitus, kilpirauhasen liikatoiminta, tai tunnettu tai epäilty maha-suolikanavan sairaus (mukaan lukien ruokaresponsiivinen krooninen enteropatia), diagnoosi.

2. Seerumin aminohappoanalyysi

Omistajia kehotettiin pidättelemään kissoiltaan ruokaa vähintään 12 tuntia ennen verenottoa. Veri kerättiin steriileihin heparinisoimattomiin putkiin ja hyytymän muodostumisen jälkeen sentrifugoitiin (30 minuutin sisällä näytteenoton jälkeen) nopeudella 5000 rpm 5 minuuttia. Seerumi kerättiin välittömästi ja sitä säilytettiin -80 ◦C:ssa 0–2 viikkoa ennen kuin se lähetettiin kuivajäällä Texas A&M Gastrointestinal Laboratory -laboratorioon analysoitavaksi. Saapuessaan näytteet sulatettiin huoneenlämpötilassa ja proteiinit poistettiin yhtä suurella tilavuudella 5 % (w/v) sulfosalisyylihappoa ja 500 uM L-norleusiinia sisäisenä standardina. Näytteitä säilytettiin sitten 4 ◦C:ssa 10 minuuttia ennen sentrifugointia 10,000× g 5 minuutin ajan. Supernatantti siirrettiin PVDF-huokoskoon 0,2 um keskipakosuodattimeen ja sentrifugoitiin 10 000 x g 5 minuuttia 4 °C:ssa. Sitten näytteistä analysoitiin aminohappopitoisuus käyttämällä ioninvaihtokromatografista aminohappoanalysaattoria kolonnin jälkeisellä ninhydriinijohdannaisella (Biochrom 30 plus, Biochrom Ltd., Holliston, MA, USA). Sata mikrolitraa suodatettua supernatanttia siirrettiin automaattisen näytteenottimen pulloihin ja säilytettiin 4 °C:ssa enintään 48 tuntia ennen 30 µl:n automaattista injektiota analyyttiseen kolonniin.

Seuraavien 25 aminohapon ja samankaltaisten yhdisteiden seerumipitoisuudet analysoitiin: -alaniini, L-alaniini, L-arginiini, L-asparagiini, L-asparagiinihappo, L-sitrulliini, L-glutamiinihappo, L-glutamiini, glysiini, tauriini , L-histidiini, hydroksi-L-proliini, L-isoleusiini, L-leusiini, L-lysiini, L-metioniini, 3-MH, L-ornitiini, L-fenyylialaniini, L-proliini, L-seriini, L-treoniini, L-tryptofaani, L-tyrosiini ja L-valiini. Standardikäyrien R2, jotka vaihtelivat välillä 2,5 µM - 75 0 µM, olivat suurempia kuin 0,998 kaikille yhdisteille. Sisäisen standardin L-norleusiinin huippupinta-ala pitoisuudessa 250 uM oli 2 standardipoikkeaman sisällä kaikkien näytteiden ja standardien keskiarvosta. Toimiva standardikalibraattori valmistettiin pitoisuudella 250 uM ja ajettiin joka 10. injektio, jolloin tuloksena olevien pitoisuuksien välinen vaihtelu oli alle 5 prosenttia. Kvantifioinnin alarajat laskettiin käyttämällä standardikäyrän alinta pitoisuutta, jonka havaittu suhde odotettuihin pysyi välillä 80–120 prosenttia.

Aminohappopitoisuudet laskettiin Biochrom BioSys V.3.{1}} -ohjelmistolla, joka on integroitu EZChrom Elite™ VA04.08 (Agilent Technologies Inc., Santa Clara, CA, USA) tiedonkäsittelyohjelmistoon.

Cistanche-uute

3. Ulosteen aminohappoanalyysi

Omistajia ohjeistettiin ottamaan poistunut ulostenäyte kissastaan ​​12 tunnin kuluessa ulostuksesta ja varastoimaan sitä tilapäisesti 4 ◦C:ssa suljetussa astiassa, kunnes näyte tuotiin sairaalaan jäillä 24 tunnin kuluessa keräämisestä. Ulosteen alikvootteja säilytettiin -80 ◦C:ssa analyysiin asti. Tutkimukseen ilmoittautumisen jälkeen kaikki ulostenäytteet lähetettiin ulkopuoliseen laboratorioon (Metabolon Inc., Morrisville, NC, USA) analysoitavaksi nestekromatografialla tandem-massaspektrometrialla. Ulostenäytteistä analysoitiin seuraavat 22 AA:ta: L-alaniini, L-arginiini, L-asparagiini, L-asparagiinihappo, L-sitrulliini, L-glutamiinihappo, L-glutamiini, glysiini, L-histidiini, hydroksi-L -proliini, L-isoleusiini, L-leusiini, L-lysiini, L-metioniini, L-ornitiini, L-fenyylialaniini, L-proliini, L-seriini, L-treoniini, L-tryptofaani, L-tyrosiini ja L- valiini.

Ulostenäytteet lyofilisoitiin ja erä punnittiin. Kuivatut ulosteerät uutettiin sitten orgaanisella liuottimella, ja osa supernatantista siirrettiin puhtaalle näytelevylle. Supernatanttieriin lisättiin stabiileja leimattuja sisäisiä standardeja (taulukko S1) ja proteiinisaostettiin orgaanisella liuottimella. Saatiin analyyttivertailumateriaalit (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) ja isotooppisesti leimattuja sisäisiä standardeja (Sigma-Aldrich, Cambridge Isotope Laboratories, CDN Isotopes). Sentrifugoinnin jälkeen osa supernatantista laimennettiin ja injektoitiin Agilent 1290/AB Sciex QTrap 5500 -nestekromatografia-tandem-massaspektrometriajärjestelmään, joka oli varustettu C18-käänteisfaasi-ultrakorkealla nestekromatografiakolonnilla. Massaspektrometria käytettiin positiivisessa tilassa käyttäen sähkösumutusionisaatiota.

Yksittäisten analyytin lähtö-ionien piikkien pinta-alat mitattiin vastaavien sisäisten standardien emo-ionien piikin pinta-alat pseudo-MRM-moodissa. Kvantitointi suoritettiin käyttämällä painotettua pienimmän neliösumman regressioanalyysiä, joka luotiin vahvistetuista kalibrointistandardeista, jotka oli valmistettu välittömästi ennen jokaista ajoa. Raakadata kerättiin ja käsiteltiin SCIEX OS-MQ -ohjelmistolla v1.7. Tietojen vähentäminen suoritettiin Microsoft Excel for Office 365 v.16:lla.

Aminohappopaneelin 22 analyytille käytettiin yhtä plasmaerää laadunvalvontanäytteiden valmistukseen. Näyteanalyysi suoritettiin 96-kuoppalevymuodossa, joka sisälsi kaksi kalibrointikäyrää ja kuusi laadunvalvontanäytettä (levyä kohden) määrityksen suorituskyvyn seuraamiseksi. Tarkkuus arvioitiin käyttämällä vastaavia laadunvalvontatoistoja jokaisessa näyteajossa. Määrityksen sisäinen tarkkuus (% CV) oli pienempi tai yhtä suuri kuin 20 prosenttia. Yksi erä valmistettiin ja käsiteltiin. Konsentraatioarvot korjattiin näyteerän painon perusteella. Arvot ilmaistaan ​​yksikköinä µg/g. Glutamiinin kvantifioinnin alaraja (LLOQ) oli 2,5 µg/g; L-alaniinille, L-arginiinille, L-lysiinille, L-proliinille, L-tyrosiinille ja L-valiinille LLOQ oli 1.0 ug/g. Glysiinin LLOQ oli 0,75 µg/g. L-glutamiinihapolle, L-histidiinille, L-leusiinille, L-treoniinille ja L-tryptofaanille LLOQ oli 0,5 µg/g. L-fenyylialaniinin ja L-seriinin LLOQ oli 0,4 µg/g. L-asparagiinin, L-asparagiinihapon, L-isoleusiinin ja L-ornitiinin LLOQ oli 0,25 µg/g. L-sitrulliinin LLOQ oli 0,2 µg/g. L-metioniinin LLOQ oli 0,125 µg/g. Hydroksi-L-proliinille LLOQ oli 0,05 ug/g.

4. Tilastollinen analyysi

Tulosten tilastollista vertailua varten IRIS:n CKD-vaiheiden välillä vaiheen 1 ja 2 CKD-kissat sekä vaiheen 3 ja 4 CKD-kissat yhdistettiin, kun otetaan huomioon muutamat tutkimukseen otetut vaiheen 1 ja 4 CKD-kissat.

AA-mittausten histogrammit ja QQ-käyrät terveillä ja CKD-kissoilla vahvistivat oletuksen likimääräisestä normaalista. Boksiplottien tarkastelu osoitti, että CKD-kissojen mittaukset vaihtelivat usein enemmän kuin terveillä kissoilla. Siten Welchin testiä käytettiin jatkuvien muuttujien vertaamiseen kahden itsenäisen ryhmän välillä (eli terveet kissat ja CKD-kissat). Yksisuuntaista Welchin ANOVAa ja Holm-Sidakin moninkertaista vertailutestiä käytettiin muuttujien vertaamiseen kolmen riippumattoman ryhmän välillä (eli terveet kissat; CKD-vaiheen 1 ja 2 kissat ja CKD-vaiheen 3 ja 4 kissat). Lisäksi Spearman-korrelaatiokerroin (rho) laskettiin seerumin ja ulosteen AA-pitoisuuksien ja seerumin kreatiniinipitoisuuden, seerumin kreatiniini- ja 3-MH-pitoisuuksien sekä seerumin ja ulosteen AA-pitoisuuksien välisen korrelaation arvioimiseksi. Benjaminin, Kriegerin ja Yekutielin [24] mukautuvaa menetelmää käytettiin hallitsemaan vääriä löytöjä q-arvon ollessa 5 prosenttia. Tilastollista analyysiä varten kaikki näytteet, joilla ei ollut mitattavissa olevaa pitoisuutta, ilmoitettiin 0. Absoluuttista arvoa käytettiin mahdollisuuksien mukaan näytteille, joiden pitoisuus oli kvantifiointirajan alapuolella tai yli. Käyttäen raportoituja plasman AA-pitoisuuksien standardipoikkeamia terveillä ja kroonisesti sairastuneilla kissoilla [9], suoritettiin analyysi kunkin AA:n vähimmäiseron määrittämiseksi, joka voidaan havaita tutkimuksessamme otoskoolla (16 terveillä kissoilla; 26 kroonista sairaudesta kärsivää kissaa). ). Analyysissä saatiin pienin ero, joka voidaan havaita kullekin AA:lle potenssilla 80 prosenttia ja alfalla {{20}},05. Analyysin perusteella pienin havaittavissa oleva ero on yhden keskihajonnan erotus. Tilastollinen analyysi suoritettiin käyttämällä tilastollisia ohjelmistoja (GraphPad Prism 9.2.0; GraphPad Software, La Jolla, CA ja SAS 9.4; SAS Institute, Cary, NC, USA). Korjattua p-arvoa < 0,05 pidettiin merkitsevänä.

Cistanche-kapselit

Keskustelu

Tässä tutkimuksessa mittasimme seerumin ja ulosteen AA-pitoisuuksia vertaillaksemme profiileja terveiden aikuisten ja iäkkäiden kissojen ja kroonista munuaistautia sairastavien kissojen välillä. Ensinnäkin havaitsimme, että CKD-kissoilla on häiriintynyt seerumin AA-profiili; erityisesti CKD-kissoilla oli alhaisemmat seerumipitoisuudet kolmesta välttämättömästä (fenyylialaniini, treoniini, tryptofaani) ja kahdesta ei-välttämättömästä AA:sta (seriini, tyrosiini) verrattuna terveisiin kissoihin. Muutoksia seerumin AA-profiileissa esiintyi kissoilla, joilla oli alkuvaiheen sairaus (IRIS-vaihe 1 ja 2), ja poikkeavuuksien suuruus oli suurempi kissoilla, joilla oli myöhäisvaiheinen krooninen munuaistauti (IRIS-vaihe 3 ja 4) useiden AA:iden (asparagiinihappo, - alaniini, sitrulliini, leusiini, fenyylialaniini, seriini, tauriini, tryptofaani, valiini). Toiseksi, toisin kuin oletamme, emme löytäneet merkittäviä eroja ulosteen AA-pitoisuuksissa terveiden kissojen ja CKD-kissojen välillä. Tämä viittaa siihen, että proteiinien malassimilaatio ja sitä seuraava AA:iden häviäminen ulosteissa eivät ehkä ole merkittävä tekijä seerumin AA-profiilin merkittävästi epätasapainossa kroonisissa taudissa. Muita mahdollisia syitä seerumin AA-statuksen muutoksiin kissoilla voivat sisältyä riittämätön energian saanti ja lisääntynyt proteiinikatabolismi, kuten aiemmin on käsitelty, lisäksi AA:n häviäminen virtsassa, joka johtuu tubulusten toimintahäiriöstä, valikoidun AA:n heikentynyt munuaisaineenvaihdunta ja systeemisen tulehduksen aiheuttama muuttunut AA-aineenvaihdunta. [25,26]. Suurimmalla osalla tämän tutkimuksen CKD-kissoista oli riittävä ruokahalu ilmoittautumisen yhteydessä saatujen ruokahalupisteiden mukaan; Tämä pisteytysjärjestelmä on kuitenkin subjektiivinen, eikä päivittäisen kalorinsaannin laskeminen ollut mahdollista annettujen tietojen perusteella. Sen vuoksi riittämätöntä saantia ei voida sulkea pois, koska se vaikuttaa AA-profiilin häiriintymiseen näillä kroonisesti taudista kärsivillä kissoilla. Lopuksi havaitsimme, että 3-MH/Crea-suhteet eivät eronneet merkittävästi terveiden aikuisten ja iäkkäiden kissojen välillä, joilla oli lihasten menetystä tai ei.

Aikaisemmassa tutkimuksessa arvioitiin aterioita edeltäviä plasman AA-pitoisuuksia CKD-kissoilla, ja se osoitti epänormaalia plasman AA-profiilia kroonisesta taudista kärsivillä kissoilla verrattuna terveisiin kissoihin [9]. Tutkimuksemme osoitti useita samanlaisia ​​eroja AA-pitoisuuksissa terveiden ja CKD-kissojen välillä. Molemmat tutkimukset osoittivat merkittävästi alhaisempia tryptofaani- ja tyrosiinipitoisuuksia sekä korkeampia sitrulliinipitoisuuksia kroonisesta sairaudesta kärsivillä kissoilla verrattuna terveisiin kissoihin [9]. Yleisesti ottaen sekä plasman että seerumin metaboliittipitoisuudet ovat hyvin toistettavissa ihmisillä; jotkin AA-pitoisuudet (esim. arginiini, seriini, fenyylialaniini, glysiini) voivat kuitenkin olla korkeampia seerumissa [27]. Siksi on noudatettava jonkin verran varovaisuutta verrattaessa tuloksia suoraan tutkimuksemme ja edellisen tutkimuksen välillä, jossa mitattiin AA-pitoisuudet plasmassa.

Joidenkin AA-yhdisteiden seerumipitoisuudet olivat korkeammat kroonisesta sairaudesta kärsivillä kissoilla kuin terveillä kissoilla, mukaan lukien välttämätön AA-tauriini ja ei-välttämättömät AA:t asparagiinihappo, sitrulliini ja -alaniini. Sekä tauriinin että sitrulliinin kiertävät pitoisuudet ovat korkeampia kissoilla ja ihmisillä, joilla on munuaisten vajaatoiminta [9,28]. Sitrulliinin osalta tämä havainto johtuu sitrulliinin vähentyneestä muuttumisesta arginiiniksi munuaisissa [29]. Tauriini on kissoille välttämätön aminohappo, toisin kuin ihmisillä ja koirilla, ja siksi kissat tarvitsevat ravinnon. Korkeammat seerumin tauriinipitoisuudet kroonisessa sairaudessa (CKD) kissoilla voivat johtua vähentyneestä munuaiserityksestä [30]. Syytä alaniinin ja asparagiinihapon korkeampiin pitoisuuksiin CKD-kissoilla ei tunneta; tämä on kuitenkin yhdenmukainen verenkierron AA-profiilin mallin kanssa (eli korkea ei-välttämätön ja alhainen välttämätön AA), joka on dokumentoitu munuaissairautta sairastavilla [28,31].

Leusiinin, fenyylialaniinin, lysiinin, histidiinin, metioniinin, tyrosiinin ja tryptofaanin pitoisuudet ulosteessa lisääntyivät dramaattisesti hemodialyysihoitoa saavilla ihmisillä, joilla oli loppuvaiheen munuaissairaus (ESRD) verrattuna terveisiin kontrolleihin [15]. Nämä sulamattomat AA:t ESRD-potilaiden paksusuolessa voivat suosia proteolyyttisiä bakteereja, jotka tuottavat tärkeimpiä suolistosta peräisin olevia ureemisia toksiineja, indoksyylisulfaattia (IS) ja p-kresolisulfaattia (PCS) [32]. Ihmiset, kissat ja koirat keräävät IS:ää, kun taas jotkut lajit keräävät pCS:ää systeemiseen verenkiertoon, ja näiden ureemisten toksiinien kerääntyminen johtuu pääasiassa vähentyneestä tubuluserityksestä [33–35]. Jotkut kuitenkin uskovat, että proteiinien epätasapaino ja lisääntyneet AA-arvot paksusuolessa voivat myös edistää verenkierron pitoisuuksia suosimalla proteolyyttisiä bakteereja paksusuolessa [6,32]. Toisin kuin oletamme, tutkimuksemme ei osoittanut merkittäviä eroja ulosteen AA-pitoisuuksissa kroonisen taudin ja terveiden kissojen välillä. Tämä asettaa kyseenalaiseksi pilkkoutumattomien AA:iden osuuden kiertävän IS:n ja pCS:n kerääntymisessä CKD-kissoissa. Erojen puute ulosteen AA-pitoisuuksissa saattaa johtua potilaspopulaatiostamme. Useimmat tutkimuksemme kissat olivat kliinisesti stabiileja, ja tutkimuskohortissamme oli liian vähän 4. vaiheen kroonisesta sairaudesta kärsiviä kissoja (n=4) järkevän vertailun tekemiseksi. Suurempia eroja ulosteen AA-profiilissa voidaan arvostaa paremmin kissoilla, joilla on loppuvaiheen CKD.

Mittasimme seerumin 3-MH-pitoisuudet terveillä kissoilla ja kroonisesti keuhkoahtaumatautien kissoilla. Kuten odotettiin, havaitsimme, että CKD-kissoilla oli korkeammat seerumin 3-MH-pitoisuudet verrattuna terveisiin kontrollikissoihin ja että seerumin 3-MH-pitoisuudet korreloivat positiivisesti seerumin kreatiniinipitoisuuksien kanssa. Tämä on samanlainen kuin aikaisempien kissoilla, koirilla ja ihmisillä tehtyjen tutkimusten havainnot, joissa havaittiin, että 3-MH-pitoisuudet kroonista munuaistautia sairastavien potilaiden plasmassa tai seerumissa olivat korkeammat kuin terveillä kontrolleilla [9,11,28]. Tämä havainto johtuu 3-MH:n vähentyneestä munuaiserityksestä kroonista munuaistautia sairastavilla potilailla. Tästä syystä emme määritelleet 3-MH/Crea-suhdetta kroonisesta sairaudesta kärsiville kissoille, joilla on lihasten menetys, koska kreatiniini on hämmentävä tekijä. Sen selvittämiseksi, voidaanko 3-MH/Crea-suhteita käyttää luurankolihasten hajoamisen merkkinä terveillä aikuisilla ja iäkkäillä kissoilla, 3-MH/Crea-suhteita verrattiin kissojen, joilla oli lihasten menetystä, ja niiden välillä, joilla ei ollut lihasta. Tämän kissaryhmän lihasmassan arvioimiseen käytettiin yhden eläinlääkärin hankkimaa MCS:ää. MCS:n estimoiminen on helppoa ja ei-invasiivista koulutettujen yksilöiden suoritettavaksi klinikkaympäristössä, ja sen havaittiin olevan huomattava toistettavuus ja kohtalainen toistettavuus tarkkailijoiden välillä [36]. Terveillä kissoilla, joilla oli subjektiivisesti lievää tai kohtalaista lihasten menetystä, oli korkeampi keskimääräinen 3-MH/Crea-suhde kuin niillä, joilla ei ollut lihasten menetystä, mutta tämä löydös ei ollut tilastollisesti merkitsevä, mikä johtui pienestä otoskoosta ja mahdollisesti vaihtelevasta proteiinin saannista. tutkimuskohortti [20,37]. 3-MH:n käyttö luustolihasten hajoamisen biomarkkerina kissoilla vaatii lisätutkimuksia.

Kliinikot suosittelevat kroonista munuaistautia sairastavien ihmisten kakeksian torjumiseksi lisäämään fyysistä aktiivisuutta, hoitamaan metabolista asidoosia ja poistamaan korjattavia tulehdustekijöitä (esim. suolistosairaus) proteiinien katabolian minimoimiseksi. Lisäksi ravitsemushoidon optimointi on tärkeää. Ihmisten tapaan proteiinin saannin vähentäminen käyttämällä hyvin sulavaa proteiinilähdettä ja riittävän kalorinsaannin ylläpitäminen ovat kroonisen munuaistautia sairastavien kissojen hoidon pääasia [38,39]. Aiempi tutkimus kissoilla, joilla oli IRIS-vaiheen 1 ja 2 CKD, osoitti, että välttämättömän AA-treoniinin lisääntynyt saanti käyttämällä proteiinipitoista munuaisterapeuttista ruokavaliota (6,7 g/100 kcal) kuuden kuukauden ajan piti laittoman painon yllä (Hill's Prescription Diet k/d). Kissa kanan kanssa, Hill's Pet Nutrition, Topeka, KS, USA) [40]. Aminohappoprofiileja ennen ruokavalioon siirtymistä ja sen jälkeen ei arvioitu näillä kissoilla. Havaitsimme, että CKD-kissojen seerumista on vähän treoniinia verrattuna terveisiin kontrollikissoihin, mikä tukee entisestään tämän AA:n täydentämisen mahdollista hyötyä kroonisesta taudista kärsivillä kissoilla. Hemodialyysihoitoa saavilla ihmisillä suun kautta otettava ravintoaine, jota käytettiin tuottamaan kaloreita makroravinteista, mukaan lukien proteiinit AA:iden ja peptidien muodossa, paransi useimpia seerumin AA-pitoisuuksia [41]. Näiden tutkimusten perusteella välttämättömillä AA-yhdisteillä täydennetyt munuaisterapeuttiset ruokavaliot voivat olla hyödyllisiä kroonisesti kroonisissa sairauksissa kärsiville kissoille toivoen, että kehon massa säilyy laihassa ja parannetaan mahdollisesti seerumin AA-pitoisuuksia. jälkimmäinen jää kuitenkin selvitettäväksi.

Cistanche jauhe

Tällä tutkimuksella on rajoituksia. Kissapopulaatioista todettakoon, että kontrolliryhmä ei ollut ikäsuunnassa kroonisen taudin ryhmän kanssa, koska terveitä vanhempia kissoja oli mahdotonta löytää.<14 years of age in the referral hospital population. As a result, the healthy control cats were significantly younger than the CKD cats, which may have affected our conclusions. In people, serum AA profiles differ between the young and elderly, and therefore, the deranged serum AA profile in CKD cats in comparison to the healthy controls may be explained in part by age [42,43]. Second, our results reflect only a single time-point and are not representative of dynamic changes that may occur in circulating or fecal AA concentrations. Third, deproteinization of serum was not performed until after freezing and just before analysis within 2 weeks of collection. Deproteinization prevents losing AA by co-precipitation with other serum proteins, therefore this may have impacted our results, especially for sulfur-containing AAs (methionine, taurine) [44]. However, all samples were handled similarly, so any effect should have been standardized across all samples. Lastly, all healthy cats and the majority of CKD cats (21/26) were fasted before blood collection. In cats, there is a mild postprandial rise in plasma AA concentrations, and the magnitude of the postprandial rise varies based on the AA concentration of the diet and feeding regimen [45–47]. Therefore, the fed state of these five CKD could have affected results to an unknown degree.

Johtopäätökset

Kissoilla, joilla on IRIS-vaiheen 1–4 CKD, joidenkin välttämättömien AA:iden pitoisuudet seerumissa ovat alhaisemmat verrattuna terveisiin, aikuisiin ja iäkkäisiin kissoihin, ja siksi kroonisten munuaistautien kissojen seerumin AA-profiilit voivat toimia ravinnonhallinnan terapeuttisena kohteena. Ulosteen AA-pitoisuudet eivät eronneet merkittävästi CKD-kissojen ja terveiden kissojen välillä, joten AA:iden erittyminen ulosteeseen on epätodennäköistä, että se vaikuttaa merkittävästi seerumin AA-profiilien häiriintymiseen, joka on dokumentoitu CKD-kissoilla. Seerumin 3-MH-pitoisuudet ovat korkeampia CKD-kissoilla kuin terveillä kontrolleilla, ja tämä löydös johtuu vähentyneestä munuaiserityksestä. 3-MH/Crea-suhteet eivät olleet merkittävästi korkeampia terveillä kissoilla, joilla oli lihasten menetystä, verrattuna niihin, joilla oli normaali lihasmassa; Pienen otoksen koon vuoksi lisäarviointi on kuitenkin perusteltua.

Viitteet

1. Summers, S.; Quimby, JM; Phillips, RK; Stockman, J.; Isaiah, A.; Lidbury, JA; Steiner, JM; Suchodolski, J. Alustava arviointi ulosteen rasvahappopitoisuuksista kissoilla, joilla on krooninen munuaissairaus, ja korrelaatio indoksyylisulfaatin ja p-kresolisulfaatin kanssa. J. Vet. Harjoittelija. Med. 2020, 34, 206–215. [CrossRef]

2. Freeman, LM; Lachaud, kansanedustaja; Matthews, S.; Rhodes, L.; Zollers, B. Painonpudotuksen arviointi kissoilla, joilla on krooninen munuaissairaus. J. Vet. Harjoittelija. Med. 2016, 30, 1661–1666. [CrossRef]

3. Freeman, LM Kakeksia ja sarkopenia: esiin nousevat tärkeät oireyhtymät koirilla ja kissoilla. J. Vet. Harjoittelija. Med. 2012, 26, 3–17. [CrossRef]

4. Zha, Y.; Qian, Q. Proteiiniravitsemus ja aliravitsemus CKD:ssä ja ESRD:ssä. Nutrients 2017, 9, 208. [CrossRef]

5. Bammens, B.; Verbeke, K.; Vanrenterghem, Y.; Evenepoel, P. Todisteita proteiinin heikentyneestä assimilaatiosta kroonisessa munuaisten vajaatoiminnassa. Kidney Int. 2003, 64, 2196–2203. [CrossRef]

6. Liu, Y.; Li, J.; Yu, J.; Wang, Y.; Lu, J.; Shang, EX; Zhu, Z.; Guo, J.; Duan, J. Suoliston aminohappojen aineenvaihdunnan häiriö kroonisen taudin etenemisen aikana liittyy suolen mikrobiotan dysbioosiin ja metagenomin muutokseen. J. Pharm. Biomed. Anaali. 2018, 149, 425–435. [CrossRef]

7. Gryp, T.; Huys, GRB; Joossens, M.; Van Biesen, W.; Glorieux, G.; Vaneechoutte, M. Eristäminen ja kvantifiointi ureemisen toksiinin esiasteita tuottavien suolistobakteerien kroonisilla munuaissairauspotilailla. Int. J. Mol. Sci. 2020, 21, 1986. [CrossRef]

8. Graboski, AL; Redinbo, MR Gut-peräisiä proteiineihin sitoutuneita ureemisia toksiineja. Toxins 2020, 12, 590. [CrossRef]

9. Goldstein, RE; Marks, SL; Cowgill, LD; Kass, PH; Rogers, QR Plasman aminohappoprofiilit kissoilla, joilla on luonnollisesti hankittu krooninen munuaisten vajaatoiminta. Olen. J. Vet. Res. 1999, 60, 109–113.

10. Parker, VJ; Fascetti, AJ; Klamer, BG Aminohappostatus koirilla, joilla on proteiinia menettävä nefropatia. J. Vet. Harjoittelija. Med. 2019, 33, 680–685. [CrossRef]

11. Hansen, B.; DiBartola, SP; Chew, DJ; Browner, C.; Berrie, HK Aminohappoprofiilit koirilla, joilla on krooninen munuaisten vajaatoiminta, joita ruokittiin kahdella ruokavaliolla. Olen. J. Vet. Res. 1992, 53, 335-341.

12. Kumar, MA; Bitla, AR; Raju, KV; Monohar, SM; Kumar, VS; Narasimha, S. Branched-chain aminohappoprofiili varhaisessa kroonisessa munuaissairaudessa. Saudi J. Kidney Dis. Transpl. 2012, 23, 1202–1207.

13. Zeng, L.; Yu, Y.; Cai, X.; Xie, S.; Chen, J.; Zhong, L.; Zhang, Y. Erot seerumin aminohappojen fenotyypeissä potilailla, joilla on diabeettinen nefropatia, hypertensiivinen nefropatia ja krooninen nefriitti. Med. Sci. Monit. 2019, 25, 7235–7242. [CrossRef]

14. Laidlaw, SA; Berg, RL; Kopple, JD; Naito, H.; Walker, WG; Walser, M. Plasman paasto-aminohappotasojen mallit kroonisessa munuaisten vajaatoiminnassa: Munuaistautitutkimuksen ruokavalion muuttamisen toteutettavuusvaiheen tulokset. Olen. J. Kidney Dis. 1994, 23, 504–513. [CrossRef]

15. Liu, S.; Liang, S.; Liu, H.; Chen, L.; Sun, L.; Wei, M.; Jiang, H.; Wang, J. Ulosteiden ja seerumin aineenvaihduntaprofilointi hemodialyysipotilailla ja lääkehiilitablettien vaikutus. Munuaisten verenpaine. Res. 2018, 43, 755–767. [CrossRef]

16. Kochlik, B.; Gerbracht, C.; Grune, T.; Weber, D. Ruokailutottumusten ja lihankulutuksen vaikutus plasman 3-metyylihistidiiniin – potentiaalinen merkkiaine lihasproteiinien kiertoon. Mol. Nutr. Food Res. 2018, 62, e1701062. [CrossRef]

17. Hall, JA; Jackson, MI; Farace, G.; Yerramilli, M.; Jewell, DE Ravinnon ainesosien vaikutus laihaan kehon prosenttiin, ureemiseen toksiinipitoisuuteen ja munuaisten toimintaan vanhoilla aikuisilla kissoilla. Metabolites 2019, 9, 238. [CrossRef]

18. Hall, JA; Yerramilli, M.; Obare, E.; Yerramilli, M.; Jewell, DE Symmetrisen dimetyyliarginiinin ja kreatiniinin seerumipitoisuuksien vertailu munuaisten toiminnan biomarkkereina terveillä iäkkäillä kissoilla, joita ruokittiin vähäproteiinista kalaöljyllä, L-karnitiinilla ja keskipitkäketjuisilla triglyserideillä rikastettua ruokaa. Vet. J. 2014, 202, 588–596. [CrossRef]

19. Patel, SS; Molnar, MZ; Tayek, JA; Ix, JH; Noori, N.; Benner, D.; Heymsfield, S.; Kopple, JD; Kovesdy, CP; Kalantar-Zadeh, K. Seerumin kreatiniini lihasmassan merkkinä kroonisessa munuaissairaudessa: Poikkileikkaustutkimuksen tulokset ja kirjallisuuskatsaus. J. Cachexia Sarcopenia Muscle 2013, 4, 19–29. [CrossRef]

20. Kochlik, B.; Stuetz, W.; Pérès, K.; Feart, C.; Tegner, J.; Rodriguez-Manas, L.; Grune, T.; Weber, D. Plasman 3-metyylihistidiinin ja hauraustilan yhdistäminen ranskalaisissa FRAILOMIC-aloitteen kohortteissa. J. Clin. Med. 2019, 8, 1010. [CrossRef]

21. Peterson, ME; Castellano, CA; Rishniw, M. Ruumiinpainon, kehon kunnon ja lihaskunnon arviointi kissoilla, joilla on kilpirauhasen liikatoiminta. J. Vet. Harjoittelija. Med. 2016, 30, 1780–1789. [CrossRef]

22. Lihaskunnon pisteet – Cat. Saatavilla verkossa: https://wsava.org/global-guidelines/global-nutrition-guidelines/ (käytetty 18. tammikuuta 2022).

23. CKD:n IRIS-vaihe. Saatavilla verkossa: http://www.iris-kidney.com/guidelines/staging.html (käytetty 18. tammikuuta 2022).

24. Benjamini, Y.; Krieger, AM; Yekutieli, D. Mukautuvat lineaariset askelproseduurit, jotka ohjaavat vääriä löytöjä. Biometrika 2006, 93, 491–507. [CrossRef]

25. van de Poll, MCG; Soeters, PB; Deutz, NEP; Fearon, KCH; Dejong, CHC Aminohappojen munuaisaineenvaihdunta: Sen rooli elinten välisessä aminohappovaihdossa. Olen. J. Clin. Nutr. 2004, 79, 185–197. [CrossRef]

26. Suliman, ME; Qureshi, AR; Stenvinkel, P.; Pecoits-Filho, R.; Barany, P.; Heimburger, O.; Anderstam, B.; Ayala, ER; Filho, JCD; Alvestrand, A.; et ai. Tulehdus vaikuttaa alhaiseen plasman aminohappopitoisuuteen potilailla, joilla on krooninen munuaissairaus. Olen. J. Clin. Nutr. 2005, 82, 342–349. [CrossRef]

27. Yu, Z.; Kastenmüller, G.; Hän, Y.; Belcredi, P.; Moller, G.; Prehn, C.; Mendes, J.; Wahl, S.; Roemisch-Margl, W.; Ceglarek, U.; et ai. Erot ihmisen plasman ja seerumin metaboliittiprofiilien välillä. PLoS ONE 2011, 6, e21230. [CrossRef]

28. Ceballos, I.; Chauveau, P.; Guerin, V.; Bardet, J.; Parvy, P.; Kamoun, P.; Jungers, P. Plasman vapaiden aminohappojen varhaiset muutokset kroonisessa munuaisten vajaatoiminnassa. Clin. Chim. Acta 1990, 188, 101–108. [CrossRef]

29. Bouby, N.; Hassler, C.; Parvy, P.; Bankir, L. Arginiinin munuaissynteesi kroonisessa munuaisten vajaatoiminnassa: In vivo ja in vitro -tutkimukset rotilla, joilla on 5/6 nefrektomia. Kidney Int. 1993, 44, 676-683. [CrossRef]

30. Suliman, ME; Bárány, P.; Filho, JC; Lindholm, B.; Bergstrom, J. Kertyminen tauriini potilailla, joilla on munuaisten vajaatoiminta. Nephrol. Soita. Transpl. 2002, 17, 528–529. [CrossRef]

31. Bergström, J.; Alvestrand, A.; Fürst, P. Plasma- ja lihasvapaat aminohapot ylläpito hemodialyysipotilailla ilman proteiinialiravitsemusta. Kidney Int. 1990, 38, 108–114. [CrossRef]

32. Wong, J.; Piceno, YM; DeSantis, TZ; Pahl, M.; Andersen, GL; Vaziri, ND Ureaasia ja urikaasia sisältävän, indolia ja p-kresolia muodostavan ja lyhytketjuisen rasvahappoja tuottavan suoliston mikrobiston supistuminen ESRD:ssä. Olen. J. Nephrol. 2014, 39, 230–237. [CrossRef]

33. Summers, SC; Quimby, JM; Isaiah, A.; Suchodolski, JS; Lunghofer, PJ; Gustafson, DL Indoksyylisulfaatin ja p-kresolisulfaatin ulosteen mikrobiomi ja seerumipitoisuudet kissoilla, joilla on krooninen munuaissairaus. J. Vet. Harjoittelija. Med. 2018, 33, 662–669. [CrossRef]

34. Cheng, FP; Hsieh, MJ; Chou, CC; Hsu, WL; Lee, YJ Indoksyylisulfaattipitoisuuksien havaitseminen koirilla ja kissoilla, jotka kärsivät luonnollisesti esiintyvistä munuaissairauksista. Vet. J. 2015, 205, 399–403. [CrossRef]

35. Lin, CN; Wu, IW; Huang, YF; Peng, SY; Huang, YC; Ning, HC Seerumin kokonais- ja vapaan indoksyylisulfaatin ja p-kresyylisulfaatin mittaaminen kroonisessa munuaissairaudessa UPLC-MS/MS:llä. J. Food Drug Anal. 2018, 27, 502–509. [CrossRef]

36. Freeman, LM; Michel, KE; Zanghi, BM; Boler, BMV; Fages, J. Lihasten kuntopisteiden ja ultraäänimittausten hyödyllisyys lihasmassan arvioimiseksi kakeksiaa ja sarkopeniaa sairastavilla kissoilla. Olen. J. Vet. Res. 2020, 81, 254–259. [CrossRef]

37. Rebholz, CM; Zheng, Z.; Mummi, ME; Appel, LJ; Sarnak, MJ; Inker, LA; Levey, AS; Coresh, J. Ravinnon proteiinin saantiin liittyvät seerumin metaboliitit: Tulokset ruokavalion muuttamisesta munuaissairaudessa (MDRD) satunnaistetussa kliinisessä tutkimuksessa. Olen. J. Clin. Nutr. 2019, 109, 517–525. [CrossRef]

38. Sparkes, AH; Caney, S.; Chalhoub, S.; Elliott, J.; Finch, N.; Gajanayake, I.; Langston, C.; Lefebvre, HP; White, J.; Quimby, J. ISFM:n konsensusohjeet kissan kroonisen munuaissairauden diagnosoinnista ja hoidosta. J. Feline Med. Surg. 2016, 18, 219–239. [CrossRef]

39. Ruokavalio kissoille, joilla on krooninen munuaissairaus. Saatavilla verkossa: http://www.iris-kidney.com/education/protein_restriction_ feline_ckd.html#:~{}:text= Perustuu prosenttiin 20% 20 todisteisiin 20% 20 kliinisiin, lääkkeisiin 20 prosenttiin 20 prosenttiin 20 prosenttiin 20 hoitoon 20 lääketieteelliseen prosenttiin 20 sairauteen (käytetty 18. tammikuuta 2022).

40. Hall, JA; Fritsch, DA; Jewell, DE; Burris, PA; Gross, KL -kissat, joilla on IRIS-vaiheen 1 ja 2 krooninen munuaissairaus, säilyttävät painon ja vähärasvaisen lihasmassan, kun niille syötetään ruokaa, jonka kaloritiheys on kasvanut ja karnitiinin ja välttämättömien aminohappojen pitoisuus on suurempi. Vet. Rec. 2019, 184, 190. [CrossRef]

41. Małgorzewicz, S.; Gał ˛ezowska, G.; Cieszy ´ska-Semenowicz, M.; Ratajczyk, J.; Wolska, L.; Rutkowski, P.; Jankowska, M.; Rutkowski, B.; Debska-Slizien, A. Aminohappoprofiili oraalisen ravintolisän jälkeen hemodialyysipotilailla, joilla on proteiini-energian tuhlausta. Ravinto 2019, 57, 231–236. [CrossRef]

42. Timmerman, KL; Volpi, E. Aminohappojen aineenvaihdunta ja säätelyvaikutukset ikääntymisessä. Curr. Opin. Clin. Nutr. Metab. Hoito 2008, 11, 45–49. [CrossRef]

43. Sarwar, G.; Botting, HG; Collins, M. Paaston seerumin aminohappoprofiilien vertailu nuorilla ja iäkkäillä henkilöillä. J. Am. Coll. Nutr. 1991, 10, 668–674. [CrossRef]

44. Phipps, WS; Jones, pääministeri; Patel, K. Amino- ja orgaanisten happojen analyysi: Keskeiset työkalut synnynnäisten aineenvaihduntavirheiden diagnosoinnissa. Adv. Clin. Chem. 2019, 92, 59–103.

45. Camara, A.; Verbrugghe, A.; Cargo-Froom, C.; Hogan, K.; DeVries, TJ; Sanchez, A.; Robinson, LE; Shoveller, AK Päivän ruokintatiheys vaikuttaa ruokahalua sääteleviin hormoneihin, aminohappoihin, fyysiseen aktiivisuuteen ja hengitysosamäärään, mutta ei energiankulutukseen, aikuisilla kissoilla, joita ruokitaan 21 päivän ajan. PLoS ONE 2020, 15, e0238522. [CrossRef]

46. ​​Pion, PD; Lewis, J.; Greene, K.; Rogers, QR; Morris, JG; Kittleson, MD Ateriaruokinnan ja ruuan puutteen vaikutus plasman ja kokoveren tauriinipitoisuuksiin kissoilla. J. Nutr. 1991, 121, S177–S178. [CrossRef]

47. Heinze, CR; Larsen, JA; Kass, PH; Fascetti, AJ Plasman aminohappo ja kokoveren tauriinipitoisuudet kissoilla, jotka syövät kaupallisesti valmistettua ruokavaliota. Olen. J. Vet. Res. 2009, 70, 1374–1382. [CrossRef]

Stacie C. Summers 1, Jessica Quimby 2, Amanda Blake 3, Deborah Keys 4, Joerg M. Steiner 3 ja Jan Suchodolski 3

1 Carlson College / eläinlääketiede lääketiede % 2c Oregon osavaltio yliopisto % 2c Corvallis % 2c OR 97331% 2c USA

2 Department of Veterinary Clinical Sciences, Ohio State University, Columbus, OH 43210, USA; quimby.19@osu.edu

3 Texas A&M Gastrointestinal Laboratory, Department of Small Animal Clinical Sciences, College Station, TX 77843, USA; ablake@cvm.tamu.edu (AB); jsteiner@cvm.tamu.edu (JMS); jsuchodolski@cvm.tamu.edu (JS)

4 Kaleidoscope Statistics Veterinary Medical Research Consulting, Athens, GA 30606, USA; deborah.a.keys@kaleidoscopestatistics.com