Ruusun terälehtiuute (Rosa Gallica) valkaisee ihoa ja ehkäisee ryppyjä

Yhteystiedot: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Sähköposti:audrey.hu@wecistanche.com

Young-Ran Song,1,* Won-Chul Lim,1,* Ahram Han,1 Myung-hee Lee,1 Eun Ju Shin,1Kwang-Min Lee,1,2 Tae-Gyu Nam,1 ja Tae-Gyu Lim1, 3

ABSTRAKTI

Pyrimme tutkimaan uutteiden vaikutustaRosa gallican terälehdet(RPE) päälläihon valkaisuunjaRypistymisen estotoiminta. Tyrosinaasiaktiivisuutta heikensi RPE-hoito, joka samanaikaisesti vähensi melaniinin kertymistä ihmisen B16F10-melanoomassa. Vapaaehtoisten kasvojen ihon hoito kliinisessä tutkimuksessa RPE:tä sisältävällä formulaatiolla paransi ihon kirkkautta (L*-arvo) merkittävästi. Taustalla olevan mekanismin määritettiin liittyvän mitogeeniaktivoidun proteiinikinaasin (MAPK) aktivaatioon. Lisäksi,RPEesilläRypistymisen estoihmisen ihon fibroblastien muodostumisaktiivisuus suppressoimalla matriksin metalloproteinaasin (MMP){0}} tasoa. In vivo -tutkimuksessa RPE esti myös auringon ultravioletti-stimuloitua MMP-1-tasoa c-Jun-säätelyllä. Kaiken kaikkiaan havaintomme osoittavat, että RPE herättääihon valkaisuunja ryppyjä ehkäisevä aktiivisuus säätelemällä solunsisäistä signalointia ja tukemalla sen käyttöä ihon valkaisu- ja ryppyjä ehkäisevien kosmeettisten tuotteiden ainesosana.

AVAINSANAT: melaniini, MMP-1, Rosa gallica, ihon valkaisuun, ryppyjen muodostumista

Cistanche-uute: ihon valkaisu

JOHDANTO

Vaikka ihon ikääntymisellä on geneettisesti määrätty perusnopeus, se on monimutkainen ja monitekijäinen prosessi, jota useat ympäristötekijät voivat kiihdyttää.1 Normaali ihon ikääntyminen on luonnollisesti ajan mittaan tapahtuva kronologinen prosessi, jota pahentaa ulkoinen ikääntyminen, jonka laukaisevat auringonvalon ja ilmansaasteiden aiheuttamat ulkoiset rasitukset. 2 Näistä altistuminen auringon ultraviolettisäteilylle (SUV) (erityisesti ultravioletti B [UVB]) on ensisijainen ihon valovanhenemisen syy, jolle on ominaista hyperpigmentaatio (melaniinin ylituotanto) jaryppyjen muodostuminen.3 SUV-säteily stimuloi reaktiivisten happilajien (ROS)/reaktiivisten typpilajien ja DNA-vaurioiden muodostumista, mikä johtaa erilaisiin ikääntymiseen liittyviin prosesseihin ihosoluissa, kuten tulehdukseen, solunulkoisen matriisin (ECM) uudelleenmuodostumiseen, solukuolemaan ja hyperpigmentaatioon.4Melaniini (musta tai ruskea pigmentti) suojaa ihoa UV-säteilyn aiheuttamilta vaurioilta.5 Ihon epäsäännöllinen tai liiallinen melaniinin tuotanto voi kuitenkin johtaa hyperpigmentaatiohäiriöihin, mukaan lukien kloasma, pisamia ja seniilit lentigiinit.6 Arbutiini ja kojiinihappo, jotka on kehitetty näiden hoitoon. sairauksien tiedetään aiheuttavan riskin saada suolistosyöpä tai vastaavasti maksasyöpä.7 Tästä syystä on ollut kiinnostusta sellaisten luonnonmateriaalien hyödyntämiseen, jotka estävät erinomaisesti melaniinin tuotantoa ilman vakavia sivuvaikutuksia. Melanogeneesiä stimuloi tyrosinaasi, jolla on ratkaiseva rooli melaniinin biosynteesireitin alkunopeuden määräävässä vaiheessa, ja TRP-1 ja TRP 2.8 stabiloivat ja aktivoivat tämän entsyymin. Näiden melanogeenisten proteiinien transkriptiota moduloivat mikroftalmiaan liittyvä transkriptiotekijä. (MITF). UV-altistus aktivoi MITF-promoottorin ja indusoi tyrosinaasigeenin ilmentymistä, mikä johtaa melaniinin kertymiseen melanosyytteihin. Lisäksi mitogeeniaktivoidut proteiinikinaasit (MAPK:t), jotka koostuvat solunulkoisesta signaalisäädellystä kinaasista (ERK), c-Jun-N-terminaalisesta kinaasista (JNK) ja p38:sta, johtavat melanogeneesin transkription säätelyyn.8 Erityisesti ERK ja JNK tiedetään säätelevän negatiivisesti MITF:n ilmentymistä,9 kun taas p38 MAPK indusoi melanogeenisten entsyymien proteasomaalista hajoamista. Fosforyloitu p38 MAPK puolestaan ​​aktivoi MITF:n ja melanogeenisten entsyymien ilmentymisen.

Ihon matriisissa on ECM-proteiineja, kuten kollageenia, elastiinia ja proteoglykaaneja, mikä antaa iholle vahvuutta ja kimmoisuutta.11 Ihon ikääntymisprosessin aikana ihomatriisi muuttuu, mukaan lukien muutokset kollageenin suhteissa, mikä johtaa lopulta ryppyjen muodostumiseen. Lisäksi UV-säteily laukaisee myös kollagenaasin hajoamisen, jonka aikana syntyvä oksidatiivinen stressi helpottaa proteolyyttisen matriisin metalloproteinaasin (MMP:t) ilmentymistä, mikä vähentää kollageenisynteesiä ja nopeuttaa kollageenin hajoamista.2 Oksidatiivinen stressi stimuloi erilaisia ​​valokuvauksen ikääntymiseen liittyviä biologisia reittejä sekä MAPK:n ja MAPK:n sytoplasmaa. simuloivat aktivaattoriproteiinia 1 (AP-1; c-Fos/c-Jun), transkriptiotekijää, joka edelleen säätelee MMP:iden tasoa.12 Nämä proteiinit ovat ensisijaisesti vastuussa kollageenin hajoamisesta.7 MMP:istä MMP-1 on tunnetaan tärkeänä entsyyminä, joka osallistuu ECM:n hajoamiseen hajottamalla tyypin I kollageenia, joka on avainkomponentti dermiksessä.3 Näin ollen MMP{12}}:n estoa on pidetty käyttökelpoisena strategiana ihon ikääntymistä ehkäisevässä hoidossa.

Rosa (R.) -laji kuuluu Rosaceae-heimoon ja Rosa-suku on yksi laajimmin levinneistä kasveista. Nämä ovat tärkeitä kaupallisia viljelykasveja, joita käytetään puutarhanhoidossa, koristeissa ja hajuvedessä. Syötävinä kukina terälehtiä käytetään yleisesti myös funktionaalisten elintarvikkeiden ainesosina niiden värin, runsaan maun ja korkean ravintoarvonsa vuoksi.13 Ruusuja on käytetty yrttilääkkeinä kuukautiskipujen, ripulin ja munuaistulehduksen hoitoon, verenkierron parantamiseen, kivun hallintaan ja hemostaasi.13,14 Havaitut fysiologiset ominaisuudet voivat johtua niiden runsaudesta fytokemikaalista, mukaan lukien fenoliyhdisteet, flavonoidit ja antosyaanit.15 Jotkin tutkimukset ovatkin osoittaneet biologisia toimintoja, jotka sisältävät voimakasta antioksidanttia, antimikrobiologiaa, tulehdusta ja allergiaa ehkäiseviä ominaisuuksia. .15–17 Raportoimme äskettäin, että ruusun terälehtien etanoliuute saa aikaan ihon anti-inflammatorisen potentiaalin.18 Lisäksi on tutkittu optimaalisia uuttamisolosuhteita ruusun terälehtien, joilla on ihon ikääntymistä estävä vaikutus, teollisiin sovelluksiin.19 Huolimatta niistä laaja saatavuus, ruusun terälehtiuutteiden (RPE) haarukan mahdolliset ikääntymistä estävät ominaisuudet hoito on edelleen huonosti ymmärretty. Tässä tutkimuksessa arvioimme mahdollisia sovelluksiaRPEihonhoidossa ja niistä vastuussa olevista molekyylimekanismeista.

cistanche-etu: Anti-aging

MATERIAALIT JA MENETELMÄT

Reagenssit

Ruusun terälehdet ostettiin Turkista GN Bion (Gyeonggi-do, Korea) kautta. MTS (CellTiter 96 Aqueous OneSolution Cell Proliferation Assay) -liuos ostettiin Promegalta (Madison, WI, USA). Polyklonaalinen anti-tyrosinaasi, anti-b-aktiini, anti-ERK, anti-MKK4 ja anti-JNK ostettiin Santa Cruz Biotechnologylta (CA, USA). Monoklonaalinen anti-fosfo-MEK (Ser217/221), anti-MEK, anti-fosfo-MKK4, anti-fosfo-MKK3/6, anti-fosfo-ERK, anti-fosfo-JNK, anti-MKK3, anti-fosfo-p38, anti-p38 ja anti-fosfo-c-Jun ostettiin CellSignaling Technology (Danvers, MA, USA). Monoclonalanti-MMP-1 ja anti-tyypin I kollageeni saatiin R&D Systemsiltä (Minneapolis, MN, USA) ja Ab cam (Cambridge, Yhdistynyt kuningaskunta), vastaavasti. Alfa-melanosyyttejä stimuloiva hormoni (a-MSH), sienityrosinaasi ja l-3,4-dihydroksifenyylialaniini (l-DOPA) saatiin Sigma-Aldrichilta (St. Louis, MO, USA).

RPE:n valmistus

Ruusun terälehdet (10 g) ilmakuivattiin, jauhettiin ja sekoitettiin 1 000 ml:aan 70-prosenttista (tilavuus/tilavuus) etanolia ja uutettiin 70 °C:ssa 3 minuuttia soxhlet-uuttimella. Tuote suodatettiin sitten suodatinpaperin nro 2 läpi (Whatman, Maidstone, Yhdistynyt kuningaskunta). Liuotin väkevöitiin jatkuvasti tyhjössä ja jäännös lyofilisoitiin käyttämällä pakastekuivaajaa.

Sienien tyrosinaasin aktiivisuusmääritys in vitro

Entsymaattinen määritys suoritettiin mittaamalla DOPAkromin muodostuminen aiemmin kuvatulla tavalla.20 Lyhyesti, 40 lLofRPEnäyte (12,5, 25, 50 ja 100 LG/ml) laimennettiin 20 ll:ksi PBS-puskuria. Kun oli lisätty 20 ui sienityrosinaasia (0,02 mg/ml), inkuboitiin 30 minuuttia. Substraatti l-DOPA lisättiin entsyymiä sisältävään seokseen ja inkuboitiin sitten 15 minuuttia. Dopa-kromituote mitattiin sitten 475 nm:ssä. Positiivisena kontrollina käytettiin arbutiinia ja C-vitamiinia.

Cistanche-uute vähentää tyrosinaasin aktiivisuutta

Soluviljely

Hiiren melanooma B16F10 -solut ja primääriset ihmisen dermalfibroblastit (HDF:t) saatiin Korean Cell LineBankilta (Soul, Korea) ja ScienCell Research Laboratoriesilta (Carlsbad, CA, USA), vastaavasti. Molempia soluja pidettiin Dulbeccon modifioidussa Eagle-elatusaineessa (DMEM) (GIBCO Invitrogen, Auckland, Uusi-Seelanti), jota oli täydennetty 10 prosentilla (tilavuus/tilavuus) naudan sikiön seerumilla (FBS) ja 1 prosentilla streptomysiini-penisilliiniä (GIBCO Invitrogen) 37 °C:ssa ja 5 °C:ssa. prosentin CO2-inkubaattori.

Solujen elinkelpoisuusmääritys

MTS-määritystä käytettiin ihmisen melanooma-B16F10-solujen RPE-indusoidun proliferaation mittaamiseen. Lyhyesti sanottuna solut kylvettiin ja viljeltiin DMEM:llä, joka sisälsi 10 % FBS:ää ja 1 % antibiootteja 96-kuoppalevyillä. Soluja pidettiin seerumin nälkään 12 tunnin ajan ja niihin lisättiinRPEnäytteet (50–1000 LG/ml) 24 tunnin ajan. Sen jälkeen 10-prosenttista MTS-liuosta, joka sisälsi fenatsiinimetosulfaattia, käsiteltiin soluihin 1 tunnin ajan. Elävien solujen aste mitattiin 490 nm:ssä.

Melaniinin tuotantomääritys

Melaniinin muodostuminen ihmisen melanooma B16F10 -soluissa arvioitiin aiemmin raportoidulla tavalla.20 Lyhyesti sanottuna soluja (8 · 103 solua/kuoppa) viljeltiin kuusikuoppaisilla levyillä 2 ml:ssa DMEM:a. Seuraavana päivänä solut esikäsiteltiin RPE:llä (100 ja 200 lg/ml) 1 tunnin ajan ennen kuin a-MSH 100 nM lisättiin ja sitten inkuboitiin edelleen 72 tuntia. Solunulkoista melaniinia tutkittiin 495 nm:ssä.

Western blot -analyysi

Proteiininäytteet B16F10-soluista, HDF:istä ja ihmisen ihokudoksesta hajotettiin RIPA-puskurilla [20 mM Tris-HCl (pH 7,5) 150 mM NaCl, 1 mM Na2EDTA 1 mM EGTA 1 % NP{51}} % natriumdeoksikolaatti 2. pyrofosfaatti 1 mM b glyserofosfaatti 1 mM Na3VO4 1 lg/ml leupeptiini] ja kvantifioitu Pierce BCA Protein Assay Kitillä. Proteiinit erotettiin 10-prosenttisilla natriumdodekyylisulfaattiakryyliamidigeeleillä molekyylipainon perusteella ja siirrettiin sitten nitroselluloosakalvoille. Kalvot estettiin 1 · naudan seerumialbumiiniliuoksella 1 tunnin ajan ja inkuboitiin osoitetun primaarisen vasta-aineen kanssa 4 °C:ssa 12 tuntia. Kun oli reagoitu piparjuuriperoksidaasilla konjugoidun sekundaarisen vasta-aineen kanssa 1 tunnin ajan, proteiinin ilmentymisen intensiteetti visualisoitiin käyttämällä kemiluminesenssilukijaa (UVITEC Cambridge).

Aiheet ja hoidot

KykyRPEkasvojen parantamiseksiihon valkaisuun was assessed in a double-blind clinical trial in 10 women (>20vuotta vanha). Perusformulaatio valmistettiin käyttämällä puhdistettua vettä, polyakryylihappoa, 1,2-heksaanidiolia ja natriumhydroksidia. RPE:tä lisättiin pitoisuutena 0,05 % (v/v). 6-viikon lisäravintojakson aikana koehenkilöt levittivät RPE-kaavaa yhdelle kasvojensa puolelle, ja kasvojen toista puolta käsiteltiin kerran päivässä käyttämällä vain peruskoostumusta kontrollina. Kokeilujakson aikana vapaaehtoisia kiellettiin käyttämästä muita kosmetiikkaa.

Ihon kunnon arviointi

Ihon kunto arvioitiin Korea Institute of DermatologicalSciences (Soul, Korea) standardin käyttöprotokollan mukaisesti ja suoritettiin 22 C - 2 Cand 50 - 5 prosentin kosteudessa. 30 minuutin kasvojen pesun jälkeen jokaisen koehenkilön ihon tila tutkittiin Skin ColorCatchin avulla (Delfin Technologies, Kuopio, Suomi) ja kerättiin kommentteja. Pisteet määritettiin L*-arvolla (kirkkaus) ja mitattiin välittömästi ennen testiä ja 3 ja 6 viikon kuluttua.

SUV-säteilytys

SUV-säteilytys suoritettiin yhdistämällä ultravioletti-A- (UVA)- ja UVB-lamput (Q-Lab Corporation, Cleveland, OH, USA); niiden valot emittoivat aallonpituudella 340 nm, mikä jäljittelee optimaalista auringonvaloa välillä 365 ja 295 nm. Tämän lampun tuottama UVA:n ja UVB:n suhde oli 94,5 prosenttia ja 5,5 prosenttia. HDF:t ja ihmisen ihoa vastaava kudos seerumittomassa väliaineessa stimuloitiin SUV-säteilyllä 23 ja 46 kJ/m2 UVB-lamppua käyttäen.

Ihmisen ihonäytteen valmistus

Vatsan iholeikkeet saatiin valkoihoiselta naispotilaalta (Biopredic International, Saint Gregoire, Ranska). Lyhyesti sanottuna kudosnäytteet otettiin vatsasta plastiikkakirurgian jälkeen French Law L:n.1245-2 CSP mukaisesti. Tässä tutkimuksessa noudatettiin kaikkia Helsingin julistuksessa esitettyjä periaatteita. Ihokudosta inkuboitiin Biopredic Internationalilta toimitetussa 10-prosenttisessa FBS-väliaineessa 37 °C:ssa 5-prosenttisessa CO2:ssa 10 päivän ajan, jolloin väliaineet vaihdettiin 2 päivän välein. Juoksujakson aikana kudos altistettiin myös anRPEnäyte 1 h ennen SUV-säteilytystä 46 kJ/m2 kahdesti päivässä. Hoidon lopussa kudosta käytettiin immunohistokemialliseen (IHC) analyysiin tai immunoblot-analyysiin.

IHC-havainto

IHC-analyysin suoritti sopimustutkimustoimisto ABION (Soul, Korea). Ihokudosta liotettiin 1 0-prosenttisessa formaldehydissä, kuivattiin etanolin väkevöintigradientin avulla ja upotettiin parafiinivahaan. Leikkeen endogeeninen peroksidaasi inaktivoitiin 0,3-prosenttisella H2O2:lla 15 minuutin ajan ja inkuboitiin sitten anti-MMP-1-vasta-aineen kanssa (R&D Systems, Inc., USA, Kanada) tunnin ajan. Viisi pesun jälkeen leikkeitä inkuboitiin toissijaisten vasta-aineiden kanssa 20 minuuttia. Leikkeet värjättiin DAB:n (3,30-diaminobentsidiini) tunnistusreagenssilla (K3468; DAKO, Glostrup, Tanska) ja tarkkailtiin ja valokuvattiin valomikroskoopilla (BX40; Olympus, Tokio, Japani).

Tilastollinen analyysi

Kaikki kokeet suoritettiin vähintään kolme kertaa ja tiedot ilmaistiin keskimääräisenä keskihajonnana. Tilastollinen merkitsevyys arvioitiin Studentin t-testillä SPSS-ohjelmassa (Chicago, IL, USA) ja merkittävät erot ilmaistiin muodossa P <>

cistanche tubulosa

TULOKSET

RPE estää melaniinin tuotantoa tyrosinaasin eston kautta

Tyrosinaasi on ainoa melanogeneesin nopeutta rajoittava entsyymi, joka esiintyy ihmisen ihosoluissa.8 Melanosyyteissä DOPA:ta tuotetaan tyrosiinista tyrosinaasilla, joka hapettuu edelleen dopakinoniksi melaniinin synteesireitissä.7 Tässä tutkimuksessa määritettiin sienten tyrosinaasimääritystä. anti-melanogeeninen aktiivisuusRPE. Kuten kuviosta 1A esitetään, RPE sai aikaan merkittävän annoksesta riippuvan estävän vaikutuksen tyrosinaasiaktiivisuuteen ja estovaikutus 50–100 lM RPE:llä oli suurempi kuin arbutiinilla ja C-vitamiinilla. Nämä tulokset vahvistettiin edelleen arvioimalla RPE:n vaikutus melaniinin eritykseen ja tyrosinaasin ilmentyminen a-MSH-käsitellyissä B16F10-melanoomasoluissa. Keratinosyytit erittävät a-MSH:ta suojaamaan ihoa liialliselta UV-altistukselta, mikä saa aikaan melanosyyttien aktivoitumisen melaniinin tuottamiseksi.5 Vahvistettiin, että a-MSH-hoidon indusoi tyrosinaasin ilmentyminen ja melaniinin tuotanto melanosyyteissä (kuvio 1B, C). Kuitenkin tyrosinaasin ilmentyminen a-MSH-indusoiduissa B16H10-soluissa vaimensi annoksesta riippuvaisesti RPE-käsittelyllä (kuvio 1B), mikä on johdonmukaista aiemmin kuvattujen tulosten kanssa. Lisäksi RPE (100 ja 200 LG/ml) vähensi merkittävästi melaniinipitoisuutta, joka lisääntyi a-MSH-stimuloiduissa melanosyyteissä (kuvio 1C). Lisäksi vahvistimme, että uute ei indusoinut solusytotoksisuutta 1000 GBP:n LG/ml pitoisuuksilla B16F10-soluissa (kuvio 1D).

RPE vähentää MITF-ilmentymistä indusoimalla MAPK-aktivaation B16F10-melanoomasoluissa

Erilaiset signalointireitit voivat välittää melaniinin pigmentin muodostumista. Melanogeneesiä säätelevät MAPK:t, jotka on luokiteltu kolmeen alatyyppiin, jotka koostuvat ERK:sta, JNK:sta ja p38:sta sekä ylävirran aktivaattoreista MEK, MKK4 tai MKK3/6, säätelemällä transkriptionaalisesti MITF:n ja tyrosinaasin ilmentymistä.21 P38:n fosforylaatio MAPK:n stimuloimalla lankaa melanogeenisten entsyymien proteasomaalista hajoamista.6 ERK:n tiedetään vähentävän MITF:n ilmentymistä ja melanogeneesiä yli 160 proteiinin fosforylaatiolla.10 Lisäksi JNK osallistuu syöpäsolujen proliferaatioon ja apoptoosiin ja myös säätelee melanogeneesiä säätelemällä MITF-ilmentymistä.

Selvittää biologisesta aktiivisuudesta vastaavaa mekanismiaRPE, tutkimme RPE:n vaikutusta MAPK-signalointireittiin Western blot -analyysin avulla. Kuten kuvassa 2 on esitetty, RPE-hoidon osoitettiin myös fosforyloivan MEK-ERK-, MKK4/7-JNK- ja MKK3/6- p38 MAPK -reitit B16F10-soluissa. Lisäksi MAPKK-MAPK:iden fosforylaatio parani merkittävästi RPE-pitoisuuksien kasvaessa. Lisäksi havaitsimme, että RPE vähensi MITF:n ilmentymistä. Nämä tulokset viittaavat siihen, että RPE estää MITF:n ja tyrosinaasin ilmentymistä aktivoimalla MAPK-signalointireittejä.

RPE saa aikaan ihoa valkaisevan vaikutuksen ihmisen iholla

Tässä tutkimuksessa vaikutusRPEIhmisen ihon kirkkaus vahvistettiin edelleen kaksoissokkoutetussa kliinisessä tutkimuksessa. Jokaiselle koehenkilölle levitettiin kahta eri formulaatiota, joista toisessa oli 0.05 prosenttia (tilavuus/tilavuus) RPE:tä ja toinen ilman RPEonia. kumpikin puolikas kasvoillaan kerran päivässä 6 viikon ajan. L*-arvolla arvioitu ihon kirkkaus arvioitiin käyttämällä SkinColorCatch-ohjelmaa (Delfin Technologies). Kuten kuviossa 3 on esitetty, ihon kirkkaus 0,05 % (v/v) RPE:tä sisältävällä formulaatiolla käsittelyn läsnä ollessa lisääntyi merkittävästi verrokkeihin verrattuna. RPE-hoito 3 viikon ajan johti L*-arvojen merkittävään nousuun, ja vaikutus lisääntyi entisestään hoitoajan jatkuessa.

RPE estää kollageenin hajoamista MAPK-MMP-1-estolla HDF:issä

UV-säteily synnyttää oksidatiivista stressiä ja laukaisee siten kollageenin hajoamisen indusoimalla MMP:iden aktivoitumista.2 MMP-1 on tärkeä tekijä valovanhenemisprosessissa, koska se pilkkoo spesifisesti tyypin I kollageenia.3 MMP-1:n ilmentymistä välittävät MAPK:t, kuten ERK, p38 MAPK ja JNK, lisäävät myöhemmin AP-1-transkriptiotekijän aktivaatiota.22 AP-1:n alayksikkönä c-Jun indusoituu myös vasteena UV-säteilyn stimuloimaan MAPK-aktivaatioon. .23 Yritimme selvittää, onkoryppyjä vähentäväRPE:n vaikutus määritettiin MMP{0}}- ja MMP-1--välitteisen ylävirran signaalitransduktion vaimenemisasteella SUV-säteilytetyissä HDF:issä. Myös tyypin I kollageenin ilmentymistaso, joka heijastaa soluissa syntetisoituneen kollageenin määrää, arvioitiin. Kuten kuvioista 4A ja B esitetään, SUV-säteilytys johti vähentyneeseen tyypin Ikollageenin ilmentymiseen ja lisääntyneeseen MMP-1-ilmentymiseen HDF:issä. SUV-säteilytyksen alentamien tyypin I kollageenitasojen ilmentyminen kuitenkin palautui dramaattisesti RPE-käsittelyllä, mikä myös heikensi merkittävästi SUV-säteilytyksen aiheuttamaa lisääntynyttä MMP{5}}-ekspressiota. Lisäksi RPE:n vaikutusta SUV:n aiheuttamaan AP-1:n ja MAPK:iden fosforylaatioon tutkittiin SUV-välitteiseen MMP-1-ekspressioon liittyvien signalointireittien selvittämiseksi. Tulokset osoittivat, että c-Junin lisääntynyt fosforylaatio SUV-indusoiduissa HDF:issä tukahdutti huomattavastiRPEannosriippuvaisella tavalla (kuvio 4C). Lisäksi RPE esti SUV:n aiheuttamaa MEK ERK:n, MKK4/7-JNK:n ja MKK3/6-p38:n fosforylaatiota (kuvat 4D–F). Nämä tulokset viittaavat siihen, että RPE lievittää SUV:n aiheuttamaa kollageenin hajoamista estämällä MMP{10}}-ilmentymistä säätelemällä alaspäin ylävirran AP-1- ja MAPK-signalointireittejä HDF:issä.

RPE vähentää SUV:n aiheuttamaa MMP-1-ilmentymistä heikentämällä AP-1- ja MAPKK-MAPK-signalointia ihmisen ihokudoksessa

Vahvistaaksemme edelleen RPE:n vanhenemista estäviä ominaisuuksia in vivo esikäsittelimme ihmisen ihokudosnäytteitä 1 tunnin ajan, mitä seurasi 46 kJ/m2 SUV-säteilytys. Kuten kuvassa 5A esitetään, SUV-altistus lisäsi huomattavasti MMP-1-ilmentymistä, kun taasRPEhoito tukahdutti SUV:n aiheuttamia MMP{1}}-ilmentymistasoja. Lisäksi IHC-värjäysanalyysi paljasti RPE:n suojaavan vaikutuksen orvaskeden paksuuteen SUV-altistuksella osoittamalla MMP-1-ekspression tason ihokudoksessa. MMP-1-ekspressio SUV-käsitellyssä ihmisen ihomallissa lisääntyi huomattavasti, kun taas RPE-hoito vähensi SUV-indusoitua MMP-1-ilmentymistä (kuvio 5B). AP-1 stimuloi MMP-124:n ilmentymistä, ja MAPK:t ovat pääasiallisia UV-indusoidun MMP-1-ilmentymisen välittäjiä säätelemällä AP-1-transaktivaatiota.25 Kuten kuvasta 5C, RPE esti SUV:n aiheuttamaa c-Junin fosforylaatiota ihmisen ihokudoksessa, mikä viittaa RPE:n aiheuttamaan AP-1-transkription aktivaation heikkenemiseen. Lisäksi RPE tukahdutti SUV:n aiheuttamaa MEK-ERK:n, MKK4/7-JNK:n ja MKK3/6-p38:n fosforylaatiota (kuva 6). Nämä tulokset yhdessä viittaavat siihen, että RPE estää SUV:n aiheuttamaa kollageenituotantoa. ihosoluissa ja ihokudoksessa.

cistanche tubulosa -uute

KESKUSTELU

Monia nykyään olemassa olevia koristeruusulajikkeita on käytetty pitkään ravinnoksi ja lääketieteellisiin tarkoituksiin. Ruusukasvissa on todellakin erilaisia ​​mielenkiinnon kohteena olevia bioaktiivisia yhdisteitä, mukaan lukien fenoliyhdisteet.26 Aiemmin raportoimme ihon tulehdusta estävästä vaikutuksesta.RPEkäyttämällä hiiren epidermaalisia soluja, joissa RPE vähensi SUV:n aiheuttamaa COX-2-ekspressiota estämällä MAPK-signalointireittiä.

Tulehduksen ja vanhenemisprosessin välinen läheinen suhde on vakiintunut,28 ja pyrimme tutkimaan tätä suhdettaihon valkaisuunjaRypistymisen estomuodostustoimintaa. Kuten kuviossa 1 on esitetty, RPE suppressoi annosriippuvaisesti tyrosinaasin aktiivisuutta ja sen ilmentymistä B16F10-soluissa. Lisäksi ihon pigmentaation lopputulos, melaniinin tuotanto, esti RPE-käsittelyn B16F10-soluissa. RPE indusoi myös MAPK:iden ja sen ylävirran aktivaattorien MAPKK:iden fosforylaation, mitä seurasi MITF:n ilmentymisen lasku (kuvio 2). MAPK:iden tiedetään olevan avainsignalointitekijöitä, jotka säätelevät melanogeneesiä melanosyyteissä.21 ERK- ja JNK-reitit osallistuvat lukuisiin signaalinsiirtovaiheisiin ja osallistuvat myös MITF:n säätelyyn, mikä johtaa peräkkäin tyrosinaasin ja melanogeneesin estoon.9 Samaan aikaan MAPK:n aktivaatio johtaa p38:n aktivoitumiseen. melaniinin synteesiä indusoimalla tyrosinaasiproteiinin hajoamista.6 Nämä tulokset yhdessä osoittavat, että RPE estää melanogeneesiä B16F10-melanoomasoluissa estämällä MITF:n ja tyrosinasetranskription, ja RPE:n vaikutus ilmenee MAPKK-MAPK-signalointireitin aktivoitumisen yhteydessä.

Vahvistaaksesi, onkoihon valkaisuunja RPE:n ryppyjä ehkäisevät vaikutukset ovat voimassa ihmisen iholla, hoidimme vapaaehtoisia RPE:llä 6 viikon ajan arvioidaksemme ihon valkaisua. Arvioimme myös ex vivo ihmisen ihokudosta 10 päivän ajan arvioidaksemmeRypistymisen estomuodostumisen vaikutuksia. Käsittely RPE:tä sisältävällä formulaatiolla paransi merkittävästi L*-arvoja, ihon valkoisuuden mittayksikköä (kuva 3). Lisäksi suurin osa vapaaehtoisista vastasi, että heidän ihonsa, mukaan lukien valkoisuus, paransi formulaatiolla, joka sisälsiRPE, perustuu kyselyyn (tietoja ei näytetä).

SUV-säteilyä pidetään ensisijaisena tekijänä ihon ikääntymiseen liittyvissä prosesseissa.4 Tässä tutkimuksessa RPE ei ainoastaan ​​palauttanut prokollageenisynteesiä vaan myös tukahdutti SUV:n aiheuttaman MMP-1-ilmentymisen HDF:issä (kuva 4). Lisäksi IHC-värjäysanalyysi osoitti, että RPE voi heikentää SUV-indusoitua MMP1-ilmentymistä ihokudoksessa (kuvio 5B). Lisäksi tutkimme, vaikuttaako RPE transkriptiotekijöihin, kuten MAPK ja AP{8}}. Huomasimme, että proteiinitasot olivat kohonneet SUV-säteilytetyssä HDF:ssä ja ihokudoksessa, kun taasRPEesti merkittävästi MAPKK-MAPK-reittiä ja AP-1aktivaatiota. SUV-altistuksen jälkeen tuloksena oleva ROS voi toimia aktivaattoreina useille molekyylireiteille, mukaan lukien MAPK-reitti, joka aktivoi AP-1- ja ydintekijä-kappaB-transkription.29 Nämä reitit myötävaikuttavat useiden geenien, mukaan lukien MMP:iden, ilmentymiseen, mikä johtaa kollageenin puutteeseen ja ryppyjä.12 Aiemmassa tutkimuksessa osoitimme myös, että RPE sisältää suuria pitoisuuksia antioksidantteja, kuten antosyaaneja, polyfenoleja ja flavonoideja, mikä tarjoaa jonkin verran anti-inflammatorista kapasiteettia SUV-altistumista vastaan.27 Siksi RPE:n SUV-säteilyn aiheuttaman ihovaurion suojaava vaikutus. Tässä tutkimuksessa osoitettu voi johtua sen antioksidanttikapasiteetista.

Lopuksi totesimme senRPEesittelee ihon valkaisua jaRypistymisen estovaikutukset, jotka estävät samalla tyrosinaasin aktiivisuutta ja melaniinin muodostumista melanosyyteissä. RPE:n anti-melanogeeniset ominaisuudet voidaan saada esiin MAPKK-MAPK-signalointireitin aktivoinnin kautta. Lisäksi RPE ei ainoastaan ​​edistä prokollageenisynteesiä, vaan myös estää SUV-altistuksen indusoimaa MMP-ilmentymistä ihon fibroblasteissa ja kudoksissa estämällä MAPKK-MAPK-reittiä ja AP-1-aktivaatiota. Lisäksi vapaaehtoisilla ei havaittu formulaation stabiilisuuteen liittyviä negatiivisia vaikutuksia. Tuloksemme viittaavat siihen, että RPE voi olla tehokas ihoa suojaava biomateriaali, jota voidaan käyttää ihopigmentaation ja ryppyjen kliinisessä ja/tai kosmeettisessa hoidossa.

cistanche-lisäaineet