Maksakinaasi B1:n (LKB1) ennustearvo mahasyöpään liittyvän kasvaimen mikroympäristön immuniteetissa

Abstrakti:

Maksakinaasi B1 (LKB1) on kasvainsuppressorigeeni, jonka inaktivaatiota tapahtuu usein eri kasvaintyypeissä. Ei kuitenkaan tiedetä, liittyykö LKB1 mahasyövän (GC) kliinisiin piirteisiin ja tuumorin immuniteetin säätelyyn. Tässä tutkimuksessa osoitimme, että LKB1 ekspressoituu voimakkaasti terveiden yksilöiden seerumissa (n = 176) verrattuna GC-potilaisiin (n = 416) ja se liittyy myös kliinisiin tuloksiin ja hyviin eloonjäämislukuihin GC-potilailla. Lisäksi immuunitarkistuspisteisiin ja T-soluaktivaatioon liittyvät geenit, kuten PD−1, PD−L1:n, CD8A:n, CD8B:n, CD28:n ja GZMM:n osoitettiin ilmentyvän voimakkaasti GC-alaryhmissä, joilla on korkea LKB1-ekspressio. Verrattuna tuoreisiin mahasyöpäkudoksiin LKB1 ekspressoitui voimakkaasti CD3+CD8+ ja CD3+CD8+CD28+ T-soluissa tuoreissa vierekkäisissä ei- syöpäkudokset. CD3+CD8+ T-solut tuottivat IFN:n−anti−syövän immuunivaste. Lisäksi LKB:tä ilmentäneiden CD3+CD8+ T-solujen osuudella oli positiivinen korrelaatio IFN:n kanssa−ilmaisu. Lisäksi GC-potilailla, joilla oli alhainen LKB1-ekspressio, oli huono objektiivinen vasteprosentti ja huonompi eloonjääminen ilman etenemistä ja kokonaiseloonjääminen pembrolitsumabilla hoidettuna. Yhteenvetona voidaan todeta, että LKB1 voi olla mahdollinen immuunitarkastuspiste GC-potilailla.

Cistanche tubulosa-Antitumorin edut

Avainsanat:

LKB1; mahasyöpä; kliiniset tulokset; immuunijärjestelmän tarkistuspiste; CD3+CD8+ T-solut

1. Esittely

Maailmanlaajuisesti mahasyöpä (GC) on kansanterveysongelma ja viidenneksi yleisimmin diagnosoitu maligniteetti [1,2]. Vaikka GC:n yleisiä hoitomenetelmiä, kuten mahalaukun resektio, kemoterapia, sädehoito ja kohdennettuja hoitoja, käytetään laajalti kliinisessä käytännössä [3], 5−edenneen GC:n vuoden eloonjäämisaste on < 20 %. GC-hoidon [4,5] kehityksen seurauksena immunoterapiaa pidetään innovatiivisena lähestymistapana [6], joka on selventänyt tämän taudin hoitoa [7]. Immunoterapian aikakaudella ohjelmoitu solukuolema 1 (PD−1)/PD−ligandi 1 (PD−L1) on osoitettu olevan biomarkkeri syövän diagnosoinnissa ja immunoterapiavasteen ennustamisessa, mutta se ei ole riittävän herkkä. Siksi on tärkeää tunnistaa uudet ennustavat biomarkkerit immunoterapiassa GC:lle.

Maksakinaasi B1 (LKB1), joka tunnetaan myös nimellä STK11, on seriini/treoniinikinaasi, jota esiintyy laajalti useissa kudoksissa [8]. Yhä useammat todisteet ovat osoittaneet, että LKB1 on keskeinen kasvainsuppressori useissa eri syöpätyypeissä, kuten haimasyöpä [9], melanooma [10,11], ei−pienisoluinen keuhkosyöpä [12,13] ja kohdunkaulansyöpä [14]. Lisäksi LKB1:n tiedetään osallistuvan immuunisolutoimintojen säätelyyn [10]. LKB1-puutos T-soluissa edistää maha-suolikanavan polypoosin kehittymistä [15] ja siihen liittyy myös IL−11−JAK/STAT3-reitti, joka johtaa maha-suolikanavan tuumorigeneesiin [16]. Lisäksi LKB1:llä on tärkeä rooli makrofagien toiminnassa osallistumalla prosesseihin, kuten solujen kasvuun, aineenvaihduntaan ja polarisaatioon [17]. Viimeaikaiset tutkimukset ovat osoittaneet, että LKB1:n häviäminen voi olla osallisena kasvaimen immuuni-mikroympäristön modulaatiossa [18]. Erityisesti LKB1-puutos tukahduttaa T−solujen aktiivisuutta edistämällä tulehdusta edistävien sytokiinien tuotantoa ja neutrofiilien lisääntymistä keuhkosyöpäpotilaiden kasvainten mikroympäristössä [19]. Rajoitettu määrä tutkimuksia on selventänyt yhteyttä LKB1:n ilmentymisen, kliinisten tulosten, immuunijärjestelmän ja terapeuttisen vasteen välillä GC:ssä. Tässä tutkimuksessa osoitimme yhteyden LKB1-ekspression ja kliinisten tulosten välillä GC-potilailla. Lisäksi osoitimme, että alhainen LKB1-ekspressio edistää immunosuppressiivista mikroympäristöä ja saattaa johtaa huonoon ennusteeseen GC-potilaiden keskuudessa. Lisäksi GC-potilaat, joilla oli korkea LKB1:n ilmentyminen, saivat enemmän hyötyä pembrolitsumabihoidosta. LKB1:n ennustearvoa ja mahdollista roolia kasvainimmunologiassa käsitellään tässä, ja ne voivat auttaa ymmärtämään mahdollista GC:n taustalla olevaa mekanismia.

cistanche tubulosa - parantaa immuunijärjestelmää

2. Materiaalit ja metodit

2.1. Potilaat ja verinäytteet

Tämän retrospektiivisen tutkimuksen hyväksyi Zhejiangin syöpäsairaalan paikallinen eettinen komitea (IRB−2021−154). Keräsimme verinäytteitä 176 terveeltä aikuiselta ja 416 GC-potilaalta tammikuun 2015 ja elokuun 2022 välisenä aikana ja keräsimme 26 paria tuoreita syöpäkudoksia ja viereisiä ei-syöpäkudoksia 26 GC-potilaalta. Potilaat, joilla on ollut muita pahanlaatuisia kasvaimia, suljettiin pois.

2.2. CEA:n, CA19−9:n, AFP:n ja LKB1:n ilmentyminen

Kaupallista ELISA-testisarjaa (RX106671H; Ruixinbio, Quanzhou, Fujian, Kiina) käytettiin LKB1:n ilmentymisen tason arvioimiseen plasmanäytteissä standardoidun protokollan mukaisesti. Lyhyesti sanottuna vastaavat plasmanäytteet (50 µl) ja standardimalliproteiineja (50 µl) lisättiin 96-kuoppaisille levyille. Seuraavaksi lisättiin 100 µl HRP-leimattua vasta-ainetta ja 96-kuoppaisia ​​levyjä inkuboitiin 1 tunti 37 °C:ssa. Sitten levyt pestiin kolme kertaa pesupuskurilla. Substraattiseos (100 µl) lisättiin ja levyt analysoitiin mikrolevylukijalla OD 450:ssa. CEA:n määrittämiseen käytettiin kemiluminesenssia (CFDA 20163402679, Siemens Healthcare Diagnostic Products., Shanghai, Kiina), CA19-9 (CFDA 201734017813401). Siemens Healthcare Diagnostic Products., Shanghai, Kiina) ja AFP-lauseke (CFDA 20173400053, Siemens Healthcare Diagnostic Products., Shanghai, Kiina). SPSS 19.0 -ohjelmistoa (IBM, Armonk, NY, USA) käytettiin CEA:n, CA19-9:n, AFP:n ja LKB1:n vastaanottimen toimintakäyrien (ROC) alla olevan alueen määrittämiseen. TNM-patologisen vaiheen, FIGO-vaiheen ja HER2-ekspression perusteella 416 GC-potilasta jaettiin eri alaryhmiin. Paritettua t-testiä käytettiin analysoimaan LKB1:n ilmentyminen eri GC-potilaiden alaryhmissä.

2.3. LKB1:n ilmentymisen analyysi immuunisoluissa ja yhteys immuunitarkastuspisteiden kanssa

Comprehensive Analysis on Multi−Omics of Immunotherapy in Pan−cancer [CAMOIP] (http://www.camoip.net/) (käytetty 1. tammikuuta 2. {{10}}23) on analysointityökalu ilmentymis- ja mutaatiotiedot syövän genomianalyysistä (TCGA) ja immuunitarkistuspisteestäjillä (ICI) käsitellyistä projekteista. Normaalia prosessointiputkea käytettiin immunogeenisyyden ja reitin rikastumisen analysoimiseen GC-potilailla. CAMOIP:tä käytettiin myös erilaisten immuunisolujen ilmentymien analysointiin LKB1:n ilmentymisen mukaan GC-potilailla. UCSC Xena -tietokanta (https://xena.ucsc.edu/public) (käytetty 1. tammikuuta 2023) on syövän genomiikan data-analyysialusta, joka tukee useiden syöpänäytteiden histologisten tietojen visualisointia ja analysointia. UCSC Xena -tietokanta tarjoaa LKB1:n, T-solujen immuunitarkistuspisteen geenit, T-soluaktivaation ja mRNA:n ilmentymisen antigeeniesityksen. Monimutkainen lämpökartta tehtiin käyttämällä R-kieltä (4.2.1). SPSS 19.0 -ohjelmistoa (IBM, Armonk, NY, USA) käytettiin analysoimaan LKB1-ilmentymistä kvartiilien perusteella. Jaoimme GC-potilaat LKB1:n korkean ja alhaisen ilmentymisen ryhmiin LKB1-ekspression välitysarvon mukaan. T-testiä käytettiin analysoimaan T-soluimmuunitarkistuspistegeenejä, T-soluaktivaatiota ja mRNA:n ilmentymisen antigeenin esittelyä GC-potilailla LKB1:n korkean ja alhaisen ilmentymisen GC-potilaiden alaryhmiin. p-arvoja < 0,001 pidettiin tilastollisesti merkitsevänä.

Cistanche tubulosa-Antitumorin edut

2.4. Virtaussytometria

Leikkauksen aikana saadut tuoreet syöpäkudokset (n {0}}) ja tuoreet vierekkäiset ei-syöpäkudokset (n=26) jauhettiin kudosjauhatusliuokseksi 30 minuutin kuluessa. Jauhatusliuos ja perifeerisen veren mononukleaariset solut (PBMC:t) (1 x 106 solua/ml) kerättiin fosfaattipuskuroituun suolaliuokseen (PBS) (50 µl, CR20012; Zhejiang Crenry, Zhejiang, Kiina), johon oli lisätty 0,5 % naudan seerumialbumiinia (BSA) (Thermo Fisher, Waltham, MA, USA) ja inkuboitiin anti-ihmisen monoklonaalisten vasta-aineiden kanssa 15 minuuttia. Ihmisen vastaisia ​​monoklonaalisia vasta-aineita käytettiin, kuten taulukossa 1 ja lisätaulukossa S1 ja täydentävässä kuvassa S1 esitetään: anti-LKB1 (PTG, Wuhan, Hubei, Kiina); anti-CD68 (Biolegend, San Diego, CA, USA); anti-CD209 (Biolegend, San Diego, CA, USA); anti-CD28 (Biolegend, San Diego, CA, USA); anti-CD45/CD56/CD19 (Beckman Coulter, St. Louis, MO, USA); anti-CD45/CD4/CD8/CD3 (Beckman Coulter, St. Louis, MO, USA); anti-CD4, CD3 (Beckman Coulter, St. Louis, MO, USA); anti-CD45RO (Beckman Coulter, St. Louis, MO, USA); anti-CD8 (Beckman Coulter, St. Louis, MO, USA); anti-CD38 (Beckman Coulter, St. Louis, MO, USA); ja anti-CD45RA (Beckman Coulter, St. Louis, MO, USA). CD3/CD4/CD8/CD28/PD−1-tunnistussarja ostettiin Raise Carelta (Hangzhou, Kiina). Tulosten analysointiin käytettiin CXP-analyysiohjelmistoa ja Beckman Coulter FC 500 -virtaussytometriä [20,21]. Sytokiinien havaitsemispakkausta (Seager, Dalian, Kiina) käytettiin sytokiinien havaitsemiseen GC-potilaiden plasmanäytteistä valmistajan ohjeiden mukaisesti.

Taulukko 1. GC-potilaiden ja terveiden yksilöiden vertailu kliinisillä parametreilla.

2.5. Immuunisolujen osuudet tuoreessa kudoksessa

T-testillä analysoitiin immuunisolujen osuuksia tuoreissa syöpäsoluissa (n=26) ja tuoreissa vierekkäisissä ei-syöpäkudoksissa (n=26). Ero LKB1+- ja PD1+LKB1+-immuunisoluosuuksien välillä tuoreissa syöpäkudoksissa ja tuoreissa vierekkäisissä ei-syöpäkudoksissa analysoitiin käyttämällä parillista t-testiä. SPSS 19.0 -ohjelmistoa (IBM, Armonk, NY, USA) käytettiin määrittämään immuunisolujen osuuden ja sytokiinien välinen korrelaatio tuoreissa syöpäsoluissa ja tuoreissa vierekkäisissä ei-syöpäkudoksissa.

2.6. Kudos-immunohistokemia (IHC)

Zhejiangin syöpäsairaalan biopankki toimitti tuoreita syöpäsoluja (n=26) ja tuoreita vierekkäisiä ei-syöpäkudoksia (n=26), joita käytettiin tässä tutkimuksessa. IHC-sarjaa (Beijing Zhongshan Golden Bridge Biotechnology Co., Ltd., Beijing, Kiina) käytettiin IHC:n suorittamiseen valmistajan ohjeiden mukaisesti. Lyhyesti sanottuna parafiinileikkeistä poistettiin peräkkäin parafiini, ne hydratoitiin ja keitettiin antigeenin hakemista varten. Ensisijainen LKB1-vasta-aine (IPB0924 [laimennussuhde, 1:100]; Baijia, Taizhou, Jiangsu, Kiina) ja gamma-interferoni (IFN−) vasta-aine (IPB0703 [laimennussuhde, 1:100]; Baijia, Taizhou, Jiangsu, Kiina) inkuboitiin 2 tuntia huoneenlämmössä. Leikkeet pestiin kolme kertaa PBS:llä. Histokemiallista polymeerin tehostajaa (400 ui) lisättiin parafiinileikkeisiin 20 minuutin ajaksi, mitä seurasi 3 pesua PBS:llä. Seuraavaksi sekundaariset vasta-aineet lisättiin parafiinileikkeisiin ja inkuboitiin 20 minuuttia, mitä seurasi pesu, DAB-värjäys, vastavärjäys ja kiinnitys.

2.7. GC-potilaiden hoitovaste pembrolitsumabille LKB1-ekspression perusteella

Hoitovaste pembrolitsumabille ja kliiniset tiedot GC-potilaista, joille suoritetaan immuunitarkastuspisteen salpaus (ICB), saatiin aikaisemmasta raportista [22]. SPSS 19.0 -ohjelmistoa (IBM, Armonk, NY, USA) käytettiin analysoimaan LKB1-ilmentymistä kvartiilien perusteella. Jaoimme GC-potilaat LKB1:n korkean ja alhaisen ilmentymisen ryhmiin LKB1-ekspression välitysarvon mukaan. R-kieltä (4.2.1) käytettiin GC-potilaiden pembrolitsumabihoitovasteen määrittämiseen LKB1-ekspression mukaan. PD−L1:n ilmentyminen analysoitiin SPSS 19.{12}} -ohjelmistolla (IBM, Armonk, NY, USA) kvartiilien perusteella. GC-potilaat jaettiin PD−L1 korkean ja matalan ilmentymisen ryhmiin välittäjäarvon mukaan. LKB1:n ja PD−L1:n ilmentymisen perusteella GC-potilaat jaettiin LKB1 korkeaan ja matalaan PD−L1:n korkean ja matalan ilmentymisen alaryhmiin, ja Pythonia käytettiin kuvaamaan pembrolitsumabihoitovastetta alaryhmissä. Pembrolitsumabilla hoidettujen GC-potilaiden kokonaiseloonjääminen ja etenemisvapaa eloonjääminen analysoitiin Kaplan-Meier-menetelmällä log-rank-testillä.

2.8. Tilastollinen analyysi

Tilastolliset analyysit suoritettiin SPSS 19.{1}} -ohjelmistolla (IBM, Armonk, NY, USA). Potilaan eloonjääminen varmistettiin puhelimitse ja analysoitiin Kaplan-Meier-menetelmällä log-rank-testillä. p-arvoja < 0,05 pidettiin tilastollisesti merkittävinä. Lisäksi Kaplan−Meier Plotteria (http://www.kmplot.com) (käytetty 1. tammikuuta 2023) käytettiin vahvistamaan LKB1:n (korkea vs. matala ekspressio) vaikutus GC-potilaiden eloonjäämiseen. Pythonia käytettiin kuvaamaan GC-potilaiden kliinisiä piirteitä ja parametreja.

3. Tulokset

3.1. LKB1-ekspression ja klinikan ominaisuuksien välinen yhteys GC-potilailla

Tähän tutkimukseen osallistui 416 GC-potilasta (268 miestä ja 148 naista) ja 176 tervettä henkilöä (87 miestä ja 89 naista). Terveiden yksilöiden ja GC-potilaiden ominaisuudet on esitetty kuvassa 1A ja taulukossa 1. GC-potilaiden kliiniset tulokset on yhteenveto, mukaan lukien CEA-, CA19-9-, AFP- ja HER2-ekspressio, patologinen aste, Union for International Cancer Control (UICC) ) kasvainvaihe, imusolmukkeiden osallistuminen ja etäpesäkkeet (kuva 1B, taulukot 1 ja 2). Kuten kuvasta 1C näkyy, CEA, CA19-9 ja AFP ekspressoituivat voimakkaasti GC-potilaiden seerumissa, kun taas LKB1 ekspressoitui voimakkaasti terveillä yksilöillä. Verrattuna CEA:han, CA19-9:ään ja AFP:hen, LKB1:llä oli paras spesifisyys ja herkkyys (AUC=0.727; kuva 1D). Kliinisistä parametreista LKB1 oli huomattavasti alhaisempi vaiheissa T3–4, N2–3, M1 ja vaiheessa III–IV UICC-vaiheen kriteerien mukaan (p < {{30}}.0 5, p < 0,05, p < 0,001 ja p < 0,01, vastaavasti; kuvio 1E ja taulukko 2). Lisäksi LKB1 ilmentyi numeerisesti voimakkaasti HER2-negatiivisilla GC-potilailla (kuva 1F). Siten nämä tulokset viittasivat siihen, että LKB1 on mahdollisesti osallisena GC:n etenemisessä.

Kuva 1. LKB1:n ilmentymisen ja kliinisten ominaisuuksien väliset suhteet. (A, B), Terveiden yksilöiden (n=176) ja GC-potilaiden (n=416) kliiniset piirteet kartoitettiin Pythonilla. (C), CEA:n, CA19-9:n ja AFP:n ilmentyminen mitattiin GC-potilaiden ja terveiden yksilöiden seerumista. (D), Verrattuna CEA:han, CA19-9:ään ja AFP:hen, LKB1:llä oli suurempi herkkyys ja spesifisyys. (E), LKB1-ekspressio oli alhaisempi vaiheen N2-3, M1 ja vaiheen III-IV GC-potilailla. (F), LKB1 ilmentyi numeerisesti voimakkaasti HER2-negatiivisilla GC-potilailla. HER2-~+: HER2-negatiiviset GC-potilaat. HER2++~+++: paitsi HER2-negatiiviset GC-potilaat. Pariton t-testi, * p < 0.05, ** p < 0,01, *** p < 0,001.

Taulukko 2. GC-potilaiden perusominaisuudet.

3.2. LKB1 edistää immunosuppressiivista mikroympäristöä GC-potilailla

TCGA-tietokantojen mukaan T-solureseptorikompleksi oli merkittävästi erilainen GC-potilaiden välillä, joilla oli korkea ja alhainen LKB1-ekspressio (kuva 2A). Lisäksi osoitimme, että T-solujen ilmentyminen erosi GC-potilailla korkean ja alhaisen LKB1-ilmentymisen alaryhmissä, mukaan lukien CD8+ T-solut, säätelevät T-solut, neutrofiilit ja eosinofiilit (kuvio 2B). Lisäksi havaittiin voimakkaita korrelaatiokuvioita LKB1:n ilmentymisen ja T-soluimmuunitarkistuspisteisiin, T-soluaktivaatioon ja antigeenin esittelyyn osallistuvien geenien lisääntymisen välillä (kuva 2C). Jaoimme edelleen GC-potilaita PD-1-, PD-L1-, CD8A-, CD8B-, CD28- ja GZMM-mRNA:n ilmentymisen perusteella LKB1:n korkean ja alhaisen ilmentymisen alaryhmissä. Mielenkiintoista on, että geenit ekspressoituivat voimakkaasti LKB1-high-ekspressio-alaryhmässä (kuva 2D). LKB1-, PD-1- ja PD-L1-ekspressio osoitti rajallisia eroja limakalvo- ja diffuusityypeissä (lisäkuva S2). Nämä tiedot viittaavat siihen, että LKB1 saattaa liittyä T-soluaktivaatiofenotyyppiin ja T-soluimmuunitarkistuspisteeseen GC-potilailla.

3.3. LKB1 ilmentyy selektiivisesti T (CD3+CD8+) -solujen infiltraatioissa GC:ssä

LKB1:n ilmentymisen määrittämiseksi immuuni-mikroympäristössä mittasimme kuuden immuunijärjestelmää infiltroivan solun ilmentymisen ääreisveressä (B), tuoreessa syöpäsolussa (T) ja vierekkäisissä ei-syöpäkudoksissa (N) ja 12 eri sytokiinien ilmentymistä GC-potilailla ( Kuva 3A). Osoitimme myös LKB1-ilmentymistä kaikkien kuuden immuuni-infiltraatiosolun, mukaan lukien B-solut, T-solut, neutrofiilit, makrofagit ja dendriittisolut, runsauden perusteella (kuva 3A ja täydentävä kuva S3). Huomasimme, että T-solujen (CD3+CD8+) osuus oli suurempi vierekkäisissä ei-syöpäkudoksissa (N), kun taas T-solujen osuus (CD3+CD{{) 9}}) oli korkeampi tuoreissa syöpäkudoksissa (T), ja muut T-solut osoittivat rajallisia eroja tuoreiden syöpäkudosten (T) ja vierekkäisten ei-syöpäkudosten välillä (N; kuva 3B). Lisäksi T-solut (CD3+CD8+LKB1+, CD3+CD8+CD28+LKB1+, CD 3+CD8+CD28+PD−1+LKB1+) oli merkittävästi korkeampi tuoreissa vierekkäisissä ei-syöpäkudoksissa (N; kuva 3C). LKB1:n ilmentyminen muissa immuunisoluissa oli samanlainen tuoreiden syöpäkudosten (T) ja viereisten ei-syöpäkudosten (N) välillä, paitsi neutrofiilit (lisäkuva S3). Yhdessä nämä tulokset osoittivat, että LKB1 saattaa liittyä erityisesti T (CD3+CD8+, CD3+CD8+CD28+) solujen solutunkeutumismikroympäristöön. GC-potilailla.

Kuva 2. LKB1 liittyy T-soluaktivaatiogeeniin ja immuunijärjestelmän tarkistuspisteisiin. (A) T-solureseptorikompleksi osoitti suurimman eron LKB1:n korkean ja alhaisen ilmentymisen alaryhmissä. (B) CAMOIP-tietokantaanalyysi immuunisolujen erilaisesta ilmentymisestä LKB1:n korkean ja matalan ilmentämisen alaryhmien välillä. (C) Lämpökartta näyttää z-pisteiden normalisoidut log-cpm-arvot allekirjoitusimmuunigeenijoukkojen LKB1-ilmentymiseen perustuville (n=407). (D) PD-1, PD-L1, CD8A, CD8B, CD28 ja GZMM ilmentyivät voimakkaasti LKB1-korkean GC:n potilasalaryhmässä. Pariton t-testi, ns: ei merkitsevää eroa, * p < 0.05, ** p < 0.01, *** p < 0,001 , **** p < 0,0001.

Kuva 3. LKB1 liittyy T-soluinfiltraatioon GC-potilailla. (A) Lämpökartta näyttää immuunisolujen osuuden ääreisveressä (B), tuoreessa syöpäkudoksessa (T) ja vierekkäisissä ei-syöpäkudoksissa (N) ja sytokiinien ilmentymisen. (B) Erilaisten T-solujen suhteet tuoreissa syöpäkudoksissa (T) ja vierekkäisissä ei-syöpäkudoksissa (N). (C) LKB1:tä ilmentävien T-solujen erot tuoreissa syöpäsoluissa (T) ja vierekkäisissä ei-syöpäkudoksissa (N). Parillinen t-testi, * p < 0.05, ** p < 0,01, *** p < 0,001.

3.4. LKB1 on potentiaalisesti korreloitu IFN-lausekkeen kanssa

Oletimme, että immuunisoluissa ekspressoitu LKB1 korreloi immuunisolujen toiminnan kanssa. Tulosten perusteella analysoimme immuuni-infiltraatiosolujen (LKB1+) osuuden ja sytokiinien ilmentymisen välistä yhteyttä (kuvio 4A). Edellinen tutkimus osoitti, että T-solujen tuottama IFN− (CD3+CD8+) on tehokas indikaattori kliinisen tehon ja eloonjäämisen ennustamisessa anti−PD−1-salpauksella GC-potilailla [23,24] . Havaitsimme, että vain T-solujen (CD3+LKB1+) ja (CD3+CD8+LKB1+) suhteilla oli lievä positiivinen korrelaatio IFN−:n kanssa ilmentyminen tuoreissa syöpäkudoksissa (T) ja vierekkäisissä ei-syöpäkudoksissa (N; kuva 4B). Seuraavaksi määritimme LKB1- ja IFN-ekspression edellä mainituissa tuoreissa syöpäkudoksissa (T) ja vierekkäisissä ei-syöpäkudoksissa (N) ja havaitsimme, että LKB1:n ilmentyminen oli merkittävästi alhaisempaa syöpäkudoksissa verrattuna IFN-ilmentymiseen (kuva 4C). Nämä havainnot viittasivat siihen, että LKB1:llä saattaa olla positiivinen yhteys T-solujen (CD3+CD8+, CD3+CD8+CD{{) erittämän kasvainvastaisen IFN-ekspression kanssa 23}}).

Kuva 4. LKB1 korreloi positiivisesti IFN−-ekspression kanssa. (A) Analyysi immuunisoluinfiltraatin (LKB1+) osuuden ja sytokiinien ilmentymisen välillä. (B) T-solujen (CD3+LKB1+) ja (CD3+CD8+LKB1+) suhteiden korrelaatio IFN-ekspression kanssa tuoreessa syöpäsolussa (T) ja viereiset ei-syöpäkudokset (N). (C) Immunohistokemialliset analyysit LKB1- ja IFN-ilmentymisestä tuoreissa syöpäsoluissa (T) ja vierekkäisissä ei-syöpäkudoksissa (N).

3.5. LKB1 ennustaa hyvää vastetta pembrolitsumabille GC:ssä

Tulosten perusteella LKB1 saattaa olla mahdollinen immuunijärjestelmän tarkistuspiste. Kuten kuvassa 5A osoitetaan, alhainen LKB1-ilmentyminen liittyi merkittävästi lyhyempään kokonaiseloonjäämiseen perustuen GC-potilaiden eloonjäämiseen vuosina 2015–2019. Tämän havainnon mukaisesti Kaplan–Meier-tietokanta (http://kmplot.com/) haettu 1. tammikuuta 2023) osoitti myös, että LKB1:n ilmentyminen vaikutti merkittävästi GC-potilaiden ennusteeseen, ja kokonaiseloonjääminen oli merkittävästi alhaisempi niillä potilailla, joilla oli alhainen LKB1-ekspressio (kuvio 5B). Seuraavaksi LKB1:n ennustusarvon arvioimiseksi immunoterapiaa varten analysoitiin pembrolitsumabilla hoidetuista GC-potilaista koostuva ICB-kohortti (taulukko 3). Verrattuna GC-potilaisiin, joilla oli korkea LKB1-ekspressio, alhaisen LKB1-ilmentymisen alaryhmällä oli alentunut objektiivinen vasteprosentti (ORR; kuvio 5C). Lisäksi GC-potilailla, joilla oli alhainen LKB1:n ilmentyminen, oli huonompi PFS ja OS (kuvio 5D). Aiempi tutkimus osoitti, että PD-L1-mRNA:n ilmentyminen liittyi pembrolitsumabihoidon tehokkuuteen [6]. Lisäksi LKB1:n ja PD−L1:n ilmentymisen perusteella GC-potilaat jaettiin LKB1 korkeaan ja matalaan PD−L1:n korkean ja alhaisen ilmentymisen alaryhmissä. Kuten kuvasta 5E näkyy, GC-potilailla, joilla oli korkea sekä LKB1:n että PD−L1:n ekspressio, oli korkein ORR. PD−L1/LKB1:n ilmentymisen ja molekyyliparametrien välinen korrelaatio GC-potilailla on koottu taulukkoon 4. Yhteenvetona LKB1 saattaa olla mahdollinen immuunijärjestelmän tarkistuspiste pembrolitsumabivasteen ennustamisessa GC-potilailla.

Taulukko 3. Objektiivinen mahasyöpäpotilaan vaste pembrolitsumabille.

Taulukko 4. LKB1/PD−L1-ekspression ja molekyyliparametrien välinen yhteys.

kuva 5. LKB1:n ilmentyminen ennustaa vastetta pembrolitsumabiin GC-potilailla. (A) Korkeat LKB1-ilmentymisen tasot liittyivät GC-potilaiden eloonjäämisajan pidentämiseen vuosina 2015–2019. (B) Kaplan−Meier-plotteri osoitti, että korkeat LKB1-tasot pidensivät GC-potilaiden eloonjäämisaikaa. (C) Pinottu palkki- ja vesiputouskaaviot osoittavat vastetta pembrolitsumabille ICB-kohortissa (n=43) LKB1-ilmentymisen perusteella. (Pearsonin χ2-testi). (D) Kaplan−Meier-käyrät etenemisvapaalle eloonjäämiselle (PFS) ja kokonaiseloonjäämiselle (OS) ICB-kohortissa (n=43) perustuen LKB1-ilmentymiseen. (E) Perustuen LKB1-mRNA-ilmentymiseen GC-potilaiden alaryhmissä, joilla oli korkea ja matala PD−L1-ilmentyminen, lämpökartta osoitti vastetta pembrolitsumabille ja molekyyliparametreille ICB-kohortissa (n=43). GS, genomillisesti stabiili; MSI-H, mikrosatelliitin epävakaus-korkea; EBV, EBV positiivinen; sinettirengassolu: mahalaukun sinettirengassolusyöpä; ORR, objektiivinen vastausprosentti; SD, vakaa sairaus; PR, osittainen vastaus; PD, etenevä sairaus; CR, täydellinen vastaus; M/D adeno, kohtalaisen erilaistunut adenokarsinooma; P/D-adeno, huonosti erilaistunut adenokarsinooma; W/D adeno, hyvin erilaistunut adenokarsinooma; Sekoitettu (W/D ja P/D), hyvin erilaistunut adenokarsinooma ja huonosti erilaistunut adenokarsinooma.

4. Keskustelu

GC on yleinen pahanlaatuinen sairaus, ja se on kolmanneksi yleisin syöpäkuolemien syy maailmanlaajuisesti [17,18]. Viime vuosikymmeninä GC:n terapeuttiset ja diagnostiset strategiat ovat parantuneet merkittävästi [19]. Tehokkaiden diagnostisten merkkiaineiden puutteen vuoksi potilaat kuitenkin usein diagnosoidaan aluksi pitkälle edenneessä vaiheessa, ja 5 vuoden eloonjäämisaste on<20% [25,26]. Therefore, there is an urgent need to explore tumor markers with favorable specificity and sensitivity for GC diagnosis. In this study, we first showed that LKB1 expression was decreased in GC serum. Compared with GC diagnostic biomarkers mainly used in clinical practice, including CEA, CA19−9, and a−1−fetoprotein (AFP), LKB1 showed the best specificity and sensitivity. Furthermore, LKB1 was associated with clinical features of GC patients, such as grade, invasion depth, TNM stage, UICC stage, and vital status. These results suggested that LKB1 serves as a tumor suppressor gene and suppresses GC progression.

cistanche-kasveja lisäävä immuunijärjestelmä

Napsauta tästä nähdäksesi Cistanche Enhance Immunity -tuotteet

【Kysy lisää】 Sähköposti:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

LKB1 tunnistettiin alun perin vuonna 1997, ja se tunnetaan myös nimellä STK11 [27]. LKB1 on tärkeä ihmisen kasvainsuppressorigeeni, ja ei-pienisoluista keuhkosyöpää (NSCLC) sairastavilla potilailla LKB1-mutaatioita tai genomisen menetystä esiintyy usein KRAS-muutosten kanssa. Tämä yhdistelmä johtaa erittäin aggressiiviseen fenotyyppiin ja alentuneeseen eloonjäämisasteeseen [28–30]. Suurin osa LKB1:tä koskevista raporteista on keskittynyt pääasiassa keuhkosyöpään, mutta vain vähän raportteja LKB1:n roolista GC:ssä. Edellinen tutkimus osoitti, että LKB1:n ilmentyminen saattaa liittyä huonoon ennusteeseen GC-potilailla [31]; ei kuitenkaan ole varmistettu, toimiiko LKB1 potentiaalisena diagnostisena markkerina ja immunoterapeuttisena kohteena. Tutkimuksemme osoitti ensimmäistä kertaa, että LKB1:n alhainen ilmentyminen johti heikompaan terapeuttiseen vasteeseen pembrolitsumabille potilailla, joilla oli GC, mikä viittaa siihen, että LKB1 saattaa olla mahdollinen immunoterapeuttinen kohde.

cistanche tubulosa - parantaa immuunijärjestelmää

Viime aikoina immunoterapia on osoittanut suuria etuja GC:n kliinisessä hoidossa [32,33]. PD−1/PD−L1-salpaus on noussut uudeksi ja lupaavaksi terapeuttiseksi strategiaksi [34], joka korostaa kasvainten vastaisen immuniteetin merkitystä ja normalisoi sytotoksisten T-lymfosyyttien (CTL:t, CD8+) toimintahäiriötä syövissä [35] . Useissa syövissä CTL-infiltraatio säätelee kasvaimen regressiota ja sitä pidetään positiivisena prognostisena indikaattorina [36]. Tutkimukset ovat kuitenkin osoittaneet, että CTL:n toimintahäiriö infiltraatiossa johtaa immuunijärjestelmän kiertämiseen ja lopulta epäonnistumiseen hyökätä syöpäsoluihin [37]. PD-1/PD-L1-salpauksen osoitettiin eliminoivan vakiintuneita kasvaimia dysfunktionaalisen CTL:n avulla, joka elvyttää kasvainten vastaista immuniteettia [38]. Osoitimme, että PD-1/PD-L1 ilmentyi voimakkaasti LKB1:tä runsaasti ekspressoivissa GC-potilaiden alaryhmissä, mikä viittaa siihen, että LKB1 saattaa liittyä T-solujen immuunitarkistuspisteisiin. Lisäksi IFN− on sytokiini, joka estää viruksen replikaatiota ja tehostaa CD8+T-solujen vapauttamien spesifisten antigeenien esiintymistä [39]. Lisäksi havaitsimme, että T-soluaktivaatio- ja antigeenin esittelygeenit ilmenivät myös voimakkaasti GC-potilaiden alaryhmissä, joissa LKB1-ekspressio oli korkea, ja T (CD3+CD8+LKB1+, CD3+CD8+CD28+LKB1+) -soluilla oli positiivinen korrelaatio IFN-ekspression kanssa GC-potilaiden tuoreissa kudoksissa. Näin ollen päätimme, että LKB1 saattaa haitata T-solujen (CD3+CD8+, CD3+CD8+CD28+) eritystä ja se liittyy positiivisesti anti- −kasvain IFN− ilmentyminen. Taustalla oleva mekanismi, jolla LKB1 liittyy sytotoksiseen T-soluaktivaatioon, vaatii lisätutkimuksia.

Viitteet

1. Lyypekki, EG; Curtius, K.; Jeon, J.; Hazelton, WD Kasvaimen etenemisen vaikutus syövän ilmaantuvuuskäyriin. Cancer Res. 2013, 73, 1086–1096. [CrossRef] [PubMed]

2. Li, Y.; Hän, X.; Fan, L.; Zhang, X.; Xu, Y.; Xu, X. Uuden immuuniprognostisen mallin tunnistaminen mahasyövässä. Clin. Käännös Oncol. 2021, 23, 846–855. [CrossRef] [PubMed]

3. Lutz, MP; Zalcberg, JR; Ducreux, M.; Ajani, JA; Allum, W.; Aust, D.; Bang, YJ; Cascinu, S.; Holscher, A.; Jankowski, J.; et ai. EORTC St. Gallenin kansainvälisen asiantuntijakonsensuksen kohokohdat mahalaukun, ruokatorven ja ruokatorven syövän ensisijaisesta hoidosta – Erotetut hoitostrategiat varhaisen gastroesofageaalisen syövän alatyypeille. euroa J. Cancer 2012, 48, 2941–2953. [CrossRef] [PubMed]

4. Thomassen, I.; van Gestel, YR; van Ramshorst, B.; Luyer, MD; Bosscha, K.; Nienhuijs, SW; Lemmens, VE; de Hingh, IH Mahaperäinen vatsakalvon karsinomatoosi: väestöpohjainen tutkimus ilmaantumisesta, eloonjäämisestä ja riskitekijöistä. Int. J. Cancer 2014, 134, 622–628. [CrossRef]

5. Kahraman, S.; Yalcin, S. Viimeaikaiset edistysaskeleet HER-2 positiivisen pitkälle edenneen mahasyövän systeemisissä hoidoissa. OncoTargets Ther. 2021, 14, 4149–4162. [CrossRef]

6. Kono, K.; Nakajima, S.; Mimura, K. Immuunitarkistuspisteen estäjien nykytila ​​mahasyöpään. Mahasyöpä 2020, 23, 565–578. [CrossRef]

7. Lordick, F.; Shitara, K.; Janjigian, YY Uusia tekijöitä näköpiirissä mahasyövän hoidossa. Ann. Oncol. 2017, 28, 1767–1775. [CrossRef]

8. Zhang, Y.; Meng, Q.; Sun, Q.; Xu, ZX; Zhou, H.; Wang, Y. LKB1-puutoksen aiheuttama metabolinen uudelleenohjelmointi tuumorigeneesissä ja ei-neoplastisissa sairauksissa. Mol. Metab. 2021, 44, 101131. [CrossRef]

9. Kottakis, F.; Nicolay, BN; Roumane, A.; Karnik, R.; Gu, H.; Nagle, JM; Boukhali, M.; Hayward, MC; Li, YY; Chen, T.; et ai. LKB1-häviö yhdistää seriinimetabolian DNA-metylaatioon ja tuumorigeneesiin. Luonto 2016, 539, 390–395. [CrossRef]

10. Su, KH; Dai, S.; Tang, Z.; Xu, M.; Dai, C. Heat Shock Factor 1 on AMP-aktivoidun proteiinikinaasin suora antagonisti. Mol. Cell 2019, 76, 546–561.e8. [CrossRef]

11. Olvedy, M.; Tisserand, JC; Luciani, F.; Boeckx, B.; Wouters, J.; Lopez, S.; Rambow, F.; Aibar, S.; Thienpont, B.; Barra, J.; et ai. Vertaileva onkogenomiikka tunnistaa tyrosiinikinaasin FES:n kasvaimen suppressoriksi melanoomassa. J. Clin. Tutki. 2017, 127, 2310–2325. [CrossRef]

12. Hollstein, PE; Eichner, LJ; Brun, SN; Kamireddy, A.; Svensson, RU; Vera, LI; Ross, DS; Rymoff, TJ; Hutchins, A.; Galvez, HM; et ai. AMPK:hen liittyvät kinaasit SIK1 ja SIK3 välittävät LKB1:n avainkasvaimen suppressiivisia vaikutuksia NSCLC:ssä. Cancer Discov. 2019, 9, 1606–1627. [CrossRef]

13. Svensson, RU; Parker, SJ; Eichner, LJ; Kolar, MJ; Wallace, M.; Brun, SN; Lombardo, PS; Van Nostrand, JL; Hutchins, A.; Vera, L.; et ai. Asetyyli-CoA-karboksylaasin esto estää rasvahapposynteesiä ja ei-pienisoluisen keuhkosyövän kasvaimen kasvua prekliinisissä malleissa. Nat. Med. 2016, 22, 1108–1119. [CrossRef]

14. Zeng, Q.; Chen, J.; Li, Y.; Werle, KD; Zhao, RX; Quan, CS; Wang, YS; Zhai, YX; Wang, JW; Youssef, M.; et ai. LKB1 estää HPV:hen liittyvän syövän etenemistä kohdentamalla solujen metaboliaa. Oncogene 2017, 36, 1245–1255. [CrossRef]

15. Poffenberger, MC; Metcalfe-Roach, A.; Aguilar, E.; Chen, J.; Hsu, BE; Wong, AH; Johnson, RM; Flynn, B.; Samborska, B.; Ma, EH; et ai. LKB1-puutos T-soluissa edistää maha-suolikanavan polypoosin kehittymistä. Tiede 2018, 361, 406–411. [CrossRef]

16. Ollila, S.; Domenech-Moreno, E.; Laajanen, K.; Wong, IP; Tripathi, S.; Pentinmikko, N.; Gao, Y.; Yan, Y.; Niemela, EH; Wang, TC; et ai. Stroman Lkb1-puutos johtaa maha-suolikanavan kasvainten muodostumiseen, johon liittyy IL-11-JAK/STAT3-reitti. J. Clin. Tutki. 2018, 128, 402–414. [CrossRef]

17. Sung, H.; Ferlay, J.; Siegel, RL; Laversanne, M.; Soerjomataram, I.; Jemal, A.; Bray, F. Globaalit syöpätilastot 2020: GLOBOCAN-arviot maailmanlaajuisesta ilmaantumisesta ja kuolleisuudesta 36 syövälle 185 maassa. CA Cancer J. Clin. 2021, 71, 209–249. [CrossRef]

18. Pons-Tostivint, E.; Lugat, A.; Fontana, JF; Denis, MG; Bennouna, J. STK11/LKB1 Immuunivasteen modulaatio keuhkosyövässä: Biologiasta terapeuttiseen vaikutukseen. Solut 2021, 10, 3129. [CrossRef]

19. Koyama, S.; Akbay, EA; Li, YY; Aref, AR; Skoulidis, F.; Herter-Sprie, GS; Buczkowski, KA; Liu, Y.; Awad, MM; Denning, WL; et ai. STK11/LKB1-puutos edistää neutrofiilien lisääntymistä ja tulehdusta edistävien sytokiinien tuotantoa estämään T-solujen aktiivisuutta keuhkokasvainten mikroympäristössä. Cancer Res. 2016, 76, 999–1008. [CrossRef]

20. Janjigian, YY; Maron, SB; Chatila, WK; Millang, B.; Chavan, SS; Alterman, C.; Chou, JF; Segal, MF; Simmons, MZ; Momtaz, P.; et ai. Ensilinjan pembrolitsumabi ja trastutsumabi HER2-positiivisessa ruokatorven, mahalaukun tai gastroesofageaalisen liitossyövän hoidossa: Avoin, yksihaarainen, vaiheen 2 tutkimus. Lancet Oncol. 2020, 21, 821–831. [CrossRef]

21. Picard, E.; Verschoor, CP; Ma, GW; Pawelec, G. Immuunimaisemien, geneettisten alatyyppien ja vasteiden immuunihoitoon väliset suhteet kolorektaalisyövässä. Edessä. Immunol. 2020, 11, 369. [CrossRef] [PubMed]

22. Kim, ST; Cristescu, R.; Basso, AJ; Kim, KM; Odegaard, JI; Kim, K.; Liu, XQ; Sher, X.; Jung, H.; Lee, M.; et ai. Kattava molekulaarinen karakterisointi kliinisistä vasteista PD-1-estoon metastaattisessa mahasyövässä. Nat. Med. 2018, 24, 1449–1458. [CrossRef] [PubMed]

23. Savas, P.; Virassamy, B.; Joo, C.; Salim, A.; Mintoff, CP; Caramia, F.; Salgado, R.; Byrne, DJ; Teo, ZL; Dushyanthen, S.; et ai. Rintasyövän T-solujen yksisoluinen profilointi paljastaa kudoksessa asuvan muistin alajoukon, joka liittyy parantuneeseen ennusteeseen. Nat. Med. 2018, 24, 986–993. [CrossRef] [PubMed]

24. Brewitz, A.; Eickhoff, S.; Dahling, S.; Quast, T.; Bedoui, S.; Kroczek, RA; Kurts, C.; Garbi, N.; Barchet, W.; Iannakone, M.; et ai. CD8(+) T-solut järjestävät pDC-XCR1(+) dendriittisolujen spatiaalisen ja funktionaalisen yhteistoiminnan esikäsittelyn optimoimiseksi. Immunity 2017, 46, 205–219. [CrossRef]

25. Kinoshita, J.; Yamaguchi, T.; Moriyama, H.; Fushida, S. Vaiheen IV mahasyövän muunnosleikkauksen nykytila. Surg. Tänään 2021, 51, 1736–1754. [CrossRef]

26. Du, Y.; Wei, Y. Luonnollisten tappajasolujen terapeuttinen potentiaali mahasyövässä. Edessä. Immunol. 2018, 9, 3095. [CrossRef]

27. Zhao, RX; Xu, ZX Kohdistus LKB1-kasvainsuppressoriin. Curr. Drug Targets 2014, 15, 32–52. [CrossRef]

28. Skoulidis, F.; Goldberg, ME; Greenawalt, DM; Hellmann, MD; Awad, MM; Gainor, JF; Schrock, AB; Hartmaier, RJ; Trabucco, SE; Gay, L.; et ai. STK11/LKB1-mutaatiot ja PD-1-inhibiittoriresistenssi KRAS-mutanttikeuhkojen adenokarsinoomassa. Cancer Discov. 2018, 8, 822–835. [CrossRef]

29. Kim, J.; Lee, HM; Cai, F.; Ko, B.; Yang, C.; Lieu, EL; Muhammad, N.; Rhyne, S.; Li, K.; Haloul, M.; et ai. Heksosamiinin biosynteesireitti on kohdistettavissa oleva vastuu KRAS/LKB1-mutanttikeuhkosyövässä. Nat. Metab. 2020, 2, 1401–1412. [CrossRef]

30. Kitajima, S.; Tani, T.; Springer, BF; Campisi, M.; Osaki, T.; Haratani, K.; Chen, M.; Knelson, EH; Mahadevan, NR; Ritter, J.; et ai. MPS1:n esto käynnistää KRAS-LKB1-mutanttikeuhkosyövän immunogeenisyyden. Cancer Cell 2022, 40, 1128–1144e1128. [CrossRef]

31. Hu, M.; Zhao, T.; Liu, J.; Zou, Z.; Xu, Q.; Gong, P.; Guo, H. LKB1:n vähentynyt ilmentyminen liittyy epiteeli-mesenkymaaliseen siirtymiseen ja johti epäsuotuisaan mahasyövän ennusteeseen. Hyräillä. Pathol. 2019, 83, 133–139. [CrossRef]

32. Hogner, A.; Moehler, M. Immunotherapy in Gastric Cancer. Curr. Oncol. 2022, 29, 1559–1574. [CrossRef]

33. Kole, C.; Charalampakis, N.; Tsakatikas, S.; Kouris, NI; Papaxoinis, G.; Karamouzis, MV; Koumarianou, A.; Schizas, D. Immunoterapia mahasyövälle: vuoden 2021 päivitys. Immunoterapia 2022, 14, 41–64. [CrossRef]

34. Oliva, S.; Troia, R.; D'Agostino, M.; Boccadoro, M.; Gay, F. Lupaukset ja sudenkuopat PD-1/PD-L1-estäjien käytössä multippeli myeloomassa. Edessä. Immunol. 2018, 9, 2749. [CrossRef]

35. Farhood, B.; Najafi, M.; Mortezaee, K. CD8 (+) sytotoksiset T-lymfosyytit syövän immunoterapiassa: Katsaus. J. Cell. Physiol. 2019, 234, 8509–8521. [CrossRef]

36. Kalathil, SG; Thanavala, Y. Luonnolliset tappajasolut ja T-solut hepatosellulaarisessa karsinoomassa ja virushepatiitissa: nykyinen tila ja tulevaisuuden immunoterapeuttisten lähestymistapojen näkymät. Cells 2021, 10, 1332. [CrossRef]

37. Zhang, H.; Jiang, R.; Zhou, J.; Wang, J.; Xu, Y.; Zhang, H.; Gu, Y.; Fu, F.; Shen, Y.; Zhang, G.; et ai. PS1 säätelee CTL-vaimennusta syöpään liittyvissä fibroblasteissa. Edessä. Immunol. 2020, 11, 999. [CrossRef]

38. Xiao, M.; Xie, L.; Cao, G.; Lei, S.; Wang, P.; Wei, Z.; Luo, Y.; Fang, J.; Yang, X.; Huang, Q.; et ai. CD4(+)-T-soluepitooppipohjainen heterologinen prime-boost-rokote tehostaa kasvaintenvastaista immuniteettia ja PD-1/PD-L1-immunoterapiaa. J. Immunother. Syöpä 2022, 10, e004022. [CrossRef]

39. Wang, W.; Green, M.; Choi, JE; Gijón, M.; Kennedy, PD; Johnson, JK; Liao, P.; Lang, X.; Kryczek, I.; Myy, A.; et ai. CD8+ T-solut säätelevät kasvaimen ferroptoosia syövän immunoterapian aikana. Luonto 2019, 569, 270–274. [CrossRef]