Party1: Sri Lankassa viljeltyjen sormihirssin (Eleusine Coracana (L.) Gaertn.) lajikkeiden anti-inflammatoriset ja antioksidanttiset ominaisuudet

Lisätietoja: ottaa yhteyttätina.xiang@wecistanche.com

Tulehdusvälitteisten ja oksidatiiviseen stressiin liittyvien sairauksien esiintyvyys lisääntyy maailmanlaajuisesti, mikä luo kasvavaa kysyntää uusilletulehdusta ehkäiseväagentit jaantioksidantteja. Tämä tutkimus keskittyi Ravin, Rawanan arakidonaatti-{0}}lipoksigenaasin (A5-LOX), ksantiinioksidaasin (XO), hyaluronidaasin, oksidatiivisia purskeen estäviä aktiivisuuksia ja antioksidanttiominaisuuksien määrittämiseen in vitro. , ja Oshadha sormihirssilajikkeet, joissa käytetään etanoli- ja metanoliuutteita. Kaikista uutteista Oshadhan metanoliuutte osoitti korkeimman A5-LOX (ICsvalue∶ 484,42 ug/ml) ja XO (ICsvalue∶764,34 ug/ml) estoaktiivisuuden. Kaikki uutteet osoittivat alle 50 prosenttia hyaluronidaasia inhiboivaa aktiivisuutta pitoisuudella 1 mg/ml. Metanoliuutteet osoittivat kohtalaista estopotentiaalia kokoveren fagosyyteistä syntyneille reaktiivisille happilajeille (ROS) IC-arvojen 0vaihteluilla 26,9 - 27,7 ug/ml verrattuna ibuprofeeniin (IC-arvo: 11,18 ug/ml). Kaikki uutteet osoittivat ihmisen verestä eristetyistä polymorfonukleaarisista neutrofiileistä tuotetun ROS:n voimakasta estoa verrattuna ibuprofeeniin (ICs-arvo: 2,47 ug/ml) ja metanoli- ja etanoliuutteiden IC-arvot vaihtelivat välillä 0,29-0,47 ug/ml ja 1,35 ug/ml ja 1,70 ug/ml. vastaavasti. Kaikissa uutteissa oli merkittävästi suuria määriä fenoliyhdisteitä, mukaan lukienflavonoiditja mahdollisuus poistaa 2,2'-atsino-bis(3-etyylibentsotiatsoliini-6-sulfoni)happo (ABTS)kationi,2,2-difenyyli-1-pikryylihydratsyyli( DPPH) ja happiradikaaleja. Lisäksi ne pystyivät pelkistämään metalli-ioneja ja kelaatoimaan metalli-ioneja, jotka päättivät radikaaleja synnyttävät reaktiot. Tämä on ensimmäinen raportti minkä tahansa Sri Lankassa viljellyn sormihirssiuutteen A5-LOX:n, XO:n, hyaluronidaasin ja oksidatiivisen purskeen estoominaisuuksista. Löydökset paljastivat potentiaalin käyttää näitä sormihirssiuutteita tulehdusta ehkäisevien lääkkeiden luonnollisina lähteinä. Lisäksi havainnot osoittivat, että Ravi-, Rawana- ja Oshadha-lajikkeet ovat hyviä antioksidanttien lähteitä. Siksi näiden sormihirssilajikkeiden säännöllisellä kulutuksella voi olla tärkeä rooli oksidatiiviseen stressiin liittyvien sairauksien ehkäisyssä ja ruokavaliohoidossa.

Napsauta tätä saadaksesi lisätietoja tuotteista

1. Esittely

Tulehduson puolustava reaktioimmuunijärjestelmä haitallisten ärsykkeiden, kuten patogeenien, vaurioituneiden solujen ja allergisten tai kemiallisten ärsytysten poistamiseksi sekä paranemisprosessin aloittamiseksi. Vaikka tulehdus on normaali vaste, jos sitä ei hallita, liiallinen tulehdus johtaa moniin akuutteihin ja kroonisiin sairauksiin. Tällä hetkellä tulehdusvälitteisten sairauksien esiintyvyys kasvaa maailmanlaajuisesti, mikä luo kasvavaa kysyntää uusille ja tehokkaille tulehduskipulääkkeille [1, 2].

Arakidonaatti5-lipoksigenaasi(A5-LOX) on keskeinen entsyymi, joka osallistuu tulehdussairauksien ja allergisten reaktioiden tehokkaiden välittäjien biosynteesiin. Se katalysoi leukotrieenien muodostumista arakidonihaposta [3]. Leukotrieenit ovat endogeenisiä välittäjiä useiden tulehdussairauksien, kuten astman, allergisen nuhan, kroonisen keuhkoputkentulehduksen, nivelreuman, tulehduksellisen suolistosairauden ja allergisten reaktioiden, patogeneesissä [3,4]. Siksi A5-LOX:n estäminen on tärkeää erilaisten tulehdussairauksien ehkäisyssä ja hoidossa.

Ksantiinioksidaasi (XO) katalysoi hypoksantiinin hapettumista ksantiiniksi ja ksantiinin hapettumista virtsahapoksi[5]. XO-estäjät estävät virtsahapon biosynteesin ja vähentävät siten virtsahapon määrää sekä verisuonten oksidatiivista stressiä. XO:n katalyyttisen toiminnan aikana muodostuu reaktiivisia happilajeja (ROS), ja siksi XO:lla on patogeneettinen rooli myös muissa tulehdussairauksissa. Näin ollen XO-estäjät ovat tärkeitä hoidettaessa erilaisia ​​tulehdussairauksia, joihin liittyy XO:n katalyyttinen vaikutus [2,5].

Hyaluronidaasi on lysosomaalinen entsyymi, joka katalysoi mukopolysakkaridien, kuten hyaluronihapon, hydrolyysiä. Nivelreumassa hyaluronidaasi hajottaa liikaa hyaluronihappoa ja vähentää sen määrää ja molekyylipainoa aiheuttaen niveltulehduksia [6]. Hyaluronihapon hajoamisen estäminen on kriittistä ja välttämätöntä hyaluronidaasivälitteisten patologisten tilojen hallinnassa[7].

Tulehduksellisissa olosuhteissa immuunisolut houkuttelevat tulehduskohtaa. Puolustus- ja immunologisten reaktioiden aikana immuunisoluissa asuvat NADPH-oksidaasit aktivoituvat ja tuottavat suuria määriä ROS:ää luoden oksidatiivisen purskeen [1, 8]. Pienet ja kohtalaiset ROS-määrät ovat hyödyllisiä erilaisissa fysiologisissa prosesseissa. ROS:n ylituotanto kuitenkin vapauttaa solujen toiminnan säätelyn, mikä puolestaan ​​lisää tulehdustilaa [8,9]. Siksi ROS-indusoidun oksidatiivisen purskeen estäminen on mahdollinen parannuskeino tulehduksellisten sairauksien ehkäisemisessä ja hallinnassa.

Oksidatiivisen fosforylaation aikanavapaat radikaalitROS mukaan lukien muodostuvat sivutuotteina [10]. Normaalin soluaineenvaihdunnan lisäksi on monia muita tekijöitä, jotka johtavat vapaiden radikaalien muodostumiseen, ja jos vapaiden radikaalien muodostumisnopeus ylittää neutraloitumisnopeuden, oksidatiivinen stressi syntyy, ja se vaikuttaa merkittävästi kaikkiin tulehdussairauksiin. Koska antioksidantit pystyvät estämään vapaiden radikaalien muodostumista ja sammuttamaan vapaita radikaaleja, tasapaino antioksidanttien ja vapaiden radikaalien välillä on välttämätöntä fysiologisten toimintojen ylläpitämiseksi kunnolla [8, 11, 12].

Sormihirssi (Eleusine coracana(L.)Gaertn.) on tärkein pieni hirssi tropiikissa, ja useita sormihirssin terapeuttisia ominaisuuksia on raportoitu aiemmin [13-17]. Sri Lankassa tällä hetkellä viljeltävien ja kulutettavien sormihirsilajikkeiden terapeuttisista ominaisuuksista ei kuitenkaan ole tieteellistä näyttöä.

ja mahdollisia terveyshyötyjä kuluttajille. Siksi on välttämätöntä tutkia Sri Lankalaisten sormihirssilajikkeiden anti-inflammatorisia ja antioksidanttisia ominaisuuksia ja tunnistaa niiden mahdollisuudet parantaa kuluttajien ravitsemus- ja terveydentilaa. Tulehdusvälitteisten ja oksidatiiviseen stressiin liittyvien sairauksien esiintyvyys lisääntyy maailmanlaajuisesti, mikä luo kysyntää uusille anti-inflammatoristen aineiden ja antioksidanttien lähteille[1, 2]. Tätä taustaa vasten tässä tutkimuksessa keskityttiin arvioimaan Sri Lankan sormihirssilajikkeiden in vitro anti-inflammatorisia ominaisuuksia A5-LOX-, XO-, hyaluronidaasin, oksidatiivisen purskeen estoaktiivisuuden ja antioksidanttiominaisuuksien suhteen käyttämällä erilaisia ​​antioksidanttimäärityksiä. .

2. Materiaalit ja metodit

2.1. Näytteenotto ja valmistelu. Sormihirssilajikkeet, joita maatalousministeriö suosittelee viljelyyn Sri Lankassa, nimittäin Ravi, Rawana ja Oshadha, kerättiin Field Crops Research and Development Institutesta (FCRDI), Mahailuppallama, Sri Lanka. Näitä lajikkeita viljeltiin koepalstoilla Low Country Dry Zonessa, FCRDI:ssä, Mahailuppallamassa, ja siemenet olivat Sri Lankan maatalousministeriön siementen sertifiointipalvelun sertifioimia.

Sormihirssin siemenet kuorittiin (TM 05C, Satake Cor-poration, Japani), ja jauhot täysjyväviljasta saatiin jauhamalla (Pulverisette 14, Fritsch, Saksa) ja johtamalla se 0,5 mm:n seulan läpi. Täysjyväjauhot uutettiin etanolilla ja metanolilla erikseen. Täysjyväjauhoja (100 g) uutettiin liuottimella (400 ml) yön yli huoneenlämpötilassa (28 ± 2 astetta) käyttämällä magneettisekoitinta ja sentrifugoitiin nopeudella 4000 rpm 20 minuuttia. Supernatantti kerättiin erikseen ja jäännös uutettiin uudelleen kahdesti samoissa olosuhteissa. Supernatantit yhdistettiin ja haihdutettiin kuiviin alennetussa paineessa 40 asteessa käyttämällä pyöröhaihdutinta (R-114, Büchi Labortechnik AG, Sveitsi). Liuotinvapaita uutteita säilytettiin ilmatiiviissä lasisäiliöissä -20 asteessa, kunnes niitä käytettiin analyysiin.

2.2. Entsyymit, kemikaalit ja laitteet. Folin-Ciocalteu-fenolireagenssi, alumiinikloridi, 2,4,6-tri(2-pyridyyli)-s-triatsiini (TPTZ), 2,2'-atsobis(2-amidinopropaani)dihydrokloridi (AAPH),2,2-difenyyli-1-pikryylihydratsyyli (DPPH), kversetiini, 6-hydroksi-2,5,7,8-tetrametyylikromaani{{19} }karboksyylihappo (Trolox), etyleenidiamiinitetraetikkahappo (EDTA), 2,2'-atsinobis(3-etyylibentsotiatsoliini-6-sulfonihappo) diammoniumsuola (ABTS), fluoreseiini, 3-( 2-Pyridyyli)-5,6-difenyyli-1,2,4-triatsiini-p,pdisulfonihapon mononatriumsuola

hydraatti(ferrotsiini), arakidonaatti5-lipoksigenaasi, linolihappo, baicaleiini, ksantiinioksidaasi, ksantiini, allopurinoli, hyaluronidaasi, hyaluronihapon natriumsuola, p-dimetyyliaminobentsaldehydi, gallushappo, tanniinihappo, dimetyylisulfoksidi ja ostettiin ibuprofeenilta Sigma-Aldrich, MO, Yhdysvallat. HBS* plus ja HBSS ostettiin Thermo Fisher Sci-entific Inc:ltä, Massachusetts, USA. Zymosan ostettiin yhtiöltä Wako Pure Chemical Industries Ltd., Osaka, Japani.

Luminol (3-aminoftaalihydratsidi) ostettiin Alfa Aesar GmbH & Co KG:ltä, Karlsruhe, Saksa. Lymfosyyttien erotuselatusaine ostettiin MP Biomedicals, Inc:ltä, Ohio, USA. Kaikki muut kokeissa käytetyt kemikaalit ja reagenssit olivat ACS-, HPLC- ja analyyttisiä laatuja. Happiradikaalin absorbanssikapasiteetin määrittämiseksi käytettiin fluoresenssimikrolevylukijaa (SpectraMax-Gemini EM, Molec-ular Devices Inc., USA). Kemiluminesenssimäärityksiin käytettiin luminometriä (Luminoskan RS, Labsystems, Suomi). Kaikissa muissa biomäärityksissä käytettiin mikrolevylukijaa (Spectra-Max Plus384, Molecular Devices Inc, USA).

2.3.Fenolin kokonaispitoisuuden määrittäminen. Kokonaisfenolipitoisuus (TPC) määritettiin Folin-Ciocalteun menetelmällä 【18】. Sormihirssiuute (20ul) sekoitettiin 110 ul:aan juuri valmistettua 10 kertaa laimennettua Folin-Ciocalteu-reagenssia ja 70 ul:aan natriumkarbonaattiliuosta (10 % w/v) ja inkuboitiin huoneenlämpötilassa (RT) 30 minuuttia. Absorbanssi mitattiin aallonpituudella 765 nm. Gallihappoa käytettiin piirtämään standardikäyrä (y=0.0532x plus 0.0339;r=0.9992), ja TPC laskettiin mg gallushappoekvivalentteina (GAE) per 100 g jauhoja kuivalla. painon perusteella.

2.4. Flavonoidin kokonaispitoisuuden määritys. Flavonoidin kokonaispitoisuus (TFC) määritettiin alumiinikloridikolorimetrisellä menetelmällä [19]. Sormihirssiuute (100 ul) sekoitettiin alumiinikloridiliuokseen (2 % w/v, 100 ul), inkuboitiin 10 minuuttia huoneenlämpötilassa ja absorbanssi mitattiin 415 nm:ssä. Standardikäyrän piirtämiseen käytettiin kvertsetiiniä (y=0.0349x-0.2091; r²=0.9974), ja TFC laskettiin mg:na kversetiiniekvivalenttia 100 g:aa jauhoja kohti kuivapainon perusteella.

2.5. DPPH:n radikaalinpoistoaktiivisuuden määrittäminen. Kyky puhdistaa DPPH-radikaaleja määritettiin Blois'n [20] kuvaaman menetelmän mukaisesti. Sormimilteluute (50 ul) sekoitettiin 90 ul:aan metanolia ja 60 ul:aan DPPH-liuosta (0,02 % w/v) ja inkuboitiin huoneenlämpötilassa pimeässä 10 minuuttia. Näytteen (As) ja kontrollin (Ac) absorbanssiarvot mitattiin aallonpituudella 517 nm. Troloxia käytettiin vakiona. DPPH-radikaaleja poistava aktiivisuus prosentuaalisena inhibitiona laskettiin käyttämällä yhtälöä (1). ICs-arvo laskettiin käyttämällä annos-vaste-kaavioita.

2.6. ABTS-kationin radikaalinpoistoaktiivisuuden määritys. Kyky puhdistaa ABTS-kationiradikaaleja määritettiin Re et al.:n kuvaaman menetelmän mukaisesti. [21] tietyin muutoksin. ABTS-kationiradikaaliliuos valmistettiin inkuboimalla 10 mg ABTS:ää 2,5 ml:ssa kaliumpersulfaattia 37 °C:ssa pimeässä 16 tuntia ja laimentamalla 7 kertaa 50 mM fosfaattipuskurisuolaliuoksella (pH 7,4). Sormihirssiuute (12,5 ul) sekoitettiin fosfaattipuskurisuolaliuoksen (147,5 ul) ja vasta valmistettuun ABTS-kationiradikaaliliuokseen (40 ul) ja inkuboitiin huoneenlämpötilassa pimeässä 10 minuuttia. Näytteen (As) ja kontrollin (Ac) absorbanssiarvot mitattiin aallonpituudella 734 nm. Troloxia käytettiin vakiona. ABTS-kationiradikaaleja poistava aktiivisuus prosentuaalisena inhibitiona laskettiin käyttämällä yhtälöä (2). ICs-arvo laskettiin käyttämällä annos-vaste-kaavioita.

2.7. Happiradikaalin absorbanssikapasiteetin (ORAC) määrittäminen. ORAC arvioitiin Ou et al:n kuvaaman menetelmän mukaisesti.[22] Fluoreskeiinin (4,8 uM) ja AAPH:n (40 mg/ml) liuokset valmistettiin 75 mM fosfaattipuskuriin (pH 7,4). Sormihirssiuutetta (10 ul) sekoitettiin 40 ul:aan fosfaattipuskuria ja 100 ul:aan fluoreseiinia ja inkuboitiin 37 asteessa 10 minuuttia. AAPH (50 ul) lisättiin, ja fluoreseiinin hajoaminen mitattiin viritys- ja emissioaallonpituuksilla 494 nm ja 535 nm, vastaavasti, 37 asteessa 35 minuutin ajan 1 minuutin välein käyttäen fluoresenssimikrolevylukijaa. Tro-loxia käytettiin vakiona. Näytteen (AUC), kontrollin (AUC) ja Trolox (AUC-) arvot käyrän alla (AUC) kirjattiin. ORAC-arvo laskettiin käyttämällä yhtälöä (3), jossa kons. tarkoittaa keskittymistä. Tulokset ilmaistiin mg Trolox-ekvivalentteina 100 g:aa jauhoja kohti kuivapainon perusteella.

2.8. Rauta-ionien kelatointiaktiivisuuden (FIC) määrittäminen. Kyky kelatoida rautaioneja määritettiin Carterin [23] kuvaaman menetelmän mukaisesti. Sormihirssiuute (100 ul) sekoitettiin 1 mM rautasulfaattiliuoksen (20 ul) ja 40 ul:n tislattua vettä kanssa. Sitten lisättiin 1 mM ferrotsiiniliuosta (40 ul) ja inkuboitiin 10 minuuttia huoneenlämpötilassa. Näytteen (As) ja kontrollin (Ac) absorbanssiarvot rekisteröitiin aallonpituudella 562 nm. Standardina käytettiin EDTA:ta. FIC-aktiivisuus kelatoitumisprosenttina laskettiin käyttämällä yhtälöä (4).

2.9. Ferric-pelkistävän antioksidanttivoiman (FRAP) määrittäminen. FRAP määritettiin Benzinen ja Szeton [24] kuvaaman menetelmän mukaisesti muutamin muutoksin. FRAP-reagenssi valmistettiin sekoittamalla 300 mM asetaattipuskuria (pH 3,6), 20 mM rautakloridia ja 10 mM TPTZ:tä suhteessa 10:1:1 ja inkuboimalla 37 °C:ssa 10 minuuttia. Sormihirssiuutetta (20 ul) sekoitettiin 30 ul:aan asetaattipuskuria ja 150 ul:aan juuri valmistettua FRAP-reagenssia, inkuboitiin huoneenlämpötilassa 8 minuuttia, ja absorbanssi rekisteröitiin aallonpituudella 600 nm. Standardikäyrän piirtämiseen käytettiin Troloxia (y=0,17x plus 0,15; 产=1,00), ja FRAP on laskenut mg Trolox-ekvivalentteina 100 grammaa jauhoja kuivapainon perusteella.

2.10.A5-LOX-inhibitioaktiivisuuden määrittäminen. A{{0}}LOX-inhiboiva aktiivisuus arvioitiin Tappelin [25] kuvaaman menetelmän mukaisesti muutamin modifioinnein. Sormihirssiuute (10ul) sekoitettiin 115 ul:aan 100 mM natriumfosfaattipuskuria (pH 8,0) ja 50 ul:aan A5-LOX-liuosta (5000 U/ml) ja inkuboitiin huoneenlämpötilassa 10 minuuttia. Reaktio aloitettiin lisäämällä 25 ui 0,08 mM linolihappoa. Absorbanssin muutos tallennettiin aallonpituudella 234 nm 1 minuutin välein 10 minuutin ajan huoneenlämpötilassa, ja näytteen (Vmaxs) ja kontrollin (Vmaxc) maksiminopeusarvot (Vmxk) tallennettiin. Standardina käytettiin bicaleiinia. A5-LOX-inhiboiva aktiivisuus prosentuaalisena iän estona laskettiin käyttämällä yhtälöä (5). ICs.-arvo laskettiin käyttämällä annos-vaste-kaavioita.

2.11.XO:ta estävän aktiivisuuden määrittäminen. XO:ta estävä aktiivisuus määritettiin menetelmällä, jonka ovat kuvanneet Lee et ai. [26] tietyin muutoksin. Sormihirssiuute (10ul) sekoitettiin 150ul:aan 50 mM natriumfosfaattipuskuria (pH 7,4) ja 20 ul:aan XO:ta (0,15 U/ml) ja inkuboitiin 10 minuuttia huoneenlämpötilassa. Reaktio aloitettiin lisäämällä 20 ui 0,1 mM ksantiinia. Absorbanssin muutos tallennettiin 295 nm:ssä min välein 15 minuutin ajan huoneenlämpötilassa, ja näytteen (Vmaxs) ja kontrollin (Vmaxc) Vmax-arvot rekisteröitiin. Standardina käytettiin allopurinolia. XO:ta estävä aktiivisuus prosentuaalisena inhibitiona laskettiin käyttämällä yhtälöä (6). ICs-arvo laskettiin käyttämällä annos-vaste-kaavioita.

2.12. Hyaluronidaasia estävän aktiivisuuden määrittäminen. Hyaluronidaasia inhiboiva aktiivisuus arvioitiin Sahasrabudhen ja Dedharin [27] kuvaaman menetelmän mukaisesti tietyin muutoksin. Sormihirssiuutetta (50ul) sekoitettiin 10ul:aan hyaluronidaasia (8400 U/ml) ja inkuboitiin 37 asteessa 10 minuuttia. Entsyymi aktivoitiin lisäämällä 20 ui kalsiumkloridia (12,5 mM) ja inkuboimalla 37 asteessa 10 minuuttia. Reaktio aloitettiin lisäämällä natriumhyaluronaattia (50 ul) ja inkuboitiin 37 °C:ssa 40 minuuttia. Sitten lisättiin 10 ui 0,9 M natriumhydroksidia ja 20 ul 0,2 M natriumboraattia ja inkuboitiin 100 asteessa 3 minuuttia. Huoneenlämpötilaan jäähdyttämisen jälkeen lisättiin 50 ui 67 mM p-dimetyyliaminobentsaldehydiä ja inkuboitiin 37 asteessa 10 minuuttia. Näytteen (As) ja kontrollin (Ac) absorbanssiarvot mitattiin aallonpituudella 585 nm. Standardina käytettiin tanniinihappoa. Hyaluronidaasia estävä aktiivisuus prosentuaalisena inhibitiona laskettiin käyttämällä yhtälöä (7).

2.13.Oksidatiivisen purskeen estoaktiivisuuden määrittäminen. Anti-inflammatoriset potentiaalit oksidatiivisen purskeen estoaktiivisuuksien suhteen ihmisen kokoveressä ja eristetyissä polymorfonukleaarisissa neutrofiileissä määritettiin käyttämällä luminolilla tehostettua kemiluminesenssimääritystä [28, 29] joissakin muutoksissa. Kokeet suoritettiin tohtori Panjwanin molekyylilääketieteen ja lääketutkimuksen keskuksessa, kansainvälisessä kemian ja biologian tieteiden keskuksessa, Karachin yliopistossa Pakistanissa, ja instituutilla on riippumattoman eettisen komitean ICCBS:n myöntämä eettinen lupa ihmisveren tutkimuksille. . No:ICCB-S/IEC-008-BC-2015/Protocol/1.{7}}.

2.13.1. Oksidatiivisen purkausta estävän aktiivisuuden määrittäminen koko ihmisveressä. Ihmisveri (1 ml) kerättiin aseptisesti laskimopunktiolla heparinisoituun putkeen terveeltä tupakoimattomalta vapaaehtoiselta, joka ei käyttänyt mitään lääkkeitä tai lisäravinteita yli viikkoon, ja laimennettiin (1:20 laimennus) HBS:llä plus *(Hanks Balanced) kalsiumia ja magnesiumia sisältävä suolaliuos). Sormihirssiuutetta (25 ul) sekoitettiin laimennettuun kokovereen (25 ul) ja inkuboitiin 37 °C:ssa 15 minuuttia. Sitten lisättiin 25 ui seerumin opsonoitua tsymosaania ja 25 ui luminolia. Oksidatiivisen purskeen ROS-tuotantoa seurattiin 50 minuutin ajan luminometrillä toistuvilla skannauksilla 30 sekunnin välein ja 1 s:n pisteen mittausajalla. Ibuprofeenia käytettiin vakiolääkkeenä. Estoprosentti laskettiin käyttämällä yhtälöä (8).

jossa RLU on luminometrin lukema suhteellisissa valoyksiköissä (RLU) ohjausta varten ja RLU on luminometrin lukema RLU:na näytteelle. ICs-arvo laskettiin käyttämällä annos-vaste-kaavioita.

2.13.2. Oksidatiivisen purskeen estävän aktiivisuuden määritys eristetyissä polymorfonukleaarisissa neutrofiileissä. Ihmisen kokoverta (10 ml) sekoitettiin yhtä suureen tilavuuteen HBSS:ää (Hanks Balanced Salt Solution, ilman kalsiumia ja magnesiumia) ja lymfosyyttien erotusalustaa (LSM) ja erytrosyyttien annettiin asettua 30 minuutin ajan huoneenlämpötilassa. Sitten plasma asetettiin varovasti LSM:lle ja sentrifugoitiin 400 x g 20 minuuttia huoneenlämpötilassa. Supernatantti poistettiin; saadun pelletin punasolut hajotettiin sekoittamalla kylmään deionisoituun veteen, sekoitettiin kylmän HBSS7:n kanssa ja sentrifugoitiin 300 x g 10 minuuttia 4 asteessa. Pelletti pestiin kahdesti ja saatujen polymorfonukleaaristen neutrofiilien elinkelpoisuus tarkastettiin käyttämällä Trypaaninsinistä poissulkemismenetelmää. Solujen konsentraatio säädettiin arvoon 1 x 10 astetta solua/ml. Eristetyt polymorfonukleaariset neutrofiilit (25 αl) sekoitettiin sormihirssiuutteen (25 ul) kanssa ja inkuboitiin 15 minuuttia 37 asteessa. Sitten lisättiin 25 ui seerumin opsonoitua tsymosaania ja 25 ui luminolia, ja oksidatiivisen purskeen ROS-tuotantoa tarkkailtiin 50 minuutin ajan käyttämällä luminometriä toistuvin skannauksin 30 sekunnin välein ja 1 s pisteen mittausaika. Ibuprofeenia käytettiin vakiolääkkeenä. Estoprosentti laskettiin käyttämällä yhtälöä (8).

2.14. Tilastollinen analyysi. Kunkin kokeen tiedot analysoitiin tilastollisesti käyttämällä IBM SPSS Statistics (versio 20) -ohjelmistoa ja tulokset ilmaistiin keskiarvo±standardivirheenä (SE). Tilastollinen merkitsevyys asetettiin 95 prosentin luottamustasolle. Yksisuuntaista varianssianalyysiä (ANOVA) ja Tukeyn testiä käytettiin määrittämään erot lajikkeiden ja uutteiden välillä. Korrelaatioanalyysissä käytettiin Pearsonin korrelaatiokerrointa.

Tulehduksen luokitus

Akuutti tulehdus: pääasiassa punoitusta, turvotusta, kipua jne., eli tulehdus, joka koostuu pääasiassa verisuonijärjestelmän reaktiosta.

Krooninen tulehdus: pääasiassa jotkin krooniset tulehdussairaudet, kuten krooninen gastroenteriitti, krooninen hepatiitti, toistuva gynekologinen tulehdus ja muut sairaudet.

Tulehduksen syy

Mikä tahansa tekijä, joka voi aiheuttaa kudosvaurioita, voi olla tulehduksen syy, eli tulehdustekijät voidaan ryhmitellä seuraaviin luokkiin:

(1) Biologiset tekijät

Bakteerit, virukset, mykoplasmat, sienet, spirokeetat ja loiset ovat yleisimpiä tulehduksen aiheuttajia. Biologisten patogeenien aiheuttamaa tulehdusta kutsutaan myös infektioksi. Bakteerien tuottamat ekso- ja endotoksiinit voivat vahingoittaa kudoksia suoraan; viruksen replikaatio infektoiduissa soluissa johtaa solunekroosiin; tietyt antigeeniset patogeenit vahingoittavat kudoksia indusoitujen immuunivasteiden kautta infektion jälkeen, kuten loisinfektiot ja tuberkuloosi.

2) Fyysiset tekijät

Korkea lämpötila, matala lämpötila, radioaktiiviset aineet, ultraviolettisäteet jne. ja mekaaniset vauriot.

(3) Kemialliset tekijät

Eksogeeniset kemikaalit, kuten vahva happo, vahva alkali ja tärpätti. Endogeeniset myrkylliset aineet, kuten nekroottisen kudoksen hajoamistuotteet ja aineenvaihduntatuotteet, kuten urea, kertyvät kehoon tietyissä patologisissa olosuhteissa.

(4) Vieras kappale

Ihmiskehoon eri tavoin päässeet vieraat kappaleet, kuten erilaiset metallit, puujätteet, ilmassa oleva pöly, kirurgiset ompeleet jne., voivat aiheuttaa eriasteisia tulehdusreaktioita erilaisesta antigeenisyydestään johtuen.

(5) Nekroottinen kudos

Syyt, kuten iskemia tai hypoksia, voivat aiheuttaa kudosnekroosia, joka on mahdollinen tulehdustekijä. Kongestiiviset verenvuotonauhat ja tulehdussolujen infiltraatio tuoreen infarktin reunoilla ovat molemmat tulehduksen ilmentymiä.

(6) Allergiat

Kun kehon immuunivaste on epänormaali, se voi aiheuttaa sopimattoman tai liiallisen immuunivasteen, mikä aiheuttaa kudos- ja soluvaurioita ja tulehduksia. Kuten allerginen nuha, paksusuolentulehdus, urtikaria, tuberkuloosi, glomerulonefriitti ja muut sairaudet.

Antibiootit ovat bakteereja tappavia ja anti-inflammatorisia, pitkäaikainen käyttö tuhoaa ihmiskehon normaalin kasviston, tappaa hyviä bakteereja, aiheuttaa suolistoflooran epätasapainoa, aiheuttaa erilaisia ​​suoliston toimintahäiriöitä ja haittavaikutuksia sekä aiheuttaa toissijaisia ​​infektioita, vähentää kehoa. vastus. Lisäksi antibiootit metaboloituvat pääasiassa maksassa ja munuaisissa, ja antibioottien väärinkäyttö aiheuttaa todennäköisimmin maksan ja munuaisten toiminnan vaurioita. Voit kiinnittää huomiota kaikkien tulehduskipulääkkeiden ohjeisiin sanoihin "käyttää varoen potilailla, joilla on huono maksan ja munuaisten toiminta". Lisäksi antibiootit voivat myös lisätä allergisia reaktioita lääkkeille. Viime vuosina korkea allergisen nuhan ja allergisen astman ilmaantuvuus liittyy antibioottien väärinkäyttöön.

Kokeet ovat osoittaneet, että ekinakosidia sisältävällä Cistanche pipiensis -uutteella on hyvä parantava vaikutus koliittiin; Cistanche-glykosidilla K ja piposidilla B on hyvä estävä vaikutus typpioksidin erittymiseen soluissa, mikä osoittaa, että sen hyvä anti-inflammatorinen vaikutus.Cistancheon kiinalainen lääkeaine, jonka alkuperä on sama kuin lääkkeet ja ruoka. Se on yksi kymmenestä suurimmasta kiinalaisesta kasviperäisestä lääkkeestä maassani. Se on aarre aavikon syvyyksistä ja luonnollinen tonic. Cistanche Cistanchella on lähes 2,000 vuoden lääkehistoria. Se äänitettiin ensimmäisen kerran "Shen Nong's Materia Medicassa". Vuonna 2005 Cistanche sisällytettiin "Kiinan kansantasavallan farmakopeaan" aidona lääkemateriaalina. Cistanche on ollut hyvä tonic antiikin ajoista lähtien ilman myrkyllisyyttä, mikä todistaa täysin sen turvallisuuden.