Osa 2: Ekinakosidi estää glutamaatin vapautumista estämällä jänniteriippuvaista Ca2- ja proteiinikinaasi C:tä rotan aivokortikaalisissa hermopäätteissä

Yhteystiedot: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Sähköposti:audrey.hu@wecistanche.com

Cheng Wei Lu 1,2, Tzu Yu Lin 1,2, Shu Kuei Huang 1 ja Su Jane Wang 3,*

Pls napsauta tästä takaisin osaan 1

3.2 Terapeuttiset vaikutukset

Eksitotoksisuus, liiallisen glutamaatin vapautumisen ja glutamaattireseptorin aktivoitumisen aiheuttama patologinen prosessi, on tärkein hermosolujen kuoleman aiheuttaja akuuteissa ja kroonisissa aivosairauksissa, kuten aivohalvauksessa, traumaattisissa aivovaurioissa, Parkinsonin ja Alzheimerin taudeissa [13,41] ja hoitostrategioissa. glutamaatin vapautumisen esto voi olla lupaavia hermostoa suojaavia strategioita tällaisten sairauksien hoidossa. Ekinakosidin on vahvistettu läpäisevän veri-aivoesteen (BBB) ​​ja sillä on hermoja suojaavia vaikutuksia erilaisissa hermotoksisuuden in vivo -malleissa [8,10–12,42]. Vaikka näiden neuroprotektiivisten vaikutusten mekanismia ei täysin ymmärretä, on raportoitu useita mahdollisia mekanismeja, mukaan lukien tulehdusvasteen esto, mitokondrioiden toiminnan stabilointi, antioksidantti, vapaiden radikaalien poistaminen ja neurotrofisen toiminnan matkiminen [5, 9, 12, 42]. Nykyisessä tutkimuksessa kykyekinakosidiglutamaatin vapautumisen vähentäminen hermopäätteistä saattaa myös osittain selittää sen neuroprotektiivisen mekanismin. Kuitenkin, vaikuttaako tämä vaikutus ilmeiseen terapeuttiseen potentiaaliinekinakosidiglutamaatin eksitotoksisuuteen liittyvissä aivosairauksissa vaatii lisätutkimuksia.

Neuroprotektiiviset vaikutuksetcistanchän ekinakosidi

4.Materiaalit ja menetelmät

4.1. Kemikaalit

Fura-2-asetoksimetyyliesteri (Fura-2-AM) ja 3',3',3'-dipropyylitiadikarbosyaniinijodidi [DiSC3(5)] ostettiin Invitrogenilta (Carlsbad, CA, USA). o-konotoksiini MVIIC, rottleriini, 2-[1-(3-dimetyyliaminopropyyli)indol-3-yyli]-3-(indol-3-yyli)maleimidi ( GF109203X), 5,6,7,13-tetrahydro- 13-metyyli-5-okso-12H-indolo[2,3-a]pyrrolo[3,{ {27}}c]karbatsoli-12-propaaninitriili (Go6976) ja N-[2-(p-bromikinnamyyliamino)etyyli]-5-isokinoliinisulfonamidi (H89) ostettiin Tocris Biosciencelta (Bristol, UK) ).Ekinakosidi, dantroleeni, DL-treo-beta-bentsyyli-oksiaspartaatti (DL-TBOA), 7-kloori-5-(2-kloorifenyyli)-1, 5-dihydro{ {10}},1-bentsotiatsepin-2(3H)-oni (CGP37157), 2-(2-amino-3- metoksifenyyli)-4H -1-bentsopyraani-4-one) (PD98059), etyleeniglykoli-bis(-aminoetyylieetteri)-N,N,N/,N/-tetraetikkahappo (EGTA) ja kaikki muut reagenssit ostettiin Sigmalta. Aldrich Co. (St. Louis, MO, USA).

4.2. Eläimet

Käytettiin kahden kuukauden ikäisiä urospuolisia Sprague-Dawley-rottia. Eläimiä pidettiin standardoiduissa ympäristöolosuhteissa (22 ± 1 oC; 50 prosentin suhteellinen kosteus; 12 h valo/pimeä sykli) ja niille annettiin rajoittamaton pääsy ruokaan ja veteen. Eläimet lopetettiin katkaisemalla ja aivokuori poistettiin nopeasti 4 oC:ssa. Fu Jen Institutional Animal Care and Utilisation Committee (A10259) hyväksyi koemenettelyt National Institutes of Health Guide for the Care and Use of Laboratory Animals -oppaan mukaisesti. Kaikkea yritettiin minimoida eläinten kärsimys ja käyttää mahdollisimman vähän eläimiä luotettavien tulosten saamiseksi.

4.3. Synaptosomaaliset valmisteet

Synaptosomit puhdistettiin rottien aivokuoresta epäjatkuvilla Percoll-gradienteilla, kuten aiemmin on kuvattu [43,44]. Lyhyesti sanottuna kudos homogenisoitiin väliaineessa, joka sisälsi 0,32 M sakkaroosia (pH 7,4), homogenaattia sentrifugoitiin 10 min nopeudella 3000 × g (5{{25}). [ 000 rpm JA 25.5 -roottorissa). Pelletti suspensoitiin varovasti uudelleen 0,32 M sakkaroosiin (pH 7,4), ja erä tästä synaptosomaalisesta suspensiosta (2 ml) asetettiin 3 ml:n Percoll epäjatkuvalle gradientille, joka sisälsi 0,32 M sakkaroosia, 1 mM EDTA:ta, 0,25 mM, dl-diothre. 3 prosenttia, 10 prosenttia ja 23 prosenttia Percollia (pH 7,4). Kun oli sentrifugoitu 32 500 × g:llä (16 500 rpm JA 20.5 -roottorissa) 7 minuuttia 4 oC:ssa, synaptosomit otettiin talteen 10 prosentin ja 23 prosentin Percoll-vyöhykkeistä ja ne laimennettiin 30 ml:n lopputilavuuteen. HEPES-puskurielatusaine (140 mM NaCl, 5 mM KCl, 5 mM NaHC03, 1 mM MgCl2+6H20, 1,2 mM Na2HPO4, 10 mM glukoosia ja 10 mM HEPES (pH 7,4)). Sen jälkeen, kun oli edelleen sentrifugoitu 27, 000 x g (15 000 rpm JA 25.5:ssä) 10 minuutin ajan, synaptosomipelletti suspendoitiin uudelleen 3 ml:aan HEPES-puskurialustaa ja proteiinipitoisuus määritettiin käyttämällä Bradford-määritystä. Lopuksi 0,5 mg synaptosomisuspensiota laimennettiin 10 ml:aan HEPES-puskurialustaa ja sentrifugoitiin 3000 x g:ssä (5000 rpm JA 20.1 -roottorissa) 10 minuuttia. Supernatantti heitettiin pois, ja synaptosomit sisältävät pelletit säilytettiin jäissä ja käytettiin 4–6 tunnin kuluessa.

cistanche-yrtti

4.4. Glutamaatin vapautuminen

Glutamaatin vapautuminen määritettiin online-fluorimetrialla, kuten aiemmin on kuvattu [45,46]. Synaptosomaaliset pelletit suspendoitiin uudelleen HEPES-puskurialustaan ​​(0,5 mg/ml) ja esi-inkuboitiin 37 oC:ssa 10 minuuttia 16 uM naudan seerumialbumiinin läsnä ollessa mahdollisten synaptosomeista esi-inkuboinnin aikana vapautuvien vapaiden rasvahappojen sitomiseksi. 2- ml:n alikvootti synaptosomeja siirrettiin sekoitettuun kyvettiin, joka sisälsi 2 mM NADP plus, 50 yksikköä glutamaattidehydrogenaasia ja 1,2 mM CaCl2, ja NADPH:n fluoresenssi mitattiin Perkin-Elmer LS{{14 }} spektrofluorimetri (PerkinElmer Life and Analytical Sciences, Waltham, MA, USA) viritys- ja emissioaallonpituuksilla 340 ja 460 nm, vastaavasti. Koska synaptosomit eivät ole alttiita sähköiselle stimulaatiolle, kaliumkanavan salpaajaa 4-aminopyridiiniä käytettiin stimuloimaan glutamaatin vapautumista. 4-aminopyridiini destabiloi kalvopotentiaalia ja sen uskotaan aiheuttavan toistuvaa spontaania Na plus -kanavasta riippuvaa depolarisaatiota, joka on lähellä synaptisen terminaalin depolarisaatiota in vivo, mikä johtaa jännitteestä riippuvien Ca2 plus -kanavien aktivoitumiseen ja välittäjäaineiden vapautumiseen [47 ]. Tiedot saatiin 2 sekunnin välein. Eksogeenisen glutamaatin standardi (5 nmol) lisättiin kunkin kokeen lopussa. Standardilisäyksen tuottaman fluoresenssin muutoksen arvoa käytettiin laskettaessa vapautunut glutamaatti nanomooleina glutamaattia per milligramma synaptosomaalista proteiinia (nmol/mg). Tekstissä lainatut vapautumisarvot ovat tasoja, jotka saavutetaan vakaassa tilassa 5 minuutin depolarisaation jälkeen (nmol/mg/5 min). Kumulatiiviset tiedot analysoitiin käyttämällä Lotus 1-2-3 -laskentataulukoita (IBM, White Plains, NY, USA) ja MicroCal Origin -ohjelmaa (OriginLab Corporation, Northampton, MA, USA).

4.5. Plasmakalvon potentiaali

Plasmakalvopotentiaali määritettiin kalvopotentiaaliherkällä väriaineella DiSC3(5) [48]. Synaptosomit suspendoitiin uudelleen HEPES-puskurialustaan ​​ja 2 ml:n erät siirrettiin sekoitettuun kyvettiin, joka sisälsi 5 uM DiSC3(5):tä 37 oC:ssa Perkin-Elmer LS-55 -spektrofluorometrissä (PerkinElmer Life and Analytical Sciences, Waltham, MA, Waltham). , USA). Kun seoksen oli annettu tasapainottua 3 minuuttia, fluoresenssi määritettiin viritys- ja emissioaallonpituuksilla 646 ja 674 nm, vastaavasti. Tiedot kerättiin 2 sekunnin välein. Kumulatiiviset tiedot analysoitiin käyttämällä MicroCal Origin -laitetta (OriginLab Corporation, Northampton, MA, USA) ja ilmaistiin fluoresenssiyksiköinä.

4.6. Sytosolinen Ca2 plus pitoisuus ([Ca2 plus ]C)

[Ca2 plus ]C mitattiin Ca2 plus -indikaattorilla fura-2. Synaptosomeja (0,5 mg/ml) esi-inkuboitiin HEPES-puskuriväliaineessa, joka sisälsi 5 uM fura-2 ja 0,1 mM CaCl2, 30 minuuttia 37 oC:ssa sekoitettussa koeputkessa. . Fura-2-latauksen jälkeen synaptosomeja sentrifugoitiin mikrosentrifugissa 30 s nopeudella 3000 × g (5000 rpm). Synaptosomaaliset pelletit suspendoitiin uudelleen HEPES-puskuriväliaineeseen ja synaptosomaalista suspensiota sekoitettiin termostoidussa kyvetissä Perkin-Elmer LS-55 -spektrofluorometrissä (PerkinElmer Life and Analytical Sciences, Waltham, MA, USA). CaCl2 (1 mM) lisättiin 3 minuutin kuluttua ja lisälisäyksiä tehtiin vielä 10 minuutin kuluttua. Fluoresenssitiedot kerättiin viritysaallonpituuksilla 340 ja 380 nm (emission aallonpituus 505 nm) 2 sekunnin välein. [Ca2 plus]C (nM) laskettiin käyttämällä kalibrointimenetelmiä [49] ja yhtälöitä, jotka on kuvattu aiemmin [50]. Kumulatiiviset tiedot analysoitiin käyttämällä MicroCal Origin -laitetta (OriginLab Corporation, Northampton, MA, USA).

4.7. Western Blotting

Synaptosomit homogenisoitiin lyysipuskurissa (10 mM HEPES-puskuri, pH 7,4), 1 % Triton X-100 ja proteaasi-inhibiittoriseoksessa. Lysaatit selkeytettiin sentrifugoimalla ja proteiinipitoisuus määritettiin käyttämällä proteiinimäärityspakkausta (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA, USA). Samat määrät proteiineja erotettiin natriumdodekyylisulfaatti-polyakryyliamidigeelielektroforeesilla (SDS-PAGE) ja siirrettiin nitroselluloosakalvolle. Kalvot estettiin Tris-puskuroidulla suolaliuoksella, joka sisälsi 5 prosenttia vähärasvaista maitoa ja inkuboitiin sopivan primaarisen vasta-aineen kanssa (fosfoproteiinikinaasi C (pannu), 1:3000, NOVUS Biologicals Inc., Beverly, MA, USA) yön yli klo. 4 oC. Kolmen pesun jälkeen Tris-puskuroidussa suolaliuoksessa kalvoa käsiteltiin sitten sekundaarisella piparjuuriperoksidaasilla konjugoidulla vasta-aineella (1:3000) 1 tunnin ajan huoneenlämpötilassa. Sitten kalvot pestiin vähintään kolme kertaa Tris-puskuroidulla suolaliuoksella ja visualisoitiin käyttämällä tehostettua kemiluminesenssijärjestelmää (Amersham, Buckinghamshire, UK). Alikvootti näytteitä ladattiin ja tutkittiin anti-PKC-vasta-aineella PKC:n havaitsemiseksi latauskontrollina. Ekspression tai fosforylaation taso arvioitiin vyöhyketiheydellä, joka kvantifioitiin densitometrisesti. Vyöhykkeiden densitometrinen kvantifiointi analysoitiin käyttämällä Syngene-ohjelmistoa (Synoptics, Cambridge, UK).

4.8 Tilastollinen analyysi

Tiedot saatiin yhdestä synaptosomaalisesta valmisteesta, eivätkä ne olleet riippumattomia toisistaan. Lääkkeen vaikutuksen ja kontrollin välisen merkityksen testaamiseksi käytettiin kaksisuuntaista Studentin t-testiä. Kun tarvittiin lisävertailua (kuten se, vaikuttiko toinen käsittely ekinakosidin toimintaan), käytettiin yksisuuntaista ANOVAa ja sen jälkeen Tukeyn testiä. Analyysi suoritettiin SPSS-ohjelmistolla (17.0; SPSS Inc., Chicago, IL, USA). Tiedot ilmaistaan ​​keskiarvona ± SEM; merkitsevyys arvioitiin p < 0,05="" kaikilla="" tilastollisilla="">

cistanche

5. Johtopäätökset

Tämä on ensimmäinen tutkimus, joka osoittaa, että ekinakosidi estää glutamaatin vapautumista rotan aivokuoren synaptosomeista vähentämällä Ca2:n ja Cav2.2- ja Cav2.1-kanavien kautta tapahtuvaa vapautumista, ja tämä vapautumisen esto riippuu todennäköisesti proteiinikinaasi C -reitin suppressiosta, ainakin osa. Tämä löydös on arvokas, koska se tarjoaa uudenlaisen käsityksen ekinakosidin vaikutusmekanismeista aivoissa.

Kiitokset: Tätä työtä tuettiin tiede- ja teknologiaministeriön apurahalla (MOST 103-2320-B-030-001 MY3).

Tekijän panokset: Tzu Yu Lin ja Su Jane Wang suunnittelivat ja suunnittelivat kokeet; Cheng Wei Lu suoritti kokeet; Cheng Wei Lu ja Shu Kuei Huang analysoivat tiedot; Su Jane Wang kirjoitti paperin.

Eturistiriidat: Kirjoittajat ilmoittavat, että ne eivät ole eturistiriitoja.

cistanche-yrttiuute

Viitteet

1. Tu, PF; Wang, B.; Deyama, T.; Zhang, ZG; Lou, ZC Herba cistanchiksen fenyylietanoidiglykosidien analyysi RP-HPLC:llä. Acta Pharm. Synti. 1997, 32, 294-300.

2. Dalby-Brown, L.; Barnett, H.; Landbo, AK; Meyer, AS; Molgaard, P. Echinacea purpureasta peräisin olevien alkamidien, kofeiinihappojohdannaisten ja polysakkaridifraktioiden synergistiset antioksidanttiset vaikutukset ihmisen matalatiheyksisten lipoproteiinien in vitro -hapetukseen. J. Agric. Food Chem. 2005, 53, 9413–9423. [CrossRef] [PubMed]

3. Dapas, B.; Dall'Acqua, S.; Bulla, R.; Agostinis, C.; Perissutti, B.; Invernizzi, S.; Grassi, G.; Voinovich, D. Immunomodulaatio, jonka välittää yrttisiirappi, joka sisältää standardoitua Echinacea-juuriuutetta: Pilottitutkimus terveillä ihmisillä sytokiinigeenin ilmentymisestä. Phytomedicine 2014, 21, 1406–1410. [CrossRef] [PubMed]

4. Hän, WJ; Fang, TH; Tu, PF Ekinakosidin farmakologisten toimintojen tutkimuksen edistyminen. Kiina J. Chin. Mater. Med. 2009, 34, 476–479.

5. Deng, M.; Zhao, JY; Tu, PF; Jiang, Y.; Li, ZB; Wang, YH Echinacoside pelastaa SHSY5Y-hermosolut TNFalfan aiheuttamasta apoptoosista. euroa J. Pharmacol. 2004, 505, 11–18. [CrossRef] [PubMed]

6. Koo, KA; Sung, SH; Park, JH; Kim, SH; Lee, KY; Kim, YC Callicarpa dichotoman fenyylietanoidiglykosidien hermostoa suojaavat vaikutukset in vitro. Planta Med. 2005, 71, 778–780. [CrossRef] [PubMed]

7. Wang, YH; Xuan, ZH; Tian, ​​S.; Du, GH Echinacoside suojaa 6-hydroksidopamiinin aiheuttamalta mitokondrioiden toimintahäiriöltä ja tulehdusvasteilta PC12-soluissa vähentämällä ROS-tuotantoa. Evid. Perustuu täydennys. Altern. Med. 2015, 2015, 189239. [CrossRef] [PubMed]

8. Zhu, M.; Lu, C.; Li, W. Ohimenevä altistuminen ekinakosidille riittää aktivoimaan Trk-signaloinnin ja suojaamaan hermosoluja rotenonilta. J. Neurochem. 2013, 124, 571–580. [CrossRef] [PubMed]

9. Geng, X.; Tian, ​​X.; Tu, P.; Pu, X. Echinacosidin neuroprotektiiviset vaikutukset Parkinsonin taudin hiiren MPTP-mallissa. euroa J. Pharmacol. 2007, 564, 66–74. [CrossRef] [PubMed]

10. Wei, LL; Chen, H.; Jiang, Y.; Tu, PF; Zhong, M.; Du, J.; Liu, F.; Wang, L.; Liu, CY Echinacosidin vaikutukset aktiivisen massan histio-keskisiin tasoihin keskimmäisillä aivovaltimon okkluusiorotilla. Biomed. Ympäristö. Sci. 2012, 25, 238–244. [PubMed]

11. Wu, CR; Lin, HC; Su, MH Cistanche tubulosan vesiuutteiden poistaminen käyttäytymispuutteista Alzheimerin taudin kaltaisessa rottamallissa: Relevanssi amyloidin kerrostumisen ja keskushermoston toiminnan kannalta. BMC-täydennys. Altern. Med. 2014, 14, 202. [CrossRef] [PubMed]

12. Zhao, Q.; Gao, J.; Li, W.; Cai, D. Echinacosidin neurotrofiset ja neurorescue-vaikutukset Parkinsonin taudin subakuutissa MPTP-hiirimallissa. Brain Res. 2010, 1346, 224–236. [CrossRef] [PubMed]

13. Meldrum, BS Glutamaatti välittäjäaineena aivoissa: katsaus fysiologiaan ja patologiaan. J. Nutr.2000, 130, 1007S–1015S. [PubMed]

14. Lee, D.; Shim, MS; Kim, KY; Ei, YH; Kim, H.; Kim, SY; Weinreb, RN; Ju, WK Koentsyymi Q10 estää glutamaatin eksitotoksisuutta ja oksidatiivisen stressin välittämää mitokondrioiden muutosta glaukooman hiirimallissa. Tutki. Ophthalmol. Vis. Sci. 2014, 55, 993–1005. [CrossRef] [PubMed]

15. Choi, DW Kalsium ja eksitotoksinen hermoston vaurio. Ann. NY Acad. Sci. 1994, 747, 162-171. [CrossRef][PubMed]

16. Lau, A.; Tymianski, M. Glutamaattireseptorit, neurotoksisuus ja hermoston rappeuma. Pflugerit. Kaari. 2010, 460, 525–542. [CrossRef] [PubMed]

17. Sattler, R.; Tymianski, M. Glutamaattireseptorivälitteisen eksitotoksisen hermosolujen kuoleman molekyylimekanismit. Mol. Neurobiol. 2001, 24, 107–129. [CrossRef]

18. Schauwecker, PE Neuroprotektio glutamaattireseptorin antagonisteilla kohtausten aiheuttamaa eksitotoksista solukuolemaa vastaan ​​ikääntyvissä aivoissa. Exp. Neurol. 2010, 224, 207–218. [CrossRef] [PubMed]

19. Yeganeh, F.; Nikbakht, F.; Bahmanpour, S.; Rastegar, K.; Namavar, R. NMDA:n ja ryhmän I metabotrooppisten glutamaattireseptoriantagonistien neuroprotektiiviset vaikutukset homokysteiinin aiheuttamaa hermoston rappeutumista vastaan ​​rotan hippokampuksessa: In vivo -tutkimus. J. Mol. Neurosci. 2013, 50, 551–557. [CrossRef] [PubMed]

20. Doble, A. Eksitotoksisuuden rooli neurodegeneratiivisessa sairaudessa: vaikutukset hoitoon. Pharmacol. Ther.1999, 81, 163–221. [CrossRef]

21. Muir, KW Glutamaattiin perustuvat terapeuttiset lähestymistavat: Kliiniset tutkimukset NMDA-antagonisteilla. Curr. Opin. Pharmacol. 2006, 6, 53–60. [CrossRef] [PubMed]

22. González, JC; Egea, J.; del Carmen Godino, M.; Fernandez-Gomez, FJ; Sánchez-Prieto, J.; Gandía, L.; García, AG; Jordán, J.; Hernández-Guijo, JM Neuroprotektantti minosykliini heikentää glutamatergista hermovälitystä ja Ca2 plus -signalointia aivotursohermosoluissa. euroa J. Neurosci. 2007, 26, 2481–2495. [CrossRef] [PubMed]

23. Lu, CW; Lin, TY; Wang, SJ Memantiini alentaa glutamaatin vapautumista estämällä jännitteestä riippuvaisen Ca2:n plus sisäänpääsyn ja proteiinikinaasi C:n rotan aivokuoren hermopäätteissä: NMDA-reseptorista riippumaton mekanismi. Neurochem. Int. 2010, 57, 168–176. [CrossRef] [PubMed]

24. Wang, SJ; Sihra, TS Ei-kilpaileva metabotrooppinen glutamaatti 5 -reseptorin antagonisti (E)-2-metyyli-6- styryylipyridiini (SIB1893) vähentää glutamaatin vapautumista estämällä jännitteestä riippuvaisen Ca2:n sekä pääsyn rotan aivokuoren hermopäätteisiin (synaptosomeihin). J. Pharmacol. Exp. Siellä. 2004, 309, 951–958. [CrossRef] [PubMed]

25. Dunkley, PR; Jarvie, PE; Heath, JW; Kidd, GJ; Rostas, JA Nopea menetelmä synaptosomien eristämiseksi Percoll-gradienteilla. Brain Res. 1986, 372, 115–129. [CrossRef]

26. Araque, A.; Li, N.; Doyle, RT; Haydon, PG SNARE proteiinista riippuvainen glutamaatin vapautuminen astrosyyteistä.J. Neurosci. 2000, 20, 666–673. [PubMed]

27. Dunlop, J. Glutamaattiin perustuvat terapeuttiset lähestymistavat: Kohdistaminen glutamaatin kuljetusjärjestelmään.

Curr. Opin. Pharmacol. 2006, 6, 103–107. [CrossRef] [PubMed]

28. Zucchi, R.; Ronca-Testoni, S. Sarkoplasminen verkkokalvo Ca2 plus kanava/ryanodiinireseptori: Modulaatio endogeenisten efektorien, lääkkeiden ja sairaustilojen avulla. Pharmacol. Rev. 1997, 49, 1–51. [PubMed]

29. Fan, Y.; Li, J.; Zhang, YQ; Jiang, LH; Zhang, YN; Yan, CQ Proteiinikinaasi C -deltavälitteinen 6-hydroksidopamiinin sytotoksisuus jatkuvan solunulkoisen signaalin säätelemän kinaasi 1/2 -aktivaation kautta PC12-soluissa. Neurol. Res. 2014, 36, 53–64.[CrossRef] [PubMed]

30. Gschwendt, M.; Müller, HJ; Kielbassa, K.; Zang, R.; Kittstein, W.; Rinkke, G.; Marks, F. Rottlerin, uusi proteiinikinaasi-inhibiittori. Biochem. Biophys. Res. Commun. 1994, 199, 93–98. [CrossRef] [PubMed]

31. Nicholls, DG; Sihra, TS; Sanchez-Prieto, J. Kalsiumista riippuvainen ja riippumaton glutamaatin vapautuminen synaptosomeista, jota seurataan jatkuvalla fluorometrialla. J. Neurochem. 1987, 49, 50–57. [CrossRef] [PubMed]

32. Nicoll, RA Välittäjäreseptorien kytkeminen aivojen ionikanaviin. Science 1988, 241,545–551. [CrossRef] [PubMed]

33. Wu, LG; Saggau, P. Presynaptinen esto herättänyt välittäjäaineen vapautumisen. Trends Neurosci. 1997, 20, 204–212. [CrossRef]

34. Turner, TJ; Dunlap, K. Presynaptisten kalsiumkanavien farmakologinen karakterisointi käyttämällä synaptosomaalisen neuroerityksen subsekuntia biokemiallisia mittauksia. Neuropharmacology 1995, 34, 1469-1478. [CrossRef]

35. Millan, C.; Sanchez-Prieto, J. N- ja P/Q-tyypin kalsiumkanavien differentiaalinen kytkentä glutamaattieksosytoosiin rotan aivokuoressa. Neurosci. Lett. 2002, 330, 29–32. [CrossRef]

36. Vazquez, E.; Sanchez-Prieto, J. Glutamaatin vapautumisen presynaptinen modulaatio kohdistuu eri kalsiumkanaviin rotan aivokuoren hermopäätteissä. euroa J. Neurosci. 1997, 9, 2009–2018. [CrossRef] [PubMed]

37. Long, P.; Mercer, A.; Begum, R.; Stephens, GJ; Sihra, TS; Jovanovic, JN:n hermopäätteen GABAA-reseptorit aktivoivat Ca2 plus/kalmoduliiniriippuvaisen signaloinnin estämään jänniteohjatun Ca2 plus sisäänvirtauksen ja glutamaatin vapautumisen. J. Biol. Chem. 2009, 284, 8726–8737. [CrossRef] [PubMed]

38. Turner, JR; Angle, JM; Musta, ED; Joyal, JL; Säkit, DB; Madara, JL PKC-riippuvainen transepiteliaalisen resistenssin säätely: MLC:n ja MLC-kinaasin roolit. Olen. J. Physiol. 1999, 277, C554–C562. [PubMed]

39. Vaughan, PF; Walker, JH; Peers, C. Proteiinikinaasin välittäjäaineiden erityksen säätely C. Mol. Neurobiol. 1998, 18, 125–155. [CrossRef] [PubMed]

40. Coffey, ET; Sihra, TS; Nicholls, DG; Pocock, JM Synapsiini I:n ja MARCKSin fosforylaatiota hermopäätteissä välittää Ca2 plus -sisääntulo Aga-GI-herkän Ca2 plus -kanavan kautta, joka on kytketty glutamaattieksosytoosiin. FEBS Lett. 1994, 353, 264-268. [CrossRef]

41. Obrenovitsh, TP; Urenjak, J. Muuttunut glutamaterginen siirto neurologisissa häiriöissä: Korkeasta ekstrasellulaarisesta glutamaatista liialliseen synaptiseen tehokkuuteen. Prog. Neurobiol. 1997, 51, 39–87. [CrossRef]

42. Zhang, D.; Li, H.; Wang, JB Echinacoside estää HEWL:n amyloidivärinää ja suojaa A-indusoidulta neurotoksisuudesta. Int. J. Biol. Macromol. 2015, 72, 243–253. [CrossRef] [PubMed]

43. Lin, TY; Lu, CW; Wang, CC; Lu, JF; Wang, SJ Hispidulin estää glutamaatin vapautumista rotan aivokortikaalisissa hermopäätteissä. Toxicol. Appl. Pharmacol. 2012, 263, 233–243. [CrossRef] [PubMed]

44. Chang, CY; Lin, TY; Lu, CW; Huang, SK; Wang, YC; Chou, SS; Wang, SJ Hesperidiini estää glutamaatin vapautumista ja antaa hermosuojan kaiiinihapon aiheuttamaa eksitotoksisuutta vastaan ​​rottien hippokampuksessa. Neurotoxicology 2015, 2015, 157–169. [CrossRef] [PubMed]

45. Nicholls, DG; Sihra, TS Synaptosomeilla on eksosytoottinen glutamaattipooli. Nature 1986, 321, 772–773.[CrossRef] [PubMed]

46. ​​Wang, CC; Kuo, JR; Wang, SJ Dimebon, antihistamiinilääke, estää glutamaatin vapautumista rotan aivokortikaalisissa hermopäätteissä. euroa J. Pharmacol. 2014, 734, 67–76. [CrossRef] [PubMed]

47. Tibbs, GR; Barrie, AP; van Mieghem, FJ; Mc-Mahon, HT; Nicholls, DG. Toistuvat toimintapotentiaalit eristetyissä hermopäätteissä 4-aminopyridiinin läsnä ollessa: Vaikutukset sytosolisen vapaan Ca2 plus- ja glutamaatin vapautumiseen. J. Neurochem. 1989, 53, 1693–1699. [CrossRef] [PubMed]

48. Akerman, KE; Scott, LG; Heikkila, JE; Heinonen, E. Kalvopotentiaalin ioniriippuvuus ja glutamaattireseptoriin liittyvät vasteet synaptoneurosomeissa mitattuna syaniinivärillä, DiSC2(5).J. Neurochem. 1987, 48, 552-559. [CrossRef] [PubMed]

49. Sihra, TS; Bogonez, E.; Nicholls, DG Localized Ca2 plus pääsy vaikuttaa ensisijaisesti proteiinien defosforylaatioon, fosforylaatioon ja glutamaatin vapautumiseen. J. Biol. Chem. 1992, 267, 1983–1989. [PubMed]

50. Grynkiewicz, G.; Poenie, M.; Tsien, RY Uuden sukupolven Ca2 plus -indikaattorit, joilla on huomattavasti parannetut fluoresenssiominaisuudet. J. Biol. Chem. 1985, 260, 3440–3450. [PubMed]