Osa 1: Ekinakosidi estää glutamaatin vapautumista estämällä jänniteriippuvaista Ca2- ja proteiinikinaasi C:tä rotan aivokortikaalisissa hermopäätteissä

Yhteystiedot: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Sähköposti:audrey.hu@wecistanche.com

Cheng Wei Lu 1,2, Tzu Yu Lin 1,2, Shu Kuei Huang 1 ja Su Jane Wang 3,*

Abstrakti:

Glutamaterginen järjestelmä voi olla osallisena hermostoa suojaavien hoitojen vaikutuksissa.Ekinakosidi, fenyylietanoidiglykosidi, joka on uutettu kiinalaisesta lääkeyrtistäHerba Cistanche, sillä on hermostoa suojaavia vaikutuksia. Tässä tutkimuksessa tutkittiin vaikutuksiaekinakosidi4-aminopyridiinin aiheuttamasta glutamaatin vapautumisesta rotan aivokuoren hermopäätteissä (synaptosomeissa). Ekinakosidi esti Ca2 plus -riippuvaista, mutta ei Ca2 plus -riippumatonta, 4-aminopyridiinin aiheuttamaa glutamaatin vapautumista pitoisuudesta riippuvaisella tavalla. Ekinakosidi vähensi myös 4-aminopyridiinin aiheuttamaa lisäystä sytoplasman vapaassa Ca2 plus -pitoisuudessa, mutta ei muuttanut synaptosomaalisen kalvon potentiaalia. Ekinakosidin estävän vaikutuksen 4-aminopyridiinin aiheuttamaan glutamaatin vapautumiseen esti o-konotoksiini MVIIC, joka on laajakirjoinen Cav2.2 (N-tyyppi) ja Cav2.1 (P/Q-tyyppi) kanavien salpaaja. , mutta oli epäherkkä solunsisäisille Ca2- ja vapautumisen estäjille dantroleenille ja 7-kloori-5-(2-kloorifenyyli)-1,5-dihydro-4 ,1-bentsodiatsepiini-2(3H)-oni (CGP37157). Lisäksi ekinakosidi vähensi 4-aminopyridiinin aiheuttamaa proteiinikinaasi C:n fosforylaatiota, ja proteiinikinaasi C:n estäjät poistivat ekinakosidin vaikutuksen glutamaatin vapautumiseen. Näiden tulosten mukaan ehdotamme, että ekinakosidin inhiboiva vaikutus herätettyyn glutamaatin vapautumiseen liittyy vähentyneeseen jännitteestä riippuvaiseen Ca2:n sisääntuloon ja sitä seuraavaan proteiinikinaasi C -aktiivisuuden suppressioon.

Avainsanat:ekinakosidi; glutamaatin vapautuminen; aivokuoren hermopäätteet; jännitteestä riippuvaiset Ca2 plus -kanavat; proteiinikinaasi C

1. Esittely

Ekinakosidion tärkeä fenyylietanoliglykosidi, jota esiintyyHerbaCistanche, tunnettu perinteinen kiinalainen lääketiede, jota käytetään unohduksen, impotenssin ja kroonisen ummetuksen hoitoon [1].Ekinakosidisillä on erilaisia ​​bioaktiivisuuksia, kuten hapettumista estävä, tulehdusta estävä, syöpää ehkäisevä, hepatosuojaus ja immuunimodulaatio [2–4]. Ekinakosidilla on erityisesti hermostoa suojaavia vaikutuksia; Se voi esimerkiksi suojata oksidatiivisen stressin tai neurotoksiinien aiheuttamalta hermotoksisuudelta primaarisissa rotan aivokuoren hermosoluissa, ihmisen neuroblastooma-SH-SY5Y-soluissa ja feokromosytoomasoluissa (PC12) [5–8]. Lisäksi ekinakosidi vaimentaa aivovaurioita ja parantaa kognitiivista toimintaa Parkinsonin taudin, Alzheimerin taudin ja keskimmäisen aivovaltimotukoksen eläinmalleissa [9–12]. Kuitenkin mekanismi, jonka kauttaekinakosidiindusoi neuroprotektiota ei täysin ymmärretä.

Neuroprotektio on monimutkainen prosessi hermosolujen rakenteen ja toiminnan säilyttämiseksi myrkyllisten loukkausten yhteydessä. Glutamaatin eksitotoksisuuden vähentämistä pidetään mahdollisena mekanismina, joka liittyy aivojen hermosolujen suojaamiseen. Glutamaatilla, kiihottavalla aminohappovälittäjäaineella, on ratkaiseva rooli useissa aivotoiminnoissa [13]. Glutamaattireseptorien yliaktivoituminen korkeissa glutamaattipitoisuuksissa aiheuttaa kuitenkin solunsisäistä Ca2- ja ylikuormitusta, mitokondrioiden toimintahäiriöitä, vapaiden radikaalien tuotantoa ja hermosolujen kuolemaa [14,15]. Tämä patologinen prosessi liittyy lukuisiin aivosairauksiin, mukaan lukien aivoiskemia, traumaattinen aivovaurio, epilepsia ja hermostoa rappeuttava sairaus [16,17]. Tästä syystä patofysiologista glutamatergista siirtymistä estäviä estäjiä pidetään mahdollisina hermostoa suojaavina lääkkeinä. Merkittäviä esimerkkejä näistä ovat glutamaattireseptoriantagonistit [18,19]; näiden lääkkeiden kliiniset kokeet ovat kuitenkin epäonnistuneet heikomman tehokkuuden ja ei-toivottujen tai jopa sytotoksisten sivuvaikutusten vuoksi [20,21]. Suoran glutamaattireseptorin salpauksen lisäksi glutamaatin vapautumisen esto voi olla tehokas hermosolujen suojausstrategia. Useat hermostoa suojaavat aineet (esim. memantiini ja rilutsoli) voivat vähentää glutamaatin vapautumista rotan aivokudoksissa [22–24].

Ottaen huomioon glutamaatin roolin eksitotoksisuuteen ja ekinakosidin hermoja suojaavan profiilin, tässä tutkimuksessa käytettiin eristettyjä hermopäätteitä (synaptosomeja), jotka oli puhdistettu rotan aivokuoresta, tutkimaan ekinakosidin vaikutusta glutamaatin vapautumiseen ja tutkimaan edelleen mahdollisia mekanismeja. Eristetty hermopäätevalmiste on vakiintunut malli lääkkeiden välittäjäaineiden vapautumisen presynaptisen säätelyn tutkimiseksi postsynaptisten vaikutusten puuttuessa [25]. Tätä mallia käyttämällä arvioimme ekinakosidin vaikutuksen glutamaatin vapautumiseen, kalvopotentiaaliin, presynaptiseen Ca2 plus -virtaukseen ja proteiinikinaasi C -aktiivisuuteen. Kirjallisuuskatsauksen mukaan tämä on ensimmäinen raportti, joka dokumentoi mekanismin, jolla ekinakosidi estää endogeenisen glutamaatin vapautumista presynaptisella tasolla.

2. Tulokset

2.1. EkinakosidiEstää 4-aminopyridiinin aiheuttaman glutamaatin vapautumisen rotan aivokortikaalisista hermopäätteistä vähentämällä vesikulaarista eksosytoosia

Kuva 1 havainnollistaa ekinakosidin pitoisuudesta riippuvaa vaikutusta 4-aminopyridiinin aiheuttamaan glutamaatin vapautumiseen puhdistetuista rotan aivokuoren synaptosomeista. Synaptosomeissa, joita oli inkuboitu 1 mM CaCl2:n kanssa, 1 mM 4-aminopyridiini aiheutti glutamaatin vapautumisen 7,4 ± {{1{{20}}},1 nmol/mg/5 min, mikä väheni 1, 5, 10, 30 ja 50 uM ekinakosidilla arvoihin 6,5 ± 0,2, 5,8 ± 0,3, 4,8 ± 0,2,

4,1 ± 0,1 tai 2,3 ± 0,4 nmol/mg/5 min (F(5,24)=67.1, p=0). 000). Ekinakosidivälitteisen 4-aminopyridiinin aiheuttaman glutamaatin vapautumisen eston IC50-arvo, joka on johdettu annos-vastekäyrästä, oli 24 uM. Lisäksi glutamaatin vapautuminen, jonka aiheuttaa 1 mM 4-aminopyridiini ekstrasellulaarisessa Ca2 plus -vapaassa liuoksessa, joka sisältää 300 uM etyleeniglykoli-bis(-aminoetyylieetteri)-N,N,N/,N/-tetraetikkahappoa (EGTA) oli 2.1 0.2 nmol/mg/5 min (F(2,12)=310.65, p=0.000),

ja tähän 4-aminopyridiinin aiheuttaman glutamaatin vapautumisen Ca2 plus -riippumattomaan komponenttiin ei vaikuttanut 20 uM ekinakosidia (1,8 ± 0,2 nmol/mg/5 min; p {{1) 0}}.58; kuva 1). Synaptosomeissa, joita käsiteltiin 0,1 uM bafilomysiini A1:llä, rakkulakuljettajan estäjällä [26], 4-aminopyridiinin aiheuttama glutamaatin vapautuminen väheni merkittävästi (2,2 ± 0,2 nmol/mg/ 5 min; F (2,12)=249,518, p=0.000). Bafilomysiini A1:n läsnä ollessa 20 uM ekinakosidia ei pystynyt merkittävästi estämään glutamaatin vapautumista (2,1 ± 0,2 nmol/mg/5 min; p=0,94; kuva 1). Sitä vastoin 10 uM DL-treo-beta-bentsyylioksiaspartaattia (DL-TBOA, glutamaatin takaisinoton estäjä) [27] lisäsi 4-aminopyridiinin aiheuttaman glutamaatin vapautumisen arvoon 11,8 ± 0,4 nmol/mg/5 min ( t(8)=-11.31, p=0.000). Jopa DL-TBOA:n läsnä ollessa 20 uM ekinakosidi esti 4-aminopyridiinin aiheuttamaa glutamaatin vapautumista merkittävästi (7,7 ± 0,2 nmol/mg/5 min; F(2,12)=87.23, s.=0.000; kuva 1).

2.2 Ekinakosidi vähentää sytosolista Ca2 plus -pitoisuutta, mutta ei muuta synaptosomaalisen kalvon potentiaalia

1 mM 4-aminopyridiinin aiheuttama synaptosomien depolarisaatio lisäsi Ca2 plus -pitoisuutta (p=0.000; Taulukko 1). 20 uM ekinakosidin käyttö ei vaikuttanut merkittävästi Ca2 plus -peruspitoisuuteen (t(8)=0.06, p=0.95), mutta vähensi merkittävästi 4-aminopyridiinin aiheuttamaa lisäystä Ca2 plus -pitoisuus (t(10)=6.16, p=0.000). Lisäksi 1 mM 4-aminopyridiini lisääntyi 3',3',3'-dipropyylitiadikarbosyaniinijodidin [DiSC3(5)] fluoresenssissa (p=0.000). 20 uM ekinakosidin lisäys ei muuttanut lepokalvopotentiaalia (t(8)=0.976, p=0.36) eikä merkittävästi muuttanut 4-aminopyridiinivälitteistä DiSC3:n nousua (5) fluoresenssi (t(8)=-0.014, p=0.99; taulukko 1).

2.3 Vähentynyt Ca2 plus sisäänvirtaus Cav2.2- (N-tyyppi) ja Cav2.1 (P/Q-tyyppi) -kanavien kautta voi liittyä 4-aminopyridiinin aiheuttaman glutamaatin vapautumisen estämiseen ekinakosidilla

Kuva 2 osoittaa, että 2 uM o-konotoksiini MVIIC, N- ja P/Q-tyypin Ca2 plus kanavasalpaaja, vähensi 4-aminopyridiinin aiheuttamaa glutamaatin vapautumista arvosta 7,4 ± {{10}}. 2-2.0 ± 0.1 nmol/mg/5 min (t(9)=25.35, p=0.000). O-konotoksiini MVIIC:n läsnä ollessa 20 uM ekinakosidin vaikutus 4-aminopyridiinin aiheuttamaan glutamaatin vapautumiseen oli merkityksetön (1.8 2± plus 0,2 nmol/mg/5 min; t(8)=1.06,s=0.32). Dantroleeni (10 uM), solunsisäisen Ca:n vapautumisen estäjä endoplasmasta

reticulum [28], vähentynyt 4-aminopyridiinin aiheuttama glutamaatin vapautuminen (5,6 ± 0,3 nmol/mg/5 min; F(2,14) {{10}}. 95, s.=0.{13}}). Dantroleenin läsnä ollessa 20 uM ekinakosidia voi kuitenkin edelleen estää glutamaatin vapautumista merkittävästi (3,3 ± 0,2 nmol/mg/5 min; p=0.000). Samanlaisia ​​tuloksia havaittiin käytettäessä 100 uM 7-kloori-5-(2-kloorifenyyli)-1,5-dihydro-4,1-bentsotiatsepiini -2(3H)-one (CGP37157), kalvoa läpäisevä mitokondrioiden Na plus /Ca2 plus vaihdon estäjä. Viidessä tutkitussa synaptosomaalisessa valmisteessa 20 uM ekinakosidia yhdistettynä 100 uM CGP37157:ään vähensi 4-aminopyridiinin aiheuttamaa glutamaatin vapautumista 48,3 prosenttia ± 5,2 prosenttia (F(2,13) ​​= 136}. 49}}.000), joka on samanlainen kuin pelkkä ekinakosidin aiheuttama esto (46,2 prosenttia ± 2,3 prosenttia; p=0,89; kuva 2).

2.4 EkinakosidiEstää 4-aminopyridiinin aiheuttamaa glutamaatin vapautumista signaalin kautta proteiinikinaasi C:n kautta

Kuten kuvassa 3 on esitetty, 10 uM 2-[1-(3-dimetyyliaminopropyyli)indol-3-yyli]-3-(indol-3-yyli)maleimidiä (GF109203X), yleinen proteiinikinaasi C:n estäjä [29], vähensi 4-aminopyridiinin aiheuttamaa glutamaatin vapautumista (F(2,13) ​​= 19.46, p=0.{17 }}). GF109203X:llä käsitellyissä synaptosomeissa 20 uM ekinakosidi vähensi 4-aminopyridiinin aiheuttamaa glutamaatin vapautumista vain 5,5 prosenttia ± 1,8 prosenttia (p=0,89), vähemmän kuin pelkkä ekinakosidi (42,4 ± 2,3 prosenttia). prosenttia ; p=0.000). Samanlaisia ​​tuloksia saatiin 5,6,7,13-tetrahydro-13-metyyli-5-okso-12H-indolo[2,3-a]pyrrolo[3:lla ,4-c]karbatsoli-12-propaaninitriili (Go6976), selektiivinen Ca2 plus -riippuvaisten proteiinikinaasi C -isoformien ( , I, II, y) suhteen [29]. Kun läsnä oli 3 uM Go6976:ta, 20 uM ekinakosidia vähensi glutamaatin vapautumista 11,9 prosenttia ± 2,9 prosenttia (p=0,59), mikä tarkoittaa merkittävää vähennystä verrattuna pelkkään ekinakosidiin (42,4 prosenttia 2,3 prosenttia; p=0.59). 65}}.000; kuva 3). Sitä vastoin 3 uM rottleriini, Ca2 plus -riippumaton proteiinikinaasi C6:n estäjä [30], ei merkittävästi muuttanut 4-aminopyridiinin (1 mM) aiheuttamaa glutamaatin vapautumista (p=0,45). Siitä huolimatta rottleriinin läsnä ollessa 20 uM ekinakosidia aiheutti tehokkaasti 37,1 prosentin ± 5,6 prosentin vapautumisen eston (F(2,13) ​​= 19.72, p=0.{{88 }}), samanlainen kuin pelkällä ekinakosidilla (p=0.41; kuva 3). Lisäksi mitogeenin aktivoima proteiinikinaasi-inhibiittori 2-(2-amino-3-metoksifenyyli)-4H-1-bentsopyraani-4-oni) (PD98059) ) (50 uM) ja proteiinikinaasi A:n estäjä N-[2-(p-bromisinnamyyliamino)etyyli]-5-isokinoliinisulfonamidi (H89) (100 uM) vähensivät 4-aminopyridiinin aiheuttamaa glutamaatin vapautumista (p=0.{110}}). Jopa PD98059:n tai H89:n läsnä ollessa 20 uM ekinakosidia vähensi vapautumista tehokkaasti (F(2,13) ​​= 52.3, p=0.000; kuva 3).

Kuvio 4 osoittaa, että 1 mM 4-aminopyridiini lisäsi proteiinikinaasi C:n fosforylaatiota synaptosomeissa (t(4)=-6.871, p=0.002). Kun synaptosomeja esikäsiteltiin 20 uM ekinakosidilla 10 minuuttia ennen 4-aminopyridiinin lisäämistä, 4-aminopyridiinin aiheuttama proteiinikinaasi C:n fosforylaatio väheni huomattavasti (F(2,6)=29.202) , p=0.001).

2.5 Ekinakosidivälitteinen glutamaatin vapautumisen esto ei sisällä gamma-aminovoihappotyypin A (GABAA) reseptoria

Kuvassa 5 verrattiin ekinakosidin vaikutusta 4-aminopyridiinin aiheuttamaan glutamaatin vapautumiseen SR95531:n (GABAA-reseptorin antagonisti) puuttuessa tai läsnä ollessa. Lisäksi 100 uM SR95531 ei merkittävästi muuttanut 4-aminopyridiinin (1 mM) aiheuttamaa glutamaatin vapautumista. SR95531-käsitellyissä synaptosomeissa 20 uM ekinakosidin käyttö johti 43 prosentin estoon 4-aminopyridiinin aiheuttamaan glutamaatin vapautumiseen (F(2,12)=42.63, p { {18}}.000), joka ei eronnut merkittävästi pelkän ekinakosidin tuottamasta inhibitiosta (40 prosenttia ; p=0.000). Samanlainen tulos saatiin toisella GABAA-reseptorin antagonistilla, bikukuliinilla (50 uM). Bikukuliinin ja ekinakosidin läsnä ollessa mitattu vapautuminen oli merkittävästi erilainen kuin pelkän bikukuliinin läsnä ollessa (p=0.000).

3. Keskustelu

Tässä tutkimuksessaekinakosidi, vaikuttava yhdiste HerbassaCistanche, esti 4-aminopyridiinin aiheuttaman glutamaatin vapautumisen rotan aivokuoren hermopäätteissä. Mahdolliset taustalla olevat mekanismitekinakosidi-välitteistä glutamaatin vapautumisen estoa tutkitaan edelleen ja niistä keskustellaan täällä.

3.1 Ekinakosidivälitteisen glutamaatin vapautumisen eston taustalla olevat mekanismit

4-Aminopyridiinin aiheuttama glutamaatin vapautuminen sisältää kaksi komponenttia: fysiologisesti merkityksellisen Ca2 plus -riippuvaisen komponentin, joka syntyy glutamaattia sisältävien synaptisten vesikkelien eksosytoosin kautta; ja Ca2 plus -riippumaton komponentti, joka on peräisin pitkittyneestä depolarisaatiosta, joka aiheuttaa kalvopotentiaalin välittämän glutamaattikuljettajan vakaan tilan siirtymän ulospäin, mikä vaikuttaa sytosolisen glutamaatin ulosvirtaukseen [31]. Tässä havaitsimme, että ekinakosidi ei estänyt merkittävästi 4-aminopyridiinin aiheuttamaa glutamaatin vapautumista Ca2 plus -vapaan väliaineen läsnä ollessa (Ca2 plus -riippumaton vapautuminen). Lisäksi havaittu ekinakosidivälitteinen 4-aminopyridiinin aiheuttaman glutamaatin vapautumisen esto esti tehokkaasti bafilomysiini A1:llä (joka vähentää synaptisten rakkuloiden glutamaattipitoisuutta), mutta ei DL-TBOA:lla (joka ei-selektiivisesti estää kaikkia kiihottavia aminohappoja kuljettajan alatyypit). Nämä tulokset viittaavat siihen, että ekinakosidi vaikuttaa glutamaatin vapautumisen Ca2 plus -riippuvaiseen eksosytoosiin vaikuttamatta glutamaatin Ca2 plus -riippumattomaan sytosoliseen ulosvirtaukseen hermopäätteen plasmamembraanin glutamaattikuljettajan käänteisyyden kautta. Synaptisissa päätteissä Na plus -kanavan esto tai K plus -kanavan aktivaatio stabiloi kalvon kiihtyneisyyttä ja näin ollen vähentänyt Ca2 plus -sisäänpääsyä ja välittäjäaineen vapautumista [32,33]. Siksi ekinakosidivälitteisen glutamaatin vapautumisen eston taustalla oleva mahdollinen mekanismi sisältää synaptosomaalisen kiihottumisen vähenemisen. Tämä mahdollisuus on kuitenkin kestämätön kahden havainnon perusteella: (1) 4-aminopyridiinin aiheuttama kalvopotentiaalin depolarisaatio mitattuna kalvopotentiaaliherkällä väriaineella DiSC3(5) ei vaikuttanut ekinakosidin lisäyksellä; ja (2) ekinakosidi ei vaikuttanut 4-aminopyridiinin aiheuttamaan Ca2 plus -riippumattomaan glutamaatin vapautumiseen, joka on vapautumisen komponentti, joka riippuu vain kalvopotentiaalista [31]. Jos vaikutus ei johdu synaptosomaalisen kiihottumisen suppressiosta, se voi ilmetä Cav2.2 (N-tyyppi) ja Cav2.1 (P/Q-tyyppi) Ca2 plus -kanavien aktiivisuuden vähenemisenä yhdistettynä glutamaattieksosytoosiin hermopäätteet [34–36]. Käyttämällä fura-2:a osoitamme, että ekinakosidi vähentää merkittävästi 4-aminopyridiinin aiheuttamaa Ca2 plus -pitoisuuden nousua. Lisäksi tietomme osoittavat, että ekinakosidin estävä vaikutus 4-aminopyridiinin aiheuttamaan glutamaatin vapautumiseen laski 42,4 prosentista 2,3 prosentista 12,1 prosenttiin 3,9 prosenttiin Cav2.2:n (N-tyyppi) ja Cav2:n salpaajalle altistumisen jälkeen. .1 (P/Q-tyyppi) Ca2 plus -kanavat. Lisäksi havaitsimme, että ekinakosidi esti edelleen merkittävästi 4-aminopyridiinin aiheuttamaa glutamaatin vapautumista solunsisäisten Ca2 plus vapautumisen estäjien läsnä ollessa. Nämä tulokset osoittavat, että Cav2.2:n (N-tyyppi) ja Cav2.1:n (P/Q-tyyppi) Ca2 plus kanavaaktiivisuuden samanaikainen suppressio on mahdollinen mekanismi, joka on ekinakosidivälitteisen glutamaatin vapautumisen eston taustalla. Cav2.2:n (N-tyyppi) ja Cav2.1:n (P/Q-tyyppi) Ca2 plus kanavaaktiivisuuden yhdistetty aktivaatio ei kuitenkaan voinut estää ekinakosidin toimintaa kokonaan. Tästä syystä muut tuntemattomat Ca2 plus -kanavat tai muut presynaptiset reitit voivat olla osallisena estoon. Esimerkiksi GABAA-reseptorit ovat läsnä presynaptisella tasolla, ja niiden aktivaation on osoitettu estävän Ca2:n sekä sisäänvirtausta ja glutamaatin vapautumista [37]. Tässä tutkimuksessa GABAA-reseptoriantagonistit SR95531 ja bikukuliini eivät estäneet ekinakosidivälitteistä glutamaatin vapautumisen estoa, mikä viittaa siihen, että GABAA-reseptorit eivät ole mukana jännitteestä riippuvaisen Ca2 plus -kanavaaktiivisuuden vähentämisessä ja sitä seuraavassa glutamaatin vapautumisen estämisessä. Ca2 plus:n sisäänpääsy jännitteestä riippuvaisten Ca2 plus -kanavien kautta aktivoi useita proteiinikinaaseja, jotka liittyvät glutamaatin vapautumiseen hermopäätteissä, mukaan lukien mitogeenin aktivoiman proteiinikinaasin, proteiinikinaasi C:n ja proteiinikinaasi A:n. Tässä osoitamme, että proteiinikinaasi C:n estäjät antagonisoivat tehokkaasti ekinakosidia. -välitteinen glutamaatin vapautumisen esto; siitä huolimatta mitogeenilla aktivoitu proteiinikinaasi-inhibiittori PD98059 tai proteiinikinaasi A:n estäjä H89 oli tehoton. Lisäksi 4-aminopyridiinin aiheuttama proteiinikinaasi C:n fosforylaatio väheni synaptosomeissa sen jälkeen, kun niitä esikäsiteltiin ekinakosidilla pitoisuudessa, joka on tehokas estämään glutamaatin vapautumista. Siksi ekinakosidivälitteisen glutamaatin vapautumisen eston signalointireitti voi sisältää proteiinikinaasi C:tä. Proteiinikinaasi C on tärkeä solunsisäinen signalointijärjestelmä, joka on läsnä presynaptisella tasolla ja jolla on ratkaiseva rooli välittäjäaineiden eksosytoosissa. Proteiinikinaasi C fosforyloi esimerkiksi useita synaptisia proteiineja, jotka osallistuvat synaptisiin rakkuloiden kuljetuksiin tai värväämiseen ja eksosytoosiin, kuten myristoyloitu alaniinirikas C-kinaasisubstraatti [38, 39]. Tätä fosforylaatioprosessia voidaan lisätä depolarisaation stimuloidulla Ca2 plus -sisääntulolla, mikä helpottaa glutamaatin vapautumista [40]. Näin ollen voimme kohtuudella olettaa, että tässä havaittu ekinakosidin estävä vaikutus Ca2:n plus sisääntuloon voi vähentää proteiinikinaasi C -aktiivisuutta ja siten glutamaatin vapautumista.

Pls napsauta tästä päästäksesi osaan 2