Hajuttomat glutationi-mikroneulalaastarit ihon valkaisuun

Abstrakti:

Glutationi on luonnollinen ikääntymistä estävä aine, joka estää proteiinitiolien hapettumisen reaktiivisista happilajeista. Lääketeollisuudessa pelkistettyä glutationia (GSH) on käytetty laajalti ihon valkaisuun, koska se pystyy estämään tyrosinaasia.

Sen huono läpäisevyys ja epämiellyttävä haju rajoittavat kuitenkin sen käyttöä ihosovelluksissa. Tässä raportissa kerromme GSH:lla ladatusta liukenevasta mikroneulasta (MN), joka on valmistettu hyaluronihapolla (HA), joka mahdollistaa paremman läpäisyn ihon läpi ja vähentää GSH:n epämiellyttävää hajua. HA valittiin hajuttomien GSH-liuosten valmistukseen ja sitä käytettiin MN-valmisteissa GSH:n kantajana. GSH:lla ladatut MN (GSH-MN) -sarjat, jotka oli valmistettu MN:ää muodostavasta liuoksesta, joka sisälsi jopa 10 prosenttia GSH:ta, osoittivat hyvän kuvion tasaisuuden ja sopivat mekaaniset ominaisuudet ihoon viemistä varten. GSH-MN:t, joiden latauskapasiteetti on 17,4 prosenttia, liukenevat 10 minuutissa sian ihoon viemisen jälkeen ja vapauttavat ladatun GSH:n hapettumatta. Tässä uudessa lähestymistavassa yhdistyvät toiminnalliset biopolymeerit tyypillisen GSH-hajun vähentämiseksi ja edistynyt MN-teknologiaan perustuva transdermaalinen annostelu, joka parantaa ihon läpäisyä ilman kipua. Uskomme, että tämä tekniikka voisi laajentaa GSH:n käyttöä monilla kosmeettisilla aloilla.

Valkaisua varten havaitsimme, että Cistanchella on erittäin hyvä valkaisuvaikutus, ja Cistanchen fenyylietanolin kokonaisglykosidiuutteella on merkittävä alasäätelyvaikutus tyrosinaasin, ihon melaniinin synteesin pääasiallisen nopeutta rajoittavan entsyymin, toimintaan. Aktiivinen vaikutus voi vähentää melaniinirakeiden määrää ihossa (Yang Jianhua et ai. West China Pharmaceutical Journal, 2010, 25(05):533-535); tutki Cistanche deserticolan viittä tärkeintä fenyylietanoliglykosidimonomeeriä ja puhdistettua Cistanche deserticola bentseeniä. Etanoliglykosidien kokonaisvaikutuksen melaniinirakeiden pitoisuuteen ihmisen primääriviljeltyissä ihon melanosyyteissä havaittiin olevan merkittävä estävä vaikutus ihon melaniinin synteesiin; Cistanche deserticolan fenyylietanoliglykosidien ultraviolettispektri skannattiin ja havaittiin, että se voi absorboida tehokkaasti ultraviolettisäteilyä UVA- ja UVB-alueilla (Yang Jianhua et al. West China Pharmaceutical Journal, 2011, 26(3):{{9 }}); Cistanche deserticola -lajin fenyylietanoliglykosidien antioksidanttista aktiivisuutta tutkittiin ja tulokset osoittivat, että niillä kaikilla oli vahva huuhteluvapaus Base aktiivinen, on valkaiseva vaikutus.

Napsauta tästä ostaaksesi cistanche tubulosa

Avainsanat:

glutationi; transdermaalinen lääkkeen anto; hyaluronihappo; mikroneula; ihon valkaisuun.

1. Esittely

Glutationilla, luonnossa esiintyvällä -glutamyyli-kysteinyyliglysiinin tiolitripeptidillä, on tärkeä rooli solujen redox-reaktioissa ja se osallistuu melaniinin synteesin estämiseen, suojaa reaktiivisilta happilajeilta ja solujen myrkkyjen poistamiseen [1,2]. Vaikka glutationi on läsnä kehossa sekä hapettuneessa että pelkistetyssä muodossa, pelkistetty glutationi (GSH) on yhdiste, jolla on suuri biologinen hyöty [3,4].

Esimerkiksi sen kyky tukahduttaa melaniinin synteesiä tyrosinaasin eston avulla mahdollistaa sen käytön ihoa valkaisevana aineena kosmeettisissa valmisteissa [5–7]. Lisäksi GSH:ta voidaan käyttää immuunijärjestelmän vahvistajana, metallimyrkytyksen vastalääkenä ja sairauksien, kuten fibroosin, glaukooman ja niveltulehduksen, hoidossa [8–11]. Valitettavasti sen huono hyötyosuus ja epämiellyttävä haju rajoittavat GSH:n käyttöä klinikoilla sen monista terapeuttisista sovelluksista huolimatta.

Lääkepeptidejä annetaan tavallisesti parenteraalisesti käyttäen ihonalaisia ​​neuloja. Tämä reitti vaatii kuitenkin lääketieteellistä hoitoa jokaisella annoksella, ja potilaan hoitomyöntyvyys on huono injektion aikana koetun kivun vuoksi [12,13]. Vaikka GSH:ta on käytetty paikallisesti levittämään ihon läpi, sen epämiellyttävä haju ja kyvyttömyys kulkeutua marraskeden (SC, ihon uloin este) läpi rajoittavat sen käyttöä [14].

Viime aikoina minimaalisesti invasiivinen transdermaalinen annostelujärjestelmä mikroneuloilla (MN) on saanut suurta huomiota lääkäreiltä, ​​erityisesti sellaisten bioaktiivisten aineiden, kuten peptidien ja proteiinien, kuljettamisessa, jotka ovat labiileja maha-suolikanavan pH:lle ja alttiita entsymaattiselle hajoamiselle [15].

Voidaksemme olemassa oleviin GSH-annostelumenetelmiin liittyvät rajoitukset visioimme nopeasti liukenevan MN-laastarin, joka valmistettiin deodoroimalla biopolymeereja GSH:n tehokkuuden ja potilaan hoitomyöntyvyyden parantamiseksi. Biopolymeerien, kuten hyaluronihapon (HA), korkea bioyhteensopivuus ja säädettävät fysikaalis-kemialliset ominaisuudet tekevät niistä sopivia ehdokkaita MN-materiaaleina [16,17]. Lisäksi biopolymeerit, joissa on monifunktionaalisia ryhmiä, voivat olla vuorovaikutuksessa molekyylien kanssa palautuvien ionivuorovaikutusten, vetysidosten ja van der Waal-voimien kautta, mikä myötävaikuttaa niiden korkeaan kuormituskykyyn ja hyviin adsorptioominaisuuksiin [18]. Koska MN:iin ladattujen lääkkeiden vapautumiskinetiikkaa voidaan hallita käytettyjen polymeerien liukenemisen tai hajoamisnopeuden avulla, liukenevia MN-alustoja voidaan soveltaa lääkkeiden jatkuvaan ja pitkäaikaiseen vapautumiseen ihon läpi [19–22].

Raportoimme tässä uudesta lähestymistavasta GSH:n tehokkaaseen ja hajuttomaan transdermaaliseen annosteluun käyttämällä hajunpoistetuista biopolymeereistä valmistettuja liukenevia MN-laastareita. Useiden biopolymeerien hajuttomien GSH-formulaatioiden seulonnan jälkeen HA valittiin MN:n materiaaliksi ja sitä käytettiin GSH:lla ladattujen MN-laastarien valmistukseen. HA MN:iin ladatun GSH:n määrällä määritettiin olevan optimaaliset anti-melanogeeniset vaikutukset ja pienempi sytotoksisuus, kuten sytotoksisuus- ja tyrosinaasin estotutkimukset vahvistivat. GSH:lla ladatut HA MN (GSH-HA MN) -ryhmät arvioitiin niiden yhtenäisen rakenteen, geometrian, halutun mekaanisen lujuuden ja ihon läpäisykyvyn perusteella. GSH-HA MN -laastareiden kiinnittämisen jälkeen eläimen ihokudokseen tutkittiin niiden liukenemiskykyä ja lääkkeen vapautumismalleja.

2. Materiaalit ja metodit

2.1. Materiaalit

Pelkistetty glutationi (GSH), gelatiini (sian ihosta), 3-(4,5-dimetyylitiatsol-2-yyli)-2, 5- difenyylitetratsoliumbromidi (MTT) ja kojiinihappo (KA) ostettiin Sigma-Aldrichilta (St. Louis, MO, USA), natriumhyaluronaatti (100 k, HA) ostettiin SNVIA:lta (Busan, Korea). Kondroitiinisulfaatti (CS) ostettiin Wako Chemicalsilta (Osaka, Japani). - Melanosyyttejä stimuloiva hormoni (-MSH) ostettiin TOCRIS:ltä (Bristol, UK) ja apoptoosin havaitsemispakkaus, jossa käytettiin FITC (fluoreseiini-isotiosyanaatti) -leimattua anneksiini V:tä, ostettiin BD Biosciencesilta (Bedford, MA, USA). Nestemäinen esipolymeeri (Sylgard 184A) ja kovetusaine (Sylgard 184B) polydimetyylisiloksaani (PDMS) muovausta varten ostettiin Dow Corningilta (Midland, MI, USA). Kaikkia kemikaaleja käytettiin ilman lisäpuhdistusta. Sian nahka (karvat poistettu) hankittiin paikallisesta lihakaupasta ja pidettiin -20 ◦C:ssa, kunnes sitä käytettiin kokeissa.

2.2. Soluviljely

Ihmisen keratinosyytit (HaCaT-solut) ja hiirestä peräisin olevat melanoomasolulinjat (B16F10), joita käytettiin in vitro -tutkimuksiin, saatiin ATCC:ltä (Manassas, VA, USA). Soluja kasvatettiin GSH-vapaassa DMEM-elatusaineessa (Hyclone, Logan, UT, USA), jota oli täydennetty 10 prosentilla naudan sikiön seerumilla (FBS, Hyclone), 2 mM glutamiinilla (Sigma-Aldrich), 100 U/ml penisilliinillä (Hyclone), ja 100 ug/ml streptomysiiniä (GenDEPOT, Barker, TX, USA) 37 ◦C:ssa kostutetussa ilmakehässä, jossa on 5 % CO2:ta.

2.3. Hajutestit

Hajupisteytysmenetelmä suoritettiin arvioimaan biopolymeerien vähentävää vaikutusta GSH-hajuun [4]. Biopolymeerin (natriumhyaluronaatti, gelatiini ja kondroitiinisulfaatti) määräksi kiinnitettiin 1 0 painoprosenttia kokonaisliuoksessa ja GSH:ta sekoitettiin eri pitoisuuksina (1.0 prosenttia , 2.{101} {9}} prosenttia, 2,5 prosenttia ja 5,0 painoprosenttia) deionisoidussa (Di) vedessä. 30 minuutin sekoituksen jälkeen 10 vapaaehtoisen koepaneeli haisi liuoksen, joka sisälsi biopolymeerin ja GSH:n seosta. GSH-liuosta ilman biopolymeeriä käytettiin vertailuna sekanäytteiden rikkipitoisen hajun vertailussa.

Jokaista vapaaehtoista pyydettiin ilmaisemaan näkemyksensä sekaliuoksen hajusta seuraavalla 5-pisteasteikolla: 1: ei hajua, 2: tunnistettava haju, 3: helposti havaittava haju, 4: voimakas haju ja 5: voimakas haju .

2.4. Kaasukromatografian (GC) mittaukset

Pisteytystulosten perusteella vapautuneen H2S:n määrä kvantifioitiin kaikille GSH-HA-formulaatioille kaasukromatografialla (Shimadzu, Tokio, Japani) käyttämällä pulssikehyksen fotometristä ilmaisinta (PFPD) [23,24]. Liuokset, jotka sisälsivät 1 %, 2,5 % ja 5 % (painosta) GSH:ta, sekoitettiin 1 0 % (painon mukaan) HA:n kanssa ja 1 ml injektoitiin 10 ml:n ruskeaan tyhjiöpulloon. Pulloa säilytettiin uunissa 40 ◦C 1 tunnin ajan ja otettiin sitten ulos. Syntynyt kaasu (100 ui) kerättiin ruiskulla ja injektoitiin Shimadzu GC:hen, joka oli varustettu PFPD:llä. Tärkeimmät rikkiyhdisteet erotettiin 30 m × 0,25 mm id lasikolonnissa (DB-1, J&W) 90 ◦C:ssa ja kantajavirtauksella (typpi) 1 ml/min. Havaitsemis- ja injektiolämpötilat olivat 250 ja 150 ◦C. H2S:n määrä mitattiin käyttämällä standardinäytteitä. PFPD:n herkkyys oli 10 ppb H2S:lle. Kaikkien näytteiden tietojen vahvistettiin olevan standardikäyrän alueella.

2.5. Sytotoksisuustestit

GSH:n sytotoksisuus arvioitiin käyttämällä MTT-määritystä ja anneksiini V-FITC -värjäystä. Lyhyesti sanottuna HaCaT-soluja (solujen lukumäärä: 1 × 104 ) käsiteltiin aineilla 0.1, 0.25, {{10}}.5 ja 1.0 mg/ml GSH:ta DMEM-elatusaineessa. 24, 48 ja 72 tunnin käsittelyn jälkeen soluun lisättiin 50 µl MTT-liuosta ja inkuboitiin 1 tunti ennen väliaineen imemistä. Sen jälkeen lisättiin 100 µl dimetyylisulfoksidia (DMSO) ja elävien solujen prosenttiosuudet laskettiin mittaamalla 540 nm:n absorbanssi käyttämällä MULTISKAN GO -lukijaa (Thermo Scientific, Waltham, MA, USA). Apoptoosi mitattiin värjäämällä samanaikaisesti anneksiini V-FITC:llä ja propidiumjodidilla (PI). HaCaT-soluja (1 x 106 ui) käsiteltiin 0,1, 0,25, 0,5 ja 1,0 mg/ml GSH:lla. 72 tunnin käsittelyn jälkeen solut kerättiin, trypsinoitiin, pestiin kylmällä PBS:llä ja värjättiin 1X sitoutumispuskurilla, joka sisälsi anneksiini V-FITC -liuosta ja PI:tä. Sen jälkeen soluja inkuboitiin huoneenlämmössä 15 minuuttia pimeässä. Värjäytyneet solut analysoitiin virtaussytometrialla 1 tunnin sisällä. Sekä apoptoottiset että elävät solut analysoitiin käyttämällä Becton Dickinson FACSscan -virtaussytometriä ja BD FACSDiva -ohjelmistoa (BD Biosciences, San Jose, CA, USA).

2.6. Solujen melaniinipitoisuuden ja tyrosinaasiaktiivisuuden määritys

GSH:n ehdotettu valkaisuvaikutus arvioitiin mittaamalla sen kyky estää tyrosinaasiaktiivisuutta. Lyhyesti sanottuna hiirestä peräisin olevia B16F10-melanoomasoluja kylvettiin 6-kuoppaviljelylevylle pitoisuudella 50 × 104 solua/kuoppa ja sallittiin kiinnittää yön yli. Solut käsiteltiin {{10}}:lla (tyhjä), 0.1, 0.25, 0,5 ja 1,0 mg/ml GSH:ta ja 10 µM kojiinihappoa ( KA) positiivisena kontrollina 4 tunnin ajan ja sen jälkeen stimuloitiin -MSH:lla (1 uM) 72 tunnin ajan tyrosinaasiaktiivisuuden indusoimiseksi. Elatusaineen poistamisen jälkeen solut liuotettiin 500 ul:aan 1 N NaOH:ta ja inkuboitiin 1 tunti 60 °C:ssa melaniinin liuottamiseksi. Melaniinipitoisuus määritettiin mittaamalla absorbanssi 405 nm:ssä. Tyrosinaasiaktiivisuutta varten solut hajotettiin 100 ul:ssa 50 mM natriumfosfaattipuskuria (pH 6,5), joka sisälsi 5 µl 1 % Triton X-100 ja 5 µl 0,1 mM fenyylimetyylisulfonyylifluoridia. 10,000 g (30 min, 4 ◦C) sentrifugoinnin jälkeen supernatantit, joissa oli 20 µl l-3,4-dihydroksifenyylialaniinia (l-DOPA), ladattiin {{ 44}}kuoppalevylle, ja absorbanssi mitattiin 492 nm:ssä 37 ◦C:ssa.

2.7. GSH-MN-laastarien valmistus

Luodinmuotoiset GSH-MN-sarjat (10 × 10 MNs/cm2) valmistettiin uudelleenkäytettävällä PDMS-muotilla liuotinvalulla 10-prosenttista HA:ta sisältävää vesiliuosta. liuokset, joissa on eri GSH-pitoisuudet (0 prosenttia, 1,0 prosenttia, 2,5 prosenttia ja 5,0 painoprosenttia). Negatiiviset PDMS-muotit, joissa oli luodin muotoisia onteloita, kopioitiin mikrotyöstyksellä valmistetuista metallisista MN-ryhmistä [16]. MN:ää muodostavat liuokset (350 µl HA- tai HA/GSH-liuoksia) pipetoitiin PDMS-muottiin ja kuivattiin 40 ◦C:ssa 12 tuntia tyhjössä tapahtuneen kaasunpoiston jälkeen. Kuivatut MN-sarjat kuorittiin varovasti pois muotista. Valmistettujen MN-ryhmien morfologia karakterisoitiin digitaalisella (AM413ZT, Dino-Lite, Taiwan) ja optisella (Eclipse TS100, Nikon, Japani) mikroskopialla. HA MN:t, jotka sisälsivät 0, 1, 2,5 ja 5 mg/ml GSH:ta, kutsuttiin nimellä GSH0-HA MN, GSH1-HA MN, GSH2.5-HA MN ja GSH5-HA MN.

2.8. Murtumatestit

Yksittäiset HA MN:llä ja GSH:lla ladatut HA MN:t (GSH0-HA MN, GSH1-HA MN ja GSH2.5-HA MN) kiinnitettiin syanoakrylaattiliimalla (Loctite 4{{ 7}}1, Loctite Corp, Dublin, Irlanti) kiinnittääksesi yleisen testauskoneen (UTM, A&D 5000H, A&D Sales Corp, Daegu, Korea) alempaan kahvaan sijoitettua asennustappia. Mekaanisen testerin yläkahvaa liikutettiin aksiaalisesti alas kohti MN-kärkeä nopeudella 0,1 mm/min. Myötövoima mitattiin koettimen siirtymänopeuden funktiona ja ilmaistiin newtoneina (N).

2.9. Ihon kiinnitystesti

Ihon kiinnitystesti suoritettiin MN:iden läpäisykyvyn, todennäköisen vääristymän laajuuden ja mahdollisen kudoksen taipumisen tarkistamiseksi sen asettamisen aikana. GSH0-HA MN, GSH1-HA MN ja GSH2.5-HA MN kiinnitettiin syanoakrylaattiliimalla metallipintaan kiinnittämällä UTM:n yläkahvalla ja laitettiin sisään 10 mm/min voima mekaanisen testerin pohjalle sijoitettuun sian ihoon (3 × 3 cm2, ~2 mm paksu) [25]. Sian ihoa käytettiin sen jälkeen, kun ihonalainen rasvakerros oli poistettu skalpellilla.

2.10. Liukenemistesti

GSH2.{1}}HA MN:ää levitettiin sian iholle (3 × 3 cm2) useissa ennalta määrätyissä aikapisteissä (3, 5, 7 ja 10 minuuttia). MN-laastarien poistamisen jälkeen MN-kärkien liuennut korkeus mitattiin optisella mikroskoopilla (Eclipse TS100, Nikon, Tokio, Japani).

GSH2:n lävistysmerkin vahvistamiseksi.5-HA MN -laastarit, 0,5 mg väriainetta (rodamiini B) lisättiin 1 ml:aan 2,5-prosenttista (painon mukaan) sekoitettua GSH-liuosta MN:iden valmistamiseksi. . Tämän jälkeen MN-sarjan valmistus käyttämällä väriaineeseen sekoitettua liuosta valmistettiin käyttämällä samaa edellä kuvattua menetelmää. MN-ryhmistä muodostunut lävistysmerkki, niiden sijainti sian ihoon siirtymisen aikana ja kudoksen taipumisen aste analysoitiin digitaalisella mikroskoopilla (AM413ZT, Dino-Lite, Taiwan). Kaikki muutokset MN:n morfologiassa lisäyksen jälkeen tutkittiin optisella mikroskoopilla.

2.11. Latauskapasiteetti ja kapselointitehokkuus

HA MN:iin ladatun GSH:n määrän määrittämiseksi GSH{{0}}HA MN:stä ja GSH2.5-HA MN:stä saadut MN-kärjet leikattiin ja liuotettiin täysin PBS:ään (pH 7,4). ) 24 tunnin ajan. GSH-määrän määrä MN-kärjeissä määritettiin analysoimalla 10 µl näyteliuosta käyttämällä korkean erotuskyvyn nestekromatografiaa (HPLC, e2695, Waters, USA) SunFire C18 -kolonnilla (100Å, 5 µm, 4,6). × 250 mm, Waters). HPLC ajettiin käyttämällä asetonitriilivettä (5:95) ja 0,1-prosenttista trifluorietikkahappoa (TFA) liikkuvana faasina virtausnopeudella 0,8 ml/min. HPLC-tietojen perusteella lastauskapasiteetti (LC) ja kapselointitehokkuus (EE) laskettiin käyttämällä seuraavia yhtälöitä: Kuormituskapasiteetti (prosenttia)=men mtot × 100 (1). Kapseloinnin tehokkuus ( prosenttia )=miehiä min × 100 (2)

missä miehet edustavat kapseloitua lääkemäärää MN-kärjeissä, suurin osa on MN-kärkien kokonaismassaa ja min edustaa lääkemäärää MN:tä muodostavissa liuoksissa [26].

2.12. In vitro GSH-ihon läpäisytestit

GSH2:sta vapautuneen pelkistetyn GSH:n ex vivo -läpäisykinetiikan tutkimiseksi ihon läpi.5-HA MN -laastarit, staattiset diffuusio-Franzin solutestit suoritettiin ajasta riippuvan GSH:n vapautumisnopeuden laskemiseksi GSH2:n kautta. {5}}HA MN:t ja sen diffuusio ihon läpi yhdessä GSH-HA-vertailuliuoksen kanssa. GSH2.5-HA MN-laastarit ja 350 µL GSH2.5-HA-liuosta, jota käytettiin MN-valmisteissa, levitettiin leikatulle Sprague-Dawley (SD) -rotan iholle (paksuus noin 2 mm) sijoitetaan luovuttajan ja reseptorikammion väliin Franzin diffuusiokennossa, vastaavasti. Kun GSH2{15}}HA MN -laastarit oli asetettu rotan ihoon, MN-taustalle laitettiin hydrokolloidinen liimalappu (NeoDerm Roll, EVERAID, Yangsan, Korea) lääkkeen annostelun aikana. Reseptorikammio, jossa oli sivuvarsi, täytettiin 22 ml:lla tuoretta PBS-puskuria (pH 7,4) ja pidettiin 37 ◦C:ssa [27]. Yksi millilitra näytettä otettiin kullakin ajankohdalla (0,5, 1, 2, 4, 8, 12, 24, 36 ja 48 h) Franz-solureseptorikammiosta ja täytettiin uudelleen yhtä suurella määrällä tuoretta PBS:ää (pH 7,4). ). GSH2.{34}}HA MN -laastarit poistettiin rotan iholta 1 tunnin kuluttua. GSH:n määrä, joka vapautui MN-kärjestä ja läpäistyi rotan ihon läpi, analysoitiin HPLC:llä käyttämällä edellä kuvattua protokollaa. GSH havaittiin mittaamalla absorbanssi aallonpituudella 385 nm ja lääkkeen pitoisuus ilmaistiin mg:na.

2.13. Tilastollinen analyysi

Kaikki tulokset ilmaistaan ​​keskiarvona ± keskihajonta (SD) ja analysoidaan Studentin t-testillä. Merkitystasoksi asetettiin p < 0.05.

3. Tulokset ja keskustelu

3.1. Seulontatestit hajunpoistavien polymeerien valitsemiseksi

Hajun intensiteetin perusteella pisteytysanalyysi suoritettiin asteikolla 1–5 arvioimaan H2S:n vapautumista vapaan GSH- ja GSH-biopolymeeriformulaatioiden automaattisesta hajoamisesta. Koe suoritettiin ottamalla mukaan 10 satunnaisesti valittua tervettä vapaaehtoista kummasta tahansa sukupuolesta. Voimakas haju yhdistettiin suurempaan vapautuneen H2S-määrään ja päinvastoin. Kaikki gelatiinin (4,75 ± 0,2) ja CS-GSH:n (3,25 ± 0,95) pitoisuudet (1.0–5.0 painoprosenttia) formulaatiot ovat saaneet korkeammat pisteet, kun taas HA-GSH (1,5 ± 0,35) ovat saaneet alhaisemmat pisteet kuin pelkkä GSH (2,75 ± 0,61; kuva 1a). Gelatiini-GSH- ja CS-GSH-formulaatioiden korkeat pisteet verrattuna pelkkään GSH:hen johtuivat niiden ominaisista hajuista vapautuneen H2S:n hajun lisäksi.

Myöhemmin hajupisteiden perusteella vapautuneen H2S:n (ppm) kvantitatiivinen estimointi suoritettiin GC:llä GSH-HA-formulaatiolle eri pitoisuuksilla. Vapautuneen H2S:n määrän havaittiin olevan vähintään 1.0 prosenttia ja 2,5 prosenttia (0,55 ± 0.01 ja {{13} }.49 ± 0.03 ppm) ja enintään 5.0 prosenttia (1.03 ± 0.{{27} }1 ppm) GSH:ta formulaatiossa. Kaikissa pitoisuuksissa arvojen havaittiin olevan pienempiä kuin pelkän GSH:n arvot (0,59 ± 0.03, 0,75 ± 0,04 ja 1,15). ± 0,05 1,0 prosentille, 2,5 prosentille ja 5 prosentille GSH:ta, vastaavasti; kuvio 1b). Syynä tähän tulokseen oli, että HA:ssa oleva substituoitu Na plus reagoi GSH:n tioliryhmän kanssa lisäkuvassa S1 esitetyn reaktiokaavan kautta. Vahvistettiin, että hajun väheneminen johtui H2S:n tuotannon vähenemisestä (lisäkuva S1) [28,29]. Nämä tulokset osoittavat, että HA:lla on parempi deodoranttivaikutus verrattuna gelatiiniin ja CS:ään, minkä vuoksi se valittiin MN:ien valmistukseen tässä tutkimuksessa. Koska HA:n suurin hajunpoistokyky vapautuneelle H2S:lle havaittiin 1,0 prosentin, 2,5 prosentin ja 5,0 prosentin GSH-HA-formulaatioilla (kuvio 1b), nämä kolme pitoisuutta valittiin MN:ien valmistukseen.

3.2. GSH:n vaikutus sytotoksisuuteen ja tyrosinaasiaktiivisuuteen

MTT-määritystä käytettiin määrittämään, onko GSH sytotoksinen HaCal:lle. Fluoresenssiaktivoidun solulajittelun (FACS) analyysi suoritettiin käyttämällä anneksiini V:tä, joka tuulee spesifisesti ja voimakkaasti solun pinnan PI:tä vasten varmistaakseen, havaittiinko apoptoottista vai nekroottista solukuolemaa (30GSH-hoito0 .2-1.0 mg/ml ei merkittävästi muuttanut elävien solujen osuutta 72 °C:ssa verrattuna vehikkelillä käsiteltyihin soluihin (kuva 2a). Virtauksella ei varmistettu GSH:n sytotoksisia vaikutuksia HaCaT-soluihin sytometria-analyysi käyttäen anneksiini V:tä. HaCaT-solujen altistuminen 0, 0.1, 0.25, 0.5 tai 1 mgml GSH:lle 72 tunnin ajan johti pitoisuudesta riippuvainen apoptoosin induktio (kuvio 2b, c) Altistuminen GSH:lle ei aiheuttanut merkittävää lisäystä apoptoottisissa soluissa (7,90 plus 1.02-13,99 plus 0,37 prosenttia ) ja elävien solujen osuuden lasku (88,38 plus 1.02-80,81 plus 0,67 prosenttia) verrattuna vehikkelillä käsiteltyihin soluihin (4,85 plus 0,72 prosenttia ja 90,47 plus 0,93 prosenttia apoptoottisten ja vastaavasti elävät solut; kuvio 2b, c) Nämä tulokset viittaavat siihen, että GSH ei ole myrkyllinen ihmisen keratinosyyteille ja sitä voidaan käyttää turvallisesti ihmisen iholla.

Tyrosinaasi on entsyymi, joka vastaa melaniinin synteesistä. GSH:n valkaisuvaikutuksia arvioitiin mittaamalla sekä melaniinin tuotannon estonopeus että tyrosinaasin nopeutta rajoittavan entsyymin aktiivisuus melanogeneesissä. B16F10-soluja esikäsiteltiin 10 uM KA:lla ja GSH:lla (0,1-1,0 mg/ml) 4 tunnin ajan ja sitten stimuloitiin -MSH:lla (1 uM) 72 tunnin ajan. GSH-käsittely esti merkittävästi -MSH:n indusoimaa melaniinin tuotantoa (kuvio 3a). Tämän havainnon mukaan -MSH:n aiheuttama tyrosinaasiaktiivisuus (345,60 ± 18,29 prosenttia ilman GSH-hoitoa) laski merkittävästi 207:ään.{22}} ± 2,78 prosenttia hoidettaessa 1 mg/ml GSH:ta (kuva 3b).

3.3. GSH-kuormitettujen HA MN:ien valmistus ja niiden mekaaniset ominaisuudet

GSH:n kuljettamiseksi ihon läpi minimaalisesti invasiivisella tavalla valitsimme HA:n MN-materiaaliksi sen kyvyn perusteella vähentää H2S:ää, mikä vahvistettiin pisteytystesteillä ja kaasukromatografisilla tiedoilla (kuva 1). HA:ta ja GSH:ta sisältäviä MN:n muodostavia liuoksia käytettiin GSH:lla ladattujen HA MN (GSH-HA MN) -ryhmien valmistukseen. Sarjat valmistettiin liuotinvalumenetelmällä käyttämällä PDMS-muottia, jossa oli luodin muotoisia onteloita. GSH-MN-ryhmillä (100 MNs/cm2) oli tasainen kuvio, jonka korkeus oli 770 ± 5 um, pohjan halkaisija 172,25 ± 2,5 um ja kärjen halkaisija 7,8 ± 2,5 um kulman ollessa 40° ± 2. (Kuva 4a). MN:n geometria määritettiin varmistamaan SC-kerroksen tunkeutuminen ja GSH:n transdermaalinen annostelu minimaalisella verisuoni- tai hermosoluvauriolla kivun ja kapillaariverenvuodon välttämiseksi levityskohdassa. GSH-HA MN:ien yhtenäiset ominaisuudet saatiin, kun MN:t valmistettiin käyttämällä MN:ää muodostavia liuoksia, jotka sisälsivät 2,5 prosenttia GSH:ta, mutta joitain taipuneita MN:itä havaittiin, kun niitä valmistettiin korkealla pitoisuudella (5 prosenttia) GSH:ta (lisäkuva S2).

GSH-HA MN:ien mekaanisia ominaisuuksia tutkittiin puristustilassa. Yksittäinen MN, joka oli kiinnitetty syanoakrylaattiliimalla UTM:n pohjapinnalle, puristettiin aksiaalisesti litteällä metallilevyllä, joka oli kiinnitetty käyttämällä koneen yläkahvaa nopeudella 0,1 mm/min (kuva 4a–c) . Myötövoimaksi eli voimaksi, joka tarvitaan materiaalin kimmoisuuden menettämiseen, määritettiin olevan 0.25, 0.39 ja 0.4{{1{{17 }}}} N, jonka poikkeama on ±0.03 GSH0-HA MN:lle, GSH1-HA MN:lle ja GSH2:lle.5-HA MN:t, vastaavasti (kuvio 4d). Lisäysvoiman todettiin olevan 0,36 ± 0.003, 0,39 ± 0,015 ja 0,37 ± 0,005 GSH0-HA MN:ille, GSH{{30 }}HA MN:t ja GSH2.{32}}HA MN:t. Sekä myötövoiman että sisäänvientivoiman havaittiin riittävän MN:ien työntämiseen sian ihoon ilman murtumia, vääristymiä tai kudoksen taipumista.

3.4. GSH-HA MN:ien in vitro -liukenemistestit

Biopolymeerin liukenemisaika määrittää lääkkeen vapautumismallin ja vaikutuksen alkamisen mille tahansa formulaatiolle. GSH:n vapautumiseen tarvittavan ajan ennustamiseksi sian ihoon lisättiin yksittäinen MN (GSH, 5-HA), joka on rakenteeltaan samanlainen kuin ihmisen iho. Mikroskooppinen analyysi osoitti MN:ien ajasta riippuvan liukenemisen. Kun GSH-MN:itä oli levitetty iholle 12 minuutin ajan, MN-kärjet liukenivat täysin, mikä aloitti sen nopean vapautumisen mallin (kuvio 5a, b). GSH 5-HA MN -laastarien ihon tunkeutumisen vahvistamiseksi rodamiinivärillä ladattuja MN-laastareita (1,5 x 1,5 cm) asetettiin sian iholle 20 N:n syöttövoimalla 1 minuutin ajan. Kun olimme poistaneet väriaineilla ladatut MN-laastarit, havaitsimme joukon väritäpliä, jotka vastaavat kutakin neulaa, mikä vahvisti GSH 5-HA MN:ien työntymisen ihoon (kuva 5c).

Latauskapasiteetti viittaa lääkkeen enimmäismäärään, joka voidaan altistaa kuljetusalustalle ja määrittää sen lataustehokkuuden. GSH-HA MN -laastarien latauskapasiteetti määritellään ladatun lääkkeen (GSH) massana MN-kärkissä jaettuna GSH-HA MN-kärkien kokonaismassalla. Lataustehokkuuden tarkistamiseksi GSH:lla ladatut MN-kärjet leikattiin ja liuotettiin PBS:ään (pH 7,4), ja kärkiin ladatun GSH:n määrä analysoitiin HPLC:llä. GSH:n latausmäärä 100 MN kärjessä oli {{10}},29 ± {{20}}.03 mg ja 0,56 ± 0,03 mg GSH1-HA MN -laastareille ja GSH2.{16}}HA MN -laastareille. Kun otetaan huomioon GSH-MN-kärkien kokonaismassa (100 MNs, 2 ± 0,2 mg), kuormituskyky oli 11,26 ± 1,24 prosenttia ja 21,33 ± 1,13 prosenttia, kun taas kapseloinnin tehokkuuden havaittiin olevan 8,36 ± 0,92 prosenttia ja 6,3 GSH1-HA MN ja GSH2.{40}}HA MN, vastaavasti (taulukko 1). Samanlaiset arvot HA:GSH-painosuhteen (10:1 tai 10:2,5) välillä MN:ää muodostavissa liuoksissa ja GSH:n latauskapasiteetin välillä MN-laastareissa viittaavat GSH:n tasaiseen jakautumiseen MN-laastareissa.

3.5. Ex Vivo GSH-HA MN -laastarien ihonläpäisytesti

GSH:n vapautumisen alkamisen ja keston arvioimiseksi GSH:sta,5-HA MN:istä, Franzin solututkimus suoritettiin 48 tunnin ajan asettamalla SD-rotan iho simuloituihin fysiologisiin olosuhteisiin (kuva 6). GSH 5-HA MN:t osoittivat suhteellisen nopeaa lineaarista vapautumiskinetiikkaa alkuvaiheessa12 tuntia, jota seuraa hidas vapautumisnopeus ajan myötä.

Ihon läpi imeytynyt GSH-määrä MN-levityksen jälkeen oli ~ 1,4 mg kokeen ensimmäisen 12 tunnin aikana ja saavutti ~ 1,6 mg 48 tunnin ajan. GSH:ta toimitettiin suurempi määrä kuin ladattu määrä MN-kärjeissä. Tämä määrä ei sisällä vain GSH2:een ladattua GSH:ta.{7}}HA MN-kärjet, vaan myös pohjakerrokseen lääkesäiliönä lisätyn GSH:n. Sitä vastoin GSH-HA-liuosta annosteltiin hitaasti pieninä määrinä (~0,2 mg) GSH:n heikon ihon läpäisyn vuoksi. Koska ihmisen kasvuhormonin transdermaalinen annostelu käyttämällä karboksimetyyliselluloosasta ja trehaloosista valmistettuja MN-soluja osoitti lyhyen tmax-arvon (n. 30 min) MN:n levittämisen jälkeen ja osoitti samanlaisia ​​farmakokineettisiä profiileja kuin SC-injektiolla [19], GSH-HA-laastarin, jossa oli nopea vesi- absorptio-ominaisuudet olisivat sovellettavissa systeemiseen GSH-annostukseen. In vitro -tutkimuksen perusteella hoito 1 mg/ml GSH:lla esti merkittävästi melaniinin tuotantoa ja tyrosinaasin aktiivisuutta. Kun otetaan huomioon pieni tilavuus (~150 µL/cm2) interstitiaalista nestettä ihossa [31], HA MN-laastareilla (1,6 mg GSH/1 cm2 MN-laastareilla) paikallisesti toimitettu GSH voisi toimia antioksidanttina MN:n liukenemisprosessin aikana. Koska MN-soluihin ladatun GSH:n vapautumiskinetiikkaa voidaan hallita MN-materiaalin silloitustiheydellä [32,33], turpoava MN-alusta olisi hyödyllinen tehokkaalle GSH:n kuljetukselle minimaalisilla sivuvaikutuksilla.

4. Johtopäätökset

GC:n hajunpoistokapasiteetin (pistearvon) ja tulosten perusteella valitsimme HA:n kehittämään biohajoavia MN-laastareita GSH:n hajuttomaan transdermaaliseen annosteluun. HA peitti GSH:n pahan hajun tehokkaammin kuin gelatiini ja CS. HA-MNs-laastarin (GSH2{2}}HA) kestävyys oli riittävä tunkeutumaan ihon läpi vahingoittumatta. GSH:n vapautumisen HA-MNs-laastareista (GSH1-HA ja GSH25-HA) havaittiin olevan tasaista tietyn ajanjakson aikana, kuten vastaavat kokeet osoittavat. Sytotoksiset ja tyrosinaasia estävät tutkimukset osoittivat, että GSH-pitoisuus 1 mg/ml on turvallinen ja tehokas ihon valkaisutarkoituksiin. Kaiken kaikkiaan kehitettyjen HA MN -laastarien käyttökelpoisuus lupaavana alustana GSH:n tai lääkkeiden, joilla on haitallisia tai ei-hyväksyttäviä organoleptisiä ominaisuuksia, on osoitettu tässä tutkimuksessa väitettyjen kokeellisten tietojen perusteella.

Täydentävät materiaalit:

Kuva S1: Natriumhyaluronaatin vaikutus hajun vähentämiseen, Kuva S2: GSH5 -HA MN -taulukon kuvat.

Tekijän panokset:

Conceptualization, YL, Y.-SJ ja SYY; Metodologia, YL, SHK, K.-YS ja SK; Datan kuratointi, CK ja HL; Kirjoitus – alkuperäinen luonnos, YL, SK, SYY; arvostelu ja editointi, SK, Y.-SJ, K.-YS ja SYY; Valvonta, SYY Kaikki kirjoittajat ovat lukeneet ja hyväksyneet käsikirjoituksen julkaistun version.

Rahoitus:

Tätä tutkimusta tuki Korean kansallinen tutkimussäätiö (NRF), jota rahoitti tiede- ja ICT-ministeriö (NRF-2018R1A4A1025623) ja National Creative Research Initiative Programme National Research Foundation of Korean (NRF) kautta. Tiede-, ICT- ja tulevaisuudensuunnitteluministeriön rahoittama (NRF-2017R1D1A3B03035360).

Eturistiriidat:

SYY on patentin keksijä, joka on lisensoitu SNVIA:lle, joka kehittää hajuttomia GSH-kosmetiikkatuotteita. Tätä mahdollista eturistiriitaa hallitsee Pusan ​​National University.

Viitteet

1. Forman, HJ; Zhang, H.; Rinna, A. Glutationi: Yleiskatsaus sen suojaaviin rooleihin, mittaukseen ja biosynteesiin. Mol. Asp. Med. 2009, 30, 1–12. [CrossRef].

2. Hayes, JD; McLellan, LI Glutationi ja glutationiriippuvaiset entsyymit edustavat koordinoidusti säädeltyä puolustusta oksidatiivista stressiä vastaan. Vapaa Radic. Res. 1999, 31, 273–300. [CrossRef].

3. Rahman, I.; Kode, A.; Biswas, SK Assay glutationi- ja glutationidisulfiditasojen kvantitatiiviseen määrittämiseen käyttämällä entsymaattista kierrätysmenetelmää. Nat. Protoc. 2006, 1, 3159. [CrossRef].

4. Yano, H. Hapetetun ja pelkistyneen glutationin vertailu riisitaikinan leipäominaisuuksissa. J. Food Sci. 2012, 77, C182–C188. [CrossRef] [PubMed].

5. Weschawalit, S.; Thongthip, S.; Phutrakool, P.; Asawanonda, P. Glutationi ja sen ikääntymistä estävät ja melanogeeniset vaikutukset. Clin. Kosmeettinen. Tutki. Dermatol. 2017, 10, 147. [CrossRef] [PubMed].

6. Villarama, CD; Maibach, HI Glutationi depigmentointiaineena: Yleiskatsaus. Int. J. Cosmet. Sci. 2005, 27, 147–153. [CrossRef] [PubMed].

7. Arjinpathana, N.; Asawanonda, P. Glutationi suun valkaisuaineena: satunnaistettu, kaksoissokkoutettu, lumekontrolloitu tutkimus. J. Dermatol. Kohdella. 2012, 23, 97–102. [CrossRef] [PubMed].

8. Droge, W.; Breitkreutz, R. Glutationi ja immuunitoiminta. Proc. Nutr. Soc. 2000, 59, 595–600. [CrossRef] [PubMed].

9. Patrick, L. Elohopeamyrkyllisyys ja antioksidantit: Osa 1: Glutationin ja alfalipoiinihapon rooli elohopeamyrkyllisyyden hoidossa. Altern. Med. Rev. 2002, 7, 456–472.

10. Chen, JZ; Kadlubar, FF Uusi vihje glaukooman patogeneesiin. Olen. J. Med. 2003, 114, 697–698. [CrossRef].

11. Hassan, MQ; Hadi, RA; Al-Rawi, ZS; Padron, VA; Stohs, SJ Glutationin puolustusjärjestelmä nivelreuman patogeneesissä. J. Appl. Toxicol. 2001, 21, 69–73. [CrossRef] [PubMed].

12. Seong, KY; Seo, MS; Hwang, DY; O'Cearbhaill, ED; Sreenan, S.; Karp, JM; Yang, SY Itsekiinnittyvä, luodin muotoinen mikroneulalaastari insuliinin kontrolloituun transdermaaliseen annosteluun. J. Control. Julkaisu 2017, 265, 48–56. [CrossRef] [PubMed].

13. Jin, J.; Zhu, LL; Chen, M.; Xu, HM; Wang, HF; Feng, XQ; Zhu, XP; Zhou, Q. Optimaalinen lääkkeen antoreitin valinta suonensisäisen, lihaksensisäisen ja ihonalaisen injektion suhteen. Potilas mieluummin. Adherence 2015, 9, 923–942. [PubMed].

14. Bouwstra, JA; Honeywell-Nguyen, PL; Gooris, GS; Ponec, M. Ihosuojan rakenne ja sen modulaatio vesikulaarisilla formulaatioilla. Prog. Lipid Res. 2003, 42, 1–36. [CrossRef].

15. Jiskoot, W.; Randolph, TW; Volkin, DB; Middaugh, CR; Schöneich, C.; Winter, G.; Friess, W.; Crommelin, DJ; Carpenter, JF Proteiinin epävakaus ja immunogeenisuus: Esteet injektoivien proteiininantojärjestelmien kliiniselle soveltamiselle jatkuvaa vapautumista varten. J. Pharm. Sci. 2002, 101, 946–954. [CrossRef].

16. Liu, S.; Jin, MN; Quan, YS; Kamiyama, F.; Katsumi, H.; Sakane, T.; Yamamoto, A. Hyaluronihaposta valmistettujen uusien mikroneulasarjojen kehitys ja ominaisuudet ja niiden käyttö insuliinin transdermaalisessa annostelussa. J. Control. Julkaisu 2012, 161, 933–941. [CrossRef].

17. Wang, C.; Joo, Y.; Hochu, GM; Sadeghifar, H.; Gu, Z. Tehostettu syövän immunoterapia anti-PD1-vasta-aineen mikroneulapatch-avusteisella toimituksella. Nano Lett. 2016, 16, 2334–2340. [CrossRef].

18. Dassanayake, RS; Acharya, S.; Abidi, N. Biopolymeeripohjaiset materiaalit polysakkarideista: Ominaisuudet, käsittely, karakterisointi ja sorptiosovellukset. Advanced Sorption Process Applications; Edebali, S., toim.; IntechOpen: Lontoo, Iso-Britannia, 2018; s. 1–24.

19. Lee, JW; Choi, SO; Felner, EI; Prausnitz, MR Liukeneva mikroneulalaastari ihmisen kasvuhormonin transdermaaliseen antamiseen. Pieni 2011, 7, 531–539. [CrossRef].

20. Donnelly, RF; Singh, TRR; Garland, MJ; Migalska, K.; Majithiya, R.; McCrudden, CM; Kole, PL; Mahmood, TMT; McCarthy, HO; Woolfson, AD Hydrogeeliä muodostavat mikroneulajärjestelmät tehostamaan transdermaalista lääkkeen antoa. Adv. Toiminto. Mater. 2012, 22, 4879–4890. [CrossRef].

21. Kim, JD; Kim, M.; Yang, H.; Lee, K.; Jung, H. Pisarapohjainen ilmapuhallus: Uusi liukeneva mikroneulojen valmistus. J. Control. Julkaisu 2013, 170, 430–436. [CrossRef].

22. Kim, H.; Seong, KY; Lee, JH; Park, W.; Yang, SY; Hahn, SK Biohajoava mikroneulalaastari, joka toimittaa antigeenistä peptidi-hyaluronaattikonjugaattia syövän immuunihoitoon. ACS Biomater. Sci. Eng. 2019, 5, 5150–5158. [CrossRef].

23. Du, X.; Song, M.; Rouseff, R. Uusien mansikan rikkihaihtuvien aineiden tunnistaminen ja kypsymisen aikana tapahtuvat muutokset. J. Agric. Food Chem. 2011, 59, 1293–1300. [CrossRef] [PubMed].

24. Boczkaj, G.; Kaminski, M.; Przyjazny, A. Prosessin ohjaus ja hapettumisen jälkeisten jätevesien hapettumiskinetiikan tutkimus kaasukromatografialla pulssiliekkifotometrisella ilmaisulla (GC-PFPD). Ind. Eng. Chem. Res. 2010, 49, 12654–12662. [CrossRef].

25. Davis, SP; Landis, BJ; Adams, ZH; Allen, MG; Prausnitz, MR Mikroneulojen työntäminen ihoon: työntövoiman ja neulan murtumisvoiman mittaaminen ja ennustaminen. J. Biomech. 2004, 37, 1155–1163. [CrossRef] [PubMed].

26. Chandrasekharan, A.; Hwang, YJ; Seong, KY; Park, S.; Kim, S.; Yang, SY Happokäsitelty vesiliukoinen kitosaani, joka sopii mikroneula-avusteiseen ihonsisäiseen lääkeannostukseen. Pharmaceutics 2019, 11, 209. [CrossRef] [PubMed].

27. Kim, B.; Seong, KY; Sinä, minä; Selvaraj, V.; Yim, SG; O'Cearbhaill, ED; Jeong, U.; Yang, SY Kosketustoiminen depotlaastari ihon läpäisyn kvantitatiiviseen hallintaan. Sens. Actuators B Chem. 2018, 256, 18–26. [CrossRef].

28. Jensen, GA; Adams, DF; Stern, H. Rikkivedyn ja metyylimerkaptaanin absorptio laimeista kaasuseoksista. J. Air Pollut. Control Assoc. 1966, 16, 248–253. [CrossRef].

29. Onda, K.; Takeuchi, H.; Kobayashi, T.; Yokota, K. Rikkivedyn ja hiilidioksidin samanaikainen imeytyminen natriumhydroksidin vesiliuoksissa. J. Chem. Eng. Jpn. 1972, 5, 27–33. [CrossRef].

30. Kabakov, AE; Gavai, VL Solukuolema- ja eloonjäämismääritykset. In Chaperones; Humana Press: New York, NY, USA, 2018; s. 107–127.

31. Samant, PP; Prausnitz, MR Mekanismit interstitiaalisen nesteen näytteenottoon iholta käyttämällä mikroneulalapasta. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 2018, 115, 4583–4588. [CrossRef].

32. Yang, SY; O'Cearbhaill, ED; Sisk, GC; Park, KM; Cho, WK; Villiger, M.; Bouma, BE; Pomahac, B.; Karp, JM Biovaikutteinen turpoava mikroneulaliima mekaaniseen lukitukseen kudoksen kanssa. Nat. Commun. 2013, 4, 1702. [CrossRef].

33. Migdadi, EM; Courtenay, AJ; Tekko, IA; McCrudden, MT; Kearney, MC; McAlister, E.; McCarthy, HO; Donnellyn RF-hydrogeeliä muodostavat mikroneulat tehostavat metformiinihydrokloridin transdermaalista vapautumista. J. Control. Julkaisu 2018, 285, 142–151. [CrossRef] [PubMed].

Yechan Lee 1, Sujeet Kumar 1, Sou Hyun Kim 2, Keum-Yong Seong 1, Hyeseon Lee 1, Chaerin Kim 1, Young-Suk Jung 2* ja Seung Yun Yang 1,*

1 Biomateriaalitieteen laitos, Life and Industry Convergence Institute, Pusan ​​National University, Miryang 50463, Korea.

2 College of Pharmacy, Pusan ​​National University, Busan 46241, Korea.

Vastaanotettu: 31. joulukuuta 2019; Hyväksytty: 22. tammikuuta 2020; Julkaistu: 27.1.2020

For more information:1950477648nn@gmail.com