N-bentsyylieikosapentaenamidin neurosuojaus vastasyntyneillä hiirillä hypoksisen ja iskeemisen aivovaurion jälkeen

Ottaa yhteyttä:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Abstrakti:

Maca(Lepidium meyenii) on noussut suosituksi funktionaaliseksi kasvisruoaksi sen lääkinnällisten ominaisuuksien ja ravintoarvon vuoksi.Macamidit, koska yksinomaan aktiivisia ainesosia löytyymaca, ovat ainutlaatuinen sarja ei-polaarisia, pitkäketjuisia rasvahappo-N-bentsyyliamideja, joilla on useita bioaktiivisia ominaisuuksia, kuten väsymystä ehkäiseviä ominaisuuksia ja lisääntymisterveyttä parantavia ominaisuuksia. Tässä tutkimuksessa tunnistettiin uudenlainen maksimointi, N-bentsyyli-eikosapentaenamidi (NB-EPA).maca. Tutkimme edelleen sen mahdollista neuroprotektiivista roolia hypoksis-iskeemisessä aivovauriossa. Tuloksemme osoittivat, että hoito biosyntetisoidulla NB-EPA:lla lieventää merkittävästi aivoinfarktin kokoa ja parantaa hermostollisia käyttäytymishäiriöitä vastasyntyneiden hiirten hypoksis-iskeemisen aivovaurion jälkeen. NB-EPA esti hermosolujen apoptoosia iskeemisen altistuksen jälkeen. NB-EPA paransi hermosolujen eloonjäämistä ja lisääntymistä aktivoimalla fosforyloitua AKT-signalointia. On huomattava, että NB-EPA:n suojaava ominaisuus iskeemisiä hermosoluvaurioita vastaan ​​riippui p53-PUMA-reitin tukahduttamisesta. Yhdessä nämä havainnot viittaavat siihen, että NB-EPA voi edustaa uutta hermosuojaa vastasyntyneille, joilla on hypoksis-iskeeminen enkefalopatia.

Avainsanat:maca; N-bentsyyli-eikosapentaenamidi; vastasyntyneen hypoksi-iskeeminen enkefalopatia; hermosolujen suojaus; PUMA

1. Esittely

Vastasyntyneiden hypoksis-iskeeminen enkefalopatia (HIE) on yleinen hapenpuutteen ja verenkierron heikkenemisen aiheuttama aivovaurio [1,2]. HIE on erittäin vastenmielinen aivojen kehitykselle, joka on tärkein lasten neurologisia toimintahäiriöitä aiheuttava tekijä [3]. HIE:n yleisimpiä seurauksia ovat aivohalvaus, vakava kognitiivinen vajaatoiminta sekä motoriset ja käyttäytymisvajeet, jotka johtavat miljooniin vastasyntyneiden kuolemaan tai pitkäaikaisiin vammoihin joka vuosi [4]. Terapeuttinen hypotermia on kliinisesti yleinen hoito vastasyntyneiden HIE-potilaille, ja sen on osoitettu parantavan eloonjääneiden neurologisia tuloksia [5]. Pelkkä hypotermiahoito ei kuitenkaan riitä vähentämään kuolleisuutta tai välttämään vakavia hermoston kehityshäiriöitä vaikeassa HIE:ssä [6]. Huolimatta nykyaikaisen lääketieteellisen tekniikan merkittävästä edistymisestä, HIE:n aiheuttamiin hermovaurioihin ei ole olemassa tehokasta lääketieteellistä hoitoa [7]. Neuroprotektiivisella hoidolla on suuri merkitys aivotoiminnan pitkäaikaiselle palautumiselle [8]. Siksi on välttämätöntä kehittää turvallisia ja tehokkaita hermostoa suojaavia lääkkeitä.

mistä voin ostaa kakkulankuorta

Maca(Lepidium meyenii) on Etelä-Amerikan ristikukkaisten heimoon kuuluva yksi- tai kaksivuotinen yrtti, joka luokiteltiin uudeksi luonnonvararuoaksi vuonna 2011 [9,10]. Macasta on tunnistettu erilaisia ​​komponentteja, joilla on farmakologisia ja ravitsemuksellisia vaikutuksia, kuten polysakkarideja, fytosteroleja, alkaloideja, glukosinolaatteja, makaaeneja jamacamides[11,12]. Näiden bioaktiivisten ainesosien joukossa makamideja, ryhmä ei-polaarisia, pitkäketjuisia rasvahappo-N-bentsyyliamidiyhdisteitä, tunnistettiin tunnusomaisiksi ainesosiksi samalla kun ne vaikuttivat tärkeimpiin macan tehoihin, kuten väsymyksen, osteoporoosin ja hedelmällisyyden parantamiseen [13]. –15]. Makamidien ja niiden synteettisten analogien on äskettäin raportoitu osoittavan erilaista rasvahappoamidihydrolaasia (FAAH) estävää aktiivisuutta, mikä tarkoittaa, että näillä yhdisteillä on potentiaalista hermostoa suojaavaa ja anti-inflammatorista aktiivisuutta [16,17].

cistanche tubulosa

Tässä tutkimuksessa on tunnistettu uudenlainen maksimoida N-bentsyylieikosapentaenamidi (NB EPA)maca. Tutkimme edelleen sen biologista aktiivisuutta hypoksis-iskeemisissä aivovaurioissa. Tuloksemme osoittivat, että NB-EPA parantaa merkittävästi HI-välitteisiä vastasyntyneiden aivovaurioita parantamalla aivoinfarktia ja käyttäytymishäiriöitä. Erityisesti NB-EPA:n hermoja suojaava vaikutus iskeemisten hermosolujen eloonjäämiseen oli riippuvainen p53-PUMA-signalointireitin tukahduttamisesta.

2. Tulokset

2.1. N-bentsyyli-eikosapentaenamidin tunnistaminen ja synteesi

Macamiditovat bentsyyliamiinin ja rasvahappoosan muodostamien amidialkaloidien luokka, joita pidetään tyypillisinä merkkiyhdisteinä.maca. Tässä tunnistimme macasta uuden maksimin, NB-EPA:n (molekyylikaava C27H37NO). Kuten kuvasta 1A näkyy, korkean erotuskyvyn nestekromatografia sähkösumutusionisaatiomassaspektrometrialla (HPLC-ESI-MS/MS) osoitti kaksi huippua, jotka kirjattiin kokonaisionikromatogrammiin m/z 392,3 ja retentioajat 7.{1 0}} min ja 9.{14}} min. MS/MS-spektri osoitti, että 7,0 minuutin retentioajan piikin fragmenttiinformaatio oli yhdenmukainen NB-EPA:n teoreettisten fragmenttien kanssa (kuvio IB). Tästä uudesta makamidista havaittu pääfragmentti-ionihuippu oli m/z 91,1, mikä vastaa bentsyyliä [C7H7] plus. MS/MS-fragmentti-ionihuiput rasvahappopuolella olivat yhdenmukaisia ​​eikosapentaeenihapon MS/MS-tietojen kanssa National Institute of Standards and Technology (NIST) Chemistry WebBookissa (SRD 69).

Alhaisen NB-EPA-pitoisuuden vuoksimaca, syntetisoimme sitten NB-EPA:n käyttämällä karbodi-imidikondensaatiomenetelmää. Syntetisoitu seos puhdistettiin puolipreparatiivisella HPLC-järjestelmällä. Fraktio, jonka retentioaika oli 23,5 - 25,5 minuuttia, kerättiin, ja kerätyn fraktion puhtaus saavutti 98,2 prosenttia (kuvio 1C, D). HPLC-MS/MS-analyysi osoitti, että biosyntetisoidulla NB-EPA:lla ja luonnollisella NB-EPA:lla oli identtiset kromatografiset erotusominaisuudet ja sekundaarisen massaspektrometrian fragmenttitiedot (kuva 1E-G). Yhdessä nämä tiedot viittaavat siihen, että uusimakamidiNB-EPA tunnistettiinmacaja syntetisoitu onnistuneesti.

2.2. NB-EPA vähentää infarktien määrää ja neurokäyttäytymisen puutteita vastasyntyneiden HI-aivovaurioissa

Sitten tutkimme NB-EPA:n bioaktiivisuutta vastasyntyneillä hiirillä hypoksis-iskeemisen (HI) aivovaurion jälkeen. Aivojen ulkonäön kuvat osoittivat, että iskeeminen aivokudos muuttui valkoiseksi ja turvotuksi vehikkeliryhmässä päivänä 1, 3, 7 ja 14 HI:n jälkeen (kuvio 2A). Sitä vastoin NB-EPA:n antaminen annoksella 250 ug/päivä 3 päivän ajan vähensi merkittävästi aivojen turvotusta ja aivojen vesipitoisuutta (kuvio 2A, B). Värjäys 2,3,5-trifenyylitetratsoliumkloridilla (TTC) osoitti, että NB-EPA-hoito (11,13 ± 2,58 prosenttia) vähensi selvästi aivoinfarktin kokoa 3 päivää HI:n jälkeen verrattuna vehikkeliin (37,01 ± 4,68 prosenttia). ) (kuvio 2C). Neurokäyttäytymistestit osoittivat, että vehikkeliryhmän hiirillä oli merkittäviä hermostollisia käyttäytymishäiriöitä 1, 3 ja 7 päivää HI:n jälkeen (kuva 2D–F). Päinvastoin, NB-EPA-hoito paransi selvästi näitä neurologisia vikoja (kuva 2D–F). Siten nämä tiedot osoittavat, että NB-EPA suojaa iskeemisiltä vaurioilta ja hermostollisia käyttäytymishäiriöitä vastaan ​​vastasyntyneillä hiirillä HI-aivovaurion jälkeen.

Kuva 1. Luonnollisen NB-EPA:n ja synteettisen NB-EPA:n kromatogrammit ja MS/MS-spektrit.(A) Edustava kokonaisionivirran (TIC) kromatogrammi, joka on saatu positiivisesti valitussa ionivalvontatilassa (SIM) maca-uutenäytteestä. (B) MS/MS-spektrit m/z3923([NB-EPA plus H]*) maca-uutenäytteelle.(C) Synteettisten NB-EPA-materiaalien puolivalmisteinen HPLC-kromatogrammi. NB-EPA-fraktioiden (23.{9}},5 min) (D)HPLC-kromatogrammi, joka on kerätty puolivalmisteisesta HPLC-järjestelmästä. (E) Edustava TIC-kromatogrammi, joka on saatu positiivisessa SIM-tilassa synteettisestä NB-EPA-näytteestä. (F)MS/MS-spektrit m/z 392,3 biosynteettiselle NB-EPA-näytteelle (G) NB-EPA:n kemiallinen rakenne.

2.3. NB-EPA vähentää HI:n aiheuttamaa aivovauriota estämällä hermoston apoptoosia

Seuraavaksi tutkimme, oliko NB-EPA:n suojaaminen HI-aivovauriossa osallisena hermosolujen kuoleman modulaatiossa. Hematoksyliini-eosiinivärjäys (HE) osoitti, että hermosolujen järjestelyt aivokuoressa, hippokampuksen dentate gyrus (DG), Cornun ammoniakki (CA) 1 ja CA3 alueilla olivat häiriintyneitä. ja hermosäikeet löystyivät ja vakuoloitiin iskeemisissä aivoissa HI-vaurion jälkeen. Kuitenkin hoito NB-EPA:lla poisti selvästi hermosolujen vaurion (kuvio 3A). Western blot vahvisti, että NB-EPA vähensi merkittävästi proapoptoottisten proteiinien, kuten p53, PUMA ja Bax, ilmentymistä iskeemisessä aivokudoksessa (kuvio 3B, C). Lisäksi hermosolujen ytimien antigeeni (NeuN) ja TUNEL-kaksoisvärjäys osoittivat merkittävän laskun TUNEL plus NeuN plus -solujen määrässä 7 päivää HI:n jälkeen NB-EPA:lla käsitellyissä hiirissä (5,80 ± 1,35 prosenttia) vehikkeleihin verrattuna (14,39 ± 1,35 prosenttia). 2,55 prosenttia). (Kuva 3D). Yhdessä nämä tiedot viittaavat siihen, että NB-EPA:n edullinen vaikutus HI-aivovaurioissa liittyy hermosolujen apoptoosin estämiseen.

Kuva 2. NB-EPA:n antaminen vähentää aivoinfarktia ja käyttäytymisvirheitä vastasyntyneillä hiirillä HI-aivovaurion jälkeen. (A) Edustavia kuvia aivojen ulkonäöstä 1, 3, 7 ja 14 päivää HI:n jälkeen. (B) Tilastollinen analyysi aivojen vesipitoisuudesta jokaisesta hiiriryhmästä 3 päivää Hl:n jälkeen. (C) Edustavia valokuvia TTC-värjätyistä koronaalisista aivoleikkeistä jokaisesta hiiristä 3 päivää HI:n jälkeen ja infarktin tilavuuden kvantitatiivinen analyysi. (DF) Geotaksisrefleksin (D), kallion välttämisreaktion (E) ja pitotestin (F) neurokäyttäytymistulokset 1, 3 ja 7 päivän kuluttua HI:stä. Tiedot ovat keskiarvo ± keskiarvon standardivirhe (SEM) ( n=8 ryhmää kohti).*s<0.05 compared="" to="">

2.4. NB-EPA vähentää HI:n aiheuttamaa aivovauriota neuronaalisen apoptoosin tukahduttamisen vuoksi

Nissl-värjäys osoitti, että suuri määrä hermosoluja osoitti atrofiaa, turvotusta ja ydinpyknoosia ja jopa kuoli Nissl-kappaleiden katoamisen myötä iskeemisistä aivoista. Sitä vastoin NB-EPA ilmeisesti paransi hermosolujen eloonjäämistä ja hermosolujen uudelleenjärjestymistä HI-vaurion jälkeen (kuvio 4A, B). Western blot osoitti, että NB-EPA nosti fosforyloidun AKT:n (p-AKT) tasoja, jotka toimivat eloonjäämistä edistävänä signalointina iskeemisessä aivokudoksessa 7 päivää HI-altistuksen jälkeen (kuvio 4C, D). Doublecortin (DCX) on hermosolujen esiasteiden ja nuorten vaeltavien hermosolujen markkeri [18], ja Ki-67 on soluproliferaation markkeri [19]. NB-EPA-käsittely (19,83 ± 1,25 solua/mm3) lisäsi merkittävästi Ki-67 plus DCX plus -solujen määrää 7 päivää HI:n jälkeen verrattuna vehikkeliin (11,83 ± 1,08 solua/mm3) (kuvio 4E). Siksi nämä tiedot viittaavat siihen, että NB-EPA helpottaa hermosolujen selviytymistä ja lisääntymistä vastasyntyneillä hiirillä HI-aivovaurion jälkeen.

Kuvio 3. NB-EPA estää hermosolujen kuolemaa vastasyntyneillä hiirillä HI-aivovaurion jälkeen. (A) Edustavat valokuvat HE-värjäytymisestä aivokuoressa, hippokampuksen DG-, CA1- ja CA3-alueilla jokaisesta hiiriryhmästä 7 päivää HI:n jälkeen (mittakaavapalkki, 75 μm). (B) Edustavia Western blot -kuvia p53:sta, PUMA:sta, ja Bax jokaisesta hiiriryhmästä 7 päivää HI:n jälkeen. (C) Tietojen densitometrinen analyysi on esitetty kohdassa (B). (D) Edustavia kuvia NeuN:stä (punainen) ja TUNEL (vihreä) jokaisesta hiiriryhmästä 7 päivää hoidon jälkeen. HI (vasen, asteikkopalkki, 25 um) aivokuoressa; NeuN- ja TUNEL-kaksoisleimattujen solujen kvantifiointi 7 päivää HI:n jälkeen (oikea). Tiedot ovat keskiarvo ± SEM (n =8 ryhmää kohti). *s<005 compared="" to="">

cistanche pdf

2.5. NB-EPA vähentää HI:n aiheuttamaa aivovauriota neuronaalisen apoptoosin tukahduttamisen vuoksi

Perustuen yllä olevaan NB-EPA:n suojaavaan vaikutukseen vastasyntyneen HI-aivovaurioissa, arvioimme edelleen NB-EPA:n suoraa vaikutusta hermosolujen eloonjäämiseen in vitro. Primaariset aivokuoren neuronit, joita viljeltiin 7 päivää in vitro, olivat pyöreitä ja pieniä, runsailla synapseilla ja toisiinsa liittyvillä verkkoilla (kuvio 5A). Neuronien puhtaus määritettiin virtaussytometrialla, ja positiivinen nopeus oli yli 95 prosenttia (kuvio 5B). NeuN*-neuronit tunnistettiin myös immunofluoresenssilla (kuvio 5C). Nämä tulokset osoittavat, että primaarisia aivokuoren neuroneja viljeltiin onnistuneesti.

Kuva 4. NB-EPA parantaa hermosolujen eloonjäämistä ja lisääntymistä vastasyntyneillä hiirillä HI-aivovaurion jälkeen. (A) Edustavia valokuvia Nissl-värjäytymisestä aivokuoressa, hippokampuksen DG-, CAl- ja CA3-alueilla jokaisesta hiiriryhmästä 7 päivää HI:n jälkeen (mittakaava, 75 μm). (B) Neuronien lukumäärän tilastollinen analyysi on esitetty kohdassa (A). (C) Edustavia Western blot -kuvia p-AKT:sta ja AKT:sta jokaisesta hiiriryhmästä 7 päivää H:n jälkeen. (D) Tietojen densitometrinen analyysi on esitetty kohdassa (C). (E) Edustavia kuvia DCX:stä (vihreä) ja Ki-67 (punainen) jokaisesta hiiriryhmästä 7 päivää HI:n jälkeen (vasen, asteikkopalkki, 25 um) hippokampuksen DG-alueilla; DCX:n ja Ki{11}} kaksoisleimatun solun kvantifiointi 7 päivää HI:n jälkeen (oikealla). Tiedot ovat keskiarvo±SEM (n=8 ryhmää kohti).*p<0.05 compared="" to="">

Sitten neuronit altistettiin 3 tunnin happiglukoosin puutteelle (OGD) ja niitä käsiteltiin erilaisilla NB-EPA-pitoisuuksilla. Hypoksiset neuronit ilmaantuivat atrofian ja tumapyknoosin kanssa vehikkelissä PBS-käsitellyissä viljelmissä. Sitä vastoin NB-EPA-hoito paransi merkittävästi hermosolujen eloonjäämistä OGD:n jälkeen (kuvio 5D). Neuronien eloonjääminen mitattiin 24 tuntia myöhemmin käyttämällä solulaskentasarja-8(CCK-8) -määritystä. Kuten kuviossa 5E esitetään, NB-EPA-hoito ilmeisesti pelasti hermosolujen eloonjäämisasteen OGD-ilmiön jälkeen. NB-EPA:n suurin teho saavutettiin 1 μM:lla, jota käytettiin kaikissa seuraavissa in vitro -kokeissa. Virtaussytometria-analyysi vahvisti, että anneksiinipositiivisten neuronien lukumäärä NB-EPA-käsitellyissä viljelmissä oli merkittävästi vähentynyt verrattuna vehikkelillä PBS-käsiteltyihin viljelmiin (kuvio 5F). Samaan aikaan NB-EPA-hoito inhiboi myös merkittävästi apoptoosiin liittyvien proteiinien, mukaan lukien p53, PUMA ja Bax, ilmentymistä OGD-käsitellyissä neuroneissa (kuvio 5G, H). Siksi nämä tiedot viittaavat siihen, että NB-EPA vaimentaa hermosolujen vaurioita lisäämällä hermosolujen eloonjäämistä ja samalla inhiboi hermosolujen apoptoosia.

Kuva 5. NB-EPA vähentää iskeemistä hermosoluvauriota OGD-haasteen jälkeen. (A) Edustavia kuvia primaarisista aivokuoren neuroneista, joita viljeltiin 1, 3 ja 7 päivän kohdalla (mittakaavapalkki, 25 μm). (B) NeuN plus -solujen prosenttiosuus primaarisista aivokuoren hermosoluista, joita viljeltiin 7 päivää in vitro.(C) NeuN(vihreä) ja 4',{8}}diamidino-2-fenyyli-indolin (DAPI) edustavat kuvat ( sininen) primaarisista aivokuoren neuroneista, joita viljeltiin 7 päivää in vitro (mittakaavapalkki, 10 um). (D) Edustavia kuvia primaarisista aivokuoren hermosoluista jokaisesta ryhmästä 24 hofin viljelmässä 3 tunnin OGD jälkeen (mittakaavapalkki, 25 μm). （E）CCK-8-määritys neutroneilla rikastetuissa viljelmissä, jotka on altistettu 3 tunnin OGDor-kontrolliolosuhteille, mitä seurasi käsittely eri pitoisuuksilla NB-EPA:lla vielä 24 tuntia.(F) Liittyvien neuronien prosenttiosuus 24 tunnin kohdalla viljelmän 3 tunnin OGD jälkeen. (G) Edustavia Western blot -kuvia p53:sta, PUMA:sta ja Baxista jokaisesta ryhmästä 24 tunnin viljelyn jälkeen 3 tunnin OGD:n jälkeen. (H) Tietojen densitometrinen analyysi on esitetty kohdassa (G). Tiedot ovat keskiarvo ±SEM (n =3 kussakin ryhmässä).* s<0.05 compared="" to="">

2.6. NB-EPA suojaa neuroneja apoptoosilta estämällä p53-PUMA:n

Signalointi p53–PUMA-reitin tiedetään osallistuvan iskemian/reperfuusion aiheuttamaan aivohermosolujen apoptoosiin [20]. Tutkimme täällä, liittyykö NB-EPA:n suoja hermosolujen kuolemaa vastaan ​​p53-PUMA-reitin estämiseen. Kuten kuviossa 6A on esitetty, NB-EPA kumosi OGD:llä ehdollisen soluapoptoosin, mutta sillä ei ollut vaikutusta näytteisiin, jotka oli esikäsitelty pififitriinillä (PFT), joka on p53-inhibiittori. Sillä välin NB-EPA-käsittely esti merkittävästi pro-apoptoottisen proteiinin Bax ilmentymistä OGD-käsitellyissä hermosoluissa, mutta sillä ei ollut vaikutusta niihin, joita oli esikäsitelty PFT:llä (kuvio 6B). PUMA-ilmentyminen parani huomattavasti hermosoluissa OGD-altistuksen jälkeen, kun taas PUMA-mRNA:n ja proteiinin ilmentyminen ei muuttunut PFT-esikäsitellyissä hermosoluissa, mikä osoittaa, että PUMA-induktio hermosoluissa on p53-riippuvainen (kuva 6C). NB-EPA-käsittely esti OGD-indusoitua PUMA-ilmentymistä hermosoluissa, mutta sillä ei ollut vaikutusta PFT-esikäsiteltyihin hermosoluihin (kuvio 6C). Aivohermosoluissa, joissa oli spesifinen PUMA-hiljennys, oli pienempi apoptoottisten solujen prosenttiosuus (kuvio 6D) ja vähentynyt Bax-proteiinin ekspressio (kuvio 6E) 24 tuntia OGD-altistuksen jälkeen verrattuna PUMA:ta ekspressoiviin hermosoluihin. Siksi nämä tiedot osoittavat, että NB-EPA-välitteinen OGD-indusoidun hermosolujen apoptoosin esto on suurelta osin riippuvainen p53-PUMA-reitin tukahduttamisesta.

Kuva 6. NB-EPA vähentää hermosolujen apoptoosia estämällä p53-PUMA-reittiä. (A) Anneksiinin plus neuronien prosenttiosuus p53-inhibitiolla tai ilman 24 tunnin viljelyssä NB-EPA:n kanssa tai ilman ja 3 tunnin OGD:n jälkeen. (B) Edustavia Western blot -kuvia Baxista p53-inhibitiolla tai ilman sitä 24 tunnin viljelyssä NB-EPA:n kanssa tai ilman ja 3 tunnin OGD:n jälkeen (vasemmalla); Bax-proteiinin ilmentymisen densitometrinen analyysi (oikealla). (C) PUMA-mRNA:n ilmentyminen hermosoluissa 12 tunnin kuluttua viljelystä NB-EPA:n kanssa tai ilman ja 3 tunnin OGD:n jälkeen (vasemmalla); PUMA-proteiinin ilmentymisen keskimääräiset prosenttiosuudet neuroneissa 24 tunnin viljelyssä NB-EPA:n kanssa tai ilman ja 3 tunnin OGD:n jälkeen (oikealla). (D) Niiden anneksiinihermosolujen prosenttiosuus, joissa on tai ei ole PUMA-poistoa 24 tunnin viljelyn jälkeen NB-EPA:n kanssa tai ilman ja 3 tunnin OD jälkeen. (E) Edustavia Western blot -kuvia Baxista PUMA-poiston kanssa tai ilman 24 tunnin viljelyn jälkeen tai ilman NB-EPA:ta ja 3 tunnin kuluttua OGD:stä (vasemmalla); Bax-proteiinin ilmentymisen densitometrinen analyysi (oikealla). Tiedot ovat keskiarvo ± SEM (n=3 ryhmää kohti).*p< 0.05="" compared="" to="" vehicle.="" n.s.="" not="">

3. Keskustelu

Perinataalisen asfyksian aiheuttama vastasyntyneiden hypoksis-iskeeminen vaurio on yksi yleisimmistä vastasyntyneiden sairauksista. Ei ole olemassa tehokkaita farmaseuttisia terapeuttisia interventioita, jotka vähentävät aivovaurioita tai parantavat imeväisten neurologista toimintaa [21]. Tässä tutkimuksessa havaitsimme, että hoito uudella makamidi NB-EPA:lla helpotti merkittävästi vastasyntyneiden hiirten hypoksi-iskeemistä aivovauriota. NB-EPA:n hermosuojaus liittyi hermosolujen eloonjäämisen lisääntymiseen samalla kun se inhiboi hermosolujen kuolemaa. Erityisesti NB-EPA-välitteinen antiapoptoottinen mekanismi oli riippuvainen p53-PUMA-signaloinnin tukahduttamisesta. Makamidit, jotka tunnetaan macan tunnusomaisina merkkiyhdisteinä, koostuvat bentsyyliamiinista ja pitkäketjuisesta rasvahappoosasta, jossa on vaihteleva tyydyttymättömyysaste [22].

Maca-uutteessa on raportoitu 23 erilaista makamideja, joista N-bentsyyliheksadekanamidi on runsain yhdiste Perun macassa, kun taas N-bentsyyli-9Z,12Z-oktadekadienamidi on Yunnanin macan rikkain yhdiste. [23]. Tässä tutkimuksessa tunnistimme Yunnanin macassa uuden makamidin NB-EPA:n. Makamidi NB-EPA koostuu bentsyyliamiinista ja eikosapentaeenihaposta (EPA; 20:5, n-3), yhdestä omega-3 monityydyttymättömän rasvahapon (n-3 PUFA) pääkomponenteista. ). n-3 PUFA:iden ja niiden aineenvaihduntatuotteiden on raportoitu esiintyvän keskushermostossa ja niillä on ratkaiseva rooli aivojen toiminnassa ja sairauksissa, kuten hermovälityksessä, neurogeneesissä ja hermotulehduksessa [24]. On huomionarvoista, että jotkin tutkimukset ovat ehdottaneet, että EPA n-3 PUFA:iden ja dokosaheksaeenihapon (DHA; 22:6, n-3) sijaan liittyy useimpien iskeemisten aivohalvausten pienempiin riskeihin [25 ]. Yhdessä näiden havaintojen kanssa osoitimme, että tämä uusi makamidi NB-EPA ei vain lievitä aivovaurioita, vaan myös parantaa hermostollisia käyttäytymisvajeita HI-vaurion jälkeen. Neuronit ovat hermoston perusrakenteisia ja toiminnallisia yksiköitä, joiden tehtävänä on yhdistää ja integroida syötetietoa ja lähettää tietoa. Kun aivot vahingoittuvat hypoksian ja iskemian vuoksi, suuri määrä hermosoluja vaurioituu, mikä puolestaan ​​​​aiheuttaa neurologisia toimintahäiriöitä. p53, solun stressivasteen avainsäätelijä, voi aktivoitua iskeemisillä alueilla aivovaurion jälkeen [26]. Se voi edistää hermosolujen apoptoosia, ja p53-puutos tai p53-estäjien käyttö voi merkittävästi vähentää aivovaurioita erilaisissa aivohalvausmalleissa [27]. p53-välitteinen apoptoosi tapahtuu useiden molekyylimekanismien kautta, joista PUMA, ap53- ja apoptoosin säädelty modulaattori on voimakas proapoptoottinen geeni p53:sta alavirtaan [28]. Tutkimukset ovat osoittaneet, että p53–PUMA-reitti on osallisena mitokondrioiden inhibiittoreiden aiheuttamassa striatumin hermosolujen apoptoosissa rotilla [29].

munuaisvauriot ja sairaudetcistanche propiedades

P53-PUMA-palautesilmukan aktivoitumisen estäminen p53-estäjillä ja PUMA-siRNA:lla voi vähentää hermosolujen apoptoosia ja iskemia-reperfuusion aiheuttamaa tulehdusta [30]. Tässä tulokset ovat yhdenmukaisia ​​näiden tutkimusten kanssa, jotka osoittavat, että PUMA on vahva p53-välitteisen apoptoosin toteuttaja neuroneissa HI-aivovaurion jälkeen. NB-EPA-hoito estää HI:n aiheuttamaa PUMA:n nousua hermosoluissa. Lisäksi NB-EPA:n suojaavat vaikutukset hermosolujen eloonjäämiseen ovat suurelta osin riippuvaisia ​​PUMA-signaloinnin tukahduttamisesta. Lisätodisteet osoittavat, että n-3 PUFA:t vaikuttavat hermosolujen eloonjäämiseen ja neurogeneesiin iskeemisen aivovaurion jälkeen [31,32]. Ne voivat parantaa aivohalvauksen ennustetta ja rajoittaa hermosolujen lisävaurioita [33]. Vaikka iskeeminen aivohalvaus indusoi hermosolujen progenitorisolujen proliferaatiota ja erilaistumista subventrikulaarisella vyöhykkeellä (SVZ), suurin osa vastasyntyneistä hermosoluista kuoli pian aivohalvauksen jälkeen [34]. n-3 PUFA:iden on raportoitu parantavan epäkypsien hermosolujen eloonjäämistä, vaan myös helpottavan niiden kypsymistä aivokuoren parenkyymassa aivohalvausvaurion jälkeen [35]. Viime aikoina useat tutkimukset ovat myös ehdottaneet makamidien suotuisaa vaikutusta hermosoluvaurioiden lievittämiseen, mikä liittyy mitokondrioiden hengitystoiminnan paranemiseen [36,37].

AKT-signaalin välitysreitillä on tärkeä rooli apoptoosin vastaisessa mekanismissa. Kun aivot loukkaantuvat, AKT-reitti aktivoituu ja keho aloittaa itsesuojan ja vamman korjaamisen, mikä johtaa p-AKT:n lisääntyneisiin ilmentymiin [38–41]. Näiden havaintojen mukaisesti havaitsemme, että hoito NB-EPA:lla suojaa hermosolujen eloonjäämistä HI-välitteiseltä aivovauriolta aktivoimalla eloonjäämistä edistävän AKT-signaloinnin samalla kun se estää pro-apoptoottista reittiä.

Neurobiologit uskoivat pitkään, että hermoston kantasolut (NSC) katosivat vähän ennen syntymää tai sen jälkeen, ja neurogeneesi pysähtyi tuolloin. Ajatus siitä, että kypsissä aivoissa ei ole uusia hermosoluja, alkoi muuttua 1960-luvulla. Tutkimuksen kehityksen myötä havaittiin, että aikuisten NSC:itä esiintyy pääasiassa SVZ:ssä ja hippokampuksen hammaskiveen subgranulaarisessa vyöhykkeessä (SGZ) [42–44]. Lisäksi myöhemmin vahvistettiin, että NSC:itä on myös muilla laajoilla keskushermoston (CNS) alueilla [45]. Viimeaikaiset tutkimukset ovat osoittaneet, että aivokuoren endogeeniset NSC:t voivat aktivoitua aivovaurion jälkeen edistääkseen hypoksis-iskeemisen aivovaurion korjaamista itsensä uusiutumisen, lisääntymisen ja uusien hermosolujen, astrosyyttien ja oligodendrosyyttien synnyn kautta [46,47]. . DCX edistää hermosolujen korjausta stabiloimalla mikrotubuluksia hermosoluissa ja edustaa merkkiä uusien hermosolujen siirtymisen seuraamiseen aivojen vaurioituneisiin kohtiin [48]. Hypoksi-iskeeminen aivovaurio ja vakava traumaattinen aivovaurio lisäävät uusien aivojuovion hermosolujen tuotantoa, jotka ilmentävät DCX:tä [49]. Ki-67 on proliferoituviin soluihin liittyvä tumaantigeeni, joka kattaa kaikki muut proliferaatiosyklit paitsi G0-vaiheen. Tässä tutkimuksessa NB-EPA:n antaminen ilmeisesti edistää neurogeneesiä, joka liittyy Ki-67 plus DCX plus -solujen lisääntymiseen HI-aivovaurion jälkeen. Kuitenkin, liittyykö Ki-67 plus DCX plus -solujen määrän kasvu NB-EPA:n indusoimaan hermoston kantasolujen lisääntymiseen ja erilaistumiseen, on vielä tutkittava.

Viitteet

1 Thornton, C.; Rousset, C.; Kichev, A.; Miyakuni, Y.; Vontell, R.; Baburamani, AA; Fleiss, B.; Gressens, P.; Hagberg, H. Vastasyntyneiden aivovaurion molekyylimekanismit. Neurol. Res. Int. 2012, 2012, 506320. [CrossRef]

2. Ma, Q.; Zhang, L. Hypoksi-iskeemisen enkefalopatian epigeneettinen ohjelmointi vastauksena sikiön hypoksiaan. Prog. Neurobiol. 2015, 124, 28–48. [CrossRef] [PubMed]

3. Conforti M, HD; Deniz, BF; de Almeida, W.; Miguel, pääministeri; Bronaugh, L.; Vieira, MC; de Oliveira, BC; Pereira, LO Vastasyntyneen hypoksia-iskemia aiheutti lievää motorista toimintahäiriötä, joka toipui akrobaattisen harjoittelun avulla vaikuttamatta rottien motoriseen ohjaukseen osallistuviin morfologisiin rakenteisiin. Brain Res. 2019, 1707, 27–44. [CrossRef]

4. Yıldız, EP; Ekici, B.; Tatlı, B. Neonatal hypoksis-iskeeminen enkefalopatia: Päivitys taudin patogeneesistä ja hoidosta. Asiantuntija. Pastori Neurother. 2017, 17, 449–459. [CrossRef]

5. Azzopardi, DV; Strohm, B.; Edwards, AD; Dyet, L.; Halliday, HL; Juszczak, E.; Kapellou, O.; Levene, M.; Marlow, N.; Porter, E.; et ai. Keskivaikea hypotermia perinataalisen asfyksiaalisen enkefalopatian hoitoon. N. Engl. J. Med. 2009, 361, 1349–1358. [CrossRef] [PubMed]

6. Tagin, MA; Woolcott, CG; Vincer, MJ; Whyte, RK; Stinson, DA Hypotermia vastasyntyneen hypoksi-iskeemisen enkefalopatian vuoksi: Päivitetty systemaattinen katsaus ja meta-analyysi. Kaari. Pediatr. Adolesc. Med. 2012, 166, 558–566. [CrossRef] [PubMed]

7. Thoresen, M.; Sabir, H. Epilepsia: Vastasyntyneiden kohtauksista puuttuu edelleen turvallinen ja tehokas hoito. Nat Rev Neurol. 2015, 11, 311–312. [CrossRef] [PubMed]

8. Nair, J.; Kumar, VHS Nykyiset ja kehittyvät terapiat vastasyntyneiden hypoksisen iskeemisen enkefalopatian hoidossa. Lapset 2018, 5, 99. [CrossRef] [PubMed]

9. Gonzales, GF; Gonzales, C.; Gonzales-Castañeda, C. Lepidium meyenii (Maca): Kasvi Perun ylängöiltä – perinteestä tieteeseen. Forsch. Komplementoitu. 2009, 16, 373–380. [CrossRef]

10. Chen, L.; Li, J.; Fan, L. Macan ravintokoostumus Kiinan eri alueilla viljellyissä varsissa (Lepidium meyenii Walp.). J. Food Quality 2017, 2017, 3749627. [CrossRef]

11. Balick, MJ; Lee, R. Maca: Perinteisistä ruokakasveista energia- ja libido-stimulaattoriin. Altern. Siellä. Health Med. 2002, 8, 96.

12. Chen, SX; Li, KK; Pub, D.; Jiang, SP; Chen, B.; Chen, LR; Yang, Z.; Ma, C.; Gong, XJ Ultraääni-avusteisen uuton optimointi, HPLC- ja UHPLC-ESI-Q-TOF-MS/MS-analyysi Macasta (Lepidium meyenii Walpin lajikkeet) peräisin olevista päämakamiideista ja makaaneista. Molecules 2017, 22, 2196. [CrossRef]

13. Yang, Q.; Jin, W.; Lv, X.; Dai, P.; Ao, Y.; Wu, M.; Deng, W.; Yu, L. Makamidien vaikutukset kestävyyteen ja väsymystä ehkäisyyn pitkäaikaisissa uimahiirissä. Pharm. Biol. 2016, 54, 827–834. [CrossRef] [PubMed]

14. Wang, T.; Sun, CH; Zhong, HB; Gong, Y.; Cui, ZK; Xie, J.; Wang, YP; Liang, C.; Cao, HH; Chen, XR; et ai. N-(3- metoksibentsyyli)-(9Z,12Z,15Z)-oktadekatrienamidi edistää luun muodostumista kanonisen Wnt/-kateniinin signalointireitin kautta. Phytother. Res. 2019, 33, 1074–1083. [CrossRef]

15. Uchiyama, F.; Jikyo, T.; Takeda, R.; Ogata, M. Lepidium meyenii (Maca) lisää luteinisoivan hormonin seerumitasoja naarasrotilla. J. Ethnopharmacol. 2014, 151, 897–902. [CrossRef] [PubMed]

16. Alasmari, M.; Böhlke, M.; Kelley, C.; Maher, T.; Pino-Figueroa, A. Rasvahappoamidihydrolaasin (FAAH) esto Macamidesilla. Mol. Neurobiol. 2019, 56, 1770–1781. [CrossRef]

17. Huang, YJ; Peng, XR; Qiu, MH Progress on the Chemical Constituents Derived glucosinolaates in Maca (Lepidium meyenii). Nat. Tuot. Bioprospect. 2018, 8, 405–412. [CrossRef] [PubMed]

18. Piens, M.; Muller, M.; Bodson, M.; Baudouin, G.; Plumier, JC Lyhyt ylävirran promoottorialue välittää hiiren kaksoiskortiinigeenin transkription säätelyä erilaistuvissa hermosoluissa. BMC. Neurosci. 2010, 11, 64. [CrossRef]

19. Rahmanzadeh, R.; Hüttmann, G.; Gerdes, J.; Scholzen, T. PKI-67:n kromoforiavusteinen valoinaktivointi johtaa ribosomaalisen RNA-synteesin estoon. Cell Prolif. 2007, 40, 422–430. [CrossRef]

20. Hong, LZ; Zhao, XY; Zhang, HL p53-välitti hermosolujen kuoleman iskeemisessä aivovauriossa. Neurosci Bull. 2010, 26, 232–240. [CrossRef]

21. Wachtel, EV; Verma, S.; Mally, PV Päivitys vastasyntyneiden vastasyntyneiden enkefalopatian nykyisestä hoidosta. Curr Probl Pediatr. Adolesc. Health Care 2019, 49, 100636. [CrossRef] [PubMed]

22. Wang, S.; Zhu, F. Macan (Lepidium meyenii) kemiallinen koostumus ja terveysvaikutukset. Food Chem. 2019, 288, 422–443. [CrossRef]

23. Carvalho, FV; Ribeiro, PR Rakenteellinen monimuotoisuus, biosynteettiset näkökohdat ja LC-HRMS-tietojen kokoaminen Lepidium meyeniin bioaktiivisten yhdisteiden tunnistamiseen. Food Res. Int. 2019, 125, 108615. [CrossRef]

24. Bazinet, RP; Layé, S. Monityydyttymättömät rasvahapot ja niiden metaboliitit aivotoiminnassa ja sairauksissa. Nat. Rev. Neurosci. 2014, 15, 771–785. [CrossRef] [PubMed]

25. Venø, SK; Bork, CS; Jakobsen, MU; Lundbye-Christensen, S.; McLennan, PL; Bach, FW; Overvad, K.; Schmidt, EB Marine n-3 Monityydyttymättömät rasvahapot ja iskeemisen aivohalvauksen riski. Stroke 2019, 50, 274–282. [CrossRef]

26. Yonekura, I.; Takai, K.; Asai, A.; Kawahara, N.; Kirino, T. p53 voimistaa globaalin iskemian aiheuttamaa hippokampuksen hermosolujen kuolemaa. J. Cereb. Verenkiertoa. Metab. 2006, 26, 1332–1340. [CrossRef] [PubMed]

27. Xie, YL; Zhang, B.; Jing, L. MiR-125b estää Bax/sytokromi C/kaspaasi-3 apoptoottisen signalointireitin aivoiskemia-reperfuusiovaurion rottamalleissa kohdistamalla. Neurol. Res. 2018, 40, 828–837. [CrossRef] [PubMed] 28. Chen, H.; Tian, ​​M.; Jin, L.; Jia, H.; Jin, Y. PUMA osallistuu iskemian/reperfuusion aiheuttamaan hiiren aivoastrosyyttien apoptoosiin. Neuroscience 2015, 284, 824–832. [CrossRef] [PubMed]

29. Zhang, XD; Wang, Y.; Wang, Y.; Zhang, X.; Han, R.; Wu, JC; Liang, ZQ; Gu, ZL; Han, F.; Fukunaga, K.; et ai. p53 välittää mitokondrioiden toimintahäiriön laukaisemaa autofagian aktivoitumista ja solukuolemaa rotan striatumissa. Autofagia 2009, 5, 339–350. [CrossRef] [PubMed]

30. Li, XQ; Yu, Q.; Chen, FS; Tan, WF; Zhang, ZL; Ma, H. Poikkeavan p53-PUMA-palautesilmukan aktivaation estäminen heikentää iskemian reperfuusion aiheuttamaa neuroapoptoosia ja hermotulehdusta rotilla alentamalla kaspaasia 3:a ja NF-KB-sytokiinireittiä. J. Neuroinflflamm. 2018, 15, 250. [CrossRef] [PubMed]

31. Shi, Z.; Ren, H.; Luo, C.; Yao, X.; Li, P.; Hän, C.; Kang, JX; Wan, JB; Yuan, TF; Su, H. Rikastetut endogeeniset omega-3 monityydyttymättömät rasvahapot suojaavat aivokuoren neuroneja kokeellisilta iskeemisiltä vaurioilta. Mol. Neurobiol. 2016, 53, 6482–6488. [CrossRef] [PubMed]

32. Belajev, L.; Hong, SH; Menghani, H.; Marcell, SJ; Obenaus, A.; Freitas, RS; Khoutorova, L.; Balaszczuk, V.; Jun, B.; Oriá, RB; et ai. Dokosanoidit edistävät neurogeneesiä ja angiogeneesiä, veri-aivoesteen eheyttä, penumbra-suojausta ja neurobehavioralista palautumista kokeellisen iskeemisen aivohalvauksen jälkeen. Mol. Neurobiol. 2018, 55, 7090–7106. [CrossRef]

33. Zendedel, A.; Habib, P.; Dang, J.; Lammerding, L.; Hoffmann, S.; Beyer, C.; Slowik, A. Omega-3 monityydyttymättömät rasvahapot parantavat hermoston tulehdusta ja lieventävät iskeemisiä aivohalvausvaurioita vuorovaikutuksella astrosyyttien ja mikroglian kanssa. J. Neuroimmunol. 2015, 278, 200–211. [CrossRef]

34. Ohab, JJ; Fleming, S.; Blesch, A.; Carmichael, ST Neurovaskulaarinen markkinarako neurogeneesille aivohalvauksen jälkeen. J. Neurosci. 2006, 26, 13007–13016. [CrossRef] [PubMed]

35. Zhang, W.; Wang, H.; Zhang, H.; Vuoto, RK; Shi, Y.; Hu, X.; Gao, Y.; Chen, J. Omega-3-monityydyttymättömiä rasvahappoja sisältävä ravintolisä edistää voimakkaasti hermosolujen korjaavaa dynamiikkaa ja parantaa neurologisia toimintoja aivohalvauksen jälkeen. Exp. Neurol. 2015, 272, 170–180. [CrossRef]

36. Gugnani, KS; Vu, N.; Rondón-Ortiz, AN; Böhlke, M.; Maher, TJ; Pino-Figueroa, AJ Makamidien neuroprotektiivinen vaikutus mangaanin aiheuttamaan mitokondriohäiriöön U-87 MG-glioblastoomasoluissa. Toxicol. Appl. Pharmacol. 2018, 340, 67–76. [CrossRef]

37. Zhou, Y.; Wang, H.; Guo, F.; Synti.; Brantner, A.; Yang, J.; Han, L.; Wei, X.; Zhao, H.; Bian, B. Integroitu proteomiikka ja lipidomiikka N-bentsyyliheksadekaanamidin neuroprotektiivisen vaikutuksen taustalla olevan mekanismin tutkimus. Molecules 2018, 23, 2929. [CrossRef] [PubMed]

38. Liu, Y.; Liu, Y.; Jin, H.; Cong, P.; Zhang, Y.; Tong, C.; Shi, X.; Liu, X.; Tong, Z.; Shi, L.; et ai. Kylmästressin aiheuttama aivovaurio säätelee TRPV1-kanavia ja PI3K/AKT-signalointireittiä. Brain Res. 2017, 1670, 201–207. [CrossRef]

39. Xu, W.; Li, T.; Gao, L.; Lenahan, C.; Zheng, J.; Yan, J.; Shao, A.; Zhang, J. Natriumbentsoaatti vaimentaa toissijaista aivovauriota estämällä neuronaalista apoptoosia ja vähentämällä mitokondriovälitteistä oksidatiivista stressiä aivojen sisäisen verenvuodon rottamallissa: DJ:n mahdollinen osallisuus-1/Akt/IKK/NFκB Pathway. Edessä. Mol. Neurosci. 2019, 12, 105. [CrossRef]

40. Li, J.; Minkä tahansa.; Wang, JN; Yin, XP; Zhou, H.; Wang, YS Curcumin kohdistuu verisuonten endoteelin kasvutekijöihin aktivoimalla PI3K/Akt-signalointireittiä ja parantaa aivojen hypoksi-iskeemistä vauriota vastasyntyneillä rotilla. Korealainen. J. Physiol. Pharmacol. 2020, 24, 423–431. [CrossRef]

41. Li, T.; Xu, W.; Gao, L.; Guan, G.; Zhang, Z.; Hän, P.; Xu, H.; Fan, L.; Yan, F.; Chen, G. Mesenkefaalisista astrosyyteistä peräisin oleva neurotrofinen tekijä tarjoaa hermosuojan subarachnoidaalisen verenvuodon aiheuttamalle varhaiselle aivovauriolle aktivoimalla Akt-riippuvaisen prosurvival-reitin ja puolustamalla veri-aivoesteen eheyttä. FASEB J. 2019, 33, 1727–1741. [CrossRef]

42. Morshead, CM; Reynolds, BA; Craig, CG; McBurney, MW; Staines, WA; Morassutti, D.; Weiss, S.; van der Kooy, D. Neuraaliset kantasolut aikuisen nisäkkään etuaivoissa: Subependymaalisten solujen suhteellisen rauhallinen alapopulaatio. Neuron 1994, 13, 1071-1082. [CrossRef]

43. Chiasson, BJ; Tropepe, V.; Morshead, CM; van der Kooy, D. Aikuisten nisäkkään etuaivojen ependymaaliset ja subependymaaliset solut osoittavat lisääntymispotentiaalia, mutta vain subependymaalisilla soluilla on hermokantasolujen ominaisuuksia. J. Neurosci. 1999, 19, 4462–4471. [CrossRef] 44. Alvarez-Buylla, A.; Lim, DA Pitkällä aikavälillä: Ylläpitää sukusoluja aikuisen aivoissa. Neuron 2004, 41, 683-686. [CrossRef]

45. Vescovi, AL; Snyder, EY Neuraalisten kantasolukloonien perustaminen ja ominaisuudet: Plastisuus in vitro ja in vivo. Brain Pathol. 1999, 9, 569–598. [CrossRef] [PubMed] 46. Buffo, A.; Rite, I.; Tripathi, P.; Leiper, A.; Colak, D.; Horn, AP; Mori, T.; Götz, M. Reaktiivisen glioosin alkuperä ja jälkeläiset: Monipotenttisolujen lähde loukkaantuneissa aivoissa. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 2008, 105, 3581–3586. [CrossRef]

47. Ahmed, AI; Shtaya, AB; Zaben, MJ; Owens, EV; Kiecker, C.; Gray, WP Endogeeniset GFAP-positiiviset hermoston kanta-/progenitorisolut postnataalisessa hiiren aivokuoressa aktivoituvat traumaattisen aivovaurion jälkeen. J. Neurotrauma 2012, 29, 828–842. [CrossRef] [PubMed] 48. Horesh, D.; Sapir, T.; Francis, F.; Wolf, SG; Caspi, M.; Elbaum, M.; Chelly, J.; Reiner, O. Doublecortin, mikrotubulusten stabilointiaine. Hyräillä. Mol. Genet. 1999, 8, 1599–1610. [CrossRef] [PubMed]

49. Ong, J.; Lentokone, JM; Vanhempi, JM; Silverstein, FS Hypoksi-iskeeminen vaurio stimuloi subventrikulaarisen vyöhykkeen proliferaatiota ja neurogeneesiä vastasyntyneellä rotalla. Pediatr. Res. 2005, 58, 600–606. [CrossRef] [PubMed]

50. Shao, Y.; Li, Y.; Liu, T. Tutkimus Maca-makamidien (Lepidium meyenii Walp.) uuttoprosessin optimoinnista. Ruokaa. Res. Dev. 2017, 38, 35–39.

51. Skorupskaite, V.; Makareviciene, V.; Gumbyte, M. Mahdollisuudet samanaikaiseen öljyn louhintaan ja transesteröintiin mikrolevistä valmistetun biodieselpolttoaineen tuotannon aikana: Katsaus. Polttoaine. Prosessi. Technol. 2016, 150, 78–87. [CrossRef]

52. Riisi, JE, 3.; Vannucci, RC; Brierley, JB Epäkypsyyden vaikutus hypoksis-iskeemiseen aivovaurioon rotalla. Ann. Neurol. 1981, 9, 131-141. [CrossRef] [PubMed]

53. Xiao, AJ; Chen, W.; Xu, B.; Liu, R.; Turlova, E.; Barszczyk, A.; Sun, CL; Liu, L.; Deurloo, M.; Wang, GL; et ai. Meriyhdiste ksyloketaali B vähentää vastasyntyneiden hypoksi-iskeemistä aivovauriota. Mar. Drugs 2014, 13, 29–47. [CrossRef] [PubMed]

54. Jiao, M.; Li, X.; Chen, L.; Wang, X.; Yuan, B.; Liu, T.; Dong, Q.; Mei, H.; Yin, H. Astrosyyteistä johdetun IL-33:n neuroprotektiivinen vaikutus vastasyntyneiden hypoksi-iskeemisessä aivovauriossa. J. Neuroinflflamm. 2020, 17, 251. [CrossRef] [PubMed]