Neem Leaf (Azadirachta Indica A. Juss) etanoliuute rottien maksan ja munuaisten toiminnasta

edmund.chen@wecistanche.com

Johdanto

lääkkeiden kehittäminen luonnontuotteista on nykyään maailman huomion kohteena. luonnontuotteilla on ainutlaatuinen kemiallinen rakenne, ne tuottavat erilaisia ​​biologisia vaikutuksia ja niillä on lääkkeen kaltaisia ​​ominaisuuksia [1]. plus e lääketieteen harjoittelua luonnontuotteilla on esiintynyt esihistoriallisista ajoista lähtien erilaisten sairauksien ehkäisyssä ja hoidossa. Luonnontuotteet tarjoavat monia etuja tehokkuuden ja molekyylikohteen selektiivisyyden suhteen, joten niitä voidaan käyttää toistuvasti kiireellisten lääkkeiden tehokkaaseen tyydyttämiseen [2]. Luonnontuotteet sisältävät aktiivisia yhdisteitä implantoituna [8, 9], antihyperglykeemisiä, haavaumia, sienilääkkeitä, antibakteerisia, tulehdusta ehkäiseviä, immunomoduloivia, antimutageenisia, syöpää, malarialääkkeitä, viruslääkkeitä, antioksidantteja [10–12], hedelmällisyyttä ehkäiseviä [13, 14] ja ehkäisy [9, 11]. Neem-kasvin eri osia on eristetty onnistuneesti, ne sisältävät yli 140 kemiallista yhdistettä [10], ja niitä on käytetty kasviperäisinä lääkkeinä tuhansia vuosia [14]. Neem sisältää erilaisia ​​primääriyhdisteitä, mukaan lukien rasvajohdannaisia, hiilihydraatteja ja proteiineja sekä sekundaarisia yhdisteitä, kuten flavonoideja, steroideja, saponiineja, terpenoideja, alkaloideja, glykosideja ja tanniineja [7–15]. Neem-kasvit ovat maailmanlaajuisesti kiinnostuneita, koska ne ovat tehokkaita ilman sivuvaikutuksia. plus neem-kasvin käyttö perinteisesti on melko turvallista, ja yli 75 prosenttia perinteisestä lääketieteestä käyttää neem-lehtiuutetta. plus sen käyttöhistoria olemassa olevien raporttien perusteella ei osoita mitään sivuvaikutuksia neem-lehdistä. Kuitenkaan ei ole koskaan tehty kattavaa turvallisuusarviointia neem-lehtivalmisteiden käytöstä [11].

CISTANCHE PARANTAA MUUNAISTEN/MUUNAISTEN TOIMINTAA

Edellinen tutkimus raportoi, että neem-lehtiuutteella on myrkyllisiä vaikutuksia maksaan jamunuainen [4, 11]; Muut raportit osoittavat kuitenkin, että neem-lehtiuute voi suojata maksaa jamunuainenvaurioilta [16–18]. Aceh Besar Regencyssä, Acehin maakunnassa, Indonesiassa, paikalliset ihmiset ovat käyttäneet neem-lehtiä vihanneksina ja estämään raskautta tietämättä sivuvaikutuksia. plus e neem-lehtien turvallisuus tähän mennessä on edelleen epäselvä. Tietojemme mukaan tähän asti on vielä rajallisia tutkimuksia, jotka arvioivat neem-lehden etanoliuutteen vaikutusta maksaan jamunuaisten toiminta. Tässä tutkimuksessa tavoitteena oli selvittää neem-lehden etanoliuutteen vaikutusta maksaan jamunuaisten toimintatutkimalla ASAT-, ALT-, urea- ja kreatiniinipitoisuudet sekä histopatologinen maksa jamunuainenurosrotissa.

Avainsanat:Munuaisten toiminta; Munuaiskudokset; munuaisten vajaatoiminta; Munuaissairaus; Munuaiset

Materiaalit ja menetelmät

Neem Leaf -näytekokoelma.Neem-lehdet kerättiin Kajhun kylästä, Aceh Besar Regencysta, Acehin maakunnasta, Indonesiasta, syyskuussa 2019. Neem-lehtien tunnistus suoritettiin Bogoriense Herbariumissa, Biology Research Center, Indonesian Institute of Sciences (LIPI), Bogor, Indonesia (1454). /IPH.1.01/If.07/VII/2019), ja se on merkitty nimellä Azadirachta indica A. Juss.Neem-lehden etanoliuutteen valmistus.Tuoreet neem-lehdet kerättiin, pestiin, ilmakuivattiin ja muussattiin raakajauheen tuottamiseksi. Lisäksi raakajauhetta maseroitiin 70-prosenttisella etanolilla 7 päivän ajan. plus fi, suodos haihdutettiin käyttämällä pyöröhaihdutinta 50 asteessa viskoosien uutteiden tuottamiseksi.Eläinkoe.Koe-eläimet olivat 24 urospuolista Wistar-rottaa, joiden ruumiinpaino oli 150–250 g. Rotat sopeutuivat 7 päivään ja jaettiin satunnaisesti neljään ryhmään (TO, T1, T2 ja T3), koska jokainen ryhmä sisälsi 6 rottaa. T0 on kontrolliryhmä ilman käsittelyä ja T1, T2 ja T3 ovat käsittelyryhmät, jotka olivat

annettiin neem-lehden etanoliuutetta 100, 200 ja 300 mg/kg ruumiinpainoa, vastaavasti. uutetta annettiin suun kautta mahaletkulla 48 päivän ajan, ja verinäytteitä otettiin 49. päivänä ASAT-, ALT-, urea- ja kreatiniinipitoisuuksien määrittämiseksi ja sitten maksa- jamunuainenkudokset kerättiin histopatologian arvioimiseksi. Tutkimuksen aikana rotille annettiin vakiorehua ja vettä ad libitum.

Biokemiallinen analyysi.Verinäytteet (2–3 ml) otettiin sydämestä steriilillä ruiskulla. plus fi, veri siirrettiin Eppendorf-putkeen ja jätettiin huoneenlämpötilaan (30 astetta) 10 minuutiksi. Verta sentrifugoitiin 10 minuuttia nopeudella 3000 rpm. plus e seerumi erotettiin ja säilytettiin jääkaapissa (0 20 astetta). Lisäksi AST, ALT, urea ja veren kreatiniini tutkittiin käyttämällä kemiallista analysaattoria (Rayto RT-1904C). plus e AST-, ALT-, urea- ja kreatiniinipitoisuuksien määritysmenettely suoritettiin valmistajan ohjeiden mukaisesti.

Histopatologinen tutkimus. The maksa jamunuainenrotista kiinnitettiin 10-prosenttisessa neutraalissa puskuroidussa formaliiniliuoksessa 24 tunnin ajan, kuivattiin alkoholisarjassa ja kirkastettiin ksyloliliuoksessa, minkä jälkeen upotettiin parafiinilohkoon. Parafiinilohkoon upotetut kudokset leikattiin pyörivällä mikrotomilla 4 um:n paksuisiksi, kiinnitettiin lasilevyille, värjättiin hematoksyliinillä ja eosiinilla ja tutkittiin valomikroskoopilla suurennuksella 10 x 10.Tilastollinen analyysi.Tiedot analysoidaan käyttämällä varianssianalyysiä (yksisuuntainen ANOVA), jota seuraa Duncanin posthoc-testi käyttäen SPSS 24:ää. p-arvo<0.05 was="" considered="" statistically="">

CISTANCHE PARANTAA MUNUAINEN/MUUNAISKIPUA

Tulokset ja keskustelu

6e AST- ja ALT-pitoisuus. plus e AST:n T0, T1, T2 ja T3 AST-pitoisuus oli 290,9 ± 202,5 U/L, 277,2 ± 167,2 U/L, 421,3 ± 2{ {28}}1,5 U/L ja 366,3 ± 276,9 U/L, vastaavasti. plus e AST-konsentraatiolla T2- ja T3-ryhmissä oli taipumus nousta verrattuna T{{30}}:aan (kontrolliryhmä). AST-pitoisuudet T1-, T2- ja T3-ryhmissä eivät kuitenkaan osoittaneet merkitsevää eroa T0-ryhmään (p > 0,05). plus e ALT-pitoisuus T0:ssa, T1:ssä, T2:ssa ja T3:ssa oli 108,6 ± 23,1 U/L, 116,3 ± 51,9 U/L, 105,9 ± 15,2 U/L ja 95,9 ± 36,2 U/L. plus e ALT-konsentraatiolla T2- ja T3-ryhmissä oli taipumus laskea verrattuna T0:aan (kontrolliryhmä).

ALT-pitoisuudet T1-, T2- ja T3-ryhmissä eivät kuitenkaan osoittaneet merkitsevää eroa T0-ryhmään (p > 0,05) (taulukko 1). AST-entsyymi on yksi markkeri, jota käytettiin maksavaurion arvioimiseen. plus on entsyymi, joka osallistui glukoneogeneesiprosessiin katalysoimassa asparagiinihapon aminoryhmän muuttumista ketoglutaarihapoksi oksaloetikkahapon tuottamiseksi. AST-entsyymiä löytyy maksan, luurankolihasten, sydänlihasten, sytosolisten ja mitokondrioiden isoentsyymeistä,munuaiset,aivot, haima, keuhkot, leukosyytit ja punasolut. Tämä AST-entsyymi on kuitenkin vähemmän herkkä ja spesifinen maksavaurion arvioinnissa [19]. Vaikka AST-pitoisuuksissa ei ollut merkittäviä eroja hoitoryhmissä (T1, T2 ja T3) verrattuna kontrolliryhmään (T0), AST-konsentraatiolla oli taipumus nousta T2- ja T3-ryhmissä verrattuna T-ryhmään. 0 (vertailuryhmä). plus e nousu oli mahdollisesti myöhässä neem-lehtiuutteiden aktiivisten yhdisteiden, kuten flavonoidien, tanniinien, saponiinien, alkaloidien ja steroidien vuoksi, mutta neem-lehtietanoliuutteen aktiivisten yhdisteiden ei ole havaittu lisäävän AST:ta. AST-entsyymin nousua ei välttämättä seuraa maksavaurio, koska tämä entsyymi ei ole spesifinen vain maksassa vaan myös muissa kehon kudoksissa.

Tässä tutkimuksessa havaittiin myös, että ALT-entsyymillä oli taipumus laskea hoitoryhmässä (T1, T2 ja T3) verrattuna kontrolliryhmään (T0), mutta ALT-entsyymin lasku ei ollut tilastollisesti merkitsevä. ALT-entsyymit olivat parempi maksavaurion ennustaja kuin AST-entsyymit, koska tätä sytosolientsyymiä löydettiin maksassa korkeimpina pitoisuuksina ja se oli tarkempi arvioitaessa maksan toiminnan vaurioita [20]. plus on entsyymi, joka osallistui glukoneogeneesiin katalysoimalla aminoryhmien siirtymistä alaniinista ketoglutaarihappoon palorypälehapon tuottamiseksi [19]. ALT koostui 496 aminohaposta ja sitä löydettiin sytosolin hepatosyyteistä. Maksan ALT-entsyymiaktiivisuus oli noin 3000 kertaa seerumin aktiivisuus, joten maksasoluvaurion tai kuoleman tapauksessa vaurioituneista maksasoluista vapautuva ALT lisää ALT-entsyymin mitattua aktiivisuutta seerumissa [21].

CISTANCHE PARANTAA MUNUAIS-/MUUNAISDIALYYSIÄ

Mohamed et ai. [22] havaitsivat, että neem-lehden etanoliuute aiheutti rotan AST- ja ALT-entsyymien laskun. Neem-lehden etanoliuutteella ei ollut sivuvaikutuksia maksaan, ja se toimii jopa maksan suojana. Haque et ai. [23] havaitsivat myös, että neem-lehtiuute ei aiheuttanut muutoksia AST- ja ALT-entsyymien normaalissa seerumiaktiivisuudessa urosrotilla. Bhangra et ai. [24] raportoivat, että 500 mg/kg:n neem-lehtiuutteen antaminen parasetamoli-indusoiduille rotille vähensi maksavaurioita, kuten normaalit AST- ja ALT-pitoisuudet ja histopatologiset havainnot osoittavat. Dkhil et ai. tekemän tutkimuksen tulokset. [17] osoittivat sisplatiinin aiheuttaman rotan suojaavan vaikutuksen neem-lehtien metanoliuutteella 500 mg/kg:n annoksella maksaan. Mallick et ai. [25] raportoivat, että neem-lehden metanoliuutteella ei ollut myrkyllistä vaikutusta rotan maksaan edes suurina annoksina. Neem-lehtiuutteen antioksidanttipitoisuus antoi hepatoprotektiivisen vaikutuksen. Hartonon ja Prabowon suorittamassa tutkimuksessa [26] havaittiin, että neem-lehden etanoliuutteen antaminen rotille indusoimalla suuria parasetamoliannoksia kymmenen päivän ajan saattoi myös vähentää ALT-entsyymin aktiivisuutta koe-eläimissä. ALT-entsyymin lasku johtui neem-lehtiuutteen aktiivisesta yhdisteestä, joka toimi hepatosuojana estämällä oksidatiivista maksavauriota. Antioksidantit voisivat vähentää vapaita radikaaleja muodostumista varten suoralla poistamisella, mikä vähentää reaktiivisten happilajien (ROS) muodostumista, joilla on myrkyllisiä vaikutuksia kalvon fosfolipideihin ja jotka aiheuttavat laajan kirjon soluvaurioita. Antioksidantit voivat vähentää maksasolujen oksidatiivista stressiä ja veren ALT-entsyymin aktiivisuus laskee.

Urea- ja kreatiniinipitoisuus.T{{0}}, T1, T2 ja T3 ureapitoisuus oli 51,1 ± 7.0 mg/dl, 55,6 ± 8,5 mg/dl, 44,5 ± 5,4 mg/dl ja 48,4 ± 3,4 mg/dl, vastaavasti. Ureapitoisuudet T1-, T2- ja T3-ryhmissä osoittivat merkittäviä eroja T0-ryhmään verrattuna (p < 0.{{30}}5).="" t0,="" t1,="" t2="" ja="" t3="" kreatiniinipitoisuus="" oli="" 0,22="" ±="" 0.{{40}}4="" mg/dl,="" {{44="" }},24="" ±="" 0.03="" mg/dl,="" 0,21="" ±="" 0,03="" mg/dl="" ja="" 0,25="" ±="" 0,03="" mg/dl.="" kreatiniinipitoisuudet="" t1-,="" t2-="" ja="" t3-ryhmissä="" eivät="" osoittaneet="" merkitsevää="" eroa="" t0-ryhmään="" (p=""> 0,05) (kuvio 1). Themunuainensillä on tärkeä rooli jätetuotteiden ja toksiinien, kuten urean, kreatiniinin ja virtsahapon, erittymisessä; sillä on myös tehtävä solunulkoisen nesteen tilavuuden, osmolaliteetin, elektrolyyttipitoisuuksien ja hormonituotannon säätelyssä. plus e toiminnallinen yksikkömunuainenon nefroni, joka koostuu glomeruluksesta, proksimaalisista tubuluksista, distaalisista tubuluksista ja keräyskanavista [27]. plus e -tulokset osoittivat, että ureapitoisuuksissa oli merkittäviä eroja hoitoryhmissä (T1, T2 ja T3) verrattuna kontrolliryhmään (T0), ja ureapitoisuus laski T2- ja T3-ryhmissä verrattuna. T0 (verrokkiryhmä). Urea on typpeä sisältävä yhdiste, joka muodostuu maksassa proteiiniaineenvaihdunnan ja ureakierron lopputuotteena. Noin 85 prosenttia alueesta erittyymunuaisetja loput erittyvät ruoansulatuskanavan kautta. Seerumin urea lisääntyy munuaisten puhdistustiloissa, kuten akuutissa ja kroonisessamunuaisten vajaatoiminta. Urea voi lisääntyä myös muissa olosuhteissa, kuten ylemmän maha-suolikanavan verenvuodon, kuivumisen, katabolisten prosessien ja proteiinipitoisen ruokavalion yhteydessä [27].Tässä tutkimuksessa urean pitoisuus hoitoryhmässä laski kontrolliryhmään verrattuna. on osoitettu, että neem-lehden etanoliuute ei vaikuttanutmunuaisten toimintaurosrotista. Guytonin ja Hallin [28] mukaan veren kokonaisurea määräytyi ravinnon proteiinin jamunuaiseturean erittämiseen. Jos munuaiset vaurioituivat, urea kertyy vereen. Lisääntynyt urea plasmassa on osoitettumunuaisten vajaatoimintasuorittaessaan suodatustehtäväänsä. plus e kuntomunuaisten vajaatoimintauremia, jolle on ominaista erittäin korkea plasman ureapitoisuus.

Urea on typen lopputuote, joka on peräisin proteiinien ja aminohappojen kataboliasta, jota tuottaa maksa ja joka jakautuu kaikkiin solunsisäisiin ja solunulkoisiin nesteisiin. Vuonnamunuainenurea suodattuu verestä glomerulusten avulla ja imeytyy osittain uudelleen veteen. Lisääntynyt urea on osoitus siitä, että glomerulusten suodatusnopeus on huono. Lisääntynyt ureapitoisuus liittyymunuaissairaustai epäonnistuminen, virtsateiden tukosmunuainenkivet, sydämen vajaatoiminta, nestehukka, kuume, sokki ja verenvuoto ruoansulatuskanavassa.Tutkimuksessa havaittiin myös, että kreatiniinipitoisuuksissa ei ollut merkittäviä eroja hoitoryhmissä (T1, T2 ja T3) verrattuna kontrolliryhmään (T0). on osoitettu, että neem-lehtien etanoliuute ei aiheuttanut vahinkoa rotallemunuainen.Kreatiniinia käytetään yleisesti mittanamunuaisten toiminta. Kreatiniinipitoisuuteen ei vaikuta vain lihasmassan tuote, vaan myös lihasten toiminta, lihaskoostumus, aktiivisuus, ruokavalio ja terveydentila. Lisääntynyt kreatiniinipitoisuus havaitaan myös lihasdystrofiassa, anemiassa, leukemiassa ja kilpirauhasen liikatoiminnassa [29]. Kreatiniini on yleisimmin käytetty markkeri arvioinnissamunuaisten toiminta.kreatiniinipitoisuus on indikaattori glomeruluksen toiminnasta. Kreatiniini on kreatiinifosfaatin sivutuote lihaksissa, ja keho tuottaa sitä tasaisella nopeudella. Suurin osa kreatiniinista poistuu verestä kokonaanmunuaiset. Lisääntynyt kreatiniini osoittaa heikentynyttä puhdistustamunuaiset. Kreatiniiniseerumi on tarkempi arviomunuaisten toimintakuin urea [27].

Moneim et ai. [16] havaitsivat, että neem-lehtiuutteen antaminen annoksella 500 mg/kg ruumiinpainoa viiden päivän ajan rotilla ei aiheuttanut muutoksia urea- ja kreatiniinipitoisuuksissa rotilla. Kepala et ai. [30] havaitsivat myös, että rotta, jota ruokittiin neem-lehtiuutteella annoksella 500 mg/kg ruumiinpainoa 14 päivän ajan, aiheutti sisplatiinin aiheuttaman rotan urea- ja kreatiniinipitoisuuksien laskun.munuaisvaurio. Neem-lehden etanoliuute toimi nefrosuojana vuonnamunuaisvaurio.Somsak et al. [18] havaitsivat, että neem-lehtivesiuutteella annoksina 1000 ja 2000 mg/kg ruumiinpainoa ei ollut myrkyllisiä vaikutuksia rotille. Neem-lehtiuutetta voidaan käyttää ehdokkaana munuaisten suojaamiseen vaurioita vastaanmunuaiset.

Maksan ja munuaisten histopatologia.Maksan histopatologiset havainnot kontrolliryhmässä (kuva 2(a) ja hoitoryhmässä annoksilla 100 mg/kg (kuva 2(b)), 200 mg/kg (kuva 2(c)) ja 300 mg/kg (Kuva 2(d)) osoitti, että maksa, keskuslaskimot ja hepatosyyttisolut näyttivät normaaleilta (kuva 2).munuainenhistopatologiset havainnot kontrolliryhmässä (kuva 3(a)) ja hoitoryhmässä annoksilla 100 mg/kg (kuva 3(b)), 200 mg/kg (kuva 3(c)) ja 300 mg/kg ( Kuvio 3(d)) osoitti glomeruluksen ja proksimaalisten ja distaalisten tubulusten normaalin ulkonäön. plus ei ollut histologista muutostamunuainen(Kuva 3).

Maksa jamunuaisetovat elimiä, joilla on tärkeä rooli lääkkeiden tai muiden aineiden aineenvaihdunnassa ja erittymisessä. Tutkimuksessa osoitettiin, että neem-lehtien etanoliuutteen antaminen annoksina 100, 200 ja 300 mg/kg ei aiheuttanut poikkeavuuksia ja vaurioita rotan maksassa. plus e maksa käsitellyillä rotilla osoitti normaalin maksan yleisen rakenteen ja normaalin keskuslaskimojen ja hepatosyyttisolujen ulkonäön. plus e maksan histopatologia seuraa AST- ja ALT-entsyymien analyysin tuloksia, jotka osoittivat, että kontrolli- ja hoitoryhmien välillä ei ollut merkittävää eroa. Vaikka AST-entsyymi lisääntyi 200 ja 300 mg/kg ryhmässä verrattuna kontrolliryhmään, maksan histopatologia vaikutti normaalilta. AST-entsyymi ei ole spesifinen maksavaurioille. AST:ta löytyy pääasiassa punasoluista, sydän- ja luustolihaksista sekämunuaiset. AST on vähemmän herkkä maksalle kuin ALT [19].

Themunuainenhistopatologiset havainnot neem-lehden etanoliuutteen antamisen jälkeen annoksilla 100, 200 ja 300 mg/kg eivät osoittaneet eroa kontrolliin verrattuna. Themunuainenhoidetuilla rotilla osoitti normaalia yleistärakennemunuainenja glomeruluksen ja tubulusten normaali ulkonäkö. Tätä havaintoa tukee rotan veren urean ja kreatiniinin analyysi, joka ei osoittanut merkittävää eroa kontrolli- ja hoitoryhmien välillä. Urea ja kreatiniini ovat biokemiallisia parametreja, jotka ovat tärkeimmät indikaattoritmunuaisten toiminta. Kreatiniini on kuitenkin tarkempi arviomunuaisten toimintakuin urea [27]. Tämä on linjassa joidenkin aiempien raporttien kanssa, joiden mukaan neem-lehtiuutteella on potentiaalisia maksa- ja munuaisia ​​suojaavia vaikutuksia [31]. Kusuma et ai. [32] havaitsivat, että neem-lehden etanoliuute ei vaikuttanut hepatosyyttien halkaisijaan, maksalohkojen halkaisijaan ja maksan painoon rotalla. Sitä vastoin Katsayalin et al. [33] havaitsivat, että neem-lehtien metanoliuutteen antaminen annoksina 500, 1000 ja 2000 mg/kg aiheutti poikkeavuuksia hoidettujen rottien maksassa ja munuaisissa verrokkeihin verrattuna. Tämä ero tuloksissa johtui luultavasti neem-lehtien erilaisista uuteannostuksista. TheTämän tutkimuksen tulokset osoittavat, että Kajhun neem-lehtien etanoliuute ei aiheuttanut vaurioita maksalle jamunuaiseturosrotista. plus johtuu neem-lehtien etanoliuutteen aktiivisesta yhdisteestä, joka on antioksidantti. Aiemmat tutkimukset osoittavat, että Kajhun neem-lehden etanoliuute sisältää flavonoideja, alkaloideja, tanniineja, saponiineja ja steroideja [34]. plus e aktiivisia yhdisteitä, jotka toimivat antioksidantteina, ovat flavonoideja. plus e neem-lehden etanoliuutteella on voimakas antioksidanttivaikutus [35]. plus meille, Kajhun neem-lehtien etanoliuute on turvallista urosrottien maksalle ja munuaisille.

CISTANCHE PARANTAA MUNUAIKAISTEN/MUUNAISTEN VAATTOA

Johtopäätökset

Neem-lehtien etanoliuute ei aiheuttanut vaurioita maksalle eikämunuainenurosrotan AST-, ALT-entsyymien, urean ja kreatiniinipitoisuuden sekä histopatologisen maksan jamunuainen. Lisätutkimuksia tarvitaan kuitenkin neem-lehtiuutteen kattavaan turvallisuusarviointiin eri annoksilla, jotta saadaan selkeä kuva neem-lehtien turvallisuudesta lääkkeille.