Bakuchiolin monisuuntainen aktiivisuus kasvojen ikääntymisen solumekanismeja vastaan ​​– Kokeellinen todiste kokonaisvaltaisesta hoitomenetelmästä, osa 1

Abstrakti

Tavoite: Ihon ikääntyminen on monitekijäinen prosessi, johon liittyy reaktiivisten happilajien muodostuminen, peräkkäinen tulehdus, johon liittyy epidermaalisen ja ihon solujen elinkelpoisuuden väheneminen, ja siitä aiheutuva solunulkoisen matriisin vaurioituminen. Tehokkaiden ihokosmeettisten hoitomuotojen tulisi ihanteellisesti käsitellä näitä tunnusmerkkejä kokonaisvaltaisessa lähestymistavassa. Tässä määritimme bakuchiolin, kasviperäisen meroterpeenin, vastaavan aktiivisuusprofiilin useissa in vitro-, ex vivo- ja in vivo -tutkimuksissa ja vertasimme sitä retinoliin, jota tällä hetkellä pidetään kultaisena standardina paikallisessa ikääntymistä estävässä kosmetiikassa.

Cistanchen glykosidi voi myös lisätä SOD:n aktiivisuutta sydämen ja maksan kudoksissa ja vähentää merkittävästi lipofussiinin ja MDA:n pitoisuutta kussakin kudoksessa, poistaen tehokkaasti erilaisia ​​reaktiivisia happiradikaaleja (OH-, H₂O₂ jne.) ja suojaamalla DNA-vaurioilta. OH-radikaalien toimesta. Cistanche-fenyylietanoidiglykosideilla on vahva vapaita radikaaleja poistava kyky, suurempi pelkistyskyky kuin C-vitamiini, ne parantavat SOD:n aktiivisuutta siittiösuspensiossa, vähentävät MDA-pitoisuutta ja niillä on tietty suojaava vaikutus siittiöiden kalvon toimintaan. Cistanche-polysakkaridit voivat lisätä SOD:n ja GSH-Px:n aktiivisuutta D-galaktoosin aiheuttamien kokeellisesti vanhenevien hiirten punasoluissa ja keuhkokudoksissa sekä vähentää MDA- ja kollageenipitoisuutta keuhkoissa ja plasmassa sekä lisätä elastiinipitoisuutta. hyvä huuhteluvaikutus DPPH:lle, pidentää hypoksian aikaa vanhenevilla hiirillä, parantaa SOD:n aktiivisuutta seerumissa ja viivyttää keuhkojen fysiologista rappeutumista kokeellisesti vanhenevilla hiirillä Solumorfologisen rappeutumisen yhteydessä kokeet ovat osoittaneet, että Cistanchella on hyvä antioksidanttikyky ja sillä on potentiaalia olla lääke ihon ikääntymisen sairauksien ehkäisyyn ja hoitoon. Samaan aikaan Cistanchen ekinakosidilla on merkittävä kyky poistaa DPPH-vapaita radikaaleja ja se voi poistaa reaktiivisia happilajeja, estää vapaiden radikaalien aiheuttaman kollageenin hajoamisen ja sillä on myös hyvä korjaava vaikutus tymiinin vapaiden radikaalien anionivaurioihin.

Napsauta Antioksidantti Cistanche Tubulosaa

【Lisätietoja:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】

menetelmät: Bakukiolin ja retinolin hapettumisenestokyky ja teho analysoitiin mittaamalla 2,2'-difenyyli-1-pikryylihydratsyylin (DPPH) pelkistyminen sen absorptiohajoamisen ja elektronin spin-resonanssispektroskopian avulla. Vaikutukset prostaglandiini E2 (PGE2), makrofagien migraatiota estävä tekijä (MIF), fibroblastikasvutekijä 7 (FGF7), tyypin I ja VII kollageeni (COL1A1, COL7A1), fibronektiini (FN) tasoihin sekä vesiliukoisen tetratsoliumin metaboloitumiseen 1 (WST-1) määritettiin ihmisen ihon fibroblasteista. Epidermaalinen regeneraatio arvioitiin käyttämällä in vitro haavan paranemismallia. FN-proteiinin tasot analysoitiin ex vivo bakuchiolia, retinolia tai vehikkeliä sisältävällä formulaatiolla käsittelyn jälkeen käyttämällä imukuplienestettä. Ihon kunnon paraneminen määritettiin in vivo kasvojen halkeaman vertailututkimuksessa bakuchiolin tai vehikkelin levittämisen jälkeen.

Tulokset: Toisin kuin retinoli, bakuchiolilla oli korkea antioksidanttiteho. Sekä bakuchiol että retinoli laskivat merkittävästi PGE2- ja MIF-tasoja. Bakuchiol, mutta ei retinoli, lisäsi merkittävästi FGF7-proteiinitasoja. Bakuchioli ja retinoli lisäsivät merkittävästi WST-1-aineenvaihduntatasoja. Bakuchiolin ja retinolin käyttö johti merkittävään COL1A1-, COL7A1- ja FN-proteiinitasojen lisääntymiseen. Bakuchiolilla, mutta ei retinolilla täydennetyt haavat lisäsivät merkittävästi orvaskeden uusiutumista. Kliinisesti bakuchiolia sisältävällä formulaatiolla käsitellyt alueet osoittivat tilastollisesti merkitsevää nousua FN-proteiiniarvoissa 4-viikon käytön jälkeen verrattuna käsittelemättömiin alueisiin ja vehikkelillä käsiteltyihin alueisiin.

Johtopäätös: Nämä tiedot tarjoavat todisteita bakuchiolin monisuuntaisesta tehosta ihon ikääntymisen solujen tunnusmerkkejä vastaan. Sen aktiivisuusprofiililla on joitain yhteisiä piirteitä retinolin kanssa, mutta se osoittaa useita tähän mennessä tuntemattomia positiivisia vaikutuksia tutkimuksissamme, nimittäin kriittisen ekstrasellulaarisen matriisin komponentin FN stimulaatiota ja nopeutettua epidermaalista regeneraatiota ja haavan paranemista.

AVAINSANAT

anti-aging, bakuchiol, väitteen perustelut in vivo/ex vivo/in vitro, retinoli, ihon fysiologia/rakenteet

JOHDANTO

Ikääntyneelle iholle on ominaista ryppyjä, epätasainen pigmentti, ihon karheus ja löysyys. Nämä kliiniset oireet ovat seurausta rakenteellisista ja metabolisista muutoksista, jotka aiheutuvat sisäisestä ja ulkoisesta ikääntymisestä. Sisäisen ikääntymisen on katsottu johtuvan tekijöistä, kuten telomeerien lyhenemisestä, kroonisesta tulehduksesta, mitokondrion DNA:n yksittäisistä mutaatioista ja vapaista radikaaleista [1]. Ikääntynyt iho sisältää lisäksi sen antioksidanttijärjestelmän vähenemisen[2]. Myös solujen lisääntymisnopeus laskee biologisen ikääntymisprosessin vuoksi, mikä johtaa ihon rakenteen ja toiminnan menettämiseen. Ulkoinen ikääntyminen laukaisee ensisijaisesti UV-säteilyn ja ympäristövaikutukset. Nämä loukkaukset johtavat ihovaurioihin, jotka vahvistavat kronologista heikkenemistä ja nopeuttavat ihon ikääntymistä. Ihmisen iho menettää edelleen kykynsä selviytyä tulehduksellisista tiloista ikääntymisen aikana, mikä johtaa krooniseen proinflammatoriseen tilaan.

Retinoidien, kuten retinoiinihapon, verkkokalvon tai retinolin, paikallista käyttöä pidetään tehokkaan ikääntymistä ehkäisevän hoidon kliinisenä kultastandardina [3, 4]. Retinoidien molekyylimekanismeja on kuvattu laajasti [5–10]. Paikalliset retinoidit vähentävät tehokkaasti näkyviä ikääntymisen merkkejä, kuten ryppyjä, löysyyttä tai karheutta [4, 11] ja vähentävät valovaurioituneen ihon pigmentoitumista, mukaan lukien livedo reticularis ja aktininen lentigines [12]. Paikallinen hoito retinoideilla voi kuitenkin johtaa pitoisuudesta riippuvaiseen ihon kuivumiseen ja ärsytykseen [13]. Koska retinolin käyttö aiheuttaa vähäisiä haittavaikutuksia verrattuna muihin retinoideihin, kuten retinoiinihappoon [6, 14], sitä käytetään laajalti kasvojen ikääntymisen kosmeettisessa hoidossa.

Toisin kuin retinoli, jota on käytetty ihonhoitotuotteissa vuodesta 1984 [15], bakuchiol on vasta äskettäin saanut huomiota ajankohtaisena ikääntymistä estävänä yhdisteenä. Bakuchiol on meroterpeeni (kuva 1), joka on johdettu Psoralea corylifolia -siemenistä. Sitä on käytetty perinteisessä intialaisessa ja kiinalaisessa lääketieteessä vuosisatojen ajan [16, 17] ja se on hyvin siedetty [18]. Bakuchiolilla ehdotettiin retinolin kaltaisia ​​toimintoja, sillä ihonkorvikemallissa molemmilla aineilla on samanlaiset geeniekspressiomallit in vitro [19] ja ihon valovaurioiden paraneminen in vivo [20]. Siksi sitä on kutsuttu myös kasviperäiseksi toiminnalliseksi retinoidianalogiksi [21]. Lisätutkimukset osoittivat bakuchiolin antioksidanttisen [19, 22–24], anti-inflammatorisen [19, 25–27], antibakteerisen [28] sekä antiproliferatiivisen ja kasvaimia estävän vaikutuksen [29, 30].

Monitekijäisten ihon ikääntymisprosessien tehokkaaksi parantamiseksi ja viivästymiseksi erilaisia ​​solumekanismeja on käsiteltävä integroidulla lähestymistavalla. Bakuchiol moduloi samanaikaisesti useita kohteita, mikä tekee siitä lupaavan yhdisteen tässä suhteessa. Koska oksidatiiviset ja tulehdusstressit liittyvät läheisesti ihon ikääntymiseen, niiden estäminen bakuchiolilla saattaa edistää ihon yleistä tilaa. Nykyisen tieteellisen näytön laatua on kuitenkin viime aikoina arvioitu kriittisesti [31]. Tässä yhteydessä määritimme bakuchiolin ja retinolin (i) antioksidatiiviset ja (ii) anti-inflammatoriset kapasiteetit ja tutkimme niiden kykyä parantaa solujen aineenvaihduntaa ja kasvutekijä 7:n synteesiä tiivistettynä (iii) soluaktiivisuuteen. Analysoimme edelleen, vaikuttavatko bakuchiol ja retinoli tiettyjen (iv) ECM-komponenttien ekspressioon ja parantavatko (v) epidermaalista regeneraatiota ja epitelisaatiota. Lopuksi suoritettiin in vivo -tutkimus bakuchiolin kliinisen ikääntymisen estokyvyn tarkistamiseksi ihmisen ihossa.

MATERIAALIT JA MENETELMÄT

Testimateriaalit

Bakuchiol hankittiin Sytheon Ltd:ltä (Boonton, New Jersey, Yhdysvallat). Retinoli ostettiin Sigma-Aldrichilta (St. Louis, Missouri, Yhdysvallat). Soluviljelykokeita varten molemmat testiaineet laimennettiin juuri DMSO:hon (Merck, Darmstadt, Saksa). DMSO-kantaliuoksille käytetty testiaineiden pitoisuus oli 1000-kertaisesti korkeampi kuin suurin soluviljelmässä käytetty pitoisuus, jolloin saatiin 0,1 prosenttia DMSO:ta elatusaineessa tai puskurissa. Lisälaimennokset suoritettiin käyttämällä väliainetta tai puskuria, jossa oli 0,1 prosenttia DMSO:ta. Tästä syystä kaikki soluviljelykokeet suoritettiin 0,1 prosentin DMSO:n läsnä ollessa. In vivo -tutkimuksia varten paikallisesti käytettävä retinoli formuloitiin samaan vehikkeliin kuin bakuchiol.

In vitro -tutkimukset

Antioksidatiivisen kapasiteetin määrittäminen

Bakuchiolia, retinolia (molempia käytetty lopullisessa pitoisuudessa 100 µM) tai korkean standardin troloxia (Merck, lopullinen pitoisuus 25 µM) laimennettiin DMSO:hon. Lyhyesti sanottuna 30 µl näitä yhdisteitä (10-kertaa suurempi pitoisuus kuin lopullinen määrityskonsentraatio) lisättiin 96-kuopan tasapohjaiselle levylle. Sen jälkeen kuhunkin kuoppaan lisättiin nopeasti 270 µl 39 ug/ml DPPH:ta (Merck, laimennettuna 1:1 vesi/etanoli-seokseen), jolloin saatiin 10 prosentin DMSO:n lopullinen pitoisuus. Kontrollina DPPH-liuosta inkuboitiin DMSO:n kanssa, josta puuttui testiaineet. Lisäksi nollakontrollit suoritettiin inkuboimalla bakuchiolia tai retinolia vesi/etanoli (1:1) tai vain vesi/etanoli (1:1) -seoksen, joka sisälsi 10 prosenttia DMSO:ta, kanssa ilman DPPH:ta. 10, 30 ja 60 minuutin kuluttua absorbanssi mitattiin aallonpituudella 524 nm käyttämällä Spark-monimoodimikrolevylukijaa (Tecan, Männedorf, Sveitsi). Tyhjien kontrollien signaalit vähennettiin.

Antioksidanttivoiman määritys

HDF:t kylvettiin {{0}}kuoppalevyille, joissa oli 150 000 solua/kuoppa 2 ml:n väliaineessa, joka sisälsi 10 prosenttia vasikan seerumia, ja inkuboitiin 24 tuntia. Sen jälkeen vanha elatusaine heitettiin pois ja soluja käsiteltiin alustalla, joka sisälsi 2 prosenttia vasikan seerumia ja bakuchiolia tai retinolia lopullisessa pitoisuudessa 10 µM. Kontrolli-HDF:itä täydennettiin 0,1 prosentilla DMSO:ta, josta puuttui bakuchioli tai retinoli. Tyhjät kontrollit suoritettiin inkuboimalla väliainetta ilman soluja. 24 tunnin kuluttua käsitelty väliaine siirrettiin Vivaspin-proteiinikonsentraattorin spin-pylväisiin (5000 MWCO; Sartorius, Göttingen, Saksa) ja konsentroitiin noin 10--kertaiseksi. Kaikkien väliainesupernatanttien tilavuudet tasattiin lisäämällä uudelleen läpivirtaus. FGF7-proteiinitasot väkevässä käsitellyssä elatusaineessa analysoitiin käyttämällä kaupallisesti saatavaa ELISA-pakkausta noudattaen valmistajan ohjeita (Bio-Techne GmbH). Mittaukset suoritettiin käyttämällä Spark multimode -mikrolevylukijaa (Tecan). Nollakontrolleista saadut signaalit vähennettiin ja FGF7-proteiinitasot normalisoitiin solujen kokonaismäärään, joka määritettiin käyttämällä solulaskuria (Scepter, Merck).

WST{0}}-aineenvaihdunnan määrittäminen

HDF:t kylvettiin {{0}}kuoppalevyille, joissa oli 3000 solua/kuoppa 100 µl:ssa elatusainetta, joka sisälsi 10 prosenttia vasikan seerumia, ja inkuboitiin 24 tuntia. Tyhjennetty elatusaine heitettiin pois ja soluja käsiteltiin 100 µl:lla väliainetta, joka sisälsi retinolia tai bakuchiolia lopullisessa pitoisuudessa 1 µM tai 10 µM. Kontrolli-HDF:itä täydennettiin 0,1 prosentilla DMSO:ta, josta puuttui bakuchioli tai retinoli. Lisäkontrollina soluja käsiteltiin 10-prosenttisella triton-X:llä (Merck). Tyhjät kontrollit suoritettiin inkuboimalla väliainetta ilman soluja. 72 tunnin kuluttua solut värjättiin käyttämällä kaupallisesti saatavaa soluproliferaatioreagenssia WST-1 valmistajan ohjeiden mukaisesti (Merck). Absorbanssi mitattiin aallonpituudella 450 ja 620 nm käyttäen Tecan Infinity M200 -mikrolevylukijaa (Tecan). Näiden mittausten eroa käytettiin analysoinnissa. Tyhjien kontrollien signaalit vähennettiin.

COL1A1- ja COL7A1-proteiinitasojen määrittäminen

HDF:t kylvettiin {{0}}kuoppalevyille, joissa oli 10  000 solua/kuoppa 100 µl:ssa elatusainetta, joka sisälsi 10 prosenttia vasikan seerumia, ja inkuboitiin 24 tuntia. Bakuchiolia tai retinolia laimennettiin 100 µl:aan väliaineeseen ilman vasikan seerumia, ja sitä täydennettiin esillä olevaan alustaan ​​vastaavasti 1 µM tai 10 µM lopullisessa pitoisuudessa. Kontrollia täydennettiin 100 µl:lla seerumivapaata alustaa, jolloin saatiin 0,1 prosentin DMSO-pitoisuus, joka vastasi retinoli- ja bakuchiolikäsittelyä. Korkeana standardina käytettiin 10 ng/ml transformoivaa kasvutekijää (TGF-) ja 11 ug/ml natriumaskorbaattia (molemmat Merck). Tyhjät kontrollit suoritettiin inkuboimalla väliainetta ilman soluja. 4 tunnin kuluttua käsitellyn alustan COL1A1- ja COL7A1-proteiinitasot analysoitiin käyttämällä kaupallisesti saatavia ELISA-pakkauksia noudattaen valmistajan ohjeita (Novus Biologicals, Littleton, Colorado, Yhdysvallat). Mittaukset suoritettiin käyttämällä Spark multimode -mikrolevylukijaa (Tecan). Tyhjien kontrollien signaalit vähennettiin. COL1A1- ja COL7A1-proteiinitasot normalisoitiin solulysaattiproteiinin kokonaismäärään, joka määritettiin käyttämällä kaupallisesti saatavilla olevaa bikinkoniinihappomäärityspakkausta (Thermo Fisher Scientific) valmistajan ohjeiden mukaisesti. Edellytyksenä tulosten käytölle oli solujen positiivinen reaktio korkeatasoiseen TGF- ja natriumaskorbaattiin.

COL7A1-proteiinitasojen analysointia varten pidennetyn inkubaatioajan jälkeen HDF:t kylvettiin 96-kuoppalevyille, joissa oli 3 000 solua/kuoppa 100 µl:ssa elatusaineessa, joka sisälsi 10 prosenttia vasikan seerumia. Kaikki käsittelyt, kontrollit ja analyysi suoritettiin edellä kuvatulla tavalla, paitsi että bakuchiolia ja retinolia käytettiin vain 10 μM:n lopullisessa pitoisuudessa. Solut kerättiin, kun subkonfluenssi saavutettiin, erityisesti 72 tai 96 tunnin kuluttua.

FN-proteiinitasojen määrittäminen

HDF:t kylvettiin {{0}}kuoppalevyille, joissa oli 10 000 solua/kuoppa 100 µl:ssa elatusainetta, joka sisälsi 10 prosenttia vasikan seerumia, ja inkuboitiin 24 tuntia. Vanha väliaine korvattiin alustalla, joka sisälsi 2 prosenttia vasikan seerumia ja bakuchiolia tai retinolia lopullisessa pitoisuudessa 10 µM. Kontrollia täydennettiin 0,1 prosentilla DMSO:ta, josta puuttui bakuchioli tai retinoli. Tyhjät kontrollit suoritettiin inkuboimalla väliainetta ilman soluja. 24 tunnin kuluttua käsitellyn alustan FN-proteiinitasot analysoitiin käyttämällä kaupallisesti saatavaa ELISA-pakkausta noudattaen valmistajan ohjeita (R&D Systems, Minneapolis, Minnesota, Yhdysvallat). Mittaukset suoritettiin käyttämällä Spark multimode -mikrolevylukijaa (Tecan). Tyhjien kontrollien signaalit vähennettiin. FN-proteiinitasot normalisoitiin solulysaattiproteiinin kokonaismäärään, joka määritettiin edellä mainitulla tavalla.

Epidermaalisen regeneraation määritys in vitro haavan paranemismallissa

Kokeet suoritettiin aiemmin kuvatulla tavalla [34]. Haavojen paranemismallien hoitoa varten bakuchiolia tai retinolia laimennettiin DPBS:ään ja lisättiin lopullisessa pitoisuudessa 100 µM haavan alueelle (5 µl haavaa kohti). Vertailuhaavoja täydennettiin samalla määrällä DPBS:ää, joka sisälsi 0,1 prosenttia DMSO:ta ilman bakuchiolia tai retinolia. Muut haavat jätettiin hoitamatta lisäkontrollina. Haavan paranemismalleja inkuboitiin 43 tuntia 95 prosentin kosteudessa, 5 prosentin CO2:ssa ja 37 asteessa. Myöhemmin näytteet pikapakastettiin isopentaanissa, joka oli esijäähdytetty nestemäisellä typellä, ja säilytettiin -80 asteessa. Uudelleen epitelisaatio arvioitiin hematoksyliini- ja eosiinivärjätyissä kryostaattileikkeissä mittaamalla regeneroidun epidermiksen pituus käyttämällä Leica DMLS -mikroskooppia (10×), Leica MC 170 HD CCD -kameraa ja Leica LAS V4.9 -ohjelmistoa (Leica Microsystems, Wetzlar, Saksa). Kvantitointi suoritettiin sokeasti.

In vivo -tutkimukset I ja II

Molemmissa in vivo -tutkimuksissa kosmeettiseen tutkimukseen sovellettiin Helsingin julistuksen nykyisen version ja Kansainvälisen hyvän kliinisen käytännön harmonisointikonferenssin ohjetta. Tutkimussuunnitelman I hyväksyi Freiburgin riippumaton eettinen toimikunta (feki koodi 08/2610). Molemmissa tutkimuksissa kaikki vapaaehtoiset antoivat kirjallisen, tietoon perustuvan suostumuksen. Koehenkilöillä oli terve iho, he kuuluivat Fitzpatrick-ihotyyppiin I-III ja hormonaalisen lääkityksen aloittaminen tai vaihto oli poissulkemiskriteeri.

10-päivän esikäsittelyjakson aikana ja koko tutkimusjakson ajan koehenkilöiden oli pidättäydyttävä altistumasta UV-säteilylle testialueilla. Hikoilua edistävä toiminta oli kielletty 24 tuntia ennen suunniteltuja arviointeja.

Tutkija osoitti formulaatioiden oikean käytön käyttämällä määrää, joka vastasi koehenkilöiden tavallista ihonhoito-ohjelmaa.

Tutkimus I: FN-proteiinitasojen ex vivo -määritys

Tähän vehikkeleillä kontrolloituun tutkimukseen osallistuneista 52 naishenkilöstä 33 koehenkilöä suoritti tutkimuksen, ja 31 henkilön tiedot (30–64 vuotta, keski-ikä: 50,9 vuotta) sisällytettiin data-analyysiin. Keskeyttämiset johtuivat SARS-CoV-2-pandemian ja henkilökohtaisista syistä (13 henkilöä) sekä yhteensopimattomuusreaktioista (viisi potilasta, retinolihoidon aiheuttamia). Retinolivälitteiset yhteensopimattomuusreaktiot sekä näytteenotto-ongelmat aiheuttivat eri määrän koehenkilöitä, jotka testattiin kussakin tilassa (katso tarkemmat tiedot tuloksista).

Seitsemän päivää ennen suunniteltuja arviointeja ihonhoitotuotteiden, puhdistusaineiden ja saippuoiden käyttö käsivarsissa kiellettiin. Ensimmäisenä tutkimuspäivänä sisäkyynärvarsiin muodostettiin neljä testialuetta. Kahdella testialueella käytettiin kahta verum-formulaatiota, jotka sisälsivät vastaavasti {{0}},5 prosenttia bakuchiolia tai 0,15 prosenttia retinolia. Kuluttajaturvallisuutta käsittelevän tiedekomitean vuonna 2016 julkaisemassa lausunnossa käytettyä retinolipitoisuutta pidettiin kosmeettisena hoitona [35]. Kahdella muulla testialueella käytettiin vastaavaa vehikkeliä tai alue jätettiin käsittelemättä. Hoitopaikkojen sijaintia muutettiin. Kun testiformulaatioita oli käytetty 4 viikkoa kahdesti päivässä, vapaaehtoiset palasivat testiinstituuttiin. Jokaiselle testialueelle muodostui kolme imurakkulaa (halkaisijaltaan 7 mm), kuten aiemmin on kuvattu [36, 37]. Lyhyesti sanottuna testialueille asetettiin mittatilaustyönä tehdyt imukupit ja 550–850 mbar:n tyhjiö. Noin 90–150 minuutin kuluttua, kun imurakkuloita oli muodostunut, tyhjiö vapautettiin ja neste imettiin läpipainopakkauksesta 24-mittarin neulalla. Nesteet jäädytettiin välittömästi -80 asteeseen kuivajäällä analyysiin asti. FN-proteiinitasot kvantifioitiin imukuplien nestenäytteissä käyttämällä kaupallisesti saatavaa ELISA-sarjaa (R&D Systems). Mittaukset suoritettiin käyttämällä Spark multimode -mikrolevylukijaa (Tecan). FN-tasot normalisoitiin imukuplien nestenäytteiden kokonaisproteiinitasoihin, jotka määritettiin edellä mainitulla tavalla.

Tutkimus II: Ihon kunnon paranemisen määrittäminen in vivo

Kaikkiaan 43 naispuolista vapaaehtoista otettiin mukaan tähän ajoneuvolla kontrolloituun kasvopuoliskon vertailututkimukseen. Lääketieteellisten arvioiden mukaan koehenkilöillä oli sekaihotyyppejä (kuiva, normaali, rasvainen ja sekaiho). 34 henkilöä (39–66 vuotta, keski-ikä: 56,2 vuotta) suoritti tutkimuksen ja otettiin mukaan analyysiin. Poistot johtuivat teknisistä ongelmista ja vaatimustenvastaisuudesta (kahdeksan koehenkilöä) sekä yhteensopimattomuusreaktioista (yksi koehenkilö, vehikkeli- ja bakuchiolikäsittelyn aiheuttama).

Kaksi viikkoa ennen tutkimuksen alkua ja koko tutkimusjakson ajan vapaaehtoisten oli pidättäydyttävä käyttämästä itseruskettavia tuotteita tai intensiivisiä kasvojen kosmeettisia hoitoja (esim. ihon pintakerrosten poisto). 10-päivän esihoitojakson aikana ja koko tutkimuksen ajan koehenkilöitä pyydettiin pidättymään kestomeikin, ripsien ja kulmakarvojen hoidoista, silmänaameista ja laastareista. Kolme päivää ennen ensimmäistä arviointia koehenkilöitä pyydettiin pidättäytymään kasvojenhoitotuotteiden käytöstä. Suunniteltua arviointia edeltävänä iltana koehenkilöitä vaadittiin lopettamaan koristekosmetiikan levitys.

Ensimmäisen 7 päivän aikana 10-päivän esikäsittelyvaiheessa koehenkilöt saivat voidepurkin, joka sisälsi tutkimusajoneuvovoidetta (jonka sisällöstä puuttui tietoa), ja levittivät sitä kahdesti päivässä koko kasvoilleen. Alkuvaiheessa vapaaehtoiset suorittivat itsearvioinnin. Erityisesti he arvioivat visuaalisesti kasvojen ihon ulkonäköä tarkkailemalla sen raikkautta ja hehkua sekä ihon ikääntymisen merkkejä. Siten käytettiin visuaalista analogista asteikkoa 1:stä (erittäin väsynyt, ikääntynyt) 1:ään 0 (erittäin raikas, ei ikääntyneen ihon merkkejä). Sitten koehenkilöt saivat kaksi sokkoutettua kermapurkkia, jotka sisälsivät verumia (vehikkeli, joka sisälsi 0,5 prosenttia bakuchiolia) tai vehikkeliä, vastaavasti, ilman minkäänlaista sisällön erittelyä. 12 viikon tutkimusjakson aikana toista kasvojen puolta käsiteltiin kahdesti päivässä verumilla, kun taas toista kasvojen puolta käsiteltiin kahdesti päivässä vehikkelillä. Hoitojen jako testipaikoille muutettiin. 12 viikon säännöllisen käytön jälkeen vapaaehtoiset suorittivat jälleen itseluokituksen edellä mainitulla tavalla.

Tilastollinen analyysi

Tilastolliset analyysit suoritettiin käyttämällä Microsoft Excel for Office 365 (Microsoft Corporation, Redmond, Washington, Yhdysvallat), SAS Software Package for Windows V9.4 (SAS Institute GmbH, Heidelberg, Saksa) ja GraphPad Prism V8 (GraphPad Software, San Diego) avulla. , Kalifornia, Yhdysvallat).

Aineiston normaalijakauma arvioitiin Shapiro–Wilkin testillä. Jos normaalijakauma varmistettiin, suoritettiin toistettu varianssianalyysi (RM-ANOVA) post hoc -parivertailulla. Jos normaaliushypoteesi hylättiin, alkuperäisten tietojen Blom-muunnetut arvot arvioitiin käyttämällä RM-ANOVAa post-hoc-parivertailulla, tai alkuperäiset tiedot arvioitiin käyttämällä Wilcoxonin merkkiarvotestiä. Kaikki tilastolliset testit olivat kaksipuolisia merkitsevyystasolla alfa=0.05.

TULOKSET

In vitro -tutkimukset

Antioksidatiivisten vaikutusten määrittäminen

Bakuchiolin ja retinolin (i) antioksidatiivisten vaikutusten analysoimiseksi suoritimme kaksi erilaista määritystä käyttämällä DPPH:ta ilmaisinmolekyylinä.

Antioksidanttikyky

Antioksidanttikapasiteetti määritettiin mittaamalla DPPH:n väheneminen sen absorption heikkenemisen kautta. Korkeatasoinen Trolox osoitti merkittävästi kohonnutta antioksidanttikapasiteettia verrattuna kontrolliin (p=0.0000 kaikilla ilmoitetuilla aikapisteillä) varmistaen oikean mittauksen (kuva 2a). Vertailusta voidaan todeta, että bakuchiolilla käsiteltyjen näytteiden absorbanssi väheni merkittävästi kaikkina tutkituina aikoina (10 min: p=0.0003, 30 ja 60 min: p=0.0000 ) osoittaen lisääntynyttä antioksidanttikapasiteettia. Sitä vastoin retinolilla ei ollut merkittävää antioksidanttikykyä verrattuna kontrolliin.

【Lisätietoja:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】