Jianpi Bushen Yiqi -keitteen vaikutukset immuunitoimintoihin ja hermo-lihasliitoksiin EAMG-hiirissä

2.3 Kateenkorvan ja imusolmukkeiden histomorfologinen vertailu kussakin hiiriryhmässä

Kuten näkyyKuva 1, kateenkorvakuori ja ydintyhjä kontrolliryhmähiiret olivat selvästi rajattuja, ja solut olivat järjestyksessä. Sitä vastoinmallin kontrolliryhmäosoitti epäselviä aivokuoren-ytimen rajat ja harvaa solujakaumaa. Verrattuna malliryhmään, hiiretprednisoniryhmäjamatalan, keskisuuren ja suuren annoksen Jianpi Bushen Yiqi -keittoryhmätosoitti suhteellisen selkeät kortikaali-ydinrajat ja tiheät, hyvin organisoidut solut.

Kuva 2osoittaa, että tyhjän kontrolliryhmän imusolmukesolut osoittivat täydellisen rakenteen ja järjestyksen. Primaariset lymfaattiset follikkelit olivat näkyvissä aivokuoressa, ilman sekundaarisia follikkeleja tai itukeskuksia. Malliryhmässä solurakenne oli epäorganisoitunut, ja siinä oli lisääntyneet primaariset follikkelit ja näkyvissä sekundaariset follikkelit ja itukeskukset. Prednisoni- ja Jianpi Bushen Yiqi -ryhmät osoittivat vähentynyttä lymfaattisten follikkelien liikakasvua.

Taulukko 3osoittaa, että verrattuna tyhjään kontrolliryhmään, malliryhmällä oli pienentynyt aivokuoren ja ydinosan välinen suhde kateenkorvassa ja lisääntyneet itukeskukset imusolmukkeissa (P < 0,05 tai P < 0,01). Malliryhmään verrattunaprednisonijasuuren annoksen Jianpi

 

 

 

Kuva 1 Katteenkorvakudoksen histopatologisen morfologian vertailu eri hiiriryhmissä (HE-värjäys)

 

Taulukko 3. Kateenkorvan aivokuoren ja ydinosan pinta-alan suhteen ja imusolmukkeiden itukeskusten lukumäärän vertailu kussakin hiiriryhmässä

Yksikkö: (x̄ ± s)

ryhmä	n	Kateenkorvan aivokuoren/ytimen pinta-alan suhde	Ikukeskuksen numero (per LN)
Tyhjä ohjausobjekti	3	3.62 ± 0.18	0.00 ± 0.00
Mallin ohjaus	3	1.74 ± 0.11 ᵃ	6.47 ± 1.51 ᵃ
Prednisoni	3	4.62 ± 1.41 ᵇ ᶜ	3.52 ± 0.35 ᵇ ᶜ
Keittäminen pieni annos	3	2.91 ± 0.42 ᶜ	5.77 ± 0.66 ᶜ
Keittäminen Keskimääräinen annos	3	3.41 ± 1.05 ᶜ	4.12 ± 0.25 ᶜ
Decoction suuri annos	3	4.60 ± 0.55 ᵇ ᶜ	3.00 ± 0.71 ᶜ

Huomautuksia:

ᵃ: P < 0,01 vs. Blank Control

ᵇ: P < 0,05 vs. Model Control

ᶜ: P < 0,01 vs. Model Control

Bushen Yiqiryhmät osoittivat korkeampaa aivokuoren ja ydinosan suhdetta. Kaikki interventioryhmät, mukaan lukien prednisoni ja kaikki kolme keiteannosta, vähensivät merkittävästi itukeskusten määrää (P < 0,01). Verrattuna prednisoniryhmään, keittämiseenpieni- ja keskiannoksiset ryhmätosoitti silti hieman enemmän itukeskuksia, kun taassuuren annoksen ryhmäei ollut merkittävää eroa.

Huomautus: Mustat nuolet osoittavat imusolmukkeisiin ja punaiset nuolet itukeskuksiin.

Kuva 2 Imusolmukekudosten histopatologisen morfologian vertailu eri hiiriryhmissä (HE-värjäys)

 

 

 

 

2.4 Th1-, Th2-, Th17-, Treg- ja Tfh-soluprosenttien vertailu pernasolususpensioissa

Kuten näkyyTaulukko 4, verrattuna tyhjään kontrolliryhmään,malliryhmäosoitti lisääntynyttä Th1-, Th2-, Th17- ja Tfh-solujen prosenttiosuutta ja vähentynyt Treg-prosentti (P < 0,05 tai P < 0,01). Verrattuna malliryhmään,keskisuurten ja suurten annosten keittoryhmätoli alentanut Th1-prosenttia ja lisännyt Treg-prosenttia; kaikki kolme keittoryhmää osoittivat alentuneita Th17- ja Tfh-prosenttiosuuksia. Erityisesti,prednisoniryhmävähensi Treg-prosentteja, mikä herättää huolta sen mahdollisuudesta häiritä immuunihomeostaasia.

Verrattuna prednisoniryhmään, kaikissa keittoryhmissä oli vähennyksiä Th2-, Th17- ja Tfh-soluissa. Thekeskisuurten ja suurten annosten ryhmätvähensi entisestään Th1- ja lisääntynyt Treg-soluja (P < 0,05 tai P < 0,01), mikä viittaa tasapainoisempaan immuunisäätelyyn.

 

 

 

Huomautus: NMJ, neuromuskulaarinen liitos; AChR, asetyylikoliinireseptori.

Kuva 3 AChR-morfologian vertailu lihasryhmien neuromuskulaarisissa liitoksissa eri hiiriryhmien välillä
(immunofluoresenssivärjäys, × 100)

 

Taulukko 4. Th1-, Th2-, Th17-, Treg- ja Tfh-solujen prosenttiosuuksien vertailu pernasolususpensioissa eri hiiriryhmissä

Yksikkö: (% , x̄ ± s)

ryhmä	n	Th1	Th2	Th17	Treg	Tfh
Tyhjä ohjausobjekti	6	0.05 ± 0.04	0.03 ± 0.02	0.11 ± 0.06	16.42 ± 2.59	9.45 ± 3.29
Mallin ohjaus	7	3.43 ± 1.11 ᵃ	0.82 ± 0.22 ᵃ	1.64 ± 0.65 ᵇ	7.99 ± 3.26 ᵃ	18.27 ± 4.21 ᵃ
Prednisoni	7	1.84 ± 0.26	0.84 ± 0.47	1.03 ± 0.71	5.02 ± 1.58 ᵃ	15.32 ± 3.84
Keittäminen pieni annos	7	1.42 ± 0.59 ᶜ ᵉ	0.60 ± 0.16 ᶜ ᶠ	0.73 ± 0.24 ᶜ ᶠ	14.97 ± 2.11 ᶠ	10.35 ± 3.72 ᶜ ᶠ
Keittäminen Keskimääräinen annos	7	1.08 ± 0.59 ᶜ ᵉ	0.47 ± 0.14 ᶜ ᶠ	0.45 ± 0.20 ᶜ ᶠ	13.82 ± 2.21 ᶠ	9.87 ± 3.65 ᶜ ᶠ
Decoction suuri annos	7	1.23 ± 0.62 ᶜ ᵉ	0.32 ± 0.14 ᶠ	0.34 ± 0.22 ᶜ ᶠ	13.50 ± 2.47 ᶠ	7.97 ± 3.60 ᶜ ᶠ

Huomautuksia:

ᵃ: P < 0,01 vs. Blank Control

ᵇ: P < 0,05 vs. tyhjä ohjaus

ᶜ: P < 0,01 vs. Model Control

ᵈ: P < 0,05 vs. Model Control

ᵉ: P < 0,05 vs. prednisoni

ᶠ: P < 0,01 vs. prednisoni

 

 

2.5 AChR-morfologian vertailu NMJ:ssä kussakin lihasryhmässä

Kuva 3osoittaa, että NMJ AChR:t nollakontrolliryhmässä olivat rakenteellisesti ehjiä ja näyttivät tiiviiltä, ​​pretzelin kaltaisilta muodostelmilta. Malliryhmässä silmä-, sternocleidomastoid-, deltoid- ja säärilihasten NMJ:t näyttivät pirstoutuneilta ja epämuodostuneilta, kun taas purenta-, kylkiluidenväli- ja pallealihaksissa oli vakavasti häiriintyneitä rakenteita. Kaikissa interventioryhmissä AChR-morfologia parani vaihtelevasti.

Kuten näkyyTaulukko 5, verrattuna tyhjään kontrolliryhmään, malliryhmällä oli merkittävästi pienentynyt AChR-aluesuhteet useissa lihaksissa (P < 0,05 tai P < 0,01). Malliryhmään verrattunaprednisonijakeskiannoksen keiteryhmät osoittivat lisääntynyttä AChR-aluetta silmälihaksissa. Thepieniannoksinen keittoryhmäparantuneet AChR-alueet hartialihaksen ja sääriluun anteriorissa. Thesuuren annoksen ryhmäparantuneet AChR-alueet silmän, sternocleidomastoid, hartialihaksen ja sääriluun etulihaksissa.

Verrattuna prednisoniin,pieniannoksinen ryhmäparantuneet AChR-alueet silmä- ja puremislihaksissa; thekeskiannoksen ryhmäpuremislihaksessa; jasuuren annoksen ryhmästernocleidomastoidissa ja tibialis anteriorissa (P < 0,05 tai P < 0,01).

Taulukko 5. AChR-alueen vertailu hermo-lihasliitoksessa kussakin hiiren lihasryhmässä

Yksikkö: (% , x̄ ± s)

ryhmä	n	Silmän lihas	Pureskelulihas	Sternocleidomastoid	Hartialihas	kylkiluiden välinen lihas	Kalvo	Tibialis Anterior
Tyhjä ohjausobjekti	3	3.83 ± 0.28	4.28 ± 0.29	4.48 ± 0.77	3.79 ± 0.12	3.78 ± 0.22	4.80 ± 0.26	3.60 ± 0.32
Mallin ohjaus	3	2.58 ± 0.34 ᵃ	2.55 ± 0.45 ᵃ	2.15 ± 0.31 ᵇ	2.33 ± 0.15	2.55 ± 0.33	2.98 ± 0.34ᵇ	2.95 ± 0.49
Prednisoni	3	3.33 ± 0.49ᶜ	2.67 ± 0.55	3.83 ± 0.54	3.49 ± 0.38	3.60 ± 0.16	3.45 ± 0.67	3.02 ± 0.40
Keittäminen pieni annos	3	2.76 ± 0.49ᵉ	3.05 ± 0.37ᵉ	3.77 ± 0.64	2.77 ± 0.44ᶜ	3.03 ± 0.25	3.33 ± 0.33	3.44 ± 0.71ᶜ
Keittäminen Keskimääräinen annos	3	3.32 ± 0.40ᶜ	3.27 ± 0.75ᵉ	3.98 ± 0.43	3.27 ± 0.65	3.50 ± 0.28	3.85 ± 0.42	3.56 ± 0.52
Decoction suuri annos	3	3.46 ± 0.37ᶜ	3.34 ± 0.23ᵉ	4.54 ± 0.67ᶜ	3.69 ± 0.39	3.75 ± 0.36	3.75 ± 0.35	3.84 ± 0.52ᶜ

Huomautuksia:

ᵃ: P < 0,05 vs. tyhjä kontrolli

ᵇ: P < 0,01 vs. tyhjä ohjaus

ᶜ: P < 0,05 vs. Model Control

ᵈ: P < 0,01 vs. Model Control

ᵉ: P < 0,05 vs. prednisoni

 

Taulukko 6. AChR-Ab:n, IL-6:n ja TNF- seerumin tasojen vertailu eri hiiriryhmissä

Yksikkö: (x̄ ± s)

ryhmä	n	AChR-Ab (P⁻¹)	IL-6 (pg·ml⁻¹)	TNF- (pg·ml⁻¹)
Tyhjä ohjausobjekti	12	1.00 ± 0.13	110.66 ± 30.75	25.84 ± 9.71
Mallin ohjaus	12	3.13 ± 0.97 ᵃ	327.91 ± 38.71 ᵃ	124.15 ± 37.61 ᵃ
Prednisoni	11	2.05 ± 0.29 ᵇ ᶜ	487.21 ± 124.09 ᵇ	78.76 ± 22.35 ᵇ ᶜ
Keittäminen pieni annos	13	2.50 ± 0.49ᵉ	306.42 ± 93.91ᶜ	89.14 ± 25.90 ᶜ
Keittäminen Keskimääräinen annos	13	1.98 ± 0.34 ᶜ	278.60 ± 63.97ᶜ	80.36 ± 21.95ᶜ
Decoction suuri annos	13	1.42 ± 0.33 ᶜ	224.43 ± 49.03ᶜ	84.26 ± 36.60ᶜ

Huomautuksia:

ᵃ: P < 0,01 vs. Blank Control

ᵇ: P < 0,01 vs. Model Control

ᶜ: P < 0,01 vs. Model Control

ᵈ: P < 0,05 vs. prednisoni

ᵉ: P < 0,01 vs. prednisoni

2.6 Seerumin AChR-Ab-, IL-6- ja TNF-tasojen vertailu

Taulukko 6osoittaa, että tyhjään kontrolliryhmään verrattunamalliryhmähänellä oli merkittävästi kohonneet AChR-Ab-, IL-6- ja TNF-tasot (P < 0,01). Malliryhmään verrattunaprednisonijakeskisuurten ja suurten annosten keittoryhmätvähensi merkittävästi AChR-Ab:tä. Kuitenkin,prednisoni lisääntynyt IL-6, kun taassuuren annoksen keittoryhmä väheni IL-6. Sekä prednisoni ettäkeskisuurten ja suurten annosten ryhmätvähentynyt TNF- (P < 0,05 tai P < 0,01).

Verrattuna prednisoniin,pieniannoksinen keittoryhmäoli korkeampi AChR-Ab-taso, muttakaikki keittoryhmätalentunut IL-6 välttäen prednisonin tulehdusta edistävät vaikutukset.

3. Keskustelu

Kliinisesti MG luokitellaan silmän myasthenia gravikseksi (oMG) ja yleistyneeksi MG:ksi (gMG). oMG ilmenee ensisijaisesti ptoosina ja diplopiana, ja se voi edetä gMG:ksi, jolle on ominaista systeeminen luustolihasten heikkous [1]. Perinteisen kiinalaisen lääketieteen (TCM) teorian mukaan MG:n patogeneesi johtuu kudosten toimintahäiriöistä.perna ja munuaiset. Perna hallitsee lihaksia ja raajoja, koska se on synnytyksen jälkeinen juuri ja Qi:n ja veren lähde. Munuaiset varastoivat esanssia ja hallitsevat luita ja ydintä. Molempien puute johtaa lihasheikkouteen, kuten MG:ssä [15–16].

Perustuu TCM-periaatteeseen "juuren hoitaminen"tonisoi pernaa ja munuaisiatulee keskeiseksi. TheJianpi Bushen Yiqi -keittoilmentää tätä lähestymistapaa. Sen pääainesosa,Astragalus membranaceus, lisää pernan Qi:tä ja nostaa Yangia.Kilpikonnankuoren liimajahirvensarvi liimaarikastuttaa munuaisesanssia ja yangia, vahvistaa lihaksia ja luustoa.Codonopsis, Angelica sinensis, Bupleurum, Cimicifuga, jahunajapaistettua lakritsiatoimivat synergistisesti veren ravitsemiseksi, Yangin kohottamiseksi ja kaavan harmonisoimiseksi.

Keskeinen lisäys tähän formulaatioon onCistanche deserticola, tunnettu yrttivirkistävä munuaisyang ja täydentää elintärkeää olemusta. Cistanchen on osoitettu tehostavan immuunimodulaatiota ja parantavan väsymyksen vastustuskykyä, mikä tekee siitä ihanteellisen MG:n kaltaisiin olosuhteisiin. XJCistanchen mukaan Cistanche-uute tukeehermojen ja lihasten elinvoimaa, edistäävälittäjäaineiden tasapaino, ja parantaaimmuuni homeostaasi-Mekanismeja, jotka liittyvät suoraan MG-patofysiologiaan.

Tässä tutkimuksessa käytettiin EAMG-hiirimallia keitoksen vaikutusten arvioimiseen käyttäytymis-, immuuni- ja NMJ-rakennemitoissa. Tulokset osoittivat senprednisoniparansi pitovoimaa ja Lennon-pisteitä, mutta aiheutti merkittäviälaihtuminen, mikä vastaa tunnettuja glukokortikoidien sivuvaikutuksia [19]. Sitä vastoin kaikki keiteannoksetlisääntynyt ruumiinpaino, mikä tarkoittaa parempaa turvallisuutta.

Terapeuttinen teho oliannoksesta riippuvainen, kanssasuuren annoksen ryhmäsaavuttaa vertailukelpoinen parannus pitovoimassa ja Lennon-pisteissä prednisonitarjoamiseen molempiatehoa ja turvallisuutta.

Immuunielinten indeksit paljastivat, että prednisoni alensi kateenkorvaindeksiä ja aiheutti aivokuoren atrofiaa, mikä heikensi keskushermostoa [20]. Keite kuitenkin säilytti tai paransi kateenkorvan rakennetta varsinkin suurilla annoksilla. Pernaindeksit seurasivat akaksivaiheinen säätökuvio, jossa pienet ja keskisuuret annokset estävät epänormaalia immuuniproliferaatiota, kun taas suuri annos säilytti tasapainon.

Kaikki keittoryhmät vähensivät imusolmukkeiden follikkelien liikakasvua, vaikka vain suuri annos vastasi prednisonia itukeskuksen suppressiossa, mikä viittaa suuren annoksen erinomaiseen sekä keskus- että perifeerisen immuniteetin säätelyyn.

Koska EAMG:n taustalla on CD4⁺ T-solujen epätasapaino [4], keitteen kykytasapainottaa uudelleen Th1/Th2/Th17/Tfh ja Tregsolut ovat avainasemassa. Toisin kuin prednisoni, joka alensi Tregia, keittäminen (erityisesti keskisuuret ja suuret annokset)tehostettu Tregja suppressoivat tulehdusta edistäviä alaryhmiä. Tämäimmuunimodulaatio, instead of immune suppression, aligns better with the needs of autoimmune diseases like MG.

NMJ:n eheyden osalta keittäminen osoittimonilihasten AChR-korjaus, joka on parempi kuin prednisoni useissa lihasryhmissä. Lisäksi se vähensi tehokkaastiAChR-Ab, IL-6 ja TNF-, suurella annoksella on kattavin tulehdusta estävä vaikutus ilman prednisonin IL-6 nousua.

 

Johtopäätös

TheJianpi Bushen Yiqi -keitto, rikastettuCistanche deserticola, saa aikaan usean kohteen terapeuttisia vaikutuksia EAMG-hiirissä. Se:

Tasapainottaa Th/Treg-akselin ja estää Tfh-välitteisen B-soluaktivaation

Vähentää patogeenisten vasta-aineiden ja tulehduksellisten sytokiinien määrää

Korjaa NMJ-rakenteita ja palauttaa lihasten toiminnan

Verrattuna prednisoniin, se tarjoaa erinomaisenturvallisuutta, immuunijärjestelmän palauttaminen, jamonilihaskohdistus, korostaa sen potentiaalia akliininen vaihtoehtotailisähoitoaMG:lle.

Tulevien tutkimusten pitäisi selvittää sitäbioaktiiviset yhdisteet, aineenvaihduntareittejä, jamolekyylikohteet, mahdollisesti läpiverkostofarmakologiajaproteomiikkaanopeuttaakseen sen kehitystä uudeksi TCM-pohjaiseksi lääkkeeksi.