Cistanche Tubulosasta peräisin olevat iridoidi- ja asykliset monoterpeeniglykosidit, kankanosidit L, M, N, O ja P

Cistanche tubulosa(SCHRENK) R. WOIKEA(Orobanchaceae) on monivuotinen loistavi, joka kasvaa juurissaSalvadorataiCalotropislajeja, joita esiintyy Pohjois-Afrikassa, Arabiassa ja Aasian maissa.1) Tämän kasvin varsia (japaniksi Kanka-nikujuyou) on perinteisesti käytettyimpotenssin, hedelmättömyyden, lumbagon ja kehon heikkouden hoitoonsekä verenkiertoa edistävä aine.1,2) Tutkimuksissamme varresta peräisin olevia bioaktiivisia aineosiaC. tubulosa, 3-6) raportoimme aiemmin 24 fenyylietanoidiaminoglykosidista, mukaan lukien kankanosidit H1, H2, I, J1, J2, K1, ja K2ja kaksi asyloitua oligosokeria tuoreista varrestaC. tubulosa. 5,6) Lisäksi rehtorifenyylietanoidiglykosidit, ekinakosidi, akteosidi ja isoakteosiditodettiin estävän seerumin aspartaattiaminotransferaasin (AST) ja alaniiniaminotransferaasin (suola) tasojen nousua hiirten vaurioituneessa maksassa, jonka aiheuttivatD-galaktosamiini (D-GalN)/ lipopolysakkaridi annoksina 25-100 mg/kgper os(p.o.). Myös fenyylietanoidiglykosidien rakenteelliset vaatimukset hepatoprotektiiviselle aktiivisuudelle selvitettiin.5) Tässä jatkuvassa tutkimuksessa ainesosista tuoreissa varsissaC. tubulosa, eristimme edelleen yksitoista iridoidiglykosidia, mukaan lukien kankanosidit L (1), M (2), ja N (3), seitsemän asyklistä monoterpeeniglykosidia, mukaan lukien kankanosidit O (4) ja P (5), kolme fenyylipropanoidia ja neljä lignaania. Tämä artikkeli käsittelee viiden uuden yhdisteen eristämistä ja rakenteen selvittämistä (1-5).

LUONNOLLINEN CISTANCHE TUBULOSA SEKSUAALISTEN HÄIRIÖIDEN LIITTYMISEEN PHGS75% ECH 30% ACT 12%

C. tubulosan tuoreet varret (viljelty Urumqissa, Xinjiangin maakunnassa, Kiinassa) uutettiin metanolilla palautusjäähdyttäen, jolloin saatiin metanoliuute (8,36 % tuoreista varreista). Metanoliuutteesta saatiin H2O:lla ja MeOH:lla eluoidut fraktiot (5,63 % ja 2,73 %) Diaion HP-20 -pylväskromatografialla (H2O→MeOH) aiemmin kuvatulla tavalla.5) MeOH:lla eluoitu fraktio altistettiin SiO2- ja ODS-pylväskromatografialle ja lopuksi HPLC:lle, jolloin saatiin kankanosidit L (1, 0.0026 %), M (2, 0).{27 }}001 %), N (3, 0.00{{60}}7 %), O (4, 0.0{{90}}2{{105}}%) ja P (5, 0 .0002 %), 6-deoksikatalpol3,7) (6, 0.197 %), bartsiosidi3,7) (7, { {147}}.0583 %), glurosidi3,7) (8, 0,0443 %), kankanoisidi A3) (9, 22,3 mg, 0,0010 %), mussaenosidiinihappo3,7) ( 10, 0,0056 %), 8- epilogaanihappo3,8) (11, 0,0023 %), 8-epideoksilogaanihappo3,7) (12, 0,0004 %), geniposidiinihappo3,7) (13, 0,0040 % ), kankanosidi E3) (14, 0,0026 %), (2E,6Z)-8-bD-glukopyranosyylioksi-2, 6-dimetyyli-2, 6-oktadieenihappo3 ,9) (15, 31,0 mg, 0,0014 %), (2E,6E)-3,7-dimetyyli-8-hydroksioktadien-1-yyli-ObD-glukopyranosidi10) (16, 0,0082 %), 8-hydroksigeranioli 8-O-bD-glukopyranosidi11) (17, 0,0044 %), betulalbusidi A12) (18, 0,0004 %), havuferiini13) (19, 0,0002 %)), (ruisku 20, 0,0015 %), sinapic aldehydi 4-ObD-glukopyranosidi14) (21, 0,0001 %), ()-pinoresinoli ObD-glukopyranosidi4,8,15) (22, 0,0010 %), eucommin A3, 16 %), isoeukomiini A17) (24, 0,0010 %) ja ()-syringaresinoli ObD-glukopyranosidi4,8,18) (25, 0,0044 %).

Kankanosidien L (1), M (2) ja N (3) rakenteet

Kankanosidi L (1) saatiin valkoisena jauheena, jolla oli negatiivinen optinen rotaatio ([a]D 26 - 45,7 MeOH:ssa). Sen IR-spektri osoitti voimakkaan absorptiokaistan kohdissa 3433 ja 1{{20}}80 cm- 1, mikä viittaa glykosidiosaan. Fast atom bombardment (FAB)-MS 1 ajon positiivisten ja negatiivisten ionien moodissa osoitti kvasimolekylaariset ionihuiput arvoilla m/z 371 [M Na] ja 347 [M-H]-, vastaavasti, ja molekyylikaava oli määritetty C15H24O9:ksi korkearesoluutioisella FABMS-mittauksella. Yhdisteen 1 happohydrolyysi 1,0 M suolahapolla (HCl) vapautti D-glukoosia, joka tunnistettiin HPLC-analyysillä käyttämällä optista rotaatiodetektoria.3-6) 1:n 1 H- ja 13C-NMR-spektrit (CD3OD, taulukot) 1, 2), jotka määritettiin useilla NMR-kokeilla,19) osoittivat neljälle metyleenille osoitettavia signaaleja [d 1,43 (1H, br dd, J= noin 5, 13 Hz, 4a-H), 1,73 ( 1H, br dd, J= noin 12, 14 Hz, 6a-H), 1,85 (1 H, m, 4b-H), 1,93 (1 H, br dd, J= noin 8). , 14 Hz, 6b-H), 3,50 (1H, ddd, J= 2,4, 12,5, 13,0 Hz, 3a-H), 3,83 (1H, br dd, J=

noin 5, 13 Hz, 3b-H), 3,78, 4,12 (1H kumpikin, molemmat d, J= 13,1 Hz, 10-H2)], kaksi metiiniä [d 2,15 (1H, dd, J)=7,2, 8,9 Hz, 9-H) ja 2,23 (1H, m, 5-H)] ja asetaaliryhmä [d 4,81 (1H, d, J{{28) }},9 Hz, 1-H)] yhdessä b-glukopyranosyyliosan kanssa [d 4,70 (d, J= 7,9 Hz, 1 -H)]. Kuten kuvasta 1 näkyy, 1 H-1 H -korrelaatiospektroskopia (1 H-1 H COSY) -koe 1:llä osoitti lihavoituilla viivoilla kirjoitettujen osittaisten rakenteiden läsnäolon. Heteronukleaarisessa monisidoskorrelaatiokokeessa (HMBC) 1:llä havaittiin pitkän kantaman korrelaatioita seuraavien protonien ja hiilen välillä (1-H ja 3-C, 8-C; {{ 49}}H ja 7-H ja 8-C, 10-H ja 8-C; }}H2 ja 7-C, 8-C; 1 -H ja 1-C), kuten kuvassa 1. Seuraavaksi 1:n suhteellinen stereorakenne karakterisoitiin vaiheherkkyydellä. ydin Overhauser-parannusspektroskopia (vaiheherkkä NOESY) -koe, joka osoitti NOE-korrelaatioita seuraavien protoniparien välillä (1-H ja 3aH; 3a-H ja 4a-H; 3b-H ja 4b-H; 4b-H). ja 9-H, 5- H ja 9- 6a-H ja 7-H; ja 10-H2), kuten kuvassa 1 on esitetty. 1 H- ja 13C-NMR-spektrit olivat päällekkäisiä iridoidin pääainesosan 6-deoksikatalpolin (6) spektrien kanssa, lukuun ottamatta aiheellisia signaaleja tyydyttyneeseen d-laktoliosaan. Lopuksi yhdisteen 6 hydraus antoi arvon 1, joten kankanosidi L:n stereorakenteen selvitettiin olevan 3,4- dihydro-6-deoksikatalpoli (1).

LUONNOLLINEN CISTANCHE TUBULOSA POSTIKIRITTYSHÄIRIÖN LIITTYMISEEN PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Kankanosidi M (2) saatiin valkoisena jauheena, jolla oli negatiivinen optinen rotaatio ([a]D 26 - 18,7 MeOH:ssa). IR-spektri 2 osoitti absorptiovyöhykkeitä kohdissa 3433, 1736, 1655 ja 1076 cm- 1, jotka voidaan katsoa johtuvan hydroksyyli-, d-laktoni-, olefiini- ja eetteriosista. Positiivisen ionin FAB-MS-spektri 2 osoitti kvasimolekylaarisen ionihuipun m/z:ssä 353 [M Na], ja molekyylikaavaksi määritettiin C15H22O8 korkean erotuskyvyn positiivisen ionin FAB-MS-mittauksella. Yhdisteen 2 happohydrolyysi 1,0 M HCl:lla vapauttamalla D-glukoosilla. 2:n1H- ja 13CNMR-spektrit (CD3OD, taulukot 1, 2) osoittivat neljälle metyleenille osoitettavia signaaleja [d 1,66, 2,11 (1H kumpikin, molemmat m, 4-H2), 2,15, 2,75 (kukin 1H, molemmat m, 6-H2), 4,29 (1H, ddd, J= 2,8, 8,4, 14,3 Hz, 3b-H), 4,32, 4,51 (1H kumpikin, molemmat d, J{{61 }},1 Hz, 10-H2), 4,35 (1H, ddd, J= 3.1, 6,7, 14,3 Hz, 3a-H)], kaksi metiiniä [d 2,97 (1H, m, 5-H), 3,82 (1H, br s, 9-H)], olefiini [d 5,94 (1H, m, 7-H)] ja tyydyttynyt laktoniryhmä (d C 174,9) yhdessä bD-glukopyranosyyliosan kanssa [d 4,32 (1H, d, J= 7,9 Hz, 1 -H)]. Kuten kuvasta 1 näkyy, 1 H–1 H COZY -koe 2:lla osoitti lihavoituilla viivoilla kirjoitettuja osittaisia ​​rakenteita ja HMBC-kokeessa havaittiin pitkän kantaman korrelaatioita seuraavien protoni- ja hiiliparien välillä ({{ 103}}H ja 1-C 9-H ja 1-C, {{110 }}H2 ja 7-C, 8-C, 9-1 -H ja 10-C). 2:n suhteellinen stereorakenne karakterisoitiin vaiheherkällä NOESY-kokeella, joka osoitti NOE-korrelaatioita seuraavien protoniparien välillä (3a-H ja 4a-H; 3b-H ja 4b-H; 4b-H ja 5- H; 5-H ja 6b-H, 9-H), kuten kuvassa 1. Siten 2:n stereorakenne selvitettiin kuvan mukaisesti.

Kankanosidi N (3) eristettiin valkoisena jauheena negatiivisella optisella rotaatiolla ([a]D 25 - 24,6 MeOH:ssa). Positiivisen ionin FAB-MS:ssä 3, kvasimolekylaarinen ionihuippu havaittiin m/z:ssä 371 [M Na]. Molekyylikaava C16H28O8 määritettiin korkearesoluutioisella FAB-MS-mittauksella. Yhdisteen 3 happohydrolyysi 10 M HCl:n vapauttamalla D-glukoosilla. 1H- ja 13C-NMR-tiedot (CD3OD, taulukot 1, 2) osoittivat signaalit, jotka voidaan osoittaa metyylille [d 1.07 (3H, d, J= 7.2 Hz, {{ 28}}H3)], neljä metyleeniä {d 1,37, 1,87 (1H kumpikin, molemmat m, 7-H2), 1,65, 1,81 (1H kumpikin, molemmat m, 6-H2), [3,65 ( 1H, dd, J= 9,1, 9,8 Hz), 3,90 (1H, dd, J= 5,9, 9,8 Hz), 11-H2] ja [3,70 (1H, dd, J= 3,3, 12,0 Hz), 3,88 (1H, m), 3-H2]}, neljä metiiniä [d 1,69 (1H, m, 4-H), 1,75 (1H, m, 9-H), 2,06 (1H, m, 8-H), 2,16 (1H, m, 5-H)] ja puoliasetaaliryhmä [d 4,67 ( 1H, d, J= 7,4 Hz, 1-H)] yhdessä bD-glukopyranosyyliosan kanssa [d 4,26 (1H, d, J= 7,9 Hz, {{101) }}H)]. Yhdisteen 3 iridoidirakenne selvitettiin 1 H-1 H COZY- ja HMBC-kokeilla ja suhteellinen stereorakenne karakterisoitiin faasiherkällä NOESY-kokeella, kuten kuvassa 1 on esitetty. Näin ollen yhdisteen 3 stereorakenne selvitettiin kuvan mukaisesti.

LUONNOLLINEN CISTANCHE TUBULOSA SEKSUAALISEN ONGELMAN RATKAISEMINEN PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Kankanosidien O (4) ja P (5) rakenteet

Kankanosidit O (4) ja P (5), C16H26O8, saatiin myös valkoisina jauheina negatiivisilla optisilla rotaatioilla (4: [a]D 23 - 26.1; 5: [a]D 21 - 32). 7 molemmat MeOH:ssa). IR-spektrit 4 ja 5 osoittivat absorptiokaistat kohdissa 3433, 1696, 1647 ja 1076 cm- 1 4:lle ja 3434, 1701, 1647 ja 1{ {95}}76 cm- 1 5:lle, mikä johtuu glykosidi-, karboksyyli- ja olefiinifunktioista. Niiden UV-spektrit osoittivat yhteisen absorptiomaksimin 217 nm:ssä, mikä osoitti a,b-tyydyttymättömän karboksyylihappoosan läsnäolon molemmissa. 4:n ja 5:n happohydrolyysi vapautti D-glukoosia, kun taas entsymaattisella hydrolyysillä glukosidaasilla 4 ja 5 tuottivat (2E,6E)-8-hydroksi-2,6-dimetyyli{{37} },6-oktadieenihappo20) (4a) ja (2E,6E)-8-hydroksi-3,7- dimetyyli-2,{{ 47}}oktadieenihappo21) (5a). Yhdisteen 41H- ja 13C-NMR-tiedot (CD3OD, taulukot 2, 3) osoittivat kahdelle metyylille osoitettavia signaaleja [d 1,71 (3H, br s, 10-H3), 1,81 (3H, d, J{{ 66}},0 Hz, 9-H3)], kolme metyleeniä {d 2,19 (2H, br t, J= noin 7 Hz, 5-H2), 2,36 (2H, m, 4-H2), [4,24 (1H, dd, J= 7,6, 12,0 Hz), 4,33 (1H, dd, J= 6,2, 12,0 Hz), { {96}}H2]} ja kaksi trisubstituoitua olefiinia [d 5,41 (1H, ddd, J= 1.2, 6,2, 7,6 Hz, 7- H), 6,75 (1H, tq, J{ {111}},2, 1,0 Hz, 3-H)] yhdessä b-Dglukopyranosyyliosan kanssa [d 4,34 (d, J= 7,8 Hz, 1 -H)]. Vertailemalla hiilisignaaleja 13C-NMR-spektrissä 4

kohdan 4a vastaavien kanssa havaittiin glykosylaatiosiirtymä 8--asemassa (d C 4: 65,5; 4a: 59,4). Glukosidisidoksen sijainti varmistettiin myös HMBC-kokeilla, kuten kuvassa 2 on esitetty. Tämän seurauksena yhdisteen 4 stereorakenne selvitettiin olevan (2E,6E)-8-bD-glukopyranosyylioksi-2,{{ 16}}dimetyyli-2, 6-oktadieenihappo. Toisaalta yhdisteen 51H- ja 13C-NMR-tiedot (CD3OD, taulukot 2, 3) osoittivat (2E,6E)-8-hydroksi{{30}} läsnäolon. ,7-dimetyyli-2,6-oktadieenihappoosa [d 1,70 (3H, br s, 10-H3), 2,14 (3H, br s, 9- H3), 2,24 (2H, m, 4-H2), 2,27 (2H, m, 5-H2), 4,05, 4,20 (1 H kumpikin, molemmat br d, J= ca. 12 Hz, 8-H2), 5,47 (1H, tq, J= 7.1, 0,9 Hz, 6-H), 5,67 (1H, br s, 1-H )] yhdessä bD-glukopyranosyyliosan kanssa [d 4,23 (d, J= 7.7 Hz, 1 -H)]. BD-glukopyranosyyliosan liitettävyys kohdassa 5 selvitettiin HMBC-kokeiden perusteella, kuten kuvassa 2 on esitetty. Lisäksi havaittiin tyypillinen glykosylaatiosiirtymä signaaleille asemassa 8- (d C 5: 75,6; 5a: 68,8). edellä mainittujen todisteiden perusteella 5:n stereorakenteen määritettiin olevan (2E,6E)-8-bD-glukopyranosyylioksi-3,7-dimetyyli-2,{103 }}oktadieenihappo.

Ainesosien vaikutukset tuumorinekroositekijä-a:n (TNF-a) aiheuttamaan sytotoksisuuteen L929-soluissa

TNF-a:n tiedetään välittävän erilaisia ​​elinvaurioita indusoimalla solujen apoptoosia. Maksan tapauksessa TNF-a:n biologiset vaikutukset on yhdistetty maksatoksiinien, iskemian/reperfuusion, virushepatiitin ja alkoholin aiheuttamiin maksavaurioihin.22-24) Siksi TNF-a:n katsotaan olevan tärkeä kohde tulehdusta ehkäisevien ja hepatoprotektiivisten aineiden löytämisessä. Yllämainitun konseptin perusteella tutkimme luonnossa esiintyvien tuotteiden suojaavia ainesosia TNF-a:n aiheuttamassa solukuolemassa L929-soluissa, TNF-a-herkässä solulinjassa.25) Olemme aiemmin raportoineet

että useiden Piper chaba, 26-29) Boesenbergia rotunda, 30, 31) Punica granatum, 32) Helichrysum arenarium, 33-35) ja Sapindus rarak, 36-38) aineosien havaittiin osoittavan estäviä vaikutuksia TNF-a:n aiheuttamasta sytotoksisuudesta L929-soluissa. Koska C. tubulosan fenyylietanoliaineosat (esimekinakosidi, akteosidi ja isoakteosidi, jne.) 5) esti myös tätä sytotoksisuutta, tutkimme edelleen iridoidi-, fenyylipropanoidi- ja lignaaniaineosia taulukon 4 mukaisesti. Tuloksena kankanosidi A (9, esto: 16,3± 2.0% 1:ssä 00 mM), mussaenosidiinihappo (10, 44,7± 8,7 %), 8-epigaamihappo (11, 10,7± 0,4 %), 8-hydroksigeranioli 8-ObD- glukopyranosidin (17, 21,3 ± 2,4 %) ja ()-pinoresinoli ObD-glukopyranosidin (22, 22,3 ± 1,6 %) havaittiin osoittavan merkittävää aktiivisuutta. Vaikka niiden aktiivisuus oli heikompaa kuin ekinakosidin (IC50= 31,1 mM), akteosidin (17,8 mM) ja isoaseteosidin (22,7 mM), tärkeimmät fenyylietanoidiaineosat.5)

LUONNOLLINEN CISTANCHE TUBULOSA SEKSUAALITOIMINNON PARANTAMISEEN PHGS75% ECH 30% ACT 12%