Kasvaimensisäinen lapsuuden rokotespesifinen CD4+ T-solujen palautuskoordinaatit Antitumor CD8+ T-solut ja eosinofiilit
Oct 17, 2023
ABSTRAKTI
Tausta
CD{0}} T-solujen kasvainten vastaiset mekanismit ovat edelleen karkeasti määriteltyjä, eikä CD4+ T-solujen avun tehokkaaksi hyödyntämiseksi syövän immunoterapiassa ole. Aiemmin olemassa olevat muisti-CD4+ T-solut tarjoavat mahdollisuuden hyödyntää tätä tarkoitusta varten. Lisäksi olemassa olevan immuniteetin rooli viroterapiassa, erityisesti yhdistelmä-DNA-poliovirusimmunoterapiassa, jossa lapsuuden poliorokotespesifinen immuniteetti on kaikkialla, on edelleen epäselvä. Täällä testasimme hypoteesia, että lapsuuden rokotespesifiset muisti-T-solut välittävät kasvaimia estävää immunoterapiaa ja edistävät polioviroterapian kasvainten vastaista tehoa.
Cistanche tubulosa-Antitumorin edut
menetelmät
Polio-immunisaation vaikutusta polion viroterapiaan sekä polion ja tetanuksen takaisinkuoleman kasvaimia estäviä vaikutuksia testattiin syngeenisissä hiiren melanooma- ja rintasyöpämalleissa. CD8+ T-solujen ja B-solujen poisto, CD4+ T-solujen väheneminen, CD4+ T-solujen adoptiosiirto, CD40L-salpaus, kasvainten vastaisen T-soluimmuniteetin arvioinnit ja eosinofiilien väheneminen määritti palautusantigeenien kasvaimia estävät mekanismit. Näiden löydösten merkityksen arvioimiseksi ihmisillä käytettiin yleissyöpää koskevia transkriptiotietoja ja polioviroterapian kliinisten tutkimusten korrelaatioita.
Tulokset
Aikaisempi rokotus poliovirusta vastaan vahvisti oleellisesti polion viroterapian kasvainten vastaista tehoa hiirillä, ja kasvaimensisäinen polioviruksen tai tetanusimmuniteetin palauttaminen viivästytti kasvaimen kasvua. Kasvaimensisäiset palautusantigeenit lisäsivät kasvainten vastaista T-solutoimintaa, aiheuttivat merkittävää tyypin 2 synnynnäisten lymfoidisolujen ja eosinofiilien kasvaimen infiltraatiota ja vähensivät säätelevien T-solujen (Tregs) osuuksia. Palautusantigeenien kasvaimia estävät vaikutukset välittelivät CD4+ T-soluja, B-solujen rajoittamia, CD40L:stä riippumattomia ja eosinofiileistä ja CD8+ T-soluista riippuvaisia. Käänteinen suhde eosinofiilien ja Treg-allekirjoitusten välillä havaittiin kaikissa The Cancer Genome Atlas (TCGA) -syöpätyypeissä, ja eosinofiilien väheneminen esti Tregin vähenemistä polion palauttamisen jälkeen. Polioa neutraloivien vasta-aineiden tiitterit olivat korkeammat potilailla, jotka elävät pidempään, ja eosinofiilit lisääntyivät suurimmalla osalla potilaista polion viroterapian jälkeen
Johtopäätös
Aiemmin olemassa oleva polion vastainen immuniteetti edistää polion viroterapian kasvainten vastaista tehoa. Tämä työ määrittelee lapsuuden rokotteiden syövän immunoterapian potentiaalin, paljastaa niiden hyödyn saada CD4+ T-solujen apua kasvaintenvastaisille CD8+ T-soluille ja ottaa eosinofiilit osaksi CD:n kasvainten vastaisia vaikuttajia4+ T-solut.
JOHDANTO
Vaikka CD4+ T-solut ovat tärkeitä adaptiivisen immuunitoiminnan ja muistin välittäjiä, 1–3 tapaa hyödyntää niiden potentiaalia syövän immuunihoidossa puuttuu. Mukautuva immuunimuisti mahdollistaa vankan immuunivasteen aiemmin kohdattuille taudinaiheuttajille. Vastaavasti palautusvasteet, eli adaptiivisten muistisolujen aktivointi sukulaisantigeenin vaikutuksesta, järjestävät paikallisen synnynnäisen ja adaptiivisen tulehduksen.4 5 Perustuu viimeaikaiseen työhön, joka osoittaa kasvaintensisäisten antiviraalisten CD8+ T-soluvasteiden hyödyllisyyttä syövän immunoterapiassa. , 6 7 oletimme, että kasvainlokalisoitunut, lapsuuden rokotteeseen liittyvä CD4+ T-solujen palautus voi vaikuttaa CD4+ T-solujen kasvainten vastaisiin toimiin. PVSRIPO (nykyisin nimellä "Lerapolturev"), elävä heikennetty poliovirustyyppi 1 (Sabin) -rokote, jota on modifioitu ihmisen rinovirustyypin 2,8 sisäisellä ribosomaalisella sisääntulokohdalla, on osoittanut varhaisia todisteita tehokkuudesta toistuvassa glioblastoomassa (rGBM)9 ja uusiutuvissa , ei-resekoitava melanooma10 11 kasvaimen (it) annon jälkeen. Poliovirusrokotus (polio) on osa yleistä lasten rokotusohjelmaa maailmanlaajuisesti joko elävällä heikennetyllä (Sabin) tai inaktivoidulla (IPOL) rokotteella. PVSRIPO:n koodaussekvenssi on identtinen tyypin 1 Sabin-rokotteen kanssa. Aiempi seerumin anti-PVSRIPO/polio-vasta-ainereaktiivisuus varmistettiin kaikilla PVSRIPO-hoitoa saavilla potilailla.{21}} Lisäksi PVSRIPO:n kliininen käyttö edellyttää kolmenarvoisen IPOL:n tehostetta vähintään 1 viikko ennen sen antamista, mikä aiheutti seerumin PVSRIPO:n neutraloitumisen. vasta-aine lisääntyy kaikissa potilaissa.{23}} Polion viroterapian kasvaimia estävät vaikutukset kattavat kasvainsoluvaurion ja myeloidisolujen subletaalit virusinfektiot, jotka ohjaavat jatkuvaa tyypin I interferoni (IFN) -signalointia.12–15 Polion vastainen immuunimuisti todennäköisesti estää PVSRIPO:n replikaatiota kasvaimessa, mutta se voi tarjota vaihtoehtoisen antituumorivaikutusmekanismin, koska se palauttaa poliorokotteelle spesifisiä T-soluja. Käyttämällä hiiren melanooman ja rintasyövän kasvainmalleja osoitamme, että jo olemassa oleva immuniteetti poliota vastaan voimistaa polion viroterapian kasvainten vastaista tehoa aktivoimalla CD4+ T-solujen kasvainten vastaisia toimintoja. Se polion tai tetanuksen palautus laukaisi merkittävän CD4+ T-solun, tyypin 2 synnynnäisen lymfoidisolun (ILC2) ja eosinofiilien sisäänvirtauksen; välittää kasvainten vastaista tehoa CD8+ T-solujen ja eosinofiilien kautta CD40L-riippumattomalla tavalla. Lerapolturevilla (PVSRIPO) hoidetuissa rGBM-potilasryhmissä hoitoa edeltäneiden poliota neutraloivien vasta-aineiden korkeammat tasot liittyivät pidempään eloonjäämiseen, ja eosinofiilien perifeerinen induktio havaittiin potilailla, joilla oli melanooma Lerapolturev-hoidon jälkeen. Siten polion viroterapia ja lapsuuden rokotteisiin liittyvät antigeenit koordinoivat kasvainten tyypin I ja II immuniteettia CD4+ T-solujen palauttamisen kautta.
cistanche-lisäaine hyödyttää - lisää vastustuskykyä
MATERIAALIT JA MENETELMÄT
Laajennetut materiaalit ja menetelmät on esitetty online-lisätiedoissa.
Hiiret, solulinjat, virukset, poly(I:C) ja in vivo -luokan vasta-aineet
(Tokio, Japani). Villityyppi (wt) (#000664), CD8 knockout (k/o) (#002665), B-solu k/o (#002288), OT-I (#003831) ja CD45.1 C57BL/6 hiiret (#) 002014) olivat The Jackson Laboratorysta. OT-I- ja CD45.1 C57BL/6 -hiiret risteytettiin CD45{18}}OT-I-hiirten tuottamiseksi. B16.F10 (American Type Culture Collection), E0771 (G. Palmer, Duke University, USA), E0771hCD155, B16.F10hCD155 ja B16. F10.9hCD155-OVA-soluja kasvatettiin runsaasti glukoosia sisältävässä Dulbecco's Modified Eagle Mediumissa (DMEM, Gibco), joka sisälsi 10 % naudan sikiön seerumia (FBS) (Sigma-Aldrich). B16. F10.9hCD155-OVA-, B16-F10hCD155- ja E0771hCD155-solut saatiin aiemmin.12 13 Kaikki solulinjat vahvistettiin mykoplasmanegatiivisiksi. Laboratorioluokan PVSRIPO, hiireen mukautettu PVSRIPO (mRIPO) ja UV-inaktivoitu PVSRIPO (UVP) luotiin HeLa-soluissa, mitä seurasi tuloksena olevan supernatantin kokoekskluusiopuhdistus aiemmin kuvatulla tavalla.{47}} PVSRIPO:ta käytettiin rokotukseen; UVP:tä käytettiin poliokapsidin (joka sisältää poliorokotteelle spesifisiä epitooppeja) vaikutusten eristämiseen; mRIPO on hiirelle sovitettu versio PVSRIPO:sta, jota käytettiin polion viroterapian täyden vaikutuksen testaamiseen hiirillä. VacciGrade korkean molekyylipainon poly(I:C) (InvivoGen) valmistettiin valmistajan ohjeiden mukaisesti. In vivo -luokan vasta-aineet interleukiinille (IL)-5 (TRFK5) tai kontrollille (HRPN), CD4:lle (GK1.5) tai kontrollille (LTF-2), CD40L:lle (MR-1) tai kontrolli (#BP0091) ja CD40 (FGK4.5) tai kontrolli (2A3) olivat Bio X Cell.
Rokotteet, rokotukset ja virustiitterit
Ellei toisin mainita, rokotteet käyttäen PVSRIPO:ta (1×107 plakkia muodostavaa yksikköä (pfu)/hiiri), tetanustoksoidia (Tet) (MilliporeSigma; 0,5 µg/hiiri) tai hemosyaniini-avaimenreikälimpetiä (KLH, Sigma) -Aldrich; 100 ug/hiiri) laimennettiin fosfaattipuskuroituun suolaliuokseen (PBS) Alhydrogelilla (1:1; InvivoGen); 50 µl rokotetta annettiin molemmin puolin nelipäiseen lihakseen. IPOL:n ja Tenivacin (Sanofi Pasteur) yhdistelmäimmunisaatiot annettiin yksipuolisesti kullekin rokotteelle. Rokotetehosteet tapahtuivat 14 päivää myöhemmin. Sen virustiittereitä varten kasvaimet kerättiin, punnittiin ja homogenisoitiin mekaanisesti 1 ml:ssa PBS:ää. Homogenaatti testattiin plakkimäärityksellä.16
Hiiren kasvainmallikokeet
Cistanche tubulosa-Antitumorin edut
B16-istutuksia varten 2 × 105 solua istutettiin ihonalaisesti uros- ja naarashiirten kylkeen; E0771-implantaatioita varten 5 x 105 solua istutettiin naarashiirten neljänteen rintarasvatyynyyn. hCD155-tg C57BL/6-hiiriä käytettiin mRIPO:n kanssa polion viroterapian (aktiivinen viruksen replikaatio ± olemassa oleva immuniteetti) yhteenvetoon; kun taas wt C57BL/6 -hiiriä, jotka eivät ole permissiivisiä poliolle, käytettiin UVP:n kanssa polion palauttamisen vaikutusten eristämiseen. Kasvaimet käsiteltiin joko DMEM:llä tai PBS:llä (vehikkeli), mRIPO:lla (1 x 107 pfu), UVP:llä (1 x 108 esiinaktivoitua pfu), Tet:llä (0,5 µg) ja/tai poly(I:C) (30 µg) osoitetulla tavalla. hahmolegendoissa. Hoitoryhmät satunnaistettiin kasvaimen tilavuuden mukaan (mittaukset, käyttäen yhtälöä L × W × W/2) ensimmäisenä hoitopäivänä. Hiiret lopetettiin, kun kasvaimen tilavuus ylitti 1000 mm3, ellei sitä edeltänyt haavauma (joka oli harvinainen eikä liittynyt mihinkään erityiseen hoitoon), jolloin hiiret suljettiin pois tutkimuksesta. Ryhmäkoot perustuivat pilottikokeiden tehoarvioihin tai aikaisempaan kokemukseen.12 Kasvainmittaukset suoritettiin sokkoutetusti it-hoitoryhmälle alkaen viimeisen it-terapian/antigeeniannoksen jälkeen. Hiiret, joiden kasvaimen aloitustilavuus oli poikkeava satunnaistamisen aikaan (1 SD keskiarvosta), suljettiin pois.
Kasvainten virtaussytometrinen analyysi
Kasvaimet kerättiin aikapisteissä, jotka on merkitty kuvioiden selitteillä ja dissosioituivat RPMI{0}}-elatusaineessa (Thermo Fisher), joka sisälsi 100 µg/ml Liberase-TM (Sigma-Aldrich) ja 10 µg/ml DNAse I (Roche) 30 minuutin ajan 37 asteessa. 70 uM (Olympus Plastics) solusiivilä, sentrifugointi ja pesu PBS:ssä. Kokeita varten, joissa käytettiin Zombie Aquaa (BioLegend), solut värjättiin Zombie Aqualla PBS:ssä (1:500) valmistajan ohjeiden mukaisesti. Sitten solususpensioita inkuboitiin 1:50 hiiren TruStain FcX:n (BioLegend) kanssa, mitä seurasi paneelispesifinen värjäys PBS:ssä, joka sisälsi 2 % FBS:ää. Solunsisäisten transkriptiotekijöiden, sytokiinien ja grantsyymi B:n värjäys suoritettiin käyttämällä Foxp3/Transcription Factor Staining Buffer Set -puskurisarjaa (Thermo Fisher) noudattaen valmistajan ohjeita. Katso online-lisätiedoista tietoa käytetyistä paneeleista ja vasta-aineista. Tiedot kerättiin Fortessa X20:llä Duke Cancer Instituten Flow Cytometry Core Facilityssä; FCS-tiedostot analysoitiin käyttämällä FlowJo V.10:tä (BD Biosciences). Porttistrategiat esitetään online-lisätiedoissa; isotyyppikontrollit, fluoresenssi miinus yksi kontrollit ja vertailu vakiintuneisiin negatiivisiin solupopulaatioihin käytettiin positiivisuuden määrittämiseen.
Kliinisiin tutkimuksiin liittyvät analyysit
PVSRIPO-neutralointitiitterimääritykset suoritettiin kliinisen tutkimusprotokollan mukaisesti9, ja molempien kliinisten rGBM-tutkimusten arvoja käytettiin kliinisten tutkimusten osallistumismäärityksistä. Vaiheen I rGBM (NCT01491893) poliotitterit raportoitiin aiemmin, ja eloonjääminen päivitettiin 29. huhtikuuta 2020; vaiheen II (NCT02986178) eloonjäämistiedot päivitettiin 27. huhtikuuta 2021. Melanooma (NCT03712358)10 11 kliinisen tutkimuksen osallistujien prosenttiosuudet valkosoluista saatiin kliinisistä kokonaisverenkuvatesteistä (CBC).
Tilastollinen analyysi ja kliinisten tutkimusten kohortit
Määrityskohtaiset tilastolliset testit on osoitettu vastaavissa kuvien selitteissä. GraphPad Prism V.8:aa käytettiin tilastollisten analyysien suorittamiseen. Kaksisuuntaista varianssianalyysiä (ANOVA) käytettiin arvioimaan ero kasvaimen kasvussa ajan kuluessa ryhmien välillä, ja ANOVA post hoc -testausta käytettiin useiden vertailujen huomioon ottamiseksi, ellei kuvassa ja/tai kuvion selityksessä toisin mainita. Tilastollinen todennäköisyys (s<0.05) was used unless otherwise noted; all p values are two-tailed. All data points reflect individual mice or patients.
TULOKSET
Polio-immunisaatio tehostaa polion viroterapiaa
Testasimme ensin polion vastaisten vasta-aineiden tuotantoa (eli serokonversiota) hiirillä, jotka olivat siirtogeenisiä ihmisen poliovirusreseptorin CD155 (hCD155-tg) suhteen IPOL- tai PVSRIPO-immunisoinnilla (jäljittelemään tyypin 1 Sabiinia) alunaadjuvantin kanssa ja ilman ( Alhydrogel; ALH), osa lisensoituja rokoteformulaatioita (esim. Pentacel, Pediarix, Kinrix).17 45 päivää ensimmäisen immunisaation ja kasvaimen implantaation välillä mahdollisti immunologisen muistin muodostumisen.18 IPOL saavutti rajallisen serokonversion ja PVSRIPO-immunisaatio sai aikaan vahvemman vasta-ainevaste; ALH vahvisti vasta-ainevasteita molemmille (online-lisäkuva S1A, B). Korkeiden polion vastaisten vasta-aineiden määrittämiseksi syöpäpotilailla9 valitsimme PVSRIPO+ALH (jäljempänä 'polio') -rokotteen määrittääksemme olemassa olevan polioimmuniteetin roolin PVSRIPO-immunoterapiassa. Hiiren kasvainmalleja ja hCD155:tä ilmentäviä hiiriä kehitettiin aiemmin mahdollistamaan PVSRIPO:n sisäänpääsy ja replikaatio, ja PVSRIPO mukautettiin hiiren soluihin viruksen replikaation tekemiseksi uudelleen hiiren syöpäsoluissa (mRIPO).13 19 Aikaisemmissa tutkimuksissa poliorokotteita käyttämättömillä syngeeniset hiiren kasvainmallit, yksittäinen mRIPO-injektio vaati ohjelmoidun solukuolemaproteiinin-1 (PD1)/ohjelmoidun kuoleman ligandin-1 eston tai immunogeenisen ovalbumiini (OVA) -proteiinin kasvaimen ilmentymisen kestävien kasvainten vastaisten vaikutusten välittämiseksi .12 13 Se mRIPO välitti kuitenkin kestävää kasvainten vastaista tehoa polioimmunisoiduissa hiirissä melanooma- (B16) ja rintasyöpämalleissa (E0771) verrattuna kontrolliin (KLH) immunisoituihin kollegoihin (kuva 1A, B, online-lisäkuva S1C) . Siten aikaisempi polioimmunisointi vahvistaa polion viroterapian kasvainten vastaista tehoa. Polion viroterapia liittyy T-solutulehdukseen kasvaimen sisällä.{22}} mRIPO-replikaatio kasvaimissa väheni merkittävästi polioimmunisoiduissa hiirissä 2 päivää ja 5 päivää hoidon jälkeen (kuva 1C, D), mikä vastaa voimakkaasti neutraloivaa vasta-ainetta tiitterit (online-lisäkuva S1B). Havaitsimme kuitenkin lisääntyneen immuunisolutiheyden (CD45.{30}} ) polioimmunisoiduissa hiirissä mRIPO-hoidon jälkeen, mikä selittyy suurelta osin perinteisten CD4+ T-solujen ja myeloidisolujen (CD11b+, Ly6GNeg, F4/80+ ) (kuva 1E, online-lisäkuvat S2A, S3). Myöhempi analyysi paljasti, että lisääntyneet CD11b+-myeloidisolut polioimmunisoiduissa hiirissä, joita käsiteltiin mRIPO:lla, olivat eosinofiilejä (kuvio 1F); dendriittisolujen (DC) tasot eivät muuttuneet merkittävästi. Kasvaimen nekroositekijän (TNF), granulosyytti-makrofagipesäkkeitä stimuloivan tekijän (GM-CSF), IL-1- ja IL-17A-tasot kasvainhomogenaatissa ja korkeammat IL-4- ja IL{-tasot {51}} polioimmunisoiduista hiiristä, jotka oli käsitelty mRIPO:lla, kasvaimien tyhjentävien imusolmukkeiden (TDLN) viljelmissä osoitti selkeitä tulehdusvasteita mRIPO-hoidon jälkeen (online-lisäkuva S2B). GM-CSF ja IL{55}} ovat tunnettuja eosinofiilien tuotannon ja rekrytoinnin indusoijia20, mikä mahdollisesti selittää eosinofiilien sisäänvirtauksen kasvaimissa (kuva 1F). Perinteisiä CD4+ T-soluja ja eosinofiilien infiltraatiota vasteena polioimmunisoitujen hiirten mRIPO-käsittelylle havaittiin myös erillisessä mallissa, E0771 (online-lisäkuva S2C, D). Siten jo olemassa oleva immuniteetti poliota vastaan korostaa tulehduksellisia vasteita mRIPO:lle, jotka liittyvät lisääntyneeseen kasvainten vastaiseen tehokkuuteen.
Figure 1 Polio immunization potentiates antitumor and inflammatory efficacy of polio virotherapy. (A) Polio or KLH-immunized hCD155-tg mice bearing hCD155-tg B16 or E0771 tumors were treated with DMEM (control) or mRIPO. (B) Survival cut-off was tumor volume >1000mm3; katso online-lisäkuva S1C; edustaja kahdesta kokeesta. (C) Kaavio D-H:n kokeille. (D) Tuumorihomogenaatin virustiitterit mRIPO:n jälkeen; ND, ei havaittu. (E) Kasvainten virtaussytometria-analyysit päivänä 7 (n=13/ryhmämalli; n=14/ryhmä mRIPO). (F) Virtaussytometriaanalyysit myeloidisoluille ja dendriittisoluille (DC:t: Ly6CNeg, F480Neg, CD11c+, IA/IE+) päivänä 11. (G) Aktivaatiomarkkerit TIL:issä päivinä 7 ja 12; yhdistettiin kahdesta kokeesta; KLH-DMEM-arvojen kertaiset keskiarvot näytetään. (H) TIL-transkriptiotekijän ilmentyminen päivänä 12; samat näytteet kuin (A) päivänä 12; kolmen toiston edustavat tiedot esitetään. Katso lisätiedot verkossa olevista lisäkuvista S1–S4. (E–H) Tukeyn post hoc -testi s< 0.05 versus mock controls (*) or all other groups (#). Data bars and brackets indicate mean+SEM. mRIPO, mouse adapted PVSRIPO; DMEM, Dulbecco's Modified Eagle Medium; IFN, interferon; i.t., intratumor; KLH, hemocyanin keyhole limpet; OVA, ovalbumin; TIL, tumor-infiltrating lymphocyte; TNF, tumor necrosis factor.
Tehostetut T-solujen toiminnalliset fenotyypit polioimmunisoiduissa hiirissä, jotka on käsitelty mRIPO:lla
CD8+ ja CD4+ kasvaimeen infiltroivat lymfosyytit (TIL:t) poliorokotetuissa hiirissä ilmensivät korkeampia pitoisuuksia solunsisäistä IFN-, TNF- ja grantsyymi B:tä mRIPO-hoidon jälkeen, mikä viittaa parantuneeseen toimintatilaan (kuva 1G , online-lisäkuva S4). mRIPO:lla käsiteltyjen polioimmunisoitujen hiirten TIL:t osoittivat myös transkriptiotekijöiden T-bet, GATA3 ja RORt lisääntynyttä ilmentymistä; sekä T-solujen aktivoitumisen ja toiminnan promoottorin IRF4:n induktio (kuva 1H).21 T-solujen uupumusmarkkerien PD1 ja T-soluimmunoglobuliinin ja musiinidomeenia sisältävän proteiinin 3 (TIM3) ilmentyminen CD:llä{{20 }} mRIPO:lla käsiteltyjen poliorokotettujen hiirten kasvaimen T-solut ja TDLN:t vähenivät (online-lisäkuva S2E). Muutokset T-solujen aktivaatio-/erilaistumismarkkereissa olivat yhdenmukaisia ortotooppisessa E0771-rintasyöpämallissa (online-lisäkuvat S2F, G). Siten muistutusvasteet polioon lisäävät toiminnallisia fenotyyppejä TIL:issä intratumoraalisen polion viroterapian jälkeen.
Polion ja tetanuksen palautusantigeenit välittävät kasvainten vastaista tehoa
Reovirusspesifiset muisti-CD8+ T-solut tappavat suoraan reoviruksen infektoimia syöpäsoluja onkolyyttisen reovirushoidon aikana,22 ja tetanusspesifiset muisti-CD4+ T-solut tappavat syöpäsoluja, jotka ovat infektoituneet Tet.23:a ilmentävällä listerialla. tulehdusreaktiot, jotka johtuvat muistin T-solujen palautumisesta kasvaimen mikroympäristössä (TME), voivat myös vahvistaa immuunivalvontaa.{8}} Oletimme, että palautumisen aiheuttama tulehdus selitti polion viroterapian korostuneen kasvainten vastaisen tehon poliorokotetuissa hiirissä, koska viruksen replikaatio – tarvitaan virusantigeenin tuotantoon kasvainsoluissa, onkolyysiin ja antiviraaliseen tulehdukseen12 – väheni jyrkästi polioimmunisoiduissa hiirissä (kuva 1D). Polion palauttamisen kasvainten vastaisten vaikutusten tutkimiseksi TME:ssä käytimme mallia, jossa ei ollut hCD155:tä (hiiret ja kasvaimet; wt C57BL/6 -hiiret) ja käsittelimme kasvaimia UV-inaktivoidulla PVSRIPO:lla (UVP) virusinfektion/replikaation estämiseksi. Lisäsimme vertailuja toiseen rokotteeseen liittyvään palautusantigeeniin Tet, jonka on osoitettu välittävän kasvainten vastaisia vaikutuksia muissa tutkimuksissa.{18}} Se UVP-hoito vaikutti kasvainten vastaiseen tehoon yksinomaan polioimmunisoiduilla hiirillä; Tet-hoito välitti ohimeneviä kasvainten vastaisia vaikutuksia Tet-immunisoiduissa hiirissä (kuva 2A–C, online-lisätiedosto 1). Luonnolliset palautusvasteet esiintyvät paikallisen synnynnäisen immuunivasteen läsnä ollessa patogeenin replikaatiolle. Tämän jäljittelemiseksi Tet- tai polioimmunisoituja hiiriä käsiteltiin poly(I:C):llä yksin tai yhdessä UVP:n tai Tet:n kanssa. Sekä UVP että Tet välittivät voimakkaita kasvainten vastaisia vaikutuksia tässä yhteydessä (kuva 2D). Nämä tiedot paljastavat, että se palauttaa muistiin TME:ssä olevat muisti-T-solut – riippumatta siitä, miten pahanlaatuiset solut esittelevät niiden sukulaisantigeenin ilmentymistä/pääasiallisen histokompatibiliteettikompleksin (MHC) – välittää kasvainten vastaista tehoa.
CD4+ T-solut välittävät palautusantigeenien kasvainten vastaista tehoa
Sen määrittämiseksi, mitkä mukautuvat osastot selittävät polion palautusvasteiden kasvaintenvastaisen tehokkuuden (viruksen replikaatiosta riippumatta), vertailimme sen hoitoa UVP:llä CD8+ T-solu- ja B-solu k/o -hiirissä suhteessa wt-hiiriin. hiiret (kuvio 3A). CD4 k/o -hiiriä ei testattu, koska CD4+ T-solut mahdollistivat sekä CD8+ T-solu- että B-soluvasteen rokotuksiin. Kuten odotettiin, polioimmunisaatio WT- ja CD8 k/o-hiirillä, mutta ei B-soluk/o-hiirillä, johti anti-PVSRIPO-vasta-aineen tuotantoon (kuvio 3B). B16-kasvaimen kasvu oli samanlaista kussakin geneettisessä kontekstissa valehoidon jälkeen. Suhteessa wt-hiiriin UVP:n kasvainten vastainen teho polioimmunisoiduissa hiirissä oli rajoitettu CD8 k/o -hiirillä myöhemmissä pisteissä, mutta se parani B-solujen k/o-hiirissä (kuva 3C; p=0.007wt vs B-solu k/o UVP-käsitellyt käyrät, kaksisuuntainen ANOVA). Lisäksi B-solujen k/o ei estänyt polion palauttamiseen liittyvää eosinofiilien tai CD{23}} TIL:ien (online-lisäkuva S6A) sisäänvirtausta (kuva 1). Siten polion palauttamisen kasvainten vastainen teho riippuu osittain CD8+ T-soluista ja sitä rajoittavat B-solut. Nämä havainnot sekä lisääntyneet CD4+ TIL:t polioimmunisoitujen hiirten mRIPO-hoidon jälkeen (kuva 1E) viittaavat siihen, että CD4+ T-solut sanelevat polion palautusvasteiden kasvainten vastaisen tehon. Niinpä testasimme seuraavaksi polion palauttamisen kasvaimia estävää vaikutusta ohimenevän CD4+ T-solujen ehtymisen kanssa ja ilman sitä (kuva 3D, 1-päiväesihoidon aloitus). Huolimatta CD4+ T-solujen voimakkaasta ehtymisestä TDLN:ssä, CD4+ T-solujen väheneminen kasvaimessa oli epätäydellistä ja ensisijaisesti vähensi sääteleviä T-solupopulaatioita (Treg), mikä mahdollisesti selittää vaatimattomat kasvainten vastaiset vaikutukset ja lisääntynyt CD 8+ T-solutiheydet CD4+ T-solujen ehtymisen jälkeen (kuva 3D, online-lisäkuva S6B). Siitä huolimatta CD4+ T-solujen väheneminen lähes poisti UVP:n kasvainten vastaisen tehon polioimmunisoiduissa hiirissä ja esti eosinofiilien kerääntymisen vasteena UVP:lle (kuva 3D); CD4+ T-solujen ehtyminen esti myös grantsyymi B:n induktion CD8+ T-soluissa UVP-hoidon jälkeen (online-lisäkuva S6B). Yhdessä nämä havainnot osoittavat, että polion palauttamisen kasvainten vastaiset ja tulehdusvaikutukset ovat CD4+ T-soluista riippuvaisia. Vahvistaa, että poliospesifiset CD4+ T-solut ovat riittäviä vahvistamaan polion viroterapian kasvainten vastaista tehoa (aktiivisella viruksen replikaatiolla), CD4+ T-solujen adoptiivinen siirto polioimmunisoitujen hiirten pernoista, mutta ei että Tet, vahvisti mRIPO:n kasvainten vastaista tehoa (kuva 3E, online-lisäkuva S6C).
Se muistuttaa antigeenihoitoa tehostaa kasvaintenvastaista CD{0}} T-solujen toimintaa
Kasvainspesifisten CD4+ T-solujen osoitettiin tappavan suoraan kasvainsoluja, 25–27 sitoutuvat sytotoksisiin synnynnäisiin immuunisoluihin28 29 ja auttavat efektori-CD8+ T-soluja.1–{ {7}} Viimeksi mainitun mukaisesti palautusantigeenien kasvaimia estävät vaikutukset havaittiin TME:hen toimituksen jälkeen (kuvat 2 ja 3), ne olivat osittain riippuvaisia CD8+ T-soluista (kuva 3C) ja CD{{12 }} TIL:illä oli parantuneet polyfunktionaaliset fenotyypit mRIPO-hoidon jälkeen poliorokotetuissa hiirissä (kuvio 1G).
Kuva 2 Polion ja tetanuksen palautusantigeenit välittävät kasvainten vastaista tehoa. B16 (A) tai E0771 (B) kasvaimia kantavia hiiriä, jotka oli immunisoitu poliolla tai Tetillä, käsiteltiin kasvaimensisäisesti Tet:llä tai UV-inaktivoidulla PVSRIPO:lla (UVP). (C) Ikäsopivia naiiveja tai Tenivac- ja IPOL-immunisoituja hiiriä käsiteltiin PBS:llä, Tet:llä tai UVP:llä. (D) Kohdassa (A, B) immunisoidut hiiret käsiteltiin tuumorinsisäisillä vale-, poly(I:C)- (30 ug), poly(I:C) + Tet:llä tai poly(I:C)+UVP:llä, kuten on esitetty. (A–D) Keskiarvo + SEM vähintään kahden toiston edustavasta kokeesta on esitetty; tähdet osoittavat Dunnettin testiä s< 0.05 versus all other groups; online supplemental figure S5 presents extended data. IPOL, inactivated polio vaccine; i.t., intratumor; PBS, phosphate buffered saline; UVP, UV-inactivated PVSRIPO; Tet, tetanus toxoid.
Näin ollen pyrimme seuraavaksi määrittämään, tehostavatko polio (UVP) ja Tet-palauttaminen kasvaintenvastaisten CD{0}} T-solujen toimintaa. Tätä tarkoitusta varten siirsimme CD45:n.1+OT-I CD8+ T-solut (OVA-spesifiset) polio- tai Tet-rokotetuille hiirille ja määritimme UVP- ja Tet-indusoidun palautumisen vaikutuksen B{ {7}}OVA OT-I TIL -fenotyypit (kuva 4A). Palautusvasteiden induktio kasvaimessa UVP:n tai Tet:n jälkeen liittyi kasvaimen kasvun viivästymiseen ja endogeenisten CD452+-solujen, eosinofiilien ja tavanomaisten CD{12}}-T-solujen lisääntyneeseen kasvaimen infiltraatioon; erityisesti kasvaintenvastaisten OT-I T-solujen tasot eivät nousseet merkittävästi (kuvio 4B). Kuitenkin kasvaimeen tunkeutuvien OT-I CD8+ T-solujen analyysi paljasti lisääntyneen grantsyymi B:n, TNF:n ja IFN-:n; ja terminaalisen uupumusmarkkerin TIM3 vähentynyt ilmentyminen polion tai Tet-palautuksen jälkeen (kuva 4C). Havaittiin vaihteleva Th-assosioituneen transkriptiotekijän ilmentyminen sekä OT-I- että endogeenisissa T-soluissa, mukaan lukien GATA3:n, RORt:n ja BCL6:n ekspressio (kuvio 4C). OT-I TIL:ien transkriptominen analyysi polion palauttamisen jälkeen paljasti grantsyymien lisääntyneen ilmentymisen; geenit, jotka liittyvät T-solujen aktivaatioon, toimintaan tai homeostaasiin (Taok3, CD86, CCR5, Egr2, Adgre1, Vdr, IRF4 ja BCL6); geenit, jotka liittyvät Th1-immuniteettiin (Ptger4, Fgl2); sekä Th2-immuniteettiin liittyvät geenit (Alox15, Ccl8 ja GATA3) (kuva 4D, online-lisäkuva 8C). Vahvistimme nämä havainnot testaamalla polion palauttamisen vaikutusta endogeenisiin TRP2-spesifisiin (endogeeninen B16-antigeeni) CD8+ TIL-soluihin B16-kasvaimissa ilman OVA-ilmentymistä. TRP2-spesifiset CD8+ TIL:t lisäsivät grantsyymi B:tä ja vähensivät TIM3:n ilmentymistä polion palauttamisen jälkeen CD4+ T-soluista riippuvaisella tavalla (online-lisäkuva S9). Yhdessä nämä tiedot osoittavat kasvaintenvastaisten T-solujen parantuneita sytolyyttisiä ja toiminnallisia fenotyyppejä polion palauttamisen jälkeen. Osoittaen toiminnallisesti tehostunutta kasvaintenvastaista T-soluimmuniteettia sen palauttamisen jälkeen, sillä T-solut, jotka on eristetty sillä käsiteltyjen hiirten pernoista, muistuttavat antigeeniä (UVP poliorokotetussa tai Tet in Tenivac rokotetussa tapauksessa) viivästyttivät kasvaimen kasvua siirron jälkeen naiiveille vastaanottajille (kuva 4E). CD4+ T-solut edistävät kasvaintenvastaista CD8+ T-solujen toimintaa osittain CD40L-signaloinnin kautta CD40:lle antigeeniä esittelevissä soluissa,1 mutta voivat myös auttaa antitumor CD8+ T-soluista riippumattomia CD40L.31:n CD40L-salpaus ei estänyt UVP-indusoitua eosinofiiliä, tavanomaisia CD4+-T-soluja tai antituumori-OT-I T-virtausta; se ei myöskään estänyt kasvainten vastaisia vaikutuksia (online-lisäkuva S10). Lisäksi CD40-ligaatio ei koonnut uudelleen eosinofiilien sisäänvirtausta, joka havaittiin palautusantigeenihoidon jälkeen (online-lisäkuva S10). Siten se CD4+ T-solujen palautus tehostaa kasvaintenvastaisten CD{77}} T-solujen kasvainten vastaista toimintaa CD40L-riippumattomalla tavalla.
Kuva 3 CD4+ T-solut välittävät polion palauttamisen kasvainten vastaista tehoa. (A) Suunnittelu kokeille (B, C). (B) ELISA polion vasta-aineille kussakin geneettisessä taustassa päivänä 0 (n=4/ryhmä). (C) Keskimääräinen kasvaimen tilavuus + SEM valehoidon jälkeen (vasemmalla) tai vale- vs. UVP-käsittely (oikea paneeli) kullekin genotyyppikontekstille; p-arvot ovat UVP:n kaksisuuntaisen varianssianalyysin (ANOVA) vertailusta kontrolliryhmään. (D) Poliolla immunisoituja hiiriä käsiteltiin vale- tai UVP:llä kuten kohdassa (A), intraperitoneaalisilla (ip) IgG- (kontrolli) tai CD4+ T-soluja tuhoavilla vasta-aineinjektioilla (250 µg joka 3. päivä alkaen päivästä alkaen -1); kasvaimen keskimääräinen tilavuus + SEM ja kasvaimeen infiltroituneiden CD4 T-solujen ja eosinofiilien virtaussytometrinen analyysi esitetään; n=9 ryhmää kohti; p-arvo on kaksisuuntaisesta ANOVAsta, jossa verrataan UVP IgG:tä UVP CD4:ään; (*) osoittaa Tukeyn post hoc p<0.05. (E) CD4+ T cells from spleens of mice immunized with Tet (control) or polio were adoptively transferred to naïve B16 tumor-bearing recipients 1day-prior to intratumor treatment with DMEM or mRIPO. Mean tumor volume+SEM for mock or mRIPO treated mice for each CD4+ T-cell transfer condition; p values are from two-way ANOVA comparison of the two curves shown in each panel. See online supplemental figure S6 for extended data. DMEM, Dulbecco's Modified Eagle Medium; i.t., intratumor; UVP, UVinactivated PVSRIPO; Tet, tetanus toxoid; mRIPO, mouse adapted PVSRIPO; Tconv, conventional CD4+ T cells.
Kuva 4 Tuumorinsisäinen palautusantigeenihoito tehostaa kasvaintenvastaista CD8+ T-solujen toimintaa. (A) Polio- tai Tet- (Tenivac) -immunisoituihin hiiriin istutettiin B16-OVA-kasvaimia, mitä seurasi aktivoitujen OT-I (CD45.1+ ) -solujen adoptiosiirto ja joko Tet- tai UVP-käsittely. . (B) immuunisolujen (B) ja TIL-alaryhmien (C) tuumorin tilavuus- ja virtaussytometria-analyysit; online-lisäkuva S7 esittää OT-I TIL:ien portituksen. (D) Polioimmunisoiduista hiiristä 12 päivää käsittelyn jälkeen (DMEM tai UVP) eristettyjen OT-I TIL:ien transkriptomit analysoitiin. Keskimääräiset ja skaalatut keskimääräiset normalisoidut lukemat näytetään transkripteillä, jotka olivat merkittävästi erilaiset väärien havaitsemissuhteen p-arvon säätämisen jälkeen kahdessa erillisessä kokeessa (yläpaneeli, n=4/ryhmä ja n=3/ryhmä, vastaavasti ) tai (C):n kannalta merkityksellisille ominaisuuksille, jotka lähestyivät merkitystä molemmissa tietosarjoissa, mukaan lukien granzymit, IRF4, BCL6 ja GATA3 (alapaneeli); n=4 kopiota/ryhmää näytetään lämpökartassa. Online-lisäkuvat S8B ja C esittävät yksittäisten näytteiden ja laajennettujen tietojen normalisoidut lukemat. (E) Kasvaimen eteneminen naiiveissa hiirissä, jotka on siirretty T-solujen kanssa hiirten pernoista A–C:ssä. Keskimääräinen kasvaimen tilavuus + SEM näytetään; p-arvo on kaksisuuntaisesta varianssianalyysistä. Kaikki datapalkit edustavat keskiarvoa + SEM; lämpökartat kohdassa (C) normalisoitiin yhteensopimattoman antigeenikontrollin kerta-arvolla; Tukeyn post hoc -testi s<0.05 relative to all other groups (#) or respective DMEM control (*). (A–C) pooled results from two experiments; data in (E) were repeated twice. DMEM, Dulbecco's Modified Eagle Medium; TIM3, T cell immunoglobulin and mucin domain-containing protein 3; IFN, interferon; i.t., intratumor; OVA, ovalbumin; PD1, programmed cell death protein-1; UVP, UV inactivated PVSRIPO; Tet, tetanus toxoid; TIL, tumor-infiltrating lymphocytes; TNF, tumor necrosis factor.
Kasvaimeen tunkeutuvat eosinofiilit liittyvät käänteisesti Tregiin ihmisen kasvaimissa
Muiden kasvainten vastaisten immuuniefektorien sitoutuminen sytokiinierityksen kautta on CD4+ T-solujen CD40L-riippumaton mekanismi.31 32 Poliokapsidi (UVP) ja viroterapia (mRIPO) aiheuttivat johdonmukaisesti voimakkaan it-tunkeutumisen eosinofiileihin ( kuvat 1, 3 ja 4), CD4+ T-soluista riippuvalla tavalla (kuva 3D). Kasvaineosinofiilien sisäänvirtaus liittyy immuunihoitovasteeseen33–35, ja viimeaikainen tutkimus osoitti, että CD4+ T-solut aktivoivat eosinofiilien kasvaimia estäviä toimintoja PD1-salpauksen jälkeen IL-5.36 Ensin kysyimme, korreloiko eosinofiilitiheys CD4+ T-solujen tai muiden ihmisen kasvainten TME:n ominaisuuksien kyselyä syövän tietojoukosta The Cancer Genome Atlas (TCGA). kerrostettiin havaittujen eosinofiiligeenin ilmentymissignatuurien läsnäolon tai puuttumisen perusteella (kuvio 5A, online-lisäkuva S11, 12); Kivesten sukusolukasvaimet (TGCT) ja uveal melanooma (UVM) jätettiin pois, koska eosinofiilien rikastuminen oli rajoitettua (n<3). While limited association of eosinophil presence was observed with CD8+ or CD4+ T-cell enrichment, eosinophil presence was associated with significantly lower Treg signatures across all cancer types (figure 5A, online supplemental figure S11B, C). Eosinophil presence was associated with longer survival in Low-Grade Glioma (LGG), where eosinophil density was also the highest (online supplemental figure S11A), but not in other tumor types (figure 5B, online supplemental figure S11D). Importantly, significant differences in Treg density on stratification by eosinophil enrichment were observed within several cancer types, with heterogenous relationships between CD4+ and CD8+ T-cell density (online supplemental figure S12). Notably, eosinophil influx was associated with reduced Treg proportions after polio recall in our studies (figures 1E and 4B, online supplemental figure S2). Together, these data may reflect a role for eosinophils in countering tumor-infiltrating Tregs.
cistanche tubulosa - parantaa immuunijärjestelmää
Napsauta tästä nähdäksesi Cistanche Enhance Immunity -tuotteet
【Kysy lisää】 Sähköposti:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692
Tuumorityypin II immuniteetti polioimmunisoitujen hiirten mRIPO-hoidon jälkeen
Seuraavaksi pyrimme määrittämään eosinofiilien tunkeutumisen merkityksen polion palauttamisen jälkeen hiirillä. Eosinofiilit ovat tyypin II immuunivasteiden välittäjiä, joilla on rooli helmintin vastaisessa immuniteetissa ja allergisessa tulehduksessa.39 Eosinofiilien lisääntymistä voivat välittää muut tyypin II immuunivälittäjät, mukaan lukien ILC2:t, jotka koordinoivat Th2-vasteita suorien vuorovaikutusten kautta CD:n kanssa{{4} } T-solut,40 ekspressoivat transkriptiotekijää GATA3:a ja eosinofiilejä edistävää sytokiinia IL-5, mutta niistä puuttuu T-solureseptorin ilmentyminen. Todellakin, GATA3+ CD3Neg-solut lisääntyivät hiirten kasvaimissa sen palautumisen jälkeen (kuva 5C), mikä mahdollisesti heijastaa ILC2-virtausta. Seuraavaksi testasimme, kuinka eosinofiilit vaikuttavat polion viroterapiaan (mRIPO) polioimmunisoiduissa hiirissä, ja mittasimme suoraan ILC2:t. Eosinofiilien väheneminen (IL-5-neutraloinnin kautta41) lievensi mRIPO:n kasvaimia estäviä vaikutuksia B16-OVAhCD155:tä kantavissa, polioimmunisoiduissa hiirissä (kuva 5D, E); ei vähentänyt CD4+ T-soluvirtausta; mutta esti Treg-osuuden pienenemisen (kuva 5F). Lisäksi polion viroterapia (mRIPO) johti ILC2-virtaukseen (kuva 5F) ja muutti ILC2-fenotyyppejä poliolla immunisoiduissa hiirissä, jolloin IL-5 väheni ja PD1:n ja grantsyymi B:n ilmentyminen indusoitui (kuva 5G). Sen lisäksi, että se kontrolloi eosinofiilitasoja, IL-5 on myös kriittinen B-solujen erilaistumiselle.42 Koska polion palauttamisen kasvaimia estävät vaikutukset ovat kuitenkin riippumattomia B-soluista ja mahdollisesti ne vastustavat niitä (kuva 3C), ja johdonmukaisen vahvan eosinofiilien tunkeutumisen vuoksi polion palauttamisen yhteydessä päätämme, että IL-5-neutralointi vähentää polion palauttamisen kasvaimia estäviä vaikutuksia eosinofiilien ehtymisen kautta. Yhdessä nämä tiedot osoittavat eosinofiilien antituumorirooleja ja ILC2-solujen, joilla on muuttuneet fenotyypit, värväytymistä polion palauttamisen jälkeen ja viittaavat siihen, että eosinofiilit säätelevät sen Treg-tiheyksiä.
Aiemmin olemassa olevat polion vastaiset vasta-aineet liittyvät pidempään eloonjäämiseen Lerapolturev (PVSRIPO) -hoidon jälkeen; perifeeriset eosinofiilit lisääntyvät Lerapolturevin jälkeen
In trials of Lerapolturev in rGBM9 and melanoma,10 all patients were confirmed seropositive for anti-PVSRIPO neutralizing antibodies (from polio vaccine crossreacting antibodies) at the time of enrollment, a feature anticipated to correlate with pre-existing PVSRIPO specific CD4+ T-cell immunity. We queried both phase I (n=61)9 and II (n=72 at the time of data cut-off) clinical rGBM cohorts for the relationship between pretreatment Lerapolturev neutralizing antibodies and survival. In both cohorts, patients living >18 kuukautta Lerapolturevin jälkeen (tyypillinen mediaani eloonjäämisaika rGBM:ssä on ~9 kuukautta)9 43 oli merkittävästi korkeampi ennen käsittelyä neutraloivien vasta-aineiden tiitterit (kuvio 6A, B). Selvittääksemme, voivatko tyypin II immuunivasteet aktivoitua potilailla, joita hoidetaan sillä polioviroterapialla, analysoimme pitkittäisiä CBC:itä, jotka olivat saatavilla pienestä Lerapolturevin annoksen eskalaatiotutkimuksesta toistuvassa, ei-leikkauskelvottomassa melanoomassa (vaihe I, n{6}}). .10 11 Nämä tiedot paljastivat kohonneita veren eosinofiilitasoja Lerapolturev-hoidon jälkeen 8/12 potilaalla (kuva 6C) ja samaan aikaan neutrofiilien vähenemisen kanssa (10/12 potilasta). Nämä havainnot voivat viitata siihen, että olemassa oleva immuniteetti edistää polion viroterapian kasvainten vastaista tehoa ja että polion viroterapia indusoi tyypin II immuunivasteita syöpäpotilailla.
kuvio 5 Eosinofiilit assosioituvat käänteisesti Tregien kanssa ihmisen kasvaimissa; mRIPO indusoi kasvainten tyypin II immuniteetin polioimmunisoiduissa hiirissä. (A) CIBERSORT dekonvoluuti T-solujen alajoukot The Cancer Genome Atlas -syöpätyypeissä (n=29) eosinofiilisyyden perusteella, p-arvot paritusta t-testistä. (B) HR:t (eloonjääminen) ± 95 % CI:t eosinofiilitasolle syöpätyypin mukaan; syöpätyypit, joissa kuoli alle 20, jätettiin pois; p-arvot ovat Mantel-Coxin log-rank-testistä. (C) GATA3+ CD3Neg-solujen prosenttiosuus kuvan 4C tiedoista, p-arvot ovat parittomasta t-testistä. (D) Suunnittelu (E–H): polioimmunisoidut, B16-OVAhCD155 kasvainta kantavat hCD155-siirtogeeniset hiiret hoidettiin vale- tai PVSRIPO:lla ± eosinofiilien väheneminen (anti-IL-5 tai kontrolli-IgG, 1 mg viikossa). Keskimääräinen kasvaimen tilavuus + SEM (E), eosinofiilien ja ILC2:n tiheys kasvaimissa (F) ja kasvaimeen infiltroivien ILC2-solujen fenotyyppi (lineageNegCD90+ CD127+ CD25+ ) vs. sukulinjan negatiivinen CD 90+ vertailusolut näytetään (G). (E) (*)Kaksisuuntainen varianssianalyysi s<0.05; (F–G) (*)Tukey's post hoc test p< 0.05 versus mock+IgG control. Online supplemental figure S11–S13 presents extended data. IL, interleukin; ILC2, type 2 innate lymphoid cell; i.p., intraperitoneal; i.t., intratumor; OVA, ovalbumin; PD1, programmed cell death protein-1; UVP, UV-inactivated PVSRIPO; Tet, tetanus toxoid; Tregs, regulatory T cells; mRIPO, mouse-adapted PVSRIPO.
Kiinan yrtti cistanche kasvi-Antitumor
KESKUSTELU
Tämä työ paljastaa kasvaimeen lokalisoituneen CD{1}} T-solujen palauttamisen syövän immunoterapian potentiaalin. CD4+ T-solujen apu on avainasemassa täysin toimivan antitumor CD8+ T-soluimmuniteetin1 44 ja pitkäaikaisen muistin luomisessa.2 45 Antitumor CD8+ T-soluilla oli suurempia polyfunktionaalisia fenotyyppejä palautuksen jälkeen, adoptiivinen T-solujen siirto palautusantigeenilla käsitellyistä hiiristä viivästytti kasvaimen kasvua naiiveilla vastaanottajilla, ja UVP:n kasvainten vastaiset vaikutukset heikkenivät polioimmunisoiduissa hiirissä, joista puuttui CD{14}} T-soluja. Tämä osoittaa, että CD4+ T-solujen tarjoaminen auttaa antitumor CD8+ T-soluja. CD4+ T-solujen apu liittyy todellakin uupumusmarkkerien alasäätelyyn, kohonneeseen TNF/IFN-/grantsyymi B:n ilmentymiseen ja Tbet/IRF4:n induktioon "avustetuissa" efektori-T-soluissa3, jotka kaikki tapahtuivat polion yhteydessä. viroterapia immunisoiduilla hiirillä. Tällainen T-soluapu on todennäköisesti monitahoinen, mukaan lukien DC:iden "lisensointi"; CD4+ sytokiinien T-solueritys (esim. IL-21, IFN-); TME:n uudelleenohjelmointi; tai värvättyjen eosinofiilien positiivisten vaikutusten kautta CD8+ T-solujen immuunivalvontaan.36 46 Johtuu mahdollisesti poliota neutraloivien vasta-aineiden aktiivisuudesta, joka rajoittaa CD4+ T-solujen aktivaatiota vähentämällä palautusantigeenin saatavuutta. tai pysyvyyttä, B-solut olivat haitallisia polion palauttamisen kasvainten vastaisille vaikutuksille. Polio-muisti välitti johdonmukaisesti voimakkaampia kasvainten vastaisia ja tulehdusvasteita kuin Tet tutkimuksissamme. Yksi mahdollisuus on, että tämä johtuu eroista poliorokotuksen ja Tet-rokotteen jälkeisen olemassa olevan immuniteetin intensiteetissä ja/tai laadussa mallijärjestelmissämme. Tämän mahdollisuuden tueksi Tet:n ja UVP:n kasvaimia estävät vaikutukset olivat samanlaisia, kun hiiret immunisoitiin kliinisen asteen IPOL-rokotteella (kuva 2C), joka indusoi heikomman polio-immuniteetin kuin polioimmunisaatiostrategia (PVSRIPO+ALH), jota käytettiin muissa kokeissa tutkimuksemme (online-lisäkuva S1B). On kuitenkin myös hyvin todistettu, että antigeenin luonne (esim. epitooppitiheys, joka on todennäköisesti korkeampi poliokapsidissa) voi vaikuttaa adaptiivisiin immuunivasteisiin. 47 48 Polion palauttamisen kasvainten vastainen teho riippui vain osittain CD8+ T-soluista. Muistutusantigeenihoito aiheutti eosinofiilien ja ILC2:n sisäänvirtauksen, ja eosinofiilien väheneminen vähensi kasvainten vastaisia vaikutuksia polioimmunisoiduissa hiirissä, joita hoidettiin mRIPO:lla. Kontekstin tärkeyttä korostaen, että sekä eosinofiilien että ILC2-solujen osoitettiin välittävän myös alkukasvua aiheuttavia vaikutuksia.{43}} Astmassa CD4+ T-solut värväävät eosinofiilejä51 ILC2:n kautta.52 ILC2:t ilmentävät MHC-luokkaa II ja levittävät Th2-vasteita helmintin infektiot.40 Syövässä kasvaimen eosinofiilien infiltraatio liittyy immunoterapiavasteeseen, 33 34 eosinofiilien osoitettiin tukevan CD8+ T-solujen immuunivalvontaa,46 ja ILC2:t edistävät anti-PD1-kasvaintehoa. 35 53 Työmme osoittaa, että CD4+ T-solut voivat aktivoida eosinofiilien ja mahdollisesti ILC2:n kasvainten vastaisia toimintoja. Se, kuinka CD4+ T-solujen palautus värvää eosinofiilit kasvaimeen, on vielä täysin selvittämättä, mutta viimeaikainen tutkimus tarjoaa mahdollisen selityksen osoittamalla, että PD1-salpauksen aikana CD4+ erittää IL-5:a. T-solut indusoivat eosinofiilien laajenemista ja niiden rekrytoitumista.36 Lisäksi kasvainhomogenaattien ja TDLN-eksplanttien sytokiinianalyysi polioviroterapian jälkeen paljasti myös lisääntyneen eosinofiilejä edistävän GM-CSF:n ja IL-5:n polioimmunisoiduissa hiirissä (online-lisäkuva S2B). ).
Kuvio 6 Aiemmin olemassa olevat polion vastaiset vasta-aineet liittyvät pidempään eloonjäämiseen Lerapolturev (PVSRIPO) -hoidon jälkeen; perifeeriset eosinofiilit lisääntyvät Lerapolturevin jälkeen. (A, B) Esikäsittely Lerapolturev-seerumin neutralointitiitterit mitattiin toistuvan glioblastooman (rGBM) faasin I (A, Ph1, NCT01491893) ja faasin II (B, Ph2, NCT02986178) kokeissa. Eloonjääminen erotuksen jälkeen mediaanineutralisaatiotiitterin mukaan (1:2000) sekä keskiarvo+SEM-tiitteri eloonjääneille potilaille
Löysimme myös käänteisen suhteen kasvaimen eosinofiilien sisäänvirtauksen ja Treg-tiheyden välillä ihmisen kasvaimissa, ja muistutusantigeenihoito johti vähentyneeseen Tregien osuuteen, joka kovarioi eosinofiilien sisäänvirtauksen kanssa, mikä viittaa eosinofiilien vastavuoroiseen rooliin CD{0}} T-solujen hallinnassa. biologia. Sen määrittäminen, kuinka eosinofiilit välittävät kasvainten vastaisia vaikutuksia CD4+ T-solujen palautumisen jälkeen, ja osallistuvatko ILC2:t tähän prosessiin, vaatii lisätutkimuksia. Erot eosinofiilien tiheydessä eivät yksinään näytä olevan ennustavia useimmissa syöpätyypeissä, lukuun ottamatta LGG:tä, jossa eosinofiilitasot olivat myös korkeimmat kaikista muista kasvaintyypeistä. Mielenkiintoista on, että perifeeristen eosinofiilien ja gliooman asteen välillä on raportoitu negatiivinen korrelaatio54; ja hengitystieallergiat ja atopia liittyvät pienempään gliooman ilmaantuvuuteen.55 Käytimme polio- ja tetanusrokotteiden kliinisen käytön mukaisia Th2-polarisoivia rokotusstrategioita tulkitaksemme CD4+ T-solujen palautumisen kasvaintenvastaisen potentiaalin. Vaikka kanonisesti Th1/Tc1-, Th2/Tc2- ja Th17/Tc17-polarisaatiot ovat toisensa poissulkevia, muistutusantigeeniterapia tuotti tässä yhteydessä Th1:n (CD8+ T-solujen sitoutuminen, Tbet/IFN-ekspressio CD{{) 20}} T-solut); Th2 (eosinofiilien/ILC2:n rekrytointi, GATA3:n ilmentyminen CD4+ T-soluissa); ja vähäisemmässä määrin Th17:n (ROR t:n ilmentyminen CD4+ /CD8+ T-soluissa) polarisoivia ominaisuuksia. Nämä tiedot lisäävät kasvavaa näyttöä siitä, että erilaiset CD4+ T-solupolarisaatiot, Th1:n polarisaatioiden lisäksi, voivat tuottaa yhteensopivia ja tuottavia kasvainten vastaisia immuunivasteita.56–58 Työmme osoittaa, että vaikka olemassa oleva immuniteetti rajoittaa viruksen replikaatiota sisällä kasvain, se parantaa polion viroterapian kasvainten vastaista tehoa. Tämän työn rajoituksena on, että se suoritettiin hiiren järjestelmissä, jotka eivät kaappaa polion/Tet-muisti CD4+ T-soluvasteiden heterogeenisyyttä tai TME:tä ihmisillä. Lisäksi käytettyjen kasvainmallien nopean kasvun vuoksi kasvaimet olivat suhteellisen pieniä hoidon aloitushetkellä. Siitä huolimatta, mikä viittaa havaintojemme soveltuvuuteen ihmisiin, hoitoa edeltävät poliota neutraloivien vasta-aineiden tiitterit olivat korkeammat potilailla, joilla oli rGBM ja jotka elivät pidempään polioviroterapian jälkeen, ja veren eosinofiiliarvot nousivat suurimmalla osalla melanoomapotilaista (8/12) sen jälkeen, kun sitä oli hoidettu polion viroterapia (Lerapolturev). Varoituksena korkeammat neutraloivien polion vasta-aineiden tiitterit voivat heijastaa erinomaista immuunitoiminnallista tilaa. Vaikka emme voi sulkea pois tätä mahdollisuutta, nämä tiedot osoittavat ainakin, että olemassa oleva immuniteetti ei estä onnistunutta polioviroterapiaa potilailla. Havaintomme viittaavat myös siihen, että Lerapolturev-valmisteen useat annokset voivat olla perusteltuja korostamaan polion palauttamisen kasvaimia estäviä vaikutuksia. Itse asiassa Lerapolturevilla hoidettujen melanoomapotilaiden vasteet ryhmittyivät kohorttiin, jossa oli eniten hoitoja.10 Ottaen huomioon CD4+ T-solujen huomattavan merkityksen syövän immunoterapiassa,1 32 kasvavilla ponnisteluilla pyritään hyödyntämään CD4+ T-solut auttavat kasvaimissa, esimerkiksi CD40-agonistisilla vasta-aineilla59 tai peptidirokotteilla, mukaan lukien MHC-luokan II epitoopit44, jotka käynnistävät neoantigeenispesifisen CD4+- ja CD8+-T:n 60 Työmme paljastaa potentiaalin valjastaa lapsuuden rokotespesifisiä muisti-CD4+ T-soluja CD4+ T-solujen monitahoisten kasvainten vastaisten mekanismien aktivoimiseksi.
VIITTEET
1 Borst J, Ahrends T, Bąbała N, et ai. Cd4+ T-solut auttavat syövän immunologiassa ja immunoterapiassa. Nat Rev Immunol 2018;18:635–47.
2 Ahrends T, Busselaar J, Severson TM, et ai. Cd4+ T-solut auttavat luomaan muisti-CD8+ T-soluja, joilla on synnynnäinen ja avusta riippumaton palautuskyky. Nat Commun 2019;10:5531.
3 Ahrends T, Spanjaard A, Pilzecker B, et ai. CD4+ t-solut auttavat aikaansaamaan sytotoksisen t-soluefektoriohjelman, joka sisältää rinnakkaisinhibitorin reseptorin heikkenemisen ja lisääntyneen kudosten invasiivisuuden. Immunity 2017; 47:848–61.
4 Schenkel JM, Fraser KA, Beura LK, et ai. T-solumuisti. pysyvä muisti CD8 T-solut laukaisevat suojaavia synnynnäisiä ja adaptiivisia immuunivasteita. Tiede 2014; 346:98–101.
5 Ariotti S, Hogenbirk MA, Dijkgraaf FE, et ai. T-solumuisti. ihon muistin cd8+t-solut laukaisevat kudoksen laajuisen patogeenivaroituksen. Tiede 2014; 346:101–5.
6 Rosato PC, Wijeyesinghe S, Stolley JM, et ai. Virusspesifiset muisti-t-solut kantavat kasvaimia ja niitä voidaan käyttää uudelleen kasvainten immunoterapiaa varten. Nat Commun 2019;10:567.
7 Çuburu N, Bialkowski L, Pontejo SM, et ai. Sytomegalovirusimmuniteetin hyödyntäminen paikallisessa immunoterapiassa kiinteitä kasvaimia vastaan. Proc Natl Acad Sci USA 2022;119:e2116738119.
8 Gromeier M, Lachmann S, Rosenfeld MR, et ai. Geneeriset poliovirusrekombinantit pahanlaatuisen gliooman hoitoon. Proc Natl Acad Sci USA 2000;97:6803–8.
9 Desjardins A, Gromeier M, Herndon JE 2nd, et ai. Rekombinantilla polioviruksella hoidettu toistuva glioblastooma. N Engl J Med 2018;379:150–61.
10 Beasley GM, Nair SK, Farrow NE, et ai. Vaiheen I tutkimus intratumoraalisesta PVSRIPO:sta potilailla, joilla on ei-leikkauskelpoinen, hoitoon reagoimaton melanooma. J Immunother Cancer 2021;9:e002203.
11 Beasley GM, Brown MC, Farrow NE, et ai. Multimodaalisuusanalyysi antaa prognostisen hyödyn T-solujen infiltroituneesta kasvainmikroympäristöstä ja perifeerisen immuunijärjestelmän tilasta melanoomapotilailla. J Immunother Cancer 2022;10:e005052.
12 Brown MC, Mosaheb MM, Mohme M, et ai. Kasvaimen mikroympäristössä olevien solujen virusinfektio välittää kasvainten vastaista immunoterapiaa selektiivisen tbk1-irf3-signaloinnin kautta. Nat Commun 2021;12:1858.
13 Brown MC, Holl EK, Boczkowski D, et ai. Syövän immunoterapia rekombinantilla polioviruksella indusoi dendriittisolujen ja kasvainantigeenispesifisten CTL-solujen IFN-dominoivan aktivaation. Sci Transl Med 2017;9:eaan4220.
14 Holl EK, Brown MC, Boczkowski D, et ai. Rekombinantilla onkolyyttisellä polioviruksella, PVSRIPO:lla, on voimakkaita sytotoksisia ja synnynnäisiä tulehdusvaikutuksia, ja se välittää hoitoa ihmisen rinta- ja eturauhassyövän ksenograftimalleissa. Oncotarget 2016; 7:79828–41.
15 Yang Y, Brown MC, Zhang G, et ai. Polioviroterapia kohdistuu pahanlaatuiseen gliooman myelooiseen infiltraatioon diffuusilla mikrogliaaktivaatiolla, joka peittää keskushermoston. Neuro Oncol 2023:noad052.
16 Brown MC, Bryant JD, Dobrikova EY, et ai. Viruksen, 7-metyyliguanosiinikapselista riippumattoman translaation ja onkolyysin induktio mitogeenin aktivoiman proteiinikinaasin kanssa vuorovaikutteisen kinaasivälitteisen vaikutuksen avulla seriini/arginiinirikkaaseen proteiinikinaasiin. J Virol 2014;88:13135–48.
17 Hawken J, Troy SB. Adjuvantit ja inaktivoitu poliorokote: systemaattinen katsaus. Rokote 2012;30:6971–9.
18 Swain SL. Polarisoitujen th1- ja th2-muistisolujen syntyminen ja pysyvyys in vivo. Immunity 1994;1:543–52.
19 Mosaheb MMet al. Geneettisesti vakaat poliovirusvektorit aktivoivat dendriittisoluja ja luovat antituumori-CD8-T-soluimmuniteetin. Nat Commun 2020;11:524.
20 Blanchard C, Rothenberg ME. Eosinofiilien biologia. Adv Immunol 2009;101:81-121.
21 Mittrücker HW, Matsuyama T, Grossman A, et ai. Vaatimus transkriptiotekijälle lsirf/irf4 kypsän b- ja t-lymfosyyttien toiminnalle. Science 1997;275:540–3.
22 Groeneveldt C, Kinderman P, van Stigt Thans JJC, et ai. Ennalta indusoitu reovirusspesifinen t-soluimmuniteetti lisää reovirushoidon syövänvastaista tehoa. J Immunother Cancer 2022;10:e004464.
23 Selvanesan BCet al. Listeria toimittaa tetanustoksoidiproteiinia haiman kasvaimiin ja indusoi syöpäsolukuolemaa hiirissä. Sci Transl Med 2022;14:eabc1600.
24 Tähtinen S, Feola S, Capasso C, et ai. Hyödynnetään olemassa olevaa immuniteettia onkolyyttisen syövän immunoterapian tehostamiseksi. Cancer Res 2020;80:2575–85.
25 Cachot A, Bilous M, Liu YC, et ai. Kasvainspesifiset sytolyyttiset cd4 t -solut välittävät immuniteettia ihmisen syöpää vastaan. Sci Adv 2021;7:eabe3348.
26 Oh DY, Kwek SS, Raju SS, et ai. Intratumoraaliset cd4+ t-solut välittävät kasvainten vastaista sytotoksisuutta ihmisen virtsarakon syövässä. Cell 2020; 181:1612–25. 27 Quezada SA, Simpson TR, Peggs KS, et ai. Kasvainreaktiiviset CD4 (+) T-solut kehittävät sytotoksista aktiivisuutta ja hävittävät suuren vakiintuneen melanooman siirrettyään lymfopenisiin isäntiin. J Exp Med 2010; 207:637–50.
28 Perez-Diez A, Joncker NT, Choi K, et ai. Cd4-solut voivat olla tehokkaampia kasvaimen hylkimisessä kuin CD8-solut. Blood 2007; 109:5346–54.
29 Corthay A, Skovseth DK, Lundin KU, et ai. CD4+ T-solujen välittämä primaarinen antituumori immuunivaste. Immunity 2005;22:371–83.
30 Church SE, Jensen SM, Antony PA, et ai. Kasvainspesifiset CD4+ T-solut ylläpitävät efektori- ja muistikasvainspesifisiä CD8+ T-soluja. Eur J Immunol 2014;44:69–79.
31 Lu Z, Yuan L, Zhou X, et ai. Cd40-T-solujen riippumattomat reitit auttavat CD8 (+) sytotoksisten T-lymfosyyttien esikäsittelyssä. J Exp Med 2000;191:541–50.
32 Hung K, Hayashi R, Lafond-Walker A, et ai. CD4 (+) T-solujen keskeinen rooli kasvainten vastaisessa immuunivasteessa. J Exp Med 1998;188:2357–68.
33 Simon SCS, Hu X, Panten J, et ai. Eosinofiilien kertyminen ennustaa vastetta melanoomahoitoon immuunitarkistuspisteen estäjillä. Onkoimmunology 2020; 9:1727116.
34 Mackensen A, Meidenbauer N, Vogl S, et ai. Vaiheen I tutkimus adoptiivisesta T-soluhoidosta, jossa käytetään antigeenispesifisiä CD8+ T-soluja metastaattisen melanooman hoitoon. J Clin Oncol 2006;24:5060–9.
35 Jacquelot N, Seillet C, Wang M, et ai. Koinhiboivan molekyylin PD-1 esto vapauttaa ILC2--riippuvaisen kasvaintenvastaisen immuniteetin melanoomassa. Nat Immunol 2021;22:851-64.
36 Blomberg OS, Spagnuolo L, Garner H, et ai. IL-5-tuottavat cd4+ t-solut ja eosinofiilit tekevät yhteistyötä tehostaakseen vastetta immuunitarkistuspisteen estoon rintasyövässä. Cancer Cell 2023; 41:106–23.
37 Thorsson V, Gibbs DL, Brown SD, et ai. Syövän immuunimaisema. Immunity 2018;48:812–30.
38 Newman AM, Steen CB, Liu CL, et ai. Solutyyppien runsauden ja ilmentymisen määrittäminen massakudoksista digitaalisella sytometrialla. Nat Biotechnol 2019;37:773–82.
39 Lloyd CM, Snelgrove RJ. Tyypin 2 immuniteetti: näkemyksemme laajentaminen. Sci Immunol 2018; 3:eaat1604.
40 Oliphant CJ, Hwang YY, Walker JA et ai. MHCII-välitteinen dialogi ryhmän 2 synnynnäisten lymfoidisolujen ja cd4(+) t -solujen välillä voimistaa tyypin 2 immuniteettia ja edistää loishelmintin karkotusta. Immunity 2014; 41:283–95.
41 Moynihan KD, Opel CF, Szeto GL ym. Suurten vakiintuneiden kasvainten hävittäminen hiiristä yhdistelmäimmunoterapialla, joka saa aikaan synnynnäisiä ja adaptiivisia immuunivasteita. Nat Med 2016; 22:1402–10.
42 Kouro T, Takatsu K. IL-5- ja eosinofiilien välittämä tulehdus: löydöstä terapiaan. Int Immunol 2009;21:1303-9.
43 Barthel FP, Johnson KC, Varn FS, et ai. Diffuusi gliooman pituussuuntaiset molekyyliradat aikuisilla. Luonto 2019; 576:112–20.
44 Alspach E, Lussier DM, Miceli AP, et ai. MHC-II-neoantigeenit muokkaavat kasvaimen immuniteettia ja vastetta immunoterapialle. Luonto 2019; 574:696–701.
45 Laidlaw BJ, Craft JE, Kaech SM. CD4 (+) T-solujen monipuolinen rooli CD8 (+) T-solumuistissa. Nat Rev Immunol 2016;16:102–11.
46 Arnold IC, Artola-Boran M, Gurtner A, et ai. Eosinofiilien GM-CSF-IRF5-signalointiakseli edistää kasvaintenvastaista immuniteettia aktivoimalla tyypin 1 T-soluvasteita. J Exp Med 2020;217:e20190706.
47 Bachmann MF, Rohrer UH, Kündig TM, et ai. Antigeeniorganisaation vaikutus B-solujen herkkyyteen. Science 1993;262:1448–51.
48 Link A, Zabel F, Schnetzler Y et ai. Luontainen immuniteetti välittää hiukkasmaisten mutta ei liukenevien proteiiniantigeenien follikulaarista kuljetusta. J Immunol 2012;188:3724-33.
49 Trabanelli S, Chevalier MF, Derré L, et ai. ILC2:n kasvaimia estävä ja anti-rooli. Semin Immunol 2019;41:101276.
50 Simon SCS, Utikal J, Umansky V. Eosinofiilien vastakkaiset roolit syövässä. Cancer Immunol Immunother 2019; 68:823–33.
51 Lloyd CM, Hessel EM. T-solujen toiminnot astmassa: enemmän kuin vain T (H) 2 -soluja. Nat Rev Immunol 2010;10:838–48.
52 Smith SG, Chen R, Kjarsgaard M, et ai. Lisääntynyt aktivoituneiden ryhmän 2 synnynnäisten lymfoidisolujen määrä potilaiden hengitysteissä, joilla on vaikea astma ja jatkuva hengitysteiden eosinofilia. J Allergy Clin Immunol 2016; 137:75–86.
53 Moral JA, Leung J, Rojas LA, et ai. Ilc2S vahvistaa PD-1-salpausta aktivoimalla kudosspesifistä syöpäimmuniteettia. Luonto 2020; 579:130–5.
54 Huang Z, Wu L, Hou Z, et ai. Eosinofiilit ja muut perifeerisen veren biomarkkerit gliooman luokittelussa: alustava tutkimus. BMC Neurol 2019; 19:313.
55 Ostrom QT, Lu D, Lu R, et ai. Autoimmuniteetin ja atopian esiintyvyys yhdysvaltalaisilla aikuisilla, joilla on glioblastooma ja meningiooma. Neuro Oncol 2022;24:1807–9.
56 Tuzlak S, Dejean AS, Iannakone M, et ai. Solupolarisaation siirtäminen yksittäisistä sytokiineista komplekseihin auttaa. Nat Immunol 2021;22:1210–7.
57 Nishimura T, Iwakabe K, Sekimoto M, et ai. Antigeenispesifisten T-auttajatyyppi 1 (Th1)- ja Th2-solujen selkeä rooli kasvaimen hävittämisessä in vivo. J Exp Med 1999;190:617–27.
58 Lorvik KB, Hammarström C, Fauskanger M, et ai. Kasvainspesifisten Th2-solujen siirto tuhoaa kasvaimet laukaisemalla in situ tulehduksellisen immuunivasteen. Cancer Res 2016;76:6864–76.
59 Vonderheide RH. Cd40-agonistivasta-aineet syövän immunoterapiassa. Annu Rev Med 2020;71:47–58. 60 Ott PA, Hu Z, Keskin DB, et ai. Immunogeeninen henkilökohtainen neoantigeenirokote melanoomapotilaille. Luonto 2017; 547:217–21.
