Ihmisen amnioottiset mesenkymaaliset kantasolut lievittävät AGVHD:tä Allo-HSCT:n jälkeen säätelemällä suoliston mikrobiotan ja suoliston immuniteetin välisiä vuorovaikutuksia

Abstrakti

Akuutti graft versus-host -sairaus (aGVHD) allogeenisen hematopoieettisen kantasolusiirron jälkeen on yksi kiusallisimmista haasteista. Suoliston mikrobiota dysbioosi voi edetä aGVHD: n kanssa, ja mesenkymaalisilla kantasoluilla (MSC) on lupaava terapeuttinen potentiaali aGVHD: lle. Kuitenkin, vaikuttavatko hAMSC:t suoliston mikrobiotaan aGVHD:n lieventämisen aikana, ei tiedetä. Näin ollen pyrimme määrittelemään ihmisen amnionkalvosta peräisin olevien MSC:iden (hAMSC) vaikutukset ja taustalla olevat mekanismit, jotka säätelevät suoliston mikrobiota ja suoliston immuniteettia aGVHD: ssä. Perustamalla humanisoituja aGVHD-hiirimalleja ja hAMSC-hoitoa havaitsimme, että hAMSC:t paransivat merkittävästi aGVHD-oireita, käänsivät T-solualaryhmien ja sytokiinien immuuni epätasapainon ja palauttivat suolistoesteen. Lisäksi suoliston mikrobiotan monimuotoisuus ja koostumus paranivat hAMSC-hoidolla. Spearmanin korrelaatioanalyysi osoitti, että suoliston mikrobiotan ja tiukan liitoksen proteiinien, immuunisolujen ja sytokiinien välillä oli korrelaatio. Tutkimuksemme ehdotti, että hAMSC:t lievittivät aGVHD:tä edistämällä suoliston mikrobiotan normalisoitumista ja säätelemällä suoliston mikrobiotan ja suoliston esteen eli immuniteetin välisiä vuorovaikutuksia.

cistanche-edut miehille - vahvistavat immuunijärjestelmää

Avainsanat

Akuutti graft-versus-host -sairaus · Lapsivesien mesenkymaaliset kantasolut · Suoliston mikrobisto · Suolistoeste · Suoliston immuniteetti

Johdanto

Allogeenisen hematopoieettisen kantasolusiirron (allo-HSCT) ensisijainen etu on voimakas kasvainten vastainen vaste, joka johtuu graft-versus-leukemia (GVL) -vaikutuksesta, jonka laukaisee peptidien tunnistaminen, jotka johtuvat eroista potilaan ja potilaan genomissa polymorfismissa. luovuttaja. Akuutti graft versus-host -sairaus (aGVHD) kuitenkin pyörii vastaanottajan kudosvaurion kehittymisen ympärillä allo-reaktiivisten luovuttajien T-solujen hyökkäyksen vuoksi, ja se on hengenvaarallinen suuri komplikaatio alloHSCT:ssä [1, 2]. Suoliston mikrobisairauden on raportoitu aiheuttavan tulehdusvasteita ja korreloivan tulehdukseen liittyvien sairauksien kanssa [3, 4]. Lukuisat tutkimukset ovat osoittaneet, että häiriöt suoliston mikrobiotassa ovat olennainen tekijä, joka laukaisee aGVHD:n allo-HSCT:n jälkeen, ja niistä tulee uusi hoitokohde [5, 6]. Erityisesti suoliston mikrobiotan dysbioosille aGVHD:ssä on yleensä tunnusomaista suoliston bakteerien monimuotoisuuden menetys ja opportunististen patogeenien lisääntyminen [6]. Ruoansulatuskanavan GVHD:ssä vaarantunut limakalvoeste käynnistää isäntäantigeeniä esittelevien solujen ja luovuttajan T-solujen aktivaation, mikä huipentuu T-solujen erilaistumiseen patogeenisen tyypin-1 ja tyypin-17 paradigmojen mukaan tolerogeenisten säätely-T-solujen kustannuksella. solukuviot [7]. Ensisijaisesti 16S ribosomaalisen RNA:n (16S rRNA) sekvensointi osoitti, että GVHD:hen on liittynyt useita suolen mikrobiotalajeja, ja esimerkiksi butyraattia tuottavat klostridit liittyvät epiteelin estetoiminnan ylläpitämiseen ja akuutin GVHD:n heikkenemiseen [8 ]. Mesenkymaaliset kantasolut (MSC:t) ovat saaneet suurta huomiota viimeisen vuosikymmenen aikana niiden itsensä uusiutumisen ja monilinjaisen erilaistumispotentiaalin sekä immunomoduloivien ominaisuuksien vuoksi [9]. MSC:iden uskotaan mahdollistavan vaurioituneita kudoksia tasapainoisista tulehduksellisista ja regeneratiivisista mikroympäristöistä voimakkaan tulehduksen läsnä ollessa, ja niitä on käytetty laajalti immuunipohjaisten sairauksien hoidossa, joissa menestyksekkäin kliininen sovellus liittyy GVHD-hoitoon [10]. Ihmisen amnion mesenkymaaliset kantasolut (hAMSC) ovat perinataalisia kantasoluja, joilla on alkion kantasolujen kaltainen erilaistumiskyky ja aikuisen kantasolun kaltaiset immunomodulatoriset ominaisuudet. HAMSC:istä, joilla on samanlaisia ​​fenotyyppejä kuin tyypillisiä MSC:itä, on tullut lupaava kantasolujen lähde kudosten hankinnan helpon, ei-invasiivisen ja turvallisuuden, runsaan solusaannon ja erittäin alhaisten eettisten ja moraalisten kiistojen vuoksi verrattuna muista lähteistä peräisin oleviin kantasoluihin. Ihmisen AMSC:iden etuna on alhainen immunogeenisyys ja ei tuumorigeenisyyttä, mikä tekee niistä ihanteellisen solulähteen soluterapiaan [11, 12]. In vitro -kokeet ovat vahvistaneet, että hAMSC:illä oli suurempi proliferaatiokyky ja suurempi pitkän aikavälin kasvukyky kuin luuytimestä johdetuilla MSC:illä [13, 14]. Lukuisat tutkimukset ovat osoittaneet, että hAMSC:illä on potentiaalia parantaa monia tulehdussairauksia, mukaan lukien tulehduksellinen suolistosairaus, nivelrikko ja autoimmuunisairaus [11]. Äskettäinen tutkimuksemme on osoittanut, että hAMSC:t paransivat aGVHD:tä säätelemällä T-efektori- ja Treg-solujen tasapainoa [15]. HAMSC:iden vaikutusta ja mekanismia suoliston mikrobisairauteen GVHD:ssä ei kuitenkaan tunneta. Tässä pyrimme tutkimaan hAMSC:iden mahdollista vaikutusta aGVHD:hen sekä suoliston mikroekosysteemiin. Se olisi ensimmäinen tutkimus, joka paljastaisi suoliston mikrobiotan ja sen korrelaation suoliston immuniteetin kanssa aGVHD:n hAMSC-hoidon jälkeen.

Materiaalit ja menetelmät

HAMSC:iden eristäminen, viljely ja tunnistaminen

hAMSC:t uutettiin aiemmin kuvatulla tavalla [15]. Kolmannen passauksen (P3) solut kerättiin fenotyypin tunnistamisesta värjäämällä vasta-aineilla CD34:ää (581, BD Pharmingen, USA), CD45:tä (HI30, BD Pharmingen, USA), HLA-DR:ää (G46-6, BD Pharmingen) vastaan. , USA), CD11b (ICRF44, BD Pharmingen, USA), CD90 (5E10, BD Pharmingen, USA), CD73 (AD2, BD Pharmingen, USA) ja CD105 (SN6, biotiede, USA) ja analysoitiin sitten virtaussytometrillä ( BD FACS Canto II). Solut tarkastettiin niiden monilinjaisen erilaistumisen suhteen käyttämällä spesifistä induktioväliainetta (BGscience, Kiina) ja värjättiin Oil Red-O:lla ja Alizarin Redillä vastaavasti adipogeneesin ja osteogeenisen erilaistumisen varalta. Kokeissa käytettiin kohdissa 3 - 6 olevia hAMSC:itä.

cistanche tubulosa - parantaa immuunijärjestelmää

Ihmisen PBMC-kokoelma

Plasmanäytteet hankittiin terveiltä vapaaehtoisilta kirjallisella suostumuksella. Ihmisen perifeerisen veren mononukleaarisolut (PBMC:t) eristettiin ääreisverestä Ficoll-Hypaque (Tianjin Haoyang, Kiina) tiheyssentrifugoinnilla, pestiin PBS:llä, suspendoitiin punaisen veren lyysipuskuriin (Solarbio, Kiina) 4 asteessa 15 minuutin ajan. Pese uudelleen ja suspendoi sitten PBS:ään häntälaskimoinjektiota varten NPG-hiiriin.

Hiiret

8–10 viikon ikäiset ja 25–30 g:n uros- ja naaraspuoliset NPG-hiiret ostettiin Beijing Vitalstar Biotechnology Co., Ltd.:ltä ja niitä kasvatettiin SPF-olosuhteissa 12 tunnin valo-pimeäsyklissä vakiolämpötilassa ja kosteudessa. Kaikki eläintoimenpiteet hyväksyttiin Eteläisen lääketieteellisen yliopiston Institutional Animal Care and Use -komitean (nro L2019132) toimesta Kiinan kansallisen terveys- ja lääketieteellisen tutkimusneuvoston eläinkokeita koskevien ohjeiden mukaisesti.

Akuutti GVHD-eläinmalli ja hoito

aGVHD-hiirimalli perustettiin aiemmin kuvatulla tavalla [15]. Hoitoa varten 5 x 105 hAMSC:tä hiirtä kohden (tässä hAMSCs-ryhmä) ja PBS:ää (tässä aGVHD-ryhmä) injektoitiin häntälaskimon kautta jokaiseen hiireen kolmantena päivänä transplantaation jälkeen. Kaikissa hiirimalleissa hiiret tarkastettiin kahden päivän välein sairastuvuuden ja painon muutosten varalta. Jokaisesta hiirestä pisteytettiin patologisia piirteitä, mukaan lukien painonpudotus, kumartunut asento, ryppyinen turkki, ihovauriot, alentunut liikkuvuus ja ripuli, ja sitten ne luokiteltiin kliinisen aGVHD-pisteytysjärjestelmän mukaan, joka oli mukautettu Cooken alun perin kuvaamasta järjestelmästä [16]. Joissakin tapauksissa aGVHD-ryhmän hiiret kärsivät vaikeasta aGVHD:stä, ja hAMSC-ryhmän hiiret tapettiin kolmantena päivänä hoidon jälkeen perifeerisen veren ja kohde-elinten, mukaan lukien maksan, pernan, keuhkojen ja suolet, keräämiseksi. Näiden hiirten ulosteet kerättiin ennen lopettamista.

GFP-leimatut hAMSC:t ja in vivo -jäljitys

GFP-leimatut hAMSC:t perustettiin ja tunnistettiin aiemmin kuvatulla tavalla [15]. Lyhyesti sanottuna transfektoimme vihreän fluoresenssiproteiinin (GFP) geenin hAMSC:ihin lentivirus vektorina. 5 x 105 GFP-leimattua hAMSC:tä, jotka oli suspendoitu 500 µl:aan PBS:ää, injektoitiin aGVHD-hiiriin häntälaskimon kautta. 24 tunnin ja 72 tunnin kuluttua hiiret lopetettiin suolen keräämiseksi ja sitten luotiin jäädytetyt leikkeet. DAPI-vastavärjäystä käytettiin vastaanottajasolujen erottamiseen.

Histopatologinen arviointi

AGVHD-kohde-elimet kerättiin ruumiinavauksen yhteydessä ja prosessoitiin sitten parafiiniin upotetuiksi lohkoiksi 5-μm:n paksuisten osien muodostamiseksi hematoksyliini- ja eosiinivärjäystä (H&E) varten. Histologiset pisteet arvioitiin kudosrakenteen tuhoutumisen ja lymfosyyttien infiltraation perusteella [17]. Immunohistokemiaa varten leikkeet deparafnisoitiin, hydratoitiin uudelleen ja käsiteltiin 3-prosenttisella H202:lla metanolissa 20 minuutin ajan endogeenisen peroksidaasiaktiivisuuden inaktivoimiseksi. Sitten leikkeille suoritettiin antigeenin haku ja niitä käsiteltiin seerumialbumiinilla 1 tunnin ajan. Tämän jälkeen leikkeitä inkuboitiin kanin anti-ihmis-CD45-vasta-aineiden (EP322Y, Abcam, Englanti) tai ZO-1-vasta-aineiden ((EPR19945-296, Abcam, Englanti) kanssa 1 tunnin ajan 37 asteessa. vasta-aineet havaittiin HRP-konjugoidulla sekundaarisella vasta-aineella (Genentech, USA) ja visualisoitiin DAB:lla. Positiivinen alue analysoitiin Image J:llä.

cistanche-kasveja lisäävä immuunijärjestelmä

Ulosteen mikrobiotan 16S-rRNA-sekvensointi

Ulosteen genominen DNA uutettiin 0,1 g jäädytetyistä ulostenäytteistä käyttämällä EZNA®-jakkara-DNA -sarjaa (Omega BioTek, Norcross, GA, US) valmistajan ohjeiden mukaisesti. Genomista DNA:ta käyttäen templaattina käytettiin spesifisiä alukkeita (338F: 5'-ACTCCTACGGGAGGCAGCA-3' ja 806R: 5'-GGACTACHVGGGTWTCTAAT-3') viivakoodeilla ja PremixTaq) (TaKaampl, Kiina). bakteerin 16S-rRNA-geenin V3-V4-hypervariaabelit alueet. Monistamisen ja puhdistuksen jälkeen Magigene Technology Co., Ltd. (Guangzhou, Kiina) sekvensoi näytteen koko genomi Illumina Hiseq- tai Miseq-sekvensointialustalla (Guangzhou, Kiina) raakadatan saamiseksi FASTQ-muodossa. Sekvenssitietojen analyysit suoritettiin pääosin Magichand-alustalla.

Virtaussytometrinen analyysi

Hiirten aGVHD-kohde-elimet ja perifeerinen veri saatiin ja niistä valmistettiin yksisolususpensio. Solut värjättiin monoklonaalisilla vasta-aineilla CD3 (UCHT1, Biolegend, USA), CD4 (RPA-T4, Invitrogen, USA), CD8 (RPA-T8, Biolegend, USA), CD25 (BC96, Biolegend, USA) tai isotyyppisovitetuilla vasta-aineilla. kontrolloida IgG:tä (eBioscience, USA) 30 minuuttia huoneenlämmössä pimeässä. Sitten soluja käsiteltiin Lysing Bufferilla (BD Pharm Lyse™) 4 asteessa pimeässä 15 minuuttia. Solunsisäinen Foxp3 (236A/E7, Invitrogen, USA) värjäys suoritettiin valmistajan suositusten mukaisesti (Fixation/Permeabilization Solution Kit; eBioscience). Sitten suoritettiin polykromaattiset virtaussytometriset analyysit virtaussytometrillä.

Sytokiinien kvantitointi

Sytokiinien tasot hiirten seerumissa ja kudossupernatantissa määritettiin käyttämällä Cytometric Bead Array (CBA) -humaani Th1/Th2/Th17 sytokiinipakkausta (BD Pharmingen, USA) valmistajan ohjeiden mukaisesti. Lyhyesti sanottuna 50 µl kutakin supernatanttinäytettä inkuboitiin 50 µl:n sekoitettua ihmisen Th1/Th2/Th17 sytokiinin sieppaushelmiä ja 50 µl:n ihmisen Th1/Th2/Th17 PE-detektioreagenssia huoneenlämmössä pimeässä, minkä jälkeen se suspendoitiin. virtaussytometria-analyysiä varten 3 tuntia myöhemmin.

Kvantitatiivinen reaaliaikainen PCR

Kokonais-RNA uutettiin hiiren paksusuolen kudoksesta eristyksen jälkeen käyttämällä Trizol-reagenssia (TaKaRa, Kiina). Kokonais-RNA:ta käytettiin templaattina cDNA:n käänteiskopioimiseksi. -aktiinia käytettiin sisäisenä referenssinä. mRNA:n ilmentyminen mitattiin qPCR:llä käyttämällä seuraavia alukkeita: ZO-1-F, 5'-ACCCACCAACCCGAGAAGAC-3' ja ZO- 1-R, 5'-CAGGAGTCATGGACGCACA-3 '; Occludin-F, 5'-TTGAAAGTCCACCTCCTTACAGA-3' ja OccludinR, 5'-CCGGATAAAAAGAGTACGCTGG-3'; -aktiini-F, 5'-GGCTGTATTCCCCTCCATCG-3' ja -aktiini-R, 5'-CCAGTTGGTAACAATGCCATGT-3'. RNA:n ilmentymistasojen mittaamiseen käytettiin 2-ct-menetelmää.

Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA)

Plasman D-LA- ja DAO-tasot mitattiin ELISA-sarjoilla (Jingmei, Kiina) valmistajan ohjeiden mukaisesti. Lyhyesti sanottuna kerätyt plasmasupernatantit laitettiin vastaavasti 96-kuoppaspesifisille vasta-ainepäällysteisille levyille. Absorbanssi rekisteröitiin aallonpituudella 450 nm käyttämällä mikrolevylukijaa (Multiskan MK3, Thermo Fisher Scientific).

Tilastollinen analyysi

Tiedot esitettiin keskiarvona ± SD. Riippumattomien näytteiden t-testi suoritettiin ja visualisoitiin GraphPad Prism8:lla.0. 16S rRNA:n sekvensointidataanalyysit suoritettiin Magichand-alustaa (http://cloud.magigenefi/). Suoliston mikrobiotan ja immuniteetin välinen korrelaatioanalyysi suoritettiin R-pakettien (v3.6.3) avulla korrelaatiomatriisin näyttämiseksi. P-arvot<0.05 were considered statistically significant. * p<0.05, ** p<0.01, *** p<0.001, **** p<0.0001, n.s. not signifcant.

Tulokset

HAMSC:iden tunnistaminen

hAMSC:t osoittivat polygonin tai fibroblastin kaltaista morfologiaa viljelmässä (kuvio 1A) ja olivat vahvasti positiivisia MSC-spesifisten markkerien CD90, CD105 ja CD73 pinnalla ilmentymisen suhteen, mutta negatiiviset CD34:n, CD45:n, HLA-DR:n ja CD11b:n suhteen (kuvio 1A) 1C). Mitä tulee monilinjaiseen erilaistumiseen, tuloksemme osoittivat, että hAMSC:t osoittivat adiposyyttistä ja osteoblastista erilaistumista (kuvio 1B).

hAMSC:t lievittivät merkittävästi aGVHD-oireita hiirillä

Arvioimme ensin hAMSC:iden terapeuttisen vaikutuksen aGVHD:hen. Verrattuna aGVHD-ryhmään, hAMSC:t paransivat merkittävästi aGVHD:tä, mistä on osoituksena huomattavasti vähentynyt painonpudotus (kuvio 2B) ja alentunut kliininen aGVHD-pistemäärä (kuvio 2C). Lisäksi hAMSCs-ryhmällä oli merkittävästi korkeampi eloonjäämisaste verrattuna aGVHD-hiiriin (kuvio 2D). Patologinen histologinen analyysi osoitti, että aGVHD aiheutti vakavia kudosvaurioita ja leukosyyttien infiltraatiota. hAMSC:t, kuten H&E osoitti, heikensivät kudosten hajoamista ja eksogeenisten T-solujen infiltraatiota aGVHD-kohde-elimissä (kuvio 2E). Johdonmukaisesti IHC:n tulokset vahvistivat myös, että hAMSC:t paransivat epänormaaleja patologisia ilmenemismuotoja (kuvio 2F). Nämä tulokset viittasivat siihen, että hAMSC:illä oli potentiaalia parantaa aGVHD-oireita aGVHD-hiirissä.

hAMSC:t vaikuttivat isännän immuniteettiin aGVHD-hiirissä

Ymmärtääksemme taustalla olevia immunomodulatorisia mekanismeja, joilla hAMSC:t vähentävät aGVHD:tä, mittasimme T-solujen aktivoitumisen ja laajentumisen ääreisveressä ja kohde-elimissä. Virtaussytometrinen määritys paljasti, että hAMSC:t estivät merkittävästi CD3+CD4+T- ja CD3+CD8+T-solujen määrää veressä ja kohde-elimissä (kuva 3A, B). Lisäksi CD4+CD25+Foxp3+Tregien osuus hAMSC-ryhmän hiirten veressä ja kohde-elimissä oli merkittävästi suurempi kuin aGVHD-ryhmässä (kuva 3C). . Seuraavaksi tutkimme hAMSC:iden vaikutusta sytokiiniprofiiliin (kuvio 4). hAMSC:iden antaminen johti selkeään laskuun IL-17A-, IFN-, TNF-, IL-6- ja IL-2-tasoissa kohde-elimissä ja veressä verrattuna aGVHD-ryhmään, paitsi TNF-taso pernassa. Tällä välin maksan IL-10-tasojen lisäksi hAMSC-hoitohiirillä havaittiin huomattavasti kohonneita IL-10- ja IL-4-tasoja kohde-elimissä ja veressä. Kaiken kaikkiaan hAMSC:illä oli suojaava rooli aGVHD:ssä kääntämällä T-solualaryhmien immuuni epätasapainoa ja sytokiinimyrskyä.

Cistanche tubulosan edut- vahvistaa immuunijärjestelmää

Napsauta tästä nähdäksesi Cistanche Enhance Immunity -tuotteet

【Kysy lisää】 Sähköposti:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

hAMSCs paransi suoliston estevaurioita aGVHD-hiirissä

Tutkiaksemme, voisivatko hAMSC:t korjata suolistoesteen aGVHD:ssä, havaitsimme ensin, voisivatko hAMSC:t siirtyä suolistoon. Kuten kuviossa 5A esitetään, GFP-leimatut hAMSC:t havaittiin suolistossa hAMSC-soluihin injektion jälkeen, ja ne voivat juurtua ja tunkeutua suolistoihin. Sitten suunnittelimme ohutsuolen kudoksen histopatologisen arvioinnin. AGVHD-ryhmässä suolisto oli kulunut ja nekroottinen, suolen villit olivat selvästi tuhoutuneet, villit murtuneet ja massiiviset leukosyytit tunkeutuivat suolen limakalvoon, submukoosiin ja lamina propriaan. Suolistovilkut järjestyivät säännöllisesti, eikä suolen villuksen katkeamista tai villoisen epiteelin irtoamista esiintynyt hAMSC-hoidon jälkeen (kuvio 5B). Ihmisen lymfosyyttien infiltraatio havaittiin myös immunohistokemian avulla suolistossa aGVHD-ryhmässä, kun taas hAMSC-hoito saattoi vähentää niiden infiltraatiota (kuvio 5C). Arvioidaksemme hAMSC:iden suojaavaa vaikutusta suolen limakalvon eheyteen suoritimme immunohistokemian havaitaksemme vaikutuksen ZO-1. hAMSCs-hoitoryhmässä tiukan liitosproteiinin ZO-1 ilmentymistaso kasvoi merkittävästi verrattuna aGVHD-ryhmään (kuvio 5D). Tutkimme myös suoliston tiiviiden liitosproteiinien (TJ) mRNA:n ilmentymistasoja sekä D-maitohapon (D-LA) ja diamiinioksidaasin (DAO) plasmatasoja suoliston estetoiminnan ja suoliston läpäisevyyden määrittämiseksi. Suonensisäisesti annettaessa hMASC:t voivat lisätä merkittävästi TJ:iden tärkeimpien proteiinien ZO-1 ja Occludinin mRNA:n ilmentymistasoja (kuvat 5E, F) ja samalla vähentää D-LA:n ja DAO:n tasoja (kuvio 5G, H). Näin ollen, kun aGVHD tapahtui, suolistoeste vaurioitui suoliston tiukan liitoksen proteiinien vähentyessä ja suolen läpäisevyyden lisääntyessä. Samaan aikaan hAMCS:t voivat merkittävästi kääntää suolistoesteen häiriön.

Kuva 1 HAMSC:iden fenotyyppinen ja toiminnallinen karakterisointi. (A) Edustavat mikrokuvat hAMSC:istä siirrosta 0 3:een (ei värjäytymistä, 100×). (B) HAM SC:iden monilinjainen erilaistumiskyky. HAMSC:iden adipogeeninen erilaistuminen (vasemmalla) värjättiin Oil Red-O:lla ja hAMSC:iden osteoblastinen erilaistuminen (oikealla) värjättiin Alizarin Redillä (värjäys, 100x). (C) Virtaussytometrinen analyysi, joka osoittaa hAMSC:t positiivisen CD90:lle, CD105:lle ja CD73:lle, kun taas negatiivisiksi CD34:lle, CD45:lle, CD11b:lle ja HLA-DR:lle

Kuvio 2 hAMSC:t lievittivät aGVHD:tä NPG-hiirissä. (A) Kaaviokaavio, joka havainnollistaa hAMSC:iden antoaikataulua aGVHD-hiirimalleissa. (B) Kehon painon muutokset eri ryhmissä (n=10). (C) aGVHD:n kliininen pistemäärä (perustuu painonpudotukseen, kumartuneeseen asentoon, ryppyiseen turkkiin, ihovaurioihin, alentuneeseen liikkuvuuteen ja ripuliin) eri ryhmissä (n=10). (D) Eloonjääminen eri ryhmien kesken (n=10). (E) Edustavia mikroskooppisia kuvia H&E-värjäyksestä (400×) ja histologisista pisteistä (perustuu kudosrakenteen tuhoutumiseen ja lymfosyyttien infltaatioon) (n=4). (F) Edustavia mikroskooppisia kuvia immunohistokemiasta (400×) ja CD45-positiivisen alueen osuudesta (n=4). Arvot esitettiin keskiarvona ± SD

Kuvio 3 hAMSC:t estivät luovuttajan T-solujen lisääntymistä samalla kun tehostivat Treg-solujen muodostumista tai laajenemista in vivo. (A) CD3+CD4+T-solujen (n=6) virtaussytometrinen analyysi, (B) CD3+CD8+ virtaussytometria-analyysi T-solut(n=6), (C) CD4+CD25+Foxp3+Treg-solujen (n=6) virtaussytometrinen analyysi. Arvot esitettiin keskiarvona ± SD

Kuva 4 hAMSC:t vähensivät tulehdusta edistäviä sytokiineja IL-17A, IFN-, TNF, IL-6, IL-2 ja lisäsään anti-inflammatorisia sytokiineja IL-10 ja IL -4 in vivo (n=5). Arvot esitettiin keskiarvona ± SD

Suoliston mikrobiotan vaihdot hAMSC-hoidon jälkeen aGVHD-hiirissä

16S-rRNA-sekvensointi suoritettiin ulostebakteeri-DNA:ssa, joka oli eristetty eri hiiriryhmistä. Monimuotoisuusindeksit, mukaan lukien OUT-, Chao1- ja Shannon-indeksit, osoittivat samanlaisia ​​taipumuksia, ja hAMSCs-hoitohiirillä oli mikrobiota, jonka monimuotoisuus oli huomattavasti suurempi kuin aGVHD-ryhmän (kuvio 6A). Pääkoordinaattianalyysi (PCoA), joka perustuu painotettuun unifrac-etäisyyteen, Manhattanin etäisyyteen ja Bray-Curtis -metriseen etäisyyteen, tuotti hajallaan datapisteitä kahden ryhmän tonteille, vaikka ero ei ollut merkittävä (kuva 6B). Myöhemmin arvioimme suoliston mikrobiotan maisemaa tutkiaksemme edelleen potentiaalista koostumuseroa kahden ryhmän välillä. Yhteensä 773 OTU:ta laskettiin, ja hAMSCs-ryhmällä oli korkeammat OTU:t verrattuna aGVHD-ryhmään (kuvio 6C). Bakteerikoostumuksen suhteen syrjätasolla Firmicutes ja Bacteroidetes olivat kaksi hallitsevinta syvyyttä (kuva 6D). Järjestimme myös vertailun lämpökartan suoliston mikrobiston analysoimiseksi näiden kahden ryhmän välillä (kuva 6E). Odoribacter- ja Ruminococcus-suku{11}} osoitti suhteellisen paljon hAMSC-ryhmässä, jotka ovat tärkeitä mikrobeja suoliston homeostaasin ylläpitämisessä (kuvat 6F, G). Vahvistaaksemme, mikä bakteeri oli muuttanut hAMSC-hoitoa ja joka puolestaan ​​vaikutti taudin etenemiseen aGVHD:tä vastaan, suoritimme korkean ulottuvuuden luokkavertailuja käyttämällä vaikutuskoon lineaarista erotteluanalyysiä (LEfSe), joka havaitsi merkittäviä eroja bakteeriyhteisöjen vallitsemisessa välillä. kaksi ryhmää. Kuten (Kuva 6H, I), Streptococcaceae (perhe ja suku Streptococcus), Paludibacteraceae, F0058 ja Delftia olivat tärkeimmät bakteerityypit, jotka vaikuttivat suoliston mikrobiotan dysbioosiin aGVHD-ryhmässä. Siitä huolimatta hyödylliset bakteerit Lachnospiraceae, Roseburia, Ruminococcaceae, Ruminiclostridium, Oscillibacter ja Clostridia (luokka ja luokka Clostridiales) osoittivat suhteellista rikastumista hAMSCs-ryhmässä, mikä saattaa liittyä hAMSCs-välitteiseen aGVHD:n lievitykseen. Yhteenvetona suoliston mikrobiotan monimuotoisuus ja koostumus paranivat hAMSC:n antamisen jälkeen ja liikkuivat yleisessä trendissä, joka oli hyödyllinen keholle.

cistanche tubulosa - parantaa immuunijärjestelmää

hAMSC:t säätelivät suoliston mikrobiotan ja suoliston immuniteetin välisiä vuorovaikutuksia

Suoliston mikrobiotan ja suoliston limakalvoesteen välisen mahdollisen suhteen ymmärtämiseksi TJ:iden ja suoliston mikrobiotan välisiä korrelaatioita sukutasolla analysoitiin Spearmanin korrelaatioanalyysillä. Kuten kuvasta 7 näkyy, ZO-1:n ja hyödyllisten bakteerien Ruminococcaceae_UCG.014, Muribaculum, Ruminococcus_1 ja Ruminiclostridium_9 välillä oli positiivinen yhteys. Hyödyllisten bakteerien, Roseburian, Odoribacterin, Ruminococcus_1 ja Ruminococcaceae_UCG.014 suhteellinen runsaus osoitti dramaattisesti positiivisia korrelaatioita Occludinin kanssa. Seuraavaksi suoritimme korrelaatioanalyysin suoliston mikrobiotan ja suoliston immuuniesteen välillä Spearmanin rankkorrelaatiomenetelmällä (kuva 7). Havaitsimme, että Roseburian, Muribaculumin ja Ruminococcusin _1 lisääntyminen korreloi negatiivisesti CD3 +CD4+T-solujen prosenttiosuuden kanssa. Lisäksi hyödyllisten bakteerien Ruminococcus_1 ja Ruminiclostridium _9 lisääntyminen korreloi positiivisesti Tregien prosenttiosuuden kanssa, kun taas negatiivisesti korreloi IL-17 kanssa. Lactobacilluksen ja Candidatus{16}}Arthromituksen runsaus korreloi negatiivisesti IFN- :n kanssa. Muribaculumin ja IL:n runsauden välillä oli negatiivinen korrelaatio-2. Candidatus{19}Saccharimonas-määrän kasvu ja lasku Escherichiassa. Shigellan runsaus korreloi positiivisesti IL-10-tason kanssa (kuva 7). Korrelaatioanalyysin tulokset osoittivat, että hAMSC:t paransivat isännän tulehdusympäristöä ja säätelivät suoliston homeostaasia, mikä saattaa liittyä suolen mikrobiotan modulaatioon, ja näin ollen estivät aGVHD:n.

Kuvio 5 hAMSC:t paransivat suolen esteen toimintahäiriötä aGVHD-hiirillä. (A) GFP-leimatut hAMSC:t tunkeutuivat suolistoon. (B) Edustavia mikroskooppisia kuvia suoliston H&E-värjäytymisestä (400×) ja histologisista pisteistä (perustuu kudosrakenteen tuhoutumiseen ja lymfosyyttien infiltraatioon) (n=4). (C) Edustavia mikroskooppisia kuvia suoliston immunohistokemiasta (400×) ja CD45-positiivisen alueen osuudesta (n=4). (D) Edustavia mikroskooppisia kuvia suoliston immunohistokemiasta (400×) ja ZO-1-positiivisen alueen osuudesta (n=4). (E) ZO-1 ja Occludin (n=3) mRNA:n ilmentymistasot. (F) D-LA- ja DAO-tasot plasmassa (n=4).Arvot esitettiin keskiarvona ± SD

Keskustelu

Kehittynyt mikrobianalyysi on tarjonnut uusia näkemyksiä isännän ja suoliston mikrobiotan monimutkaisista vuorovaikutuksista [18]. Suoliston mikrobiota voidaan muuttaa allo-HSCT:n jälkeen ja se liittyy läheisesti aGVHD:hen, mikä viittaa siihen, että suoliston mikrobiota voi olla uusi kohde aGVHD-hoidolle [5]. Lukuisat tutkimukset, mukaan lukien äskettäinen tutkimuksemme, ovat tutkineet ja vahvistaneet MSC:iden terapeuttista vaikutusta aGVHD:hen [15, 19, 20]. Vaikutus suoliston mikrobiotaan tänä aikana on kuitenkin epäselvä. Tässä tutkimuksessa tutkimme hAMSC:iden vaikutusta aGVHD:hen ja sen mahdollisia mekanismeja in vivo. Aiempien tutkimusten [15, 21–23] mukaisesti tuloksemme osoittivat, että hAMSC:illä on suotuisa suojaava vaikutus aGVHD:hen hiirillä, mistä ovat osoituksena heikentyneet aGVHD-oireet ja pidentynyt eloonjääminen. Osoitimme myös, että hAMSC:illä oli immunosuppressiivista vaikutusta vähentämällä luovuttajan T-solujen laajenemista samalla, kun ne tehostivat Tregin muodostumista aGVHD:ssä. Samaan aikaan hAMSC:t voivat vähentää tulehdusta edistäviä sytokiinejä ja lisätä anti-inflammatorisia sytokiinejä in vivo tulehdusreaktioiden estämiseksi. Suolistoeste, tiheä rakenne, joka koostuu suoliston epiteelisolujen yksikerroksisesta kerroksesta, säilyttää eheytensä ja estää luminaalisen mikrobiotan siirtymisen terveessä tilassa [24]. Allo-HSCT:n aikana hoitorykmentit vahingoittavat suolistoestettä, mikä on ensimmäinen askel aGVHD:n kehityksessä, koska se mahdollistaa bakteerien siirtymisen esteen yli ja johtaa suoliston immuunihomeostaasin häiriintymiseen [24, 25]. Kertyvä näyttö osoittaa, että MSC:illä on kyky korjata kudosta, minkä on osoitettu korjaavan suolistoesteen eheyttä koliittihiirillä [26]. Tiivis liitosproteiineilla, mukaan lukien ZO-1 ja Occludin, on olennainen rooli suoliston estetoiminnassa, ja suoliston mikrobiotan siirtyminen heikentyneen suolistoesteen yli aiheuttaa tulehduksen [27]. D-LA on peräisin suoliston bakteereista, ja DAO keskittyy pääasiassa suolen limakalvolle. Siten suuret plasman D-LA- ja DAO-pitoisuudet saattavat osittain heijastaa muutoksia suoliston läpäisevyydessä ja suoliston estetoiminnassa [28]. Tällä hetkellä havaitsimme, että TJ:iden ilmentymistasot nousivat dramaattisesti hAMSC:iden antamisen jälkeen, kun taas D-LA:n ja DAO:n plasmatasot laskivat merkittävästi, mikä osoittaa, että hAMSC:t voivat parantaa suoliston esteen toimintahäiriötä ja palauttaa suoliston läpäisevyyden. Suolisto on yksi niistä elimistä, joihin aGVHD vaikuttaa vakavimmin, ja tutkimukset ovat osoittaneet, että bakteerit, erityisesti suoliston mikrobiot, ovat keskeisessä asemassa aGVHD:n patogeneesissä ja kehityksessä [5, 6]. Kuten aiemmissa tutkimuksissa on raportoitu, allo HSCT -potilaiden bakteerien monimuotoisuuden menetys liittyi lisääntyneeseen kuolleisuuteen aGVHD:stä [29, 30]. Opportunististen patogeenien Enterococcus ja Proteobacteria dominointi ulosteessa on myös yhdistetty kohonneeseen GVHD:hen [6, 31]. Viime vuosikymmeninä on kiinnitetty entistä enemmän huomiota suoliston mikrobiotan ja MSC-hoidon väliseen korrelaatioon tulehdussairauksissa. MSC:iden on osoitettu parantavan nivelreuman, sepsiksen ja tulehduksellisen suolistosairauden suoliston mikrobiot-dysbioosia [32–34]. Tutkiaksemme edelleen mekanismia, jolla hAMSC:t parantavat aGVHD:tä, tutkimme hAMSC:iden vaikutusta suoliston mikrobiotaan. Nykyisessä tutkimuksessa hAMSC:iden antaminen osoitti huomattavaa vaikutusta mikrobiyhteisöjen monimuotoisuuteen verrattuna siihen, ettei siirtoa ole tehty, mikä osoittaa, että suoliston mikrobiotan runsaus voi muuttua hAMSC-hoidon jälkeen. Monimuotoisuusmittauksissa ei kuitenkaan ollut merkittävää eroa, mikä johtui mahdollisesti molempien ryhmien pienistä näytteistä tai hAMSC:iden riittämättömästä hoitosyklistä. Analyysi, jossa käytettiin vertailulämpökarttaa suvun tasoilla, osoitti, että hAMSC:iden antaminen lisäsi hyödyllisten bakteerien, Odoribacter ja Ruminococcus_1, määrää suolistofloorassa, jotka olivat lyhytketjuisten rasvahappojen (SCFA) tuottajia, joilla on anti-inflammatorisia ominaisuuksia [35]. , 36]. Taustalla olevien hallitsevien bakteerien tunnistamiseksi, jotka välitettiin hAMSC-siirron kautta, LEfSe-analyysi suoritettiin kahden ryhmän välillä. Verrattuna aGVHD-ryhmään, hAMSC-hoito lisäsi merkittävästi joidenkin tulehdusta ehkäiseviin vaikutuksiin liittyvien hyödyllisten mikrobien määrää, kuten Lachnospiraceae, Roseburia, Ruminococcaceae, Ruminiclostridium, Oscillibacter, Clostridia, joiden kaikkien kerrottiin olevan hyödyllisiä suoliston mikrobiotan tuotannossa [ SCFA:iden metaboliitti 37–42]. Siksi havainnot osoittivat, että hAMSC:n annon jälkeen suoliston mikrobiotan dysbioosi parani, mikä ilmenee hyödyllisten bakteerien parantuneena monimuotoisuuden ja lisääntyneenä suhteellisena runsautena.

Kuva 6 Suoliston mikrobiotan vaihtelut aGVHD-hiirissä. (A) -monimuotoisuuden vertailu. (B) -monimuotoisuuden vertailu. (C) Venn-kaavio OTU:sta. (D) Suhteellinen bakteerien määrä suvun tasolla. (E) Lämpökartta lajien runsaudesta suvun tasolla. (F) Odoribacter-bakteerien suhteellinen määrä suvun tasolla. (G) Ruminococcusin_1 suhteellinen runsaus suvun tasolla. (H) LEfSe-analyysiin perustuva kladogrammi. (I) LDA-pisteet laskettu aGVHD- ja hAMSCs-ryhmien välillä vaihtelevasti runsaista ominaisuuksista. (AI) n=3 hiirtä ryhmää kohden. Arvot esitettiin keskiarvona ± SD

aGVHD on monimutkainen tulehdusprosessi, joka käynnistyy suolen esteen eheyden tuhoutumisesta, jota seuraa suolen mikrobiotan ja niiden komponenttien siirtyminen. Vahinkoon liittyvien molekyylikuvioiden ja patogeeneihin liittyvien molekyylikuvioiden tunnistaminen antigeeniä esittelevien solujen toimesta indusoi tulehdusta edistävän vasteen, mukaan lukien T-solujen aktivoitumisen ja sytokiinimyrskyn, mikä pahentaa suoliston estevaurioita ja edistää aGVHD:n kehittymistä [24, 43]. Toisaalta suoliston mikrobiotalla ja mikrobiotosta johdetuilla metaboliiteilla, kuten SCFA:illa, on tärkeä rooli suoliston esteen eheyden ja suoliston homeostaasin ylläpitämisessä sekä limakalvon immuunijärjestelmän muokkaamisessa ja isännän puolustuksen tasapainottamisessa mikrobikomponenteilla ja metaboliiteilla [24, 44]. . Isännän ja suoliston mikrobiotan välinen vuorovaikutus suoliston esteessä säätelee limakalvojen ja systeemisiä immuunivasteita, ja patologisissa tiloissa voi johtaa GVHD:hen [6, 45, 46]. Se ehdotti, että suoliston mikrobiota liittyy läheisesti tiukan liitoksen proteiinien ilmentymiseen [47]. Tämä tutkimus osoitti, että TJ:iden ZO-1 ja Occludinin mRNA-ilmentyminen korreloi negatiivisesti haitallisten bakteerien suhteelliseen määrään, kun taas sillä oli positiivinen korrelaatio hyödyllisiin bakteereihin, mikä osoittaa, että suolen mikrobiota oli tärkeä suoliston eheyden ylläpitämiseksi. suoliston este. Lisäksi suoliston mikrobiota on myös erittäin tärkeä suoliston immuuniesteen ylläpitämisessä [47]. Havaitsimme, että jotkut hyödyllisistä bakteereista korreloivat negatiivisesti CD3+CD4+T-solujen prosenttiosuuden kanssa, mutta positiivisesti korreloivat Tregien prosenttiosuuden kanssa. Tässä paljastimme, että hyödylliset bakteerit, enimmäkseen SCFA-tuottajat, korreloivat negatiivisesti tulehdusta edistävien sytokiinien kanssa, mutta korreloivat positiivisesti anti-inflammatoristen sytokiinien kanssa, kun taas haitalliset bakteerit korreloivat päinvastoin. Yhteenvetona voidaan todeta, että merkittävä ero suoliston mikrobiotassa hoitojen välillä viittasi täydelliseen kuvaan suoliston mikrobiotan ja suoliston esteen eli immuniteetin välisistä vuorovaikutuksista. Kokeissamme oli vielä useita keskustelun arvoisia rajoituksia. Ensinnäkin, vaikka tutkimuksemme tutki hAMSC:ien vaikutuksia immuniteettiin, suolistoesteeseen ja suoliston mikrobiotaan aGVHD:ssä, taustalla oleva mekanismi on vielä tarkistettava lisätutkimuksessa. Toiseksi suoliston mikrobiston ehtymistä ja ulosteen mikrobiotan siirtoa tarvitaan suoliston mikrobiston, suoliston esteen ja immuniteetin välisten syy-suhteiden ratkaisemiseksi. Kolmanneksi lisätutkimukset, joissa tutkitaan hAMSC:ien vaikutusta mikrobiosta peräisin oleviin SCFA-yhdisteisiin ja muihin metaboliitteihin, ovat perusteltuja. Yhteenvetona voidaan todeta, että tutkimuksemme ehdotti, että hAMSC:t lievittivät aGVHD:tä edistämällä suoliston mikrobiotan normalisoitumista ja säätelemällä suoliston mikrobiotan ja suoliston esteen eli immuniteetin välisiä vuorovaikutuksia. Tutkimuksemme on ensimmäinen systemaattisesti määrittelevä hAMSC:iden vaikutukset ja taustalla olevat mekanismit, jotka säätelevät suoliston mikrobiota ja suoliston immuniteettia aGVHD:ssä.

Kuva 7 Suoliston mikrobiotan ja suoliston immuniteetin välinen korrelaatioanalyysi. Spearmanin korrelaatioanalyysi suoritettiin 15 eri suoliston mikrobiotan suhteellisen runsauden (sukutason tasolla) ja TJ:iden mRNA-ilmentymistason, immuunisolujen prosenttiosuuden sekä suolistossa olevien sytokiinien pitoisuuden välillä näiden kahden ryhmän välillä. Spearmanin r-arvot vaihtelevat välillä -0,5 (sininen) - 0,5 (punainen)

Viitteet

1. Schmid, C. (2021). Askel lähempänä GVL:tä ilman GVHD:tä. Blood, 137(19), 2565–2566. https://doi.org/10.1182/blood.2020010132

2. Chang, Y., Zhao, X. ja Huang, X. (2018). Strategiat leukemian vastaisten vaikutusten tehostamiseksi ja säilyttämiseksi pahentamatta siirrännäistä isäntäsairautta. Frontiers in Immunology, 9, 3041. https://doi.org/10.3389/fmmu.2018.03041

3. Zhu, W., Winter, MG, Byndloss, MX, Spiga, L., Duerkop, BA, Hughes, ER, Büttner, L., de Lima Romão, E., Behrendt, CL, Lopez, CA, Sifuentes- Dominguez, L., Huf-Hardy, K., Wilson, RP, Gillis, CC, Tükel, Ç., Koh, AY, Burstein, E., Hooper, LV, Bäumler, AJ, & Winter, SE (2018). Suoliston mikrobiotan tarkka muokkaaminen parantaa koliittia. Nature, 553(7687), 208–211. https://doi.org/10.1038/nature25172

4. Zhao, L., Zhang, F., Ding, X., Wu, G., Lam, YY, Wang, X., Fu, H., Xue, X., Lu, C., Ma, J. , Yu, L., Xu, C., Ren, Z., Xu, Y., Xu, S., Shen, H., Zhu, X., Shi, Y., Shen, Q., … Zhang, C (2018). Ravintokuitujen selektiivisesti edistämät suolistobakteerit lievittävät tyypin 2 diabetesta. Science (New York, NY), 359 (6380), 1151–1156. https://doi.org/10.1126/science.aao5774

5. Shono, Y. ja van den Brink, MRM (2018). Suoliston mikrobiotavaurio allogeenisessa hematopoieettisessa kantasolusiirrossa. Luontoarvostelut. Cancer, 18(5), 283–295. https://doi.org/10.1038/ nrc.2018.10

6. Stafas, A., Burgos da Silva, M., & van den Brink, MRM (2017). Suoliston mikrobiota allogeenisessa hematopoieettisessa solusiirrossa ja graft versus-host -taudissa. Blood, 129(8), 927–933. https://doi.org/10.1182/blood{10}}

7. Wu, K., Yuan, Y., Yu, H., Dai, X., Wang, S., Sun, Z., Wang, F., Fei, H., Lin, Q., Jiang, H ., & Chen, T. (2020). Suoliston mikrobien metaboliitti trimetyyliamiini-N-oksidi pahentaa GVHD:tä indusoimalla M1-makrofagien polarisaatiota hiirissä. Blood, 136(4), 501–515. https://doi.org/10.1182/blood.2019003990

8. Mathewson, ND, Jenq, R., Mathew, AV, Koenigsknecht, M., Hanash, A., Toubai, T., Oravecz-Wilson, K., Wu, S., Sun, Y., Rossi, C ., Fujiwara, H., Byun, J., Shono, Y., Lindemans, C., Calafore, M., Schmidt, TM, Honda, K., Young, VB, Pennathur, S., … Reddy, P. (2016). Suoliston mikrobiomista peräisin olevat aineenvaihduntatuotteet moduloivat suoliston epiteelisolujen vaurioita ja lieventävät graft-versus-host -sairautta. Nature Immunology, 17(5), 505–513. https://doi.org/10.1038/ni.3400

9. Dave, JR, Chandekar, SS, Behera, S., Desai, KU, Salve, PM, Sapkal, NB, Mhaske, ST, Dewle, AM, Pokare, PS, Page, M., Jog, A., Chivte , PA, Srivastava, RK, & Tomar, GB (2022). Ihmisen ikenen mesenkymaaliset kantasolut säilyttävät kasvu- ja immunomodulatoriset ominaisuutensa luovuttajan iästä riippumatta. Science Advances, 8(25), m6504. https://doi.org/10. 1126/sciadv.abm6504

10. Zhao, K., & Liu, Q. (2016). Mesenkymaalisten stroomasolujen kliininen sovellus hematopoieettisissa kantasolusiirroissa. Journal of Hematology & Oncology, 9(1), 46. https://doi.org/ 10.1186/s13045-016-0276-z

11. Liu, Q., Huang, Q., Wu, H., Zuo, G., Gu, H., Deng, K., & Xin, H. (2021). Ihmisen amnionista peräisin olevien kantasolujen ominaisuudet ja terapeuttiset mahdollisuudet. International Journal of Molecular Sciences, 22(2), 970. https://doi.org/10.3390/ijms22020970

12. Li, J., Zhou, Z., Wen, J., Jiang, F., & Xia, Y. (2020). Ihmisen amnion mesenkymaaliset kantasolut edistävät endogeenistä luun regeneraatiota. Frontiers in Endocrinology, 11, 543623. https://doi.org/10.3389/fendo.2020.543623

13. Díaz-Prado, S., Muiños-López, E., Hermida-Gómez, T., Cicione, C., Rendal-Vázquez, ME, Fuentes-Boquete, I., de Toro, FJ, Blanco, FJ ( 2011). Ihmisen lapsivesikalvo vaihtoehtoisena kantasolujen lähteenä regeneratiivisessa lääketieteessä. Erilaistuminen; Research in Biological Diversity, 81(3), 162–171. https:// doi.org/10.1016/j.dif.2011.01.005

14. Hong, J., Gao, Y., Song, J., Zhuo, W., Sun, H., & Ping, B. (2016). Biologisten ominaisuuksien ja immunosuppressiivisen aktiivisuuden vertailu ihmisen amnion mesenkymaalisten kantasolujen ja ihmisen luuytimen mesenkymaalisten kantasolujen välillä. Zhongguo Shi Yan Xue Ye Xue Za Zhi, 24(3), 858–864. https:// doi.org/10.7534/j.issn.{8}}.2016.03.041

15. Gao, Y., Li, W., Bu, X., Xu, Y., Cai, S., Zhong, J., Du, M., Sun, H., Huang, L., He, Y ., Hu, X., Liu, Q., Jin, H., Wang, Q., & Ping, B. (2021). Ihmisen amnion mesenkymaaliset kantasolut estävät aGVHD:tä säätelemällä Treg- ja T-efector-solujen tasapainoa. Journal of Inflammation Research, 14, 3985–3999. https://doi.org/10.2147/ JIR.S323054

16. Cooke, KR, Kobzik, L., Martin, TR, Brewer, J., Delmonte, JJ, Crawford, JM ja Ferrara, JL (1996). Idiopaattisen keuhkokuumeoireyhtymän kokeellinen malli luuydinsiirron jälkeen: I. Pienten H-antigeenien ja endotoksiinin roolit. Blood, 88(8), 3230–3239.

17. Yañez, R., Lamana, ML, García-Castro, J., Colmenero, I., Ramírez, M., & Bueren, JA (2006). Rasvakudoksesta peräisin olevilla mesenkymaalisilla kantasoluilla on in vivo immunosuppressiivisia ominaisuuksia, joita voidaan soveltaa siirrännäis-isäntätaudin hallintaan. Stem Cells (Dayton, Ohio), 24(11), 2582–2591.

18 Hooper, LV, Littman, DR ja Macpherson, AJ (2012). Vuorovaikutus mikrobiotan ja immuunijärjestelmän välillä. Science (New York, NY), 336 (6086), 1268–1273. https://doi.org/10.1126/ science.1223490

19. Kelly, K. ja Rasko, JEJ (2021). Mesenkymaaliset stroomasolut graft versus host -taudin hoitoon. Frontiers in Immunology, 12, 761616. https://doi.org/10.3389/fmmu.2021.761616

20. Macías-Sánchez, MDM, Morata-Tarifa, C., Cuende, N., Cardesa-Gil, A., Cuesta-Casas, M. Á., Pascual-Cascon, MJ, Pascual, A., Martín-Calvo , C., Jurado, M., Perez-Simón, JA, Espigado, I., Garzón López, S., Carmona Sánchez, G., Mata-Alcázar-Caballero, R., & Sánchez-Pernaute, R. (2022) ). Mesenkymaaliset stroomasolut steroideille resistenttien akuutin ja kroonisen siirrännäis- isäntä -taudin hoitoon: Monikeskuskokemuksen myötätuntoinen käyttö. Stem Cells Translational Medicine, 11(4), 343–355. https://doi.org/10.1093/ stcltm/szac003

21. Tago, Y., Kobayashi, C., Ogura, M., Wada, J., Yamaguchi, S., Yamaguchi, T., Hayashi, M., Nakaishi, T., Kubo, H., & Ueda, Y. (2021). Ihmisen amnionista peräisin olevat mesenkymaaliset kantasolut heikentävät ksenogeenistä graft-versus-host -sairautta estämällä T-solujen aktivoitumisen ja lisääntymisen. Scientifc Reports, 11(1), 2406. https://doi. org/10.1038/s41598-021-81916-v

22. Yamahara, K., Harada, K., Ohshima, M., Ishikane, S., Ohnishi, S., Tsuda, H., Otani, K., Taguchi, A., Soma, T., Ogawa, H. ., Katsuragi, S., Yoshimatsu, J., Harada-Shiba, M., Kangawa, K., & Ikeda, T. (2014). Ihmisen amnionista ja suonikalvosta peräisin olevien mesenkymaalisten kantasolujen angiogeenisten, sytoprotektiivisten ja immunosuppressiivisten ominaisuuksien vertailu. PLoS One, 9(2), e88319. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0088319

23. Yamahara, K., Hamada, A., Soma, T., Okamoto, R., Okada, M., Yoshihara, S., Yoshihara, K., Ikegame, K., Tamaki, H., Kaida, K ., Inoue, T., Ohsugi, Y., Nishikawa, H., Hayashi, H., Ito, YM, Iijima, H., Ohnishi, S., Hashimoto, D., Isoe, T., … Fujimori, Y (2019). Amnionista peräisin olevien mesenkymaalisten kantasolujen (AM01) turvallisuus ja tehokkuus potilailla, joilla on steroideihin reagoimaton akuutti graft-versus-host -sairaus allogeenisen hematopoieettisen kantasolusiirron jälkeen: tutkimusprotokolla vaiheen I/II japanilaiselle tutkimukselle. BMJ Open, 9(7), e26403. https://doi.org/10.1136/bmjop fi-2018-026403

24. Lin, D., Hu, B., Li, P., Zhao, Y., Xu, Y. ja Wu, D. (2021). Suoliston mikrobiotan ja mikrobien metaboliittien roolit akuutissa GVHD:ssä. Experimental Hematology & Oncology, 10(1), 49. https://doi.org/10.1186/s40164-021-00240-3

25. Ghimire, S., Weber, D., Mavin, E., Wang, XN, Dickinson, AM ja Holler, E. (2017). GvHD:n ja muiden HSCT:hen liittyvien merkittävien komplikaatioiden patofysiologia. Frontiers in Immunology, 8, 79. https://doi.org/10.3389/fmmu.2017.00079

26. Xu, J., Wang, X., Chen, J., Chen, S., Li, Z., Liu, H., Bai, Y., & Zhi, F. (2020). Alkion kantasoluista peräisin olevat mesenkymaaliset kantasolut edistävät paksusuolen epiteelin eheyttä ja regeneraatiota nostamalla verenkierrossa olevaa IGF:ää -1 paksusuolentulehdushiirissä. Theranostics, 10(26), 12204–12222. https://doi.org/10.7150/thno.47683

27. Zhao, Y., Huang, J., Li, T., Zhang, S., Wen, C. ja Wang, L. (2022). Berberiini parantaa aGVHD:tä suoliston mikrobiston uudelleenmuotoilulla, TLR4-signaloinnin tukahduttamisella ja paksusuolen esteen korjaamisella NLRP3-tulehduksen estämiseksi. Journal of Cellular and Molecular Medicine, 26(4), 1060–1070. https://doi.org/10. 1111/jcmm.17158

28. Yuan, M., Lin, L., Cao, H., Zheng, W., Wu, L., Zuo, H., Tian, ​​X., & Song, H. (2022). Suoliston mikrobiota osallistuu HO-1/BMMSC:iden suojaavaan vaikutukseen maksansiirrossa steatoottisilla maksasiirteillä rotilla. Frontiers in Microbiology, 13, 905567. https://doi.org/10.3389/fmicb.2022.905567

29. Taur, Y., Jenq, RR, Perales, M., Littmann, ER, Morjaria, S., Ling, L., No, D., Gobourne, A., Viale, A., Dahi, PB, Ponce , DM, Barker, JN, Giralt, S., van den Brink, M. ja Pamer, EG (2014). Suoliston bakteerien monimuotoisuuden vaikutukset kuolleisuuteen allogeenisen hematopoieettisen kantasolusiirron jälkeen. Blood, 124(7), 1174–1182. https://doi.org/10.1182/ blood-2014-02-554725

30. Jenq, RR, Taur, Y., Devlin, SM, Ponce, DM, Goldberg, JD, Ahr, KF, Littmann, ER, Ling, L., Gobourne, AC, Miller, LC, Docampo, MD, Peled, JU, Arpaia, N., Cross, JR, Peets, TK, Lumish, MA, Shono, Y., Dudakov, JA, Poeck, H., … van den Brink, MRM (2015). Suoliston Blautiaan liittyy vähentynyt kuolleisuus siirrännäis-isäntätaudista. Veri- ja luuytimensiirron biologia: Journal of the American Society for Blood and Marrow Transplantation, 21(8), 1373–1383. https://doi.org/10.1016/j.bbmt.2015.04.016

31. Le Bastard, Q., Chevallier, P., & Montassier, E. (2021). Suoliston mikrobiomi allogeenisessa hematopoieettisessa kantasolusiirrossa ja akuuttiin siirrännäiseen vs. isäntäsairauteen liittyvät erityiset muutokset. World Journal of Gastroenterology, 27(45), 7792–7800. https:// doi.org/10.3748/wjg.v27.i45.7792

32. Li, X., Lu, C., Fan, D., Lu, X., Xia, Y., Zhao, H., Xu, H., Zhu, Y., Li, J., Liu, H ., & Xiao, C. (2020). Ihmisen navan mesenkymaalisilla kantasoluilla on terapeuttista potentiaalia nivelreumassa säätelemällä immuniteetin ja suoliston mikrobiston välisiä vuorovaikutuksia aryylihiilivetyreseptorin kautta. Rajat solu- ja kehitysbiologiassa, 8, 131. https://doi.org/10.3389/fcell.2020.00131

33. Sun, J., Ding, X., Liu, S., Duan, X., Liang, H., & Sun, T. (2020). Rasvaperäiset mesenkymaaliset kantasolut heikentävät akuuttia keuhkovauriota ja parantavat suoliston mikrobiota septisillä rotilla. Stem Cell Research & Therapy, 11(1), 384. https://doi.org/10.1186/ s13287-020-01902-5

34. Soontararak, S., Chow, L., Johnson, V., Coy, J., Wheat, W., Regan, D. ja Dow, S. (2018). Mesenkymaaliset kantasolut (MSC), jotka on johdettu indusoiduista pluripotenteista kantasoluista (iPSC), jotka vastaavat rasvaperäistä MSC:tä edistäessään suoliston paranemista ja mikrobiomin normalisoitumista hiiren tulehduksellisen suolistosairauden mallissa. Stem Cells Translational Medicine, 7(6), 456–467. https://doi.org/ 10.1002/sctm.{9}}

35. Li, J., Zou, C., & Liu, Y. (2022). Oalbumiinin aiheuttaman ruoka-allergian parantaminen hiirillä kohdistetulla syanidiini-3-O-glukosidin peräsuoleen ja koolonin kautta. Foods (Basel, Sveitsi), 11(11), 1542. https://doi.org/10.3390/foods11111542

36. Maruyama, S., Matsuoka, T., Hosomi, K., Park, J., Nishimura, M., Murakami, H., Konishi, K., Miyachi, M., Kawashima, H., Mizuguchi, K. ., Kobayashi, T., Ooka, T., Yamagata, Z., & Kunisawa, J. (2022). Dyslipidemian esiintymisen luokittelu ohran nauttimiseen liittyvien suolistobakteerien perusteella. Frontiers in Nutrition, 9, 812469. https://doi.org/10.3389/fnut.2022.812469

37. Lee, SH, Park, H., Kang, CD, Choi, DH, Park, SC, Park, JM, Nam, S., Chae, GB, Lee, KY, Cho, H., & Lee, SJ ( 2022). Suuriannoksinen lihaksensisäinen D3-vitamiinilisä vaikuttaa suoliston mikrobiotaan potilailla, joilla on clostridioides dicille -infektio. Frontiers in Cellular and Infection Microbiology, 12, 904987. https://doi.org/10.3389/fcimb.2022.904987

38. Meyer, RK, Lane, AI, Weninger, SN, Martinez, TM, Kangath, A., Laubitz, D. ja Duca, FA (2022). Oligofruktoosi palauttaa aterian jälkeiset lyhytketjuiset rasvahappotasot runsasrasvaisen ruokinnan aikana. Lihavuus (Silver Spring, Md.), 30(7), 1442–1452. https://doi.org/ 10.1002/oby.23456

39. Sang, J, Zhuang, D, Zhang, T, Wu, Q, Yu, J, Zhang, Z (2022) Convergent and divergent age patterning of suoliston mikrobiotan monimuotoisuuden ihmisillä ja kädellisillä. M-Systems: e151221. https://doi.org/10.1128/msystems.{6}}

40. Ge, X., He, X., Liu, J., Zeng, F., Chen, L., Xu, W., Shao, R., Huang, Y., Farag, MA, Capanoglu, E. , El-Seedi, HR, Zhao, C. ja Liu, B. (2022). Tyypin 2 diabeteksen parantaminen uudella 6, 8-guanidyyliluteoliinikinoni-kromi-koordinaatiolla biokemiallisten mekanismien ja suoliston mikrobiotan vuorovaikutuksen kautta. Journal of Advanced Research, S2090–1232(22), 121–129. https://doi.org/ 10.1016/j.jare.2022.06.003

41. Ding, Q., Cao, F., Lai, S., Zhuge, H., Chang, K., Valencak, TG, Liu, J., Li, S., & Ren, D. (2022). Lactobacillus plantarum ZY08 lievittää kroonista alkoholin aiheuttamaa maksarasvaa ja maksavaurioita hiirillä palauttamalla suoliston homeostaasin. Food Research International (Ottawa, Ont.), 157, 111259. https://doi.org/10. 1016/j.foodres.2022.111259

42. Rees, NP, Shaheen, W., Quince, C., Tselepis, C., Horniblow, RD, Sharma, N., Beggs, AD, Iqbal, TH ja Quraishi, MN (2022). Järjestelmällinen katsaus luovuttajien ja vastaanottajien ennustavista biomarkkereista vasteen ulosteen mikrobiotan siirtoon potilailla, joilla on haavainen paksusuolitulehdus. EBioMedicine, 81, 104088. https://doi.org/10.1016/j.ebiom.2022.104088

43. Li, A., Abraham, C., Wang, Y. ja Zhang, Y. (2020). Uusia oivalluksia akuutin siirrännäis-isäntätaudin perusbiologiaan. Haematologica, 105(11), 2540–2549. https://doi.org/10.3324/haematol. 2019.{12}}. Kayama, H., Okumura, R., & Takeda, K. (2020). Vuorovaikutus suoliston mikrobiotan, epiteelin ja immuunisolujen välillä. Annual Review of Immunology, 38, 23–48. https://doi.org/ 10.1146/Annu rev-immunol-070119-115104

45. Schluter, J., Peled, JU, Taylor, BP, Markey, KA, Smith, M., Taur, Y., Niehus, R., Stafas, A., Dai, A., Fontana, E., Amoretti , LA, Wright, RJ, Morjaria, S., Fenelus, M., Pessin, MS, Chao, NJ, Lew, M., Bohannon, L., Bush, A., … Xavier, JB (2020). Suoliston mikrobiota liittyy ihmisen immuunisoludynamiikkaan. Nature, 588(7837), 303–307. https://doi.org/10.1038/ s41586-020-2971-8

46. ​​Yang, J, Yang, H, Li, Y (2022) Kolminkertaiset vuorovaikutukset suoliston mikrobiston, mykobiotan ja isännän immuniteetin välillä. Elintarviketieteen ja ravitsemuksen kriittisiä katsauksia: 1–21. https://doi.org/10.1080/10408 398.2022.2094888

47. An, J., Liu, Y., Wang, Y., Fan, R., Hu, X., Zhang, F., Yang, J., & Chen, J. (2022). Suoliston limakalvoesteen rooli autoimmuunisairaudessa: mahdollinen kohde. Frontiers in Immunology, 13, 871713. https://doi.org/10.3389/fmmu.2022.871713