HPLC Echinakosidin määritys Cistanche Cistanchessa

ECHINAkosidin HPLC-määritys Cistanche Cistanchessa

Lisää information:ali.ma@wecistanche.com

Objektiivi:HPLC määritti määränechinakosidiINCistanchemaa nestemäisessä typen kunnossa ja luonnollisesti ilmakuivatussa tilassa vertaamalla sitävilli cistanchejakeinotekoisesti viljelty Cistanche.

Menetelmät:käytettiin lc-20a HPLC -järjestelmää (Shimadzu, Japani). Pylväs oli YMC inertsil ods-sp (4,6 mm × 150 mm,5μm;YMC Co Ltd,Japani); Liikkuva faasi: asetonitriili-metanoli-1% muurahaishappo (10:15:75); Havaitsemisaaltopituus 334 nm; Virtausnopeus 0,7 mg · ml-1. Kolonnin lämpötila 30 ° C.

Tulokset:erilaisilla käsittelyolosuhteilla oli hyvin selvä vaikutus ekinakosidipitoisuuteen, sillä ekinakosidipitoisuudet olivat yleensä korkeammat Cistanche-maassa nestemäisen typen alla kuin näissä maissa luonnollisissa ilmakuivatuissa olosuhteissa; Luonnonvaraisen vaikuttavan aineen pitoisuusCistancheoli paljon korkeampi kuin keinotekoisen kulttuurin.

Napsauta kohtaan Cistanche-uutejauhetuotteet

Cistanche on uhanalainen laji, loiskasvi, joka asuu Clostridiumin, Salix rubrumin, juurissa. Kiinassa Cistanchea jaetaan pääasiassa Sisä-Mongoliassa, Ningxiassa, Gansussa ja Xinjiangissa, ja sillä on erinomainen maine " aavikon ginsengistä ", jolla on suuri lääketieteellinen arvo. Sen tärkeimmät lääkeaineet ovat fenyylietanoliittiset glykosidit, jotka voidaan jakaa ekinakosidiin, lehtien cohosideen, Cistancheen ja muihin riippuen niiden substituenteista. Niistä ekinakosidilla on parannettu seksuaalinen toiminta, antioksidantti ja vapaiden radikaalien raadonsyöntivaikutukset, mutta sillä on myös joitain anti-apoptoottisia vaikutuksia. 1980-luvulta lähtien luonnontuotteiden erottamisessa on käytetty laajalti HPLC-tekniikkaa, joka tarjoaa yksinkertaisen ja nopean menetelmän fenyylietanolihappoglykosidien erottamiseksi. HPLC-menetelmä valittiin analysoimaan Cistanchen, luonnonvaraisen ja keinotekoisesti viljellyn Cistanchen tärkeimmän aktiivisen ainesosan, sisältöä eri kasvukausina, mikä tarjoaa tieteellisen perustan Cistanchen järkevälle kehitykselle ja käytölle sekä sen laadun tehokkaalle arvioinnille.

Instrumentit ja reagenssit

Shimadzu, Japani lc-20a HPLC-laite, lc-20at tandem-kaksoismäntäpumppu, cto-20a-kolonniuuni, spda-20a UV Vis dual wavelength detector; Kunshan kq-100 ultraäänipuhdistin; Asetonitriili (kromatografisesti puhdas, Tianjin Guangfun kemiallinen tutkimuslaitos); Metanoli (kromatografisesti puhdas, Tianjin Guangfu Chemical Research Institute); Muurahaishappo (kromatografisesti puhdas, Tianjin Guangfu Chemical Research Institute); tislattu vesi

Ohjaus: echineoside, sisältö ≥ 98.43% (Shanghai Yuanye Bio Technology Co., Ltd.).

Viisi näytettä Cistanchesta: istutetaan keinotekoisesti vuodeksi seuraavan Cistanchen kanssa, istutetaan keinotekoisesti Cistanchelle, keinotekoisesti kuivatulle Cistanchelle, villille Cistanchelle ja istutettiin keinotekoisesti yli kolmeksi vuodeksi Cistanchella.

2 menetelmää ja tulosta

2.1 Kromatografisten olosuhteiden määrittäminen

LC-kromatogrammissa mitatun ekineosidin piikin erottamiseksi muista aineista sekä pumpun paineen ja sopivan alueen sisällä olevan aikataulun säätämiseksi suoritettiin kromatografisten olosuhteiden kokeellinen muuntaminen, ja liikkuvalla faasilla tehtyjen optimointikokeiden jälkeen pääteltiin, että mitä korkeampi lämpötila, mitä lyhyempi retentioaika ja mitä pienempi pitoisuus, sitä lyhyempi pumpun paine ja sitä pienempi retentioaika, mutta huippukorkeus pieneni, mikä oli epäsuotuisaa mittaukselle. Liikkuva faasi määritettiin lopulta asetonitriili-metanoli-1%: n muurahaishapoksi (10: 15: 75), havaitsemisaallonpituudeksi 334 nm, virtausnopeudeksi 0,7 ml / min ja kolonnin lämpötilaksi 30 ° C huoneenlämpötilan objektiivisten olosuhteiden ja pumpun suurimman laakeripaineen mukaan, mikä johti runsaaseen informaatioon, jossa oli terävät huippumuodot ja ainesosien hyvä erottaminen。

2.2 Sarakkeiden määrittäminen

YMC-Inertsil ODS-SP(4,6 mm × 150 mm,5 μ m;YMC Co Ltd,Japani).

2.3 kokeellisen liuoksen valmistus

2.3.1 Standardiliuosten valmistus

Sopiva määrä ekineosidistandardia punnittiin tarkasti ja ruiskutettiin liikkuvan faasin asetonitriili-metanoli-1%: n muurahaishapolla (10:15:75) 0,06 mg: n valmistamiseksi · ML - 1, 0,05 mg · ML - 1, 0,04 mg · ML - 1, 0,03 mg · ML - 1, 0,02 mg · ML - 1, 0,01 mg · ML - 1 ja 0,005 mg · ML - 1 echinacoside-standardin liuos.

2.3.2 Testiliuoksen valmistus

Sopivat määrät keinotekoisesti istutettua tuoretta Cistanchea (alle vuoden), keinotekoisesti tuoretta Cistanchea ja villiä tuoretta Cistanchea jauhettiin jauheeksi nestemäisen typen alla olevalla laastilla; Myös sopiva määrä edellä mainituista 3 Cistanchesta leikattiin lohkoiksi, ilmakuivattiin luonnollisesti varjoilmanvaihdossa, ja kuivauksen jälkeen se jauhettiin ja jauhettiin jauheeksi. Keinotekoinen kuiva cistanche ja villi kolmen vuoden kuiva Cistanche jauhettiin suoraan jauheeksi. 0,5 g edellä valmistettua Cistanche-jauhetta otettiin ja laitettiin sentrifugiputkeen, lisättiin 25 ml liikkuvaa faasia, punnittiin ja liotettiin 30 minuutin ajan, sonikoitiin 40 minuuttia, jäähdytettiin ja punnittiin sitten uudelleen puuttuvan painon korvaamiseksi liikkuvalla faasilla, ravistettiin ja sentrifugoitiin, ja supernatantti otettiin 0,45 μ M mikrohuokoisen suodatinkalvon suodatukseen.

2.4 regressiokäyrien kaaviot echinakosidin vakionäytteelle

Valmistetut echineoside-standardinäytteet injektoitiin LC-laitteeseen erikseen, ja kontrollin pitoisuus (mg · L-1) käytettiin abskissana, ja vastaavat huippualueet tärkytettiin standardikäyrän piirtämiseksi, mikä johti regressioyhtälöön: y = 66 867 100x-46 360,83, R2 = 0,98637, joka osoitti ekineosidin 0,1 ~ 1,2 μg:ssa hyvässä lineaarisessa suhteessa.

3 Keskustelut

Echinacoside on yksi Cistanchen tärkeimmistä aktiivisista komponenteista, joka voi hyvin edustaa Cistanchen farmakologisen vaikutuksen kemiallista perustaa, jolloin lääkemateriaalin laadunarviointi ja sen farmakologinen vaikutus vastaavat toisiaan ja parantavat Cistanche-laadunarvioinnin tarkoituksenmukaisuutta.

Erilaisilla käsittelyolosuhteilla oli selvä vaikutus ekinakosidipitoisuuteen, ja ekinakosidipitoisuudet olivat yleensä korkeammat Cistanche-maassa nestemäisen typen alla kuin näissä maissa luonnollisissa ilmakuivatuissa olosuhteissa. Yleinen ilmakuivaus vähensi ekineosidin määrää, joka olisi voitu kuluttaa ilmakuivauksen aikana tai muuttua. Vaikuttavien aineiden pitoisuuden vähenemisen estämiseksi ja Cistanchen tehon takaamiseksi on valittava asianmukainen hoito.

Johdonmukaisesti useimmat uskoivat, että Cistanchen keinotekoinen viljelyympäristö ja kasvutottumukset olivat erottamattomia luonnosta ilman laatueroja, painottivat yleensä vain satoa eivätkä analysoineet laatua. Tämä tutkimus osoitti, että keinotekoisesti viljellyn Cistanche echinacoside -määrän määrä oli pienempi kuin luonnonvaraisen Cistanche echinacoside -määrän. Korkein oli 0,3360% villistä etäisyydestä ja alin oli 0,007 0% keinotekoisesta Cistanchesta. Siksi sitä on vielä tutkittava viljelytekniikassa aktiivisten ainesosien sisällön parantamiseksi.

Cistanchen laatu riippuu sen vaikuttavan aineen, ekinakosidin, määrästä, jolla puolestaan on vahva suhde sadonkorjuukauteen, -aikaan ja -menetelmään, joten Cistanchen korjuussa tulisi ottaa huomioon vaikuttavan aineen kertymistila sekä kasvu- ja kehitysvaihe. Harkitse sekä laatua että tuottoa.

Tässä artikkelissa mainittu menetelmä on yksinkertainen, tarkka, toistettavissa ja tarkka ekineosidin määrittämiseksi. Hyödyllinen Cistanche-määrityksessä.