Kuinka taistella tehokkaasti maksasyöpää vastaan? Cistanche Deserticola -aktiivinen ainesosa fenyylietanoidiglykosidit auttavat ratkaisemaan ongelman

Abstrakti

Tausta:Cistanche tubulosa(Schenk) R. Wight on perinteinen kiinalainen lääketiede, joka loistaa Tamarix-kasvin juurissa ja jota on käytetty miesten impotenssin, hedelmättömyyden, kehon heikkouden hoitoon ja tonic-aineena. Sen kasvainten vastainen vaikutus hepatosellulaariseen karsinoomaan on kuitenkin edelleen vaikeasti havaittavissa. Täällä tutkimme C:n kasvaimia estävää vaikutusta.tubulosafenyylietanoliglykosidit(CTPG) H22-hepatosellulaarisissa karsinoomasoluissa sekä in vitro että in vivo ja sen mekanismit.

Menetelmät: H22-solujen morfologia, elinkelpoisuus, apoptoosi, solusykli ja mitokondriomembraanipotentiaali (Δψm) analysoitiin käänteismikroskopialla, MTT-määrityksellä ja virtaussytometrialla, vastaavasti. Proteiinien ilmentyminen ja aktivaatio apoptoosireitillä havaittiin Western blot -menetelmällä. Antituumorivaikutus in vivo arvioitiin kasvainhiirimallissa, joka oli luotu käyttämällä urospuolisia Kunming-hiiriä.

Tulokset: CTPG-hoito hillitsi merkittävästi H22-solujen kasvua annoksesta ja ajasta riippuvaisella tavalla, mikä korreloi lisääntyneen apoptoosin ja solusyklin pysähtymisen kanssa G0/G1- ja G2/M-vaiheissa. Lisäksi kromosomaalista kondensaatiota havaittiin CTPG:llä käsitellyissä H22-soluissa. CTPG-hoito lisäsi merkittävästi Bax/Bcl-2-suhdetta, vähensi Δψm:ää ja tehosti sytokromi c:n vapautumista. Katkaistun kaspaasin-8 ja kaspaasin-9 tasot sekä ulkoisissa että sisäisissä signalointireiteissä lisääntyivät merkittävästi, mikä aktivoi peräkkäin kaspaasin-7 ja -3 pilkkomaan PARP:n. Lopuksi CTPG esti H22-solujen kasvua hiirissä ja paransi kasvainhiirten eloonjäämisastetta.

Johtopäätökset: Nämä tulokset viittasivat siihen, että CTPG tukahdutti H22-solujen kasvua sekä ulkoisten että sisäisten apoptoosireittien kautta.

Avainsanat:Cistanchetubulosa, Fenyylietanoliglykosidit, Apoptoosi, Signalointireitti, Kasvain-hiirimalli

Ottaa yhteyttä:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Cistanche deserticolalla on monia vaikutuksia, napsauta tästä saadaksesi lisätietoja

Tausta

Maksasyöpä sijoittui kuudenneksi syövän ilmaantuvuuden ja neljänneksi syöpäkuolemien osalta maailmanlaajuisesti. Lisäksi se sijoittui neljänneksi syövän ilmaantuvuuden ja ensimmäiseksi syöpäkuolleisuuden perusteella maissa, joissa sosiodemografinen indeksi on alhainen [1]. Kiinassa maksasyöpä on kolmanneksi yleisin syöpään liittyvien kuolemien syy vuonna 2015 [2]. Yli 90 prosenttia primaarisista maksasyövistä on maksasolusyöpää (HCC) maailmassa [3]. Tällä hetkellä maksan resektio on tärkein vaihtoehto HCC:n hoidossa. Kuitenkin alle 30 prosenttia HCC-potilaista täytti parantavan maksaresektion kriteerit, ja yleinen 5-vuoden eloonjäämisprosentti on edelleen niinkin alhainen kuin 35-50 prosenttia korkean uusiutumisasteen vuoksi [4, 5 ]. Hoitovaihtoehtojen saatavuus potilaille, joilla on keskiasteesta pitkälle edennyt HCC, on hyvin rajallinen. Sorafenibi, molekyylisesti kohdennettu lääke, on FDA hyväksynyt edistyneen HCC:n ensilinjan hoitoon. Sorafenibi pidentää kuitenkin vain noin 3 kuukauden eloonjäämisaikaa ja vasteprosentti on alle 4 prosenttia [6, 7]. On kiireellisesti kehitettävä uusia lääkkeitä tai strategioita HCC:tä vastaan. Perinteistä kiinalaista lääketiedettä (TCM) yksinään tai yhdistettynä muihin strategioihin on käytetty HCC:n hoitoon, ja sen kliiniset edut ovat osoittaneet, kuten pidempi eloonjäämisaika, parantunut elämänlaatu, vähentynyt haittavaikutus ja niin edelleen [8, 9].Cistanche, eräänlainen TCM, jolla on erilaisia ​​biologisia toimintoja, kuten hapettumista estävä, tulehdusta, ikääntymistä estävä ja hermosolujen suojaus [10, 11].Fenyylietanoliglykosiditon pidetty tärkeimpinä aktiivisina komponentteinaCistanche, joilla on erilaisia ​​​​vaikutuksia, mukaan lukien antioksidantti, anti-inflammatorinen, hepato- ja hermosuojaus [12–15]. Ryhmämme on ilmoittanut, että Cistanche tubulosafenyylietanoliglykosidit(CTPG) saattoi aiheuttaa apoptoosia melanooma B16-F10-soluissa ja esti kasvainten kasvua hiirillä [16]. Tässä tutkimuksessa mittasimme CTPG:n kasvainten vastaista vaikutusta HCC H22 -soluihin sekä in vitro että in vivo ja tutkimme sen mekanismeja. Havaitsimme, että CTPG indusoi apoptoosia H22-soluissa sekä ulkoisten että sisäisten signalointireittien kautta ja tukahdutti H22-kasvainten kasvua hiirissä.

menetelmät

Solulinja

Hiiren H22 hepatosellulaariset karsinoomasolut saatiin Xinjiangin biologisten resurssien ja geenitekniikan laboratoriosta, Xinjiang University (Urumqi, Xinjiang, Kiina) ja niitä viljeltiin RPMI 1640 -elatusaineessa (Gibco), jota oli täydennetty 100 U/ml penisilliinillä ja 100 ug/ml streptomysiini ja 10 prosenttia lämpöinaktivoitua naudan sikiön seerumia (Gibco) 37 asteessa kostutetussa ilmakehässä, jossa on 5 prosenttia hiilidioksidia.

MTT-määritys

CTPG ostettiin Hetian Dichen Biotech Co., Ltd.:ltä (Hetian, Xinjiang, Kiina), ja CTPG:n tärkeimmät yhdisteet pätevöitiin ja kvantifioitiin korkean suorituskyvyn nestekromatografialla [16]. Solujen elinkelpoisuus arvioitiin 3- (4, 5-dimetyylitiatsol-2-yyli)-2, 5-difenyylitetratsoliumbromidilla (MTT) (Sigma, St. Louis, MO , USA) analyysi. H22-solut ympättiin 96-kuoppalevyille tiheydellä 2 × 104 solua 100 ul:ssa alustaa per kuoppa ja viljeltiin 37 asteessa. 24 tunnin kuluttua soluja käsiteltiin eri pitoisuuksilla CTPG:tä (0, 100, 200, 300 ja 400 ug/ml) tai 0,3 prosenttia DMSO:ta (vastaa 400 ug/ml CTPG:tä) 24, 48 ja 72 tunnin ajan, vastaavasti. . Sen jälkeen, kun oli sentrifugoitu 1000 rpm 7 minuutin ajan, supernatantti heitettiin pois ja kuhunkin kuoppaan lisättiin 100 ui MTT-liuosta (5 mg/ml PBS:ssä). Levyjä inkuboitiin 37 asteessa 4 tuntia ja 100 ui DMSO:ta lisättiin muodostuneiden formatsaanikiteiden liuottamiseksi. OD490-arvot havaittiin 96--kuoppaisella mikrolevylukijalla (Bio-Rad Laboratories, CA, USA). Solujen elinkelpoisuus laskettiin kaavan mukaan: Solujen elinkelpoisuus (prosentti)=(OD-käsitelty/OD-käsittelemätön) × 100 prosenttia.

Apoptoosin havaitseminen

H22-soluja käsiteltiin eri konsentraatioilla CTPG:tä (0, 100, 200, 300 ja 400 ug/ml) tai 0,3-prosenttisella DMSO:lla 24 tunnin ajan ja värjättiin sitten anneksiinillä V FITC/ Propidiumjodidi (PI) Apoptosis Detection Kit (YEASEN, Kiina) valmistajan ohjeiden mukaan. Näytteet analysoitiin virtaussytometrialla (BD FACSCalibur, USA).

Mitokondrioiden kalvopotentiaalin havaitseminen

H22-soluja käsiteltiin eri konsentraatioilla CTPG:tä (0, 200 ja 400 ug/ml) 24 tunnin ajan ja värjättiin sitten kalvoa läpäisevällä JC-1-väriaineella (Beyotime, Kiina) 20 tunnin ajan. min 37 asteessa. Kun näytteet oli pesty kahdesti JC-1-puskurilla, ne suspendoitiin uudelleen 300 ul:aan JC-1-puskuria ja analysoitiin virtaussytometrialla (BD FACSCalibur, USA).

Solusyklin analyysi

H22-solut siirrostettiin 60 mm:n viljelymaljoihin ja käsiteltiin eri pitoisuuksilla CTPG:tä (0, 100, 200, 300 ja 400 ug/ml) tai 0,3-prosenttisella DMSO:lla. 24 h. Kaikki solut kerättiin ja pestiin kahdesti PBS:llä. Solut kiinnitettiin 70-prosenttisessa jääkylmässä etanolissa -20 asteessa 2 tunnin ajan ja pestiin kahdesti PBS:llä, sitten suspendoitiin uudelleen 300 ul:aan propidiumjodidi/RNaasi-värjäyspuskuria (BD Biosciences). 10 minuutin huoneenlämmössä olon jälkeen näytteet kerättiin virtaussytometrialla (BD FACSCalibur, USA) ja solusyklin jakautuminen analysoitiin ModFit LT 3.0 -ohjelmistolla.

Hoechst 33 258 värjäys

H22-soluytimien morfologiset muutokset analysoitiin kalvoa läpäisevällä DNA:ta sitovalla Hoechst 33 258 -värjäyksellä. H22-solut kylvettiin 6-kuoppalevylle pitoisuudella 1 × 105 solua/kuoppa 2 ml:n alustassa. 60 - 70 prosentin konfluenssin jälkeen soluja käsiteltiin CTPG:llä (0, 100, 200, 300 ja 400 ug/ml) 24 tunnin ajan. Solut kerättiin ja kiinnitettiin 4-prosenttisella jääkylmällä paraformaldehydillä 4 asteessa 10 minuutin ajan. PBS:llä pesun jälkeen solut värjättiin Hoechst 33 258:lla (Beyotime, Kiina) 4 asteessa 10 minuutin ajan. Näytteet tarkkailtiin käänteisellä fluoresenssimikroskoopilla (Nikon Eclipse Ti-E, Japani).

Western blot

Anti-kaspaasi-3, anti-kaspaasi-3, Anti-Bcl-2 ja anti-Bax ostettiin yhtiöltä Beyotime Biotech Co., Ltd. (Shanghai, Kiina). Anti-kaspaasi-7, anti-kaspaasi-7, anti-kaspaasi-8, anti-kaspaasi-8, anti-kaspaasi-9, anti -katkaistu-kaspaasi-9, anti-PARP, anti-lohkottu PARP, anti-hiiri IgG-HRP ja anti-kanin IgG-HRP ostettiin Cell Signaling Technologylta. Anti- -aktiini ostettiin Beijing ComWin Biotech Co., Ltd.:ltä (Peking, Kiina).

H22-soluja käsiteltiin eri konsentraatioilla CTPG:tä (0, 100, 200, 300 ja 400 ug/ml) tai 0,3-prosenttisella DMSO:lla 24 tunnin ajan. Solut kerättiin ja lyysattiin Cell Lysis Solution RIPA:lla (Beijing ComWin Biotech Co., Ltd) 30 minuuttia jäillä. Näytteet sentrifugoitiin (12,{11}} g 15 minuuttia 4 asteessa) supernatanttien keräämiseksi ja proteiinipitoisuudet mitattiin BCA-kitillä (Thermo Fisher Scientific, USA). Sama määrä proteiinia kussakin näytteessä eristettiin 12-prosenttisella SDS-PAGE:lla ja siirrettiin PVDF-kalvoille (Biosharp, Kiina). Sen jälkeen kun TBST-puskurilla salpaus sisälsi 5 prosenttia rasvatonta maitoa, kalvoja inkuboitiin vastaavien primääristen vasta-aineiden ja sekundääristen vasta-aineiden kanssa, jotka oli konjugoitu piparjuuriperoksidaasiin (HRP), vastaavasti. TBST:llä pesun jälkeen kohdeproteiinit havaittiin ECL-määrityssarjalla (Beyotime, Kiina).

Eläimet ja etiikkalausunto

6-8 viikkoa vanhat urospuoliset Kunming-hiiret ostettiin Animal Laboratory Centeristä, Xinjiang Medical Universitystä (Urumqi, Xinjiang, Kiina). Hiiriä pidettiin Xinjiangin yliopiston tavallisessa lämpötilasäädellyssä, valokiertoisessa eläinlaitoksessa. Kaikki eläintutkimukset suoritettiin Xinjiangin yliopiston eläinten hoito- ja käyttökomitean ohjeiden mukaisesti. Protokollan hyväksyi Xinjiangin yliopiston Xinjiangin biologisten resurssien ja geenitekniikan avainlaboratorion eläinkokeiden etiikkakomitea (BRGE-AE001).

Tuumori hiiritutkimus

Kasvainhiirimallin indusoimiseksi urospuolisiin Kunming-hiiriin injektoitiin ihon alle 1 × 106 H22-solua 100 ul:ssa PBS:ää oikeaan kylkeen. 3 päivän kuluttua hiiret jaettiin satunnaisesti 3 ryhmään (7 hiirtä/ryhmä). Kontrolliryhmälle injektoitiin 0,1 ml DMSO:ta ihonalaisesti kasvaimen ympärille. CTPG-200- ja CTPG- 400-ryhmille injektoitiin ihon alle 200 tai 400 mg/kg CTPG:tä 0,1 ml:ssa DMSO:ta kasvaimen ympärille. Hiiriä käsiteltiin joka toinen päivä 21 päivään asti. Kasvainten koot mitattiin jarrusatulalla 25 päivään asti ja kasvaimen tilavuus laskettiin kaavan mukaan: kasvaimen tilavuus (mm3)=(pituus × leveys2)/2. 25 päivän kuluttua kasvainhiirten eloonjäämistä seurattiin joka päivä tämän tutkimuksen loppuun asti.

Tilastollinen analyysi

Tilastollinen merkitsevyys laskettiin yksisuuntaisella varianssianalyysillä hoito- ja kontrolliryhmien välillä. Kaikki tiedot ilmaistiin keskiarvona ± standardipoikkeama (SD). p < 0,05="" katsottiin="" tilastollisesti="">

Tulokset

CTPG vähensi H22-solujen elinkelpoisuutta in vitro

CTPG:n kasvaimia estävän vaikutuksen tutkimiseksi HCC:hen H22-soluja käsiteltiin erilaisilla CTPG-pitoisuuksilla (0, 100, 200, 300 ja 400 ug/ml) in vitro. 24 tunnin kuluttua H22-solujen morfologiaa tarkkailtiin käänteisellä mikroskoopilla. Havaitsimme, että CTPG-käsittely muutti dramaattisesti H22-solujen morfologiaa. CTPG-konsentraation kasvaessa soluista tuli pieniä ja pyöreitä, ja myös solujen lukumäärä väheni suuresti (kuvio la). MTT-määritystä käytettiin analysoimaan H22-solujen elinkelpoisuutta CTPG-käsittelyn jälkeen 24, 48 ja 72 tunnin ajan, vastaavasti. CTPG vähensi merkittävästi H22-solujen elinkelpoisuutta annoksesta ja ajasta riippuvaisella tavalla (kuvio 1b). CTPG pitoisuudella 300 ug/ml saavutti parhaan estonopeuden (kuvio 1c). CTPG:n IC50-arvot H22-soluille ovat 236 ug/ml 24 tunnin kohdalla ja 169,8 ug/ml 48 tunnin kohdalla.

CTPG aiheutti apoptoosin H22-soluissa

Sen tutkimiseksi, välittyykö apoptoosin induktio H22-solujen alentunut elinkyky, H22-soluja käsiteltiin eri konsentraatioilla CTPG:tä (0, 100, 200, 300 ja 400 ug/ml) 24 tunnin ajan ja värjättiin. Virtaussytometriatulokset osoittivat, että CTPG indusoi merkittävästi H22-solujen apoptoosia (mukaan lukien varhainen ja myöhäinen apoptoosi) annoksesta riippuvalla tavalla (kuvio 2a). Vaikka suuri CTPG-annos lisäsi myös merkittävästi H22-solujen nekroosia, nekroosilla on vähäinen rooli H22-solujen kasvun estämisessä, koska sen osuus on pienempi (8,3 prosenttia) verrattuna apoptoosin (52,6 prosenttia). Lisäksi H22-solujen kokonaisproteiinit eristettiin CTPG-hoidon jälkeen ja anti-apoptoottisen B-solulymfooma 2:n (Bcl-2) ja pro-apoptoottisen BCL-2--assosioituneen X-proteiinin (Bax) ilmentymät havaittiin Western blot. Harmaasävyskannaustiedot osoittivat, että Baxin ja Bcl-2:n ilmentymistasot lisääntyivät ja vastaavasti laskivat. Bax/Bcl-2-suhde kasvoi merkittävästi (kuvio 2b). Nämä tulokset viittaavat siihen, että CTPG indusoi apoptoosia H22-soluissa.

CTPG indusoi kromosomaalista kondensaatiota ja solusyklin pysähtymistä H22-soluissa

On raportoitu, että lääkkeiden aiheuttamat DNA-vauriot ja solusyklin pysähtyminen voivat estää kasvainsolujen kasvua ja aiheuttaa apoptoosia kasvainsoluissa [17, 18]. Tumien morfologian havaitsemiseksi H22-soluissa 24 tunnin CTPG-käsittelyn jälkeen H22-solut värjättiin Hoechst 33 342:lla ja tarkkailtiin käyttämällä käänteistä fluoresoivaa mikroskopiaa. CTPG:llä käsitellyt solut osoittivat tumien kirkkaasti kondensoituneen kromatiinin annoksesta riippuvaa kasvua, kun taas käsittelemättömissä soluissa oli homogeenisesti värjäytyneitä ytimiä (kuvio 3a). Solusyklin jakautumista H22-soluissa analysoitiin edelleen PI-värjäyksellä 24 tunnin CTPG-käsittelyn jälkeen. Kuten kuvasta 3b näkyy, CTPG-hoito lisäsi merkittävästi G0/G1-- ja G2/M-vaiheen solujen osuutta ja vähensi merkittävästi S-vaiheen solujen osuutta, mikä viittaa siihen, että CTPG indusoi G:tä 0/G1- ja G2/M-vaiheen pysäytys H22-soluissa. Suuri annos CTPG:tä lisäsi myös merkittävästi sub-G1-solujen osuutta.

CTPG vähensi mitokondrioiden kalvopotentiaalia ja lisäsi sytokromi c:n vapautumista

mitokondrioista riippuvaisella reitillä on tärkeä rooli apoptoosin induktiossa [19, 20]. Mitokondrioiden kalvopotentiaalin (Δψm) muutoksia voidaan seurata JC-1-värjäyksellä, koska JC-1-aggregaatti (punainen fluoresenssi) voi hajota monomeeriksi (vihreä fluoresenssi) Δψm:n pienentyessä [21]. 24 tunnin CTPG-käsittelyn jälkeen H22-solut värjättiin JC- 1-värillä. Virtaussytometriatiedot osoittivat, että punainen fluoresenssi FL-2-kanavassa ja vihreä fluoresenssi FL-1-kanavassa vähenivät ja lisääntyivät merkittävästi CTPG-käsittelyn jälkeen. PE-FITC plus -solujen osuus kasvoi merkittävästi (kuvio 4a), mikä viittaa siihen, että CTPG vähensi Δψm H22-soluissa. Tämä on yhdenmukainen lisääntyneen Bax/Bcl{13}}-suhteen kanssa. Näin ollen havaitsimme sytokromi c:n vapautumisen lisääntyneen merkittävästi CTPG-hoidon aikana (kuvio 4b). Nämä tulokset osoittivat, että CTPG saattaa osittain indusoida apoptoosia H22-soluissa mitokondrioista riippuvan (luontaisen) reitin kautta.

CTPG aktivoi kaspaasireitin ja esti DNA:n korjauksen

Seuraavaksi analysoitiin CTPG:n indusoima kaspaasin aktivaatio sekä ulkoisten että sisäisten signalointireittien kautta. 24 tunnin CTPG-käsittelyn jälkeen kokonaisproteiinit eristettiin H22-soluista ja pro- ja pilkkoutuneiden kaspaasien tasot havaittiin Western blot -menetelmällä. Verrattuna käsittelemättömään tai DMSO-kontrolliin, CTPG-hoito nosti merkittävästi paitsi pilkkoutuneen kaspaasin -8 (ulkoinen reitti) tasoa myös katkaistun kaspaasin -9 (sisäinen reitti) tasoa (kuva 1). 5). Peräkkäin aktivoituneet kaspaasi-8 ja -9 pilkkoivat alavirran pro-kaspaasin-3 ja -7, jotka havaittiin kuvassa 5. Aktivoitu kaspaasi-3 katkaisi DNA:n poly(ADP-riboosi)polymeraasin (PARP) korjausentsyymi DNA:n korjauksen estämiseksi ja DNA-vaurioiden kerääntymisen estämiseksi, kuten kuvassa 3a havaitaan.

Nämä tulokset osoittivat, että CTPG indusoi apoptoosia H22-soluissa sekä ulkoisten että sisäisten signalointireittien kautta.

CTPG estää H22 HCC:n kasvua in vivo ja parantaa kasvainhiirten eloonjäämisastetta

Lopuksi CTPG:n kasvainten vastainen vaikutus HCC:hen arvioitiin kasvainhiirimallissa, joka määritettiin injektoimalla ihon alle H22-soluja. Kolmen päivän H22-soluinjektion jälkeen kasvainhiiriä käsiteltiin CTPG:llä 8 kertaa. Hiirten ruumiinpainoa ja kasvainten kokoa tarkkailtiin osoitetuissa ajankohdissa. Kuten kuviossa 6a on esitetty, hiirten ruumiinpainossa kussakin ryhmässä ei ole merkittävää eroa, mikä viittaa siihen, että valituilla CTPG-annoksilla ei ole ilmeisiä sivuvaikutuksia. Mielenkiintoista on, että kasvaimen kasvu hiirillä, joita hoidettiin sekä 200 mg/kg että 400 mg/kg CTPG:llä, estyi merkittävästi (kuvio 6b). Lisäksi kaksi annosta CTPG-hoitoa paransivat suuresti kasvainhiirten eloonjäämistä (3/7, 3/7) verrattuna kontrolliryhmään (0/7) kokeen lopussa (kuvio 6b). Havaitsimme myös, että CTPG tehosti merkittävästi urospuolisista Kunming-hiiristä eristettyjen splenosyyttien lisääntymistä annosriippuvaisella tavalla (kuvio 6c), mikä viittaa siihen, että CTPG:llä on immunostimuloiva vaikutus.

Keskustelu

TCM:ää on käytetty useiden sairauksien, mukaan lukien syöpien, hoitoon pitkään. On raportoitu, että TCM voi indusoida apoptoosia erityyppisissä kasvainsoluissa sekä ulkoisten (kuolemareseptorivälitteisten) että sisäisten (mitokondrioista riippuvaisten) signalointireittien kautta, mikä aiheuttaa kasvainten vastaisia ​​vaikutuksia [22–25]. Nämä kaksi reittiä voivat aktivoida kaspaasin -8 ja -9 [24, 26]. Täällä havaitsimme, että CTPG tukahdutti merkittävästi H22-solujen kasvua indusoimalla apoptoosia ja solusyklin pysähtymistä. Katkaistun kaspaasin -8 ja -9 tasot nostivat merkittävästi CTPG-hoitoa, mikä viittaa siihen, että sekä ulkoiset että sisäiset signalointireitit osallistuivat apoptoosin induktioon. Edellinen tutkimuksemme osoitti, että CTPG indusoi apoptoosia melanooma B16-F10-soluissa mitokondrioista riippuvaisella reitillä, joka lisäsi katkaistun kaspaasin-9 mutta ei kaspaasin-8 määrää [16]. CTPG saattaa aktivoida erilaisia ​​signalointireittejä erityyppisissä kasvainsoluissa.

Mitokondrioiden kalvon eheyttä säätelevät tiukasti BCL-2-proteiiniperheen jäsenet, mukaan lukien Bax ja Bcl-2 [27, 28]. Baxin ja Bcl{4}}-suhteella on ratkaiseva rooli mitokondrioista riippuvaisessa apoptoosireitissä [29]. CTPG:llä käsitellyissä H22-soluissa Bax/Bcl-2-suhde oli merkittävästi ylöspäin, mikä saattaa aiheuttaa tässä tutkimuksessa havaitun Δψm:n vähenemisen ja sytokromi c:n vapautumisen. Tämän seurauksena pro-kaspaasi{11}} pilkkoutui ja aktivoitui. Lopuksi aktiivisen kaspaasin -8 ja -9 käynnistäjät aktivoivat kaspaasin-3 toteuttajan pilkkomaan PARP:n DNA:n korjaamisen estämiseksi. Yhdessä nämä tulokset viittasivat siihen, että CTPG indusoi apoptoosia H22-soluissa sekä ulkoisten että sisäisten signalointireittien kautta.

Kasvainhiirimallissa CTPG tukahdutti merkittävästi H22 HCC:n kasvua ja paransi suuresti kasvainhiirten eloonjäämistä. Mielenkiintoista on, että CTPG edisti annosriippuvaisesti Kunming-hiirten pernasolujen lisääntymistä, mikä on yhdenmukaista aiemman tutkimuksemme kanssa [16].

Nämä tulokset viittasivat siihen, että CTPG saattaa tukahduttaa H22 HCC:n kasvua hiirissä sekä suoran kasvaimia estävän vaikutuksen että epäsuoran immuunijärjestelmän kautta.

Johtopäätökset

CTPG tukahdutti H22-solujen kasvua sekä in vitro että in vivo ja indusoi apoptoosia H22-soluissa sekä ulkoisten että sisäisten signalointireittien kautta. Nämä tiedot osoittivat, että CTPG saattaa olla mahdollinen ehdokas HCC:n hoitoon.

Lyhenteet

Bax: BCL{0}}assosioitunut X-proteiini; Bcl-2: B-solulymfooma 2; CTPG: Cistanche tubulosa fenyylietanoidiglykosidit; HCC: hepatosellulaarinen karsinooma; HRP: piparjuuriperoksidaasi; MTT: 3-(4, 5-dimetyylitiatsol-2-yyli)-2, 5--difenyylitetratsoliumbromidi; PARP: poly(ADP-riboosi)polymeraasin DNA-korjausentsyymi; TCM: perinteinen kiinalainen lääketiede; Δψm: mitokondrioiden kalvopotentiaali.

Rahoitus

Tätä työtä tukivat Xinjiangin Uygurin autonomisen alueen korkean tason kykyjen esittelyprojekti JL:lle, Kiinan kansallisen luonnontieteiden säätiön apuraha (31460241) JL:lle ja Xinjiangin yliopiston tohtorinkäynnistysrahasto (BS160261 XW:lle ja BS150236:lle). YL).

Tietojen ja materiaalien saatavuus

Tämän tutkimuksen raakatiedot ovat saatavilla asianmukaisesta pyynnöstä vastaavalle tekijälle.

Tekijöiden panokset

JL ja JL suunnittelivat kokeet. PY, JL, AA ja YY suorittivat kokeet. LX, XW ja YL analysoivat tiedot. PY, JL ja JL kirjoittivat käsikirjoituksen. Kaikki kirjoittajat osallistuivat ja hyväksyivät lopullisen käsikirjoituksen.

Eettinen hyväksyntä

Eläintutkimuksen hyväksyi Xinjiangin yliopiston Xinjiangin biologisten resurssien ja geenitekniikan avainlaboratorion eläinkokeiden etiikkakomitea.

Kilpailevat kiinnostuksen kohteet

Kirjoittajat ilmoittavat, että heillä ei ole kilpailevia etuja.

Kustantajan huomautus

Springer Nature pysyy neutraalina julkaistujen karttojen ja institutionaalisten yhteyksien suhteen.

Tekijän tiedot

1 Xinjiang Key Laboratory of Biological Resources and Genetic Engineering, College of Life Science and Technology, Xinjiang University, 666 Shengli Road, Urumqi, Xinjiang 830046, China.

2 College of Life Science, Xinjiang Normal University, 102 Xinyi Road, Urumqi 830054, Xinjiang, Kiina.

3 Xinjiangin lääketieteellisen yliopiston tytäryhtiö Tumor Hospital, Urumqi 830011, Kiina.