Herba Cistanche -uute parantaa mitokondrioiden glutationin tilaa ja hengitystä rotan sydämissä mahdollistaen proteiinien irtoamisen induktion

Ada Hoi-Ling Siu & Kam Ming Ko

Lainatakseni tätä artikkelia: Ada Hoi-Ling Siu & Kam Ming Ko (2010) Herba Cistanche -uute parantaa mitokondrioiden glutationin tilaa ja hengitystä rotan sydämissä ja mahdollistaa irrottavien proteiinien induktion, Pharmaceutical Biology, 48:5, 512-517, DOI: 10.3109/13880200903190985

Linkki tähän artikkeliin: https://doi.org/10.3109/13880200903190985

Ottaa yhteyttä:joanna.jia@wecistanche.com

Abstrakti

HerbaCistanche, kiinalainen yrtti, joka on johdettu koko kasvistaCistanchedeserticolaYC Ma:n (Orobanchaceae) on osoitettu lisäävän mitokondrioiden ATP:n muodostumista ja suojaavan sydänlihaksen iskemiaa/reperfuusiota (I/R) vastaan ​​ex vivo rotilla. Mitokondrioiden roolin määrittelemiseksi Herba Cistanchen sydäntä suojaavassa vaikutuksessa tutkimme Herban vaikutustaCistanchemitokondrioiden glutationin tilan ja toiminnallisten parametrien hoito rotan sydämissä. Käsittely Herban metanoliuutteellaCistancheparantunut mitokondrioiden glutationin tila, vähentynyt mitokondrioiden Ca2 plus -pitoisuus ja lisääntynyt mitokondrioiden kalvopotentiaali. Lisäksi Herbasta eristetyissä mitokondrioissa havaittiin tilan 4 hengityksen lisääntyminen, mikä viittaa irralliseen hengitykseen.Cistanche-käsitellyt rotan sydämet. Mitokondrioiden glutationin tilan ja toiminnallisten kykyjen paraneminen sekä oletettu irtoavien proteiinien induktio voivat liittyä Herban tarjoamaan sydänsuojaukseenCistancheI/R-vaurioilta suojaava hoito.

Cistancheon monia terveyshyötyjä

Avainsanat:HerbaCistanche; mitokondriot; glutationi; kalsium; kalvopotentiaali; mitokondriaalinen hengitys; irrottaminen

Johdanto

Aiemmin iskeemisen sydänlihaksen reperfuusio aiheuttaa joukon mitokondriomuutoksia, mukaan lukien lisääntynyt reaktiivisten happilajien (ROS) tuotanto, Ca2 plus ylikuormitus ja adenosiinitrifosfaatin (ATP) tuotannon väheneminen, jotka kaikki voivat johtaa nekroosiin ja/tai apoptoosiin. välittämä solukuolema (Redegeld et ai., 1992; Lemasters et ai., 1998). Koska mitokondrioilla on ratkaiseva rooli kardiomyosyyttien kohtalon määrittämisessä iskemia/reperfuusio (I/R) -haasteen jälkeen, suoja sydänlihaksen I/R-vauriota vastaan ​​tulisi siksi suunnata mitokondrioiden rakenteellisen ja toiminnallisen eheyden säilyttämiseen. Mitokondrioiden energia-aineenvaihdunnan ylläpitäminen I/R-haasteen jälkeen on erityisen tärkeää, koska sydämen supistumistoiminta on lähes täysin riippuvainen mitokondrioiden tuottamasta ATP:stä. Sydänlihassolut, jotka ovat elossa, mutta eivät supistu, ovat hyvin vähän hyödyllisiä.

Herba Cistanche, koko Cistanche deserticola YC Ma (Orobanchaceae) kuivattu kasvi, on loiskasvi, joka kasvaa pääasiassa Pohjois- ja Koillis-Kiinan aavikkoalueilla. Herba Cistanchea, joka on luokiteltu "Yang-virkistäväksi" yrttiksi kiinalaisessa lääketieteessä, määrätään munuaisten vajaatoimintaan, naisten hedelmällisyyteen ja suolen kuivuudesta johtuvaan ummetukseen seniilipotilailla (Chen, 1998). Aiemmat tutkimukset laboratoriossamme ovat osoittaneet, että Herba Cistanchen metanoliuute lisää sydänlihaksen ATP:n tuotantokapasiteettia (Leung & Ko, 2008) ja suojaa sydänlihaksen I/R-vaurioilta rotilla (Leung, 2006). Kun ATP:n tuotantokapasiteetin stimulointia rinnastettiin mitokondrioiden elektronien kuljetuksen tehostamisen kanssa (Leung & Ko, 2008), Herba Cistanche -hoidon tarjoama sydänsuojaus I/R-vaurioita vastaan ​​liittyi sydänlihaksen ATP:n ehtymisen vähenemiseen (Leung, 2006). Tässä tutkimuksessa mitokondrioiden roolin määrittelemiseksi Herba Cistanchen sydäntä suojaavassa vaikutuksessa tutkimme Herba Cistanche -hoidon vaikutusta mitokondrioiden glutationin tilaan, Ca2 plus -pitoisuuteen, kalvopotentiaaliin ja hengitysnopeuteen rotan sydämissä.

cistanchedeserticolan edut

Materiaalit ja menetelmät

Yrttimateriaalia

Herba Cistanche ostettiin paikalliselta (Hongkongissa sijaitsevalta) yrttikauppiaalta (Lee Hoong Kee). Toimittaja varmisti yrtin, ja lahjakorttinäyte (HKUST00301) talletettiin Hongkongin tiede- ja teknologiayliopiston (HKUST) biokemian osastolle. Yrtistä tehtiin metanoliuutto aiempien tutkimusten perusteella, jotka osoittivat, että tällainen uute lisäsi mitokondrioiden ATP:n muodostumista ja suojasi I/R-vauriolta rotan sydämissä (Leung, 2006; Leung & Ko, 2008). Lyhyesti sanottuna Herba Cistanche (400 g) leikattiin pieniksi paloiksi ja uutettiin kuumentamalla palautusjäähdyttäen 300 ml:ssa metanolia 60 asteessa 2 tunnin ajan, kuten aiemmin on kuvattu (Leung & Ko, 2008). Toimenpide toistettiin kahdesti. Yhdistetty uute kuivattiin haihduttamalla liuotin alipaineessa; saanto oli 42 prosenttia (w/w) raakayrtin määrästä. Uute säilytettiin 4 asteessa käyttöön asti. Vaikka kiinalaiset yrtit uutetaan perinteisesti vedellä suun kautta nautittavaksi, aiemmassa tutkimuksessamme käytettiin metanolia näytteiden käsittelyn ja varastoinnin helpottamiseksi (Yim & Ko, 2002), ja havaitsimme metanolin uuttamisen kaikilta osin tyydyttäväksi.

Eläinten hoito ja huumehoito

Aikuisia Sprague-Dawley-naarasrottia (8–10 viikon ikäisiä; 2{{10}}0–230 g) pidettiin kosteussäädellyssä huoneessa, jossa oli 12 tunnin pimeä/valo kierto, noin 22 astetta ja sallittua ruokaa ja vettä ad libitum. Eläimet jaettiin satunnaisesti eri ryhmiin, viisi eläintä kussakin ryhmässä. Rotat saivat Herba Cistanche -uutetta mahalaukunsisäisesti (0,2 g/ml vedessä) 0,5 g/kg tai 1,0 g/kg kolmena peräkkäisenä päivänä. Kontrollieläimet (käsittelemättömät) saivat vain vettä. Kaksikymmentäneljä tuntia viimeisen annostelun jälkeen otettiin nukutetuista eläimistä sydämen kammiokudosta biokemiallista analyysiä varten. Kaikki kokeelliset protokollat ​​hyväksyttiin Research Practice Committee, HKUST, toimesta.

Mitokondriofraktioiden valmistus

Jauhetut sydämen kammiokudokset (~{0}},6 g) homogenisoitiin 10--kertaisessa (w/v) ylimäärässä jääkylmää sakkaroosipuskuria [0,32 M sakkaroosia, 1 mM etyleenidiamiinitetraetikkahappoa (EDTA), 50 mM Tris/HCl; pH 7,4] käyttäen teflon-lasihomogenisaattoria, 4000 rpm, 25–30 vedolla. Mitokondriopelletit valmistettiin kudoshomogenaateista sentrifugoimalla 800 x g 4 asteessa 30 minuutin ajan, ja puhtaus määritettiin mittaamalla sukkinaattidehydrogenaasin ja laktaattidehydrogenaasin suhteelliset spesifiset aktiivisuudet supernatantissa ja pelletissä, kuten aiemmin on kuvattu (Evans, 1992). Mitokondriopelletit suspendoitiin 1 ml:aan homogenisoivaa puskuria.

Mitokondrioiden vähentyneen glutationin ja hapettuneen glutationin tasojen mittaus

Mitokondrioiden vähentyneet glutationi (GSH) tasot määritettiin entsymaattisesti käyttämällä 5,59-ditiobis(2- nitrobentsoehappoa) (DTNB) ja glutationireduktaasia (GR) Griffithistä (198{{17}) muokatun protokollan mukaisesti. }). Alikvootti (210 µL) mitokondriofraktiosta sekoitettiin 90 µl:aan 10 % (tilavuus/tilavuus) 5-sulfosalisyylihappoa (SSA) ja seosta sentrifugoitiin nopeudella 600 x g 10 minuuttia. Oksidoituneen glutationin (GSSG) tasojen mittaamiseksi sekoitettiin 100 µl SSA-supernatanttia 10 µl:aan 20-prosenttista (w/v) 2-vinyylipyridiiniä ja 10 µl:aan 60-prosenttista (v/v) trietanoliamiinia mikrofugiputkissa. Jokaisen putken annettiin seistä huoneenlämpötilassa vähintään 1 tunti. Reaktioseosta, joka sisälsi 0,63 mM DTNB:tä ja 0,053 mM NADPH:ta (pelkistetty nikotiiniamidiadeniinidinukleotidi fosfaattina) fosfaattipuskurissa (0,1 M, 5 mM Na2EDTA:lla; pH 7,5), esi-inkuboitiin 30 asteessa 2 minuuttia. Alikvootti (30 µL) joko SSA-näytteen supernatanttia (kokonaisglutationi) tai GSSG-näytettä lisättiin 96-kuoppamikrotiitterilevyn kuoppaan ja 180 µl esilämmitettyä reaktioseosta, joka sisälsi 0,525 U:ta. Seuraavaksi lisättiin /ml GR. Absorbanssin muutoksia aallonpituudella 412 nm tarkkailtiin spektrofotometrisesti 5 minuutin ajan. GSH:n ja GSSG:n pitoisuudet arvioitiin kalibrointikäyristä käyttämällä GSH:ta ja GSSG:tä [liuotettuna 3 % (w/v) SSA:han] standardeina ja ilmaistuna nmol/mg proteiinia. GSH-tasot arvioitiin vähentämällä kaksinkertainen GSSG:n määrä GSH:n kokonaismäärästä.

Mitokondrioiden Ca2 plus -pitoisuuden mittaus

Mitokondrioiden Ca2 plus -pitoisuus mitattiin käyttämällä Ca2 plus -herkkää fluoresenssikoetinta, Fluo-5N AM esteriä (Molecular Probes, Eugene, OR) käyttäen Victor2 Multi-Label Counter -laitetta (malli 1420; PerkinElmer, Turku, Suomi), kuten Menze et al. (2005). Ca2 plus dissosiaatiovakiot (Kd-arvot) määritettiin käyttämällä Ca2 plus -kalibrointisarjaa, joka oli voimassa pitoisuusalueella 1–1000 µM; arvioidut Kd-arvot olivat 90–100 µM, erittäin luotettavasti sarjan valmistajan tietojen mukaan. Alikvootti (25 µl) mitokondriofraktiosta (0,5 mg proteiinia/ml lopullinen konsentraatio) sekoitettiin 25 µl:n kanssa inkubaatiopuskuria {100 mM KCl ja 30 mM MOPS [3-(N-morfolino)propaanisulfonihappo]; pH 7,2} 96-kuoppa mustassa mikrotiitterilevyssä. Seosta inkuboitiin 25 asteessa 15 minuuttia; Sitten lisättiin 25 µl digitoniinia (50 µg/ml) ja 25 µl Fluo-5N AM-esteriä (1 µM 0,005 % (w/v) Pluronic F-127:ssa). Helpottamalla kalvon läpäisyä digitoniini välitti fluoresoivan väriaineen pääsyä mitokondrioihin. Havaitsimme, että Fluo-5N-tasot rotan sydämen mitokondriovalmisteissa nousivat 20-kertaisesti digitoniinin läsnä ollessa. Reaktioseoksia inkuboitiin 25 asteessa 30 minuuttia, ja fluoresenssilukemat mitattiin viritysaallonpituudella 488 nm ja emissioaallonpituudella 532 nm. Mitokondrioiden Ca2 plus -pitoisuudet arvioitiin käyttämällä kalibrointikäyrää ja ilmaistiin µmol/mg proteiinia.

Mitokondrioiden kalvopotentiaalin mittaus

Kalvopotentiaali (ΔΨm) arvioitiin menetelmällä, joka oli modifioitu Bonavitan et al. (2003), käyttäen fluoresoivaa väriainetta, lipofiilistä kationista koetinta 5,596,69- tetrakloori-1,193,39-tetraetyylibentsimidatsolyylikarbosyaniinijodidi, jota kutsutaan yleisesti nimellä JC-1. Alikvootteja (50 µl) mitokondriofraktioista (säädetty arvoon 1 mg proteiinia/ml) inkuboitiin 37 asteessa 50 µl:n kanssa substraattiliuosta (sisältää 6 mM pyruvaattia ja 6 mM malaattia), 25 µl:n esikäsiteltyä adenosiinidifosfaattiliuosta (30 µl ADP) ja 25 µl 3 µM JC-1, pimeässä. ΔΨm-arvot saatiin mittaamalla fluoresenssi aallonpituudella 535 nm (FL1) versus 580 nm (FL2) käyttämällä Victor2 Multi-Label Counteria. JC-1 muodostaa aggregaattia mitokondrioissa, mikä johtaa korkeisiin FL2-fluoresenssiarvoihin ja osoittaa normaalin mitokondriopotentiaalin. ΔΨm:n häviäminen johtaa FL2-fluoresenssin vähenemiseen (JC-1 aggregoituu vähemmässä määrin) ja samanaikaiseen FL1-fluoresenssin lisääntymiseen (JC-1-monomeereistä). Tiedot ilmaistiin FL1/FL2-fluoresenssiarvojen suhteina. Karbonyylisyanidi-m-kloorifenyylihydratsonia (CCCP), ΔΨm:n romahdusainetta, käytettiin määrityksen validointiin.

Mitokondrioiden hengityksen mittaus

Mitokondrioiden hengitysnopeus mitattiin 37 asteessa käyttämällä Hansatech Oxygraph-Plus -laitetta, joka oli varustettu Clark-tyyppisellä happielektrodilla (Sarasota, FL, USA). Mitokondriofraktiot (0,6 mg proteiinia/ml) suspendoitiin hengityspuskuriin, joka sisälsi 125 mM KCl:a, 20 mM MOPS:ia, 10 mM Trisiä, 0,5 mM etyleeniglykolitetraetikkahappoa (EGTA) ja 2 mM KH2PO4:a; pH 7,2. Kun oli inkuboitu 37 asteessa 2 minuuttia, kukin näyte sai 50 ui substraattiliuosta (5 mM pyruvaattia ja 5 mM malaattia). Hengitysnopeudet mitattiin 1 mM ADP:n läsnä ollessa (tila 3) ja kaiken ADP:n fosforylaation jälkeen ATP:ksi (tila 4). Tilan 3:n tilan 4 hengitystiheyden suhde on hengityskontrolliindeksi, joka osoittaa hengityksen ja fosforylaation välisen kytkennän tiiviyden (Javadov et al., 2005; Kuwabara et al., 1997). Ennen substraattiliuoksen lisäämistä tilan 1 hengitysnopeus mitattiin tilan 2 hengityksen alkamiseen asti, ja tilan 2 hengitysnopeus arvioitiin ennen ADP:n lisäämistä.

Tilastollinen analyysi

Tiedot analysoitiin yksisuuntaisella varianssianalyysillä (ANOVA) useiden ryhmien vertailuja varten. Vähiten merkitsevien erojen (LSD) arvoja käytettiin tunnistamaan merkittäviä eroja kahden ryhmän välillä, kun p-arvot olivat <>

Cistancheonlääkinnällinenarvo

Tulokset

Kuten kuvista 1 ja 2 näkyy, käsittely Herba Cistanchen metanoliuutteella (0,5 tai 1.0g/kg/vrk × 3) paransi merkittävästi mitokondrioiden glutationin tilaa rotan sydämissä. Tästä on osoituksena annoksesta riippuvainen GSH-tason nousu (11–30 prosenttia) ja GSSG-tason lasku (31 prosenttia).

Herba Cistanche -hoito alensi annoksesta riippuen mitokondrioiden Ca2 plus -tasoja rotan sydämissä verrokkeihin verrattuna; suppressio oli 41 prosenttia annoksella 1.0 g/kg (kuva 3).

Herba Cistanche -hoito lisäsi mitokondrioiden ΔΨm:ää, mistä on osoituksena FL1/FL2-suhteen lasku (14–16 prosenttia). CCCP (100 µM) aiheutti ΔΨm:n romahtamisen, kuten FL1/FL2-suhteen kasvu osoittaa (kuva 4).

Herba Cistanche -hoito tehosti mitokondrioiden hengitystä, mistä on osoituksena huomattavasti korkeampi tilan 3 hengitysnopeus (84 prosenttia) koe-eläimissä verrokkeihin verrattuna (taulukko 1). Tilan 2 ja tilan 4 hengitystasot nousivat 47 ja 80 prosentilla, vastaavasti, mutta tilan 4 hengityksen stimulaatio tukahdutti täysin 1 mM guanosiini-5'-difosfaatilla, joka on proteiinin 2/3:n irtoamisen estäjä. Herba Cistanche -hoito ei vaikuttanut hengityskontrolliindeksiin, joka on arvioitu tilan 3/tilan 4 hengitystiheyden suhteella.

Cistancheonhermoja suojaavaominaisuuksia

Keskustelu

Herba Cistanchella käsitellyistä rotan sydämistä eristetyt mitokondriot osoittivat parantunutta glutationitilaa, kuten kohonneet GSH-tasot ja alentuneet GSSG-tasot osoittavat. Mitokondrioiden glutationin redox-tilan ylläpitäminen on kriittistä sydänsuojauksen kannalta I/R-vaurioita vastaan ​​(Chiu & Ko, 2003). Sytosolinen Ca2 plus -pitoisuus kasvaa sydänlihasiskemian aikana sisäkalvon Ca2 plus uniporterin kautta (Ataka et ai., 1992; Grover et ai., 1990), mikä johtaa mitokondriaaliseen Ca2 plus -kerääntymiseen. Tuloksemme osoittavat, että hoito Herba Cistanche -uutteilla paransi mitokondrioiden glutationin redox-tilaa ja alensi mitokondrioiden Ca2 plus -tasoa, mikä voi tarjota suojan sydänlihaksen I/R-vaurioita vastaan ​​(Leung, 2006). Herba Cistanche -hoidon kyvyttömyys alentaa GSSG- ja Ca2 plus -tasoja edelleen korkeammalla annoksella 1,0 g/kg saattaa liittyä itserajoittuvan säätelymekanismin olemassaoloon, joka vaikuttaa glutationin redox-potentiaaliin ja kalsiumin tilaan mitokondrioissa.

Mitokondriot synnyttävät sähkökemiallisen protonigradientin sisäkalvon läpi elektronien kuljetuksen avulla. ATP-syntaasi käyttää tätä gradienttia ADP:n fosforyloimiseen ATP:ksi. Vähentynyt mitokondrioiden kalvopotentiaali, kuten hypoksiassa/uudelleenhapettumisessa viljeltyjen sydänlihassolujen vaurion jälkeen (Chiu et al., 2008), johtaa ATP:n muodostumisen vähenemiseen. Herba Cistanche -hoito, joka voi lisätä sydänlihaksen mitokondrioiden kalvopotentiaalia, mahdollisesti lisää ATP:n muodostumista, erityisesti iskeemisen reperfuusion jälkeisenä aikana. Jälleen itserajoittuvan säätelymekanismin olemassaolo saattaa selittää, miksi Herba Cistanche -hoidon vaikutukset mitokondrioiden kalvopotentiaaliin eivät ole annoksesta riippuvaisia.

Herba Cistanche -hoito lisäsi huomattavasti State 3 -hengitysnopeutta rotan sydämen mitokondrioissa hapenkulutuksen perusteella arvioituna. Tämä havainto on yhdenmukainen mitokondrioiden ATP:n tuotantokapasiteetin in vitro ja situ -mittauksista saatujen tulosten kanssa (Leung & Ko, 2008). Kiinnostavaa kyllä, vaikka Herba Cistanche -hoito alensi sydänlihaksen ATP:n vakaan tilan tasoa (tietoja ei esitetty), hoito lisäsi mitokondrioiden ATP:n muodostumista. Kytkemättömän hengityksen osallisuus voi selittää nämä ristiriitaiset havainnot. Kytkemätön oksidatiivinen fosforylaatio tapahtuu, kun protonit siirretään mitokondrioiden sisäkalvon läpi takaisin mitokondriomatriisiin, mikä hajottaa elektroninkuljetusketjun muodostaman kalvopotentiaalin. Tämä johtaa ATP:n muodostumista ohjaavan protoni-moottorivoiman vähenemiseen (Garvey, 2003). Tämän seurauksena Ca2 plus -pitoisuus ja ROS-tuotanto mitokondrioissa heikkenevät dramaattisesti (Teshima et al., 2003). Tämä ehdotus on yhdenmukainen tämän tutkimuksen tulosten kanssa, jotka osoittivat mitokondrioiden Ca2 plus -tasojen laskua Herba Cistanchella käsitellyissä sydämissä. Mitä tulee kytkemättömään hengitykseen, Herba Cistanche -käsittely voi indusoida irrottavien proteiinien (UCP) synteesin. UCP:iden tiedetään erottavan oksidatiivisen fosforylaation, ja UCP1:n ilmentymisen siirtogeenisissä hiirissä sydämissä suojataan I/R-indusoidulta sydänlihasvauriolta (Hoerter et al., 2004). Puriininukleotididifosfaatit ja -trifosfaatit (kuten ADP, ATP, guanosiinidifosfaatti (GDP) ja GTP) estivät UCP:iden irrotusvaikutusta (Echtay et al., 2002). Tässä tutkimuksessa mitokondrioparametrit, kuten kalvopotentiaali ja hengitysnopeus, mitattiin ADP:n (substraattina) läsnä ollessa; UCP:iden irrotusvaikutus estyi siksi. Kuitenkin, kun mitokondrion tilan 4 hengitysnopeus mitattiin ilman ADP:tä, tämä nopeus oli korkeampi Herba Cistanchella käsitellyistä sydämistä valmistetuissa mitokondrioissa kuin käsittelemättömien kontrollien sydämissä. Tilan 4 hengitysnopeus heijastaa mitokondrioiden hapenkulutusta, kun protonit vuotavat takaisin mitokondriomatriisiin sellaisen mekanismin kautta, johon ei liity F1F0 -ATPaasia (Garvey, 2003). UCP:iden mahdollista osallistumista Herba Cistanchen aiheuttamaan tilan 4 hengityksen lisääntymiseen tukee havainto, että bruttokansantuote tukahdutti tämän lisääntymisen (Bento et al., 2007).

Yhteenvetona voidaan todeta, että Herba Cistanche -hoito voi parantaa mitokondrioiden glutationin tilaa, vähentää mitokondrioiden Ca2 plus -tasoa ja lisätä mitokondrioiden kalvopotentiaalia ja hengitysnopeutta rotan sydämessä. Mitokondrioiden glutationin tilan ja toiminnallisten kykyjen paraneminen ja oletettu UCP:iden induktio voivat liittyä Herba Cistanche -hoidon tarjoamaan sydänsuojaukseen I/R-vaurion jälkeen.

Cistanchevoi lisätämitokondriaalinenhengitys korko

Ilmoitus kiinnostuksesta

Kirjoittajat eivät ilmoittaneet eturistiriitoja. Tekijät vastaavat kirjoituksen sisällöstä ja kirjoittamisesta.

Viitteet

Ataka K, Chen D, Levitsky S, Jimenez E, Feinberg H (1992): Ikääntymisen vaikutus solunsisäiseen Ca2 plus:iin, pHi:iin ja supistumiskykyyn iskemian ja reperfuusion aikana. Levikki 86 II371–II376.

Bento LM, Fagian MM, Vercesi AE, Gontijo JA (2007): NH4 Cl:n aiheuttaman systeemisen metabolisen asidoosin vaikutukset munuaisten mitokondrioiden kytkeytymiseen ja kalsiumin kuljetukseen rotilla.

Nephrol Dial Transplant 22: 2817–2823. Bonavita F, Stefanelli C, Giordano E, Columbaro M, Facchini A, Bonafe F, Caldarera CM, Guarnieri C (2003): H9c2 sydämen myoblastit läpikäyvät apoptoosin iskemiamallissa, joka koostuu seerumin puutteesta ja hypoksiasta: PMA:n esto. FEBS Lett 536: 85–91.

Chen P (1998): Tonic Herbs. Edistyksellinen TCM-sarja. Beijing, Science Press, s. 233–320.

Chiu PY, Ko KM (2003): Mitokondrion glutationin tilan ja ATP:n tuotantokapasiteetin ajasta riippuvainen parannus skismdriini B -käsittelyllä vähentää rotan sydämien herkkyyttä iskemia-reperfuusiovaurioille.

Biofactors 19: 43-51. Chiu PY, Luk KF, Leung HY, Ng KM, Ko KM (2008): Schisandrin B -stereoisomeerit suojaavat hypoksiasta/uudelleenhapetuksen aiheuttamalta apoptoosilta ja estävät niihin liittyviä muutoksia Ca2 plus -indusoidussa mitokondrioiden läpäisevyyden siirtymisessä ja mitokondrioiden kalvopotentiaalissa H9c2-sydänlihassoluissa. Life Sci 82: 1092-1101.

Echtay KS, Roussel D, St Pierre J, Jekabsons MB, Cadenas S, Stuart JA, Harper JA, Roebuck SJ, Morrison A, Pickering S, Clapham JC, Brand MD (2002): Superoksidi aktivoi mitokondrioiden irrotusproteiineja. Nature 415: 96–99.

Evans WH (1992): Kalvojen ja soluorganellien eristäminen ja karakterisointi. Julkaisussa: Rickwood D, toim., Preparative Centrifugation. Käytännön lähestymistapa. New York, Oxford University Press, s. 233–270.

Garvey WT (2003): Proteiinin 3 irrottamisen rooli ihmisen fysiologiassa. J Clin Invest 111: 438-441. Griffith OW (1980): Glutationin ja glutationidisulfidin määritys käyttämällä glutationireduktaasia ja 2-vinyylipyridiiniä.

Anal Biochem 106: 207-212. Grover GJ, Dzwonczyk S, Sleph PG (1990): Ruteniumpunainen parantaa iskemian jälkeistä supistumistoimintoa eristetyissä rotan sydämissä. J Cardiovasc Pharmacol 16: 783-789.

Hoerter J, Gonzalez-Barroso MD, Couplan E, Mateo P, Gelly C, Cassard-Doulcier AM, Diolez P, Bouillaud F (2004): Siirtogeenisten hiirten sydämessä ekspressoitunut mitokondrioiden irrotusproteiini 1 suojaa iskeemis-reperfuusiovaurioilta. Levikki 110: 528–533.

Javadov S, Huang C, Kirshenbaum L, Karmazyn M (2005): NHE-1 esto parantaa mitokondrioiden heikentynyttä läpäisevyyttä ja hengitystoimintoa infarktin jälkeisen uudelleenmuodostumisen aikana rotalla. J Mol Cell Cardiol 38: 135-143.

Kuwabara M, Takenaka H, ​​Maruyama H, Onitsuka T, Hamada M (1997): Pitkittyneen hypotermisen iskemian ja reperfuusion vaikutus hapenkulutukseen ja mekaaniseen kokonaisenergiaan rotan sydänlihaksessa: osallistuminen mitokondrioiden oksidatiiviseen fosforylaatioon. Transplantation 64: 577–583.

Lemasters JJ, Nieminen AL, Qian T, Trost LC, Elmore SP, Nishimura Y, Crowe RA, Cascio WE, Bradham CA, Brenner DA, Herman B (1998): Mitokondrioiden läpäisevyyden muutos solukuolemassa: yleinen mekanismi nekroosissa, apoptoosi ja autofagia. Biochim Biophys Acta 1366: 177-196.

Leung HY (2006): Herba Cistanchen vaikutus mitokondrioiden ATP:n muodostukseen: "Yang-virkistyksen" farmakologinen perusta. MPhil Thesis, Hongkongin tiede- ja teknologiayliopisto, s. 67–69.

Leung HY, Ko KM (2008): Herba Cistanche -uute lisää mitokondrioiden ATP:n muodostumista rotan sydämissä ja H9C2-soluissa. Pharma Biol 46: 418-424.

Menze MA, Hutchinson K, Laborde SM, Hand SC (2005): Mitokondrioiden läpäisevyyden muutos äyriäisissä Artemia franciscana: kalsiumin säätelemän huokosen puuttuminen syvän kalsiumin varastoinnin edessä. Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol 289: R68–R76.

Redegeld FA, Moison RM, Koster AS, Noordhoek J (1992): ATP:n, mutta ei GSH:n, väheneminen vaikuttaa rotan maksasolujen elinkelpoisuuteen. Eur J Pharmacol 228: 229-236.

Teshima Y, Akao M, Jones SP, Marban E (2003): Proteiinin yli-ilmentymisen irrottaminen{1}} estää mitokondrioiden kuolemanreitin sydänlihassoluissa. Circ Res 93: 192–200.

Yim TK, Ko KM (2002): Kiinalaisten tonisoivien yrttien antioksidantti- ja immunomodulatoriset toimet. Pharm Biol 40: 329-335.