Fenyylietanoli-glykosidipitoisen Cistanche Deserticola -uutteen suolistossa kulkemisen arviointi Caco{1}}-solujen yksikerroksisessa mallissa

Johdanto

Caco{0}}-solulinjalla, joka oli peräisin ihmisen paksusuolen adenokarsinoomista, on enterosyyttien kaltaisia ominaisuuksia. Normaaleissa olosuhteissa Caco-2-solut eroavat spontaanisti kypsistä soluista ja muodostavat ehjiä yksikerroksisia kerroksia. Viereiset solut kiinnittyvät tiukkojen liitoskohtien kautta, jotka on muodostettu yksikerroksen apikaaliselle puolelle, mikä voi erottaa passiivisestija kuljetti aktiivisesti lääkkeitä epiteelikerroksen läpi. Johtuen morfologisesta ja biokemiallisesta samankaltaisuudesta normaaleiden enterosyyttien kanssa, Caco{0}}-solujen yksikerroksiset kerrokset toimivat hyvin hyväksyttynä in vitro -mallina tutkittaessa lääkkeiden imeytymispotentiaalia ja kuljetusominaisuuksia suolistossa.

Toisin kuin kemikaalit, kasviuutteet (PE) ovat seoksia, joiden biologista aktiivisuutta ja aktiivisia ainesosia ei usein tunnisteta hyvin. Lisäksi PE:n suoliston kuljetusominaisuudet, toisin kuin sen aineosien ominaisuudet, liittyvät läheisesti kliiniseen käyttöön. Caco{0}}-solun yksikerroksisen testinäytteen vuomittaukset sisältävät yleensä kemiallisia menetelmiä, kuten HPLC, LC/MS jne. Vaikka nämä menetelmät ovat tehokkaita työkaluja, ne ovat monimutkaisia, aikaa vieviä, kalliita ja toisinaan vaativat kehittyneitä laitteita. Vielä tärkeämpää on, että yksittäinen tai vähemmistökomponentti ei voi heijastaa PE kokonaisuutena. Siten on luotava uusi, ainesosien määrittämisestä riippumaton lähestymistapa PE:n kuljetusominaisuuksien tunnistamiseksi ja arvioimiseksi.

Cistanche deserticola YC Ma (CD), holoparasiittikasvi, on yleinen perinteinen kiinalainen lääketiede, jota käytetään pääasiassa munuaisten vajaatoiminnan, kehon heikkouden ja ummetuksen hoitoon, ja nämä käyttötavat on kirjattu virallisesti Kiinan farmakopeaan.Fenyylietanoidiglykosidit (PhG:t), mukaan lukien ekinakosidi (EC), akteosidi (AC) ja isoakteosidi (IS) jne., ovat polyfenoliyhdisteiden luokka. Niitä pidetään yhtenä Cistanche-lajien tärkeimmistä bioaktiivisista ainesosista. Farmakologiset tutkimukset ovat osoittaneet, että PhG:iden bioaktiivisuus on monipuolinen ja sisältää antioksidanttisia, väsymystä, maksaa suojaavia, immunomoduloivia, anti-inflammatorisia ja neuroprotektiivisia vaikutuksia. PhG:iden suoliston kuljetusominaisuuksia ei kuitenkaan ole tutkittu. Tässä tutkimuksessa tutkimme CD:stä peräisin olevan PhG-rikkaan uutteen (PRE) suoliston läpäisevyyttä integroituna järjestelmänä ja kolmen suuren PhG:n (AC, IS ja EC) läpäisevyyttä erilaistuneissa Caco{4}}-soluissa. Tuloksemme osoittivat, että PRE kuljetetaan ensisijaisesti huonosti imeytyneen passiivisen diffuusion kautta alas pitoisuusgradienttia pitkin ilman ulosvirtausta, mikä tarjoaa farmakokineettisen perustan PhG:iden kliiniselle käytölle CD:ssä.

Cistanche tubulosa extract

LUONNOLLINEN CISTANCHE TUBULOSA SEKSUAALISTEN TOIMINTOJEN PARANTAMISEEN PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Materiaalit ja menetelmät

Materiaalit

The human intestinal Caco-2 cell line was obtained from the American Type Culture Collection (ATCC, Rockville, MD, USA). AC, IS, and EC (>98 %) ostettiin Must Biotechnology Co:lta (Chengdu, Kiina). Dulbeccon modifioidun Eagle-alustan (DMEM), sikiön naudan seerumin (FBS) ja ei-välttämättömät aminohapot (NEAA) tuotti Gibco BRL (Grand Island, NY, USA). 6-kuoppa TranswellTM-levyt (inserttikalvon kasvuala 4,67 cm2) hankittiin yhtiöltä Corning (Costar) Inc. (Tewksbury, MA, USA). Rotan hännän kollageeni saatiin Sigma-Aldrichilta (St. Louis, MO, USA). Kaikki reagenssit ja kemikaalit HPLC-analyysiä varten olivat analyyttistä laatua.

PRE:n valmistaminen CD:ltä

Ilmakuivattu CD-materiaali jauhettiin ja uutettiin perkolaatiolla 70 % etanolilla. PhG-rikas fraktio valmistettiin aiemmin kuvatulla tavalla ja uutettiin vedellä kyllästetyllä n-butyylialkoholilla. Uuteliuos konsentroitiin ja kuivattiin alipaineessa. Makrohuokoinen hartsi-UV-spektrofotometria mittasi PhG-pitoisuuden 78,4 %. Lopullinen näyte edusti 1,75 % raaka-aineen saantoa kuivapainosta. Saatu näyte säilytettiin -20 asteessa jatkokäyttöön asti.

AC:n, IS:n ja EC:n määritys HPLC:llä

LC-liuosohjelmistolla varustettua Shimadzu HPLC -järjestelmää käytettiin AC:n, IS:n ja EC:n sisällön määrittämiseen PRE:ssä. Käänteisfaasi Intersil C18 -kolonnia (4,6 mm × 25{5}} mm, 5 μm) käytettiin ja pidettiin huoneenlämpötilassa. Liikkuvat faasit olivat asetonitriiliä ja vettä, joka sisälsi 0,1 % fosforihappoa (tilavuus/tilavuus) gradienttieluoimalla (taulukko 1) virtausnopeudella 1,0 ml/min. UV-spektrofotometrin detektori asetettiin 334 nm:iin. AC- ja IS-virran määrittämiseksi tarkasti kehitimme uuden HPLC-fluoresenssin havaitsemismenetelmän (HPLC-FLD). Rakenneanalyysin ja fluoresenssin aallonpituusskannauksen (tietoja ei esitetty) jälkeen saimme optimaaliset fluoresenssin havaitsemisolosuhteet AC:lle (esim. 338 nm, Em: 448 nm) ja IS:lle (esim. 320 nm, Em: 434 nm).

HPLC-analyysimenetelmä validoitiin käyttämällä seuraavia suorituskykyominaisuuksia: stabiilisuus, lineaarisuus, herkkyys, tarkkuus (päivien sisäinen ja välinen vaihtelu) ja tarkkuus. Kuljetuspuskurissa olevia analyyttejä säilytettiin 25 asteessa pimeässä 24 tuntia ja niiden stabiilisuus mitattiin. Analyytit olivat erittäin stabiileja C-vitamiinin läsnä ollessa (0,4 %), koska suhteellinen standardipoikkeama (RSD) piikin alueilla oli < 3,5 %. Lineaarinen regressioyhtälö, korrelaatiokerroin, lineaarisuuden vaihteluväli, LOD ja LOQ AC:lle, IS:lle ja EC:lle on esitetty taulukossa 2. LOD:t (18–30 nM) ja LOQ:t (60–100 nM) arvot osoittavat, että HPLC-FLD- ja HPLC-UV-menetelmät ovat erittäin herkkiä. Menetelmän tarkkuutta ilmaisevat RSD-arvot olivat kaikki < 2 % päivän sisäiselle ja väliselle vaihtelulle, mikä osoittaa hyvää tarkkuutta. Palautumisen arviointia varten AC, IS ja EC lisättiin kuljetuspuskuriin kolmen (korkean, keskisuuren ja matalan) konsentraatiotason tuottamiseksi. Analyyttien menetelmän saantoarvot on koottu taulukkoon 3. Keskimääräiset saannot vaihtelivat välillä 90,0 % - 96,4 %, mikä osoittaa hyvää tarkkuutta. Yhteenvetona voidaan todeta, että vakiintuneet HPLC-menetelmät ovat tyydyttäviä lineaarisuuden, herkkyyden, tarkkuuden ja tarkkuuden suhteen AC:n, IS:n ja EC:n kvantifiointiin kuljetuspuskurissa.

PRE:n määritys biomääritysjärjestelmällä

Biomääritys (kokonaisantioksidanttikapasiteetti) perustui aiemmin kuvaamaan FRAP-määritykseen (ferric pelkistävä/antioksidanttivoima) [16] ja validoitu lineaarisuuden ja tarkkuuden suhteen (päivien sisäinen ja välinen vaihtelu). Biomääritysmenetelmän lineaarisuus määritettiin kalibrointikäyrien perusteella. Lineaarisuuden pitoisuusalue oli 0.0625 − 40 ug/ml (y=0.0258x+0.0968, R2=0.996). Vakiintuneen biomääritysmenetelmän tarkkuus määritettiin päivänsisäisen ja päivän välisen vaihtelun suhteen PRE-analyysiä varten (10,0 ug/ml). Menetelmän päivänsisäinen toistettavuus määritettiin viiden peräkkäisen saman päivän määrityksen perusteella. Päivien välinen toistettavuus mitattiin viiden peräkkäisen määrityksen perusteella kolmena eri päivänä. Menetelmän tarkkuuden RSD-arvot olivat 1,014 % ja 4,72 % päivän sisäiselle vaihtelulle ja 4,72 %, mikä osoittaa hyvää tarkkuutta. Näin ollen vakiintunut biomääritysmenetelmä on tyydyttävä lineaarisuuden, tarkkuuden ja tarkkuuden suhteen PRE:n kvantifiointiin kuljetuspuskurissa.

Soluviljely

Caco{{0}}-soluja viljeltiin 37 asteessa ja 95 %:n suhteellisessa kosteudessa ilmakehässä, joka sisälsi 5 % CO2:ta ja väliainetta, joka koostui DMEM:stä, 10 % FBS:stä, 1 % NEAA:sta, 1 %:sta L-glutamiinista ja penisilliinistä. (100 U/ml) ja streptomysiini (100 ug/ml). Elatusaine vaihdettiin joka toinen päivä solujen kasvun ja erilaistumisen aikana. Soluja kasvatettiin 75-cm2:n muovipulloissa ja kerättiin 3–5 päivän välein 0,05-prosenttisella EDTA-trypsiinillä. Kuljetuskokeita varten solut kylvettiin tiheydellä 1 x 105 solua/cm2 Transwell-inserteille, jotka oli päällystetty kollageenilla. Noin 21 päivää kylvön jälkeen yksikerroksia käytettiin kuljetuskokeissa. Niiden eheys määritettiin mittaamalla trans-epiteliaalinen sähkövastus (TEER) yksikerrosten poikki EVOM:lla, joka oli varustettu ENDOHM-SNAP:lla (World Precision Instruments, Inc., USA). Caco-2-solujen yksikerroksen TEER-arvojen piti ylittää 500 O∙cm2.

cistanche tubulosa extract

LUONNOLLINEN CISTANCHE TUBULOSA rauhoittavaan ja laksatiiviseen PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Kuljetuskokeita

Yksikerros pestiin kuljetuspuskurilla (P-puskuri, joka sisälsi 10 mM HEPES:ä, 1 mM natriumpyruvaattia, 10 mM glukoosia, 3 mM CaCl2:a ja 145 mM NaCl:a, pH 7,4) ja esi-inkuboitiin sitten 20 minuuttia. 37 asteessa. Kuljetuspuskurin poistamisen jälkeen tuoretta kuljetuspuskuria, joka sisälsi testinäytteitä, lisättiin apikaaliseen (AP) kammioon (1,5 ml) AP:ssa basolateraalisiin (BL) suuntatutkimuksiin tai BL-kammioon (2,5 ml) BL-AP-suuntatutkimuksiin. AC-, IS- ja EC-määrityksiä varten, joissa käytettiin HPLC:tä, kustakin vastaanottokammiosta poistettiin erä (300 ul) eri aikavälein (30, 60, 90 ja 120 min). Vastaanottokammio täytettiin samalla määrällä tuoretta esilämmitettyä (37 astetta) kuljetuspuskuria jokaisen näytteenoton jälkeen. Kerätyt näytteet säilytettiin -20 asteessa jatkokäyttöä varten. PRE-määritykseen käyttämällä biomääritystä otettiin vain näytteet 120 minuutin kohdalla. PRE:n, AC:n, IS:n ja EC:n epävakauden vuoksi näytteiden stabiloimiseksi lisättiin 0,4 % (w/v) C-vitamiinia AC-, IS- ja EC-pitoisuuksien määrittämiseksi HPLC:llä, ja näytteet PRE-biomääritykseen analysoidaan välittömästi näytteenoton jälkeen. Jokaisen näytteen näennäinen läpäisevyyskerroin (Papp tai 'Papp) laskettiin.

Tietojen analysointi

Papp-arvot AC:n, IS:n ja EC:n AP BL- tai BLAP-suunnissa laskettiin seuraavan yhtälön perusteella: Papp {{0}} (4Q/4t)/(AC0), jossa Papp on näennäinen läpäisevyyskerroin (cm/s), joka on määritetty HPLC:llä. (4Q/4t) on testiyhdisteen (AC, IS tai EC) esiintymisnopeus vastaanottimen puolella (μmol/s); A on insertin pinta-ala (cm2); C0 on testiyhdisteen alkuperäinen pitoisuus luovuttajan puolella (μmol/ml). Tarkemmin sanottuna massayksikköä "ug" käytettiin "μmol":n sijaan, kun 'Papp-arvot laskettiin. Tiedot ilmaistaan keskiarvoina ± SD.

Tulokset

AC:n, IS:n ja EC:n sävellys CD:n PRE:ssä

Koska AC, IS ja EC katsotaan tärkeimmiksi bioaktiivisiksi aineiksiCistanche-lajin tohtorit, analysoimme niiden sisällön PRE:ssä HPLC-UV:n kautta. Edustava kromatogrammi on esitetty kuvassa 1. Näiden aineosien tunnistaminen perustui retentioaikojen ja UV-spektrin vertailuun autenttisten standardien vastaaviin aallonpituudella 334 nm. AC:n, IS:n ja EC:n pitoisuudet PRE:ssä olivat vastaavasti 26,60 %, 1,84 % ja 32,83 %. Siten nämä kolme yhdistettä muodostavat 61,27 % PRE:stä; lisäksi yllä olevat tulokset osoittavat, että PhG-pitoisuus PRE:ssä on 78,4 %. Siksi AC, IS ja EC muodostavat noin 80 % PRE:n PhG:istä.

PRE:n, AC:n, IS:n ja EC:n hapettumisenestokyky yhteensä

TutkimuksetPhG:iden antioksidanttivaikutusCD:stä on raportoitu, ja AC, IS ja EC muodostavat noin 80 % PRE:n PhG:istä. Täten PRE:n, AC:n, IS:n ja EC:n antioksidanttiset kokonaiskapasiteetit määritettiin ja ilmaistiin käyttämällä FRAP-arvoja (× 10–6 mmol). Kuten kuvasta 2 näkyy, kun FRAP-arvo oli 8 × 10–6 mmol, PRE:n, AC:n, IS:n ja EC:n lopulliset pitoisuudet olivat 6,20 ug/ml, 3,14 ug/ml, 22,92 ug/ml ja 4,89 ug. /ml, vastaavasti, mikä osoittaa, että näiden neljän näytteen hapettumisenestokyky sijoittui seuraavasti: AC > EC > PRE > IS. PRE:n bioaktiivisuus johtuu sen aktiivisten ainesosien ryhmistä (AIG). Noin 60 %:lla PRE:stä AC ja EC osoittivat voimakkaampaa antioksidanttiaktiivisuutta kuin PRE ja IS. Koska IS (1,84 %) muodostaa hyvin pienen osan PRE:stä, myös muut komponentit, kuten heikosti antioksidanttinen IS, ovat selvästi aktiivisia PRE:ssä. Yllättäen antioksidanttiaktiivisuus poikkesi lähes 7--kertaisesti AC:n ja sen isomeerin IS:n välillä, mikä osoittaa, että fenolisten hydroksyyliryhmien lukumäärän lisäksi myös fenolisten hydroksyyliryhmien sijainti molekyylissä vaikutti antioksidanttiseen vaikutukseen. .

Caco-2-yksikerrosten validointi

Caco-2-solujen yksikerroksisen järjestelmän validoimiseksi määritettiin propranololin (hyvin kulkeutuva markkeri) ja Lucifer-keltaisen (huonosti kulkeutuva markkeri) Papp-arvot AP:sta BL:hen Caco-2-yksikerrosten poikki. määritetty arvoiksi 1,51 × 10–5 cm/s ja 2,8 × 10–7 cm/s, ja nämä arvot ovat yhtäpitäviä aiemmissa raporteissa julkaistujen arvojen kanssa. Alkalisen fosfataasin aktiivisuusmääritys vahvisti myös, että Caco{11}}-solujen yksikerroksiset kerrokset olivat laadullisesti verrattavissa ohutsuolen epiteelin kanssa.

AC:n, IS:n ja EC:n läpäisevyys

In general, the Papp values of well-absorbed drugs were high (>1.0 × 10–5 cm/s), kun taas huonosti imeytyneiden lääkkeiden arvot olivat alhaiset (< 1.0 × 10–6 cm/s) [3]. As shown in Table 4, the Papp values of AC, IS, and EC were nearly on the order of 10–7 cm/s, indicating that these compounds were poorly permeable. Furthermore, efflux or active transport was not observed because the ratios of Papp BL to AP / Papp AP to BL for AC, IS, and EC were between 0.90 ~ 1.55, and the criterion of net efflux proposed by the FDA Guidance is a ratio less than 2. Based on the kinetic curves presented in Fig. 3, the bidirectional transport percentages of AC, IS, and EC at 200 μM increased linearly with time. The transport rate (TR) values of the three compounds increased linearly in both directions between approximately 100 and 300 μM (Fig. 4). These results indicate that the main transport mechanism of AC, IS, and EC is also passive diffusion.

PRE:n läpäisevyys

Yllä olevat tulokset osoittavat, että PRE:n kokonaisantioksidanttikapasiteetti johtuu ainakin 61,27 %:sta PRE:n AIG:stä. Näin ollen arvioimme PRE:n TR:n sen antioksidanttikapasiteetin pitoisuus-vaikutuskäyrän perusteella ja laskemme 'Papp-arvot PRE:n kuljetusominaisuuksien heijastamiseksi. AP!BL:n ja BL!AP:n PRE:n Papp-arvot olivat (2,16 ± 0,26) × 10–7 cm/s ja (3,13 ± 0,29) × 10–7 cm/ s, vastaavasti, mikä osoittaa, että tämä yhdiste oli huonosti läpäisevä. Lisäksi ulosvirtaus tai aktiivinen kuljetus ei ollut ilmeistä, koska 'Papp BL:n suhde AP:hen / 'Papp AP:n suhde BL:hen PRE:lle oli 1,45. Lisäksi PRE:n kaksisuuntainen TR kasvoi lineaarisesti välillä noin 300 ja 900 ug/ml (kuvio 5). Tulosten suuntapreferenssin puute viittaa siihen, että passiivinen diffuusio on PRE:n tärkein kuljetusmekanismi.

cistanche tubulosa extract

LUONNOLLINEN CISTANCHE TUBULOSA IMUNITEETTA PARANTAAN PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Keskustelu

Verrattuna erittäin puhtaisiin lääketuotteisiin PE on yleensä seoksia, jotka koostuvat sadoista ainesosista, joilla on hyvin erilaisia fysiokemiallisia ominaisuuksia. PE PE:n kuljetusominaisuuksien arvioimiseksi tieteellisemmin jotkut tutkijat ovat tunnistaneet PE:stä useita komponentteja yhden komponentin sijaan [22–24]. Rajoitettu määrä aineosia ei kuitenkaan voi kuvastaa PE:tä kokonaisuutena. Kaikkien komponenttien määrittäminen PE:ssä on kuitenkin mahdotonta. Lisäksi, jos PE:n eri komponenteilla on täysin erilaiset kuljetusominaisuudet, PE:n kokonaisvaltaisia kuljetusominaisuuksia on vaikea tunnistaa.

1990-luvulla biomääritysjärjestelmiä käytettiin antimikrobisten aineiden TR:n arvioimiseen [25]. Vuoteen 2005 mennessä Eguchi ja hänen kollegansa [26] olivat arvioineet porkkanauutteen hapettumista estävän aktiivisuuden käyttämällä erilaistuneista Caco{5}}-soluista peräisin olevaa BL-elatusainetta; tämä lähestymistapa sopii paremmin in vivo -tilanteisiin.

PhG:iden aktiivisuutta koskevan aikaisemman raportin ja tulostemme (kuva 2) perusteella AIG:n TR PRE:ssä voidaan arvioida määrittämällä väliaineen kokonaisantioksidanttikapasiteetti vastaanottokammiossa. Kuljetuskokeiden jälkeen havaitsimme, että PRE:n TR oli samanlainen molempiin suuntiin, ja tämä kuljetus oli tyydyttymätöntä ja huonosti absorboitunut ('Papp < 1.0 × 10–6 cm/s), eikä se ollut osoittavat ulosvirtausta, mikä viittaa siihen, että passiivinen diffuusio alas pitoisuusgradienttia pitkin on PRE:n pääkuljetusmekanismi (kuvio 5). Lisäksi PRE:n kuljetusominaisuudet ovat yhdenmukaisia AC:n, IS:n ja EC:n, tehokkaiden komponenttien, joilla on antioksidanttivaikutus PRE:ssä, kanssa (kuvio 4 ja taulukko 4). Tämä tulos oli odotettu ja osoitti, että nykyinen biotestijärjestelmä on sopiva ja luotettava AIG:n kuljetusominaisuuksien arvioimiseen PRE:ssä erilaistuneissa Caco{10}}-soluissa.

Toisin kuin kanoninen Papp-arvo, jota käytetään yleisesti kuvaamaan yksittäisen yhdisteen kulkua, pitoisuus-vaikutuskäyrään perustuva TR:stä saatu 'Papp-arvo ei välttämättä heijasta vain komponentteja, jotka tunkeutuvat ehjärakenteisiin yksikerroksisiin kerroksiin. Niihin liittyy myös muita kohdeaktiivisuuteen liittyviä tekijöitä, kuten komponenttien aineenvaihduntatuotteita, kemiallisesti hajotettuja tuotteita ja jopa joitain sytokiineja, jotka erittyvät Caco-2-soluista vasteena stimulaatiolle, joka voi vaikuttaa kohteen bioaktiivisuuteen. Siten edellä mainittu monitekijä, ei vain kuljetetut ehjät komponentit, määrää 'Papp-arvon. Siksi 'Papp voi korreloida vahvemmin in vivo -tilanteiden kanssa kuin kanoninen Papp-arvo. Tässä tutkimuksessa selvensimme PRE:n passiivisesti diffuusiota ja huonosti imeytyvää luonnetta sen 'Papp-arvon perusteella, ja tämä luonne saattaa liittyä CD:n korkeaan annokseen ja pitkään kliiniseen hoitojaksoon. Tästä huolimatta nämä havainnot tarjoavat kliinikoille järjestelmällisempää ohjausta CD:n soveltamisessa, kun vain useimpien CD:n AIG:iden kuljetusominaisuudet on tunnistettu, ei vain PhG:itä.

Valitun bioaktiivisuuskohteen on kuitenkin oltava riittävän herkkä, jotta se voidaan havaita vastaanottokammion väliaineessa, mikä on haaste PE:n kuljetusominaisuuksien arvioimiseksi käytettävän biomääritysjärjestelmän perustamiselle. Lisäksi bioaktiivisuuden tulisi myös riippua mahdollisimman monesta komponentista. Tutkimuksessamme kokonaisantioksidanttikapasiteetin määritys oli sopivampi kuin useat muut menetelmät (S1 kuva). Mutta silti analyysimme voi havaita PRE:n TR:n vain 120 minuutin kohdalla.

Tämä tutkimus loi kollektiivisesti uuden biomääritysjärjestelmän PRE:n suoliston läpäisevyyden arvioimiseksi erilaistuneissa Caco{0}}-soluissa. Saadut tulokset osoittivat, että huonosti absorboitunut passiivinen diffuusio alas pitoisuusgradienttia pitkin ilman ulosvirtausta on PRE:n pääkuljetusmekanismi (kuvio 5), joka tarjoaa farmakokineettisen perustan PhG:iden kliiniselle käytölle CD:ssä. Uuden biomääritysjärjestelmän käyttö TR:n arvioimiseksi ja sitä kautta Papp-arvojen laskemiseksi AIG:n suoliston kuljetusominaisuuksien arvioimiseksi PE:ssä on mahdollista. Tämä lähestymistapa voi sopia myös muulle PE:lle, jos sillä on sopiva bioaktiivisuus.