ELISpot-määrityksen perustaminen soluimmuniteetin havaitsemiseksi S. Pneumoniaea vastaan ​​rokotetuilla munuaissiirteen saajilla

Abstrakti:

Elinsiirron saajilla invasiivisten pneumokokkisairauksien määrä on 25 kertaa suurempi kuin muussa väestössä. Rokotusta S. pneumoniaea vastaan ​​suositellaan tässä kohortissa, koska se vähentää tämän vakavan pneumokokki-infektion muodon ilmaantuvuutta. Aiemmat tutkimukset osoittavat, että elinsiirron vastaanottajat voivat tuottaa spesifisiä vasta-aineita pneumokokkirokotuksen jälkeen.

On kuitenkin epäselvää, aiheuttaako rokotus myös spesifistä soluimmuniteettia. Nykyisessä tutkimuksessa 38 munuaissiirteen vastaanottajalla perustimme interferoni-ELISpot-määrityksen, joka pystyy havaitsemaan serotyyppispesifisiä soluvasteita S. pneumoniaea vastaan. Tulokset osoittavat, että peräkkäinen rokotus konjugoidulla Prevenar 13 -rokotteella ja polysakkaridirokotteella Pneumovax 23 johti serotyyppispesifisen soluimmuniteetin lisääntymiseen. Havaitsimme voimakkaimmat vasteet serotyyppejä 9N ja 14 vastaan, jotka molemmat ovat Pneumovax 23:n komponentteja. Soluvasteet S. pneumoniaea vastaan ​​korreloivat positiivisesti spesifisten IgG-vasta-aineiden kanssa (r=0.32, p=0.12) ).

Yhteenvetona voidaan todeta, että tämä on ensimmäinen raportti, joka osoittaa, että munuaisensiirron saajat voivat saada aikaan spesifisiä soluvasteita pneumokokkirokotuksen jälkeen. Perustamamme ELISpot mahdollistaa lisätutkimukset. Nämä voivat auttaa määrittämään esimerkiksi tekijöitä, jotka vaikuttavat spesifiseen soluimmuniteettiin immuunipuutteellisissa kohorteissa tai soluimmuniteetin kestoon rokotuksen jälkeen.

Soluimmuniteetilla tarkoitetaan kehon solujen vastustuskykyä vieraita taudinaiheuttajia vastaan, mikä on osa immuunijärjestelmää. Soluimmuniteetti sisältää erilaisia ​​solutyyppejä, mukaan lukien T-solut, NKT-solut, makrofagit, luonnolliset tappajasolut jne. Nämä solut tunnistavat ja eliminoivat patogeenejä, kuten viruksia, bakteereita ja sieniä, ja suojaavat siten kehoa infektioilta ja taudeilta. Soluimmuniteetti voi myös seurata ja poistaa kasvainsoluja. Ihmiskehon on myös parannettava vastustuskykyään. Tutkimuksen jälkeen havaitaan, että Cistanche voi parantaa immuniteettia. Cistanche-uute voi stimuloida immuunisolujen, kuten T-lymfosyyttien ja NK-solujen, lisääntymistä ja aktiivisuutta, mikä parantaa ihmisen immuniteettia.

Napsauta nähdäksesi cistanche tubulosan edut

Avainsanat:

pneumokokkikonjugaatti- ja polysakkaridirokotteet; peräkkäinen rokotus; munuaisensiirron saajat; serotyyppispesifinen soluimmuniteetti; interferoni-ELISpot.

1. Esittely

Gram-positiivinen bakteeri Streptococcus pneumoniae (S. pneumoniae) asuu usein ihmisen nenänieluun [1]. Nenänielun ulkopuolella se voi johtaa lobar-keuhkokuumeeseen, aivokalvontulehdukseen, välikorvatulehdukseen tai sinuiittiin. Paikallista infektiota lukuun ottamatta se voi aiheuttaa invasiivisia pneumokokkisairauksia (IPD), joiden kuolleisuusaste on noin 10 prosenttia [1–3]. Tautien torjunta- ja ehkäisykeskusten tietojen mukaan IPD:n esiintyvyys elinsiirtojen vastaanottajilla on 25 kertaa suurempi kuin muussa väestössä [2,3]. Rokotusta S. pneumoniaea vastaan ​​suositellaan henkilöille, joilla on immuunivastetta heikentäviä sairauksia, koska sen on osoitettu vähentävän IPD:n ilmaantuvuutta [4–6].

S. pneumoniae -bakteerin vastaisten polysakkaridirokotteiden (esim. Pneumovax 23, MSD Sharp ja Dohme, Haar, Saksa) lisäksi on olemassa rokotteita, jotka on konjugoitu difteriatoksiinin myrkyttömään mutanttimuotoon (esim. Prevenar 13, PCV13, Pfizer, New York, NY). , USA) [7], jotka vaikuttavat T-soluista riippuvaisesti.

Saksassa suositellaan 13-valenttisen pneumokokki-konjugaattirokotteen ja sen jälkeen 23-valentin pneumokokkipolysakkaridirokotteen antamista 6–12 kuukauden kuluttua immuunipuutteellisille henkilöille, kuten elinsiirtojen vastaanottajille [8]. Rokotetut saavat ensin glykokonjugaattirokotteen Prevenar 13. Aikaisempien hiirillä saatujen tietojen mukaan CD4 plus T-solut pystyivät tunnistamaan glykaanimodifioituja peptidejä, joita esittelee päähistoyhteensopivuuskompleksi (MHC) luokka II (hiilihydraattispesifiset auttaja-CD4 T plus -solut, Tcarbs) [9 ,10]. Nämä spesifiset Tcarbs voisivat tehostaa pneumokokkipolysakkarideja vastaan ​​suunnattujen IgG-vasta-ainevasteiden tuotantoa.

Nämä aikaisemmat tiedot eivät kuitenkaan pysty määrittämään interferonin (IFN) erityksen lähdettä ELISpot-määrityksissämme, joissa soluja stimuloitiin (konjugoimattomilla) polysakkaridiantigeeneillä.

Rokotusvasteiden serologista valvontaa suositellaan immuunipuutteisilla potilailla, vaikka onkin epäselvää, missä määrin vasta-ainetiitterit heijastavat suojaa [11]. Tällä rokoteohjelmalla saavutettava suoja on edelleen epäselvä elinsiirtokohorteissa [12–14]. Tällä hetkellä on tietoa vain spesifisestä humoraalisesta immuniteetista S. pneumoniae -rokotuksen jälkeen [12–16]. Erityisiä T-solutietoja pneumokokkeja vastaan ​​​​rokotuksen jälkeen ei ole vielä julkaistu siirtokohortissa. Terveillä aikuisilla voitiin kuitenkin osoittaa, että solujen immuniteetti pneumokokkipolysakkarideja vastaan ​​lisääntyi rokotuksella [17].

Tämän tutkimuksen tavoitteena oli luoda ELISpot, joka on riittävän herkkä havaitsemaan spesifinen soluimmuniteetti S. pneumoniaa vastaan ​​rokotetuilla munuaisensiirron saajilla.

2. Materiaalit ja metodit

2.1. Potilaat

Kaikkiaan 38 kliinisesti stabiilia munuaisensiirron saajaa (70 näytettä) sisällytettiin tähän poikkileikkaustutkimukseen, jossa oli yksi keskus (taulukko 1). Mediaani-ikä oli 53 vuotta (vaihteluväli 23–77 vuotta); 12 potilasta oli naisia ​​ja 26 miehiä. Potilaat saivat kaksi rokotetta S. pneumoniaea vastaan. Heidät rokotettiin peräkkäin yhdellä annoksella Prevenar 13:a, jota seurasi yksi annos Pneumovax 23:a kuusi kuukautta myöhemmin. Mediaaniväli (viimeisen) munuaisensiirron ja ensimmäisen rokotuksen välillä oli 38 kuukautta (3 kuukautta – 33 vuotta).

Stabiili allograftitoiminto (määritelty nimellä<15% change in serum creatinine concentration within one month before vaccination), an interval of ≥3 months to kidney transplantation, and absence of clinical infection, of allograft rejection and pregnancy, were defined as inclusion criteria. Blood samples were drawn immediately before vaccination with Pneumovax 23 (month 6), and one month and six months thereafter (months 7 and 12, respectively). This study was approved by the institutional review board of the University Hospital Essen (14-5858-BO), and written informed consent was obtained from all participants. It was carried out by the Declarations of Helsinki and Istanbul and their subsequent amendments.

2.2. Rokotteet

{{{{20}}}}valenttinen pneumokokkirokote Prevenar 13 sisältää 13 pneumokokki-serotyypin polysakkarideja (1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19F, 19A) ja 23F), joka on yksittäin konjugoitu difteriatoksiinin ristiinreaktiivisen materiaalin 197 (CRM197) myrkyttömään mutanttimuotoon. Rokote on formuloitu 5 mM sukkinaattipuskuriin, joka sisältää 0,85 prosenttia NaCl:a ja 0,02 prosenttia polysorbaatti 80:tä, pH 5,8, ja sisältää alumiinifosfaattia 0,125 mg/annos alumiinia adjuvanttina. Se sisältää 2,2 µg/annos kutakin serotyyppiä lukuun ottamatta serotyyppiä 6B 4,4 µg/annos (0,5 ml).

23-Valenttinen rokote Pneumovax 23 on konjugoimaton rokote, joka sisältää 25 µg kutakin 23 pneumokokki-serotyypistä 1, 2, 3, 4, 5, 6B, 7F, 8, 9N, 9V, 10A, 121,A. 14, 15B, 17F, 18C, 19F, 19A, 20, 22F, 23F ja 33F. Rokote on formuloitu fenoli- ja<1 mmol sodium chloride per dose (0.5 mL). Both vaccines were injected into the deltoid muscle.

2.3. Soluimmuniteetin määritys pneumokokkeja vastaan ​​ELISpotilla

Yhdeksän millilitraa heparinisoitua verta kerättiin ja perifeerisen veren mononukleaariset solut (PBMC) erotettiin Ficoll-gradienttisentrifugoinnilla. PBMC-määrät määritettiin automaattisella hematologisella analysaattorilla (XP-300, Sysmex, Norderstett, Saksa). Kaksinkertaisia ​​tai kolminkertaisia ​​viljelmiä, joissa oli 200,000 juuri eristettyä PBMC:tä, kasvatettiin ilman pneumokokkipolysakkarideja ja yksittäisiä viljelmiä 100, 150 ja 200 µg/ml pneumokokkipolysakkarideilla (pneumokokin serotyypit (PS) 2, 1,1 9N, 614 ja 25F, kaikki Pfizeriltä, ​​ATCC, Manassas, VA, USA). IFN-tuotanto määritettiin käyttämällä esipinnoitettuja ELISpot-levyjä ja standardoitua ilmaisujärjestelmää (T-Track® ELISpot kit, Mikrogen GmbH, Neuried, Saksa; entinen Lophius Biosciences GmbH, Regensburg, Saksa). PBMC:itä inkuboitiin ilman pneumokokkipolysakkarideja ja niiden kanssa 150 ul:ssa AIMV-elatusainetta (Gibco, Grand Island, NE, USA) 37 °C:ssa. Stimulaatio T-solumitogeenillä fytohemagglutiniinilla (PHA, 4 ug/ml) toimi positiivisena kontrollina. Soluja esi-inkuboitiin yön yli U-pohjalevyillä (BD Falcon, Nijmegen, Alankomaat).

Sen jälkeen niitä inkuboitiin vielä 19 tuntia ELISpot-levyillä. Nämä olosuhteet voidaan määritellä optimaaliseksi. ELISpot-olosuhteiden optimoimiseksi titrasimme pneumokokkipolysakkaridit (0,5–800 µg/ml) ja suoritimme soluviljelmät ilman ja yön yli esi-inkubaatiolla. Sytokiinia erittävien solujen kolorimetrinen havaitseminen suoritettiin valmistajan ohjeiden mukaisesti. Pistenumerot analysoitiin ELISpot-lukijalla (AID Fluorospot, Autoimmun Diagnostika GmbH, Strassberg, Saksa).

Sen lisäksi, että otimme huomioon yksilöiden polysakkaridien pitoisuudet, määritimme optimipitoisuuksien mediaaniarvot (100, 150 ja 200 µg/ml) ja vähennimme negatiivisten kontrollien mediaanin. Näin loimme pistelisäyksiä, jotka osoittavat tietyt pisteet. Huomaa, että negatiiviset kontrollit saavuttivat keskiarvon 0,71 täplää ja keskimääräisen keskihajonnan 0,47 täplää.

2.4. Soluimmuniteetin määritys pneumokokkeja vastaan ​​proliferaatiomäärityksellä

Potilaiden osajoukossa analysoimme myös lymfosyyttien lisääntymistä mittaamalla 3H-tymidiinin ottoa. Käytimme 200 000 PBMC:tä soluviljelmää kohden ja stimuloimme soluja 50–800 µg/ml polysakkarideilla 2, 6A, 9N ja 14. PBMC:itä inkuboitiin ilman pneumokokkipolysakkarideja ja niiden kanssa 150 µl:ssa AIMV-alustaa. viisi päivää 37 ◦C:ssa U-pohjalevyillä. Stimulaatiota PHA:lla käytettiin positiivisena kontrollina.

Viimeisten 16 tunnin aikana viljelmät leimattiin 37 kBq 3H-tymidiinillä viljelmää kohti. Sen jälkeen solut kerättiin (Harvester 96, Tomtec, Hamden, CT, USA) suodatintyynyille (Wallac, Turku, Suomi), ja sisällytetty radioaktiivisuus määritettiin nestetuikelaskennalla (1450 Microbeta Trilux, Wallac). Tulokset ilmaistiin lukemina minuutissa. Lisäksi otettiin huomioon stimulaatioindeksit (SI) (proliferaation osamäärä spesifisellä stimulaatiolla ja negatiivisella kontrollilla (proliferaatio ilman stimulaatiota)). Vähintään 3:n SI määriteltiin positiiviseksi vastaukseksi.

2.5. Pneumokokkien vasta-aineiden määritys

S. pneumoniae -vasta-aineet määritettiin ELISA:lla, joka havaitsee IgG-vasta-aineet 23 pneumokokki-serotyyppiä vastaan ​​(VaccZyme™, The Binding Site, Schwetzingen, Saksa). Määritys suoritettiin valmistajan ohjeiden mukaisesti.

2.6. Tilastollinen analyysi

Tiedot analysoitiin käyttämällä GraphPad Prism 8.4.2.679:ää (San Diego, CA, USA). Ilman esi-inkubaatiota ja sen kanssa sekä ennen tai jälkeen Pneumovax 23 -rokotteen saatuja tietoja verrattiin Mann-Whitneyn U-testillä. Spearman-testiä käytettiin korreloimaan ELISpot-tuloksia numeeristen muuttujien kanssa ja Mann–Whitney-testiä analysoimaan potilaan sukupuolen vaikutusta ELISpot-tuloksiin. Ellei toisin mainita, mediaaniarvot ilmoitetaan. Kaksipuolisia p-arvoja < 0,05 pidettiin merkittävinä.

3. Tulokset

3.1. ELISpot-olosuhteiden optimointi

Alkuperäiset titrauskokeet PBMC:llä munuaissiirteen saajilta suoritettiin 0,5–50 µg/ml pneumokokkipolysakkarideilla ja ne osoittivat lähes havaitsemattomia soluvasteita (kuvio 1a), huolimatta rokotuksesta S. pneumoniaa vastaan. Polysakkaridipitoisuuksien nousu (50–800 µg/ml) yhdistettynä yön yli suoritettuun esi-inkubaatioon U-pohjalevyillä (kuva 1b, c) johti havaittaviin, annoksesta riippuvaisiin soluvasteisiin, jotka saavuttivat maksimiarvossa 100–200 µg/ml.

3.2. Pneumokokkikohtaisten ELISpot-vasteiden aika

Käyttämällä optimoituja olosuhteita (100, 150 ja 200 µg/ml polysakkarideja ja esi-inkubaatio) testasimme kliinisesti stabiileja munuaissiirteen saajia kuukausina 6, 7 ja 12 pneumokokkeja vastaan ​​​​rokotuksen aloittamisen jälkeen, eli mittasimme konjugoidun pneumokokkirokotteen Prevenar 13 vaikutus kuukaudella 6 ja molempien rokotteiden (Prevenar 13 ja Pneumovax 23) yhteisvaikutus kuukausilla 7 ja 12. Huomionarvoista, että valitsimme polysakkaridiserotyypit, jotka sisältyivät vain rokotteeseen Prevenar 13 (6A), vain Pneumovax 23:ssa (2, 9N, 11A), molemmissa rokotteissa (14) tai ei missään niistä (25F). Pneumokokkispesifisessä ELISpot-määrityksessämme havaitut IFN-täplät voidaan luonnehtia suuriksi ja voimakkaiksi (kuva 2).

Kuva 1. ELISpot-olosuhteiden optimointi spesifisen soluimmuniteetin määrittämiseksi S. pneumoniaea vastaan. (a) Serotyyppien (PS) 2, 6A, 9N ja 14 pneumokokkipolysakkaridien pienten pitoisuuksien titraus (0.5–50 µg/ml) ilman esikäsittelyä inkubointivaihe, eli soluja inkuboitiin suoraan ELISpot-maljoilla (ilman esi-inkubaatiota). (b,c) Tulokset stimulaation jälkeen korkeammilla pneumokokkipolysakkaridien pitoisuuksilla (50-800 µg/ml), joko ilman (b) tai (c) yön yli esi-inkubaatiolla U-pohjalevyillä. Kaikissa tapauksissa (a–c) testasimme munuaisensiirron saajia pneumokokkirokotuksen jälkeen. Mediaaniarvot ilmaistaan ​​harmailla vaakasuorilla viivoilla. Positiiviset kontrollikokeet suoritettiin T-solumitogeenilla fytohemagglutiniinilla (PHA). Kohdassa (b, c) esitettyjä tuloksia verrattiin Mann–Whitney-testillä. * p < 0,05, ** p < 0,01.

Kuva 2. Interferoni-ELISpot-tulokset (200,000 PBMC/kuoppa) yhdestä naisesta, 49--vuotiaasta munuaisensiirron vastaanottajasta 12. kuukaudella. Potilas oli saanut rokotuksen Prevenar 13:lla ja Pneumovax 23:lla klo. 12 kuukautta ja 6 kuukautta ennen verenvuotoa. Jokaista pneumokokkipolysakkaridien (PS) serotyyppiä käytettiin kolmessa pitoisuudessa (100, 150 ja 200 ug/ml). Vasemmassa paneelissa näkyvät ELISpot-tulokset ja oikeassa paneelissa levyasettelu. Koko kuopan täyttävät yhtyevät täplät, kuten fytohemagglutiniinia (PHA) sisältävä positiivinen kontrolli osoittaa, asetettiin arvoksi 600.

Laskennassa käytimme mediaaniarvoja kolmelle pitoisuudelle, jolloin saatiin yksi tulos näytettä ja aikapistettä kohti. Polysakkaridien serotyypeillä 2, 6A, 9N ja 14 havaitsimme vasteiden lisääntymisen kuukaudessa 7 vs. 6 (kuvio 3). Tämä nousu näytti olevan hieman voimakkaampi kolmen neljästä Pneumovax 23 -rokotteen sisältämästä serotyypistä (2, 9N ja 14) kuin serotyypin 6A kohdalla, joka sisältyy vain Prevenar 13 -rokotteeseen. Vasteita PS 25F:lle, serotyypille, joka ei sisälly mihinkään rokotteisiin, ei ollut havaittavissa 12. kuukaudella.

Yhteenvetona tiedot osoittavat, että rokotus Pneumovax 23 -rokotteella johti soluvasteiden lisääntymiseen suurimmalle osalle tämän rokotteen sisältämistä serotyypeistä. Suurin määrä spesifisiä soluja voitiin havaita kuukauden kuluttua tämän rokotuksen jälkeen. Kuitenkaan myös Pneumovax 23:n sisältämä serotyyppi 11A ei indusoinut havaittavaa soluimmuniteettia. 12. kuukaudella immuniteetti heikkeni, mikä on odotettavissa rokotuksen jälkeisen kurssin aikana. Yllättäen myös serotyyppiä 6A koskevissa vasteissa saattoi esiintyä lievää kasvua kuukaudella 7, mikä voi johtua ristireaktiivisuudesta. Soluvasteiden puuttuminen serotyyppiä 25F kohtaan 12. kuukaudella vastasi odotuksiamme, koska se ei sisältynyt mihinkään rokotteisiin.

Kuva 3. Spesifinen soluimmuniteetti S. pneumoniaa vastaan ​​munuaissiirteen saajilla sen jälkeen, kun he ovat saaneet rokotuksen Prevenar 13:lla (kuukausi (M) 6) tai Prevenar 13:lla ja Pneumovax 23:lla (M7 ja M12). Huomionarvoista, että valitsimme pneumokokki-serotyypit (PS), jotka sisältyivät vain rokotteeseen Prevenar 13 (6A, sininen), vain Pneumovax 23:een (2, 9N, 11A, musta), molempiin rokotteisiin (14, punainen) tai ei mihinkään rokotteisiin. ne (25F, vihreä). Vasteet PS 14:ää kohtaan mitattiin vain 41:ssä 55 näytteestä, ja vasteita PS 25F:ään mitattiin vain seitsemässä (M12:ssa). Käytimme mediaaniarvoja kunkin polysakkaridin kolmelle pitoisuudelle (100, 150 ja 200 µg/ml), jolloin saatiin yksi tulos näytettä ja aikapistettä kohti. Mediaaniarvot ilmaistaan ​​harmailla vaakasuorilla viivoilla. Positiiviset kontrollikokeet suoritettiin T-solumitogeenilla fytohemagglutiniinilla (PHA). Lisäys tarkoittaa, että negatiiviset kontrollit vähennettiin tuloksista S. pneumoniae -polysakkarideilla stimuloinnin jälkeen.

3.3. Pneumokokkispesifisten proliferatiivisten vasteiden pitoisuusriippuvuus

Suoritimme myös proliferaatiomäärityksiä käyttämällä 50–800 µg/ml pneumokokkipolysakkarideja. Erityiset vastaukset olivat heikkoja. Yhtä lukuun ottamatta kaikissa tapauksissa lukemat minuutissa pneumokokkipolysakkarideilla stimuloinnin jälkeen olivat alle 2200, minkä luokittelemme rajavasteeksi (kuva 4). Kolme viidestä rokotetusta munuaisensiirron vastaanottajasta osoitti havaittavaa proliferaatiota, joka määritellään vähintään 3:n maksimistimulaatioindeksillä. Ensimmäinen potilas vastasi serotyypeille 2, 9N ja 14 (SI jopa 5,8, 3,6 ja 3,8). , toinen serotyypeille 6A ja 9N (SI enintään 3,1 ja 5,1, vastaavasti) ja kolmas serotyyppiin 2 (SI enintään 3,9).

Kuvio 4. Proliferatiiviset vasteet rokotetuilla munuaissiirteen saajilla stimulaation jälkeen S. pneumoniae -bakteerin polysakkarideilla. (a) Tulokset ilmaistuina lukemina minuutissa; (b) stimulaatioindeksi eli stimuloitujen ja stimuloimattomien viljelmien osamäärä. Käytimme pneumokokkipolysakkarideja serotyyppejä (PS) 2, 6A, 9N ja 14 pitoisuuksina 50–800 µg/ml ja soluja viljeltiin kuusi päivää. Stimulaatioindeksit vähintään 3 määriteltiin positiivisiksi vasteiksi (katkoviiva). Mediaaniarvot ilmaistaan ​​harmailla vaakasuorilla viivoilla. Negatiiviset kontrollit olivat soluja, joita viljeltiin ilman spesifistä stimulaatiota, ja positiivisia kontrollisoluja stimuloitiin T-solumitogeenilla fytohemagglutiniinilla (PHA).

3.4. Pneumokokkispesifisten ELISpot-vasteiden ja spesifisten vasta-aineiden välinen korrelaatio

Rinnakkain ELISpot-määritysten kanssa määritettiin ELISA:lla IgG-vasta-aineet 23 pneumokokki-serotyyppiä vastaan. Spearman-korrelaatioanalyysi suoritettiin 12. kuukaudessa rokotuksen jälkeen ja otettiin huomioon ELISpot-vasteiden summa serotyyppejä 2, 6A, 9N ja 14 kohtaan käyttämällä optimoituja ELISpot-olosuhteita (n=25). Havaitsimme positiivisen korrelaation (r=0.32, p=0.12), kuten kuvassa 5 on esitetty. Harkitsimme myös yksittäisiä ELISpot-määrityksiä ja havaitsimme positiivisen korrelaation kaikissa neljässä serotyypissä (PS 2). : r=0.04; PS 6A: r=0.15; PS 9N: r=0.28; PS 14: r=0.36). Lisäksi tiedot PS 11A:sta oli saatavilla 22 potilaalta 25:stä (r=0.26).

Kuva 5. Spearman-korrelaatioanalyysi ELISpot-tuloksista ja S. pneumoniae -bakteerin vastaisista IgG-vasta-aineista. Tässä analyysissä otetaan huomioon munuaissiirteen saajien tulokset kuukauden 12 kohdalla eli sen jälkeen, kun he olivat saaneet rokotuksen Prevenar 13:lla ja Pneumovax 23:lla. Summoitimme ELISpot-vasteet pneumokokkien serotyyppeihin (PS) 2, 6A, 9N ja 14, jotka on testattu pitoisuuksilla. 100, 150 ja 200 ug/ml. Käytimme mediaaniarvoja kunkin serotyypin kolmelle pitoisuudelle, jolloin saatiin yksi tulos näytettä kohti. IgG-vasta-aineet 23 pneumokokki-serotyyppiä vastaan ​​määritettiin rinnakkain kaupallisella ELISA:lla (n=25). Jatkuva viiva edustaa regressioviivaa ja katkoviivat 95 prosentin luottamusväliä.

3.5. Pneumokokkispesifisten ELISpot-vasteiden ja potilaan ominaisuuksien välinen korrelaatio

Spearman-analyysi osoitti, että ELISpot-vasteet kuukauden 12 kohdalla korreloivat viidessä serotyypissä kuudesta positiivisesti transplantaation ja rokotuksen välisen ajan kanssa, mikä saavutti tilastollisen merkitsevyyden serotyypille PS 6A (r=0.37, p=0). 04). Siten potilailla, jotka rokotettiin myöhemmin transplantaation jälkeen, oli korkeampi soluvaste. Miehet saivat keskimäärin 11-kertaa korkeammat vastaukset kuin naiset, mikä ei ollut merkittävää. Iällä ei ollut selvää vaikutusta soluvasteisiin (r=−0,35—r=0,25). Koska 25 33 potilaasta, jotka testattiin kuukaudella 12, saivat takrolimuusipohjaisen immunosuppressiivisen hoito-ohjelman, immunosuppressiivisten lääkkeiden vaikutusta ei voitu analysoida riittävästi melko pienessä kohortissamme.

4. Keskustelu

Nykyisessä tutkimuksessamme kuvaamme IFN-ELISpot-määrityksen perustamista spesifisen immuniteetin havaitsemiseksi S. pneumoniaea vastaan ​​rokotetuilla munuaisensiirron saajilla. Verrattuna aikaisempaan tutkimukseen rokotetuilla terveillä henkilöillä, ELISpot-vasteet pneumokokkipolysakkarideille näyttivät olevan yleisesti alhaisemmat elinsiirtopotilailla [17]. Kokeiluympäristössä oli kuitenkin suuria eroja. Kun taas edellinen Wuorimaan et al. käytimme täydellistä polysakkaridirokotetta (ilman adjuvantteja) antigeeninä, me käytimme tässä yksittäisiä polysakkaridiserotyyppejä.

Siten voisimme mitata serotyyppispesifisiä vasteita. Muut aiemmat tutkimukset soluimmuniteetista pneumokokkirokotuksen jälkeen käyttivät konjugaattia, kurkkumätätoksiinia [18] tai toksiinin sisältävää täydellistä rokotetta [17,19,20] antigeenisenä ärsykkeenä. Siten solumääritykset eivät olleet spesifisiä pneumokokeille, mutta ne voivat myös osoittaa vasteita konjugaatille.

Lisäksi on olemassa joitain tutkimuksia soluimmuniteetista, joissa käytetään joko bakteerilysaatteja, supernatantteja tai pneumokokkien pintaproteiinia A, S. pneumoniaen soluseinään liittyvää pintaproteiinia, rokotuksesta ja siirrosta riippumatta [21–24]. Nämä aiemmat raportit osoittavat, että CD4- ja T-soluvasteet S. pneumoniaea vastaan ​​ovat mitattavissa IFN-ELISpot- tai virtaussytometrillä, mikä havaitsee IFN- tai IL-17-tuotannon ja CD154- tai CD25-ekspression, vastaavasti. Terveiden aikuisten PBMC:tä käyttäen Wuorimaa et al. osoitti, että pneumokokki-spesifinen IFN-eritys oli huomattavaa ja lisääntynyt proteiinikonjugoiduilla ja konjugoimattomilla pneumokokkerokotteilla rokotuksen jälkeen [17]. On huomattava, että vapaaehtoisilla, jotka saivat ei-konjugoituja pneumokokkirokotteita, IFN-vasteet polysakkaridiantigeeneille (ilman proteiinin kantajaa) lisääntyivät rokotuksen jälkeen (esirokote: 0, päivä 14: 32, päivä 28: 22; tiedot edustavat keskimääräisiä lukuja IFN:ää erittävät solut). Siten nykyiset havaintomme ovat linjassa tuon edellisen tutkimuksen kanssa.

On selvitettävä, mikä solutyyppi on IFN-erityksen lähde. Pisteominaisuuksien (suuri ja voimakas) mukaan IFN- --tuottajasolut voivat olla T-soluja. Kun käytettiin kokeellista soluhiirimallia, pneumokokkipolysakkaridilla aktivoitujen CD4 plus T-solujen klonotyyppikartoitus in vivo ja in vitro paljasti klonotyyppiset T-solureseptorin (TCR) transkriptit [25]. Esitettiin, että kahtaisioniset polysakkaridit indusoivat oligoklonaalista CD4- ja T-soluaktivaatiota, joka oli riippuvainen antigeeniä esittelevistä soluista [25]. Kirjoittajat ehdottivat, että polysakkaridit voivat sitoutua MHC-luokan II sitoutumisuran ulkoosaan ja että TCR:n CDR3-sitoutumisdomeeni tunnisti ne. Esittely MHC-luokan II molekyyleillä edellytti myös HLA-DM-molekyylien läsnäoloa.

Sen ovat kuitenkin osoittaneet Avci et ai. että CD4 plus T -kloonit tunnistavat hiilihydraatteja ja reagoivat niiden kanssa vain MHC-luokan II yhteydessä, kun peptidi esittelee niitä [9]. Mutta me käytimme ärsykkeinä polysakkarideja ilman proteiinikantajaa. Voidaan myös olettaa, että vastaavat solut eivät välttämättä ole δ T-soluja tai NKT-soluja. δ T-solut eivät näytä vaativan antigeenin prosessointia ja peptidiepitooppien MHC-esittelyä [26]. He ovat pieni populaatio perifeerisessä veressä, silta synnynnäisen ja adaptiivisen immuunijärjestelmän välillä ja käyttävät TCR:ään hahmontunnistusreseptorina [26]. Lisäksi on ollut näyttöä keuhko-spesifisten δ-T-solujen osajoukoista paikallisissa vasteissa S. pneumoniae -infektiolle [27]. Lopuksi, IFN-lähde voisi olla NK-soluja, kuten aiemmin on kuvattu stimulaation jälkeen lipopolysakkaridilla, joka on gramnegatiivisten bakteerien ulkokalvon pääkomponentti [28]. Huomionarvoista, Kanevskiy et ai. stimuloi NK-soluja lipopolysakkarideilla, mutta ei pneumokokkipolysakkarideilla (grampositiivisesta S. pneumoniae -bakteerista).

Vaikka useat tutkimukset humoraalista immuniteettia elinsiirtojen vastaanottajilla osoittavat, että nämä potilaat voivat saada vasta-ainevasteen rokotuksen jälkeen – vaikkakin alhaisemmalla tasolla – [12–16], tietoja spesifistä soluimmuniteetista rokotuksen jälkeen ei ole vielä julkaistu tässä kohortissa. Haasteena oli saada aikaan määritys, joka havaitsee solujen immuunivasteet S. pneumoniaa vastaan ​​munuaisensiirron saajilla, koska se on jopa alhainen terveillä kontrolleilla [17]. Ei ollut vielä määritelty, voisiko näille potilaille kehittyä solureaktio pneumokokkeja vastaan ​​elinikäisestä immunosuppressiivisesta hoidosta huolimatta. Raportoimme täällä, että munuaisensiirron saajien solun pneumokokki-immuniteetti lisääntyi rokotuksen jälkeen. PS 9N ja 14 – molemmat Pneumovax 23:n komponentit – indusoivat kaiken kaikkiaan voimakkaimman soluimmuunivasteen. Löytö sopii hyvin rokotettujen munuaisensiirron saajien humoraalisten tietojen kanssa [29]. Tämä edellinen tutkimus osoitti kahta serotyyppiä 9N ja 14 vastaan ​​suunnattujen vasta-aineiden voimakkaan lisääntymisen Pneumovax 23 -rokotuksen jälkeen.

Lisäksi serotyyppiä 14 ja 12 muuta serotyyppiä vastaan ​​suunnatut vasta-aineet saavuttivat korkeimman pitoisuuden yhdistetyssä seerumissa 278 terveellä vapaaehtoisella, jotka oli immunisoitu Pneumovax 23:lla [30], mikä osoittaa, että tämä serotyyppi on erittäin immunogeeninen. Vasta-ainevasteiden tapaan yksilöiden välillä on suuria eroja, mikä johtuu todennäköisimmin aiemmasta S. pneumoniae -infektiosta ja vaihtelevasta immunosuppressiosta. Tällä hetkellä ei ole olemassa kultaista standardia soluvasteiden havaitsemiseksi S. pneumoniaa vastaan, ja siksi on vaikea määrittää ELISpot-määrityksemme herkkyyttä ja spesifisyyttä. Lisäksi analyysiä vaikeuttaa se tosiasia, että toistuva luonnollinen pneumokokki-infektio voi myös johtaa humoraalisiin ja sellulaarisiin immuunivasteisiin.

Koska havaitsimme ELISpot-vasteiden annosriippuvuuden (kellomuotoisella annos-vastekäyrällä) ja vasteiden lisääntymisen rokotuksen jälkeen, tulokset täyttävät antigeenispesifisten soluvasteiden tärkeimmät ominaisuudet. Vaikka pystyimme havaitsemaan serotyyppispesifisen IFN-tuotannon ELISpot-menetelmällä, proliferatiiviset vasteet olivat kaiken kaikkiaan alhaisella tasolla. Tämä havainto sopii hyvin rokotetuilla terveillä kontrolleilla tehdyn edellisen tutkimuksen kanssa, joka ei myöskään pystynyt havaitsemaan spesifistä T-solujen lisääntymistä polysakkaridirokotteella stimuloinnin jälkeen [17].

Kuten Spearman-analyysi osoittaa, solu- ja humoraalinen immuniteetti S. pneumoniaea vastaan ​​korreloi positiivisesti, mutta melko heikosti (r {{0}}.32). Tämä havainto on linjassa immuunivasteiden kanssa muita mikrobiantigeenejä vastaan, esim. hepatiitti B -virusta (r=0.38) [31] tai SARS-CoV-2 -virusta (r=0) vastaan. 20–0,52, riippuen antigeenisestä ärsykkeestä ja kohortista) [32].

Olemme aiemmin analysoineet immunosuppressiivisen hoidon vaikutusta serotyyppispesifiseen humoraaliseen immuniteettiin Prevenar 13 -rokotteen jälkeen [15]. Tutkimuksemme osoitti, että 35 munuaissiirteen saajaa, jotka saivat 14 ilman mykofenolaattimofetiilihoitoa, vastasi rokotteeseen pienemmällä opsonofagosyyttisen tappamismäärityksen (OPA) tiittereillä sekä globaalilla ja serotyyppispesifisellä anti-pneumokokkikapselipolysakkaridilla (IPPgG) IgG2. ja IgA 1. ja 12. kuukautta rokotuksen jälkeen. Kolmekymmentäkolmella takrolimuusia saaneella potilaalla oli korkeammat OPA-tiitterit ja serotyyppispesifinen anti-PCP IgG verrattuna 16:een, joilla ei ollut. Lisäksi niiden IgA-pitoisuudet olivat korkeammat 12 kuukautta rokotuksen jälkeen. Kun otetaan huomioon positiivinen korrelaatio solu- ja humoraalisen immuniteetin välillä, voidaan olettaa, että myös soluimmuniteetti pneumokokkeja vastaan ​​on riippuvainen immunosuppressiivisesta hoito-ohjelmasta.

Vaikka mittausta suositellaan, S. pneumoniae -vasta-ainetiitterien ennustearvo infektiosuojan suhteen on edelleen epäselvä elinsiirtopotilailla. Toivottavasti ELISpot-menetelmällä havaittu T-soluvaste korreloi paremmin kliinisten tapahtumien esiintymisen kanssa. Tämä on kuitenkin analysoitava.

Yhteenvetona voidaan todeta, että nykyisessä asiakirjassa kuvaamamme ELISpot-menetelmä mahdollistaa lisätutkimukset. Nämä voivat auttaa määrittämään tekijöitä, jotka vaikuttavat spesifiseen soluimmuniteettiin pneumokokkeja vastaan ​​siirtokohortissa tai soluimmuniteetin kestoon rokotuksen jälkeen.

Tekijän panokset:

Käsitteellistäminen, OW, BW ja ML; metodologia, ML; validointi, ML ja AG; muodollinen analyysi, ML; tutkimus, ML, AG ja OW; resurssit, NM, KV, BW, UE, HR ja OW; tietojen kuratointi, ML, KV ja AG; kirjoittaminen – alkuperäisen luonnoksen valmistelu, ML ja AG; kirjoittaminen – tarkistus ja editointi, BW, NM ja PAH; visualisointi, ML; valvonta, ML, NM ja OW; projektin hallinto, OW; rahoituksen hankinta, AG, PAH ja OW Kaikki kirjoittajat ovat lukeneet käsikirjoituksen julkaistun version ja hyväksyneet sen.

Rahoitus:

Tämä tutkimus ei saanut ulkopuolista rahoitusta. AG:ta tukee Stiftung Universitätsmedizinin tutkimusapuraha. OW:tä tukee RudolfAckermann-Stiftungin (Stiftung für Klinische Infektiologie) rajoittamaton apuraha.

Institutionaalisen tarkastuslautakunnan lausunto:

Tutkimus suoritettiin Helsingin julistuksen ohjeiden mukaisesti ja sen hyväksyi Essenin yliopistollisen sairaalan eettinen toimikunta (14-5858-BO).

Ilmoitettu suostumus:

Tietoinen suostumus saatiin kaikilta tutkimukseen osallistuneilta koehenkilöiltä.

Tietojen saatavuusilmoitus:

Tässä tutkimuksessa esitetyt tiedot ovat saatavilla pyynnöstä vastaavalta kirjoittajalta. Tiedot eivät ole julkisesti saatavilla tietosuojarajoitusten vuoksi.

Kiitokset:

Olemme kiitollisia Babette Große-Rhodelle hänen erinomaisesta teknisestä avusta.

Eturistiriidat:

AG on saanut puhujapalkkiot, palkkiot ja matkakulut Alexionilta, BioMérieux'lta, Novartikselta ja Sanofilta. OW on saanut tutkimusapurahoja kliinisiin tutkimuksiin, puhujapalkkioita, palkkioita ja matkakuluja Amgenilta, Alexionilta, Astellalta, Basilealta, Biotestiltä, ​​Bristol-Myers Squibbilta, Correviolta, Chiesieltä, Gileadilta, Hexalilta, Janssenilta, F. Köhler Chemieltä, MSD:ltä, Novartis, Roche, Pfizer, Sanofi ja TEVA. Muut kirjoittajat eivät ilmoittaneet eturistiriitaa. Rahoittajalla ei ollut roolia tutkimuksen suunnittelussa; tietojen keräämisessä, analysoinnissa tai tulkinnassa; käsikirjoituksen kirjoittamisessa; tai päätöksessä julkaista tulokset.

Viitteet

1. Simell, B.; Auranen, K.; Kayhty, H.; Goldblatt, D.; Dagan, R.; O'Brien, KL; Pneumococcal Carriage, G. Perusyhteys pneumokokkikuljetuksen ja taudin välillä. Expert Rev. Vaccines 2012, 11, 841–855. [CrossRef] [PubMed]

2. Kansallinen rokoteohjelmatoimisto. Aikuisten rokotussuunnitelmat.

3. Arora, S.; Kipp, G.; Bhanot, N.; Sureshkumar, KK Munuaisensiirron saajien rokotukset: mutaisten vesien puhdistaminen. World J. Transpl. 2019, 9, 1–13. [CrossRef] [PubMed]

4. Tautien torjunta- ja ehkäisykeskukset. 13-Valentin pneumokokki-konjugaattirokotteen ja 23-valentin pneumokokkipolysakkaridirokotteen käyttö aikuisille, joilla on immuunivaste: Immunisaatiokäytäntöjen neuvoa-antavan komitean (ACIP) suositukset. MMWR 2012, 61, 816–819.

5. Robert-Koch-Institut. Wissenschaftliche Begründung für die Aktualisierung der Empfehlungen zur Indikationsimpfung gegen Pneumokokken für Risikogruppen. Epid. Sonni. 2016, 37, 385–406.

6. Bonten, MJ; Huijts, SM; Bolkenbaas, M.; Webber, C.; Patterson, S.; Gault, S.; van Werkhoven, CH; van Deursen, AM; Sanders, EA; Verheij, TJ; et ai. Polysakkaridikonjugaattirokote pneumokokkikeuhkokuumetta vastaan ​​aikuisilla. N. Engl. J. Med. 2015, 372, 1114–1125. [CrossRef]

7. Euroopan lääkevirasto: Prevenar 13:n arviointiraportti.

8. Soininen, A.; Seppala, I.; Nieminen, T.; Eskola, J.; Kayhty, H. Vasta-aineiden IgG-alaluokkajakauma aikuisten pneumokokkikonjugaattirokotteiden rokotuksen jälkeen. Rokote 1999, 17, 1889–1897. [CrossRef]

9. Avci, FY; Li, X.; Tsuji, M.; Kasper, DL Mekanismi mukautuvan immuunijärjestelmän glykokonjugaattirokotteen aktivointiin ja sen vaikutukset rokotesuunnitteluun. Nat. Med. 2011, 17, 1602–1609. [CrossRef]

10. Sun, X.; Stefanetti, G.; Berti, F.; Kasper, DL Polysakkaridirakenne sanelee adaptiivisen immuunivasteen mekanismin glykokonjugaattirokotteille. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 2019, 116, 193–198. [CrossRef]

11. Niehues, T.; Bogdan, C.; Hecht, J.; Mertens, T.; Wiese-Posselt, M.; Zepp, F. Impfen bei Immundefizienz. Bundesgesundheitsblatt Gesundh. Gesundh. 2017, 60, 674–684. [CrossRef]

12. Tobudic, S.; Plunger, V.; Sunder-Plassmann, G.; Riegersperger, M.; Burgmann, H. Satunnaistettu, yksisokkoutettu, kontrolloitu tutkimus, jolla arvioitiin pneumokokkirokotuksen prime-boost-strategia munuaisensiirron saajilla. PLoS ONE 2012, 7, e46133. [CrossRef]

13. Dendle, C.; Stuart, RL; Mulley, WR; Holdsworth, SR Pneumokokkirokotus aikuisilla kiinteiden elinsiirtojen vastaanottajilla: katsaus nykyiseen näyttöön. Rokote 2018, 36, 6253–6261. [CrossRef]

14. Hoffman, TW; Meek, B.; Rijkers, GT; Grutters, JC; van Kessel, DA Pneumokokkikonjugaattirokotus ja sen jälkeen pneumokokkipolysakkaridirokotus keuhkosiirtoehdokkailla ja vastaanottajilla. Transpl. Suora 2020, 6, e555. [CrossRef]

15. Oesterreich, S.; Lindemann, M.; Goldblatt, D.; Horn, PA; Wilde, B.; Witzke, O. Humoraalinen vaste 13-valenttiselle pneumokokkikonjugaattirokotteelle munuaisensiirron saajilla. Rokote 2020, 38, 3339–3350. [CrossRef]

16. Blanchard-Rohner, G.; Enriquez, N.; Lemaitre, B.; Cadau, G.; Giostra, E.; Hadaya, K.; Meyer, P.; Gasche-Soccal, PM; Berny, T.; van Delden, C.; et ai. Pneumokokkiimmuniteetti ja PCV13-rokotevaste SOT-ehdokkailla ja vastaanottajilla. Rokote 2021, 39, 3459–3466. [CrossRef]

17. Wuorimaa, T.; Kayhty, H.; Eskola, J.; Bloigu, A.; Leroy, O.; Surcel, HM Soluvälitteisen immuniteetin aktivointi pneumokokkikonjugaatti- tai polysakkaridirokotteella immunisoinnin jälkeen. Scand. J. Immunol. 2001, 53, 422–428. [CrossRef]

18. Rabian, C.; Tschope, I.; Lesprit, P.; Katlama, C.; Molina, JM; Meynard, JL; Delfraissy, JF; Chene, G.; Levy, Y.; Ryhmä, APS Cellular CD4 T-soluvasteet konjugoidun pneumokokkirokotteen difteriaperäiselle kantajaproteiinille ja vasta-ainevaste pneumokokkirokotteelle HIV-tartunnan saaneilla aikuisilla. Clin. Tartuttaa. Dis. 2010, 50, 1174–1183. [CrossRef]

19. Gazi, U.; Karasartova, D.; Sahiner, IT; Gureser, AS; Tosun, O.; Derici, MK; Dolapci, M.; Taylan Ozkan, A. Splenektomian vaikutus PCV-13--indusoitujen muistin B- ja T-solujen määrään. Int. J. Clin. Harjoittele. 2018, 72, e13077. [CrossRef]

20. Karasartova, D.; Gazi, U.; Tosun, O.; Gureser, AS; Sahiner, IT; Dolapci, M.; Ozkan, AT Anti-pneumokokkirokotteen aiheuttamat soluimmuunivasteet trauman jälkeisillä pernanpoistopotilailla. J. Clin. Immunol. 2017, 37, 388–396. [CrossRef]

21. Glennie, SJ; Sepako, E.; Mzinza, D.; Harawa, V.; Miles, DJ; Jambo, KC; Gordon, SB; Williams, NA; Heyderman, RS Heikentynyt CD4 T-solumuistivaste Streptococcus pneumoniaelle edeltää CD4 T-solujen ehtymistä HIV-tartunnan saaneilla malawilaisilla aikuisilla. PLoS ONE 2011, 6, e25610. [CrossRef]

22. Sepako, E.; Glennie, SJ; Jambo, KC; Mzinza, D.; Iwajomo, OH; Banda, D.; van Oosterhout, JJAWN; Gordon, SB; Heyderman, RS Pneumokokin CD4 T-soluimmuniteetin epätäydellinen palautuminen antiretroviraalisen hoidon aloittamisen jälkeen HIV-tartunnan saaneilla malawilaisilla aikuisilla. PLoS ONE 2014, 9, e100640. [CrossRef]

23. Baril, L.; Dietemann, J.; Essevaz-Roulet, M.; Beniguel, L.; Coan, P.; Briles, DE; Guy, B.; Cozon, G. Pneumokokin pintaproteiini A (PspA) on tehokas T-soluvälitteisten vasteiden aikaansaamisessa invasiivisen pneumokokkitaudin aikana aikuisilla. Clin. Exp. Immunol. 2006, 145, 277–286. [CrossRef]

24. Jaat, FG; Hasan, SF; Perry, A.; Cookson, S.; Murali, S.; Perry, JD; Lanyon, CV; De Soyza, A.; Todryk, SM Bakteerivasta-aine- ja T-soluvasteet keuhkoputkentulehdusten yhteydessä liittyvät eri tavalla keuhkojen kolonisaatioon ja sairauksiin. Hengitä. Res. 2018, 19, 106. [CrossRef]

25. Groneck, L.; Schrama, D.; Fabri, M.; Stephen, TL; Harms, F.; Meemboor, S.; Hafke, H.; Bessler, M.; Becker, JC; Kalka-Moll, WM Oligoklonaaliset CD4- ja T-solut edistävät isännän muistin immuunivasteita Streptococcus-keuhkokuumeen kahtaisioniselle polysakkaridille. Tartuttaa. Immun. 2009, 77, 3705–3712. [CrossRef]

26. Holtmeier, W.; Kabelitz, D. Gamma-delta-T-solut yhdistävät synnynnäiset ja mukautuvat immuunivasteet. Chem. Immunol. Allergy 2005, 86, 151–183. [CrossRef]

27. Kirby, AC; Newton, DJ; Karstaus, SR; Kaye, PM Todisteita keuhko-spesifisten gamma-delta-T-solujen osajoukoista paikallisissa vasteissa Streptococcus pneumoniae -infektiolle. euroa J. Immunol. 2007, 37, 3404–3413. [CrossRef]

28. Kanevskiy, LM; Telford, WG; Sapožnikov, AM; Kovalenko, EI Lipopolysakkaridi indusoi IFN-gammatuotantoa ihmisen NK-soluissa. Edessä. Immunol. 2013, 4, 11. [CrossRef]

29. Lindemann, M.; Heinemann, FM; Horn, PA; Witzke, O. Immuniteetti pneumokokkiantigeeneille munuaisensiirron saajilla. Elinsiirto 2010, 90, 1463–1467. [CrossRef]

30. Goldblatt, D.; Plikaytis, BD; Akkoyunlu, M.; Antonello, J.; Ashton, L.; Blake, M.; Burton, R.; Care, R.; Durant, N.; Feavers, I.; et ai. Uuden ihmisen pneumokokkistandardin vertailuseerumin, 007sp, perustaminen. Clin. Vaccine Immunol. 2011, 18, 1728–1736. [CrossRef]

31. Lindemann, M.; Barsegian, V.; Siffert, W.; Ferencik, S.; Roggendorf, M.; Grosse-Wilde, H. G-proteiinin beeta3-alayksikön C825T ja HLA-luokan II polymorfismien rooli immuunivasteessa HBV-rokotuksen jälkeen. Virology 2002, 297, 245–252. [CrossRef]

32. Lindemann, M.; Klisanin, V.; Thümmler, L.; Fisenkci, N.; Tsachakis-Mück, N.; Ditschkowski, M.; Schwarzkopf, S.; Klump, H.; Reinhardt, HC; Horn, PA; et ai. Humoraaliset ja solujen rokotusvasteet SARS-CoV-2-tautia vastaan ​​hematopoieettisten kantasolusiirtojen vastaanottajilla. Rokotteet 2021, 9, 1075. [CrossRef]

For more information:1950477648nn@gmail.com