Metioniinin lähteiden ja Bacillus Amyloliquefaciens CECT 5940:n käyttö ruokavaliossa vaikuttaa Litopenaeus Vannamein vähäisemmällä kalajauhoruokavaliolla kasvuun, hepatopankreaattiseen histologiaan, ruoansulatukseen, immuniteettiin ja ruoansulatusmikrobiotaan

Yksinkertainen yhteenveto: Katkarapuviljelyn nopeutunut laajentuminen vaatii korkean ravintoarvon omaavia proteiinilähteitä katkarapujen ravitsemukselliset tarpeet täyttävien rehujen valmistukseen. Kalajauho (FM) on tärkein proteiinilähde vesiruokinnassa. Sen rajallinen tarjonta ja korkeat kustannukset rohkaisevat kuitenkin vaihtoehtoisten proteiinilähteiden tutkimusta kannattavampien rehujen kehittämiseksi, jotka edistävät vesiviljelyn kestävyyttä. Soijapapujauhoa (SBM) ja siipikarjan sivutuotejauhoa (PBM) on käytetty proteiinilähteinä kalajauhon korvaamiseen, mutta niiden välttämättömien aminohappojen epätasapaino heikentää katkarapujen kasvua ja vaikuttaa katkarapujen terveyteen. Siksi tutkimuksen tarkoituksena oli arvioida FM:n korvaamisen SBM:llä ja PBM:llä DL-Metillä, MET-MET:llä (AQUAVI®), Bacillus amyloliquefaciens CECT 5940 (ECOBIOL®) ja niiden yhdistelmillä täydennetyissä ruokavalioissa. nuorten Litopenaeus vannamein kasvukykyä ja terveyttä. Tulokset osoittivat, että FM voitiin korvata osittain SBM:llä ja PBM:llä katkarapurehuissa, joihin oli lisätty 0,19 % MET-MET tai 0,06 % MET-MET plus 0,10 % B. amyloliquefaciens CECT 5940 ilman vaikuttaa haitallisesti Litopenaeus vannamein kasvuun ja hyvinvointiin. Nämä tulokset voivat olla mielenkiintoisia vähäisen kalajauhon rehujen kehittämisessä ja vesiviljelyn kestävyyden edistämisessä.

cistanche-lisäaine hyödyttää - lisää vastustuskykyä

Abstrakti:{{0}}viikon ruokintakokeessa tutkittiin kalajauhon (FM) korvaamisen vaikutusta soijajauholla (SBM) ja siipikarjan sivutuotejauholla (PBM) DL-Metillä, MET-MET:llä (AQUAVI) täydennetyssä ruokavaliossa. ®), Bacillus amyloliquefaciens CECT 5940 (ECOBIOL®) ja niiden yhdistelmät nuorten Litopenaeus vannamein kasvuun ja terveyteen. Yhteensä kuusi kokeellista ruokavaliota muotoiltiin L. vannamein ravitsemuksellisten vaatimusten mukaisesti. Yhteensä 480 katkarapua (0.30 ± 0.04 g) jaettiin satunnaisesti 24 säiliöön (4 toistoa/kukin ruokavalio) , 20 katkarapua/säiliö). Katkarapuja ruokittiin kontrolliruokavaliolla (CD; 200 g/kg kalajauhoa) ja viidellä ruokavaliolla, joissa oli 50 % FM-korvausravintoa täydennettynä erilaisilla metioniinilähteillä, probiootilla (B. amyloliquefaciens CECT). 5940) ja niiden yhdistelmät: D1 (0.13 % DL-MET), D2 (0.06 % MET-MET), D3 ({{) 69}},19 % MET-MET), D4 (0,13 % DL-MET plus 0,10 % B. amyloliquefaciens CECT 5940 ja D5 (0,06 % MET-MET plus 0,10 % B. amyloliquefaciens CECT 5940). Katkarapuille oli syötetty D3 ja D5 merkittävästi suurempi lopullinen, viikoittainen painonnousu ja lopullinen biomassa verrattuna katkarapuilla syötetyillä CD:llä (p < 0,05). Katkaravut, jotka syötettiin D2:sta D5:een, lisäsivät maksahaiman epiteelisolujen korkeutta (p < 0,05). Ruoansulatuskanavan entsymaattiset aktiivisuudet lisääntyivät merkittävästi katkarapujen maksahaiman syötetyillä D3:lla (p < 0,05). D1:llä ruokittujen katkarapujen immuunijärjestelmään liittyvien geenien säätely oli merkittävää (p < 0,05). Lisäksi D3:lla ja D5:llä ruokitut katkaravut lisäsivät hiilihydraattiaineenvaihduntaan ja immuunijärjestelmään liittyvien hyödyllisten prokaryoottisten mikro-organismien, kuten Pseudoalteromonas ja Demequina, määrää. stimulaatiota. Myös D3:lla ja D5:llä ruokitut katkaravut lisäsivät hyödyllisten eukaryoottisten mikro-organismien määrää, koska Aurantiochytrium ja Aplanochytrium olivat sukua eikosapentaeenihapon (EPA) ja dokosaheksaeenihapon (DHA) tuotantoon, joilla on rooli vesieliöiden kasvua edistävässä tai vastustuskyvyn vahvistamisessa. Siksi kalajauho voitaisiin osittain korvata jopa 50 % SBM:llä ja PBM:llä ruokavaliossa, jota on täydennetty 0,19 % MET-MET:llä (AQUAVI®) tai 0,06 % MET-MET:llä (AQUAVI®) plus 0,10 % B. amyloliquefaciens CECT 5940 (ECOBIOL®) ja parantaa valkoisten katkarapujen tuotantokykyä, terveyttä ja vastustuskykyä. Lisätutkimukset ovat tarpeen aminohappojen ja probioottien synergististen vaikutusten tutkimiseksi viljellyissä katkarapuruokavalioissa sekä sen arvioimiseksi, kuinka SBM ja PBM vaikuttavat vähäisemmän kalajauhoruokavalion rasvahappokoostumukseen ja katkarapujen lihasten laatuun. Tästä huolimatta nämä tiedot voivat olla mielenkiintoisia kehitettäessä vähän kalajauhoa sisältäviä rehuja vesiviljelyyn vaikuttamatta vesieliöiden kasvuun ja hyvinvointiin.

Cistanche tubulosan edut- vahvistaa immuunijärjestelmää

Napsauta tästä nähdäksesi Cistanche Enhance Immunity -tuotteet

【Kysy lisää】 Sähköposti:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

Avainsanat: Litopenaeus vannamei; katkarapu ravitsemus; kalajauhon korvaaminen; metioniini; probiootit; esitys; terveys; mikrobiota

1. Esittely

Katkarapuviljely tuotti lähes 11,2 miljoonaa tonnia vuonna 2022, ja Tyynenmeren valkoiset katkaravut (Litopenaeus vannamei) oli edustavin laji 52 prosentilla kokonaistuotannosta [1]. Vesiviljelytuotannon kestävyys ja kannattavuus edellyttävät korkean ravintoarvon omaavien raaka-aineiden toimittamista viljeltyjen katkarapujen ravintotarpeita vastaavaan rehun valmistukseen [2,3]. Kalajauho on vesiruoan pääainesosa korkean ravintoarvon vuoksi [4]. Kalajauhon rajallinen tarjonta ja korkeat kustannukset vaativat kuitenkin tutkimusta vaihtoehtoisista rehulähteistä, jotka ovat kannattavampia ja edistävät vesiviljelyn kestävyyttä [5,6]. Aiemmat tutkimukset, jotka keskittyivät pääasiassa katkarapujen tuotantokykyyn, raportoivat, että kalajauho voidaan osittain korvata erilaisilla eläin- ja kasviperäisillä lähteillä [6]. Kasviproteiinilähteistä soijajauholla on korkea proteiinipitoisuus. Kuitenkin ravitsemuksellisia tekijöitä, huono sulavuus ja välttämättömien aminohappojen (EAA) epätasapaino, jotka vaikuttavat ruoansulatuskanavan mikrobiotaan, aiheuttavat tulehdusreaktion ruoansulatuselimissä, heikentävät tuottavuutta ja vaikuttavat vesieliön immuunivasteeseen [5,7, 8]. Siipikarjan sivutuotejauho on proteiinipitoinen eläinlähde, josta puuttuu metioniinia ja lysiiniä, joten sen käyttö vähäisissä kalajauhorehuissa saattaa vaikuttaa vesieliöiden kasvuun ja hyvinvointiin [9]. Metioniini on niukasti EAA:ta vähäisissä kalajauhoissa, ja se on välttämätön vesieliöiden normaalille kasvulle [10], proteiinisynteesille [11] ja immuunitoiminnalle [12]. Tästä syystä metioniinilisäaine vähäisissä kalajauhoissa olevissa rehuissa on tarpeen aminohappojen tasapainottamiseksi ja kielteisten vaikutusten vähentämiseksi viljeltyjen vesieliöiden kasvuun ja aineenvaihduntaan [13]. Erilaisia ​​metioniiniresursseja on kaupallisesti saatavilla, kuten D-Met- ja L-Met-isomeerien raseeminen seos nimeltä DL-metioniini (DL-Met) ja neljän erilaisen metioniinin stereoisomeerin seos (LD-Met-Met, DL-Met). -Met, LL-Met-Met ja DD-Met-Met) kaupallistettiin nimellä AQUAVI® (Met-Met) [10]. AQUAVI®:lla on kuitenkin paremmat fysikaalis-kemialliset ominaisuudet, kuten erittäin alhainen vesiliukoisuus ja korkeampi absorptio kuin DL-Metillä [10,14]. Toisaalta on raportoitu, että probioottien (Bacillus subtilis) lisäyksellä on positiivisia vaikutuksia kasvukykyyn ja terveyteen valkoisten katkarapujen (L. vannamei) ja härkäsammakoiden (Lithobates catesbeianus) ruokinnassa vähäisellä kalajauholla [15,16]. Probiootit ovat eläviä mikro-organismeja, joita käytetään vesirehuissa, koska ne voivat parantaa rehun käyttöä, entsymaattista pilkkomista, taudinaiheuttajien ehkäisyä, immuunivastetta ja kasvua [15]. Siksi probioottien sisällyttäminen vähäisempiin kalajauhorehuihin voisi parantaa vesieliöiden terveyttä ja hyvinvointia [16]. Bacillus-bakteereja käytetään laajalti vesiviljelyssä probiootteina, koska niillä on kyky tuottaa antimikrobisia yhdisteitä ja eksoentsyymejä, jotka parantavat ravinteiden sulatusta, patogeenien estoa, immuunivasteen modulaatiota, suoliston eheyden ylläpitämistä ja siten kasvukykyä [17]. B. amyloliquefaciensilla on antibakteerista aktiivisuutta ja se tuottaa ruoansulatusentsyymejä, jotka tukevat ruoansulatusta [18].

Edellä esitetystä johtuen vesirehuissa on käytetty kalajauhon vaihtoehtoisia lähteitä yhdistettynä moniin lisäaineisiin välttämättömien ravintoaineiden saannin takaamiseksi, tuotantokyvyn parantamiseksi, ruokavalion fysikaalis-kemiallisen koostumuksen säilyttämiseksi ja vesiympäristön laadun ylläpitämiseksi [19]. Tästä syystä vähäjauhoiset ruokavaliot, joita on täydennetty erilaisilla metioniinin lähteillä ja B. amyloliquefaciensilla, ovat parantaneet viljeltyjen vesieliöiden kasvukykyä ja ruokintatehokkuutta [3,7,8,20,21]. Myös B. amyloliquefaciens CECT 5940 ja sen vaikutukset broilerien [22] ja Niilin tilapian (Oreochromis niloticus) [21] kasvuun ja terveyteen on raportoitu. Harvat tutkimukset ovat kuitenkin vahvistaneet vähäjauhoisen ruokavalion ja lisäaineiden vaikutukset katkarapujen ruuansulatuksen terveyteen ja immuunivasteeseen. Siksi tämän tutkimuksen päätavoitteena oli arvioida FM-korvauksen vaikutusta SBM:llä ja PBM:llä DL-Metillä, MET-MET:llä (AQUAVI®), B. amyloliquefaciens CECT 5940:llä (ECOBIOL®) ja niiden yhdistelmillä täydennetyissä ruokavalioissa. suorituskyky, hepatopankreaattinen histologia, ruoansulatuksen entsymaattinen aktiivisuus, immuunijärjestelmään liittyvien geenien transkriptiovaste ja nuorten Tyynenmeren valkokatkarapujen (L. vannamei) ruoansulatusjärjestelmän mikrobikoostumus.

2. Materiaalit ja metodit

2.1. Kokeellinen ruokavalion valmistelu

Yhteensä kuusi kokeellista ruokavaliota muotoiltiin L. vannamein ravitsemusvaatimusten [23] ja valmistajan suositusten (Evonikin Aqua R&D -ryhmä) mukaisesti. Kontrolliruokavalio (CD) formuloitiin sisältämään seoksen FM-proteiinia (39 %), SBM-proteiinia (53 %) ja PBM-proteiinia (8 %), kuten tyypillinen kaupallinen katkarapuruokavalio. SBM ja PBM olivat tärkeimmät vaihtoehtoiset proteiinilähteet FM:n korvaamiseksi, kun taas vehnäjauhoa käytettiin side- ja täyteaineena. Kalaöljyä käytettiin pääasiallisena lipidilähteenä tyydyttämään n-3 välttämättömien rasvahappojen katkarapuvaatimukset. CD:llä oli 2{{10}}0 g/kg kalajauhoa ilman lisäravinteita. Muut viisi ruokavaliota (D1–D5), joissa SBM ja PBM korvasivat FM:n 50 %, täydennettiin erilaisilla metioniinilähteillä, B. amyloliquefaciensilla ja niiden yhdistelmillä. D1: 0.13 % DL-MET, D2: 0.06 % MET-MET (AQUAVI®), D3: 0,19 % MET-MET (AQUAVI®), D4 : 0,13 % DL-MET plus 0,10 % B. amyloliquefaciens CECT 5940 (ECOBIOL®) ja D5: 0,06 % MET-MET (AQUAVI®) plus 0,10 % B. amyloliquefaciens CECT 5940 (ECOBIOL®). Lisäksi veden stabiilisuussuhde arvioitiin ruokavalion fyysisenä ominaisuutena aiemmin kuvatulla menetelmällä [24]. Taulukossa 1 on esitetty kokeellisten ruokavalioiden koostumus, likimääräinen koostumus ja vesistabiilisuusarvot.

Taulukko 1. Koeruokavalioiden ainesosat ja likimääräinen koostumus (g/kg kuivapaino).

Taulukko 1. Jatk.

2.2. Katkarapu, ruokintakoe ja näytekokoelma

Nuori L. vannamei saatiin katkaraputilalta Sonorassa, Meksikossa. Katkaravut olivat patogeenivapaita Maailman eläintautijärjestön vesieläinten diagnostisten testien käsikirjassa [25] kuvattujen menettelyjen mukaisesti. Ennen ruokintakoetta kaikki katkaravut totutettiin vesiviljelylaboratoriossa 1500-L-säiliöissä, joissa oli merivettä kontrolloiduissa olosuhteissa (lämpötila 30 ± 0,5 ◦C, liuennut happi Yli tai yhtä suuri kuin 4 mg/l, suolapitoisuus 37 g/l, pH suurempi tai yhtä suuri kuin 7 ja valojaksot 12 valotuntia) ja ruokittiin kaupallisella rehulla 7 päivän ajan. Alussa 480 tervettä katkarapua (0,30 ± 0,02 g) paastotettiin 24 tuntia ja jaettiin satunnaisesti 24 pyöreään säiliöön (tilavuus 150 l) tiheydellä 20 katkarapua säiliötä kohti (vastaa tiheyttä 133 katkarapua/m3). Jokaista ravintohoitoa varten oli neljä kopiosäiliötä, jotka jaettiin satunnaisesti. Katkaravut ruokittiin kylläisiksi alkuannoksella 12 % niiden biomassasta jaettuna kolmeen annokseen päivän aikana (8:00, 13:00 ja 16:00 h). 56 päivää, säädetty päivittäin riippuen rehujäännösten läsnäolosta tai puuttumisesta. Lämpötila (27,84 - 28,36 ◦C), suolapitoisuus (36,98 - 37,07 g/L), liuennut happi (400 - 5,17 mg/L) ja pH (7,41 - 7,84) mitattiin. Joka päivä 30 % vedestä vaihdettiin. Syömätön rehu, ulosteet, kuolleet ja kuolleet katkaravut poistettiin päivittäin. Ruokintakokeen ja 24 tunnin paastojakson jälkeen kustakin rinnakkaisnäytteestä otettiin satunnaisesti kolme katkarapua, jotta saatiin 400 µl hemolymfiä geeniekspressioanalyysiä varten [26]. Katkaravut, joista oli aiemmin laskettu verta, leikattiin aseptisesti kokonaisten suolet ja hepatohaima saamiseksi, minkä jälkeen niitä säilytettiin -80 ◦C:ssa ruoansulatuskanavan entsymaattiseen toimintaan ja mikrobiomianalyysiin asti. Lisäksi jokaisesta käsittelystä otettiin satunnaisesti näyte kahdestatoista (kolme katkarapua/replicate) kokonaista katkarapua ja kiinnitettiin AFA Davidson -liuokseen histologista analyysiä varten.

2.3. Kasvun suorituskyky

Kaikki katkaravut punnittiin ja laskettiin kasvukyvyn laskemiseksi aikaisempien tutkimusten yhtälöiden mukaisesti [27–29].

Lopullinen paino=(Σ Lopullinen yksilön paino)/katkarapujen lopullinen lukumäärä. Viikoittainen painonnousu=(lopullinen paino − alkupaino)/viikkojen lukumäärä. Ominaiskasvunopeus=100 × (lopullinen paino − alkupaino) / kokeen päivä. Eloonjäämisprosentti=100 × (katkarapujen lopullinen lukumäärä / katkarapujen alkuperäinen lukumäärä). Lopullinen biomassa=Lopullinen paino × Katkarapujen lopullinen lukumäärä. Syöttömäärä=Syöttösyöttö (kuivapaino) − Kerätty rehu (kuivapaino). Rehun muunnosprosentti=Rehun saanti/lopullinen biomassa.

2.4. Maksahaiman histologia

Davidsonin liuokseen kiinnitetyt katkarapujen maksahaimanäytteet käsiteltiin Bellin ja Lightnerin [30] kuvaaman menetelmän mukaisesti. Histologiset leikkeet, joiden paksuus oli 4 um, leikattiin käyttämällä pyörivää mikrotomia (LEICA RM2115RT). Kudosvärjäys, objektilasien havainnointi ja kuvien digitointi toteutettiin Casillas-Hernándezin [31] kuvaaman menetelmän mukaisesti. Kudoskuvia käytettiin maksahaiman solukorkeuden mittaamiseen käyttämällä digitaalista kuvajärjestelmää Image-Pro Premier -ohjelmistoa v9.0 (Media Cyvernetics Inc., Rockville, MD, USA).

cistanche tubulosa - parantaa immuunijärjestelmää

2.5. Ruoansulatusentsyymien aktiivisuus

Suolet ja maksahaima homogenisoitiin erikseen suhteeseen 10 % 0,9-prosenttisella suolaliuoksella ja sentrifugoitiin nopeudella 3500 rpm 10 minuuttia 4 ◦C:ssa, ja supernatantti analysoitiin välittömästi ruoansulatusentsyymimäärityksiä varten mikrolevylukijalla (Bio). -Rad, Hercules, CA, USA). Proteaasi- ja lipaasiaktiivisuudet määritettiin kaupallisella pakkauksella (Sigma-Aldrich®, Louis, MO, USA). Amylaasiaktiivisuus mitattiin käyttämällä liukoista tärkkelystä substraattina [32]. Liukoisen proteiinin kokonaispitoisuus määritettiin proteiinin ja väriaineen sitoutumisen periaatteella käyttämällä naudan seerumin albumiinia standardina [33]. Kaikki määritykset suoritettiin kolmessa rinnakkaisnäytteessä. Ruoansulatusentsyymiaktiivisuudet ilmaistaan ​​U/mg proteiinia.

2.6. Immuunijärjestelmään liittyvien geenien transkriptionaalinen vaste

Hemolymfiä sentrifugoitiin nopeudella 3500 rpm 10 minuuttia 4 ◦C:ssa hemosyyttien erottamiseksi plasmasta. Kokonais-RNA hemosyyteistä uutettiin TRIzol-reagenssilla (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) ja käsiteltiin RNA-vapaalla DNaasilla (Promega®, Madison, WI, USA). cDNA syntetisoitiin Total RNA:lla (500 ng) käyttämällä ImProm-II™ Reverse Transcription System -järjestelmää (Promega®) ja oligo d(T)20:tä (T4OLIGO). cDNA-synteesi toteutettiin käänteistranskriptiolla 42 °C:ssa 60 minuutin ajan; sitten käänteistranskriptaasi inaktivoitiin 70 ◦C:ssa 15 minuutin ajan reaktion pysäyttämiseksi. cDNA laimennettiin 80 ul:lla ultrapuhdasta vettä ja 5 ui käytettiin templaattina reaaliaikaiseen kvantitatiiviseen PCR-reaktioon (qPCR). Transkriptiovaste analysoitiin viidestä immuunijärjestelmään liittyvästä geenistä ja -aktiinista vertailugeeninä (taulukko 2) [34]. QPCR suoritettiin StepOne Real-Time PCR -järjestelmällä (Thermo Fisher Scientific) käyttämällä SensiFAST™ SYBR® Hi-ROX Kit -sarjaa (Bioline™, Lontoo, UK). QPCR-olosuhteet olivat alkudenaturointi 95 ◦C:ssa 10 minuutin ajan, jota seurasi 40 denaturaatiosykliä 95 ◦C:ssa 15 sekunnin ajan ja pariutus/pidennys 60 ◦C:ssa 1 minuutin ajan. Dissosiaatiokäyrä (60–95 ◦C) analysoitiin lämpötilan siirtymänopeudella 0,5 ◦C/s jokaiselle alukeparille. Suhteellista kvantifiointimenetelmää käytettiin geeniekspressioanalyysiin Rodriguez-Anayan [35] ja Casillas-Hernándezin [36] mukaisesti.

Taulukko 2. Spesifiset alukkeet, joita käytettiin L. vannamein immuuniperäisten geenien transkriptiovasteeseen.

2.7. DNA:n erottaminen ja sekvensointianalyysi

Genominen DNA 12 katkaravun hepatohaimasta ja suolistosta hoitoa kohden uutettiin käyttämällä Quick-DNA™ Fecal/Soil Microbea (Zymo Research, Irvine, CA, USA) valmistajan ohjeiden mukaisesti. DNA-pitoisuus määritettiin käyttämällä NanoDrop 2000 spektrofotometriä (Thermo-Fisher Scientific, Waltham, MA, USA), ja DNA:n laatu arvioitiin agaroosigeelielektroforeesilla (1 %, w/v). Genomiset DNA-näytteet ulkoistettiin sitten Microbial Genomics Laboratorylle (CIAD, Meksiko) DNA-kirjaston valmistelua ja sekvensointia varten käyttäen tavanomaisia ​​Illumina-protokollia monistamiseen [37]. Lyhyesti sanottuna 16S-rRNA- ja 18S-rRNA-geenien V4-variaabelialue monistettiin PCR:llä seuraavilla alukkeilla käyttämällä Illumina-adaptereita: 16S-V4_515F (50 - GTG CCA GCM GCC GCG GTA A{{ 13}} ), 16S-V4_806R (50 -TAA TCT WTG GGV HCA TCA GG-30 ), 18S-V9_Euk_1391F ( 50 -GTA CAC ACC GCC CGT C-30 ), ja 18S-V9_EukBr (50 -TGA TCC TTC TGC AGG TTC ACC TAC-30 ). Lopuksi amplikonit kvantifioitiin Qubitissa, sekoitettiin ekvimolaarisessa poolissa ja sekvensoitiin Illumina Miniseq -alustalla standardiolosuhteissa (300 sykliä, 2 × 150).

2.8. Bioinformaattinen analyysi

Parillisten lukujen FASTQ-tiedostot analysoitiin käyttämällä DADA2-pakettia v1.24.0 [38]. Sekvenssianalyysin työnkulku sisälsi suodatuksen, replikoinnin, näytepäätelmän, kimeeran tunnistamisen ja parillisen pään (PE) lukujen yhdistämisen ASV:ihin (amplikonisekvenssimuunnelmiin). DADA2 sisältää "naiivin Bayesin" menetelmän, joka käyttää SILVA-tietokantoja sekä 16S-V4-alueella (silva_nr99_v138.1_train_set.fa) että 18S-V9-alue (silva_132.18s.99_rep_set.dada2.fa). Taksonominen tiedot analysoitiin Phyloseq V1.40.0 ja mikrobiomipaketin v1.18.0 avulla alfa- ja beetadiversiteetti- ja ordinaatioarvojen saamiseksi [37]. Beta-diversiteetti suoritettiin painottamattoman UniFrac-etäisyyden perusteella ja visualisoitiin käyttämällä PCoA:ta, joka oli rakennettu ggplotilla R:ssä. Lopuksi monimuuttujat yhteisötason erot ryhmien välillä kvantifioitiin permutaatiolla monimuuttujavarianssianalyysillä (PERMANOVA) [39]. Lopullista ASVs-taulukkoa 16S-sekvensseistä käytettiin myös syötteenä toiminnalliseen metagenomiseen ennustukseen PICRUStin avulla [40]. PICRUStilla saatu KEGG-reitin sisältö normalisoitiin ja sitä käytettiin sitten metagenomisten toiminnallisten ennusteiden saamiseksi eri hierarkkisilla KEGG-tasoilla (1, 2 ja 3) [41]. Illumina-sekvensointi käyttäen alukkeita V4-hypervariaabelille alueelle 16S-rRNA-geenissä tuotti 976 065 PE-lukemaa 150 emäsparista, jotka vastaavat L. vannamein suolistoa ja hepatohaimaa, ja keskimäärin 81 338 lukua näytettä kohti. Laadukkaan suodatusprosessin ja kimeerojen eliminoinnin jälkeen säilytettiin keskimäärin 58 235 sekvenssiä näytettä kohti, mikä vastaa 71,6 %, ja ne määritettiin 709 ASV:lle. Toisaalta V9-18S rDNA-sekvensoinnista saatiin 871 699 PE-lukemaa 150 bp:llä, keskimäärin 72 642 näytettä kohti. Sekvenssianalyysin työnkulun jälkeen lukemat vähenivät noin 12,7 %. Kuitenkin taksonomista tunnistamista ja ASV-ryhmittelyä suoritettaessa suurin osa sekvensseistä vastasi isännän (L. vannamei) DNA:ta, jolloin näytteet poistettiin hepatohaimasta. Siksi eukaryoottimikrobiston karakterisoinnissa esitetyt tiedot vastaavat suolistossa olevia mikro-organismeja. Käytetty tietojoukko oli 12 970 sekvenssiä, jotka määritettiin 43 ASV:lle.

2.9. Tilastollinen analyysi

Kasvutulokset, hepatohaiman solukorkeus, ruoansulatuksen entsymaattinen aktiivisuus ja immuunijärjestelmään liittyvien geenien transkriptiovaste arvioitiin yksisuuntaisella varianssianalyysillä (ANOVA). Jos mitään merkitystä havaittiin, Tukeyn testi suoritettiin keskiarvojen vertailua varten. Tilastollinen analyysi suoritettiin Statgraphics Centurion XVI:lla. Merkittävyys asetettiin 95 %:n todennäköisyystasolle.

3. Tulokset

3.1. Kasvun suorituskyky

Kasvutehokkuusarvot on esitetty taulukossa 3. CD:hen verrattuna korkeimmat kasvun arvot (lopullinen paino, painonnousu ja lopullinen biomassa) havaittiin katkaravuilla, joita ruokittiin D3 ja D5, jotka olivat merkittävästi korkeampia kuin katkaravuilla ruokittu D1 (p < 0.05), mutta ilman tilastollista eroa katkarapuilla syötettyjen D2 ja D4 ja (p > 0.05). Pienin rehun konversioprosentti havaittiin katkaravuilla, joille syötettiin D3, mutta FCR:ssä ei havaittu merkitsevää eroa kaikkien ruokavaliohoitojen välillä (p > 0.05). Vaikka rehun saanti väheni merkittävästi (p < 0,05) katkaravuilla, joille syötettiin D1, ja lisääntyi merkittävästi (p < 0,05) katkaravuilla, joille syötettiin D5. Eloonjäämisasteessa ei havaittu merkitsevää eroa kaikkien ruokavaliohoitojen välillä (p > 0,05).

Taulukko 3. Kokeellisten ruokavalioiden vaikutus Litopenaeus vannamein kasvukykyyn.

3.2. Hepatopankreaattinen histologia

Katkaravun hepatohaimalla oli hyvin organisoitu rakenne (kuva 1A). Lukuun ottamatta katkarapuja, joita ruokittiin D1:llä, kaikilla katkarapuilla ruokitulla vähäjauhoisella ruokavaliolla oli korkeampi (p < 0,05) maksahaiman epiteelisolut kuin katkaravuilla, jotka syötettiin CD-syötetyllä katkaravulla (kuvio 1B).

Kuva 1. L. vannamei -katkarapujen hepatohaiman histologia ruokitulla kontrolliruokavaliolla ja 50 % kalajauhokorvausruokavalioilla. (A) Hematoksyliinillä ja eosiinilla värjättyjen maksahaiman pitkittäisleikkausten (4 µm) valomikrokuvat osoittavat hyvin organisoituneen rakenteen. Nuolet osoittavat tubulusten epiteelisolujen normaaleja rakenteita, mukaan lukien erityssolut (B-solut). Mittakaava: 100 µm. (B) Katkarapujen hepatohaiman epiteelin korkeussolut. Tiedot esitetään keskiarvona ± SE, arvot eri kirjaimilla ovat merkittävästi erilaisia ​​(p < 0.05). Lyhenteet: tubulukset (Tb), epiteelisolut (EC) ja B-solut (HpB). CD (20{{30}} g/kg FM), D1 (0,13 % DL-MET), D2 (0,06 % MET-MET), D3 (0,19 % MET-MET) , D4 (0,13 % DL-MET plus 0,10 % B. amyloliquefaciens CECT 5940) ja D5 (0,06 % MET-MET plus 0,10 % B. amyloliquefaciens CECT 5940).

3.3. Ruoansulatusentsyymiaktiivisuus

Erilaisten ravinnon metioniinin lähteiden ja Bacillus amyloliquefaciensin vaikutus suolen ja maksahaiman ruoansulatusentsyymiaktiivisuuksiin L. vannameilla ruokitun vähäjauhoisen ruokavalion yhteydessä on esitetty taulukossa 4. D3:lla ruokittujen katkarapujen hepatohaiman amylaasi-, proteaasi- ja lipaasiaktiivisuudet olivat merkitsevästi korkeampi (p < 0.05) kuin katkarapuilla syötetty CD, kun taas suolen ruoansulatusentsyymiaktiivisuudet eivät vaikuttaneet (p > 0.05). D1:llä ruokittujen katkarapujen maksahaimassa havaittiin alhaisin amylaasi- ja lipaasiarvo, kun taas suolistossa ruoansulatusentsyymiaktiivisuudet olivat alhaisimmat, mutta merkittäviä eroja (p > 0,05) ei havaittu verrattuna katkarapuilla syötettyyn CD:hen.

Taulukko 4. Kokeellisten ruokavalioiden vaikutus Litopenaeus vannamein ruoansulatusentsyymiaktiivisuuteen.

3.4. Immuunijärjestelmään liittyvien geenien transkriptionaalinen vaste

Valkoisten katkarapujen immuuniperäisten geenien transkriptiovaste, joka oli ruokittu pelkistetyllä kalajauhoruokavaliolla lisäaineilla, määritettiin ja sitä verrattiin katkarapuilla syötettyyn CD:hen (kuva 2). Lukuun ottamatta katkarapuilla ruokittua D1:tä, kaikilla tässä tutkimuksessa analysoiduilla immuunijärjestelmään liittyvillä geeneillä oli korkeampi ekspressio kuin katkarapuilla syötetyillä CD:llä. Hc ja pPO olivat merkitsevästi (p < 0.05) lisääntyneet katkaravuilla, joita ruokittiin D3 ja D5. LGBP:tä säädeltiin merkittävästi (p < 0.05) katkaravuilla, joita ruokittiin D2- ja D3-luokissa. MnSOD lisääntyi merkittävästi (p < 0,05) katkaravuilla, joita syötettiin D2, D3 ja D5. HSP60:n säätely lisääntyi merkittävästi (p < 0,05) katkaravuilla, joita ruokittiin D5:llä. Immuuniin liittyvien geenien transkriptiovasteen alhaisimmat arvot havaittiin katkaravuilla, joita ruokittiin D1:llä verrattuna kaikkiin ruokavaliohoitoihin.

Kuva 2. Katkarapuilla ruokittujen kontrolliruokavalioiden ja 50 % kalajauhokorvausruokavalioiden immuunijärjestelmään liittyvien geenien transkriptiovaste. (A) hemosyaniini (Hc), (B) propenolioksidaasi (pPO), (C) lipopolysakkaridi ja -glukaania sitova proteiini (LGBP), (D) sytosolinen mangaanisuperoksididismutaasi (MnSOD) ja (E) lämpöshokkiproteiini 6{ {11}} (HSP60). Tiedot esitetään keskiarvona ± SE, arvot eri kirjaimilla ovat merkittävästi erilaisia ​​(p < 0.05). Lyhenteet: CD (20{{30}} g/kg FM), D1 (0,13 % DL-MET), D2 (0,06 % MET-MET), D3 (0,19 % MET- MET), D4 (0,13 % DL-MET plus 0,10 % B. amyloliquefaciens CECT 5940) ja D5 (0,06 % MET-MET plus 0,10 % B. amyloliquefaciens CECT 5940).

3.5. Ruoansulatuskanavan mikrobiotan analyysi ja toiminnallinen ennustaminen

Harvinaisuuskäyrän analyysi osoitti, että havaitut lajit näytettä kohden olivat riittävät sekä 16S-V4- (kuvio 3A) että 18S-V9-sekvensseille (kuvio 4A). Mitä tulee alfa-monimuotoisuuteen, 16S-tulokset osoittivat, että hepatohaiman Chao1-, Shannon- ja Simpsons-indeksit olivat korkeammat kuin suoliston (kuva 3B). Toisaalta 18S-tulokset osoittivat, että kaikki alfadiversiteettiindeksit laskivat katkarapujen suolistoissa, joita ruokittiin vähäisellä kalajauholla, verrattuna kontrolliin (kuva 4B). Ruokavaliohoitojen välillä ei kuitenkaan ollut merkittäviä eroja 16S- ja 18S-tuloksissa.

Kuva 3. Suoliston ja hepatohaiman 16S-rRNA-geenin sekvensointi katkarapuilla ruokitulla kontrolliruokavaliolla ja 50 % kalajauhon korvausruokavalioilla. (A) harvinaisuuskäyrä, (B) alfadiversiteetti ja (C) mikrobiston rakenne visualisoituna käyttämällä pääkoordinaattianalyysin (PCoA) kaavioita. Lyhenteet: Intestine (I) ja hepatohaima (H). CD (200 g/Kg FM), D1 (0,13 % DL-MET), D2 ({{20}}).{27 }}6 % MET-MET), D3 (0,19 % MET-MET), D4 (0,13 % DL-MET plus 0,10 % B. amyloliquefaciens CECT 5940) ja D5 (0,06 % MET-MET plus 0,10 % B. amyloliquefaciens CECT 5940) ).

Kokeellisen ruokavalion vaikutukset mikrobiotan rakenteeseen määritettiin käyttämällä UniFrac-etäisyyttä ja visualisoitiin PCoA-käyrillä. Tulokset paljastivat selkeän eron kokeellisten ruokavalioiden välillä, mutta ilman merkittäviä eroja prokaryoottiyhteisöissä suolistosta tai hepatohaimasta (kuva 3C) eikä eukaryoottisessa mikrobiotassa suolistosta (kuva 4C). Beetan monimuotoisuusanalyysi osoitti kuitenkin selkeän eron suolesta ja hepatohaimasta peräisin olevien prokary-korvayhteisöjen välillä (kuva 3C).

Kuva 4. Suoliston 18S-rRNA-geenin sekvensointi katkarapuilla ruokitulla kontrolliruokavaliolla ja 50% kalajauhon korvausruokavalioilla. (A) harvinaisuuskäyrä, (B) alfadiversiteetti ja (C) mikrobiston rakenne visualisoituna käyttämällä pääkoordinaattianalyysin (PCoA) kaavioita. Lyhenne: Intestine (I). CD (200 g/Kg FM), D1 (0,13 % DL-MET), D2 ({{20}}).{27 }}6 % MET-MET), D3 (0,19 % MET-MET), D4 (0,13 % DL-MET plus 0,10 % B. amyloliquefaciens CECT 5940) ja D5 (0,06 % MET-MET plus 0,10 % B. amyloliquefaciens CECT 5940) ).

Prokaryoottisten mikrobiotatulosten perusteella tunnistettiin yhteensä 19 erilaista bakteerifylaa. Proteobakteerit olivat hallitseva hylä katkarapujen suolistossa, kun taas Proteobacteria ja Actinobacteria olivat hallitseva phyla katkarapujen maksahaimassa. Katkarapujen suolistoissa, joita ruokittiin D3:lla ja D5:llä, havaittiin aktinobakteerien suhteellisen runsauden lisääntyminen, kun taas Bacteroidotan suhteellinen runsaus väheni hieman. Katkarapujen maksahaimassa, jota ruokittiin D1, D2 ja D4, havaittiin Bacteroidota suhteellisen runsauden lievä lisääntyminen, kun taas katkarapujen maksahaimassa, jota ruokittiin D3 ja D5, aktinobakteerien suhteellinen runsaus lisääntyi (kuva 5A). Suvun tasolla Pseudoalteromonas oli yleisin katkarapujen suolistossa, kun taas Demequina oli yleisin katkarapujen maksahaimassa. Demequinalla oli alhainen lisäys katkarapujen suolessa D3:lla ja D5:llä, kun taas Lysinimicrobium ja Ruegeria lisääntyivät katkarapujen maksahaimassa, jota syötettiin D3:lla ja D5:llä (kuva 5B). Toiminnallisten kategorioiden tulokset (KEGG-taso 2) osoittivat, että bakteerisekvenssit liittyivät soluprosesseihin ja aineenvaihduntareitteihin (kuva 5C ja täydentävä taulukko S1). Aminohappoaineenvaihdunta, hiilihydraattiaineenvaihdunta, kofaktorit ja vitamiiniaineenvaihdunta olivat runsaimmat aineenvaihduntareiteissä, kun taas solujen liikkuvuus oli runsainta soluprosesseissa. Sekvensointilukujen poistamisen jälkeen isännän DNA:sta havaittiin kolme fylaa eukaryoottisessa mikrobiotassa. SAR (Stramenopiles, Alveolate y Rhizaria) oli yleisin kaikissa katkarapujen suolistoissa, mutta Opisthokonta-suvun kasvu havaittiin katkarapujen suolistoissa, joita ruokittiin D5:llä (kuva 6A). Suvun tasolla Aplanochytrium oli runsain katkarapujen suolistossa, jota ruokittiin D2:sta D5:een, mutta runsaus oli huomattavasti suurempi D5:ssä. Viljelmätön alveolaatti oli rikastettu katkaravun suolistolla syötetyllä CD:llä. Auranti ochytrium oli yleisin D2-D4 ja suurempi runsaus D3. Lopuksi Ebriaa esiintyi eniten katkarapujen suolistoissa, joille syötettiin D1 (kuvio 6B).

Kuva 5. Prokaryoottinen suoliston ja hepatohaiman mikrobiota katkarapuilla ruokitulla kontrolliruokavaliolla ja 50 % kalajauhokorvausruokavaliolla. (A) Kymmenen suurinta runsautta. (B) 4 suosituimman 0-suvun lämpökartta-analyysi ja (C) KEGG-polkuanalyysiin perustuva funktion ennusteen lämpökartta-analyysi. Lyhenteet: suolisto (I) ja hepatohaima (H). CD (200 g/Kg FM), D1 ({{20}},13 % DL-MET), D2 (0,06 % MET) -MET), D3 (0,19 % MET-MET), D4 (0,13 % DL-MET plus 0,10 % B. amyloliquefaciens CECT 5940) ja D5 (0,06 % MET-MET plus 0,10 % B. amyloliquefaciens CECT 5940).

Kuva 6. Suoliston eukaryoottimikrobisto katkarapuilla ruokitulla kontrolliruokavaliolla ja 50 % kalajauhokorvausruokavaliolla. (A) Phylan runsaus. (B) Sukujen runsauden lämpökartta-analyysi. Lyhenne: intestine (I). SAR (Stramenopiles, Alveolate y Rhizaria). CD (200 g/Kg FM), D1 (0,13 % DL-MET), D2 (0.06 % MET) -MET), D3 (0,19 % MET-MET), D4 (0,13 % DL-MET plus 0,10 % B. amyloliquefaciens CECT 5940) ja D5 (0,06 % MET-MET plus 0,10 % B. amyloliquefaciens CECT 5940).

4. Keskustelu

4.1. Kasvun suorituskyky

Aiemmissa tutkimuksissa on arvioitu erilaisilla ruokavalion metioniinin lähteillä täydennetyn vähennetyn kalajauhoruokavalion vaikutuksia L. vannamein kasvukykyyn, kuten katkarapurehuun, jossa on 5–10 % kalajauhoa ja jota on täydennetty välillä {{15 }},15 % ja 1,7 % MET-METiä (AQUAVI®) tai 3 % DL-METiä [2,3,8,20,42,43]. Siitä huolimatta samanlaisilla viljelyolosuhteilla tehdyssä tutkimuksessa, jossa käytettiin nuoria katkarapuja (L. vannamei), joiden alkupaino oli 0,98 ± 0.02 g, ehdotettiin 0 .20% MET-MET (AQUAVI®) parempaan kasvuun, kun katkaravuille syötettiin alennettua kalajauhorehua [20]. DL-MET on todistettu nuorilla katkarapuilla, joiden alkupaino on 3.0 g, mikä viittaa tasoihin välillä 0.{{50}}6–0.3 0% hyvästä tuottovasteesta, kun katkaravuille syötettiin alennettua kalajauhorehua [2]. Toisaalta veteen liuotetun B. amyloliquefaciensin (104 ja 1{{90}3 UFC/ml) vaikutukset viljellylle L. vannameille bio floc-järjestelmässä raportoitu [44,45], mutta ei ole raportoitu tämän probiootin vaikutuksista kalajauhorehuun lisättynä L. vannamein kasvukykyyn. Siksi tässä tutkimuksessa arvioitiin FM:n korvaaminen SBM:llä ja PBM:llä katkarapuruokavalioissa, joihin oli lisätty 0,13 % DL-MET:tä (D1), 0,06 % MET-MET:ää (D2), 0,19 % MET-MET:ää (D3) ja valmistajan suositusten mukaisesti käytimme yhdistelmiä, joissa oli 0,13 % DL-MET:tä plus 0,1 % B. amyloliquefaciens CECT 5940 (vastaa 109 UFC/g) (D4) ja 0,06 % MET-MET plus 0,1 % B. amyloliquefaciens CECT 5940 (D5). Kaikki metioniinin lähteillä ja probiootteilla täydennetty kalajauhoruokavalio osoitti hyviä vesistabiilisuusarvoja. Siksi tässä tutkimuksessa arvioidut vähäjauhoiset ruokavaliot ovat aiempien raporttien mukaisia, ja kaikki ruokavaliohoidot osoittivat hyvän vasteen katkarapujen kasvuun. Siitä huolimatta D1:llä syötetyillä katkaravuilla oli alhaisemmat suorituskykyparametrit, kun taas D3:lla ja D5:llä syötetyillä katkaravuilla oli korkeammat suorituskykyparametrit. Merkittävä alhainen kasvukyky katkaravuilla, joille ruokitaan D1, voi johtua huonosta rehun saannista, joka johtuu metioniinin puutteesta, mikä aiheuttaa maun heikkenemistä vähennetyissä kalajauhoissa [20]. D3-katkarapujen korkea kasvukyky verrattuna D1- ja D2-katkarapuihin voi johtua metioniinin puutteesta ja lähteestä. Yllä oleva voi johtua siitä, että on raportoitu, että MET MET -dipeptidillä on alhainen vesiliukoisuus ja korkea biologinen hyötyosuus, joita katkaravut voivat hyödyntää tehokkaasti edistäen parempia kasvukykyarvoja [2,10,14]. D5:llä ruokitulla katkaravulla oli myös hyvä kasvukyky, vaikka metioniinitaso ja lähde oli sama D2:ssa, mutta lisättynä 0,10 % B. amyloliquefaciens CECT 5940:tä. Korkea kasvukyky voi johtua probiootin hyödyllisistä ominaisuuksista, joihin kuuluu antimikrobinen vaikutus ja amylaasin, sellulaasin ja proteaasin tuotanto, jotka lisäävät ravintoaineiden sulavuutta ja imeytymistä [46]. Myös aikaisemmassa tutkimuksessa kerrottiin, että B. amyloliquefaciens on metioniinin tuottaja [47] ja tämä voisi osaltaan ylläpitää tämän EAA:n tasapainoa D5:ssä. Lisäksi on raportoitu, että rehun lisäaineiden sekoitus voisi parantaa vesieliöiden [48–50] ja broilerien [51] kasvun tehokkuutta. Siksi 50 % FM:n korvaaminen SBM:llä ja PBM:llä ruokavaliossa, jota on täydennetty 0,19 % MET-MET:llä ja 0,06 % MET-MET:llä plus 0,10 % B. amyloliquefaciens CECT 5940:llä, voisi parantaa ravinteiden käyttöä ja siten katkarapujen kasvua. On tärkeää huomata, että SBM:ssä ja PBM:ssä on paljon rasvahappoja, mutta n-3 pitkäketjuisista monityydyttymättömistä rasvahapoista on puutetta näistä proteiinilähteistä [52]. Tässä yhteydessä tarvitaan lisätutkimuksia sen määrittämiseksi, kuinka SBM:n ja PBM:n käyttö vaikuttaa vähäisemmän kalajauhoruokavalion rasvahappokoostumukseen ja katkarapujen lihasten laatuun.

cistanche-edut miehille - vahvistavat immuunijärjestelmää

4.2. Hepatopankreaattinen histologia

Katkarapujen maksahaima on ruoansulatuselin ja sillä on tärkeä rooli ruoansulatusentsyymien erittymisessä, ravinteiden kuljettamisessa, varastoinnissa ja imeytymisessä, joten sen toiminta on avain katkarapujen kasvun suorituskykyyn ja terveyteen [30,53]. On kuitenkin raportoitu, että alennettu kalajauhoruokavalio voi muuttaa ruoansulatuselinten rakenteellista morfologiaa ja heikentää vesieliöiden fysiologisia olosuhteita, mikä johtaa kasvun hidastumiseen [54]. Maksapankreaattinen histologia analysoitiin katkarapujen kasvun, terveyden ja ravitsemustilan indikaattorina. Maksahaiman rakenteessa ei havaittu vaurioita, B-solut olivat yleisimmät maksahaimasolut ja niiden epiteelin korkeus nousi merkittävästi kaikissa ruokavaliohoidoissa lukuun ottamatta katkarapuja, joita ruokittiin D1:llä, jolla oli samanlainen vaste kuin kontrolliruokavaliolla. Tulokset viittaavat siihen, että hepatohaima on herkkä erilaisten ravinnon metioniinin lähteiden ja B. amyloliquefaciensin sisällyttämiselle kalajauhojen vähentämiseen, B-solujen määrän lisäämiseen, mikä vaikuttaa ruoansulatusentsyymien eritykseen, ravinteiden imeytymiseen ja assimilaatioon sekä rehun hyötykäyttöön, kuten muissa tutkimuksissa on raportoitu käytettynä. kalajauhon vaihtoehtoiset lähteet ja lisäaineet [53,55–58]. Lisäksi on raportoitu, että metioniinilisä voisi vähentää hepatohaiman muutoksia johtuen sen puutteesta vähäisissä kalajauhoissa [8]. Siksi histologisen analyysin mukaan ei ole näyttöä toksisuudesta, joka aiheutuu vähäisestä kalajauhoruokavaliosta, jota on täydennetty erilaisilla ruokavalion metioniinilähteillä ja B. amyloliquefaciens -bakteerilla L. vannamei hepatopancreas -bakteerissa.

4.3. Ruoansulatuskanavan entsyymianalyysi

Entsyymi ruoansulatusaktiivisuus on fysiologinen prosessi, joka parantaa ravinteiden sulamista ja imeytymistä, ja siksi se on avaintekijä katkarapujen kasvun edistämisessä [59]. Siitä huolimatta aiemmat tutkimukset ovat raportoineet, että ruuansulatusentsyymien aktiivisuus väheni merkittävästi, kun kalajauhoruokavaliota oli vähennetty ilman lisäravinteita [60,61]. Ruoansulatusentsyymiaktiivisuuksia käytettiin katkarapujen ruoansulatustoiminnan indikaattorina. Tässä tutkimuksessa D3:lla ruokitut katkaravut paransivat (p < 0,05) maksahaiman ruoansulatusentsyymiaktiivisuudessa kaikkien ryhmien välillä, eikä suolen ruoansulatusentsyymiaktiivisuudessa havaittu merkittäviä eroja. Kaiken kaikkiaan alhaisia ​​ruuansulatusentsyymiaktiivisuuksia havaittiin D1:llä ruokittujen katkarapujen molemmissa elimissä. Näiden tulosten mukaisesti metioniinilisä lisäsi ruuansulatusentsyymien aktiivisuutta punalahnassa (Pagrus major) [62], ruohokarpilla (Ctenopharyngodon idella) [63], valkoisessa katkaravussa (L. vannamei) [2,3,20] ja rohu-kala (Labeo rohita) [59]. B. amyloliquefaciensilla täydennetyn rehun vaikutuksia katkarapujen ruoansulatusentsyymien aktiivisuuteen ei ole raportoitu L. vannameissa, mutta tiedetään, että probiootit lisäävät ruoansulatusentsyymien aktiivisuutta ja parantavat rehun hyödyntämistä ja ruoansulatusta [64]. Lisäksi useissa töissä arvioitiin erilaisia ​​vesiviljelyn rehuja lisäaineilla yhdistettynä probiootteihin ja havaittiin ruoansulatusprosessin lisääntymistä. [48,50]. Siitä huolimatta, että ruoansulatusentsyymiaktiivisuuksissa havaittiin epäjohdonmukaisuuksia, kun broilereilla oli käytetty orgaanisia happoja, probiootteja ja yhdistelmiä, mikä johtui mahdollisesti siitä, että rehun lisäaineiden ja yhdistelmien induktiotaso oli alioptimaalisella tasolla [51]. Tämä tutkimus raportoi myös epäjohdonmukaisuuksista maksa-haiman ruoansulatusentsyymiaktiivisuudessa katkaravuilla, joita ruokittiin D3-, D4- ja D5-annoksella. Tulokset viittaavat kuitenkin siihen, että aiemmin mainittu lisäravinne ei vaikuta katkarapujen ruoansulatustoimintoihin.

4.4. Immuunijärjestelmään liittyvien geenien transkriptionaalinen vaste

Immuuniin liittyvien geenien transkriptiovaste on erittäin tärkeä katkarapujen terveydentilaa koskevien tietojen saamiseksi [35]. On kuitenkin raportoitu, että vähäinen kalajauhoruokavalio heikentää immuuni- ja antioksidanttivastetta katkarapujen epätasapainoisten ravintoaineiden, korkeiden ravitsemuksellisten tekijöiden ja kuitupitoisuuden vuoksi, jotka vaikuttavat rehun saantiin, makuun ja sulavuuteen [56,65–67]. Aiemmin tutkimme proteiinilähteen ja -tason vaikutuksia immuunijärjestelmään liittyviin geeneihin (Hc, pPO, LGBP), antioksidanttikapasiteettiin (MnSOD) ja stressinsietokykyyn (HSP60) ja ehdotimme, että puolustusmekanismit eivät vaikuttaneet kun katkarapuja ruokittiin ruokavaliolla, joka sisälsi kasviperäistä proteiinia (30–35 %) keskitasolla [35]. Toisaalta on raportoitu, että vähäjauhoisella ruokavaliolla on haitallisia vaikutuksia katkarapujen immuunivasteeseen, kun kalajauhoa vähennetään 250 g/kg:sta 100 g:aan/kg [68]. Siitä huolimatta antioksidanttivastetta moduloitiin vaikuttamatta maksan ja suoliston oksidatiiviseen tilaan, kun meribassille (Dicentrarchus labrax) syötettiin vähäistä kalajauhoa, jota oli täydennetty DL-Met-tasolla, joka oli 12 % alle niiden vakiintuneen tarpeen [69]. Myös immuunivaste ja antioksidanttikapasiteetti paranivat, kun valkoisia katkarapuja (L. vannamei) [8] ja Niilin tilapiaa (O. niloticus) [14] ruokittiin vähäkalajauhoisella ruokavaliolla, jossa oli 0,15 % MET-MET:iä. Lisäksi tutkimus osoitti, että Niilin tilapialla (O. niloticus), jota ruokittiin vähäisellä kalajauholla, johon oli lisätty Spirulina platensis ja B. amyloliquefaciens, immuunivaste ja antioksidanttikapasiteetti oli parantunut, mutta stressinsietokyky heikkeni [21]. Tämän tutkimuksen tulokset osoittivat, että immuniteettiin, antioksidanttikapasiteettiin ja stressinsietokykyyn liittyvien geenien transkriptiovasteet paranivat, kun katkarapuja ruokittiin D2-, D3-, D4- ja D5-annoksella, mikä on mielenkiintoista, koska tämä osoittaa, että metioniinin ja probioottisten lisäravinteet voivat moduloida positiivisesti. puolustusmekanismeja vähentäen vähäisten kalajauhorehujen aiheuttamia vaikutuksia. Sitä vastoin immuunijärjestelmään liittyvien geenien alhainen transkriptiovaste, joka havaittiin katkaravuilla, joille syötettiin D1, voi johtua metioniinin puutteesta. Kuitenkin, kun otetaan huomioon tuottava suorituskyky, parhaat ruokavaliohoidot voisivat olla D3 ja D5 vaikuttamatta katkarapujen kasvuun ja terveyteen.

4.5. Ruoansulatuskanavan mikrobiotan analyysi ja toiminnallinen ennustaminen

Katkarapujen ruoansulatusjärjestelmä isännöi mikro-organismiyhteisöjä, joita hallitsevat bakteerit, mutta läsnä voi olla myös eukaryoottisia mikro-organismeja, jotka rakentavat suuren mikrobiekosysteemin nimeltä mikrobiota [70]. Katkarapujen ruoansulatusjärjestelmän mikrobiota vaikuttaa immuniteettiin tai vastustuskykyyn, hyödyllisten aineenvaihduntatuotteiden tuotantoon sekä ravinteiden sulatukseen ja assimilaatioon [71,72]. Ruokavalio on yksi tärkeimmistä ympäristötekijöistä, jotka vaikuttavat katkarapujen ruoansulatusjärjestelmän mikrobiotaan [73]. Tässä tutkimuksessa arvioitiin vähän kalajauhoa sisältävien ruokavalioiden vaikutuksia L. vannamein suolesta ja hepatohaimasta peräisin olevien prokaryoottisten ja eukaryoottisten mikro-organismien monimuotoisuuteen, rakenteeseen ja suhteelliseen määrään käyttämällä 16S- ja 18S-sekvensointia. Tutkimustulokset viittaavat siihen, että mikrobiotan (prokaryoottinen ja eukaryoottinen) monimuotoisuus ja rakenne eivät eronneet ravitsemushoitojen välillä. Beetan monimuotoisuuden vertailu osoitti kuitenkin, että suoliston prokaryoottinen mikrobiootti ryhmittyi erilleen maksahaimaprokaryoottisesta mikrobiosta, mikä viittaa ainutlaatuiseen ekologiseen markkinarakoon katkarapujen ruoansulatuselimen mukaan [74]. Siksi sekä suolistossa että hepatohaimassa olevat erikoistuneet mikro-organismit auttavat parantamaan isännän tehokkaasti saamaa energiaa ja kasvuun, immuunivasteeseen, ravinteiden sulatukseen ja assimilaatioon tarvittavia aineenvaihduntaprosesseja [75]. Kuten jäljempänä selitetään, tutkimustulokset viittaavat siihen, että sekä prokaryoottisten että eukaryoottisten mikro-organismien runsaus voisi lisätä ja auttaa katkarapuja käyttämään tehokkaasti vähän kalajauhoa sisältävien ruokavalioiden ravintoaineita aineenvaihduntaprosesseihin, jotka ovat välttämättömiä energian, kasvun, immuniteetin, ruoansulatuksen ja ravinnon saamiseksi. Prokaryoottien runsauden mukaan kaikissa suolisto- ja hepatohaimanäytteissä yleisin oli proteobakteerit, kun taas Actinobacteria-suvun esiintyminen hepatohaimanäytteissä oli suurempi. Nämä tulokset ovat aiemman tutkimuksen [36] mukaisia, ja on myös kuvattu, että nämä hylsut olivat hallitsevia nuorissa ja aikuisissa katkarapuissa (Penaeus monodon) [76]. Proteobacteria-heimoon kuuluva Pseudoalteromonas on ruoansulatusentsyymi (proteaasit, amylaasit, -galaktosidaasit ja fosfolipaasit) tuottava mikro-organismi, joka edistää katkarapujen ravinteiden pilkkomista [77–79]; on myös raportoitu, että se edistää monityydyttymättömien rasvahappojen (PUFA) ja lyhytketjuisten rasvahappojen (SCF) synteesiä [80,81]. Ruegeria, joka kuuluu Proteobacteria-suvun ryhmään, tuottaa triesteraasiaktiivisuutta, mikä edistää isännän ruoansulatusprosesseja sekä antibakteerista aktiivisuutta Vibrio anguillarumia vastaan ​​[82]. Actinobacteria-suvun demequina voi tuottaa -amylaasia, ksylanaasia ja sellulaasia, jotka osallistuvat hiilihydraattien imeytymiseen ja hyödyntämiseen [83–86]. Kemotaksonomisten ja genomiikkaprofiilien mukaan Lysinimicrobiumia voidaan pitää Demequinan subjektiivisena synonyymina [87], ja näin ollen sillä voi olla sama vaikutus ruoansulatusentsyymiaktiivisuuteen ja hiilihydraattien pilkkomiseen. Prokaryoottisten mikro-organismien rooli katkarapujen ruoansulatusjärjestelmässä liittyy läheisesti KEGG-tietokannan toimintaennusteisiin, jotka olivat aminohappoja, hiilihydraatteja, kofaktoreita ja vitamiinien aineenvaihduntaa sekä solujen liikkuvuutta. Entsyymin ruoansulatuskanavan tuotanto ja välttämättömien rasvahappojen synteesi osoittavat mikrobiotan hyödyllisen roolin katkarapujen ruoansulatusjärjestelmän terveydelle ja immuunijärjestelmän stimulaatiolle. Lisäksi solujen liikkuvuusprosessit, kuten bakteerien kemotaksis ja flagellaarinen kokoonpano, voivat tukea prokaryoottisia mikro-organismeja sopeutumaan isännän ruoansulatusympäristöön [88]. Siksi vähäinen kalajauhoruokavalio, jota on täydennetty 0,19 % MET-MET:llä tai 0,06 % MET-MET:llä plus probiootilla (B. amyloliquefaciens), auttaisi prokaryoottiyhteisöjen hyödyllisiä rooleja katkarapujen ruoansulatusjärjestelmässä.

Eukaryoottisten mikro-organismien runsautta oli vaikea karakterisoida 18S-geenisekvensoinnilla, koska tässä tutkimuksessa havaittiin suuri määrä L. vannamei DNA:ta. Lisäksi ulosteen DNA:n metabarkoodauksessa on yleistä, että mikroeukaryoottien DNA ulosteessa hajoaa nopeammin kuin isännän DNA ja lisävaiheet, kuten isäntä-DNA:n pilkkominen tai estäminen restriktioentsyymeillä tai estoalukkeilla, ovat tarpeen ennen monistusta tai sen jälkeen [89] ]. Siitä huolimatta tutkimustulokset antavat käsityksen katkarapujen ruoansulatusjärjestelmän mikroeukaryoottisista yhteisöistä. SAR-perhe oli runsain katkarapujen suolistoissa, joissa oli vähäistä kalajauhoa. Aurantiochytrium oli runsaammin D3:lla ruokittujen katkarapujen suolessa, kun taas Aplanochytrium oli runsain katkaravun suolistoissa, joille syötettiin D5. Lisäksi Ebria oli yleisin katkarapujen suolistossa, jota ruokittiin D1:llä. Aurantiochytrium on eikosapentaeenihapon (EPA) tuottaja [90], kun taas Aplanochytrium tuottaa dokosaheksaeenihappoa (DHA) [91]. Näillä rasvahapoilla on olennainen rooli vesieliöiden kasvun edistämisessä tai vastustuskyvyn vahvistamisessa; myös EPA ja DHA auttavat vesieliöitä vähentämään tulehdustekijöitä ja vähentämään tulehdusta [90]. Toisaalta Ebrialla on sisäinen kiinteä piipitoinen luuranko, mikä voi johtaa vesieliöiden huonoon ruoansulatukseen [92], mikä voi heikentää D1:llä ruokittujen katkarapujen kasvukykyä. Eukaryoottiset mikro-organismit elävät kommensaaleina tai vastavuoroisina meren selkärangattomien ruoansulatusjärjestelmässä ja kudoksissa, mutta on todennäköistä, että ne ovat peräisin rannikkovesistä, joita käytettiin katkarapulammen kasteluun, kuten aiemmin on kuvattu [93]. Ympäristöystävällisten ja lisäaineilla ja probiootteilla täydennettyjen ruokavalioiden käyttö voi kuitenkin hallita haitallista mikrolevien kasvua katkarapujen ruoansulatusjärjestelmässä ja sen ympäristössä [94]. Tämä on yhtä mieltä tutkimustulosten kanssa, jotka osoittavat, että vähäinen kalajauhoruokavalio, johon oli lisätty 0,13 % DL-MET:tä, lisäsi Ebrian määrää vaikuttaen katkarapujen tuotantokykyyn ja terveyteen, kun taas ruokavaliot, joihin lisättiin 0,19 %. METMET tai 0,06 % MET-MET plus 0,10 % B. amyloliquefaciens auttaisi eukaryoottiyhteisöjen hyödyllisiä rooleja katkarapujen ruoansulatusjärjestelmässä.

cistanche-edut miehille - vahvistavat immuunijärjestelmää

5. Johtopäätökset

Kalajauho voitaisiin osittain korvata jopa 50% SBM:llä ja PBM:llä katkarapurehussa, jota on täydennetty MET-MET:llä ja/tai B. amyloliquefaciens CECT 5940:lla ilman haitallisia vaikutuksia kasvuun. Verrattuna kontrolliruokavalioon katkarapuilla, joihin syötettiin alennettua kalajauhoruokavaliota, jossa oli 0,19 % MTE-MET ja 0,06 % MET-MET plus 0,10 % B. amyloliquefaciens CECT 5940, oli 43 % ja 40 % enemmän lopullista biomassaa, vastaavasti. Lisäksi katkarapuilla syötetyillä vähäisemmällä kalajauholla, jota oli täydennetty MET-MET:llä ja/tai B. amyloliquefaciens CECT 5940:llä, oli parempi maksahaiman epiteelisolujen korkeus, ruoansulatusentsyymiaktiivisuus, immuunijärjestelmään liittyvien geenien transkriptiovaste ja hyödyllinen mikrobiota ruoansulatusjärjestelmälle. Lisätutkimukset ovat tarpeen metioniinin lähteiden porrastettujen tasojen sekä aminohappojen ja probioottien synergististen vaikutusten tutkimiseksi viljeltyjen katkarapujen vähäjauhoisissa ruokavalioissa. Olisi myös mielenkiintoista arvioida, kuinka SBM ja PBM vaikuttavat vähäisempien kalajauhoruokavalioiden rasvahappokoostumukseen ja katkarapujen lihasten laatuun. Tästä huolimatta nämä tiedot voivat olla mielenkiintoisia kehitettäessä vähän kalajauhoa sisältäviä rehuja vesiviljelyyn vaikuttamatta vesieliöiden kasvuun ja hyvinvointiin.

Viitteet

1. FAO. Maailman kalastuksen ja vesiviljelyn tila 2022. Kohti sinistä muutosta; FAO: Rooma, Italia. [CrossRef]

2. Xie, J.-J.; Lemme, A.; Hän, J.-Y.; Yin, P.; Figueiredo-Silva, C.; Liu, Y.-J.; Xie, S.-W.; Niu, J.; Tian, ​​L.-X. Valkoisten katkarapujen (Litopenaeus vannamei) kalajauhon määrää voidaan vähentää onnistuneesti, jos sitä täydennetään DL-metioniinilla (DL-Met) tai DL-metionyyliDL-metioniinilla (Met-Met). Aquac. Nutr. 2017, 24, 1144–1152. [CrossRef]

3. Lu, J.; Zhang, X.; Zhou, Q.; Cheng, Y.; Luo, J.; Masagounder, K.; Hän, S.; Zhu, T.; Yuan, Y.; Shi, B.; et ai. Ruokavalion DL-metionyyli-DL-metioniinilisäys voisi parantaa kasvukykyä vähäisen kalajauhon strategioissa moduloimalla Litopenaeus vannamein TOR-signalointireittiä. Aquac. Nutr. 2021, 27, 1921–1933. [CrossRef]

4. Cho, JH; Kim, IH Kalajauhon ravintoarvo. J. Anim. Physiol. Anim. Nutr. 2011, 95, 685–692. [CrossRef] [PubMed]

5. Song, X.; Joo, H.; Jin, F.; Li, H.; Kim, Y.-S.; Xiao, J.; Guo, Z. Fermentoidun soijapapujauhon ja guanosiini-50 -monofosfaatin vaikutukset Penaeus vannamein kasvuun, suoliston terveyteen ja stressin ehkäisyyn vähäisessä kalajauhossa. Aquaculture 2022, 548, 737591. [CrossRef]

6. Yao, W.; Yang, P.; Zhang, X.; Xu, X.; Zhang, C.; Li, X.; Leng, X. Ruokavalion kalajauhon korvaamisen Clostridium autoethanogenum -proteiinilla vaikutukset Tyynenmeren valkoisten katkarapujen (Litopenaeus vannamei) kasvuun ja lihan laatuun. Aquaculture 2022, 549, 737770. [CrossRef]

7. Zhang, J.; Yang, H.; Yan, Y.; Zhang, C.; Joo, J.; Sun, Y. Kalaperäisten probioottien vaikutukset kasvukykyyn, immuunivasteeseen ja suoliston terveyteen katkarapuilla (Litopenaeus vannamei) ruokitulla ruokavaliolla, jossa kalajauho on osittain korvattu soijapapujauholla. Aquac. Nutr. 2020, 26, 1255–1265. [CrossRef]

8. Ji, R.; Wang, Z.; Hän, J.; Masagounder, K.; Xu, W.; Mai, K.; Ai, Q. DL-metionyyli-DL-metioniinin lisäyksen vaikutukset valkoisten jalkakatkarapujen (Litopenaeus vannamei) kasvukykyyn, immuuni- ja antioksidatiivisiin vasteisiin vähäkalajauhoisella ruokavaliolla. Aquac. Rep. 2021, 21, 100785. [CrossRef]

9. Chaklader, R.; Siddik, MAB; Fotedar, R. Kalajauhon täydellinen korvaaminen siipikarjan sivutuotejauholla vaikutti nuorten barramundin, Lates calcariferin, kasvuun, lihasten laatuun, histologiseen rakenteeseen, antioksidanttikapasiteettiin ja immuunivasteeseen. PLoS ONE 2020, 15, e0242079. [CrossRef]

10. Niu, J.; Lemme, A.; Hän, J.-Y.; Li, H.-Y.; Xie, S.-W.; Liu, Y.-J.; Yang, H.-J.; Figueiredo-Silva, C.; Tian, ​​L.-X. Novel Met-Met -tuotteen (AQUAVI®Met-Met) biologisen hyötyosuuden arviointi valkoisten katkarapujen (Litopenaeus vannamei) dl-metioniiniin (dl-Met) verrattuna. Vesiviljely 2018, 484, 322–332. [CrossRef]

11. Skiba-Cassy, ​​S.; Geurden, I.; Panserat, S.; Seiliez, I. Ruokavalion metioniinin epätasapaino muuttaa kirjolohen (Oncorhynchus mykiss) maksassa glukoosin, lipidien ja aminohappojen aineenvaihduntaan osallistuvien geenien transkription säätelyä. Vesiviljely 2016, 454, 56–65. [CrossRef]

12. Machado, M.; Serra, CR; Oliva-Teles, A.; Costas, B. Metioniini ja tryptofaani näyttelevät erilaisia ​​​​modulatorisia rooleja eurooppalaisen meribassin (Dicentrarchus labrax) synnynnäisessä immuunivasteessa ja apoptoosin signaloinnissa – in vitro -tutkimus. Edessä. Immunol. 2021, 12, 660448. [CrossRef]

13. Zhou, Y.; Hän, J.; Su, N.; Masagounder, K.; Xu, M.; Chen, L.; Liu, Q.; Joo, H.; Sun, Z.; Joo, C. DL-metioniinin ja metioniinihydroksianalogin (MHA-Ca) vaikutukset karppien (Cyprinus carpio) kasvuun, aminohappoprofiileihin ja tauriiniin ja proteiinisynteesiin liittyvien geenien ilmentymiseen. Vesiviljely 2021, 532, 735962. [CrossRef]

14. Guo, T.-Y.; Zhao, W.; Hän, J.-Y.; Liao, S.-Y.; Xie, J.-J.; Xie, S.-W.; Masagounder, K.; Liu, Y.-J.; Tian, ​​L.-X.; Niu, J. Ravintolisä dl-metionyyli-dl-metioniini lisäsi kasvukykyä, antioksidanttikykyä, välttämättömien aminohappojen pitoisuutta ja paransi suoliston mikrobiston monimuotoisuutta Niilitilapiassa (Oreochromis niloticus). Br. J. Nutr. 2020, 123, 72–83. [CrossRef]

15. Lin, J.; Zeng, Q.; Zhang, C.; Song, K.; Lu, K.; Wang, L.; Rahimnejad, S. Bacillus subtilis -lisän vaikutukset soijajauhopohjaisissa ruokavalioissa kasvukykyyn, ruokavalion sulavuuteen ja suoliston terveyteen härkäsammakossa Lithobates catesbeianus. Aquac. Rep. 2020, 16, 100273. [CrossRef]

16. Tao, X.; Hän, J.; Lu, J.; Chen, Z.; Jin, M.; Jiao, L.; Masagounder, K.; Liu, W.; Zhou, Q. Bacillus subtilis DSM 32315:n (Gutcare®) vaikutukset kasvukykyyn, hapettumisenestokykyyn, immuunikykyyn ja suoliston toimintaan nuorille Litopenaeus vannameille, joita ruokitaan runsaalla/vähän kalajauhoa sisältävällä ruokavaliolla. Aquac. Rep. 2022, 26, 101282. [CrossRef]

17. De Oliveira, MJK; Sakomura, NK; Dorigam, JCDP; Doranalli, K.; Soares, L.; Viana, G. Bacillus amyloliquefaciens CECT 5940 yksinään tai yhdessä antibioottisten kasvunedistäjien kanssa parantaa suorituskykyä broilereilla enteropatogeenin altistuksessa. Poult. Sci. 2019, 98, 4391–4400. [CrossRef]

18. Silva, TFA; Petrillo, TR; Yunis-Aguinaga, J.; Marcusso, P.; Claudiano, GDS; de Moraes, FR; de Moraes, JRE Probiootin Bacillus amyloliquefaciensin vaikutukset kasvukykyyn, hematologiaan ja suoliston morfometriaan häkissä kasvatetussa Niilitilapiassa. Lat. Olen. J. Aquat. Res. 2015, 43, 963–971. [CrossRef]

19. Bai, S.; Katya, K.; Yun, H. Aquafeedin lisäaineet. Vesiviljelyn ruokinta- ja ruokintakäytännöissä; Woodhead Publishing: Sawston, Iso-Britannia, 2015; s. 171–202. [CrossRef]

20. Wang, L.; Joo, L.; Hua, Y.; Zhang, G.; Li, Y.; Zhang, J.; Hän, J.; Liu, M.; Shao, Q. Dietarydl-metionyyli-dl-metioniinin (Met-Met) vaikutukset kasviproteiinipohjaisella ruokavaliolla ruokittujen valkoisten katkarapujen (Litopenaeus vannamei) kasvukykyyn, kehon koostumukseen ja hematologisiin parametreihin. Aquac. Res. 2019, 50, 1718–1730. [CrossRef]

21. Al-Deriny, SH; Dawood, MA; Zaid, AAA; El-Tras, WF; Paray, BA; Van Doan, H.; Mohamed, RA Spirulina platensiksen ja Bacillus amyloliquefaciensin synergistiset vaikutukset Niilin tilapian (Oreochromis niloticus) kasvukykyyn, suoliston histomorfologiaan ja immuunivasteeseen. Aquac. Rep. 2020, 17, 100390. [CrossRef]

22. Sun, Y.; Zhang, Y.; Liu, M.; Li, J.; Lai, W.; Geng, S.; Yuan, T.; Liu, Y.; Tee-se-itse.; Zhang, W.; et ai. Ruokavalion Bacillus amyloliquefaciens CECT 5940 -lisän vaikutukset maissi-vehnä-soijajauho-ruokavaliolla ruokittujen broilerien kasvukykyyn, antioksidanttitilaan, immuniteettiin ja ruoansulatusentsyymiaktiivisuuteen. Poult. Sci. 2022, 101, 101585. [CrossRef]

23. NRC (National Research Council). Kalojen ja katkarapujen ravintoainevaatimukset; National Academic Press: Washington, DC, USA, 2011. [CrossRef]

24. Guo, J.; Davis, R.; Starkey, C.; Davis, DA Erilaisten päällystettyjen materiaalien tehokkuus ravinteiden huuhtoutumisen estämiseksi Tyynenmeren valkoisten katkarapujen Litopenaeus vannamei kaupallisissa ruokavalioissa. J. World Aquac. Soc. 2020, 52, 195–203. [CrossRef]

25. International Office of Epizootics; Aquatic Animal Health Standards Commission. Vesieläinten diagnostisten testien käsikirja. Kansainvälinen eläintautitoimisto. 2022. Saatavilla verkossa: https://www.woah.org/en/what-we-do/standards/codes-andmanuals/aquatic-manual-online-access/ (käytetty 1. syyskuuta 2022).

26. Martinez-Porchas, M.; Ezquerra-Brauer, M.; Mendoza-Cano, F.; Higuera, JEC; Vargas-Albores, F.; Martinez-Cordova, LR Heterotrofisen ja fotoautotrofisen bioflokin täydentämisen vaikutus valkojalkakatkarapujen Litopenaeus vannamei tuotantovasteeseen, fysiologiseen tilaan ja sadonkorjuun jälkeiseen laatuun. Aquac. Rep. 2020, 16, 100257. [CrossRef]

27. Peña-Rodríguez, A.; Elizondo-González, R.; Nieto-López, MG; Ricque-Marie, D.; Cruz-Suárez, LE Käytännöllisiä ruokavalioita ruskeiden katkarapujen, Farfantepenaeus californiensis, nuorten lintujen kestävään tuotantoon, kun luonnonravinteena on vihreä makrolevä Ulva clathrata. J. Appl. Phycol. 2017, 29, 413–421. [CrossRef]

28. Pierri, V.; Valter-Severino, D.; Goulart-De-Oliveira, K.; Manoel-Do-Espírito-Santo, C.; Nascimento-Vieira, F.; Quadros-Seiffert, W. Meren katkarapujen viljely biofloc-teknologiassa (BFT) eri veden alkaliteeteissa. Braz. J. Biol. 2015, 75, 558–564. [CrossRef] [PubMed]

29. Gonzalez-Galaviz, JR; Casillas-Hernández, R.; Flores-Perez, MB; Lares-Villa, F.; Bórquez-López, RA; Gil-Núñez, JC Genotyypin ja proteiinilähteen vaikutus Tyynenmeren valkoisten katkarapujen (Litopenaeus vannamei) suorituskykyyn. Ital. J. Anim. Sci. 2020, 19, 289–294. [CrossRef]

30. Bell, TA; Lightner, DV A Handbook of Normal Penaeid Shrimp Histology; Yhdistyneiden kansakuntien elintarvike- ja maatalousjärjestö: Rooma, Italia, 1988.

31. Casillas-Hernández, R.; Arévalo-Sainz, KJ; Gonzalez-Galaviz, JR; Rodríguez-Jaramillo, MDC; Bórquez-López, RA; Gil Núñez, JC; Flores-Pérez, MB; Lares-Villa, F.; Ibarra-Gámez, JC; Barrios, RMM Korkean hiilidioksidipitoisuuden vaikutukset katkarapujen Litopenaeus vannamein suorituskykyyn ja kudoshistologiaan. Aquac. Res. 2021, 52, 3991–3996. [CrossRef]

32. Xiao, Z.; Storms, R.; Tsang, A. Kvantitatiivinen tärkkelys-jodimenetelmä alfa-amylaasin ja glukoamylaasin aktiivisuuden mittaamiseen. Anaali. Biochem. 2006, 351, 146–148. [CrossRef]

33. Bradford, MM. Nopea ja herkkä menetelmä proteiinin mikrogrammamäärien kvantitoimiseksi käyttäen proteiini-väriainesitoutumisperiaatetta. Anaali. Biochem. 1976, 72, 248–254. [CrossRef]

34. Zhang, S.-P.; Li, J.-F.; Wu, X.-C.; Zhong, W.-J.; Xian, J.-A.; Liao, S.-A.; Miao, Y.-T.; Wang, A.-L. Erilaisten ravinnon lipiditasojen vaikutukset kasvuun, eloonjäämiseen ja immuunijärjestelmään liittyvien geenien ilmentymiseen Tyynenmeren valkoisissa katkarapuissa, Litopenaeus vannameissa. Kala Simpukat. Immunol. 2013, 34, 1131–1138. [CrossRef]

35. Anaya, LR; Casillas-Hernández, R.; Flores-Pérez, MB; Lares-Villa, F.; Lares-Jiménez, LF; Luna-Nevarez, P.; Gonzalez-Galaviz, JR Geneettisen linjan, proteiinilähteen ja proteiinitason vaikutus Litopenaeus vannamein kasvuun, eloonjäämiseen ja immuunijärjestelmään liittyvään geeniekspressioon. J. World Aquac. Soc. 2020, 51, 1161–1174. [CrossRef]

36. Casillas-Hernández, R.; Arévalo-Sainz, KJ; Flores-Pérez, MB; Garcia-Clark, JG; Rodriguez-Anaya, LZ; Lares-Villa, F.; BórquezLópez, RA; Gil-Núñez, JC; Gonzalez-Galaviz, JR Immuuniin liittyvien geenien transkriptiovaste Litopenaeus vannameissa, jota viljellään kierrättävissä vesiviljelyjärjestelmissä, joissa on kohonnut CO2. Rev. Bras. de Zootec. 2021, 50, 20200197. [CrossRef]

37. Guzmán-Villanueva, LT; Escobedo-Fregoso, C.; Barajas-Sandoval, DR; Gomez-Gil, B.; Peña-Rodríguez, A.; Martínez-Diaz, SF; Balcazar, JL; Quiroz-Guzmán, E. Arviointi mikrobidynamiikasta ja antioksidanttientsyymigeenin ilmentymisestä probioottien antamisen jälkeen viljellyissä Tyynenmeren valkoisissa katkarapuissa (Litopenaeus vannamei). Vesiviljely 2020, 519, 734907. [CrossRef]

38. Callahan, BJ; Mcmurdie, PJ; Rosen, MJ; Han, AW; Johnson, AJA; Holmes, SP DADA2: Korkean resoluution näytepäätelmä Illumina-amplikonitiedoista. Nat. Methods 2016, 13, 581–583. [CrossRef]

39. Lahti, L.; Shetty, S. Microbiome R -paketti; Vapautus (3.16); Biojohde: Boston, MA, USA, 2017. [CrossRef]

40. Langille, MGI; Zaneveld, J.; Caporaso, JG; McDonald, D.; Knights, D.; Reyes, JA; Clemente, JC; Burkepile, DE; Vega Thurber, RL; Knight, R.; et ai. Mikrobiyhteisöjen ennakoiva toiminnallinen profilointi käyttämällä 16S rRNA-markkerigeenisekvenssejä. Nat. Biotechnol. 2013, 31, 814–821. [CrossRef]

41. Cornejo-Granados, F.; Lopez-Zavala, AA; Gallardo-Becerra, L.; Mendoza-Vargas, A.; Sánchez, F.; Vichido, R.; Brieba, LG; Viana, MT; Sotelo-Mundo, RR; Ochoa-Leyva, A. Tyynenmeren valkojalkakatkarapujen mikrobiomi paljastaa erilaisen bakteeriyhteisön koostumuksen luonnonvaraisten, vesiviljeltyjen ja AHPND/EMS-epidemian puhkeamisolosuhteiden välillä. Sci. Tasavalta 2017, 7, 1–15. [CrossRef]

42. Façanha, FN; Oliveira-Neto, AR; Figueiredo-Silva, C.; Nunes, AJ Katkarapujen kasvatustiheyden ja ravinnon metioniinin eri tasojen vaikutus vihreässä vesijärjestelmässä kasvatetun Litopenaeus vannamein kasvukykyyn. Vesiviljely 2016, 463, 16–21. [CrossRef]

43. Nunes, AJP; Sabry-Neto, H.; Masagounder, K. Raakaproteiinia nuorten Litopenaeus vannamein vähäkala-aterian ruokavaliossa voidaan vähentää tasapainoisella välttämättömien aminohappojen täydennyksellä. J. World Aquac. Soc. 2019, 50, 1093–1107. [CrossRef]

44. Llario, F.; Falco, S.; Sebastiá-Frasquet, M.-T.; Escrivá, J.; Rodilla, M.; Poersch, LH Bacillus amyloliquefaciensin rooli Litopenaeus vannameissa Biofloc-järjestelmän kypsymisen aikana. J. Mar. Sei. Eng. 2019, 7, 228. [CrossRef]

45. Llario, F.; Romano, LA; Rodilla, M.; Sebastiá-Frasquet, MT; Poersch, LH Bacillus amyloliquefaciensin käyttö probioottina Litopenaeus vannameille (Boone, 1931), jota viljellään biofloc-järjestelmässä. Iran. J. Fish. Sci. 2020, 19, 904–920.

46. ​​Gharib-Naseri, K.; Dorigam, JCDP; Doranalli, K.; Kheravii, S.; Swick, RA; Choct, M.; Wu, S.-B. Suolen eheyteen, apoptoosiin ja immuniteettiin liittyvät geenien modulaatiot ovat taustalla Bacillus amyloliquefaciens CECT 5940:n suotuisat vaikutukset broilereissa, joita ruokittiin eri proteiinitasoilla sisältävällä ruokavaliolla nekroottisen suolitulehduksen altistusmallissa. J. Anim. Sci. Biotechnol. 2020, 11, 104. [CrossRef]

47. Ajogwu, TMC; Ekwealor, CC; Mbah, AN; Madukwe, EJ; Ekwealor, IA Metioniinia tuottavien Bacillus-lajien seulonta nigerialaisista fermentoiduista ruokamausteista ja joidenkin kulttuuristen parametrien vaikutukset metioniinin kertymiseen. Olen. J. Food Nutr. 2020, 9, 16–22. [CrossRef]

48. Yu, M.-C.; Li, Z.-J.; Lin, H.-Z.; Wen, G.-L.; Ma, S. Ruokavalion Bacillus- ja lääkeyrttien vaikutukset Litopenaeus vannamein katkarapujen kasvuun, ruoansulatusentsyymiaktiivisuuteen ja seerumin biokemiallisiin parametreihin. Aquac. Int. 2008, 16, 471–480. [CrossRef]

49. Yılmaz, S.; Ergun, S.; Yigit, M.; Çelik, E. Ravinnon Bacillus subtiliksen ja trans-kanelihapon yhdistelmän vaikutus kirjolohen, Oncorhynchus mykissin, Yersinia ruckerin luontaisiin immuunivasteisiin ja vastustuskykyyn. Aquac. Res. 2020, 51, 441–454. [CrossRef]

50. Zare, R.; Kenari, AA; Sadati, MY Ruokaetikkahapon, proteiinin (probiootti) ja niiden yhdistelmän vaikutus kasvukykyyn, suoliston mikrobiotaan, ruoansulatusentsyymeihin, immunologisiin parametreihin ja rasvahappokoostumukseen siperiansampissa (Acipenser baerii, Brandt, 1869). Aquac. Int. 2021, 29, 891–910. [CrossRef]

51. Rodjan, P.; Soisuwan, K.; Thongprajukaew, K.; Theapparat, Y.; Khongthong, S.; Jeenkeawpieam, J.; Salaeharae, T. Orgaanisten happojen tai probioottien vaikutus yksinään tai yhdistelmänä kasvukykyyn, ravinteiden sulavuuteen, entsyymiaktiivisuuksiin, suoliston morfologiaan ja suoliston mikroflooraan broilereilla. J. Anim. Physiol. Anim. Nutr. 2018, 102, e931–e940. [CrossRef] [PubMed]

52. Hong, Y.; Chu, J.; Kirby, R.; Sheen, S.; Chien, A. Kalajauhoproteiinin korvaamisen siipikarjan sivutuotejauhon ja fermentoidun soijapapujauhon seoksella vaikutukset aasialaisen meribassin (Lates calcarifer) kasvukykyyn ja kudosten ravintokoostumukseen. Aquac. Res. 2021, 52, 4105–4115. [CrossRef]

53. Burri, L.; Berge, K.; Chumkam, S.; Jintasataporn, O. Krillijauhon erilaisten rehupitoisuuksien vaikutukset Litopenaeus vannamein kasvuun ja hepatohaiman morfologiaan. Aquac. Res. 2020, 51, 4819–4823. [CrossRef]

54. Murashita, K.; Matsunari, H.; Fukada, H.; Suzuki, N.; Furuita, H.; Oku, H.; Rønnestad, I.; Yoshinaga, H.; Yamamoto, T. Kasvipohjaisen vähäkalajauhoisen ruokavalion vaikutus ruoansulatusfysiologiaan keltahäntäseriola quinqueradiatassa. Vesiviljely 2019, 506, 168–180. [CrossRef]

55. Rahimnejad, S.; Yuan, X.; Wang, L.; Lu, K.; Song, K.; Zhang, C. Chitooligosakkaridilisäys vähäkala-aterian ruokavaliossa Tyynenmeren valkoisten katkarapujen (Litopenaeus vannamei) osalta: Vaikutukset kasvuun, synnynnäiseen immuniteettiin, suoliston histologiaan ja immuunijärjestelmään liittyvien geenien ilmentymiseen. Kala Simpukat. Immunol. 2018, 80, 405–415. [CrossRef]

56. Peña-Rodríguez, A.; Pelletier-Morreeuw, Z.; García-Luján, J.; Rodríguez-Jaramillo, MDC; Guzmán-Villanueva, L.; Escobedo regoso, C.; Tovar-Ramírez, D.; Reyes, AG Agave lechuguillaby -tuotteen raakauutteen arviointi nuorten katkarapujen Litopenaeus vannamei rehun lisäaineena. Aquac. Res. 2019, 51, 1336–1345. [CrossRef]

57. Ray, GW; Liang, D.; Yang, Q.; Tan, B.; Dong, X.; Chi, S.; Liu, H.; Zhang, S.; Rimei, L. Kalajauhon korvaamisen vaikutukset ruokavalioon soijaproteiinikonsentraatilla (SPC) nuorten katkarapujen Litopenaeus vannamein kasvuun, seerumin biokemiallisiin indekseihin ja antioksidanttisiin toimintoihin. Vesiviljely 2020, 516, 734630. [CrossRef]

58. Ambasankar, K.; Dayal, JS; Vasagam, KK; Sivaramakrishnan, T.; Sandeep, KP; Panigrahi, A.; Ananda Raja, R.; Burri, L.; Vijayan, KK Penaeus vannamein kasvu, rasvahappokoostumus, immuunijärjestelmään liittyvä geeniekspressio, histologia ja hematologiset indeksit syötettiin antarktisen krillijauhon asteittain kahdella eri kalajauhopitoisuudella. Vesiviljely 2022, 553, 738069. [CrossRef]

59. Noor, Z.; Noor, M.; Khan, SA; Younas, W.; Ualiyeva, D.; Hassan, Z.; Yousafzai, AM Metioniinin ravintolisät parantavat rohun (Labeo rohita) kasvukykyä, synnynnäistä immuniteettia, ruoansulatusentsyymejä ja antioksidanttivaikutuksia. Fish Physiol. Biochem. 2021, 47, 451–464. [CrossRef]

60. Yun, H.; Shahkar, E.; Hamidoghli, A.; Lee, S.; Won, S.; Bai, SC Ruokavalion soijajauhon arviointi kalajauhon korvikkeeksi nuorten valkojalkaisten katkarapujen, Litopenaeus vannamei, biofloc-järjestelmässä. Int. Aquat. Res. 2017, 9, 11–24. [CrossRef]

61. Hu, X.; Yang, H.-L.; Yan, Y.-Y.; Zhang, C.-X.; Joo, J.-D.; Lu, K.-L.; Hu, L.-H.; Zhang, J.-J.; Ruan, L.; Sun, Y.-Z. Frukto-oligosakkaridin vaikutukset katkarapujen (Litopenaeus vannamei) kasvuun, immuniteettiin ja suoliston mikrobiotaan kalajauholla, joka on osittain korvattu soijapapujauholla. Aquac. Nutr. 2019, 25, 194–204. [CrossRef]

62. Mamauag, REP; Gao, J.; Nguyen, BT; Ragaza, JA; Koshio, S.; Ishikawa, M.; Yokoyama, S. dl-metioniinin ja metioniinidipeptidin lisäykset ruokavalioissa ovat tehokkaita toukkien ja nuorten punamerilahnan, Pagrus major, kehitykselle ja kasvulle. J. World Aquac. Soc. 2012, 43, 362–374. [CrossRef]

63. Wu, P.; Tang, L.; Jiang, W.; Hu, K.; Liu, Y.; Jiang, J.; Kuang, S.; Tang, W.; Zhang, Y.; Zhou, X.; et ai. Ruokavalion metioniinin ja aikuisten ruohokarpin (Ctenopharyngodon idella) kasvun, ruoansulatuksen, imeytymisen ja antioksidanttitilan välinen suhde suolisto- ja hepatohaimakudoksissa. J. Anim. Sci. Biotechnol. 2017, 8, 1–14. [CrossRef]

64. Encarnação, P. Functional Feed Additives in Aquaculture Feeds. Aquafeed-formulaatiossa; Academic Press: Cambridge, MA, USA, 2016; s. 217–237. [CrossRef]

65. Xie, S.; Wei, D.; Yin, P.; Zheng, L.; Guo, T.; Liu, Y.; Tian, ​​L.; Niu, J. Kalajauhon heikentyneen proteiinisynteesin ja immuunivasteen korvaaminen nuorten Tyynenmeren valkoisten katkarapujen, Litopenaeus vannamei alhaisella suolapitoisuudella. Comp. Biochem. Physiol. Osa B Biochem. Mol. Biol. 2018, 228, 26–33. [CrossRef]

66. Ayiku, S.; Shen, J.; Tan, B.-P.; Dong, X.-H.; Liu, H.-Y. Ruokavalion kalajauhon vähentämisen hiivalisäaineilla vaikutukset Litopenaeus vannamein kasvuun, immuunivasteeseen ja tautien vastustuskykyyn Vibrio harveyia vastaan. Microbiol. Res. 2020, 239, 126554. [CrossRef]