Cistanches Tubulosa -vesiuute suojaa kivestä syklofosfamidin aiheuttamilta vaurioilta: vaikutus ja mekanismi

XIA Lun-bin1,2 ,JIANG Ping 1,2 ,HE Yan-fei 1,2 ,SUN Tao-tao 1 ,ZHOU Yu1 ,ZUO Ｒui-hua 1,2

1. School of Biological and Pharmaceutical Engineering, West Anhui College, Lu ＇an, Anhui 237012, Kiina; 2. Anhui Engineering Laboratory konservointiin ja perinteisen kiinalaisen lääketieteen Ｒresurssien kestävään hyödyntämiseen, Lu＇an, Anhui 237012, Kiina

【Abstrakti】

Tavoite: Tutkia suojavaikutustaCistanche tubulosa vesiuute (CTWE) syklofosfamidin (CTX) aiheuttamaa kivesvauriota (TI) vastaan ​​hiirillä ja sen toimintamekanismia vastaan.

Cistanche-uutejauhe

Napsauta tästä nähdäksesi Cistanche for Kidney taudin tuotteet

【Ask for more】 Email: xue122522@foxmail.com /  Whats App:  0086 18599088692 /  Wechat:  18599088692

menetelmät: Kolmekymmentä uroshiirtä satunnaistettiin yhtä paljon normaaliin kontrolliin, CTX-indusoituun TI-mallikontrolliin ja CTWE-hoitoryhmään. 7 päivän mukautuvan ruokinnan jälkeen CTWE-hoitoryhmän hiiriä hoidettiin mahansisäisesti CTWE:llä annoksella 1{{2{{30}}}} g/kg/d, normaalin kontrolli- ja TI-mallin hiiriä. kontrolliryhmät, joilla oli sama tilavuus normaalia suolaliuosta joka päivä 35 peräkkäisenä päivänä, ja TI-mallin kontrolli- ja CTWE-hoitoryhmissä vatsaontelonsisäisellä syklofosfamidin injektiolla 80 mg/kg/d 7,14,21 ,28 ja 35 päivää. Sitten kaikki eläimet punnittiin, otettiin verinäytteitä ja kerättiin niiden kivekset ja lisäkivekset seerumin T-pitoisuuden havaitsemiseksi, siemennesteen laadun tutkimiseksi, kivesten painon mittaamiseksi, kiveksissä olevien histopatologisten muutosten havaitsemiseksi ja superkiveksen määrittämiseksi. oksididismutaasi (SOD) ja malondialdehydi (MDA) kiveskudoksessa ja geenien mＲNA-ilmentymiset, jotka liittyvät ydintekijän erytroidi{{10}}on liittyvään tekijään (Nrf2) -signalointireittiin. Ｒtulokset: TI-mallin kontrolliryhmän hiirillä, verrattuna normaaleihin kontrolleihin, ruumiinpaino laski merkittävästi (［34． 13 ± 1． 56］vs ［47． 08 ± 1． 98．g ,P ＜ 0． 05) ,kiveksen paino ( ［81． 82 ± 1{{101}}． 61］ vs ［148． 50 ± 14． 82］mg,P ＜ 0． 05) ,sperman pitoisuus (［32． 60 ± 5． 29］vs ［78． 90 ± 7． 95］ × 106 /ml,P ＜ 0． 05) ,sperman motiliteetti (［45． 20 ± 7． {{186} }}9,5 prosenttia vs［86． 70 ± 5． 64,5 prosenttia ,P ＜ 0． 05) , seerumin T-pitoisuus (［7． 49 ± 1． 03］ vs［15． ±3． 15． ］ng /L,P ＜ 0． 05) ja SOD-taso (［152． 22 ± 10． 66］vs［356． 10 ± 30． 95］U/mg prot,P． 95］U］/mg prot,P． s. morfologisesti epänormaalien siittiöiden (MAS) prosenttiosuudessa (［39． 30 ± 7． 36］ prosenttia vs［14． 40 ± 3． 53］ prosenttia ,P ＜ 0． ± 05) ja MDA-tasossa ( ［5． ± 54． 12］vs［31． 71 ± 3． 57］nmol /mg prot,P ＜ 0． 05) ． CTWE:llä käsitellyt eläimet osoittivat huomattavasti lisääntynyttä ruumiinpainoa TI-mallin kontrolleihin verrattuna (［40． 67 ± 2． 13］vs［34． 13 ± 1． 56］g, P ＜ 0, testi on 05) ( ［121． 21 ± 17． 38］ vs ［81． 82 ± 10． 61］mg,P ＜ 0． 05) , siittiöiden pitoisuus (［58． ± 5． 2［ 58． 40 ± 9． 29 ］ × 106 /ml,P ＜ 0． 05), siittiöiden liikkuvuus (［72． 30 ± 7． 51］ prosenttia vs［45． 20 ± 7． 09［ prosenttia ,P ． 0 0) 10． 89 ± 1． 07］vs［7． 49 ± 1． 03］ng /L,P ＜ 0． 05) ja SOD-taso (［217． 69 ± 24． 69 ± 24．s 59． 6 ］U/mg prot,P ＜ 0． 05), mutta vähentynyt MAS:n prosenttiosuus (［22． 20 ± 6． 07］ prosenttia vs ［39． 30 ± 7． 36． 0,50 prosenttia) ( ［36． 41 ± 4． 27］ vs ［54． 91 ± 5． 12］nmol /mg prot, P ＜ 0． 05) ． Nrf2,HO-1 ja NQO-1 mＲNA-ilmentymät kiveskudoksessa olivat merkittävästi heikommat TI-mallin kontrolleissa verrattuna normaaleihin kontrolleihin (P ＜ 0． 05) ja huomattavasti. lisääntynyt CTWE-hoitoryhmässä verrattuna TI-malliryhmään (P ＜ 0． 05), kun taas Caspase3:n taso nousi huomattavasti TI-mallin kontrolleissa (P ＜ 0． 05) ja laski CTWE-hoitoryhmässä ( P ＜ 0． 05) . Histopatologisesti TI-mallikontrollien kiveskudoksessa oli epäselviä ääriviivoja siementiehyen tyvestä luumenin pintaan, ja siittiösolujen kerrokset olivat epäjärjestyneet ja vähentyneet sekä siittiöiden lukumäärä siementiehyissä, kun taas spermatogeenisten tubulusten rakenne toipui lähes normaaliksi CTWE-hoitoryhmässä.

Johtopäätös: Cistanches tubulosa -vesiuute voi tehokkaasti estää syklofosfamidin aiheuttamaa kivesvauriota lisäämällä antioksidanttientsyymin aktiivisuutta ja säätelemällä Nrf2-signalointireittiin liittyvien geenien ilmentymiä.

Cistanche-jauhe

【Avainsanat】Cistanche tubulosa vesiuute; kives; syklofosfamidi; oksidatiivista stressiä; hiiri

Syklofosfamidia (CTX), kasvaimia estävänä lääkkeenä [1] ja immunosuppressiivisena aineena [2], on käytetty laajalti lääketieteellisessä kliinisessä käytännössä. Sillä on kuitenkin myös merkittäviä sytotoksisia vaikutuksia, ja lisääntymisjärjestelmän vaurioituminen on yksi sen sivuvaikutuksista. Aiemmat tutkimukset ovat osoittaneet, että CTX voi aiheuttaa oksidatiivista stressivauriota kivesten kudoksissa uros- tai uroseläimissä, mikä johtaa spermatogeeniseen toimintahäiriöön, kuten siittiöiden määrän ja liikkuvuuden vähenemiseen [3-6]. Siksi menetelmien tutkiminen kivesten kudoksen CTX-vaurion vähentämiseksi tai poistamiseksi ja sen normaalin spermatogeenisen toiminnan korjaamiseksi on tullut tutkimuskeskukseksi.

Cistanche deserticola äänitettiin ensimmäisen kerran "Shennong Materia Medica Classicissa" ja se on perinteinen ja arvokas kiinalainen lääketiede. Sillä on virkistävä esanssi ja verta, virkistävä munuaisten yang, ravitseva munuaisten yin, kosteuttava suolistoa ja lievittävä ummetusta. Kiinan farmakopean mukaan Cistanche deserticola on Orobaceae-heimon monivuotinen ruohomainen loiskasvi. Cistanche deserticola YCMa tai Cistanche tubulosa (Schenk) Light on kuiva, hilseilevä, mehevä varsi. "Lääketieteellisen merkityksen" [8] mukaan Cistanche deserticola "kuuluu yangin yiniin... se on tärkein munuaisia ​​vahvistava aine ja tuote, joka auttaa vahvistamaan yangia ja esanssia". Materia Medica Preparation [9] korostaa, että avain Cistanche deserticolan käyttöön lääkkeenä on "ravitsee munuaisia ​​ja ravitsee suolistoa". Cistanche deserticolaa käytetään laajalti perinteisessä kiinalaisessa lääketieteessä, ja se on yksi yleisimmin käytetyistä lääkeyrteistä munuaisten tonisoinnissa, yangin vahvistamisessa ja vahvuuden parantamisessa. Viime vuosina tehdyt kemialliset analyysit ja farmakologiset tutkimukset ovat osoittaneet, että Cistanche deserticola sisältää erilaisia ​​vaikuttavia aineita, kuten fenyylietanoidiglykosideja, iridoideja ja niiden glykosideja, lignaaneja ja niiden glykosideja, polysakkarideja, alkaloideja, aminohappoja ja hivenaineita. [10]. 

Cistanche deserticolan teho – virkistävä munuainen

Nykyaikainen farmakologinen tutkimus on osoittanut, että sillä ei ole vain farmakologisia vaikutuksia, kuten ikääntymistä estävä [11-12], väsymystä [13], antioksidantti [14], immuunisäätely [15] ja hermosuojaus [{{6] }}], mutta parantaa merkittävästi myös lisääntymistoimintoja [18]. LI et ai. [19] raportoivat, että Cistanche deserticola voisi kääntää tri pterygiumin glykosidin aiheuttaman lisääntymistoksisuuden hiirillä; Wang Dejun et ai. [20] osoittivat, että Cistanche deserticola voi edistää kivesten siittiöiden muodostumista ja parantaa lisäkivesaineen mikroympäristöä; Zhao Donghai et ai. [21] havaitsivat, että Cistanche deserticolan fenyylietanoidiglykosideilla on merkittävä terapeuttinen vaikutus CTX:n aiheuttamiin spermatogeenisiin häiriöihin hiirillä, ja huomautti, että sen mekanismi voi liittyä testosteronitasojen parantamiseen kiveskudoksessa. On kuitenkin vain vähän raportteja Cistanche deserticolan vaikutuksen mekanismista lisääntymistoimintojen, kuten spermatogeneesin, edistämisessä, ja lisätutkimusta tarvitaan. Tässä kokeellisessa tutkimuksessa käytettiin CTX:ää kivesten kudosvaurion hiirimallin rakentamiseen ja tutkittiin Cistanche tubulosa -vesiuutteen (CTWE) korjausvaikutusta vaurioituneeseen kiveskudokseen hiirillä. Tutkimus tehtiin histologisilla, fysiologisilla ja biokemiallisilla menetelmillä. Antioksidantti-indikaattoreiden ja ydintekijä E2:een liittyvään tekijä 2:een (Nrf2) liittyvien geenien ilmentymisen tutkimuksella kiveskudoksessa pyritään rikastamaan Cistanche deserticolan farmakologista perustaa ja tarjoamaan tieteellistä perustaa sen lääketieteelliselle arvolle ja tuotekehitykselle.

1 Materiaali ja menetelmät

1.1 Materiaalit

1.1.1 Koeeläimet

40 puhdasta Kunmingin valkoista hiirtä, uros, paino (18 ± 2) g, ostettu Anhuin lääketieteellisen yliopiston Experimental Animal Centeristä, eläinlupanumerolla SCXK (Anhui) 2017-001. Hiiret kasvatettiin erillisissä häkeissä, ruokittiin ja joivat vapaasti huoneenlämpötilassa 20-24 astetta ja kosteudessa 55 prosenttia -65 prosenttia. 7 päivän mukautuvan ruokinnan jälkeen niitä käytettiin kokeeseen.

1.1.2 Lääkemateriaalit ja -reagenssit

Kuivatut Cistanche deserticola -tabletitostettiin lääkeyrttimarkkinoilta Bozhoun kaupungista, Anhuin maakunnasta. Professori Chen Naidong Wanxin yliopiston biologisen ja farmaseuttisen tekniikan korkeakoulun perinteisen kiinalaisen lääketieteen opetus- ja tutkimustoimistosta tunnisti ne putkimaiseksi Cistanche deserticolaksi. Ekinasetiinin standardituote (puhtaus suurempi tai yhtä suuri kuin 98 prosenttia), Shanghai Tongtian Biotechnology Co., Ltd; Hematoksyliini-eosiinivärjäys (HE) -väriaine, Zhuhai Besso Biotechnology Co., Ltd; Malondialdehydi (MDA), superoksididismutaasi (SOD) ELISA-pakkaus, Nanjing Jiancheng Technology Co., Ltd; CTX, Shanghai Aladdin Biochemical Technology Co, Ltd; Testosteroni ELISA Kit, Shanghai Zhenke Biotechnology Co., Ltd; UNlQ-10-kolonni Trizol-RNA:n kokonaisuuttopakkaus, Shenggong Biotechnology (Shanghai) Co., Ltd; EasyScript One Step gDNA-poisto ja cDNA-synteesi SuperMix, Trans Start Green qPCRSuperMix, Beijing Quanshi Biotech Co., Ltd.

Kuivatut Cistanche deserticola -tabletit

1.1.3 Instrumentit ja laitteet

BX53 mikroskooppi, Olympus yritys; YD-335 parafiinileikkuri, Zhejiang Jinhua Yidi Medical Equipment Co., Ltd; RE-2002 Pyörivä höyrystin, Shanghai Yaote Instrument Equipment Co., Ltd; TU-1950 UV-näkyvä spektrofotometri, Beijing Puxi General Instrument Co., Ltd; NanoDrop2000 ultramikrospektrofotometri, Thermo Fisher Scientific; Agilent 1260 Infinity II Prime -nestekromatografiajärjestelmä, Agilent Technologies; Vaihe yksi plus fluoresenssin kvantitatiivinen PCR-laite, Applied Biosystems.

1.2 Menetelmä

1.2.1 CTWE:n valmistelu

Viitaten viitteessä [22] raportoituun kuuman veden uuttomenetelmään pienin parannuksin. Murskaa 500 g Cistanche deserticolaa ja upota se 5 litraan tislattua vettä. Keitä ja uuta 100 asteessa 2 tuntia. Suodata ja kerää suodos. Lisää 5 l tislattua vettä suodatinjäännökseen ja jatka uuttamista. Toista uutto kolme kertaa, yhdistä suodos, haihduta se tyhjössä 65 asteessa ja väkevöi raakalääkepitoisuuteen 0,5 g/ml. CTWE:n laadunvalvonta perustuu ekinasetiinipitoisuuteen [23]. Ekinasetiinipitoisuudeksi CTWE:ssä määritetään korkean erotuskyvyn nestekromatografialla (7,63 ± 0,08) mg/ml.

1.2.2 Eläinten ryhmittely ja hallinto

30 hiirtä jaettiin satunnaisesti normaaliin kontrolliryhmään, malliryhmään ja Cistanche deserticola -hoitoryhmään, jossa kussakin ryhmässä oli 10 hiirtä. Hoitoryhmän hiirille annettiin CTWE-annos 10 g/kg ruumiinpainoa letkuruokinnalla [laskettuna 20 kertaa aikuisten 0,5 g/(kg · d) [13]], kun taas kontrolliryhmän ja malliryhmän hiirille annettiin sama tilavuus. fysiologista suolaliuosta letkuletkulla kerran päivässä 35 peräkkäisen päivän ajan; 7., 14., 21., 28. ja 35. antopäivänä malliryhmälle ja Cistanche deserticola -hoitoryhmän hiirille annettiin 80 mg/kg CTX:a intraperitoneaalista injektiota varten, kun taas kontrolliryhmän hiirille annettiin sama tilavuus fysiologista suolaliuosta intraperitoneaalista injektiota varten.

1.2.3 Näytteiden kerääminen ja käsittely

Viimeisen CTX-injektion ja 12 tunnin paaston jälkeen ruumiinpaino mitattiin ja verinäytteitä kerättiin. Sitten kunkin ryhmän hiiret nukutettiin kloraalihydraatilla (0,3 ml/100 g) intraperitoneaalisesti, ja kivekset poistettiin ja punnittiin; Ota lisäkiveskudos molemmilta puolilta siittiöiden laadun testausta varten; Ota vasen kives ja säilytä se 4-prosenttisessa paraformaldehydiliuoksessa kudosleikkausta ja histopatologista tutkimusta varten; Ota oikea kives ja säilytä se nestetypessä kudosten biokemiallisia indikaattoreita ja fluoresenssikvantitatiivista PCR-detektiota varten.

1.2.4 Sperman laadun testaus

Leikkaa kerätty lisäkiveskudos ja aseta se esilämmitettyyn 37-asteiseen fysiologiseen suolaliuokseen. Inkuboi vakiolämpötilassa 15 minuuttia, jotta siittiöt voivat uida kokonaan ulos ja valmistaa siittiösuspensio. Ota siittiösuspensio ja aseta se siittiöiden laskentapöydälle, joka on esilämmitetty 37 asteeseen. Tarkkaile mikroskoopilla ja valitse elävinä siittiöitä, jotka voivat liikkua suorassa linjassa tai suuntaamattomaan suuntaan. Muut siittiöt, jotka voivat vain pyöriä tai pysyä inaktiivisina paikoillaan kuolleina siittiöinä. Laske elävien siittiöiden määrä 200 siittiössä ja laske siittiöiden liikkuvuus [24]; Ota 10 μ Kun siittiösuspensio on laimennettu 20-kertaisella fysiologisella suolaliuoksella, laske siittiöiden pitoisuus käyttämällä verisolujen laskentalevymenetelmää; Ota siittiösuspensio ja sekoita se 1-prosenttiseen eosiiniliuokseen suhteessa 10:1 värjäystä varten, sivele, ilmakuivaa, kiinnitä se metanoliin, tarkkaile mikroskoopilla ja laske siittiöiden epämuodostuma.

1.2.5 Kiveskudoksen patologinen havainnointi

Ota vasen kives, joka on säilötty 4-prosenttisessa paraformaldehydiliuoksessa, leikkaa se terällä noin 0,5 cm3:n kudoskappaleeksi, upota se parafiiniin, värjää HE:llä ja tarkkaile kivesten patologisia muutoksia. kudos mikroskoopin alla.

1.2.6 Biokemiallisten indikaattorien havaitseminen kiveskudoksessa

Ota SOD- ja MDA-detektiosarjan ohjeiden mukaisesti nestetypessä säilytetyt kivekset ja valmista 10-prosenttinen homogenaatti. Noudata sarjan ohjeita SOD- ja MDA-pitoisuuden havaitsemiseksi kiveskudoksesta.

1.2.7 Seerumin testosteronipitoisuuden havaitseminen

Testosteronin ELISA-tunnistussarjan käyttöohjeiden mukaan havaitse testosteronin pitoisuus hiiren seerumissa.

1.2.8 Hiiren kiveskudos

Nrf2-signalointireittiin liittyvien geenien sisältö havaittiin kvantitatiivisella fluoresenssi-PCR:llä geenien, kuten Nrf2, kaspaasi-3, hemioksygenaasi-1 (HO-1) mRNA-ilmentymistasojen havaitsemiseksi. , NADPH-kiniinioksidoreduktaasi-1 (NQO-1) ja Kelchin kaltainen ECH-assosioitunut proteiini-1 (Keap1) hiiren kiveskudoksessa. Menetelmä raportoitiin viitteessä [25] ja sitä on hieman muunnettu . Kokonais-RNA uutettiin hiiren kiveskudoksesta käyttämällä pylväsmäistä Trizol-kokonais-RNA:n uuttopakkausta. cDNA syntetisoitiin käänteistranskriptiolla käyttämällä EasyScript One Step gDNA -poistoa ja cDNA Synthesis SuperMixiä ja havaittiin RTFQ PCR:llä käyttämällä Trans Start Green qPCRSuper Mix -pakkausta. Alukkeet Nrf2:lle, Caspase3:lle, HO-1:lle, NQO-1:lle ja Keap1:lle suunnitteli ja syntetisoi Bioengineering (Shanghai) Co., Ltd. Alukesekvenssit on esitetty taulukossa 1. Tiedot tallennettiin käyttämällä fluoresenssikvantitatiivisen PCR-laitteen sisäänrakennettua ohjelmistoa, ja näytteiden Ct-arvot ilmentyivät stabiilisti hiirissä. Aktiini on endogeeninen sisäinen vertailugeeni [26]. Kaava 2 - ΔΔ Laske suhteellinen mRNA:n ilmentymistaso CT:n avulla.

1.3 Tilastollinen analyysi

Kaikki tiedot analysoitiin käyttämällä SPASS 19.0 yksisuuntaista ANOVAa varten, jolloin mittaustiedot edustivat x ± s ja P pienempi tai yhtä suuri kuin 0.05, mikä osoittaa tilastollisesti merkittäviä eroja.

Pöytä 1. RTFQ-PCR:ssä käytetyt Nrf2:n, Caspase3:n, HO-1, NQO-1, Keap1:n ja -aktiinin alkusekvenssit

2 tulosta

2.1 CTWE:n vaikutus ruumiinpainoon ja kivesten massaan hiirillä, joilla on CTX:n aiheuttama kivesvaurio

Normaaliin kontrolliryhmään verrattuna malliryhmän hiirten ruumiinmassa ja kivesten massa pienenivät merkittävästi (P<0.05); Compared with the model group, the body mass and testicular mass of mice treated with Cistanche deserticola significantly increased (P<0.05). See Table 2.

2.2 CTWE:n vaikutus siemennesteen laatuun hiirillä, joilla on CTX:n aiheuttama kivesvaurio

Taulukosta 3 voidaan nähdä, että verrattuna normaaliin kontrolliryhmään malliryhmän hiirten siittiöiden liikkuvuus ja konsentraatio väheni merkittävästi (P<0.05), while the sperm deformity rate was significantly increased (P<0.05); Compared with the model group, the sperm motility and sperm concentration in the Cistanche deserticola treatment group were significantly increased (P<0.05), while the sperm deformity rate was significantly reduced (P<0.05). The results showed that CTWE significantly improved the semen quality of mice with testicular injury caused by CTX.

Taulukko 2. Hiirten ruumiinpaino ja kivesten paino eri ryhmissä (x ± s)

NC: Normaali ohjaus; TIMC: kivesvauriomallin valvonta; CTWE: Cistanche tubulosa vesiuutteen käsittely; * : P ＜ {{0}}． 05 vs. NC-ryhmä; #: P ＜ 0. 05 vs. TIMC-ryhmä.

Taulukko 3. Siittiöiden motiliteetti, siittiöiden pitoisuus ja morfologisesti epänormaalien siittiöiden (MAS) prosenttiosuus eri ryhmissä (x ± s)

NC: Normaali ohjaus; TIMC: kivesvauriomallin valvonta; CTWE: Cistanche tubulosa vesiuutteen käsittely; * : P ＜ {{0}}． 05 vs. NC-ryhmä; #: P ＜ 0. 05 vs. TIMC-ryhmä.

Kuvio 1. Patomorfologiset kuvat eri ryhmien hiirten kiveskudoksista (HE × 400)

A＇ ja A: Normaali ohjaus; B＇ja B: kivesvauriomallin valvonta; C＇ ja C: Cistanche tubulosa vesiuutteen käsittely; Nuolet osoittavat muutoksia spermatogeenisten solujen kerroksissa kaikilla siementiehyiden tasoilla; laatikot osoittavat epäjärjestyksessä ja vähentyneitä spermatogeenisten solujen kerroksia; ja ympyrät osoittavat siittiöiden vähentyneen määrän siementiehyissä

2.3 CTWE:n vaikutus kiveskudoksen patologisiin muutoksiin hiirillä, joilla on CTX:n aiheuttama kivesvaurio

Kuten kuviosta 1 voidaan nähdä, normaaliin kontrolliryhmään verrattuna siementiehyen rakenne malliryhmän hiirten kiveskudoksessa on muuttunut merkittävästi. Siementiehyen tyvikalvon ääriviivat ovat epäselviä, siittiöiden määrät kaikilla tasoilla luumenissa ovat alentuneet ja järjestyneet epäjärjestykseen, ja siittiöiden määrä ontelossa on vähentynyt merkittävästi (kuvio 1B, B'); Malliryhmään verrattuna Cistanche deserticola -hoitoryhmässä hoidon jälkeen hiiren kiveksessä siementiehyen tyvikalvon ääriviivat tulivat täydelliset ja selkeät, siittiökerrokset luumenissa lisääntyivät ja niiden sijoittelu yleensä säännöllinen. ja siittiöiden määrä luumenissa kasvoi merkittävästi (kuvio 1C, C').

2.4 CTWE:n vaikutus SOD- ja MDA-tasoihin hiirten kiveskudoksessa, joilla on CTX-indusoitu kivesvaurio

Normaaliin kontrolliryhmään verrattuna malliryhmän hiirten kiveskudoksen SOD-pitoisuus laski merkittävästi (P<0.05) and the MDA content significantly increased (P<0.05); Compared with the model group, the SOD content in the testicular tissue of mice treated with Cistanche deserticola significantly increased (P<0.05) and the MDA content significantly decreased (P<0.05). The results showed that CTWE had a significant improvement effect on SOD and MDA indicators in the testicular tissue of mice with CTX-induced testicular injury. See Table 4.

Taulukko 4. SOD- ja MDA-tasot hiirten kiveskudoksessa eri ryhmissä (x ± s)

SOD: superoksididismutaasi; MDA: malondialdehydi; NC: Normaali ohjaus; TIMC: kivesvauriomallin valvonta; CTWE: Cistanche tubulosa vesiuutteen käsittely; * : P ＜ {{0}}． 05 vs. NC-ryhmä; #: P ＜ 0. 05 vs. TIMC-ryhmä.

2. 5 CTWE:n vaikutus seerumin testosteronipitoisuuteen hiirillä, joilla on CTX:n aiheuttama kivesvaurio

Taulukon 5 mukaan verrattuna normaaliin kontrolliryhmään malliryhmän hiirten seerumin testosteronipitoisuus pieneni merkittävästi (P<0.05); Compared with the model group, the serum testosterone content of mice treated with Cistanche deserticola significantly increased (P<0.05). This indicates that CTWE not only has a good anti-injury and repair effect on CTX-induced testicular injury in mice but also significantly increases the serum testosterone content in testicular injury mice.

Taulukko 5. Seerumin T-pitoisuus eri hiirryhmissä (x ± s)

NC: Normaali ohjaus; TIMC: kivesvauriomallin valvonta; CTWE: Cistanche tubulosa vesiuutteen käsittely; * : P ＜ {{0}}． 05 vs. NC-ryhmä; #: P ＜ 0. 05 vs. TIMC-ryhmä.

2. 6 CTWE:n vaikutus Nrf2-reitin geenien ilmentymiseen hiirten kiveksissä, joilla on CTX-indusoitu kivesvaurio

Kuten kuvasta 2 näkyy, normaaliin kontrolliryhmään verrattuna NQO-1, HO-1 ja Nrf2 mRNA:n ilmentymistasot malliryhmän hiirten kiveskudoksessa olivat merkittävästi alentuneet (P<0.05), while the mRNA expression level of the apoptotic gene Caspase3 was significantly upregulated (P<0.05); Compared with the model group, the expression levels of NQO-1, HO-1, and Nrf2 mRNA in the testicular tissue of mice treated with Cistanche deserticola were significantly upregulated (P<0.05), while the expression levels of Caspase3 mRNA were significantly downregulated (P<0.05); The mRNA expression level of Keap1 gene showed no significant difference between the normal control group, model group, and Cistanche deserticola treatment group (P>0.05). Siten CTWE voi korjata CTX:n oksidatiivisen vaurion hiiren kivesten histiosyyteissä säätelemällä NQO-1, HO-1 ja muiden Nrf2:n säätelemien antioksidanttitekijöiden ilmentymistä ja estämällä apoptoosigeenin Caspase3:n ilmentymistä. .

Kuva 2. Nrf2-signalointireittiin liittyvien geenien elatiiviset ilmentymät eri hiirryhmissä

NC: Normaali ohjaus; TIMC: kivesvauriomallin valvonta; CTWE: Cistanche tubulosa vesiuutteen käsittely; * : P ＜ {{0}}． 05 vs. NC-ryhmä; #: P ＜ 0. 05 verrattuna TIMC-ryhmään

3 Keskustelu

Kasvainten vastaisena ja immunosuppressiivisena lääkkeenä CTX:llä on voimakas lisääntymistoksisuus ja se vahingoittaa suuresti hedelmällisyyttä [27]. Tämän tutkimuksen tulokset osoittivat, että CTX-mallihiirten kiveskudos oli vaurioitunut merkittävästi, siementiehyen tyvikalvon ääriviivat olivat epäselviä, ontelon halkaisija pieneni ja spermatiditasot kaikilla tasoilla alenivat, ja Sekava, siittiöiden epämuodostuma lisääntyi ja siittiöiden elinkelpoisuus ja pitoisuus vähenivät, mikä oli yhdenmukainen Jiang Pingin [24] tutkimustulosten kanssa, mikä osoittaa edelleen, että CTX:llä oli voimakasta lisääntymistoksisuutta. Cistanche deserticola on hyvä lääke yangin vahvistamiseen ja munuaisten vahvistamiseen. Tämän tutkimuksen tulokset osoittavat, että CTWE voi tehokkaasti korjata CTX:n lisääntymistoksisuuden hiirillä. Cistanche deserticola -hoitoryhmän hiirten paino ja kivesten laatu nousivat merkittävästi, siittiöiden pitoisuus ja elinkelpoisuus lisääntyivät merkittävästi, siittiöiden epämuodostumia väheni merkittävästi ja seerumin testosteronipitoisuus kasvoi merkittävästi; Histopatologisesti tarkasteltuna kudosleikkeiden HE-värjäyshavainnointi osoitti, että kiveskudoksen vauriot paranivat merkittävästi, siementiehyen tyvikalvon ääriviivat tuli täydelliseksi ja kirkkaaksi, siittiöiden taso ontelossa oli selkeä ja yleensä säännöllinen, ja kudosmorfologia oli yleensä normaali, mikä oli yhdenmukainen Wang Dejunin et al. [20], mikä osoittaa, että CTWE:llä oli vaikutusta CTX:n aiheuttaman hiiren kiveskudoksen vaurion korjaamiseen.

Desert live cistanche – virkistävä munuainen

Normaaleissa fysiologisissa olosuhteissa kehon kudokset poistavat jatkuvasti aineenvaihdunnan tuottamia happivapaita radikaaleja ja niiden peroksideja antioksidanttijärjestelmän kautta, mikä ylläpitää kehon redox-järjestelmän dynaamista tasapainoa ja välttää kudosten oksidatiivisen stressin vaurioita [28]. SOD ja MDA ovat tärkeitä kudosten antioksidanttiaktiivisuuden indikaattoreita, jotka heijastavat kudosten antioksidanttikapasiteettia ja vastaavasti oksidatiivisen stressin vaurion astetta [29]. Ma Xiaoqing et ai. [30] havaitsivat, että Cistanche deserticola voi merkittävästi lisätä SOD-tasoa ja alentaa MDA-tasoa rotan munuaiskudoksessa, jolloin sillä on tietty suojaava vaikutus gentamysiinin aiheuttamiin vaurioihin rotan munuaiskudoksessa. Tämän tutkimuksen tulokset osoittavat, että CTWE voi tehokkaasti lisätä SOD-aktiivisuuden tasoa ja vähentää MDA-pitoisuutta hiirten vaurioituneessa kiveskudoksessa, kuten yllä olevat tutkimustulokset osoittavat, että CTWE voi vastustaa oksidatiivista stressivauriota parantamalla antioksidanttikapasiteettia. kiveskudoksesta.

Superman herbs cistanche – virkistävä munuainen

Nrf2 on Cap'n'collar-transkriptiotekijäperheen jäsen ja sillä on tärkeä rooli erilaisissa sairausprosesseissa, kuten kasvaimissa ja tulehduksissa [31]. Nrf2 on keskeinen transkriptiotekijä, joka säätelee solujen antioksidanttistressiä. Kun keho kokee oksidatiivista stressiä, se siirtyy ytimeen ja sitoutuu alavirran antioksidanttivasteelementteihin (ARE) sääteleen erilaisten endogeenisten antioksidanttitekijöiden transkriptioaktiivisuutta, mukaan lukien SOD, HO-1 ja NQO-1, ja oksidatiivisten reaktioiden estäminen [32]. Patologisissa olosuhteissa Nrf2-säätelytoiminto on epänormaali, ja oksidatiivinen stressi vahingoittaa histiosyyttejä. Le et ai. [33] raportoivat, että CTX:llä on rooli lisääntymistoksisuusvaurioissa alentamalla Nrf2:n ilmentymistä ja siten estämällä antioksidanttitekijöiden, kuten HO-1 ja NQO-1, ilmentymistä. Tässä tutkimuksessa Nrf2-, HO-1- ja NQO-1-geenien ilmentyminen malliryhmän hiirten kiveskudoksessa oli merkittävästi heikentynyt ja apoptoosigeenin Caspase3 ilmentyminen lisääntyi, mikä osoittaa, että CTX voi edistää hiiren kivesten histiosyyttien apoptoosia Nrf2-signaalireitin kautta aiheuttaen kivesten kudosvaurioita, mikä on yhdenmukainen yllä olevien tutkimustulosten kanssa; Nrf2:n, NQO-1:n ja HO-1:n ilmentyminen Cistanche deserticolalla käsiteltyjen hiirten kiveskudoksessa oli merkittävästi voimistunut, kun taas Caspase3:n ilmentyminen oli merkittävästi heikentynyt, mikä osoittaa, että Cistanche deserticola voisi edistää Nrf2:n tumaan pääsyä ja ARE-integraatiota, säätelee NQO-1, HO-1 ja muiden Nrf2:n säätelemien antioksidanttitekijöiden ilmentymistä, korjaa CTX:n oksidatiivisia vaurioita hiiren kivesten histiosyyteille ja palauttaa kivesten spermatogeenisuuden toiminto.

Yhteenvetona voidaan todeta, että CTWE voi lievittää CTX:n aiheuttamaa kiveskudosvauriota hiirillä, korjata vaurioituneen kivesten kudosrakenteen ja palauttaa kivesten spermatogeenisen toiminnan. Mekanismi voi liittyä CTWE:n kykyyn lisätä antioksidanttientsyymiaktiivisuutta, säädellä Nrf2-signalointireittiin liittyvien antioksidanttisten stressitekijägeenien ilmentymistä ja vähentää apoptoottisen geenin Caspase3 ilmentymistä. Tämä artikkeli tutkii pääasiassa CTWE:n antioksidatiivista stressivauriota kivesten kudokseen, ja sen vaikutusmekanismista tarvitaan lisätutkimusta.

viite

［1］ Smolej L, Brychtová Y, Cmunt E, et al. Pieniannoksinen fludarabiini ja syklofosfamidi yhdistettynä rituksimabiin ensilinjan hoidossa iäkkäillä / rinnakkaisilla potilailla, joilla on krooninen lymfaattinen leukemia / pieni lymfosyyttinen lymfooma (CLL / SLL): Tšekin CLL-tutkimusryhmän Q-lite-projektin pitkän aikavälin tulokset. Br J Haematol, 2021, 193(4): 769-778．

［2］ Li Ruijun, Qin Yong, Zhou Yalin ym. Kikhernepeptidin vaikutus immuunipuutteisten hiirten immuunitoimintoihin. elintarviketiede, 2020, 41 (21): 133-139

［3］Liu Bo, Li Ye, Wu Qi et ai. Erxian Tangin vaikutus syklofosfamidi-indusoitujen oligospermiamallihiirten lisääntymistoimintoihin. Chinese Journal of Andrology, 2018, 24 (6): 547-552

［4］Lai Yongwei, Xi Yanli, Shao Minghai et ai. Myrica rubra -flavonoidien suojaava vaikutus syklofosfamidin aiheuttamaan lisääntymistoksisuuteen uroshiirillä. Terveystutkimus, 2020, 49 (5): 790 - 794

［5］Liu Jianguo, Zhao Hongle, Li Jiaojiao et ai. Bushen Huoxue -reseptin vaikutus syklofosfamidin indusoimaan hiiren kivesten siittiösolujen apoptoosiin. Chinese Journal of Andrology, 2020, 26 (9): 826-831

［6］Mi Zhaoyan, Zhang Yanan, Hua Rui et ai. Resveratrolin suojaava vaikutus syklofosfamidiin aiheutti oksidatiivisia vaurioita ihmisen siittiöissä. Journal of Modern Urology, 2021, 26 (4): 340-344

［7］Kansallinen farmakopeakomissio. Kiinan kansantasavallan farmakopea: osa 1. Peking: China Medical Science and Technology Press, heinäkuu 2022

［ 8 ］ Jia Suo Xue. Farmaseuttinen kemia. Peking: China Traditional Chinese Medicine Press, heinäkuu 2015

［9］Wang Ang. Materia Medican valmistus. Peking: China Traditional Chinese Medicine Press, 2009.121

［10］Zhi Yajing, Zhen Yaqin, Tian Wei et ai. Cistanche deserticolan kemiallisen koostumuksen ja farmakologisten vaikutusten tutkimus ja laatumerkkien (Q-Markers) ennusteanalyysi. Chinese Herbal Medicine, 2021, 52 (9): 2758-2767

［11］Wu Yan, Zhang Hong, Bu Ren, et ai. Tutkimus Cistanche deserticola -polysakkaridin suojaavasta vaikutuksesta D-neneneba-galaktoosin aiheuttamaan akuutin ikääntymisen malliin. Chinese Pharmacological Bulletin, 2017, 33 (7): 927-933

［12］ Wang NQ, Ji SZ, Zhang H, et al. Herba Cistanches: Anti-aging. Aging Dis, 2017, 8( 6): 740-759．

［13］Wang Xiaoming. Tutkimus Desert Cistanchen tehokkaista komponenteista ja vaikutusmekanismista fyysisen väsymyksen lievittämisessä (väitöskirja). Peking: Peking Union Medical College, 2019.{1}}

［14］Guo Qiaoli, Wu Zhibo, Zhou Yubi, et ai. Lanzhou Cistanche deserticolan polysakkaridien koostumusanalyysi ja antioksidanttiaktiivisuus. Elintarviketeollisuustekniikka, 2021, 42 (15): 96-103

［15］Yang Xiumei, Yang Yu, Wang Danyang et ai. Cistanche deserticolan etanoliuute Xinjiangissa säätelee DC:iden kypsymisen immuunivastetta vahvistavaa vaikutusta Th1/Th2:een hiirillä. Journal of Animal Husbandry and Veterinary Medicine, 2021, 52 (3): 820-830

［16］Wang Jingkang, Wang Lichao, Jiang Yong ym. Tutkimus Cistanche deserticolan alkoholiuutteen suojaavasta vaikutuksesta ja mekanismista hypoksian/hypoglykemian reperfuusion aiheuttamiin hermosoluvaurioihin. Chinese Journal of Traditional Chinese Medicine, 2019, 44 (13): 2686-2690

［17］Cai Kerui, Liu Zhixin, Sun Xiaodong et ai. Cistanche deserticola -polysakkaridin suojaava vaikutus ja mekanismi D-neneneba-galaktoosin indusoimien aivojen hermosoluissa ikääntyvillä hiirillä. Chinese Journal of Gerontology, 2018, 38 (19): 4732-4734

［18］Wang Qixin, Chen Zehua, Luo Hujie et ai. Cistanche deserticolan eri uutteiden vaikutus seksuaalisen kyvyn parantamiseen rotilla, joilla on munuaisyangin puutos. Chinese Journal of Experimental Prescriptions, 2018, 24 (22): 95-101

［19］ Li J, Huang D, He LQ. Ｒoucongrongin (Herba Cistanch es Deserticolae) vaikutus Leigongtengin (Ｒadix etＲhizoma Tripterygii) glykosidin aiheuttamaan lisääntymistoksisuuteen hiirillä. J Tradit Chin Med, 2014, 34(3): 324-328．

［20］Wang Dejun, Sheng Shuqing, Liang Hong. Cistanche deserticolan vaikutus hiiren kivesten ja epididymiksen morfologiaan ja histokemiaan. Anatomical Research, 2000, 22 (2): 101-103158

［21］Zhao Donghai, Zhang Lei, Zhang Yan, et ai. Cistanche deserticolasta peräisin olevien fenyylietanoliglykosidien terapeuttinen vaikutus ja mekanismi syklofosfamidin aiheuttamiin spermatogeenisiin häiriöihin hiirillä. Journal of Jilin University (Medical Edition), 2014, 40 (3): 612-615

［22］Li Y, Peng Y, Wang MY jne. Ihmisen maha-suolikanavan aineenvaihdunta vesiuutteesta in vitro: Aineenvaihduntaprofiilin selvittäminen, joka perustuu kattavaan aineenvaihduntatuotteiden tunnistamiseen mahanesteessä, suolistomehussa, ihmisen suoliston bakteereissa ja suoliston mikrosomeissa. J Agricult Food Chemist, 2017, 65( 34): 7447-7456．

［23］Xu Shanshan, Wu Kangyu, Tu Xingming. Ekinasetiinin määritys Cistanche deserticolan vesiuutteesta HPLC:llä. Uusi kiinalainen lääketiede ja kliininen farmakologia, 2019, 30 (5): 598-601

［24］Jiang Ping, Xu Qinghong, Chen Cunwu et ai. Jingui Shenqi Wanin vaikutus Nrf2-signalointireitin geenien ilmentymiseen hiirten kiveskudoksessa, joilla on syklofosfamidi-indusoitu kivesvaurio. Chinese Journal of Andrology, 2020, 26 (2): 160-166

［25］Ma Chaoyang, Zhu Lijuan, Luo Chenxi, et ai. Betuliinihapon suojaava vaikutus syklofosfamidin aiheuttamaan maksavaurioon hiirillä. elintarviketiede, 2020, 41 (21): 147-153

［26］Hai Zhuo, Xiong Xianrong, Ma Hongcheng, et ai. Sisäisten vertailugeenien seulonta hiiren kivesten kvantitatiivista fluoresenssi-PCR-analyysiä varten. Journal of Southwest University for Nationalities (Natural Science Edition), 2020, 46 (5): 448-456

［27］ Guo XB, Zhai JW, Xia H, et al. Luuytimen mesenkymaalisten kantasoluista peräisin olevien eksosomien suojaava vaikutus syklofosfamidin lisääntymistoksisuutta vastaan ​​liittyy p38MAPK/EＲK- ja AKT-signalointireitteihin. Asian J Androl, 2021, 23(4): 386-391．

［28］ Liu M, Li H, Zhang L, et al. Puuvillansiemenöljy lievittää iskeemisen aivohalvauksen aiheuttamaa oksidatiivista stressivauriota aktivoimalla Nrf2-signaalireitin. Mol Neurobiol, 2021, 58(6): 2494-2507．

［29］ Yang Y, Wu ZZ, Cheng YL ym. Ｒesveratroli suojaa verkkokalvon pigmenttiepiteelisolujen oksidatiiviselta vauriolta moduloimalla SOD/MDA-aktiivisuutta ja aktivoimalla Bcl-2-ekspressiota. Eur Ｒev Med Pharmacol Sci, 2019, 23( 1): 378-388．

［30］Ma Xiaoqing, Wang Jie, Hu Junping et ai. Farmakodynaaminen tutkimus Cistanche deserticolasta peräisin olevan fenyylietanolin kokonaisglykosideista gentamysiinin aiheuttamalla akuutilla munuaisvauriolla rotilla. Journal of Xinjiang Medical University, 2020, 43 (7): 942-946950

［31］ Huang Y, Yang Y, Xu Y ym. Nrf2 /HO-1 -akseli säätelee mahasyövän angiogeneesiä kohdentamalla VEGF:ää. Cancer Manager Ｒes, 2021, 13( 1): 3155-3169．

［32］ Zhao Y, Wang Y, Zhang M, et al. Ginsenosidien ( 20Ｒ) -Ｒg3 suojaavat vaikutukset H 2O 2-indusoituun sydänlihassoluvaurioon aktivoimalla Keap-1 /Nrf2 /HO-1 signaalireitin. Chemist Biodiver, 2021, 18(4): e2001007.

［33］ Le X, Ping L, Gu Y ym. Kalmarimusteen polysakkaridi vähentää syklofosfamidin aiheuttamaa kivesvauriota Nrf2 /AＲE-aktivaatioreitin kautta hiirillä. Iranian J Basic Med Sci, 2015, 18(8): 827-831．