Cistanche Deserticola -uute lisää luun muodostumista osteoblasteissa{0}}Osa I
Mar 15, 2022
Ottaa yhteyttä:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791
Te-Mao Liaet a
Abstrakti
Tavoitteet Tutkimme vaikutustaCistanchedeserticolaMa. (CD) päälläluutamuodostusviljellyillä osteoblasteilla. Menetelmät Mineralisoituneiden kyhmyjen muodostumismääritystä käytettiin CD:n in vitro -vaikutusten tutkimiseen(Cistanchedeserticola)päälläluutamuodostus. Alkalinen fosfataasi (ALP), luun morfogeneettiset proteiinit (BMP)-2 ja osteopontiinin (OPN) mRNA:n ilmentyminen analysoitiin kvantitatiivisella reaaliaikaisella polymeraasiketjureaktiolla. CD:n vaikutusmekanismi(Cistanchedeserticola)uutetta tutkittiin Western blot -menetelmällä. CD:n osteoporoosia estävä vaikutus in vivo(Cistanchedeserticola)uutetta arvioitiin hiirillä, joilta oli poistettu munasarjat.
Avainlöydökset
CD(Cistanchedeserticola)uutteella ei ollut vaikutusta viljeltyjen osteoblastien lisääntymiseen, migraatioon tai haavan paranemiseen, mutta se lisäsi ALP:n, BMP:n-2 ja OPN:n mRNA:ta ja luun mineralisaatiota. Mitogeenilla aktivoitu proteiinikinaasi (MAPK) tai ydintekijä (NF) -kB:n estäjät vähensivät CD:tä(Cistanchedeserticola)uutteen aiheuttamaluun muodostuminenja ALP-, BMP-2- ja OPN-lauseke. Kuitenkin CD(Cistanchedeserticola)uute ei vaikuttanut osteoklastogeneesiin. Lisäksi CD(Cistanchedeserticola)uute esti munasarjojen poiston aiheuttaman luukadon in vivo.
Johtopäätökset
CD(Cistanchedeserticola)voi olla romaaniluun muodostuminenaine osteoporoosin hoitoon.
Avainsanatluun muodostuminen; Cistanchedeserticola; Kiinan yrtti; osteoblastit
Cistanche deserticolaon hyväluun muodostuminen
Johdanto
Luu on monimutkainen kudos, joka koostuu useista solutyypeistä, jotka käyvät läpi jatkuvan uusiutumis- ja korjausprosessin, jota kutsutaan "luun uudelleenmuodostumiseksi". Kaksi pääasiallista luun uusiutumisesta vastuussa olevaa solutyyppiä ovat osteoklastit, jotka resorboivat luuta, ja osteoblastit, jotka muodostavat uutta luuta. Luuston uusiutumista säätelevät useat systeemiset hormonit (esim. lisäkilpirauhashormoni, 1, 25-dihydroksi-D3-vitamiini, sukupuolihormonit ja kalsitoniini) ja paikalliset tekijät (esim. typpioksidi, prostaglandiinit, kasvutekijät ja sytokiinit).[1] Osteoporoosi syntyy, kun luun resorptio ja muodostuminen ovat koordinoimattomia ja liiallinen luun hajoaminen ylittää luun rakentamisen.[2] Nykyisiä osteoporoosin hoitoja ovat bisfosfonaatit, kalsitoniini ja estrogeeni, jotka ovat luun resorption estäjiä, jotka ylläpitävät luumassaa estämällä osteoklastien toimintaa.[3] Näiden lääkkeiden vaikutus luumassan lisäämiseen tai palautumiseen on kuitenkin suhteellisen pieni, ei varmasti enempää kuin 2 prosenttia vuodessa.[3] Siksi tarvitaan luustoa rakentavia aineita, kuten teriparatidia, jotka stimuloivat uusialuutamuodostusja korjata trabekulaarisen mikroarkkitehtuurin muutos, joka on tyypillistä vakiintuneelle osteoporoosille.[4,5] Koska uusiluutamuodostuson ensisijaisesti osteoblastin toiminto, ja aineet, jotka vaikuttavat joko lisäämällä osteoblastisten solujen proliferaatiota tai indusoimalla osteoblastien erilaistumista, voivat edistää luun muodostumista.[5,6]
Vaikka osteoporoosin mekanismit ovat edelleen epäselviä, ne liittyvät todennäköisesti luun kasvutekijöiden, kuten luun morfogeneettisten proteiinien (BMP:iden), saatavuuden vähenemiseen tai vaikutuksiin.[7] BMP:t, jotka liittyvät rakenteellisesti transformoivaan kasvutekijä-b-superperheeseen, tunnistettiin alun perin niiden kyvystä indusoida kohdunulkoisialuuta muodostusjyrsijöissä.[8] BMP:llä on tärkeä rooliluutamuodostusja luusolujen erilaistuminen stimuloimalla alkalisen fosfataasin (ALP) aktiivisuutta sekä proteoglykaanin, kollageenin ja osteopontiinin (OPN) synteesiä.[9] Äskettäisessä tutkimuksessa havaittiin yhteys osteoporoosin ja tiettyjen BMP-2-, ALP- ja OPN-geenien polymorfismien välillä, mikä viittaa siihen, että ne liittyvät osteoporoosin kehittymiseen.[10]
CistanchedeserticolaMa. (Orobanchaceae; lyhennettynä CD)(Cistanchedeserticola)on Kiinassa kotoisin oleva yrtti, ja sitä käytetään laajasti perinteisessä lääketieteessä terapeuttisena aineena sen rauhoittavien, kipua lievittävien ja immunostimuloivien ominaisuuksiensa vuoksi.[11] Nykyaikaiset farmakologiset tutkimukset ovat osoittaneet, että CD(Cistanchedeserticola)uutteet voivat stimuloida immuniteettia,[12] poistaa vapaita radikaaleja[13] ja lisätä superoksididismutaasin aktiivisuutta[14]. Anti-inflammatorisilla ja antioksidanttisilla aineilla on potentiaalia hoitaa osteoporoosia lisäämälläluuta muodostusja/tai luun resorption tukahduttaminen.[15,16] Kuitenkin CD:n vaikutus(Cistanchedeserticola)luusolujen toimintaan ei ole vielä määritetty. Tässä ilmoitamme CD:n(Cistanchedeserticola)uute ei vaikuttanut viljeltyjen osteoblastien lisääntymiseen, kulkeutumiseen tai haavan paranemisaktiivisuuteen, mutta lisäsi ALP:n, BMP:n-2 ja OPN:n ilmentymistä ja luun mineralisaatiota. Lisäksi osoitamme, että mitogeenin aktivoima proteiinikinaasi (MAPK) ja ydintekijä (NF) -kB-signalointireitit voivat olla osallisena CD-välitteisessä geeniekspression ja luun mineralisaatiossa. Sitä vastoin CD(Cistanchedeserticola)uute ei suppressoi osteoklastogeneesiä in vitro. Erityisesti CD-hiirten hoito(Cistanchedeserticola)uute esti munasarjojen poiston aiheuttaman luukadon in vivo. Näin ollen tietomme viittaavat siihen, että CD(Cistanchedeserticola)voidaan käyttää stimuloimaanluutamuodostusosteoporoosin hoitoon.
Cistanche deserticolalisää vastustuskykyä
Materiaalit ja menetelmät
Cistanche deserticola -uute ja materiaalit
CD(Cistanchedeserticola)uute ostettiin Chuang Song-Zong Pharmaceutical Companylta (Kaohsiung, Taiwan). CD-levyn purkaminen ja eristäminen(Cistanchedeserticola)seurattiin aiemmin kuvatulla tavalla (spektritietojen perusteella he ovat tunnistaneet kemiallisen koostumuksen, mukaan lukien beeta-sitosteroli, daukosteroli, meripihkahappo, triakontanoli, akteosidi, betaiini ja polysakkaridi).[17] Kanin polyklonaaliset vasta-aineet, jotka ovat spesifisiä p-ekstrasellulaarisille signaalisäädellyille kinaaseille (ERK), ERK, p-p38, p38, pc-Jun N-terminaalisille kinaaseille (JNK), JNK, p-p65 ja p65, ostettiin Santa Cruz Biotechnologylta ( Santa Cruz, Yhdysvallat). Osteokalsiini ELISA -pakkaus ostettiin Biosource Technologylta (Nivelles, Belgia). Tyypin I kollageenin ELISA-sarjan C-terminaaliset telopeptidit saatiin Cross Lapsilta (Herlev, Tanska). Dominantti-negatiivisen p38-mutantin toimitti tohtori J. Han (South-Western Medical Center, Dallas, USA). JNK-dominantti-negatiivisen mutantin toimitti tohtori M. Karin (University of California, San Diego, USA). ERK2-dominantti-negatiivisen mutantin toimitti tohtori M. Cobb (South-Western Medical Center). Kaikki muut reagenssit hankittiin Sigma-Aldrichilta (St Louis, USA).
Soluviljely
Hiiren osteoblastisolulinja MC3T3-E1 ostettiin American Type Culture Collectionilta (ATCC; Rockville, USA). Soluja viljeltiin 95 prosentissa ilmassa, 5 prosentissa CO2:ssa a-MEM:llä, jota oli täydennetty 20 mm HEPES:llä ja 10 prosentilla lämpöinaktivoitua vasikan sikiön seerumia, 2 mm-glutamiinia, penisilliiniä (100 U/ml) ja streptomysiiniä (100 mg) /ml).
Mineralisoituneiden kyhmyjen muodostumisen mittaus
Mineralisoituneiden kyhmyjen muodostuminen arvioitiin kuvatulla tavalla.[18] Lyhyesti sanottuna osteoblasteja viljeltiin väliaineessa, joka sisälsi C-vitamiinia (50 mg/ml) ja b-glyserofosfaattia (10 mm) kahden viikon ajan, ja alusta vaihdettiin joka kolmas päivä. CD:n kanssa inkuboinnin jälkeen(Cistanchedeserticola)uutetta 12 päivää, solut pestiin kahdesti 20 mm Tris-puskuroidulla suolaliuoksella, joka sisälsi 0,15 m NaCl:a (pH 7,4), kiinnitettiin jääkylmässä 75-prosenttisessa (v/v) etanolissa 30 minuutin ajan ja ilma- kuivattu. Kalsiumin kerrostuminen määritettiin käyttämällä alitsariinipuna-S-värjäystä. Lyhyesti sanottuna etanoliin kiinnitetyt solut ja matriisi värjättiin 1 tunnin ajan 40 mm alitsariinipuna-S:llä (pH 4,2) ja huuhdeltiin perusteellisesti vedellä. Sitoutunut tahra eluoitiin 10 prosentilla (paino/tilavuus) setyylipyridiniumkloridia, ja näytteissä oleva alitsariinipuna-S kvantifioitiin mittaamalla absorbanssi 550 nm:ssä ja verrattiin standardikäyrään. Yksi mooli alitsariinipuna-S:ää sitoo selektiivisesti noin kaksi moolia kalsiumia.
Cistanche deserticolaon hyväluun muodostuminen
Kvantitatiivinen reaaliaikainen polymeraasiketjureaktio
Kokonais-RNA uutettiin osteoblasteista käyttämällä TRIzol-sarjaa (MDBio Inc., Taipei, Taiwan). Käänteistranskriptio suoritettiin käyttämällä 2 mg kokonais-RNA:ta ja oligo(dT)-aluketta.[19,20] Kvantitatiivinen reaaliaikainen polymeraasiketjureaktio (qPCR) suoritettiin käyttämällä TaqMan® yksivaiheista PCR Master Mixiä (Applied Biosystems, Carlsbad, USA). Kokonais-cDNA lisättiin (100 ng per 25- ml reaktiota) sekvenssispesifisten alukkeiden ja Taqman®-koettimien kanssa. Kaikki kohdegeenialukkeet ja -koettimet ostettiin kaupallisesti, mukaan lukien b-aktiini sisäisenä kontrollina (Applied Biosystems). qPCR-määritykset suoritettiin kolmena rinnakkaisena StepOnePlus-sekvenssin havaitsemisjärjestelmässä (Applied Biosystems). Jakso-olosuhteet olivat 10-min polymeraasiaktivaatio 95 asteessa, mitä seurasi 40 sykliä 95 astetta 15 s ja 60 astetta 60 s. Kynnys asetettiin ei-templaattikontrollitaustan yläpuolelle ja kohdegeenin monistumisen lineaarisen vaiheen sisällä sen syklin numeron laskemiseksi, jossa transkripti havaittiin (merkitty CT:ksi).
Western blot -analyysi
Solulysaatit valmistettiin aiemmin kuvatulla tavalla.[21,22] Proteiinit erotettiin SDS-PAGE:lla ja siirrettiin Immobilon-polyvinyylidifluoridikalvoille (Millipore, Billerica, USA). Blotit blokattiin 4-prosenttisella naudan seerumialbumiinilla 1 tunnin ajan huoneenlämmössä ja sitten tutkittiin kanin anti-ihmisvasta-aineilla p-65:tä tai p-p65:tä (1:1000) vastaan 1 tunnin ajan huoneenlämpötilassa. Kolmen pesun jälkeen blotteja inkuboitiin peroksidaasilla konjugoidun aasin anti-kanin sekundaarivasta-aineen (1:1000) kanssa 1 tunti huoneenlämpötilassa. Blotit visualisoitiin tehostetulla kemiluminesenssilla käyttämällä X-OMAT LS -kalvoa (Eastman Kodak, Rochester, USA).
Munasarjan poiston aiheuttama osteoporoosi
Tässä tutkimuksessa käytettiin naaraspuolisia ICR-hiiriä, neljä viikkoa vanhoja, 22-28 g. Hiiriltä poistettiin munasarjat molemmin puolin triklooriasetaldehydi-anestesiassa (100 mg/kg) ja vertailuhiiriltä tehtiin valeleikkaus (Sham). Luun mineraalitiheys ja luun mineraalipitoisuus mitattiin erilaisten CD-pitoisuuksien oraalisen antamisen jälkeen(Cistanchedeserticola)uutetaan joka toinen päivä neljän viikon ajan. Koko kehon luun mineraalitiheys ja luun mineraalipitoisuus määritettiin kaksoisenergiaröntgenabsorptiometrillä (DEXA; XR-26; Norland, Fort Atkinson, USA) käyttämällä pienten koehenkilöiden tilaa, kuten aiemmin on kuvattu.[18, 23] Kaikki protokollat olivat institutionaalisten ohjeiden mukaisia, ja Kiinan lääketieteellisen yliopiston eläintenhoitokomitea hyväksyi ne.
Tilastollinen analyysi
Tilastollinen analyysi suoritettiin Prism 4.{4}}1-ohjelmistolla. (GraphPad Software Inc., San Diego, USA). Annetut arvot ovat keskimääräisiä SEM. Tilastollinen analyysi kahden näytteen välillä suoritettiin Studentin t-testillä. Useamman kuin kahden ryhmän tilastolliset vertailut suoritettiin käyttämällä yksisuuntaista varianssianalyysiä Bonferronin posthoc-testin kanssa. Kaikissa tapauksissa P < 0,05="" katsottiin="">
Cistanche deserticolaon hyväluun muodostuminen
Tulokset
Cistanche deserticolauute lisää luun mineralisaatiota osteoblastien vaikutuksesta CD:n lisääminen(Cistanchedeserticola)Uute 24 tai 48 tunnin ajan ei vaikuttanut hiiren osteoblasti-MC3T3-E1-solujen proliferaatioon MTT-määrityksessä (tietoja ei esitetty). Koska osteoblastien erilaistuminen on monimutkainen prosessi, johon liittyy solujen lisääntymistä ja migraatiota, testasimme myös MC3T3-E1-solujen migraatiokykyä CD-hoidon jälkeen.(Cistanchedeserticola)ottaa talteen. Käyttämällä Transwellia ja haavan paranemismäärityksiä löysimme tämän CD:n(Cistanchedeserticola)uute ei vaikuttanut osteoblastien migraatioon (tietoja ei ole esitetty). Mineralisoituneiden kyhmyjen muodostuminen on yksi osteoblastien kypsymisen merkkiaineista. Alizariinipunainen S-värjäys osoitti, että mineralisoituneita kyhmyjä muodostui, kun osteoblasteja viljeltiin kahden viikon ajan C-vitamiinia (50 ug/ml) ja -glyserofosfaattia (10 mm) sisältävässä elatusaineessa, konsentraatiosta riippuvaisella tavalla lisäämällä CD:tä.(Cistanchedeserticola)(Kuva 1a). Siksi CD(Cistanchedeserticola)viljeltyjen osteoblastien aiheuttama luun kyhmyjen muodostuminen, mutta ei niiden lisääntyminen tai migraatio. Tutkimme myös CD:n roolia(Cistanchedeserticola)uutetta RANKL:n aiheuttamassa osteoklastogeneesissä, mutta ei havaittu vaikutusta (tietoja ei ole esitetty).
Cistanche deserticola -uute lisää alkalista fosfataasia, luun morfogeneettistä proteiinia-2 ja osteopontiinin ilmentymistä viljellyissä osteoblasteissa
Erilaistuneilla osteoblasteilla on kohonnut ALP-aktiivisuus, mikä korreloi entsyymien ilmentymisen korkeiden tasojen kanssa.[18] Löysimme sen hoidon CD:llä(Cistanchedeserticola)Uute 72 tunnin ajan lisäsi merkittävästi osteoblastien ALP-aktiivisuutta (kuvio 1b). Koska BMP-2, ALP ja OPN ovat ratkaisevassa asemassa osteoblastien erilaistumisessa, testasimme, onko CD(Cistanchedeserticola)uute vaikuttaa osteoblastien erilaistumiseen säätelemällä BMP{0}}-, ALP- ja OPN-ilmentymistä. Solujen hoito CD:llä(Cistanchedeserticola)uutteet lisäsivät ALP:n, BMP-2:n ja OPN:n mRNA-ilmentymistä pitoisuudesta riippuvaisella tavalla (kuva 1c), mikä osoittaa, että CD(Cistanchedeserticola)uute indusoi osteoblastien erilaistumista lisäämällä ALP-, BMP-2- ja OPN-ekspressiota.
Cistanche deserticola -uute lisää luun kyhmyjen muodostumista mitogeenin aktivoiman proteiinikinaasireitin kautta
On raportoitu, että MAPK:lla on tärkeä rooliluutamuodostus[24,25] joten tutkimme seuraavaksi, liittyykö tämä signalointireitti CD:hen(Cistanchedeserticola)uutteen aiheuttama luun mineralisaatio. Solujen esikäsittely ERK-estäjillä U0126, p38-estäjillä SB203580 tai JNK-inhibiittorilla SP600125 vähensi CD:tä(Cistanchedeserticola)uutteen lisääntynyt luun mineralisaatio (kuvat 2a, 3a ja 4a). Lisäksi estäjät estivät myös CD:n(Cistanchedeserticola)uutteen aiheuttama ALP-, BMP-2- ja OPN-ekspressio (kuvat 2b–4c). Solujen transfektio ERK2-, p38- tai JNK-mutantilla vähensi CD:tä(Cistanchedeserticola)uute-lisäys ALP-, BMP-2- ja OPN-mRNA-ilmentymisessä (kuvat 2c, 3c ja 4c). Seuraavaksi tutkimme suoraan ERK-, p38- ja JNK-aktivaatiota CD:n jälkeen(Cistanchedeserticola)uutteen käsittely. Solujen inkubointi CD:n kanssa(Cistanchedeserticola)uute indusoi ERK:n, p38:n ja JNK:n fosforylaation (kuviot 2d, 3d ja 4d). Siksi ERK, p38 ja JNK välittävät lisääntymistäluutamuodostusCD:n aiheuttama(Cistanchedeserticola)osteoblastien hoitoon.
Cistanche deserticola -uute lisää luun kyhmyjen muodostumista ydintekijä-kB-reitin kautta
Kuten aiemmin mainittiin, NF-kB:n aktivointi on tarpeenluutamuodostus[26,27] Seuraavaksi käsitimme osteoblasteja NF-kB:n estäjillä pyrrolidiiniditiokarbamaatilla (PDTC) ja N-tosyyli-L-fenyylialaniinin kloorimetyyliketonilla (TPCK) ostettiin Calbiochemilta (Darmstadt, Saksa) määrittääksemme, onko NF-kB:n aktivaatio. mukana CD:ssä(Cistanchedeserticola)uutteen aiheuttama luun mineralisaatio. Kuvio 5a osoittaa, että osteoblastien esikäsittely PDTC:llä tai TPCK:lla esti CD:tä(Cistanchedeserticola)uutteen aiheuttama luun kyhmyjen muodostuminen ja vähensi myös ALP-, BMP-2- ja OPN-ekspression lisääntymistä (kuvat 5b ja 5c). NF-kB p65 -alayksikön fosforylaatio on NF-kB:n aktivaation indikaattori; [28] tämän mukaisesti havaitsimme, että CD(Cistanchedeserticola)uute lisäsi p65-fosforylaatiota osteoblasteissa (kuvio 5d). Nämä tulokset osoittivat, että NF-kB:n aktivaatio on tärkeää CD-uutteen aiheuttaman ALP:n, BMP-2:n ja OPN:n ilmentymiselle ja luun kyhmyjen muodostumiselle.
Kuvio 4 c-Jun N-terminaalisten kinaasien (JNK) osallisuus inCistanchedeserticola(CD) uutteen aiheuttama luun mineralisaatio osteoblasteissa. (a) Solut maljattiin 24-kuoppalevyille ja viljeltiin elatusaineessa, joka sisälsi C-vitamiinia (50 mg/ml) ja b-glyserofosfaattia (10 mM) kahden viikon ajan. Soluja käsiteltiin samanaikaisesti CD:llä(Cistanchedeserticola)uute (26 mg/ml) plus SP600125 (3 mM). Mineralisoituneiden kyhmyjen muodostuminen arvioitiin alitsariinipuna-S-värjäyksellä (n=5). (b, c) Solut esikäsiteltiin SP600125:llä 30 minuuttia tai transfektoitiin JNK-mutantilla tai 24 tuntia, mitä seurasi stimulaatio CD-uutteella ja alkalisen fosfataasin (ALP) aktiivisuudella ja ALP:llä, luun morfogeneettisellä proteiinilla (BMP)-2 ja osteopontiinin (OPN) mRNA:n ilmentyminen mitattiin ALP-kitillä ja kvantitatiivisella reaaliaikaisella polymeraasiketjureaktiolla. (d) Soluja käsiteltiin CD-uutteella ilmoitetuin aikavälein, ja p-JNK:n ilmentyminen tutkittiin Western blot -menetelmällä. *P< 0.05,="" compared="" with="" control="" group;="">< 0.05,="" compared="" with="" cd="">(Cistanchedeserticola)uutteella käsitelty ryhmä.
Luukadon estäminen Cistanche deserticola -uutteella hiirillä, joilta on poistettu munasarjat
Tarkastellaan CD:n vaikutusta(Cistanchedeserticola)luukadon yhteydessä osteoporoosi aiheutettiin naarashiirillä munasarjojen poistolla. Kuten odotettiin, hiirillä, joilta oli poistettu munasarjat, oli vähentynyt kehon luun mineraalitiheys ja luun mineraalipitoisuus (kuvio 6a ja 6b). Hoito CD:llä(Cistanchedeserticola)Uute neljän viikon ajan esti luun mineraalitiheyden ja luun mineraalipitoisuuden menetystä annoksesta riippuvaisella tavalla (kuvio 6a ja 6b). ALP-pitoisuudet veressä voivat heijastaa osteoblastista aktiivisuutta.[29] Kuten kuvassa 6c, CD(Cistanchedeserticola)uute esti munasarjojen poiston aiheuttamaa seerumin ALP-aktiivisuuden vähenemistä. Lisäksi CD(Cistanchedeserticola)uute lisäsi myös osteokalsiinin tasoa, joka on merkkiaineluutamuodostusja alensi tyypin I kollageenin, luun resorption merkkiaineen, C-terminaalisten telopeptidien tasoa (kuvio 6d ja 6e). Nämä havainnot tukevat siis CD:n tehoa ja tehoa(Cistanchedeserticola)Uute luukadon estämisessä in vivo.
Kuva 6 Munasarjan poiston esto aiheutti luun mineraalitiheyden ja luun mineraalipitoisuuden laskunCistanchedeserticola(CD) ote. Naaraspuolisille ICR-hiirille tehtiin valeleikkaus tai niiltä poistettiin munasarjat. Hiiriä, joilta oli poistettu munasarjat, käsiteltiin osoitetuilla CD-pitoisuuksilla(Cistanchedeserticola)uutetta suun kautta. Koko kehon luun mineraalitiheys (a), luun mineraalitiheys (b), seerumin alkalisen fosfataasin (ALP) aktiivisuus (c), seerumin osteokalsiini (d) ja seerumin tyypin I kollageenin C-terminaaliset telopeptidit (e) määritettiin neljällä viikkoa leikkauksen jälkeen. Tiedot esitetään keskimääräisinä SE, n=8–10 hiirtä/ryhmä. *P < 0,05,="" verrattuna="" huijaukseen;="" #p="">< 0,05="" verrattuna="" ryhmään,="" joilta="" on="" poistettu="">
KESKUSTELU
Napsauta tätä saadaksesi lisätietoja tämän artikkelin osasta II (Keskustelu ja johtopäätökset).
Lähettäjä:'Cistanchedeserticolauute kasvaaluutamuodostusosteoblasteissaTe-Mao Liaet ai
---© 2012 Tekijät. JPP © 2012 Royal Pharmaceutical Society 2012Journal of Pharmacy and Pharmacology, 64, s. 897–907
