Cistanche Tubulosa suojaa dopaminergisiä neuroneja säätelemällä apoptoosia ja gliasoluista peräisin olevaa neurotrofista tekijää: in vivo ja in vitro-Ⅱ

Käyttäytymistestit

Uintitesti (Zhu et al., 2014)

Kehon liikkeiden koordinaatiota hiirillä mitattiin uintitestillä. Hiiret asetettiin yksittäin vesisäiliöön (korkeus 25 cm ja halkaisija 10 cm), joka sisälsi 10 cm vettä ja testattiin hiljaisessa ympäristössä niiden paikallaan pysymisen keston kirjaamiseksi 5 minuutin ajan.

Avoin kenttätesti (Kawai et al., 1998)

Lokomotorinen aktiivisuus mitattiin avoimen kentän testillä. Hiiret testattiin hiljaisessa ja heikosti valaistussa ympäristössä ja asetettiin yksitellen 30 cm × 30 cm × 15 cm läpinäkyvään akryyliastiaan, jonka pohjassa oli 6 cm × 6 cm:n erotusristikko. Hiirille annettiin 10 minuuttia sopeutua ympäristöön, ja sitten yksittäisten hiirten ruudukon lukumäärä ja kasvatustiheys mitattiin viisi kertaa peräkkäin keskiarvojen saamiseksi.

LUONNOLLINEN CISTANCHE TUBULOSA SEKSUAALITOIMINNON PARANTAMISEEN PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Aivokudosnäytteenotto

Ennen kudosnäytteiden ottamista hiirille annettiin ad libitum vapaa pääsy veteen ja niille annettiin lääkehoitoa 14 peräkkäisen päivän ajan. Neljä hiirtä kustakin ryhmästä valittiin ja ne mestattiin nopeasti. Jokaisen eläimen SN (Bregma: -2,75 mm -2,92 mm) eristettiin ja asetettiin jäälle. Aivokudokset huuhdeltiin 0,9-prosenttisella jääkylmällä natriumkloridiliuoksella veren poistamiseksi ja kuivattiin suodatinpaperilla ennen varastointia -80 °C:ssa. Neljä hiirtä kustakin ryhmästä nukutettiin intraperitoneaalisesti ja niiden rintakehä avattiin. Infuusioneula työnnettiin sitten kunkin eläimen vasempaan kammioon. Veren poistamiseksi verenkiertoelimistöstä leikattiin oikean eteisen lisäosa ja eläimeen infusoitiin 4 ◦C:n normaalia suolaliuosta, kunnes maksa muuttui vaaleaksi peräkkäisen perfuusion varmistamiseksi. Kun oikean eteisen ulosvirtaus tuli selväksi, jokainen eläin perfusoitiin 4-prosenttisella paraformaldehydikiinnitysaineella. Perfuusion jälkeen kunkin eläimen aivokudos leikattiin sitten huolellisesti ja jälkikiinnitettiin 4-prosenttisessa paraformaldehydissä 24 tunnin ajan. Kiinteät aivokudokset huuhdeltiin sitten juoksevan veden alla, kuivattiin asteittain etanoliliuosten sarjassa ja kirkastettiin ksyleeniliuoksessa. Tätä seurasi parafiiniupotus ja upottaminen.

Muutokset DA-määrässä mitattuna HPLC:llä

Jokaisen ryhmän nanojauhettu SN laitettiin jäähauteeseen, joka sisälsi 0,9 % natriumkloridiliuosta (suhde 1:9). Aivokudos homogenisoitiin käyttämällä ultraäänisoluhajotinta ja sentrifugoitiin nopeudella 1200 rpm 20 minuuttia 4 °C:ssa supernatantin saamiseksi. HPLC:tä varten käytettiin Hypersil AA-ODS -kolonnia (2,1 mm × 200 mm, 5 um) 30 °C:n kolonnin lämpötilassa. Fluoresenssidetektio suoritettiin aallonpituudella 280 nm λex ja 340 nm λem. Injektiotilavuus oli 10 ui.

TH:n, GDNF:n, GFR 1:n ja Ret:n ilmentyminen havaittu immunohistokemialla

Jokaisesta eläimestä eristettiin yksittäisen aivokudoksen parafiinileikkeitä (5 µm) ja asetettiin 40◦C lämpimään vesihauteeseen tasoittamiseksi ja kiinnittämiseksi lasilevyihin. Kaikkia kudoslevyjä inkuboitiin 60 ◦C uunissa 3–6 tuntia, mitä seurasi ksyleenin vahanpoisto, etanoligradienttikuivaus ja antigeenin talteenotto inkuboimalla sitruunahappopuskurissa ja kuumentamalla mikroaaltouunissa 20 minuuttia. Kudoslevyjä inkuboitiin sitten 3-prosenttisessa H202-liuoksessa huoneenlämpötilassa 10 minuuttia. Kun kudoslevyjä oli pesty kolme kertaa PBS:ssä, niitä inkuboitiin normaalin seerumin kanssa suljetussa kammiossa huoneenlämpötilassa 20 minuuttia. Immunohistokemiallinen värjäys suoritettiin valmistajan ohjeiden mukaisesti. Motic Med 6.0 -kuvaanalysaattoria käytettiin integroidun optisen tiheyden arvon laskemiseen positiivisesti värjäytyneissä soluissa.

Western blot -analyysi hiirten aivokudoksissa

Tässä tutkimuksessa arvioitiin tyrosiinihydroksylaasin (TH), GDNF:n, GFR 1:n, Retin, Bcl2:n ja Baxin proteiiniekspressiota. Kunkin ryhmän aivolysaattia homogenisoitiin 3{{10}} minuuttia jäillä, minkä jälkeen sentrifugoitiin matalassa lämpötilassa, 20, 000 rpm, 4 ◦C. 5 minuuttia supernatantin keräämiseen. Proteiininäytteet erotettiin vakiopaineessa käyttämällä 1 0 % SDS-PAGE-geeliä edellä kuvatulla tavalla. Ensisijainen vasta-ainepitoisuus: TH 0,15 mg/ml, GDNF 0,5 mg/ml, GFR 1 0,8 mg/ml, Ret 0,63 mg/ml, Bcl-2 0,34 mg/ml ja Bax 0,11 mg/ml. Toimenpide oli sama kuin edellä.

LUONNOLLINEN CISTANCHE TUBULOSA ANTI AGEING ANTI-ALZHEIMER PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Tilastollinen analyysi

Tässä tutkimuksessa käytettiin SPSS 20.0 -tilastoohjelmistoa tietojen käsittelyyn ja analysointiin. Parametrien arvot ilmaistiin keskiarvona ± standardipoikkeama (¯x ± S). ANOVAa käytettiin yksitekijätietoanalyysiin. Ryhmien vertailussa käytettiin LSD:tä tai Games-Howell-testiä. P< 0.05 (or P < 0.01) was considered as a statistically significant difference.

TULOKSET

C. tubulosa nanojauheen aktiiviset komponentit

200–400 nm:n pyyhkäisyalueella C. tubulosan ECH:ssa ja VER:ssä 330 nm:ssä oli maksimiabsorptiohuippu, joka ilmestyi 20 minuutissa. ICA:lla oli maksimiabsorptiopiikit 270 nm:ssä ja ne ilmestyivät 20 minuutin kuluttua (kuvio 1A). Tulokset osoittivat, että negatiiviset näytteet eivät häirinneet havaitsemista (kuva 1B). Näytteillä ja kontrollilla oli samat kromatografiset piikit ja negatiivisella näytteellä ei yhtään. Tämä osoitti, että näytteen muut ainesosat eivät häirinneet mitattavaa komponenttia. Lisäksi kolme komponenttia ja vierekkäiset piikit voivat saavuttaa erotuksen perusviivan ja erotusaste oli suurempi kuin 1,5.

C. tubulosa nanojauheella vähennetty MPP{0}}indusoitu sytotoksisuus MES23.5-soluissa

MES23.5-solujen elinkelpoisuus väheni merkittävästi MPP+:n pitoisuuksien kasvaessa. Kuvio 2F esittää MPP+:n eri pitoisuuksien merkittävän sytotoksisuuden.

C. tubulosa nanojauhe vähensi MPP{0}}indusoitua sytotoksisuutta ja lisäsi MES23.5-solujen elinkykyä. Kuva 2G osoittaa, että C. tubulosa-nanojauheen annokset 10–250 µg/ml aiheuttivat annoksesta riippuvaisia ​​suojaavia vaikutuksia MPP+--käsiteltyihin MES23.5-soluihin.

C. tubulosan nanojauheen sytomorfologinen vaikutus

Normaaleilla MES23.5-soluilla oli hyvä soluadheesio ja ne olivat karan muotoisia ja niissä oli selkeät solurajat ja synapsit. MPP+-vaurioituneet MES23.5-solut osoittivat huonoa soluadheesiota ja kutistumista, ja monet olivat suspendoituneet elatusaineeseen supistuneiden synapsien kanssa. Nämä solut aggregoituivat, kutistuvat ja pyöreitä, ja niiden sisällä oli tyhjiä, ja ytimet hajosivat tai romahtivat. C. tubulosa nanojauhe eri annoksina paransi MES23.5-solujen sytomorfologiaa eriasteisesti parantamalla soluadheesiota ja vehikkeliryhmän synaptista puhdistumaa. MES23.5-soluilla suuriannoksisen C. tubulosa -hoitoryhmän morfologia oli samanlainen kuin normaalilla kontrolliryhmällä (kuvat 2A–E).

C. tubulosa nanojauheen vaikutus TH:n ilmentymiseen ja apoptoosiin soluissa

Kuvio 3 esittää merkittävää vähenemistä TH-proteiinin ilmentymisessä vehikkeliryhmässä. TH-proteiinin ilmentyminen lisääntyi eri tavalla ryhmissä, joita käsiteltiin erilaisilla C. tubulosa -annoksilla. LSD-testi osoitti kuitenkin, että kolmen hoidetun ryhmän välillä ei ollut merkittävää eroa.

Kuvio 4 esittää tulokset apoptoosin arvioinnista käyttämällä virtaussytometriaa. Apoptoosin määrä vehikkeliryhmässä oli merkittävästi korkeampi kuin muissa ryhmissä. Solut, joita käsiteltiin eri annoksilla C. tubulosa nanojauhetta, osoittivat eriasteista apoptoottisen nopeuden laskua vehikkeliryhmään verrattuna. Keskimääräisen ja suuren annoksen C. tubulosa -hoitoryhmän soluilla oli merkittävin parannus apoptoottisessa nopeudessa verrattuna muihin C. tubulosa -hoitoryhmiin. LSD-testi osoitti, että kahden hoidetun ryhmän välillä ei ollut merkittävää eroa, mutta merkittävä ero myös pienen annoksen ryhmän välillä.

C. tubulosa nanojauheen vaikutus Bcl2/Bax-proteiinin ilmentymiseen soluissa

Kuvio 5 osoittaa, että Bcl2-proteiinin ilmentyminen vehikkeliryhmän soluissa oli merkittävästi alhaisempi verrattuna normaaliin kontrolliryhmään. Sitä vastoin Bax-proteiinin ilmentyminen vehikkeliryhmän soluissa oli merkittävästi korkeampi kuin normaalissa kontrolliryhmässä. C. tubulosa -hoitoryhmät osoittivat lisääntynyttä Bcl2-proteiinin ilmentymistä ja vähentynyttä Bax-proteiinin ilmentymistä MPP+-käsitellyissä MES23.5-soluissa. Kolmen hoidetun ryhmän välillä LSD-testissä oli merkittäviä eroja. Nämä vaikutukset olivat annoksesta riippuvaisia.

Käyttäytymistestit

Uintitestin tulokset viittasivat siihen, että vehikkeliryhmän hiirillä oli suhteellisen pitkät paikallaanoloajat, jotka lisääntyivät ajan myötä. Päivänä 14 vehikkeliryhmän hiirillä oli merkittävästi pidempi paikallaanoloaika kuin normaalin kontrolliryhmän hiirillä. Hiirten paikallaan pysyminen

pieni annosC. tubulosahoitoryhmä ei eronnut merkittävästi vehikkeliryhmän hiiristä. Hiirten kesto paikallaan suuria annoksia saaneessa C. tubulosa -hoitoryhmässä oli kuitenkin merkittävästi lyhyempi kuin vehikkeliryhmän hiirillä.

Avokenttätestin tulokset viittaavat siihen, että MPTP-indusoidun vaurion jälkeen hiirillä, vehikkeliryhmän hiirillä havaittiin merkittävää heikkenemistä kyvyssään spontaaniin aktiivisuuteen, kuten kasvatustiheys osoittaa. 14-päivän hoidon jälkeenC. tubulosa nanojauheKohtalaisen ja suuren annoksen hoitoryhmissä olevilla hiirillä oli merkittävästi korkeammat kasvatustiheydet verrattuna vehikkeliryhmän hiiriin (kuviot 6A, B).

C. tubulosa nanojauheen vaikutus DA-sisältöön hiirissä

Muutokset SN:n DA-sisällössä määritettiin HPLC:llä. Havaittiin, että DA-pitoisuus vehikkeliryhmän aivoissa väheni merkittävästi. DA-pitoisuus PD-hiirten aivoissa pieniannoksisessa C. tubulosa -hoitoryhmässä ei eronnut merkittävästi vehikkeliryhmän hiiristä. Kuitenkin,C. tubulosa -hoitolisäsi DA-tasoja PD-hiirten aivoissa annoksesta riippuvalla tavalla. Suurella C. tubulosa-annoksella käsiteltyjen PD-hiirten aivoissa oli merkittävästi korkeampi DA-pitoisuus kuin vehikkeliryhmän hiirten aivoissa (kuvio 6C).

C. tubulosa nanojauheen vaikutus TH:n ilmentymiseen hiirissä

TH-positiivisten solujen lukumäärä ja TH-proteiinin ilmentymistaso MPTP-indusoitujen PD-hiirten SN:ssä olivat alhaisemmat verrattuna kontrolliryhmän hiiriin. C. tubulosa -hoidon jälkeen TH-positiivisten solujen määrä ja TH-proteiinin ilmentymistaso MPTP-indusoitujen PD-hiirten SN:ssä lisääntyivät, ja suuria annoksia saaneen C. tubulosa -hoitoryhmän ja vehikkeliryhmän välillä oli merkittävä ero. LSD-testillä; ja kolmen hoidetun ryhmän välillä oli merkittäviä eroja (kuvio 7).

C. tubulosa nanojauheen vaikutus GDNF:n ja sen reseptorien, GFR 1:n ja Ret:n proteiiniekspressioon hiirissä

GDNF:n ja sen reseptorien, GFR 1:n ja Retin, proteiiniekspressio positiivisesti värjäytyneissä soluissa arvioitiin käyttämällä immunohistokemiaa. Western blot -analyysiä käytettiin proteiinin ilmentymistasojen arvioimiseksi eri hiirryhmien SN:ssä. Löydökset eri ryhmien osalta olivat samanlaisia ​​käytettäessä kahta havainnointimenetelmää. GDNF:n ja sen reseptoriproteiinien, GFR 1:n ja Retin, ilmentyminen positiivisesti värjäytyneissä soluissa vehikkeliryhmän hiirten SN:ssä oli merkittävästi alhaisempi kuin normaalin kontrolliryhmän hiirillä. Erilaiset C. tubulosa -hoidon annokset lisäsivät GDNF-, GFR-1- ja Ret-positiivisten solujen määrää (kuvat 8A–S).

GDNF:n, GFR 1:n ja Ret:n proteiiniekspressio vehikkeliryhmän hiirten SN:ssä oli merkittävästi alhaisempi kuin kontrolliryhmän hiirillä. Hoitopitoisuuksien lisääminenC. tubulosa nanopowerlisäsi merkittävästi näiden proteiinien ilmentymistä. GDNF:n, GFR 1:n ja Ret:n proteiiniekspressio C. tubulosaa suuren annoksen hoitoryhmän hiirten SN:ssä oli merkittävästi korkeampi kuin vehikkeliryhmän hiirillä (P< 0.01; Figures 8T, U). 

C. tubulosa nanojauheen vaikutus Bcl2/Baxin proteiiniekspressioon hiirissä

Bcl2-proteiinin ilmentyminen väheni merkittävästi ja Bax-proteiinin ilmentyminen parani merkittävästi vehikkeliryhmän hiirten SN:ssä (P< 0.01) compared with the mice in the normal control group. High-dose C. tubulosa treatment significantly increased Bcl2 protein expression and significantly reduced Bax protein expression in the brains of the vehicle mice (P < 0.01; Figure 9). LSD test showed there was no significant difference between the middle-dose and high-dose groups but a significant difference between the low-dose group. 

KESKUSTELU

PD ja apoptoosi

PD on neurodegeneratiivinen sairaus. Zhang et ai. (2005), esiintyvyys on 10,7 % yli 55-vuotiaista kiinalaisista ja 1,67 % yli 65-vuotiaista. PD-potilaiden määrä on kasvanut vuosittain maailmanlaajuisen ikääntymisen kiihtyessä, mikä asettaa raskaan taloudellisen taakan potilaiden perheille ja koko yhteiskunta. Aivoissa dopaminergiset neuronit osallistuvat pääasiassa DA:n synteesiin ja eritykseen. Ne ovat laajalti levinneitä keskushermostoon ja sijaitsevat pääasiassa SN:ssä (80 %). TH on DA-synteesin avainnopeutta rajoittava entsyymi. Siten TH-aktiivisuuden estäminen vähentää DA-synteesiä (Huot ja Parent, 2007). PD:n tärkeimmät patologiset ja biokemialliset muutokset ovat dopaminergisten hermosolujen apoptoosi SN:ssä, nigrostriataalisen DA:n merkittävä väheneminen ja Lewy-kappaleiden muodostuminen dopaminergisissa neuroneissa (Dexter ja Jenner, 2013). PD:n etiologiaan liittyy siihen liittyviä geneettisiä tekijöitä, ympäristötekijöitä ja hermoston ikääntymistä (Allam et al., 2005). PD:n patogeneesi on edelleen epäselvä nykyaikaisessa lääketieteessä. 1960-luvun lopulta lähtien levodopakorvaushoitoa on käytetty menestyksekkäästi PD:n hoidossa, ja se on tunnustettu tärkeäksi käännekohtaksi PD:n hoidossa. Tämän terapian pitkäaikainen käyttö aiheuttaa kuitenkin sivuvaikutuksia, eikä terapialla hoideta PD:n taustalla olevia syitä (Del Sorbo ja Albanese, 2008). Siksi uusien dopaminergisten hermosolujen suojaamiseen tähtäävien lääkkeiden tai hoitomenetelmien aktiivinen tutkimus on ratkaisevan tärkeää PD:n hoidossa.

Aiemmissa tutkimuksissa terminaalisen deoksinukleotidyylitransferaasin välittämän dUTP-nimipään leimauksen käyttö osoitti, että 0,6 %–4,8 % dopaminergisistä neuroneista PD-potilaiden SN:ssä osoitti apoptoosia (Mochizuki et al., 1996). Elektronimikroskopia osoitti apoptoottisia piirteitä, mukaan lukien kromaattinen kondensaatio ja apoptoottiset kappaleet dopaminergisissa soluissa (Anglade et ai., 1997). Tompkins et ai. (1997) suorittivat ultrarakenteellisen analyysin aivokudoksen ruumiinavauksista potilailta, joilla oli PD, AD ja diffuusi Lewyn kehon tauti (DLBD). He löysivät apoptoottisia kappaleita SN:n tiheästä kerroksesta PD- ja DLBD-potilailla, mikä tarjosi vakuuttavan todisteen hermosolujen apoptoosista PD:ssä ja siihen liittyvissä sairauksissa. Siksi apoptoosin vähentäminen tai tukahduttaminen dopaminergisissä neuroneissa on olennaista PD-hoidolle.

Aiemmat tutkimukset osoittivat, että MPTP aiheutti PD:n kaltaisia ​​oireita. MPTP läpäisee veri-aivoesteen ja metaboloituu tyypin B monoamiinioksidaasien toimesta astrosyyteissä. Myöhemmin se muuttuu myrkylliseksi MPP+:ksi, joka kerääntyy dopaminergisten hermosolujen mitokondrioihin DA-kuljettajan proteiinin saannin kautta. Siten se tuottaa ylimääräisiä happivapaita radikaaleja, jotka estävät mitokondrioiden hengitysketjun kompleksi I -aktiivisuutta ja ATP-synteesiä. Nämä tapahtumat edistävät edelleen vapaiden radikaalien muodostumista ja oksidatiivisia stressireaktioita ja johtavat lopulta dopaminergisten hermosolujen rappeutumiseen ja kuolemaan. Tästä syystä tässä tutkimuksessa käytettiin MPP+:aa in vitro -vehikkelin luomiseen MES23.5-dopaminergisiin neuroniin ja MPTP:tä vehikkelihiiren indusoimiseksi keskinäistä varmennusta varten. MTT-määrityksen tulosten mukaan MPP+ vähensi merkittävästi MES23.5-solujen elinkelpoisuutta, mikä viittaa siihen, että MPP+ oli sytotoksinen dopaminergisille neuroneille. Tulokset osoittivat myös, että C. tubulosa tehosti tehokkaasti anti-apoptoottisten proteiinien ilmentymistä ja esti MPP{11}}indusoidun apoptoosin lisääntymistä.

PD ja GDNF

GDNF on neurotrofinen tekijä, jonka ensin eristivät Lin et ai. (1993). Lin et ai. (1993) osoittivat myös, että GDNF:llä oli spesifisiä ravitsemuksellisia vaikutuksia dopaminergisiin hermosoluihin rottien keskiaivoissa. GDNF, neurturiini (NTN), persefiini (PSP) ja artemiini (ART) muodostavat GDNF-perheen. Ne ovat rakenteellisesti samanlaisia ​​ja toiminnallisesti samankaltaisia ​​eritysproteiineja (Kotzbauer et ai., 1996; Baloh et ai., 1998; Milbrandt et ai., 1998; Woodbury et ai., 1998).

GDNF-reseptori koostuu kahdesta komponentista. Ensimmäinen komponentti, GFR, on kiinnitetty glykosyylifosfatidyyli-inositolin (GPI) ulkokalvoon ja ankkuroitu konneksiinin pintaan. Toinen komponentti on Ret-proteiini. Tutkimus on osoittanut, että on olemassa neljä erilaista GFR-tyyppiä: GFR 1, GFR 2, GFR 3 ja GFR 4. GFR 1 on GDNF:n korkeaaffiniteettinen reseptori (Onochie et al., 2000; Chen et ai., 2001; Lindahl et ai., 2001). Ret-proteiini on GDNF:n toiminnallinen reseptori. GDNF:n homodimeerimolekyyli sitoutuu suoraan GFR 1:een muodostaen komplekseja ja on vuorovaikutuksessa Retin kanssa, mikä johtaa Retin dimerisoitumiseen ja aktivoitumiseen. Retin autofosforylaation ansiosta Ret aktivoi useita yleisiä TH-signalointireittejä. Ret-proteiinin puuttuessa GDNF aiheuttaa MAPK:n, PI-3:n ja PLC-:n proteiinifosforylaatiota mRNA:n ilmentymisen ja C-fosin toiminnallisen aktiivisuuden lisäksi sen reseptoriproteiinin, GFR 1:n kautta (He et al., 2008).

Tutkimukset ovat osoittaneet, että GDNF:llä oli vahvin suojaava vaikutus dopaminergisiin hermosoluihin (Rangasamy et al., 2010; Campos et al., 2012). Ajoneuvoissa, joissa käytetään MPTP:tä ja 6-hydroksidipamiinia (6-OHDA) dopaminergisten hermosolujen vaurioiden aiheuttamiseen, GDNF suojaa dopaminergisiä hermosoluja vähentämällä apoptoosia ja edistämällä aksonien kasvua kantasolujen erilaistumisen indusoimiseksi (Lucas et al., 2012; Littrell et ai., 2013). Lin et ai. (1993) osoittivat, että GDNF edisti erityisesti dopaminergisten hermosolujen elinkelpoisuutta, erilaistumista ja aksonaalista kasvua edistääkseen DA:n ottoa hermosoluissa. Tutkimus osoitti myös, että GDNF ei ainoastaan ​​estänyt akuuttia toksisuutta, vaan myös lievitti MPP+:n tai 6-OHDA:n pitkäaikaista toksisuutta dopaminergisissä hermosoluissa ja estäen lisäksi solukuolemaa stressaantuneissa tai vaurioituneissa soluissa (Yu et al., 2010). Lisäksi GDNF edisti hermojen kantasolujen lisääntymistä ja erilaistumista dopaminergisiin hermosoluihin keskiaivoissa (Lindsay, 1995) dopaminergisten hermosolujen pelastamiseksi retrogradiselta degeneraatiolta (Hong-Juan et al., 2011).

Tutkimukset ovat osoittaneet, että GDNF:n ilmentyminen SN:ssä väheni merkittävästi eläinvehikkeleissä (Yang et al., 2010). Tämä viittaa siihen, että se voi olla yksi patogeneesin mekanismeista PD-rotissa. 5–15 µg/d GDNF:n injektio MPTP-indusoidun vehikkelieläimen lateraalikammioon tai aivojuovioon kolmena peräkkäisenä kuukautena edisti dopaminergisen järjestelmän nigrostriataalista korjausta vehikkeleissä (Grondin et al., 2002). PD:n GDNF-hoitoa koskevat tutkimukset eläinvehikkeleissä ovat osoittaneet, että GDNF:n aivojensisäinen injektio eri aivoalueille, kuten SN:ään, hännän ytimeen ja lateraalikammioon, paransi PD-eläinmalleihin liittyviä liikehäiriöitä, mukaan lukien motorisen toiminnan heikkeneminen, lihasjäykkyys ja vapina (Grondin et ai., 2002). GDNF ei kuitenkaan pääse suoraan veri-aivoesteen läpi. Siksi GDNF:n paikallinen aivoinjektio sisältää huomattavia riskejä ja vaikeuksia kliinisessä käytössä. Sovelluksia eksogeenisen GDNF:n tuomiseksi käyttöön kontrolloidusti vapauttavien mikropallojen, hitaasti vapauttavien kapseleiden ja virusgeenien kautta tutkitaan edelleen (Liang et al., 2010; Yang et al., 2010; Qiao et al., 2012). Ottaen huomioon eri tekniikoiden rajoitukset eksogeenisen GDNF:n viemiseksi aivoihin, neuroprotektiiviset aineet, jotka edistävät endogeenisen GDNF:n vapautumista, ovat merkittäviä kliinisessä käytössä.

PD jaC. tubulosaNanojauhe

PD on yleisempää keski-ikäisillä aikuisilla ja vanhuksilla. TCM:n teorian mukaan PD sijaitsee ensisijaisesti aivoissa ja johtuu pääasiassa maksan ja munuaisten vajaatoiminnasta elintärkeän energian ja veren vajaatoiminnan lisäksi. Tämän teorian mukaan PD-hoidon tulisi siten keskittyä munuais- ja luuytimen virkistykseen.Yang et ai. (2010)käytti satunnaistettuja, kaksoissokkoutettuja ja lumekontrolloituja kliinisiä tutkimuksia ja havaitsi, että yhdistelmähoito Madoparilla ja munuaisia ​​vahvistavilla resepteillä lievitti PD-potilaiden motorisia toimintahäiriöitä. Hoidon tulos oli parempi kuin yksittäinen Madopar-hoito. TCM-monoterapian tai yhdistelmäreseptin hoidon tehokkuus PD:ssä on vahvistettu PD-eläinmalleissa ja kliinisissä sovelluksissa. TCM-sovellukset munuaisten tonisoimiseksi ja verenkierron edistämiseksi vähensivät PD:n monoterapian annosta Madoparilla. Jotkut tutkimukset ovat ehdottaneet, että TCM paransi PD:n oireita ja suojasi dopaminergisiä hermosoluja, mikä saattoi liittyä läheisesti endogeenisen GDNF-ilmentymisen edistämiseen.Hong-Juan et ai., 2011; Qiao ym., 2012).

Tässä tutkimuksessa käytetty munuaisia ​​vahvistava yhdiste,C. tubulosananojauhe, mukanaCistanche, epimedium, jaRisoma polygonaatti. Nykyaikainen tutkimus viittaa siihen, että kemiallinen koostumusCistancheon ECH, joka suojaa dopaminergisiä neuroneja SN:ssä MPTP-indusoiduissa PD-hiirissä ja estää DA:n ja DA-kuljettajan vähenemistä (Zhao et ai., 2010). Lisäksi se estää 6-OHDA:n aiheuttaman DA:n vähenemisen ja suojaa striatalin dopaminergisiä hermosoluja (Chen et ai., 2007). Epimedium estää kaspaasin-3 aktivoitumista ja sillä on hermoja suojaava rooli (Liu ym., 2011). Epimedium flavonoidit edistävät tehokkaasti hermoston kantasolujen lisääntymistä ja erilaistumista (Yao et al., 2010).

Tässä tutkimuksessaC. tubulosananojauhe vastusti MPP:n lisääntymistä+-indusoitua apoptoosia annoksesta riippuvaisella tavalla. Se paransi merkittävästi TH:n ilmentymistäin vitroja niillä oli merkittäviä anti-apoptoottisia vaikutuksia dopaminergisissä hermosoluissa. MPTP-indusoidut vehikkelihiiret osoittivat käyttäytymishäiriöitä ja vähensivät merkittävästi TH:n ilmentymistä keskiaivokudoksissa ja DA-tasoja, jotka ovat tyypillisiä PD:n patologisia piirteitä. Eri annoksetC. tubulosananojauhe lyhensi paikallaan pysymistä, tehosti autonomista toimintaa, paransi käyttäytymishäiriöitä, kohonnut DA-tasoja aivoissa ja lisäsi TH:n ilmentymistä kulkuneuvoissa. Nämä tulokset viittasivat siihenC. tubulosananojauhe vaikutti suojaaviin vaikutuksiin dopaminergisiin hermosoluihin, mikä parantaa ajoneuvojen käyttäytymishäiriöitä. Eri annoksetC. tubulosananojauhe lisäsi GDNF-proteiinin ja sen reseptoriproteiinien ilmentymistä vehikkelihiirten aivoissa. Suuri annosC. tubulosahoito lisäsi merkittävästi Bcl2-ekspressiota ja vähensi Bax-ilmentymistä, mikä viittasi siihenC. tubulosananojauhesaattaa edistää GDNF:n ilmentymistä ja eritystä MPTP:n vaurioittamissa hiiren aivoissa. Lisäksi sillä voi olla hermosoluja suojaavia vaikutuksia dopaminergisissä hermosoluissa ja minimoida hermosolujen apoptoosia GDNF:n neurotrofisten tukiroolien kautta.

Tämä tutkimus osoitti senC. tubulosananojauheella oli suojaavia vaikutuksia dopaminergisiin hermosoluihin molemmissain vitrojain vivoja lisäsi TH-ilmentymistä DA-sisällön parantamiseksi. Se paransi myös käyttäytymishäiriöitä MPTP-indusoiduissa vehikkelihiirissä, sääteli GDNF:n ja sen reseptoriproteiinien proteiiniekspressiota SN:ssä ja sillä oli anti-apoptoottisia vaikutuksia PD-hiirissä. Kliinisten vaikutusten taustalla oleva mekanismiC. tubulosaPD:n nanojauheeseen saattaa liittyä endogeenisen GDNF:n pitoisuuden lisääminen aivoissa ja siten dopaminergisten hermosolujen vaurioiden vähentäminen.

LUONNOLLINEN CISTANCHE TUBULOSA SEKSUAALITOIMINNON PARANTAMISEEN PHGS75% ECH 30% ACT 12