Mekaaninen tutkimus kroonisen eturauhastulehduksen paranemisesta Cistanche-tableteilla STAT3/HIF-1 /glykolyysiakselin kautta

 

Abstrakti

Tämä tutkimus tutkii terapeuttista mekanismiaCistanche-tabletit (CT)kroonisen eturauhastulehduksen hoidossaSTAT3/HIF-1 /glykolyysin signalointiakseli. Cistanche-tablettien tehokkuuden arvioimiseksi perustettiin kokeellisen autoimmuunisen eturauhastulehduksen (EAP) rottamalli. Urospuoliset Wistar-rotat jaettiin satunnaisesti kuuteen ryhmään (n=7 ryhmää kohden): kontrolli-, malli-, matala-, keski- ja suuriannoksiset TT-ryhmät (197,2, 591,5 ja 1774,4 mg/kg/vrk, vastaavasti) ja positiivinen kontrolliryhmä (Pusitai, 34,2 mg/kg/vrk). Mallin induktion jälkeen kaikki hoidot annettiin neljän peräkkäisen viikon ajan.

Histologinen analyysi käyttäen hematoksyliini- ja eosiinivärjäystä (HE) arvioi eturauhasen tulehduksen ja rauhasvaurion. Interleukiini-8:n (IL-8), interleukiini-1:n (IL-1) ja immunoglobuliini G:n (IgG) seerumitasot mitattiin ELISA:lla. Fosforyloidun STAT3:n (p-STAT3), HIF-1:n, usean inositolipolyfosfaattifosfataasi 1:n (MINPP1) ja heksokinaasin (HK) proteiiniekspressio eturauhaskudoksissa arvioitiin Western blottingin ja immunohistokemian avulla. Kohdistamatonta metabolomiikkaa käytettiin erilaisten metaboliittien ja niihin liittyvien aineenvaihduntareittien tunnistamiseen.

Tulokset osoittivat, että TT lievitti merkittävästi eturauhasen patologisia vaurioita. ELISA paljasti alentuneet seerumipitoisuudet IL-8, IL-1 ja IgG. Western blot ja immunohistokemia osoittivat, että CT vähensi p-STAT3:a, HIF-1:a ja HK:ta samalla kun sääteli MINPP1:tä. Metabolomiikka tunnisti 96 erilaista metaboliittia ja paljasti, että CT voi saada terapeuttisen vaikutuksensa moduloimalla glykolyysiä ja arakidonihapon aineenvaihduntaa.

Johtopäätös:Cistanche-tabletit voivat lievittää tulehdusta ja estää kroonisen eturauhastulehduksen etenemistä kohdentamalla STAT3:een, tukahduttamalla HIF-1-signalointia ja säätelemällä glykolyyttistä aineenvaihduntaa.

Avainsanat: Cistanche-tabletit; ckrooninen eturauhastulehdus; metabolomiikka; HIF-1 signalointireitti; glykolyysi

Cistanche Edut eturauhaselle ja munuaisille

 

 

 

Lisää cistanche-pillereitä ostoskoriin

 

 

Wecistanchen tukipalvelu - Kiinan suurin vesisäiliön viejä:
Sähköposti:wallence.suen@wecistanche.com
tai

 

 

Johdanto

Krooninen eturauhastulehdus on yleinen urologinen sairaus miehillä, jolle on ominaista virtsan toimintahäiriöt, kivulias virtsaaminen, kiireellisyys ja epämukavuus välilihassa. Se on yleisin eturauhastulehduksen tyyppi, joka vaikuttaa merkittävästi potilaiden elämänlaatuun. Tutkimusten mukaan esiintyvyys on 6,0–32,9 prosenttia kiinalaisilla miehillä ja 2,0–16,0 prosenttia kansainvälisesti. Nykyiset länsimaiset hoidot perustuvat antibiootteihin ja tulehduskipulääkkeisiin, mutta pitkäaikainen käyttö johtaa usein maha-suolikanavan sivuvaikutuksiin.

Kroonisen eturauhastulehduksen etiologia ja patogeneesi ovat monimutkaisia, ja niihin liittyy immuunijärjestelmän häiriöitä, neuroendokriinista epätasapainoa ja elämäntapatekijöitä. Immunologiset poikkeavuudet ja aineenvaihduntahäiriöt ovat keskeisiä huolenaiheita.

Perinteisen kiinalaisen lääketieteen (TCM) näkökulmasta krooninen eturauhastulehdus liittyy munuaisten qi-puutteeseen, kostean lämmön kertymiseen ja veren pysähtymiseen.Cistanche-tabletit, jotka on johdettu perinteisestä sairaalavalmisteesta [hyväksyntänumero Z04000524], perustuvat klassiseen kaavaan "Cheng's Bi Xie Fen Qing Yin" yhdistettynä "Cuscuta-pillereihin". Tämä kaava sisältää kymmenen yrttiä, kutenCistanche deserticola, Dioscorea, jaPolyporus umbellatus, ja sitä käytetään perinteisesti vahvistamaan munuaisia, suojaamaan olemusta, edistämään virtsaamista ja poistamaan sameutta.

Kliiniset tutkimukset ovat vahvistaneet, että Cistanche-tabletit vähentävät tehokkaasti eturauhastulehduksen oireita ja parantavat elämänlaatua hyvällä turvallisuusprofiililla. Suurin osa olemassa olevista tutkimuksista keskittyy kuitenkin kliinisiin havaintoihin, ja tarkat hoitomekanismit ovat edelleen epäselviä.

Viimeaikaiset todisteet viittaavat siihen, että krooniseen eturauhastulehdukseen liittyy epänormaali glykolyysi ja hypoksian aiheuttaman tekijän 1 (HIF-1 ) yli-ilmentyminen, mikä tekee siitä mahdollisen hoidon kohteen. Lisäksi STAT3-reitin säätely on noussut uudeksi strategiaksi kroonisen tulehduksen ja autoimmuunivasteiden hallinnassa. Tämä tutkimus tutkii Cistanche-tablettien terapeuttista mekanismia in vivo -kokeisiin ja metabolomiikkaan perustuen. Tavoitteena on tarjota uutta näyttöä yrttivalmisteiden käytöstä kroonisessa eturauhastulehduksessa.

 

Materiaalit ja menetelmät

1. Materiaalit

Eläimet:42 SPF-luokan urospuolista Wistar-rottaa (190–210 g) ostettiin Suzhou SPF Biotechnology Co., Ltd:ltä. Eläimiä pidettiin normaaleissa olosuhteissa (20 ± 3 astetta, 55 % ± 5 % kosteus, 12 tunnin valo/pimeä-sykli) ja niille annettiin ruokaa ja vettä ad libitum. Institutional Animal Ethics Committee (hyväksyntänumero. 2023112001) hyväksyi tutkimuksen.

Lääkkeet ja reagenssit:

Cistanche-tabletit

Pusitai-tabletit (positiivinen kontrolli)

Suolaliuos, PBS-puskuri, täydellinen Freundin adjuvantti

ELISA-sarjat IL-8, IL-1 ja IgG

Vasta-aineet: p-STAT3, HIF-1, MINPP1, HK

Toissijaiset vasta-aineet ja immunohistokemialliset reagenssit

Instrumentit:

LC-MS-järjestelmät (Triple TOF 6600, Agilent 1290 Infinity LC)

Nopea sentrifugi, homogenisaattori, mikrolevylukija ja tarkkuusvaaka

---

2. Menetelmät

2.1 In vivo -tutkimus

2.1.1 Kroonisen eturauhastulehduksen malli

Kokeellinen autoimmuuniprostatiitin (EAP) malli indusoitiin käyttämällä homogenisoitua eturauhaskudosta, joka oli emulgoitu täydellisellä Freundin adjuvantilla. Rotat saivat ihonalaisia ​​injektioita päivinä 1 ja 28 useisiin kohtiin (niska, nivus ja takakäpälät). Kontrollirotat saivat suolaliuosinjektioita. Mallin menestys vahvistettiin käyttäytymisoireiden ja histopatologian perusteella.

2.1.2 Ryhmittely ja käsittely

Mallin vahvistamisen jälkeen rotat jaettiin satunnaisesti kuuteen ryhmään: kontrolli-, malli-, matala-, keski-, korkea-annos-CT- ​​ja Pusitai-ryhmä. CT-alustan annos asetettiin kliinisen vastaavan annostuksen mukaan. Hoidot annettiin suun kautta kerran päivässä 28 päivän ajan.

2.1.3 Näytteiden kerääminen

Viimeisenä päivänä kirjattiin 24 tunnin virtsan ja veden saanti. Eutanasian jälkeen veri ja eturauhaskudokset kerättiin. Eturauhasindeksi (eturauhasen paino/ruumiinpaino) laskettiin. Kudokset joko kiinnitettiin formaliiniin tai jäädytettiin nestetypessä lisäanalyysiä varten.

2.1.4 Yleisiä huomioita

Koko mallinnuksen ja hoidon ajan rottien käyttäytymistä, turkin kuntoa ja yleistä terveyttä seurattiin.

2.1.5 ELISA seerumin sytokiineille

Seerumin IL-8, IL-1 ja IgG-tasot mitattiin ELISA:lla valmistajan ohjeiden mukaisesti.

2.1.6 Histopatologia (HE-värjäys)

Formaliinilla kiinnitetyt eturauhaskudokset upotettiin parafiiniin ja leikattiin HE-värjäystä varten. Tulehduksia ja kudosvaurioita havaittiin mikroskoopilla.

2.1.7 Immunohistokemia MINPP1:lle ja HK:lle

Noudatettiin tavanomaisia ​​IHC-menetelmiä, mukaan lukien deparaffinointi, antigeenin haku, salpaus, primaarinen ja sekundaarinen vasta-aineinkubaatio, DAB-värjäys ja hematoksyliinivastavärjäys. Positiivisen värjäytymisen kvantifiointiin käytettiin ImageJ-ohjelmistoa.

2.1.8 Western Blot p-STAT3:lle ja HIF-1

Jäädytetyt eturauhaskudokset hajotettiin ja proteiinipitoisuudet määritettiin. SDS-PAGE:n ja PVDF:n kalvonsiirtoa seurasi esto, primaarinen/sekundaarinen vasta-aineinkubaatio, ECL-kehitys ja densitometria käyttämällä ImageJ:tä.

2.1.9 Tilastollinen analyysi

Tiedot analysoitiin käyttämällä GraphPad Prism 9.5.1:tä. Tulokset ilmaistiin keskiarvona ± SD. Käytettiin yksisuuntaista ANOVAa, jota seurasi LSD post hoc -testi. P<0.05 was considered statistically significant.

 

2.2 Seerumin aineenvaihdunta

2.2.1 Näytteen valmistelu

Kontrolli-, malli- ja keskiannoksen CT-ryhmien seerumi sulatettiin, sekoitettiin kylmään metanoli-asetonitriili-veteen, sonikoitiin ja sentrifugoitiin. Supernatantit kuivattiin ja liuotettiin uudelleen LC-MS-analyysiä varten.

2.2.2 LC-MS-olosuhteet

Metaboliitit erotettiin käyttämällä UPLC BEH-amidikolonnia spesifisellä gradienttieluointiprofiililla. Tiedot saatiin sekä positiivisessa että negatiivisessa ionimoodissa käyttämällä korkean herkkyyden IDA-moodia.

2.2.3 Tietojen käsittely

Raw data were converted to .mzML format, processed using XCMS for peak identification, alignment, and normalization. Metabolites with >50% missing values were removed. PCA and PLS-DA were used for multivariate analysis. Significant metabolites were filtered based on VIP >1.0 ja p<0.05, and KEGG pathway enrichment was performed.

 

Tulokset ja keskustelu

Cistanche-tabletit paransivat merkittävästi eturauhasen histopatologisia muutoksia, vähensivät tulehduksellisia sytokiinejä ja säätelivät avainproteiinien ilmentymiä STAT3/HIF-1 /glykolyysiakselilla. Metabolomiikka paljasti glykolyysin ja arakidonihapon aineenvaihdunnan modulaation, mikä viittaa sekä anti-inflammatorisiin että metabolisiin säätelymekanismeihin.

Nämä havainnot tukevat kehitystäCistanche-pohjaiset kasviperäiset lisäravinteetlupaavana luonnollisena hoitona krooniseen eturauhastulehdukseen, joka tarjoaa usean kohteen säätelyn ja hyvän turvallisuuden.