Verkkofarmakologia ja kokeellinen validointi paljastavat Cistanche-fenyylietanoliglykosidien mekaanisen roolin NAFLD:n hoidossa TNF/PI3K/Akt-reitin kautta
Oct 29, 2025
3. Tulokset
3.1 Verkkofarmakologia
3.1.1 Aktiiviset yhdisteet ja mahdolliset kohteet
Projektiryhmän aikaisemman tutkimuksen sekä tietokannoista ja kirjallisuudesta saatujen tietojen perusteella valittiin kymmenen edustavaa farmakologisesti vaikuttavaa yhdistettä [10–11]:verbaskosidi, isoverbaskosidi, ekinakosidi, 2'-asetyyli-verbaskosidi, cistanosidi A, cistanosidi B, salidrosidi, isokrenatosidi II, cistanche-glykosidi A ja cistanche-glykosidi F.
Runsaspitoisuus verbaskosidi(akteosidi)-sistanche-uutetta veren lipidien hoitoon
Cistanche-uutteen tekniset tiedot
KäyttämälläSwissTargetPrediction44 tavoitetta saatiin;NetInferennusti 20 parasta tavoitetta, mikä tuotti 45 tavoitetta;SuperPredtuotti 118 maalia. Kaksoiskappaleiden yhdistämisen ja poistamisen jälkeen195 ainutlaatuista kohdettatunnistettiin.
alkaenGSE89632tietojoukko, joka sisälsi 39 NAFLD-näytettä ja 24 normaalia näytettä,589 eri tavalla ilmentynyttä geeniäseulottiin. Yhdistetään tietoja kohteestaGeneCardsjaDisGeNET, 2 315 NAFLD:hen liittyvää sairausgeeniäsaatiin duplikoinnin poistamisen jälkeen (kuvat 1A–1B). Leikkaamalla yhdisteisiin liittyvät kohteet sairauskohteiden kanssa,77 päällekkäistä tavoitettatunnistettiin Cistanche-fenyylietanoliglykosidien mahdollisiksi terapeuttisiksi kohteiksi NAFLD:tä vastaan (kuvio 1C).
Nämä kohteet tuotiinSTRING database with an interaction threshold >0,400. Eristetyt solmut poistettiin ja verkko visualisoitiin kauttaCytoscape, jolloin tuloksena on aPPI-verkko, jossa on 75 solmua ja 408 reunaa(Kuva 1D). Cytoscapen "Analysoi verkko" -toiminnon avulla 10 parasta kohdetta tutkintoarvon perusteella tunnistettiin ydinkohteiksi:TNF, NFKB1, TLR4, HSP90AA1, ESR1, HIF1A, STAT1, APP, PRKACA, SMAD3.
3.1.2 GO-, KEGG- ja DO-rikastusanalyysit
GO-rikastusanalyysi paljasti 93 termiämolekyylifunktio (MF), 38 hintaansolukomponentti (CC), ja 989 hintaanbiologinen prosessi (BP). Jokaisen kategorian 10 parasta hakua visualisoitiin (kuva 2). Tulokset osoittivat, että Cistanche-fenyylietanoidiglykosidit voivat aiheuttaa NAFLD:n vastaisia vaikutuksia polkujen kautta, jotka liittyvättulehdus, sytokiinit, aineenvaihdunta ja immuunivaste.
DO rikastus tunnistettu833 sairauttakohteisiin, joista 25 parasta on visualisoitu (kuva 4), mukaan lukienaineenvaihdunta-, immuuni-, sydän- ja verisuoni-, liikalihavuuteen ja maksasairauksiin, jotka kaikki liittyvät läheisesti NAFLD:hen.
3.1.3 "Yhdiste-kohde-polku" -verkko
KEGG-rikastustulosten perusteella a"yhdiste-kohde-polku" -verkkoon rakennettu käyttämälläCytoscape 3.9.1. Vihreät neliöt edustavat aktiivisia yhdisteitä, siniset ympyrät edustavat kohteita ja oranssit V:n muotoiset solmut edustavat reittejä (kuva 5). Tämä osoittaa, että Cistanche-fenyylietanoidiglykosidit aiheuttavat NAFLD:n vastaisia vaikutuksiauseita yhdisteitä, kohteita ja reittejä, kanssaekinakosidi ja verbaskosidiovat yleisimmät ja listatut merkkiyhdisteet vuoden 2020 painoksessaKiinan farmakopea.
3.1.4 Molekyylitelakka
PPI-verkoston viisi tärkeintä ydintavoitetta (TNF, NFKB1, TLR4, HSP90AA1, ESR1) kiinnitettiin aktiivisiin yhdisteisiin, ja niiden vähimmäissitoutumisenergiat laskettiin (kuvio 6). Kaikki telakointipisteet olivat pienempiä kuin-6 kcal/mol, mikä osoittaa vahvoja sitoutumisaffiniteetteja.TNF:llä oli vahvin affiniteetti. Jotkut telakointitulokset visualisoitiin käyttämälläPyMOL(Kuva 7).
3.2 Solukokeet
3.2.1 FFA:n vaikutukset lipidien kertymiseen HepG2-soluissa
Kuten näkyyKuva 8FFA-pitoisuuksien nostaminen 0,5:stä 2 mmol/L:iin johti punaisten lipidipisaroiden lisääntymiseen, jotka sulautuivat suuriksi lipidipisaroiksi, mikä osoitti onnistuneen lipidilatauksen.
3.2.2 FFA- ja Cistanche-fenyylietanoliglykosidien vaikutukset solujen elinkykyyn
Kuten näkyyKuvio 9A, FFA-pitoisuudet1 mmol/L ja alleei ollut merkittävää vaikutusta solujen elinkelpoisuuteen (P > 0,05); siten,1 mmol/lvalittiin mallinnukseen. Kuten näkyyKuvio 9B, Cistanche-fenyylietanoidiglykosidit asti200 μg/mlei vaikuttanut merkittävästi elinkelpoisuuteen (P > 0,05), mutta400 μg/mlesti merkittävästi elinkelpoisuutta (P < 0,01). Siksi25, 50 ja 100 μg/mlvalittiin pieniksi, keskisuuriksi ja suuriksi annoksiksi hoitoa varten.
3.2.3 Vaikutukset lipidien kertymiseen
Kuten näkyyKuva 10, malliryhmä osoitti merkittävää punaisten lipidipisaroiden kertymistä kontrolliryhmään verrattuna (P < 0,01), mikä vahvistaa onnistuneen mallinnuksen. Hoito kanssa50 ja 100 μg/mlCistanche-fenyylietanoidiglykosidit vähensivät merkittävästi lipidipisaroiden muodostumista (P < 0,01). sisäänKuva 11, TG- ja TC-tasot olivat koholla malliryhmässä (P < 0,01), kun taas kaikissa hoitoryhmissä tasot olivat merkittävästi alentuneet malliryhmään verrattuna (P < 0,01).
3.2.4 Vaikutukset mitokondriovaurioihin
JC-1 väriaine kerääntyy terveisiin mitokondrioihin ja säteilee punaista fluoresenssia; vaurioituneissa mitokondrioissa se pysyy monomeerisessa muodossa ja säteilee vihreää fluoresenssia. Kuten näkyyKuva 12, punainen fluoresenssi hallitsi kontrolliryhmässä, kun taas vihreä fluoresenssi oli näkyvä malliryhmässä. Hoitoryhmät osoittivat vähentynyttä vihreää fluoresenssia ja lisääntynyttä punaista fluoresenssia, mikä osoitti parantuneen mitokondrioiden kalvopotentiaalin.
3.2.5 Vaikutukset solunsisäisiin ROS-tasoihin
Kuten näkyyKuva 13, malliryhmä osoitti merkittävästi lisääntynyttä fluoresenssin intensiteettiä (P < 0,01), mikä osoitti kohonnutta ROS:ää. Käsittely Cistanche-fenyylietanoidiglykosideilla vähensi merkittävästi ROS-tasoja kaikilla pitoisuuksilla (P < 0,01).
3.2.6 Vaikutukset apoptoosiin
Hoechst 33342 värjää ytimiä, joissa apoptoottisissa ytimissä on kirkkaansininen, tiivistynyt tai fragmentoitunut morfologia. Kuten näkyyKuva 14, kontrolliryhmällä oli minimaalinen kirkas fluoresenssi, kun taas malliryhmässä oli runsaasti kirkkaan sinisiä apoptoottisia ytimiä. Hoitoryhmien fluoresenssin intensiteetti oli vähentynyt, mikä osoitti vähentyneen apoptoosin.
3.2.7 Vaikutukset TNF/PI3K/Akt-signalointireitille ja Bax-lausekkeelle
Kuten näkyyKuva 15, verrattuna kontrolliryhmään, malliryhmässä ilmeni merkittävästi kohonnuttaTNF-a, PI3K p85, Akt ja Baxproteiinit (P < 0,05, P < 0,01). Hoidon aikana:
Kaikki Cistanchen fenyylietanoidiglykosidiryhmät olivat vähentyneetTNF-alauseke (P < 0,01),
The50 μg/mlryhmä väheniPI3K p85lauseke (P < 0,01),
The100 μg/mlryhmä väheniAkt ja Baxlauseke (P < 0,05).
4. Keskustelu
NAFLD on monimutkainen maksasairaus, joka liittyy aineenvaihduntahäiriöihin, joihin liittyyrasva-aineenvaihdunnan epätasapaino, insuliiniresistenssi ja oksidatiivinen stressi[12]. Viime vuosina,perinteinen kiinalainen lääketiede (TCM)on osoittanut merkittävää lupausta NAFLD:n hoidossa.
Nykyaikainen tutkimus on paljastanut senCistanchen fenyylietanoidiglykosiditvoi säädellä maksan lipidi- ja glukoosiaineenvaihduntaa ja estää oksidatiivista stressiä, tulehdusta ja fibroosia [13–15]. Maksa käyttääβ-hapetusmetaboloimaan rasvahappoja jaCYP7A1muuttaa kolesterolia sappihapoiksi lipidihomeostaasia varten [16–18]. Runsasrasvaisissa ympäristöissä metabolinen epätasapaino johtaa lipidien kertymiseen ja NAFLD:hen [19].
Tämä tutkimus vahvisti senFFA-indusoidut HepG2-solutosoitti lisääntynyttä lipidipisaroiden määrää ja kohonneita TC- ja TG-tasoja. Hoito Cistanche-fenyylietanoidiglykosideilla vähensi merkittävästi lipidipisaroiden muodostumista ja TC/TG-tasoja, mikä paransi maksan steatoosia.
Mitokondrioiden toimintahäiriö johtaa vähentyneeseen β-hapettumiseen, liialliseen ROS-tuotantoon ja lipidiperoksidaatioon [20]. ROS vaurioittaa edelleen mitokondrioita ja pahentaa steatoosia [21]. Tuloksemme osoittavat, että Cistanche-fenyylietanoidiglykosiditvähentää ROS:ää, parantaamitokondrioiden kalvopotentiaali, ja lievittääoksidatiivinen stressi, mikä vähentää rasvan kertymistä.
Verkkofarmakologia osoitti, että NAFLD:n vastaiset vaikutukset sisältävät useitametabolisiin ja apoptoosiin liittyviin reitteihin. Molekyylitelakka osoitti vahvoja sitoutumisaffiniteetteja aktiivisten yhdisteiden ja erityisesti kohteiden välilläTNF, mikä viittaa sen keskeiseen rooliin.
TheTNF-reittion kriittinen solujen signaloinnissa. TNF-α sitoutuuTNFR1, aktivoivat kuolemanreseptorireittejä ja indusoivat apoptoosia [22]. Se myös aktivoiPI3K/Akt-reittiparakriinisen signaloinnin kautta [23–24]. Epänormaali PI3K/Akt-signalointi liittyy lipidien kertymiseen, tulehdukseen ja fibroosiin NAFLD:ssä [25]. Tietomme osoittavat, että Cistanche-fenyylietanoidiglykosiditestävät apoptoosiaja vähentää ilmentymistäTNF-a, PI3K, Akt, jaBax, joka on yhdenmukainen verkon ennusteiden kanssa, mikä vahvistaa sen tärkeydenTNF/PI3K/Akt-polku.
Johtopäätös
Cistanche-fenyylietanoidiglykosidit säätelevät NAFLD:tä kauttauseita prosesseja ja polkuja, mukaan lukien:
Vähentää lipidien kertymistä,
Estää oksidatiivista stressiä,
Lievittää mitokondriovaurioita,
Tukahduttaa apoptoosia.
Nämä vaikutukset voivat liittyä läheisestiTNF/PI3K/Akt-signalointireitti. Tämä tutkimus tarjoaa paitsi tieteellistä tukea Cistanche-fenyylietanoidiglykosidien käyttöön NAFLD-hoidossa, vaan myös referenssin uusien terapeuttisten lääkkeiden kehittämiseen ja kliiniseen tutkimukseen.
