Cistanche Deserticolasta eristetyn fenyylietanoidiglykosidin kokonaisfraktion hyödylliset vaikutukset luun mikrorakenteeseen rotilla, joilta on poistettu munasarjat

Lingling Yang, Shuqin Ding, Bo Zhang, Jingjing Liu, Yanhong Dong, Qiwen Tang, Pingping Yang ja Xueqin Ma

1 Department of Pharmaceutical Analysis, School of Pharmacy, Ningxia Medical University, 1160 Shenli Street, Yinchuan 750004, Kiina

2 School of Clinical Medicine, Ningxia Medical University, 692 Shenli Street, Yinchuan 750004, Kiina

3 Huin etnisen lääketieteen nykyaikaistamisen avainlaboratorio, opetusministeriö, Ningxian lääketieteellinen yliopisto, 1160 Shenli Street, Yinchuan 750004, Kiina

Tämä on avoimen pääsyn artikkeli, jota jaetaan Creative Commons Attribution License -lisenssillä, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja jäljentämisen missä tahansa välineessä edellyttäen, että alkuperäiseen teokseen viitataan asianmukaisesti.

Ottaa yhteyttä:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Abstrakti

Tämä tutkimus suunniteltiin arvioimaan fenyylietanoidiglykosidifraktion kokonaisosteoporoottista aktiivisuutta, joka on eristettyCistanchedeserticola(CDP) rotilla munasarjojen poiston (OVX) indusoima sekä siihen liittyvät mekanismit. Kolmen kuukauden suun kautta antamisen jälkeen OVX-rottien alentunut luun mineraalitiheys, seerumin Ca ja P palautui ja huonontunut trabekulaarinen luun mikroarkkitehtuuri parani osittain Cistanche deserticola (60, 120 ja 240 mg/kg) interventiolla. luun resorptiomarkkereita säädeltiin alas ja luunmuodostusindeksin bioaktiivisuutta säädeltiin ylöspäin; sillä välin MDA-pitoisuus laski ja GSH lisääntyi CDP-hoidolla. Koostumuksellisesti 8 fenyylietanoidiglykosidiyhdistettä tunnistettiin vuonnaCistanchedeserticola(CDP), jonka kokonaissisältö määritettiin 50,3 prosentiksi käyttämällä HPLC-menetelmää. Mekaanisesti,Cistanchedeserticola(CDP)laski TRAF6-, RANKL- ja RANK-tasoja, mikä tukahdutti RANKL/RANK/TRAF6-indusoiman alavirran NF-κB- ja PI3K/AKT-signalointireittien aktivoitumisen ja lopulta esti NFAT2:n ja c:n tärkeimpien osteoklastogeenisten proteiinien toiminnan -Fos. Kaikki yllä olevat tiedot viittasivat siihen, että CDP:llä oli edullisia vaikutuksia luun mikrorakenteeseen rotissa, joilta oli poistettu munasarjat, ja nämä vaikutukset voivat liittyä NF-KB- ja PI3K/AKT-signalointireitteihin, jotka laukaisivat RANKL:n, RANK:n ja TRAF6:n sitoutumisen.

Cistanche tubulosaon monia vaikutuksia, napsauta tästä saadaksesi lisätietoja

1. Esittely

Postmenopausaalisesta osteoporoosista, josta joka kolmas yli 50-vuotias nainen kärsii, on tulossa suurin terveysriski, joka koettelee yli 200 miljoonaa naista kaikkialla maailmassa [1]. Vaihdevuosien aikana estrogeenitason jyrkkä lasku johtaa yleensä lisääntyneen osteoklastogeneesin aiheuttamaan luun resorption ylittymiseen; sitten tasapaino osteoblastien aiheuttaman luunmuodostuksen ja osteoklastien aiheuttaman luun resorption välillä häiriintyi, ja kiihtynyt luun resorptio aiheutti lopulta osteoporoosin ja jopa lonkka- tai selkärangan murtuman [2]. Uskottiin, että osteoklastien erilaistuminen laukesi, kun ydintekijä kappa B:n (RANK) reseptoriaktivaattori sitoutui RANKL:iin, RANK:n ligandiin. RANK:n ja RANKL:n yhdistelmää ei kuitenkaan voida aktivoida, ellei proteiinituumorinekroositekijäreseptoriin liittyvää tekijää 6 (TRAF6) ole liitetty siihen [3], mitä seuraa myöhempien signaalireittien stimulointi, mukaan lukien PI3K/AKT ja NF-KB. Ja lopuksi, aktivoitujen T-solujen c2 (NFAT2) ja c-Fos ydintekijän ilmentymiä säädettiin [4] osteoklastien erilaistumisen sekä luun resorption moduloimiseksi. Siten tekijöitä ja säätelijöitä, jotka liittyvät suoraan tai epäsuorasti osteoklastien aktivaatioon ja erilaistumiseen, uskottiin olevan keskeisiä kohteita luukadon estämisessä.

On todellakin joitain kliinisiä ja synteettisiä hormonikorvaushoitolääkkeitä, kuten estradiolivaleraatti, jotka ovat tehokkaita postmenopausaalisen osteoporoosin hoidossa. Valitettavasti jotkut näistä lisäsivät vakavien syöpien, mukaan lukien rinta- ja endometriumin syöpien, riskiä [5], mikä rajoitti niiden kliinistä käyttöä. Siksi on tarpeen valita muita vaihtoehtoja, joilla on sekä tehokkuus että minimaaliset sivuvaikutukset. Perinteiset kiinalaiset lääkkeet (TCM) sekä eristetyt bioaktiiviset yhdisteet ja fraktiot [6–9] osoittautuivat tehokkaiksi erilaisissa vaivoissa, mukaan lukien postmenopausaalisessa osteoporoosissa. Näiden bioaktiivisten komponenttien ja fraktioiden joukossa fenyylietanoidiglykosidiyhdisteitä (PhG), joilla on potentiaalinen teho, uskottiin lupaaviksi aineiksi osteoporoosin hoidossa [10–12]. PhG:iden rakenteet koostuvat kanelihappoaglykonista, hydroksyylifenyylietyyliryhmästä, joka on yhdistetty -glukopyranoosiin, apioosiin, galaktoosiin, ramnoosiin tai ksyloosiin glykosidisidoksen kautta. Niitä esiintyy laajalti suvun lääkelajeissaCistanche[13]. CistanchedeserticolaYC Ma on virallinen TCM, joka on kirjattu Kiinan farmakopeaan, ja sen lisäksi, että C deserticola on tärkeä TCM [14], se on myös ikääntymistä estävä tonic yrtti, jolla on vähän sivuvaikutuksia ja josta on kehitetty valtion elintarvikeviraston hyväksymä lääkelikööri ja ravintoneste. ja lääkevirasto. Kiinan farmakopean tietueen perusteella alkuperäisasukkaat olivat perinteisesti käyttäneet C. deserticolaa hoitamaan munuaisesanssin puutosongelmia, kuten lihasten heikkoutta ja lannerangan heikkoutta, ja fenyylietanoidiglykosidiyhdisteet, mukaan lukien ekinakosidi ja akteosidi, ovat tämän yrtin tärkeimmät bioaktiiviset ainesosat. TCM-teorian "munuaiset hallitsevat luuta" mukaan luujärjestelmää hallitsee munuaisesanssi [15], ja luuhun liittyvät ongelmat, kuten osteoporoosi, voitaisiin korjata yrteillä tai yhdisteillä, joilla on munuaisesanssia ravitseva vaikutus. Siksi oletimme, että C. deserticolasta eristetty fenyylietanoidiglykosidifraktio oli ainakin osittain hyödyllinen osteoporoosin hoidossa. Tämän vuoksi nykyinen koe suunniteltiin vahvistamaan hypoteesimme käyttämällä OVX-rottamallia, josta on poistettu munasarjat; Luun resorption ja muodostumisen merkkiaineiden lisäksi, jotka on arvioitava, antioksidanttiindeksiä sekä RANKL/RANK/TRAF6--indusoituja PI3K/AKT- ja NF-κB-signalointireittejä käytettiin myös osteoporoottisen bioaktiivisuuden päämekanismien tutkimiseen. .

2. Materiaalit ja menetelmä

2.1. Kasvimateriaalit ja valmistus.

Yhteensä 30 kg varretCistanchedeserticolaY.C. Ma kerättiin Yongningin piirikunnasta syyskuussa 2015 koordinaatilla 106.026597 ja 38.262816, Ningxian maakunta, Kiina. Yrtti tunnisti tohtori Lin Dong (Ningxian lääketieteellisen yliopiston farmakognosian laitos) ja vastaavan näytteen (nro 201509{{40}}1) säilytettiin farmaseuttisen analyysin laitoksella. Ensin uutettiin 30,0 kg jauhettua C. deserticolaa käyttämällä palautusjäähdytysmenetelmää 70-prosenttisella etanolilla liuottimena; materiaalin ja liuottimen suhde asetettiin 1:10:ksi ja palautusjäähdytysaika oli 2 tuntia 3 kertaa. Sitten kaikki suodokset yhdistettiin ja kondensoitiin alennetussa paineessa 60 asteessa. Toiseksi alustavaan erotukseen käytettiin AB-8 makrohuokoisia hartsikolonneja ja erilaisia ​​etanolisuhteita vedessä (0 %, 20 %, Eluointiin käytettiin 30 prosenttia, 40 prosenttia, 50 prosenttia ja 60 prosenttia, kumpikin 60 litraa. Kolmanneksi 40 prosentin ja 50 prosentin eluentit yhdistettiin ja puhdistettiin edelleen käyttämällä toistuvia AB-8 makrohuokoisia hartsikolonneja, joissa eluentit olivat 0 prosenttia, 20 prosenttia, 30 prosenttia, 40 prosenttia ja 50 prosenttia etanolia vedessä, ja kukin eluentti oli 12 litraa. Lopuksi 40-prosenttinen fraktio kerättiin ja kondensoitiin alennetussa paineessa, jolloin saatiin 150 g vaaleankeltaista C. deserticolan (CDP, saanto oli 0,5 prosenttia) fenyylietanoidiglykosidifraktiota. In vivo -kokeita varten käytettiin 0,5 % CMC-Na-liuotinta CDP:n liuottamiseen; oraalinen antaminen eläimille asetettiin 1 ml:ksi/100 g ruumiinpainoa; in vitro Western blot -analyysiä varten CDP liuotettiin DMSO:lla ja laimennettiin sitten DMEM:llä, jotta saatiin lopulliset pitoisuudet 0,1 mg/ml, 0,01 mg/ml ja 0,001 mg/ml.

2.2. Kemikaalit ja liuottimet.

Estradiolivaleraatti (EV) oli Delpharm Lille SAS:lta Ranskasta; alkalisen fosfataasin (ALP), luun gla-proteiinin (BGP), tartraattiresistentin happaman fosfataasin (TRAP) ja deoksipyridinoliinin (DPD) silloitus ELISA-sarjat yhtiöltä Xinyu Biological Engineering Co. Ltd., Shanghai, Kiina, 201605; malondialdehydi (MDA, 20181221), superoksididismutaasi (SOD, 20121218) ja glutationi (GSH, 20181221) reagenssisarjat Institute of Nanjing Jiancheng Biological Engineeringistä, Nanjing, Kiina; lntact parathormoni (l-PTH, NEWASHE7UZ), kalsitoniini (2L9ISN7AIU) ja estrogeeniin liittyvä alfareseptori (ERR, Y3AY8QEWB3) silloittavat ELISA-sarjat yhtiöltä Elabscience Biotechnology Co. Ltd., Wuhan, Kiina; katepsiini K ELISA -reagenssipakkaus, BioVision, Amerikka, 11300141; RANKL:n (GR3193842-5), RANK:n (AA02113656), TRAF6:n (2), c-Fosin (AG12059411), NFAT2:n (AO11015648), NF-κB p65:n (AH04138226), PI3-alfakinaasin (p26638226), PI3-alfakinaasin (p2685) primaariset vasta-aineet. , AKT 1 (AF05173234), -aktiini (17AV0411) ja piparjuuriperoksidaasilla konjugoidun vuohen anti-kanin IgG:n sekundaariset vasta-aineet, ZSGB-BIO, Kiina, 136080; kokonais-BCA-proteiinin määrityspakkaus ja kaupallinen pakkaus oste oklastin muodostumisen ja naudan sikiön seerumin havaitsemiseksi ja Dulbeccon modifioitu Eagle-elatusaine (DMEM) yhtiöltä HyClone, Logan, UT, USA; polyvinylideeniflfluoridi (PVDF) -kalvo yhtiöltä Millipore Life Sciences, Billerica, MA, USA; penisilliini ja streptomysiini Gibcosta, Rockville, MD, USA. Kaikki muut käytetyt kemialliset aineet olivat AR-laatua.

2.3. HPLC-kvantifiointi Cistanche Deserticola P.

CDP:n koostumuksen tunnistamiseen ja kvantifiointiin käytettiin Agilent 1220 HPLC-laitetta. Kromatografiaolosuhteet olivat seuraavat: C18-kolonni (TSK-GEL, 4 6 I d × 250 mm, 5 μm); gradienttieluointi sisälsi liuottimet A (asetonitriili) ja B (vesi, joka sisältää 0,5 prosenttia etikkahappoa) (0-10 min: 17-20 prosenttia A; 10-30 min: 20-25 prosenttia A; ja 30-40 min: 25-30 prosenttia A); ilmaisuaallonpituus oli 333 nm; ympäristön lämpötila; virtausnopeus oli 1,0 ml/min; näytteen injektiotilavuus oli 5 µl. Kahdeksan PhG-yhdistettä, nimittäin cistanosidi F, ekinakosidi, 6'-asetyylilakteosidi, cistanosidi C, cistanosidi A, akteosidi, 2'-asetyylilakteosidi ja isoakteosidi, tunnistettiin; käyttämällä vastaavia vertailuaineita ja ulkoista standardimenetelmää edellä mainittujen 8 PhG:n pitoisuudet kvantifioitiin HPLC-analyysillä (kuva 1).

2.4. Animal Experimental Protocol.

Yhteensä 6 0 3 kuukauden ikäistä naaraspuolista aikuista Sprague-Dawley-rottaa oli tarkoitettu Ningxian lääketieteellisen yliopiston eläinkokeiden keskuksesta, joiden keskimääräinen alkupaino oli noin 234 ± 25 g. Rotat pidettiin tavanomaisessa spesifisessä patogeenivapaassa ympäristössä sopeutumaan 1 viikon ajan. Sitten kaikki rotat nukutettiin (kloraalihydraatti, 100 mg/kg, ip) vain tai näennäisesti munasarjapoisto (SHAM), tai molemmat munasarjat poistettiin ja jaettiin sitten satunnaisesti viiteen alaryhmään: käsiteltiin suun kautta vehikkelillä (0,5 % CMC- Na) asetettiin malliryhmäksi (OVX), estradiolivaleraatti (1 mg/kg/vrk) positiiviseksi ryhmäksi (EV) ja 60, 120 ja 240 mg/kg/vrk CDP:tä alhaiseksi (CDPL), kohtalainen (CDPM) ja suuri (CDPH) annosryhmiä, vastaavasti. Kaikille rotille annettiin suun kautta päivittäin ja ne kestivät 3 kuukautta annostusta säädettäessä 2 viikon välein, mikä riippui koko kehon painon muutoksesta. Eläinkokeen viimeisenä päivänä otettiin 24-tunnin virtsa käyttämällä aineenvaihduntahäkkejä; seerumi kerättiin nukutettujen rottien reisivaltimosta; oikea reisiluu, sääriluu ja kaikki elimet leikattiin ja säilytettiin -80 C asteessa lisäanalyysiä varten. Suorittamamme eläinkokeet hyväksyttiin Ningxian lääketieteellisen yliopiston Institutional Animal Care and Use -komiteassa.

2.5. Luun mineraalitiheyden määritys ja mikro-CT-analyysi.

Ensinnäkin käytettiin kaksienergiaista röntgenabsorptiometrialaitetta (Lunar, USA) kunkin rotan oikean reisiluun kokonaisluun mineraalitiheyden arvioimiseen; toiseksi samaa reisiluuta käytettiin arvioimaan trabekulaarisen luun mikroarkkitehtuurin 3D-kuvaa käyttämällä mikro-CT-skanneria (GE, Amerikka). Isotrooppiseksi resoluutioksi asetettiin 14 μm ihanteellisen 3D-kuvan saamiseksi; kiinnostava alue (ROI) valittiin asettamalla samat koordinaatit kunkin näytteen reisiluun kasvulevyyn; ja luun morfometriset parametrit, mukaan lukien trabekulaarinen erottuminen (Tb. Sp), trabekulaariluku (Tb. N), trabekulaarinen paksuus (Tb. Th), luun mineraalipitoisuus (BMC), kudoksen mineraalitiheys (TMD) ja kudoksen mineraalipitoisuus (TMC) ) saatiin analysoimalla ROI.

2.6. Seerumin ja virtsan biokemiallinen määritys.

Seerumin katepsiini K:n, TRAP:n, SOD:n ja GSH:n aktiivisuudet sekä seerumin PTH-, kalsitoniini-, ERR-, MDA-, BGP- ja virtsan DPD-pitoisuudet määritettiin käyttämällä vastaavia reagenssipakkauksia valmistajan ohjeiden mukaisesti. Alkalisen fosfataasin (ALP) taso sekä seerumin ja virtsan kalsiumin (Ca) ja fosforin (P) pitoisuudet arvioitiin automaattisella koneella (Ciba-Corning 550 Diagnostics Corp., Oberlin, OH, USA).

2.7. Western Blot -analyysi.

Osteoklastit indusoitiin käyttämällä RAW 264.7 -soluja, joihin oli lisätty makrofagipesäkkeitä stimuloivaa tekijää (MCSF) ja RANKL:ää. Lyhyesti sanottuna 1 × 107 RAW 264.7 -solua viljeltiin 6-kuoppalevyllä 30 ng/ml MCSF:n ja 25 ng/ml RANKL:n läsnä ollessa. Kuuden päivän induktion jälkeen kypsyneet osteoklastisolut tunnistettiin käyttämällä TRAP-värjättyä menetelmää vastaavan pakkauksen kanssa ja käsiteltiin sitten CDP:llä (0,1, 0,01 ja 0,001 mg/ml). vastaavasti) 24 tunnin ajan; sitten solut hajotettiin lyysipuskurilla, joka sisälsi 0,5 mmol fenyylimetyylisulfonyylifluoridia, proteaasi- ja fosfataasin estäjiä. Lysaatti erotettiin sitten käyttämällä 10-prosenttista SDS-PAGE:ta ja siirrettiin PVDF-kalvolle, joka tutkittiin AKT1:llä, NF-KB-p65:llä, RANKL:llä, PI3K-p85:llä, RANK:lla, NFAT2:lla, TRAF6:lla, c-Fos:lla ja -aktiinilla. (1:400) 5 prosentin rasvattoman maidon salpauksen jälkeen 2 tunnin ajan. Samat kalvot irrotettiin ja tutkittiin uudelleen edellä mainituilla 9 vastaavalla vasta-aineella, minkä jälkeen ne havaittiin Image Lab -ohjelmistolla lopussa. Kokeet toistettiin kolme kertaa.

2.8. Tilastollinen analyysi.

Kaikki in vivo- ja in vitro -kokeista saadut tiedot, jotka kuvattiin keskiarvona ± SD, analysoitiin käyttämällä yksisuuntaista ANOVA:ta ja sen jälkeen Dunnettin testiä (SPSS 22.0 ohjelmisto, SPSS, USA); p < 0="" 05="" oli="" tilastollisesti="">

Tulokset

3.1. Cistanche Deserticola P.:n kemiallinen koostumus.

HPLC-menetelmää käyttämällä kahdeksanfenyylietanoidiglykosidiyhdisteitä löydettiin tästä fraktiosta, kuten kuvio 1 osoittaa. Standardiviittauksia ja ulkoista standardimenetelmää käyttämällä yhdisteet ja niiden pitoisuudet tunnistettiin ja määritettiin seuraavasti: (1) akteosidi F (3,6 prosenttia), (2) ekinakosidi (8,8 prosenttia), (3) cistanosidi A (5.{101} {9}} prosenttia), (4) akteosidi (13,3 prosenttia), (5) isoakteosidi (3,3 prosenttia), (6) akteosidi C (3,6 prosenttia), (7) 2'-asetyylilakteosidi (9,9 prosenttia) ja (8) ) 6'-asetyylilakteosidi (3,2 prosenttia). Näiden kahdeksan komponentin kokonaispitoisuudeksi määritettiin 50,7 prosenttia.

3.2. Cistanche Deserticola P:n vaikutukset luun mineraalitiheyteen ja trabeculan mikroarkkitehtuuriin.

Eri alaryhmien rottien kokonaisluun mineraalitiheys on esitetty kuvassa 2. Luun mineraalitiheyden pitoisuudessa havaittiin laskusuuntaus OVX-malliryhmän rotilla, joka väheni lähes 12.0 prosenttia jälkeen. 12 viikkoa leikkauksesta verrattuna SHAM-ryhmän rottiin (p < 0="" 001).="" kaikilla="" cdp-käsitellyillä="" rotilla="" luun="" mineraalitiheys="" lisääntyi="" merkittävästi="" 11,2="" prosenttia,="" 12.0="" prosenttia="" ja="" 10,7="" prosenttia="" (p="">< 0="" 01)="" verrattuna="" ovx-mallin="" rottiin.="" ryhmä.="" lisäksi="" luun="" kokonaistiheyttä="" koskevien="" tietojen="" mukaisesti="" mikro-ct-rekonstruktio="" sekä="" reisiluun="" histomorfometrinen="" määritys="" osoittivat,="" että="" ovx-ryhmän="" rotilla="" trabekulaarinen="" arkkitehtuuri="" oli="" selvästi="" heikentynyt,="" mikä="" osoitti="" myös="" trabeculan="" huomattavan="" määrän="" ja="" pinta-alan="" pienenemisen.="" kuin="" selvästi="" lisääntynyt="" tb.="" sp="" verrattuna="" sham-ryhmän="" rottiin.="" cdp-hoito="" esti="" ovx:n="" aiheuttaman="" trabekulaarisen="" arkkitehtuurin="" huononemisen;="" kuten="" kuvio="" 3="" osoittaa,="" bmc,="" tmc="" ja="" tb.="" n-arvot="" kasvoivat="" merkittävästi="" ja="" tb:n="" pinta-ala.="" sp="" laski="" huomattavasti,="" kun="" taas="" tmd:n="" ja="" tb:n="" arvot.="" ovx-toiminta="" ja="" cdp-interventiomme="" eivät="" vaikuttaneet="" niihin="">

3.3. Cistanche Deserticola P:n vaikutukset virtsan ja seerumin biokemiallisiin parametreihin.

Kuten kuva 4 osoittaa, virtsan P-tasossa ja seerumin kalsitoniinipitoisuudessa havaittiin merkittäviä laskusuuntauksia OVX-malliryhmän rotilla, mikä oli lähes 30 prosenttia ja 60 prosenttia vähemmän kuin SHAM-rotilla (p < 0="" 001="" ),="" kun="" taas="" ovx-="" ja="" sham-ryhmien="" välillä="" ei="" havaittu="" ilmeisiä="" nousevia="" tai="" laskevia="" suuntauksia="" virtsan="" ca-="" ja="" seerumin="" ca-tasoissa="" sekä="" seerumin="" p-="" ja="" pth-tasoissa.="" käsittely="" cdp:llä="" esti="" merkittävästi="" seerumin="" p-="" ja="" ca-häviötä="" ovx-rotilla,="" mikä="" on="" osoituksena="" seerumin="" p-="" ja="" ca-tasojen="" huomattavasta="" lisääntymisestä="" (p="">< 0="" 05)="" verrattuna="" ovx-malliryhmän="" rottiin.="" lisäksi="" kalsitoniinin="" lisääntyneitä,="" mutta="" ei-statistisesti="" merkittäviä="" suuntauksia="" havaittiin="" sekä="" cdp:n="" pieni-="" että="" suuriannosryhmissä="" verrattuna="">

3.4. Cistanche Deserticola P:n vaikutukset luun muodostumiseen ja luun resorptiomarkkereihin.

CDP:n edulliset vaikutukset luunmuodostusindeksiin sekä estovaikutukset luun resorptiomarkkereihin on kuvattu kuvassa 5. Mitä tulee luunmuodostusmarkkereihin, seerumin BGP-tasoihin ei juurikaan vaikuttanut munasarjojen poistoleikkaus, mikä osoitti ei- merkittäviä muutoksia havaittiin kaikissa hoidetuissa ryhmissä, kun taas tilastollisesti merkitseviä parannuksia seerumin ALP-arvossa saavutettiin sekä pienillä (60 mg/kg) että kohtalaisilla (120 mg/kg) CDP-interventioryhmien annoksilla. verrattuna SHAM-ryhmän rottiin (p < 0="" 01).="" luun="" resorptioindeksin="" osalta="" seerumin="" katepsiini="" k:n="" ja="" dpd:n="" sekä="" trap:n="" tasot="" ovx-malliryhmän="" rotilla="" paranivat="" merkittävästi="" noin="" 75,0="" prosenttia,="" 41,4="" prosenttia="" ja="" 21,0="" prosenttia="" verrattuna="" sham-rotteihin.="" ja="" kun="" niitä="" käsiteltiin="" cdp:llä,="" erityisesti="" pienellä="" annoksella="" 60="" mg/kg,="" katepsiini="" k:n="" ja="" dpd:n="" sekä="" trap:n="" ominaisuudet="" ovx-malliryhmässä="" estyivät="" merkittävästi="" 67,3="" prosentilla,="" 41,4="" prosentilla="" ja="" 25,9="" prosentilla.="" verrattuna="" ovx-malliryhmän="">

3.5. Cistanche Deserticola P:n vaikutukset emättimeen ja kohtuun sekä koko kehon painoon.

Ei-merkittäviä eroja rottien alkuperäisissä koko kehon painoissa havaittiin ennen käsittelyä kuudessa ryhmässä (kuvio 6). Munasarjapoistoleikkaus johti kuitenkin merkittävään kasvuun OVX-malliryhmän rottien lopullisessa ruumiinpainossa, joka on lähes 36.0 prosenttia, kun taas kohdun ja emättimen märkäpainot laskivat dramaattisesti lähes 9{{4 }}.0 prosenttia ja 60,0 prosenttia verrattuna SHAM-rotteihin (p < 0="" 001).="" vaikka="" err-sisällössä="" ei="" ollut="" merkittävää="" eroa="" ovx-="" ja="" sham-ryhmien="" välillä,="" kaikki="" hoitoryhmät,="" mukaan="" lukien="" cdp="" ja="" ev,="" lisäsivät="" merkittävästi="" err-tasoa.="" lisäksi="" yllämainittujen="" koko="" kehon="" painon="" nousu="" sekä="" ovx-rottien="" emättimen="" ja="" kohdun="" painon="" menetys="" kääntyivät="" osittain="" päinvastaiseksi="" (p="">< 0="" 001),="" mutta="" cdp-interventio="" ei="" vaikuttanut="">

3.6. Cistanche DeserticolaP:n vaikutukset seerumin MDA-, SOD- ja GSH-tasoihin.

Seerumin SOD:n ja GSH:n ominaisuuksissa ei ollut tilastollisesti merkitsevää eroa SHAM- ja OVX-malliryhmien välillä; kuten kuvio 7 kuvaa, GSH:n kasvutrendi voidaan havaita kahden yllä olevan ryhmän välillä. Lisäksi seerumin MDA-taso nousi jyrkästi lähes 50 prosentilla OVX-malliryhmän rotilla verrattuna SHAM-rottiin. CDP-hoito ei vaikuttanut SOD:n aktiivisuuteen, kun taas CDP:n interventio paransi GSH:n ominaisuuksia merkittävästi, ja CDP alensi MDA:n tasoa huomattavasti 33,9 prosenttia ja 42,4 prosenttia annoksilla 60 ja 240 mg/kg. p < 0="">

3.7. Cistanche deserticola P:n vaikutukset proteiinin ilmentymistasoihin.

Tietomme, jotka esitetään kuviossa 8, viittasivat siihen, että CDP-käsittely vähensi merkittävästi TRAF6:n, RANK:n ja RANKL:n proteiinitasoja kontrolliin verrattuna. Alavirran signaalireitit, mukaan lukien NF-KB, tukahdutettiin, ja PI3K/AKT stimuloitiin CDP-interventiolla, mikä osoitti NF-KB-p65:n alasäätelyn ilmentymistä, kun taas PI3K-p85 ja AKT1 lisääntyivät. Tämän seurauksena NFAT2:n ilmentyminen väheni merkittävästi ja c-Fos lisääntyi CDP-käsittelyn jälkeen konsentraatiolla 0.001-0,1 mg/ml. Kuvassa 9 on kuvattu ehdotettu mekanismi, jossa CDP alensi RANKL:n ja RANK:n tasoja, mikä johti tämän ligandin sitoutumismäärien vähenemiseen sen reseptorin kanssa, ja RANKL:n yhteyttä RANK:iin vähensi edelleen TRAF6:n alasäätely. jota seurasi alavirran kulkureittien, mukaan lukien NF-KB-reitti, tukahduttaminen, kun taas PI3K/AKT-signaalireitti stimuloitiin, mikä lopulta johti NFAT2-ilmentymisen vähenemiseen ja c-Fos-tason nousuun.

4. Keskustelu

Fenyylietanoidiglykosidit ovat luonnossa esiintyviä vesiliukoisia komponentteja, joita esiintyy laajalti lääkekasvikunnassa [11]. Tähän mennessä fenyylietanoidiglykosidien yhdisteet ovat houkutelleet yhä enemmän tutkijoita, koska niillä on ilmeinen rooli ihmisten erilaisten vaivojen ja poikkeavuuksien hoidossa [13]. Lukuisat osteoporoottisia bioaktiivisia fraktioita ja yhdisteitä, mukaan lukien polyfenoli- ja fenyylietanoidiglykosidit, tunnistettiin ja eristettiin kymmenistä luonnollisista lääkeyrteistä [5, 10, 12, 16, 17]. C. deserticola tunnetaan hyvin nimellä "aavikon ginseng", mikä merkitsi tämän syötävän TCM:n turvallisuusprofiilia [18, 19]. Yleisenä tonisoivana yrttinä ja luonnollisena terveysruokana, jota on pitkään käytetty Aasian maissa, C. deserticola osoitti hyödyllistä toimintaa munuaisten vahvuuden parantamisessa. Todettiin, että TCM:ää, jota perinteisesti käytettiin munuaisesanssin virkistykseen ja säilyttämiseen, käytettiin yleensä osteoporoosin hoitoon. Sekä in vitro että in vivo julkaistut tiedot olivat osoittaneet C. deserticolan [20–23] ja fenyylietanoliglykosidiaineosien osteoporoosin vastaisen vaikutuksen. ekinakosidi ja akteosidi ovat tärkeimmät bioaktiiviset komponentit, joita on tässä syötävässä lääkekasvissa; kaikki viittasivat siihen, että itse ekinakosidin ja akteosidin lisäksi myös muiden C. deserticolan sisältämien fenyylietanoidiglykosidikomponenttien katsottiin olevan vastuussa tämän yrtin osteoporoottisista ominaisuuksista. Tässä tutkimuksessamme käytettiin suotuisaa turvallista makrohuokoista hartsia eristämään ja rikastamaan fenyylietanoidiglykosidifraktiota C. deserticolasta, ja HPLC-menetelmällä kahdeksan pääasiallista fenyylietanolidiglykosidikomponenttia, nimittäin akteosidi F, ekinakosidi, cistanosidi A, akteosidi, Isoakteosidia, akteosidi C:tä, 2'-asetyylilakteosidia ja 6'-asetyylilakteosidia löydettiin eristetystä fenyylietanoidiglykosidifraktiosta, ja pitoisuudet olivat 3,6 prosenttia, 8,8 prosenttia, 5,0 prosenttia, 13,3 prosenttia, 3,9 prosenttia, 3,9 prosenttia. ja 3,2 prosenttia. Ekinakosidilla, yhdellä C. deserticolan [14] tärkeimmistä aktiivisista yhdisteistä, on osoitettu olevan osteoporoottista vaikutusta; 270 mg/kg:n annos oli kuitenkin niin suuri, että se rajoitti sen kliinistä käyttöä [24]. Nykyisissä kokeissa OVX-rotilla käytettiin fenyylietanoidiglykosidin kokonaisfraktiota pienemmällä annoksella 60-240 mg/kg/vrk, ja tunnistettujen ainesosien pitoisuudet olivat lähes 50-prosenttisesti puhdasta tässä fraktiossa käyttämällä HPLC-menetelmällä.

Tiedettiin hyvin, että OVX voi aiheuttaa osteoporoosia, ja OVX-rotan uskottiin olevan klassinen ja sopiva malli simuloimaan ihmisen postmenopausaalista osteoporoosia. Samaan aikaan luun mineraalitiheyden, trabekulaarisen luun mikroarkkitehtuurin, kohdun ja emättimen märkäpainon ja estrogeenitason merkittävää laskua sekä luun resorption ja kehon painon selvää parantumista havaittiin munasarjojen poistoleikkauksen jälkeen. osittain estrogeenin menetyksestä [25]. Tähänastiset tietomme ovat selvästi osoittaneet, että OVX todellakin aiheutti postmenopausaalista osteoporoosia ja siihen liittyy aina luun laadun, luun mikroarkkitehtuurin sekä kohdun ja emättimen märkäpainon jyrkkä heikkeneminen. Koska EV on yleinen hormonikorvausaine, jota on käytetty kliinisessä käytännössä, sitä käytettiin positiivisena kontrollina in vivo -kokeessamme sekä noussut painon ja atrofian kohdun painot sekä heikentynyt luun mineraalitiheys ja trabekulaarisen luun mikroarkkitehtuuri. , olivat odotettavissa päinvastaisia ​​sähköautojen lisäyksellä. Positiivisesta kontrollista poiketen CDP-hoito ei vaikuttanut OVX-malliryhmän rottien alentuneisiin emättimen ja kohdun painoihin sekä lisääntyneeseen koko kehon painoon, mikä merkitsi, että CDP saattoi tehostaa luun muodostumista aiheuttamatta sivuvaikutuksia. kehossa ja kohdun orgaanisissa kudoksissa. Vaikka CDP-hoito nosti ERR-tasoja merkittävästi, se oli aivan kuin fytoestrogeenivaikutus, ettei kohdun ja emättimen orgaanisissa kudoksissa havaittu sivuvaikutuksia. Lisäksi CDP:n hoito vahvisti merkittävästi OVX-rottien luun laatua, joka oli huonontunut munasarjojen poistoleikkauksen seurauksena.

Lisäksi OVX-rottien virtsan ja seerumin P- ja Ca-tasoja käytettiin myös heijastamaan osteoporoottista vaikutusta, ja Ca:n ja epäorgaanisen P:n pitoisuudet olivat yleensä riippuvaisia ​​kalsitoniinin ja PTH:n tasoista [26]. Vaikka tässä tutkimuksessa OVX-malliryhmän rottien Ca-, seerumi-P-, seerumin Ca- ja PTH-eritystasoissa ei havaittu merkittäviä laskevia tai lisääntyviä suuntauksia virtsan P- ja kalsitoniinitasoille (p < {="" {1}})="" havaittiin.="" yhdenmukaisesti="" julkaistujen="" tietojen="" kanssa,="" joiden="" mukaan="" munasarjojen="" poistoleikkauksen="" aiheuttama="" estrogeenipuutos="" johti="" aina="" veren="" kalsitoniinitason="" laskuun,="" tämä="" alentunut="" seerumin="" kalsitoniini="" johti="" lopulta="" kohonneeseen="" pth-tasoon,="" jossa="" ca:n="" uskottiin="" olevan="" tärkein="" pth-erityksen="" säätelijä.="" koska="" pth:n="" konsentraatio="" ei="" osoittanut="" merkittävää="" eroa="" ovx-="" ja="" sham-ryhmien="" välillä="" tässä="" tutkimuksessa,="" ca-taso="" sekä="" seerumissa="" että="" virtsassa="" ei="" myöskään="" osoittanut="" ilmeisiä="" muutoksia="" kahden="" yllä="" olevan="" ryhmän="" välillä.="" kuitenkin="" havaittiin="" merkittävästi="" alentunut="" taipumus="" kalsitoniinin="" tasossa="" ovx-="" ja="" sham-ryhmien="" välillä,="" ja="" tämän="" seurauksena="" p-pitoisuus="" ovx:n="" virtsassa="" väheni="" voimakkaasti.="" uskoimme,="" että="" yllä="" olevat="" tiedot="" voivat="" selittää="" ristiriitaisen="" ilmiön,="" miksi="" ovx-rottien="" ca-pitoisuuden="" erittyminen="" virtsaan="" ei="" osoittanut="" selvää="" muutosta="" verrattuna="" sham-rotteihin,="" ja="" tämä="" ilmiö="" saattaa="" liittyä="" myös="" luun="" vaihtuvuuden="" lisääntymiseen="" [27]="" .="" cdp-hoidon="" jälkeen="" seerumin="" p-="" ja="" ca-tasot="" nousivat="" huomattavasti="" ja="" virtsan="" p-pitoisuus="" aleni="" ovx-rotilla,="" mikä="" osoitti,="" että="" cdp="" ei="" voinut="" vain="" estää="" luun="" mineraalielementtien="" erittymistä,="" vaan="" myös="" parantaa="" näiden="" rottien="" seerumipitoisuutta.="" elementtejä,="" mikä="" estää="" epäsuorasti="">

Lisäksi luunmuodostus- ja resorptiomarkkereita sekä antioksidanttisia entsyymejä, mukaan lukien SOD ja GSH, käytettiin myös selittämään CDP:n taustalla olevia osteoporoottisia mekanismeja. Kuten julkaistut tiedot, ALP-taso OVX-malliryhmän rotilla osoitti ei-tilastollisesti merkitsevää noususuuntausta, mikä osoittaa luun vaihtuvuuden kiihtymisen postmenopausaalisessa osteoporoosissa [10]. Kuitenkin CDP-hoidon (60, 120 ja 240 mg/kg/päivä) jälkeen ALP:n ominaisuus parani merkittävästi. Tiedettiin hyvin, että OVX aiheutti estrogeenitasojen jyrkän laskun, mikä yleensä johtaa ylittyneeseen luun resorptioon ja oksidatiiviseen stressiin [28], mistä on osoituksena TRAP:n, katepsiini K:n ja DPD:n sekä MDA:n tasot, jotka lisääntyivät huomattavasti rotissa. OVX malliryhmä. CDP:n interventio paransi kuitenkin osittain näitä heikkenemiä. Lisäksi OVX-rotan käsittely CDP:llä (60 ja 240 mg/kg) osoitti GSH:n aktiivisuuden merkittävän lisääntymisen (p < 0="" 05).="" yllä="" olevat="" tulokset="" viittasivat="" siihen,="" että="" cdp:llä="" oli="" terapeuttinen="" vaikutus="" ovx:n="" aiheuttamaan="" osteoporoosiin,="" ja="" nämä="" vaikutukset="" olivat="" sekä="" luun="" muodostumista="" tehostamalla="" että="" luun="" resorptiota="" suppressoimalla="" sekä="" luun="" antioksidanttijärjestelmää="">

RANK:n aktivointi sen ligandilla RANKL stimuloi NFAT2:n ja c-Fosin ilmentymistä PI3K/AKT- ja NF-KB-signaloinnin kautta [29]. NF-κB osoittautui välttämättömäksi osteoklastogeneesille, koska NF-KB:n hajoaminen saattoi johtaa heikentyneeseen osteoklastien erilaistumiseen osteoporoottisen fenotyypin kanssa, ja NF-kB lisäsi c-Fos:a ja vähensi NFAT2-ekspressiota RANKL/RANK/TRAF-indusoidun osteoklastogeneesin aikana. CDP:n hyödyllisen vaikutuksen arvioimiseksi NFAT2- ja c-Fos-välitteiseen osteoklastogeneesiin analysoitiin RANKL:n ja RANK:n ilmentymistasot. Oletettavasti CDP esti merkittävästi NFAT2:ta ja stimuloi c-Fos-tasoja alentamalla RANKL:n ja RANK:n ilmentymiä. Samaan aikaan RANK:lta itseltään puuttui sisäinen kinaasiominaisuus, ellei TRAF6 ole liittänyt sitä alavirran signaloinnin laukaisemiseksi [3]. CDP myös vähensi TRAF6:n ilmentymistä, mikä johti RANKL:n ja RANK:n sitoutumismäärien vähenemiseen merkittävästi. Oletus CDP:n osteoporoottinen mekanismi OVX-rotilla kattoi yllä olevat signalointireitit, ja säätelijät on kuvattu kuvassa 9. Lyhyesti sanottuna CDP alensi TRAF6-, RANKL- ja RANK-tasoja, mikä tukahdutti alavirran signalointireittejä, mukaan lukien PI3K/AKT ja NF-KB, jotka RANKL/RANK laukaisee ja lopulta vähensivät tärkeimpien osteoklastogeenisten proteiinien NFAT2 ja c-Fos ilmentymistä ja aktiivisuuksia. Siksi useat vihjeet tiedoista osoittivat CDP:n suotuisan vaikutuksen OVX-rottien luumetaboliaan pääasiassa RANKL/RANK/TRAF{25}}välitteisten PI3K/AKT- ja NF-κB-reittien kautta.

5. Päätelmät

Yhteenvetona voidaan todeta, että C. deserticolasta eristettyjen fenyylietanoidiglykosidien kokonaismäärällä oli merkittäviä edullisia vaikutuksia OVX-rottien postmenopausaaliseen osteoporoosiin, ja terapeuttinen potentiaali luukadon estämisessä oli pääasiassa stimuloimalla luun muodostumista ja estämällä luun resorptiota sekä parantamalla luun antioksidanttia. järjestelmä; mekanismit voivat liittyä RANKL/RANK/TRAF{0}}indusoituun NF-KB-aktivaatioon ja PI3K/AKT-inaktivaatioon sekä c-Fos-stimulaatioon ja NFAT2-suppressioon, ja lopuksi osteoklastien erilaistuminen estyi.

Lyhenteet

AKT: Proteiinikinaasi B

ALP: Alkalinen fosfataasi

BGP: Luun GLA-proteiini

BMC: Luun mineraalipitoisuus

CDP: C. deserticolan fenyylietanoliglykosidifraktio

CK: Katepsiini K

CT: Kalsitoniini

DPD: Deoksipyridinoliini

ERR: Estrogeeniin liittyvä alfareseptori

EV: Estradiolivaleraatti

GSH: Glutationi-l-PTH: ehjä parathormoni

MCSF: Makrofagipesäkkeitä stimuloiva tekijä

MDA: Malondialdehydi

NFAT2: Aktivoitujen T-solujen ydintekijä c2

NF-κB: Ydintekijä-kappa B

OPG: Osteoprotegeriini

OVX: Munasarjat poistettu

PhG:t: Fenyylietanoliglykosidit

PI3K: fosfoinositidi-3-kinaasi

RANK: ydintekijä-kappa B:n reseptoriaktivaattori

RANKL: Ydintekijä-kapan reseptoriaktivaattori

B-ligandin ROI: Kiinnostava alue

SOD: Superoksididismutaasi

Tb. N: Trabekulaariluku

Tb.Sp: Trabekulaarinen erotus

Tb.Th: Trabekulaarinen paksuus

TCM: Perinteinen kiinalainen lääketiede

TMC: Kudosten mineraalipitoisuus

TMD: Kudosten mineraalitiheys

TNF: Tuumorinekroositekijä

TRAF6: Tuumorinekroositekijäreseptoriin liittyvä tekijä 6

TRAP: Tartraattiresistentti hapan fosfataasi.

Tietojen saatavuus

Tämän tutkimuksen tulosten tueksi käytetyt tiedot ovat saatavilla pyynnöstä vastaavalta kirjoittajalta.

Eturistiriitoja

Kirjoittajilla ei ollut eturistiriitaa.

Kirjoittajien panokset

XM suunnitteli ja valvoi kokeita; SD ja LY suorittivat suurimman osan kokeista ja laativat käsikirjoituksen; BZ ja JL suorittivat Western blot -analyysin ja osallistuivat eläinkokeisiin; YD analysoi tiedot; QT ja PY korjasivat käsikirjoituksen. Kaikki kirjoittajat arvostelivat käsikirjoituksen. Lingling Yang ja Shuqin Ding osallistuivat käsikirjoitukseen yhtä paljon.

Kiitokset

Tätä työtä tukivat Ningxian tiedeteknologiasäätiön (NGY2017090), Kiinan kansallisen luonnontieteiden säätiön (nro 81560684), Ningxian keskeisen tutkimus- ja kehitysohjelman (2018BHF2001), Ningxian avaintutkimuksen ja Idän ja lännen tiede- ja teknologiayhteistyön keksintöohjelma (nro 2017BY084 ja 2017BY079) ja Kiinan tiedeakatemian West Light Foundation - Young Scientists of West 2017.

Viitteet

[1] LJ Melton III, EA Christchilles, C. Cooper, AW Lane ja BL Riggs, "Perspective. Kuinka monella naisella on osteoporoosi?", Journal of Bone and Mineral Research, voi. 7, ei. 9, s. 1005–1010, 1992.

[2] S. Schnell, SM Friedman, DA Mendelson, KW Bingham ja SL Kates, "Ikääntyneiden lonkkamurtumaohjelmassa hoidettujen potilaiden 1-vuoden kuolleisuus", Geriatric Orthopedic Surgery & Rehabilitation, voi. 1, ei. 1, s. 6–14, 2010.

[3] EM Tan, L. Li, IR Indran, N. Chew ja EL Yong, "TRAF6 välittää osteoklastogeneesin suppressiota ja munasarjojen poiston aiheuttaman luukadon estämistä uudella prenyyliflavonoidilla", Journal of Bone and Mineral Research, voi. 32, nro. 4, s. 846–860, 2017.

[4] JH Kim ja N. Kim, "Regulation of NFATc1 in osteoclast differentiation", Journal of Bone Metabolism, voi. 21, ei. 4, s. 233–241, 2014.

[5] Q. Ye, XQ Ma, CL Hu et ai., "Antiosteoporotic activity and constituents of Podocarpium podocarpus", Phytomedicine, voi. 22, ei. 1, s. 94–102, 2015.

[6] SA Jang, HS Song, JE Kwon, et ai., "Protocatechuic acid attenuates trabecular bone loss in ovariectomized hiir", Oxidative Medicine and Cellular Longevity, voi. 2018, artikkelin tunnus 7280342, 11 sivua, 2018.

[7] AB Abdel-Naim, AA Alghamdi, MM Algandaby, et ai., "Chrozophora tinctoriasta eristetty rutiini tehostaa luusolujen lisääntymistä ja luutumista", Oxidative Medicine and Cellular Longevity, voi. 2018, artikkelin tunnus 5106469, 10 sivua, 2018.

[8] J. Wattanathorn, C. Thipkaew, W. Thukham-mee, S. Muchimapura, P. Wannanon ja T. Tong-un, "Morindacitrifolia L. -lehtiuute suojaa aivoiskemialta ja osteoporoosilta in vivo -kokeellisessa mallissa vaihdevuodet", Oxidative Medicine and Cellular Longevity, voi. 2018, artikkelin tunnus 1039364, 13 sivua, 2018.

[9] S. Sungkamanee, J. Wattanathorn, S. Muchimapura ja W. Thukham-mee, "Antiosteoporotic effect of a kombinált uutteen Morus alba ja Polygonum odoratum", Oxidative Medicine and Cellular Longevity, voi. 2014, artikkelin tunnus 579305, 9 sivua, 2014.

[10] J. Liu, Z. Zhang, Q. Guo, Y. Dong, Q. Zhao ja X. Ma, "Syringin estää luukatoa hiirissä, joilta on poistettu munasarjat TRAF6-välitteisen NF-KB:n eston ja PI3K/AKT:n stimulaation kautta ", Phytomedicine, voi. 42, s. 43–50, 2018.

[11] CW Lu, SK Huang, TY Lin ja SJ Wang, "Echinacoside, Herba Cistanchen aktiivinen ainesosa, suppressoi epileptiformista aktiivisuutta hippokampuksen CA3-pyramidaalisissa neuroneissa", The Korean Journal of Physiology & Pharmacology, voi. 22, ei. 3, s. 249–255, 2018.

[12] X. Xu, Z. Zhang, W. Wang, H. Yao ja X. Ma, "Therapeutic effect of cistanosid A on luu metabolia of ovariectomized hiice", Molecules, voi. 22, ei. 2, s. 197, 2017.

[13] K. Alipieva, L. Korkina, IE Orhan ja MI Georgiev, "Verbascoside – katsaus sen esiintymiseen, (bio)synteesiin ja farmakologiseen merkitykseen", Biotechnology Advances, voi. 32, nro. 6, s. 1065–1076, 2014.

[14] Kiinan farmakopean toimituskomitea, Kiinan kansantasavallan farmakopea, China Medical Science and Technology Press, Peking, Kiina, 10. painos, 2015.

[15] H. Zhang, WW Xing, YS Li et ai., "Effects of a perinteisen kiinalaisen kasviperäisen valmisteen vaikutukset osteoblasteihin ja osteoklasteihin", Maturitas, voi. 61, nro. 4, s. 334–339, 2008.

[16] X. Ma, J. Liu, L. Yang, B. Zhang, Y. Dong ja Q. Zhao, "Cynomorium songaricum estää luun resorption rotissa, joilta on poistettu munasarjat RANKL/RANK/TRAF6-välitteisen PI3K/AKT:n ja NF-κB-reitit", Life Sciences, voi. 209, s. 140–148, 2018.

[17] XQ Ma, T. Han, X. Zhang, et ai., "Kaempferitrin estää luukatoa rotilla, joilta on poistettu munasarjat", Phytomedicine, voi. 22, ei. 13, s. 1159–1162, 2015.

[18] PL Liao, CH Li, LS Tse, JJ Kang ja YW Cheng, "Cistanche tubulosan terveysruokatuotteen Memoregain® turvallisuusarviointi: genotoksisuus ja 28-päivän toistuvan annoksen toksisuustesti", Food and Chemical Toxicology , voi. 118, s. 581–588, 2018.

[19] CC Wong, HB Li, KW Cheng ja F. Chen, "Systemaattinen tutkimus 30 kiinalaisen lääkekasvin antioksidanttiaktiivisuudesta käyttäen ferriä vähentävää antioksidanttitehomääritystä", Food Chemistry, voi. 97, nro. 4, s. 705–711, 2006.

[20] D. Song, Z. Cao, Z. Liu, et ai., "Cistanche deserticola polysaccharide attenuates osteoklastogeneesiä ja luun resorptiota inhiboimalla RANKL-signalointia ja reaktiivisten happilajien tuotantoa", Journal of Cellular Physiology, voi. 233, nro. 12, s. 9674–9684, 2018.

[21] HD Liang, F. Yu, ZH Tong, HQ Zhang ja W. Liang, "Cistanches Herba vesipitoinen uute, joka vaikuttaa seerumin BGP:hen ja TRAP:iin ja luuytimen Smad1-mRNA-, Smad5-mRNA-, TGF- 1-mRNA- ja TIEG1-proteiiniin mRNA:n ilmentymistasot osteoporoosisairaudessa", Molecular Biology Reports, voi. 40, ei. 2, s. 757–763, 2013.

[22] TM Li, HC Huang, CM Su et ai., "Cistanche deserticola -uute lisää luun muodostumista osteoblasteissa", Journal of Pharmacy and Pharmacology, voi. 64, nro. 6, s. 897–907, 2012.

[23] H. Liang, F. Yu, Z. Tong ja Z. Huang, "Effect of Cistanches Herba vesipitoinen uutteen luun häviämiseen in ovariectomized rot", International Journal of Molecular Sciences, voi. 12, ei. 8, s. 5060–5069, 2011.

[24] F. Li, X. Yang, Y. Yang et ai., "Antiosteoporotic activity of echinacoside in ovariectomized rotat", Phytomedicine, voi. 20, ei. 6, s. 549–557, 2013.

[25] H. Nian, MH Ma, SS Nian ja LL Xu, "Antiosteoporotic activity of icariin in ovariectomized rott", Phytomedicine, voi. 16, ei. 4, s. 320–326, 2009.

[26] SR Fahmy, AM Soliman, AA Sayed ja M. Marzouk, "Cicer arietinum -uutteen mahdollinen osteoporoottinen mekanismi rotilla, joilta on poistettu munasarjat", International Journal of Clinical and Experimental Pathology, voi. 8, ei. 4, s. 3477–3490, 2015.

[27] R. Swaminathan, "Biochemical markers of bone turnover", Clinica Chimica Acta, voi. 313, nro 1-2, s. 95–105, 2001.

[28] S. Muthusamy, I. Ramachandran, B. Muthusamy, et ai., "Ovariectomy induces oksidatiivista stressiä ja heikentää luun antioksidanttijärjestelmää aikuisilla rotilla", Clinica Chimica Acta, voi. 360, no. 1-2, s. 81–86, 2005.

[29] WJ Boyle, WS Simonet ja DL Lacey, "Osteoclast differentiation and activation", Nature, voi. 423, nro 6937, s. 337–342, 2003.