Hibiscus Cannabinus L. (kenaf) -lehtiuutteen käyttö ihoa valkaisevana ja ikääntymistä estävänä aineena luonnonkosmeettisissa prototyypeissä
Mar 26, 2022
Yhteystiedot: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Sähköposti:audrey.hu@wecistanche.com
Yan Yi Sim ja Kar Lin Nyam
ABSTRAKTI
Malesiassa teollisuusjätteetHibiscus cannabinusL. (kenaf) teollisuus, erityisesti lomat, aiheuttavat haasteita kestävälle kehitykselle. Kenafin lehtien biologinen aktiivisuus on raportoitu muutamassa aikaisemmassa tutkimuksessa, joten on uskottavaa, että kenaf-lehtiuutetta (KLE) voidaan käyttää toiminnallisena ainesosana kosmeettisissa formulaatioissa. Tämän tutkimuksen tavoitteena oli siis kehittää KLE:tä sisältävä luonnonkosmetiikkavalmiste ja arvioida sen fysikaalis-kemiallisia ominaisuuksia, mikrobiologisia ominaisuuksia, varastointikestävyyttä, biologisia aktiivisuuksia (antioksidantti, antityrosinaasi jaikääntymistä vastaan), in vitro sytotoksisuus (normaalit ihmisen ihon fibroblastit ja B16F1{4}} -melanoomasolut) ja melanogeneesimääritys (sellunsisäinen tyrosinaasiaktiivisuus ja melaniinin tuotannon väheneminen). Tulokset osoittivat, että KLE-voide (KLEL), joka on valmistettu 15-prosenttisesta kenaf-siemenöljystä (KSO) (F2), jossa on 0,1 painoprosenttia KLE:tä, tuottaa parhaan fysikaalisen ja mikrobiologisen stabiilisuuden ilman myrkyllisyyttä ihmissoluille. KLEL esitti myös antioksidanttipitoisuuden jopa 1,84 ± 0.07 mg kofeiinihappoekvivalenttia (CAE)/g ja 21,62 ± 0,76 mg katekiinihydraattiekvivalenttia (CHE)/g kokonaisfenolipitoisuudesta (TPC) ) ja kokonaisflavonoidipitoisuus (TFC). Lisäksi KLEL esitti antityrosinaasikapasiteetin mykofenolaatin (30,28 ± 3,90 prosenttia) ja difenolien (11,40 ± 0,29 prosenttia) muodostumisen estämisessä ja paljasti ensimmäistä kertaaikääntymistä vastaanominaisuudet estämällä kollagenaasin (36,41 ± 0,54 prosenttia) ja elastaasin (23,13 ± 1,56 prosenttia) aktiivisuutta. Mitä tulee melanogeneesiä estävään aktiivisuuteen, KLEL esitti suurta tehoa solujen tyrosinaasiaktiivisuuden ja melaniinipitoisuuden tukahduttamisessa B16F10-soluissa. Kaiken kaikkiaan tämän tutkimuksen tulokset ovat erittäin lupaavia kenafin lehtiä käyttävien luonnonkosmeettisten prototyyppien kehittämisessä.
aavikon cistanche-lohikäärmeyrtit: ikääntymisen esto
1. Esittely
Viime aikoina yleistä kiinnostusta on herättänyt kiertotaloudellinen malli, joka voi parantaa jätehuollon kestävyyttä minimoimalla jätteentuotantoa ja säilyttämällä pitkän aikavälin arvon samalla, kun se vähentää resurssien niukkuuden ja ympäristön pilaantumisen negatiivisia seurauksia (Morseletto, 2020). Yleisesti ottaen teollinen viljelyteollisuus tuottaa vuosittain huomattavan määrän sivutuotteita, joilla on alhainen taloudellinen arvo.Hibiscus cannabinusL. KR9 (kenaf) -teollisuus on yksi Malesian BKT:hen (bruttokansantuotteeseen) vaikuttavista maataloussektoreista. Kenafin kuivavarren tuotantopaino kasvoi 7,1 (000 tonnista) vuonna 2013 7,6:een ({{7} } tonnia) vuonna 2014, ja maailmanlaajuisten kenafmarkkinoiden ennustetaan ylittävän 854 miljoonaa Yhdysvaltain dollaria vuoteen 2025 mennessä (Abdelrhman et al., 2016). Kuitenkin syntyy suuria määriä sivutuotteita, kuten kenafin siemeniä ja lehtiä, jotka aiheuttavat kestävyysongelmia.
Kenafin lehdet, jotka muodostavat merkittävän osan sivutuotteista, ovat vähiten luonnehdittuja ja arvostetuimpia kaikista syntyvistä sivutuotteista. Pyöreän lähestymistavan vuoksi on tärkeää käyttää uudelleen tai ottaa talteen kenafin lehdet lisäarvotuotteiksi, koska se tarjoaa monia etuja talouden, ympäristön ja yhteiskunnan aloilla (Coderoni ja Perito, 2019). Kenafin lehdet koostuvat runsaista bioaktiivisten yhdisteiden lähteistä, kuten klorogeenihaposta, kahviapuaineesta, kaempferolista ja katekiinihydraatista, kuten Kho et al. suorittamat tutkimukset ovat osoittaneet. (2019); Sim ja Nyam (2019) sekä Haw et al. (2020). Se on kuitenkin yleensä tarkoitettu taloudellisesti arvoltaan vähäisten tuotteiden: ravintokuitujen ja rehujen tuotantoon (Lim et al., 2020).
Termiä "paluu luontoon" on käytetty laajasti kosmetiikkateollisuuden tutkimuksessa ja kehityksessä, sillä kasvitieteellistä alkuperää olevien uutteiden käyttö on johtanut kuluttajien hyvän hyväksynnän saavuttamiseen. Sim et al. tekemän tutkimuksen mukaan. (2019), kenaf-lehtiuute (KLE) osoitti lupaavia antioksidanttisia ja antityrosinaasiominaisuuksia, ja sitä voitiin käyttää lisäarvoa tuottavina ainesosina kosmeettisten tuotteiden kehittämisessä. On tärkeää kehittää stabiileja ja turvallisia formulaatioita, jotka sisältävät KLE:tä, koska se sisältää paljon polyfenoliyhdisteitä, jotka osoittavat ihonvalkaisujaikääntymistä vastaanominaisuuksia. Uusia kosmeettisia formulaatioita kehitettäessä on otettava huomioon useita vaatimuksia, kuten formulaatiotyyppi, käyttötarkoitus ja formulaatioissa käytettyjen ainesosien mahdollinen vuorovaikutus, jotka kokonaisuudessaan lisäävät stabiilisuus- ja turvallisuustutkimusten tarvetta. (Garbossa ja Maia Campos, 2016).
Stabiilisuustutkimukset, jotka sisältävät fysikaalisten, kemiallisten ja mikrobisten ominaisuuksien tutkimuksen, ovat välttämättömiä kosmeettisille formulaatioille kehitysprosessin jälkeen. Lisäksi haitallisten vaikutusten tai allergisten reaktioiden estämiseksi kosmeettiset tuotteet tulisi myös testata käyttämällä in vitro sytotoksisuusmääritystä normaalilla ihmisen ihosolulinjalla. Tämän työn tavoitteena on siis kehittää KLE:tä sisältävä luonnonkosmetiikka (KLE lotion-KLEL). Sitten KLEL arvioitiin sen fysikaalis-kemiallisten ominaisuuksien, mikrobiologisten ominaisuuksien, säilytysstabiilisuuden, in vitro sytotoksisuuden (normaaleissa ihmisen ihon fibroblasteissa ja B16F10-melanoomasoluissa) ja melanogeneesimäärityksen (sellunsisäinen tyrosinaasiaktiivisuus ja melaniinituotannon väheneminen) suhteen. Tämä tutkimus antoi meille myös mahdollisuuden määrittää ensimmäistä kertaa paitsi KLEL:n antioksidantti- ja antityrosinaasiaktiivisuus, myös niiden kollagenaasia ja elastaasia estävä vaikutus.
2. Materiaalit ja metodit
2.1. Kasvimateriaalit ja kemikaalit
TuoreHibiscus cannabinusL. KR9 (kenaf) -lehdet 90 päivää kylvön jälkeen ja siemenet saatiin Lembaga Kenaf & Tembakau Negaralta (LKTN, Malesia). Span 20 ja Tween 80 ostettiin Sigma Aldrichilta (München, Saksa), Cosmedia® ACE, Iscaguard® PEG ja Emulgade® SE-PF hankittiin BASF:ltä (Malesia) ja glyseriini ostettiin Croda International Plc:ltä. (Yhdistynyt kuningaskunta). Normaali ihmisen dermaalinen fibroblasti (NHDF) -solulinja hankittiin Lonzasta (Basel, Sveitsi) ja hiiren melanooma (B16F10) hankittiin ATCC:ltä (Manassas, VA, USA). Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) ostettiin Nacalai Tesquelta (Japani). Kaikki muut käytetyt kemikaalit olivat analyyttistä reagenssilaatua (Belgia, Saksa, Malesia). Ultrapuhdasta vettä (Millipore, USA) käytettiin koko analyysin ajan.
2.2. menetelmät
2.2.1. Kenafin lehtien kuivaus
Kenafin lehdet puhdistettiin erittäin puhtaalla vedellä, kuivattiin ja pidettiin sitten −80 ◦C:ssa yön yli. Sitten näyte kuivattiin pakastekuivaimessa (Christ, Saksa) alle 0,0004 baarissa 48 tuntia, jauhettiin, tyhjiöpakattu ja varastoitiin -20 asteessa.
2.2.2. Osittain puhdistetun kenafin lehtiuutteen (KLE) valmistus
KLE:n pulssi-ultraääniavusteinen uutto (PUAE) suoritettiin Sim et al. (2019). Näytteet punnittiin uuttoliuottimilla (etanolilla) suhteessa 1:10. Sen jälkeen seokselle suoritettiin pulssi-ultraääni-avusteinen uutto (Sartorius, Saksa) 50 prosentin sonikaatioamplitudilla, 1 minuutin pulssin kestojaksolla ja 1 minuutin pulssivälijaksolla lämpötilan ollessa 18–22 ± 3 astetta (kolme jaksoa). ). Sitten uute suodatettiin ja väkevöitiin tyhjökiertohaihduttimessa (Buchi, Sveitsi). KLE:n osittainen puhdistus suoritettiin julkaisun Seabra et ai. (2010) pienin muutoksin. Raakauute levitettiin silikageelillä täytettyyn pylvääseen ja eluoitiin n-heksaani-etyyliasetaatin gradienttiliuottimella (100:00, 90:10, 80:20, 50:50). , 20:80, 10:90, 00:100) ja etyyliasetaattimetanoli (100:00, 90:10, 80:20, 50:50, 20:80, 10:90) , 00:100). Osittain puhdistettu KLE väkevöitiin kuivaksi pyöröhaihduttimella ja säilytettiin -20 asteessa tulevaa käyttöä varten.
2.2.3. Kenaf-siemenöljyn (KSO) liuotinuutto
KSO uutettiin Chew et ai. (2015). Kenafin siemenet jauhettiin hienoksi jauheeksi myllyllä (Panasonic, Japani) ja lisättiin heksaania suhteessa 1:5. Öljyt uutettiin Soxhlet-uuttimella 60 ◦C:ssa 3 tunnin ajan ja heksaani poistettiin pyöröhaihduttimella. Typellä huuhtelun jälkeen KSO säilytettiin -20 asteessa tulevaa käyttöä varten (Chew et al., 2015).
2.2.4. KLE:tä sisältävän lotion formulaation kokeellinen kehitys
Aluksi kosteusemulsio (ilman KLE:tä) optimoitiin käyttämällä neljää eri pitoisuutta kenaf-siemenöljyä (KSO) (10 prosenttia, 15 prosenttia, 20 prosenttia ja 25 prosenttia). Tämän jälkeen kosteusemulsiopohja arvioitiin vertailevasti useiden parametrien suhteen: fysikaalinen ulkonäkö, haju, homogeenisuus, pH, viskositeetti, sentrifugointi ja jäätymis-sulatusarviointi parhaan emulsiovoidepohjan formulaation valitsemiseksi jatkotutkimuksia varten. Mitä tulee yllä olevista parametreista saatuihin tuloksiin, sopivin lotion perusformulaatio (15 prosenttia KSO) valittiin sisällytettäväksi KLE:n kanssa (0,1 prosenttia w/w) (KLEL). Lyhyesti sanottuna ei-polaarisen faasin (Emulgade® SE PF, Span 20 ja KSO) ja polaarisen faasin (vesi, Tween 80 ja glyseriini) aineosat kuumennettiin 75 ± 2 asteeseen. Sitten ei-polaarinen faasi lisättiin tipoittain polaariseen faasiin sekoittaen nopeasti käyttämällä magneettisekoitinta (Thermo Fisher Scientific, USA) nopeudella 350 rpm primääriemulsion muodostamiseksi, mitä seurasi korkean leikkausvoiman homogenointi käyttämällä IKA T25 digitaalista ULTRAa. -TURRAX® (IKA Laboratory Equipment, Saksa) nopeudella 3200 rpm 3 min ja ultraäänihomogenointi 40 prosentin amplitudilla 3 min. Cosmedia® ACE, Iscaguard® PEG ja KLE lisättiin ja sekoitettiin Ö/V-emulsiossa huoneenlämpötilassa. KSO-emulsiopohja ilman KLE:tä toimii kontrollina (KSOL). Vaikka kojiinihappoa (0,1 painoprosenttia) (KAL) lisätty kosteusemulsiopohja toimi positiivisena kontrollina antityrosinaasiaktiivisuuden ja melanogeneesimäärityksen suhteen. Lotion-pohja, johon oli lisätty katekiinihydraattia (0,1 painoprosenttia) (CHL), toimi positiivisena kontrollina kollagenaasi- ja antielastaasiaktiivisuudelle
2.2.5. Fysikaalis-kemiallinen analyysi
2.2.5.1. Ulkonäkö, haju ja homogeenisuus.
Hanifahin ja Jufrin (2018) mukaan kosteusemulsiovalmisteet tarkastettiin niiden värin, hajun ja homogeenisuuden sekä faasien erottumisen suhteen.
2.2.5.2. pH. Standardiliuoksia käytettiin pH-mittarin elektrodin kalibroimiseen ennen mittausta.
Näytteiden pH määritettiin pH-mittarilla (Mettler Toledo, Sveitsi) huoneenlämpötilassa.
2.2.5.3. Väri.
Väri arvioidaan kolorimetrillä (Hunter Lab, Yhdysvallat). Tulokset ilmaistaan väriavaruuden L* (vaaleus), a* (vihreä), b* (keltainen) ja kokonaisvärieron (ΔE) mukaan. Kaikkien näytteiden kokonaisväriero (ΔE) laskettiin käyttämällä yhtälöä seuraavasti: ΔE = ̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅ (l ∗ - l ∗ 0) 2 plus (a ∗ - a ∗ 0) 2 plus (b ∗ - b ∗ 0) 2√
2.2.5.4. Viskositeetti.
Näytteiden viskositeetti arvioitiin Brook Field -viskosimetrillä käyttämällä LV-64-karaa Gyawali et al. (2016) pienin muutoksin. Näyte upotettiin suoraan karaan 100 rpm:n pyörimisnopeudella ja viskositeetti (cP) mitattiin.
2.2.5.5. Levitettävyys.
Näytteiden levitettävyys määritettiin rinnakkaislevymenetelmällä (Gyawali et al., 2016). Näyte punnittiin tarkasti (1 g) ja asetettiin yhden lasilevyn päälle (20 × 20 cm2). Sitten toinen objektilasi asetettiin näytteen päälle ja 100 g paino asetettiin ylemmän objektilasin päälle sen varmistamiseksi, että näyte puristuu tasaisesti. 1 minuutin kuluttua paino poistettiin ja levityshalkaisija (cm) mitattiin.
2.2.5.6. Sentrifugoinnin arviointi.
Näyte ladattiin sentrifugointiputkeen ja sentrifugoitiin sitten nopeudella 3750 rpm 30 minuuttia (Eppendorf 5417R, USA). Tämä sentrifugointitesti (vastaa 1-vuoden painovoimaa) määrittää näytteen stabiilisuuden (Hiola et al., 2018).
2.2.5.7. Jäätymis-sulatusarviointi.
Jäädytys-sulatustutkimukset tehtiin aikaisempien menetelmien mukaisesti muutamalla modifikaatiolla (Krongrawa et al., 2018). Kutakin näytettä pidettiin vuorotellen kylmässä lämpötilassa, 4 ± 1 ◦C (24 h) ja kuumassa lämpötilassa, 45 ± 1 ◦C (24 h) 75 prosentin ± 2 prosentin RH:lla (suhteellinen kosteus) kuuden syklin ajan ilmatiiviissä lasisäiliöissä. Näytteiden viskositeetti määritettiin lämpötilajännityksen jälkeen.
2.2.6. Antioksidanttipitoisuuden määrääjä
2.2.6.1. Kokonaisfenolipitoisuus (TPC).
Kokonaisfenolipitoisuus määritettiin Lim et ai. (2007). Näyte (10 mg/ml) sekoitettiin 10 prosentin Folin-Ciocalteu-reagenssin ja 7,5 prosentin (w/w) Na2C03:n kanssa, mitä seurasi 30 minuutin inkubointi pimeässä. Absorbanssi mitattiin aallonpituudella 765 nm käyttämällä UV-vis-spektrofotometriä (Secoman, Ranska). Kahvihapon kalibrointiyhtälö oli y=0,0269 plus 9,69x (r2=0,999) (Sim et al., 2019). Tulokset ilmaistiin milligrammoina kofeiinihappoekvivalenttia (CAE)/g näytettä.
2.2.6.2. Flavonoidin kokonaispitoisuus (TFC).
Flavonoidin kokonaispitoisuus arvioitiin Ogbunugafo et ai. (2011). Yleensä näyte (10 mg/ml) sekoitettiin 15 prosentin NaNO2:n, 10 prosentin AlCl3-liuoksen, erittäin puhtaan veden ja 1 M NaOH:n kanssa. Absorbanssi mitattiin välittömästi aallonpituudella 510 nm verrattuna standardiin, joka oli valmistettu käyttämällä katekiinihydraattia (0,02-0,1 mg/ml). Katekiinihydraatin kalibrointiyhtälö oli y=0,004 plus 3,1x (r2=0,999) (Sim et al., 2019). Flavonoidin kokonaispitoisuus (TFC) ilmaistiin milligrammoina katekiinihydraattiekvivalentteja (CHE)/g näytettä.
cistanche-uutteen edut: ikääntymistä estävä
2.2.7. Antikollagenaasiaktiivisuus
Kollagenaasin vastainen aktiivisuus, joka perustuu kollagenaasin ja synteettisen substraatin (FALGPA-N-(3-[2-furyl]-akryloyyli)-Leu-Gly-Pro-Ala) väliseen proteolyyttiseen hajoamiseen 345 nm:ssä kollagenaasi-inhibiittoreiden läsnäolo suoritettiin Barrantesin ja Guinean (2003) mukaan tietyin muutoksin. Clostridium histolyticumista peräisin olevan 0,25 yksikköä/ml kollagenaasin (40 µl) annettiin reagoida 10 µl:n testinäytteiden ja 20 µl:n kanssa 50 mM trikiinipuskuria (pH 7,5, 100 mM CaCl2 ja 5 mM NaCl:ssa) pimeässä. Esi-inkuboinnin jälkeen jokaiseen kuoppaan lisättiin 40 µl 2 mM FALGPA-liuosta. Jokaisen näytteen mukana oli nollakoe, jossa oli kaikki komponentit paitsi FALGPA, ja absorbanssi määritettiin 20 minuutin inkuboinnin jälkeen.
2.2.8. KLEL:n bakteriologinen säilyvyysanalyysi
KLEL:n aerobisten mikrobien kokonaismäärän (TAMC) ja hiivojen ja homesienten kokonaismäärän (TYMC) määrittämiseen käytetyt menetelmät muutettiin FDA:n bakteriologisesta analyyttisestä käsikirjasta (BAM) (Huang et al., 2017). Näyte (1 g) sekoitettiin 1 ml:aan steriiliä Tween 80:tä ja tilavuus säädettiin steriilillä peptonivedellä, jotta saatiin täydellinen laimennussarja välillä 10-1 - 10-3. TAMC:tä varten näytteet siirrostettiin ravinneagarille käyttämällä Levityslevymenetelmällä ja sitten levyjä inkuboitiin 30 ± 2 ◦C:ssa 48 tuntia. TYMC-tapauksessa näytteet siirrostettiin perunadekstroosiagar-maljoille levityslevymenetelmällä, minkä jälkeen levyjä inkuboitiin 30 ± 2 ◦C:ssa 7 päivää. Levyt tutkittiin mikrobien kasvun suhteen inkubointijakson jälkeen.
2.3. Tilastollinen analyysi
Kaikki tulokset analysoitiin käyttäen Minitab 16.2.1 -tilastopakettia (Minitab Inc., Pennsylvania, USA), suoritettiin yksisuuntainen varianssianalyysi (ANOVA), mitä seurasi Tukeyn testi merkitsevän eron määrittämiseksi (p < 0="" .05).="" keskiarvot="" ±="" keskihajonta="" (sd)="" (n="3)" esitettiin="" data-analyysiä="">
3. Tulokset ja keskustelut
3.1. Lotion peruskoostumuksen optimointi
Hiolan et al. (2018), voidepohjan optimoinnilla (esiformulaatiolla) on tärkeä rooli hyvän ja vakaan koostumuksen saamiseksi. Siksi kosteusemulsio optimoitiin käyttämällä neljää eri prosenttiosuutta KSO:ta taulukon 1 mukaisesti. Ne arvioitiin ulkonäön, hajun, homogeenisuuden, fysikaalisen stabiilisuuden, pH:n, levittävyyden, viskositeetin ja jäätymis-sulamisanalyysin perusteella (lisämateriaalit - S1 ja S2). Kaikilla KSO:lla valmistetuilla voidepohjavalmisteilla oli väri vaalean maidonkeltaisesta maidonkeltaiseen ja hyvä haju (Chu ja Nyam, 2020). Saatujen tulosten perusteella kaikkien kosteusemulsiopohjavalmisteiden pH-arvot olivat ihon pH:n alueella (4–6), ja tämä on tärkeää allergisen reaktion minimoimiseksi ja kosmeettisen valmisteen stabiilisuuden varmistamiseksi varastoinnin aikana (Chu ja Nyam , 2020). Kaikkien voidepohjavalmisteiden viskositeetti laski jäätymis-sulatusanalyysin jälkeen, mutta silti hyvän lotionin (500–5000 cP) rajoissa (Kusuma et al., 2017). Levitettävyyden kannalta mitä korkeampi KSO-pitoisuus, sitä pienempi on levitettävyyshalkaisija korkeasta viskositeetista johtuen. Mitä suurempi levittävyys on, sitä helpompi kosmeettinen koostumus voidaan levittää ihon pinnalle. Sentrifugointikestävyyden perusteella tehdyssä stabiilisuustestissä F2 ja F3 eivät osoittaneet faasierotusta, mikä viittaa siihen, että molemmat formulaatiot olivat stabiileja 1 vuoden. F3:a ei kuitenkaan voida kaataa helposti, ja se näytti kermavalmistetta muistuttavan, koska sillä oli korkeampi viskositeetti kuin F2:lla. Siksi F2 valittiin optimoidun kosteusemulsiopohjaksi yhdistettäväksi KLE:hen.
Mihin cistanchea käytetään: ikääntymisen estoon
3.2. KLE lotionin (KLEL) formulaation arviointi
3.2.1. Fysikaalis-kemiallinen analyysi
Taulukon 2 tulosten perusteella KLE:llä lisätty voidepohja osoitti vaaleaa maitomaista väriä miellyttävällä tuoksulla eikä faasien erottumista havaittu. KLEL osoitti korkeampaa pH-arvoa kuin kontrolli, mikä osoittaa, että KLE:n lisääminen kosmeettiseen formulaatioon voi johtaa pH-arvon nousuun. Näytteiden pH-arvot olivat kaikki yhteensopivia ihon pH-alueen kanssa ja turvallisia iholle. KLEL:n ja kontrollin välillä ei ollut merkittäviä eroja viskositeetissa ja levitettävyydessä, mikä osoitti, että KLE:n lisääminen emulsioon ei vaikuttanut viskositeettiin ja levittävyyteen. Merkittäviä muutoksia havaittiin KLEL:n L*-, a*- ja b*-arvoissa verrattuna kontrolliin, mikä osoitti, että kenafin lehtien luonnollinen vihreä väri vaikutti lotionin väriin. KLEL:llä on vihrein a*-arvo (-2.24 ± 0.03) ja keltaisin b*-arvolle (15,54 ± 0.{{13} }1). KLEL:n kokonaisväriero (ΔE) kontrolliin verrattuna oli tilastollisesti merkitsevä p＜0,05, KLEL:n arvon ollessa 6,82 ± 0,04. Aiemmissa tutkimuksissa ΔE=2 pidettiin visuaalisen syrjinnän kynnyksenä (Zhou et al., 2009). Siten ΔE:n tulokset osoittivat, että KLE:n lisääminen voi vaikuttaa kosmeettisen formulaation väriin.
3.2.2. Antioksidanttipitoisuuden analyysi
Taulukossa 3 on esitetty kokonaisfenolipitoisuuden (TPC) ja flavonoidipitoisuuden (TFC) määrä. Saadut tulokset osoittivat, että formuloitu voidepohja KLE:llä sisältää merkittävästi korkeamman TPC:n (1,84 ± 0.07 mgCAE/g) kuin kontrolli (1,64 ± 0.0 6 mgCAE/g). Vaikka TFC:n kohdalla KLEL osoitti myös merkittävästi korkeampaa TFC:tä (21,62 ± 0,76 mgCHE/g) verrattuna kontrolliin (19,42 ± 0,27 mgCHE/g). Joidenkin kasviperäisten sivutuotteiden samassa sarjassa KLE:n sisällyttäminen dermatologisesti sisältää edelleen korkean antioksidanttipitoisuuden, mikä korostaa sen mahdollista polyfenoliyhdisteiden lähdettä kosmetiikkateollisuudessa (Adhikari et al., 2019; Rodrigues et al., 2014). ). Haw et al. (2020), kenafin lehdet sisältävät runsaasti erilaisia polyfenoliyhdisteitä, kuten kofeiinihappoa, tanniinihappoa, katekiinia ja klorogeenihappoa.
3.2.3. Antioksidanttiaktiivisuuden analyysi
Lotionien vapaiden radikaalien poistamiskykyä tutkittiin käyttämällä DPPH- ja ABTS-määritystä. Taulukko 3 osoittaa, että KLEL:llä oli korkeampi DPPH (1,16 ± 0,18 mgTEAC/g) ja ABTS (0,50 ± 0).{11}} 4 mgTEAC/g) radikaalinpoistoaktiivisuus verrattuna kontrolliin. DPPH- ja ABTS-määritystulokset ovat osoittaneet samanlaisia kuvioita kuin TPC:ssä ja TFC:ssä, joissa se voi parantaa huomattavasti antioksidanttiaktiivisuutta lisäämällä KLE:tä voidepohjaan. Nämä havainnot ovat viittaaneet siihen, että KLE sisältää vapaita radikaaleja sieppaavia aineita, jotka voivat vaikuttaa kosmeettisiin valmisteisiin käytettynä. tärkeä rooli ensisijaisena antioksidanttina ihon ikääntymistä aiheuttavien vapaiden radikaalien tukahduttamisessa. Lisäksi KLEL (0.69 ± 0.20 mgTEAC/g) osoitti myös merkitsevästi korkeimman rautaionien pelkistyskyvyn kuin kontrolli (0,46 ± 0,09 mgTEAC/g), mikä on samaa mieltä DPPH ja ABTS. Antioksidanttiyhdisteitä tarvitaan jatkuvasti ulkoisista lähteistä, kuten kosmetiikasta, palauttamaan ihon yksilöllinen antioksidanttipuolustusjärjestelmä ihon ikääntymistä aiheuttavaa ROS:tä vastaan (Działo et al., 2016). Lisäksi ihona voidaan käyttää kosteusemulsiovalmisteita, joilla on radikaalia siivoavaa ja vähentävää vaikutustavalkaisuUV-säteilyn aiheuttaman melaniinin tuotannon vähentymisen vuoksi (Działo et al., 2016).
3.2.4. Entsyymiä estävä aktiivisuus
Lotionit testattiin tyrosinaasia, kuparia sisältävää metalloproteiinientsyymiä vastaan, joka osallistuu melaniinin biosynteesiin, in vitro antityrosinaasiaktiivisuuden arvioimiseksi. Taulukko 5 osoittaa, että KLEL (30,28 ± 3,90 prosenttia) ei osoittanut merkittäviä eroja antityrosinaasiaktiivisuudessa positiivisen kontrollin (34,05 ± 4,60 prosenttia) kanssa, kun L-tyrosiinia käytettiin substraattina. . Kuitenkin ALL (11,40 ± 0,29 prosenttia) osoitti alhaisempaa antityrosinaasiaktiivisuutta kuin positiivinen kontrolli (15,01 ± 0,84 prosenttia), kun L-DOPAa käytettiin substraattina. Tämä osoitti, että KLEL esti pääasiassa mykofenolaattia difenolien sijaan. In vitroikääntymistä vastaanominaisuudet arvioitiin kollagenaasia ja elastaasia estävän aktiivisuuden avulla. Entsyymi, kuten kollagenaasi ja elastaasi, voivat hajottaa kollageenia ja elastiinia, jotka ovat vastuussa ihon eheydestä ja elastisuudesta (Jesumani et al., 2019). Joten elastaasin ja kollagenaasin toiminnan estäminen vähentäisi elastiinin ja kollageenin hajoamista ja estäisi siten ryppyjen muodostumista, joka on yksi tärkeimmistä ikääntymisen merkeistä. Kuten taulukosta 5 käy ilmi, KLEL osoitti huomattavaa kollagenaasinvastaista (36,41 ± 0,54 prosenttia) ja antielastaasi (23,13 ± 1,56 prosenttia) aktiivisuutta verrattuna positiiviseen kontrolliin (CHL). KSOL osoitti myös antityrosinaasia (18,82 ± 0,17 prosenttia (L-tyrosiini substraattina); 8,48 ± 0,29 prosenttia (L-DOPA substraattina), anti-kollagenaasia (18,84 ± {{26). }},63 prosenttia ) ja antielastaasi (5,78 ± 0,59 prosenttia ) aktiivisuus, mutta pienempi kuin ALL. Tämä saattaa viitata siihen, että KLE:n ja KSO:n yhdistelmällä oli synergistinen vaikutus paremmalla entsyymejä estävällä aktiivisuudella. Tätä tukevat mm. Pascoal ym. (2015) ja Chew ym. (2016), joissa KSO sisältää runsaasti tokoferoleja, kun taas KLE sisältää runsaasti kversetiiniä ja kaempferolijohdannaisia. Nämä yhdisteet osoittivat ihoavalkaisujaikääntymistä vastaanominaisuuksia, jotka ovat kiinnostuneita ihon hyperpigmentaation ja ryppyjen tuotannon vähentämisestä (Lin et al., 2007; Keen ja Hassan, 2016).
3.2.5. In vitro melanogeneesimääritys
Tutkimaan ihoa lisäävalkaisuKLEL:n ominaisuuksia, B16F10-melanoomasolumallia käytettiin tutkimaan melanogeneesiä estävää vaikutusta. Solujen tyrosinaasiaktiivisuuden osalta, kuten kuvassa 5a esitetään, KLEL (32,35 prosenttia) pitoisuudessa 500 ug/ml osoitti merkittävästi voimakkaampaa solun tyrosinaasiaktiivisuuden estoa kuin KAL (14,85 prosenttia) ja KSOL (13,64 prosenttia) verrattuna a-MSH:hen. käsitelty kontrollisolu. Solunulkoisen ja solunsisäisen melaniinisisällön osalta KLEL vähensi annosriippuvaisesti B16F10-solujen melaniinipitoisuutta (kuviot 5b ja c). ALL:lla (500 ug/ml) havaittiin olevan vastaava estävä vaikutus solunulkoiseen melaniinipitoisuuteen (56,13 prosenttia) (verrattuna MSH-käsiteltyyn kontrollisoluun) KAL:n (54,53 prosenttia) kanssa. Lisäksi KLEL (36,52 prosenttia) osoitti myös voimakkaampaa solunsisäistä melaniinipitoisuutta estävää vaikutusta kuin KAL (7,98 prosenttia). Vaikka KSOL osoitti myös estävää vaikutusta solunulkoiseen melaniinipitoisuuteen (17,73 prosenttia), mutta ei vaikutusta solunsisäiseen melaniinipitoisuuteen. KAL:iin verrattuna KLEL:n voimakkaampaa estävää vaikutusta melanogeneesin estämiseen voi selventää KSO:n ja KLE:n välinen synergistinen aktiivisuus, mikä voi parantaa KLE:n ihoa valkaisuominaisuuksia voidepohjassa. Nämä tulokset osoittivat edelleen, että KLE:tä voidaan käyttää tehokkaana ihonvalkaisuaineena luonnonkosmeettisessa prototyypissä.
3.2.6. In vitro sytotoksisuusmääritys
Arvioimalla KLEL:n bioyhteensopivuus (MTT-analyysi), NHEF-solujen elinkelpoisuus (24, 48, 72 tunnin jälkeen) kasvatettuina eri KLEL-pitoisuuksien (0.125−2 mg/ml) läsnä ollessa ylläpidettiin yllä. 95 prosenttia (kuvio 4a). Tämä osoitti, että KLEL ei aiheuta myrkyllisyyttä ihmisille. Vaikka B1610-melanoomasoluja käytetään laajasti ihotutkimuksissavalkaisuaineet (Chatatikun et al., 2019; Lee et al., 2019). Ennen kuin mitattiin KLEL:n kyky suppressoida melanogeneesiä B16F10-melanoomasoluissa, KLEL:n sytotoksisuus arvioitiin. Kuten kuviossa 4b esitetään, vahvistettiin, että KLEL ei ollut toksinen B16F10-melanoomasoluille konsentraatiolla, joka on alle 500 ug/ml. Sellaisenaan seuraaviin kokeisiin käytettiin 32,5–500 ug/ml KLEL:ää.
4. Yhteenveto
Tämä tutkimus osoittautui suureksi merkitykseksi toteutuneessa kiertotalouden mallissa, koska se esittelee kenafin lehdille uusia mahdollisia käyttökohteita korkean lisäarvon ainesosina, joilla on ihoa hoitavia ominaisuuksia kosmetiikkateollisuudelle, nimittäin antioksidanttina,ikääntymistä vastaanja melanogeenisiä vaikutuksia. Tutkimuksessa esitetyt havainnot osoittivat myös, että voideformulaatio, joka on valmistettu 15 prosentilla KSO:sta (F2), jossa on 0,1 prosenttia KLE:tä, tuottaa parhaan fysikaalisen ja mikrobiologisen stabiilisuuden ilman myrkyllisyyttä ihmissoluille. Jatkossa lisätutkimuksia tulisi keskittyä myös KLEL-mikrobialtistustestiin ja kliiniseen tehokkuuteen.
cistanche-lisäosa
