Anastatica Hierochuntican etanoli- ja vesiuutteiden antioksidanttiaktiivisuus, fenoliprofiili ja munuaisia ​​suojaava potentiaali CCl{0}}indusoitua munuaistoksisuutta vastaan ​​rotilla

Ota yhteyttä:ali.ma@wecistanche.com

Tariq I. Almundarij et ai

Abstrakti:Kaff-e-Maryamia (Anastatica hierochuntica L.) käytetään laajalti useiden terveysongelmien hoitoon, erityisesti synnytyksen helpottamiseen ja lisääntymisjärjestelmään liittyvien häiriöiden lievittämiseen. Tämän tutkimuksen tavoitteena oli arvioida A. hierophatic etanolin (KEE) ja CCl{0}}vesiuutto (KAE) aiheutti oksidatiivisen stressin ja nefrotoksisuuden rotilla käyttämällä biokemiallisia markkereitamunuaistentoimintojaja antioksidanttinen tila sekä munuaiskudoksen histopatologiset tutkimukset.A. hierofantti sisälsi 67,49 mg GAE g-1 kokonaisfenoliyhdisteitä (TPC), 3,51 µg g-1 kokonaiskarotenoideja (TC) ja 49,78 ja 17,45 mg QE g-1 kokonaisflavonoideja (TF) ja kokonaisflavonoleja (TFL), vastaavasti. Se johti 128,71 µmol TE g-1 DPPH-RSA:ta ja 141,92 µmol TE g-1 ABTS-RSA:ta. A. hierophantic esitti esimiehensäantioksidanttiaktiivisuusestämällä linolihapporadikaaleja ja kelatoimalla hapettumismetalleja. HPLC-analyysi johti 9 ja 21 fenolihappoa ja 6 ja 2 flavonoidiaKEEja KAE, jossa vallitsevat sinappi- ja ruiskuhapot, vastaavasti. Lihaksensisäinen vit-injektio. E plus Se ja KEE:n, KAE:n ja KEE plus KAE:n oraalinen antaminen 250 mg kg-1 ruumiinpainolla palautti merkittävästi seerumin kreatiniini-, urea-, K-, kokonaisproteiini- ja albumiinitasoja. Lisäksi ne vähensivät malondialdehydiä (MOD), palauttivat pelkistetyn glutationin (GSH) ja paransivat superoksididismutaasin (SOD) tasoja. KEE, KAE ja KEE plus KAE suojasivatmunuaisetCCl4-nefrotoksisuudesta, koska ne pääasiassa vaimensivat indusoitua oksidatiivista stressiä. YhteensänefroniKEE:n, KAE:n ja KEE plus KAE:n osuus oli noin 83,27 prosenttia, 97,62 prosenttia ja 78,85 prosenttia. Molemmat vit. E plus Se ja A. hierofantiset uutteet heikensivät histopatologista muutosta CCl4-käsitellyissä rotissa. Yhteenvetona voidaan todeta, että A. hierophantilla, erityisesti KAE:llä, on potentiaalinen kyky palauttaa oksidatiivista stabiilisuutta ja parantaamunuainentoiminto CCl4:n jälkeenakuutti munuaisvaurioparempi kuin KEE. Siksi A. hierophanticilla on potentiaalia olla käyttökelpoinen terapeuttinen aine lääkkeiden aiheuttaman nefrotoksisuuden hoidossa.

Avainsanat:Kaff-e-Maryam; polyfenolit; bioaktiivisuus; sekundaariset metaboliitit;munuaismarkkerit; antioksidanttientsyymit;munuaistentoimintahäiriö

Cistanche NZ for ehkäisee munuaissairauksia, napsauta tästä saadaksesi näytteen

1. Esittely

Munuaissairauson yhdeksänneksi yleisin kuolinsyy, yli yhdellä seitsemästä eli 15 prosentilla yhdysvaltalaisista aikuisista eli 37 miljoonalla ihmisellä arvioidaan olevankrooninen munuaissairaus(CKD) [1]. Huomattavaa on, että vuonna 2015 havaittu kroonisen munuaistautien yleisin syy on diabetes mellitus, jota seuraa korkea verenpaine ja glomerulonefriitti [2]. Muita CKD:n syitä ovat idiopaattiset (usein pienet munuaiset munuaisten ultraäänitutkimuksessa) [3]. Aikaisemmin CCl4:a käytettiin metallin rasvanpoistoon, kuivapesuun, kankaiden täplittämiseen, sammutusnesteisiin ja viljan kaasutukseen [4]. Se aiheuttaa vakavia häiriöitä maksassa, keuhkoissa ja kiveksissä sekä veressä muodostamalla aktiivisia vapaita radikaaleja [5]. Ogeturkin et al. [6], altistuminen tälle liuottimelle aiheuttaa akuutin ja kroonisen munuaisvaurion. Vapaiden radikaalien aiheuttaman lipidiperoksidaation uskotaan olevan yksi tärkeimmistä solukalvovaurioiden syistä, mikä johtaa erilaisiin patologisiin tiloihin [7]. Reaktiivisten radikaalien syntyminen on osallisena CCl{10}}indusoituun munuaistoksisuuteen, joka liittyy lipidien peroksidaatioon ja toimintahäiriöiden proteiinien kertymiseen, mikä johtaa munuaisvaurioihin [8]. Lääkekasvien hämmästyttävät perinteiset käyttötavat ovat lisääntyneet viime vuosina, ja lukuisat tutkimukset ovat vahvistaneet niiden terapeuttisen roolin useiden sairauksien hoidossa [9–12].

2. Materiaalit ja metodit

2.1. näytteen valmistus

näyte Kaff-e-Maryam (A. hierophantic L.) -kasvista ostettiin kotimarkkinoilta Buraydahin kaupungista, Qassimin alueelta, Saudi-Arabiasta. Kasvimateriaalin varmentaa kasvituotannon ja -suojelun laitos, maatalous- ja eläinlääketieteen korkeakoulu, Qassim University, Saudi-Arabia. Näyte pestiin puhtaalla vesijohtovedellä hiekan ja lian poistamiseksi lehdistä ja ilmakuivattu kasvimateriaali (28 ± 1 ◦C 48 tuntia) jauhettiin mekaanisesti ja säilytettiin läpinäkymättömissä polyeteenipusseissa 4 ± 1 ◦C:ssa. käyttöön asti.

2.2. Etanoli- ja vesiuutteiden valmistus

Noin 200 g kuivattua A. hierophantica uutettiin 300 ml:lla 70-prosenttista etanolia Soxhlet-uuttimessa etanoliuuton (KEE) valmistamiseksi. Uute väkevöitiin pyöröhaihduttimella 40 °C:ssa jäljellä olevan liuottimen haihduttamiseksi, sitten kuiviin N2-virrassa. Vesiuutto (KAE) suoritettiin Asuzun [23] kuvaamalla tavalla pienin muutoksin. Kaksisataa grammaa kuivattua kasvimateriaalia lisättiin 500 ml:aan kuumaa steriiliä tislattua vettä. Sitten seosta ravisteltiin hyvin ja annettiin seistä 1 tunti. Sitten pulloon kiinnitettiin palautusjäähdytin ja kuumennettiin sitten varovasti kiehuvaan 10 minuutin ajan, jäähdytettiin, ravisteltiin hyvin ja suodatettiin Whatman No. 1 -suodatinpaperin läpi. Suodos haihdutettiin pyöröhaihduttimella ja sitten kuiviin N2-virrassa. Alkoholi- ja vesiuutteet (250 mg ml-1) formuloitiin juuri tislattuun veteen käytettäväksi suun kautta.

2.3. Kokonaisfenolipitoisuus (TPC)

A. hierophanticin TPC-pitoisuus määritettiin Bettaiebin et ai. mukautetun menetelmän mukaisesti. [24]. Tuloksia verrattiin piirrettyyn gallushapon (GA) standardikäyrään, joka tehtiin alueella 50–500 mg mL-1 (R2=0.99), ja TPC laskettiin mg:na gallushappoekvivalenttia (GAE). ) grammaa kohden A. hierophantista (mg GAE g−1 ).

2.4. Karotenoidit (TC), flavonoidit (TF) ja flavonolit (TFL)

Kuten Al-Qabba et ai. [10], 5 g A. hierophantica uutettiin toistuvasti asetonin ja petrolieetterin seoksella (1:1, tilavuus/tilavuus). Karotenoidien (TC) kokonaispitoisuus määritettiin spektrofotometrisesti 451 nm:ssä. TC ilmaistiin mg g-1 DW. A. hierophanticin TF-pitoisuus määritettiin Mohdaly et ai. [25]. TF-pitoisuus laskettiin mg kversetiiniekvivalenttia (QE) per 100 g-1 DW. Samassa yhteydessä suoritettiin TFL-sisältö [26]. Absorbanssi aallonpituudella 440 nm rekisteröitiin ja TFL laskettiin mg:na kversetiiniekvivalenttia (QE) per 100 g-1 DW.

2.5. Antioksidanttikapasiteetin määritys

DPPH-radikaalinpoistomääritys: RSA testattiin spektrofotometrisesti riippuen DPPH-purppuranvärisen liuoksen valkaisusta muutetun tekniikan mukaisesti Lu et ai. [27]. Antiradikaalikapasiteetti esitettiin mikromoleina Trolox-ekvivalentteja (TE) grammaa kohden A. hierophantic (µmoL TE g-1). ABTS-radikaaleja poistava aktiivisuus: A. hierophanticin RSA ABTS-radikaaleja vastaan ​​testattiin Lu et ai. mukautetulla menetelmällä. [27]. Tulokset ilmaistiin µmoL TE g-1. -karoteeni-linolihappovalkaisumääritys: A. hierophanticin antioksidanttiprosentti arvioitiin -karoteenivalkaisun suhteen verrattuna butyloituun hydroksianisoliin (BHA) käyttämällä mukautettua spektrofotometristä protokollaa, jonka ovat nimenneet Koleva et al. [28]; tulokset annettiin BHA:han liittyvinä prosenttiosuuksina. A. hierophanticin kelatoiva vaikutus rautaioneihin: A. hierophanticin kelatoiva aktiivisuus mitattiin Zhaon et ai. [29]. Ferrotsiini-Fe2 plus kompleksin muodostumisen estoprosentti metallia kelatoivana vaikutuksena mitattiin ja esitettiin mg ml-1, kun etyleenidiamiinitetraetikkahappoa (EDTA) käytettiin positiivisena kontrollina.

2.6. A. hierofanttien vesi- ja etanoliuutteiden polyfenoliyhdistefraktiointi

Polyfenolien määritys etanoli- ja vesiuutteista suoritettiin HP1100 (Agilent Technologies, Palo Alto, CA, USA) HPLC-järjestelmällä, joka oli varustettu automaattisella näytteenottimella, kvaternaaripumpulla ja diodirividetektorilla (Hewlett Packard 1050) kolonnilla (Altima) C18 150 × 4,6 mm, 5 µm) 5 mm:n Altima C18 -suojakolonnilla (Alltech, Nettetal, Saksa) Goupy et al. [30]. Käytetty liuotinjärjestelmä oli gradientti A (etikkahappo 2,5 prosenttia), B (etikkahappo 8 prosenttia) ja C (asetonitriili). Liuottimen lisänopeus oli 1 ml min-1, ja erotus suoritettiin 35 ◦C:ssa. Injektoitu tilavuus oli 10 ui. Fenoliyhdisteet määritettiin ulkoisella standardikalibroinnilla ja ilmaistiin milligrammoina g-1 DW ekvivalentteja (plus)-katekiinia flavan-3-oleille ja vastaavaa kumariinia polaarisille aromaattisille yhdisteille. 8 prosentin vaihtelu määritettiin viidellä fenoliuutolla samasta näytteestä. Kaikki arvot olivat kaksoisinjektioiden keskiarvoja. Polyfenolit ja niiden johdannaiset tunnistettiin ja kvantifioitiin aallonpituudella 280 ja 320 nm, kun taas flavonoidit tunnistettiin aallonpituudella 360 nm.

2.7. Kokeellinen suunnittelu

Kaikki kokeet hyväksyi Institutional Animal Ethics Committee (IAEC) QU:ssa (nro {0}}), KSA, jota säätelee eläinkokeiden valvonnan ja valvonnan tarkoitus (CPCSEA). Kansallisen bioetiikan komitean (NCBE) alainen komitea, Elävien olentojen tutkimuksen eettisen lain täytäntöönpanosäännökset. Tässä tutkimuksessa käytettiin yhteensä 36 urospuolista albiinorottaa, jotka jaettiin 6 ryhmään, joissa kussakin oli 6 eläintä ja niitä käsiteltiin seuraavasti: Ryhmä I (kontrolli) sai vatsaontelonsisäisen injektion (ip) oliiviöljyä (1.0 ml kg-1 kahdesti viikossa) ja 0,5 ml tislattua vettä suun kautta/päivittäin 21 peräkkäisen päivän ajan. Ryhmä II sai ip-injektiona tuoretta seosta, jossa oli yhtä suuret määrät CCl4:a ja oliiviöljyä (annoksena 1.0 ml kg-1 kahdesti viikossa) ja 0,5 ml tislattua vettä suun kautta/ päivittäin Al-Qabban et al. [10] pienin muutoksin. Ryhmä III (vertailuryhmä) sai lihaksensisäisen injektion (im) 50 mg kg-1 vit. E plus Se (Selepherol, Vetoquinol Co., Magny-Vernois, Ranska) kahdesti viikossa Asuka et ai. [31] ja El-Desoky et ai. [32] ja 0,5 ml tislattua vettä suun kautta/päivittäin. Ryhmä IV toimi testinä ja sai 250 mg kg-1 KEE:tä suun kautta/päivittäin yhdessä CCl4:n kanssa ip kahdesti viikossa. Ryhmä V sai 250 mg kg-1 KAE:tä suun kautta/päivittäin yhdessä CCl4:n kanssa ip kahdesti viikossa. Ryhmä VI sai 250 mg kg-1 KEE plus KAE (1:1) suun kautta/päivittäin yhdessä CCl4:n kanssa ip kahdesti viikossa. 24 tuntia viimeisen hoidon jälkeen (päivä 21) rotat nukutettiin seoksella (alkoholi:kloroformi:eetteri, 1:2:3). Kaikista eläimistä kerättiin verinäytteet sydänpunktiosta ja seerumi erotettiin sentrifugoimalla 4000 rpm 10 minuutin ajan ja pidettiin -20 ◦C:ssa biokemiallista tutkimusta varten.

2.7.1. Munuaisten biokemiallinen analyysi

Seerumin kreatiniini-, urea-, kokonaisproteiini- ja albumiinipitoisuudet määritettiin automaattisilla spektrofotometrisilla menetelmillä (BM/Hitachi autoanalyzer-911; Boehringer Mannheim, Saksa) valmistajan ohjeiden mukaisesti. Kaliumtasot määritettiin liekkifotometrialla aallonpituudella 766 nm.

2.7.2. Munuaisten antioksidanttiaktiivisuuden arviointi

Verinäytteiden keräämisen jälkeen kaikkien ryhmien eläimet lopetettiin; oikeinmunuaiseteristettiin nopeasti ja huuhdeltiin jääkylmällä suolaliuoksella. Kudos leikattiin sitten, huuhdeltiin kylmässä suolaliuoksessa, kuivattiin ja asetettiin välittömästi jäille. Käyttämällä sähköistä kudoshomogenisaattoria, osat kudoksesta (1.0 g) punnittiin ja homogenoitiin 9 tilavuudella jääkylmää 0,05 M fosfaattipuskuria pH:ssa 7,4. Solujätteet poistettiin sentrifugoimalla nopeudella 12, 000 rpm (4 ◦C) 20 minuutin ajan supernatanttien keräämiseksi malondialdehydi (MDA) pitoisuuden [33], superoksididismutaasin (SOD) aktiivisuuden [34] määrittämiseksi ja vähennettiin. glutationi (GSH) -pitoisuus [35]. Proteiinipitoisuus sisällämunuainenhomogenaatti määritettiin käyttämällä Bradfordin menetelmää [36].

2.7.3. Nefrosuojausprosentti

Munasuojaus (F) -prosentti vit. E plus Se, KEE, KAE ja KEE plus KAE laskettiin kullekin biokemialliselle parametrille erikseen Wakchaure et al. [37] käyttäen seuraavaa yhtälöä:

missä T=hoitoryhmän keskiarvo, C=positiivisen kontrolliryhmän keskiarvo ja N= negatiivisen kontrolliryhmän keskiarvo. Lisäksi kokonaisnefrosuojausprosenttia (TFP-prosenttia) verrattiin vit. E plus Seas seuraavasti:

2.7.4. Histopatologiset tutkimukset

Ruumiinavausnäytteet otettiin vasemmaltamunuainenerillisten rottaryhmien ja kiinnitettynä 10-prosenttisessa formaliinisuolaliuoksessa 24 tunnin ajan. Vesijohtovedellä pesua seurasi dehydratointi alkoholin sarjalaimennoksilla (metyyli, etyyli ja absoluuttinen etyyli). Näytteet kirkastettiin ksyleenissä ja upotettiin parafiiniin 24 tunnin ajan 56 ◦C:ssa kuumailmauunissa. Parafiini-mehiläisvahakudoskappaleet valmistettiin leikkausta varten 4-mikronin paksuudella kelkkamikrotomia käyttämällä. Kudosviipaleet kerättiin lasilevyille, deparafiini poistettiin ja värjättiin hematoksyliinillä ja eosiinilla säännöllistä tarkastusta varten valosähkömikroskoopilla [38].

2.8. Tilastollinen analyysi

Tulokset esitetään keskiarvona ± standardivirhe (SE). Keskiarvojen välisten erojen merkitystä eri ryhmissä tutkittiin käyttämällä yksisuuntaista varianssianalyysiä (ANOVA), jota seurasi Duncanin testi, ja keskiarvojen p-arvo annettiin tasolla p < 0,05="" [39].="">

3. Tulokset

3.1. A. hierophantin fytokemikaalit ja antioksidanttikapasiteetti

A. hierofanttisten fytokemikaalien ja niihin liittyvien antioksidanttiaktiivisuuksien kvantitatiivinen analyysi suoritettiin käyttämällä DPPH- ja ABTS-radikaalinpoistoa, -karoteeni-linolihappovalkaisutoimintoja ja kelatointikykyä (CA). Kuten taulukosta 1 voidaan selvästi nähdä, TPC-pitoisuus oli 67,49 mg GAE g-1. TC-pitoisuus oli 3,51 µg g-1. TF- ja TL-pitoisuudet olivat 49,78 ja 17,45 mg QE g-1, vastaavasti. Lisäksi DPPH-RSA:ta ja ABTS-RSA:ta käytettiin mittaamaan antioksidanttiaktiivisuuden etenemistä. Tulokset osoittivat 128,71 µmol TE g-1:tä ja 141,92 µmol TE g-1:tä DPPH-RSA:lle ja ABTS-RSA:lle, vastaavasti. Lisäksi,antioksidanttiaktiivisuusA. hierophanticin (AOA) on esitetty taulukossa 1. Linolihapporadikaalien estoprosentti laskettiin 45,74 prosentiksi verrattuna BHA:han käyttämällä -karoteenivalkaisu (-CB) -määritystä. Lisäksi metallikelatointiaktiivisuuden arviointi paljasti 42,89 mg g-1, joka näyttää olevan taitava häiritsemään Fe2 plus -ferrotsiinikompleksin muodostumista, mikä osoittaa sen kyvyn kelatoida hapettumismetalleja.

3.2. A. hierofanttisten fenoliyhdisteiden kvantifiointi

Fenoliyhdisteiden kvantitatiivinen analyysi KEE:lle ja KAE:lle HPLC-analyysillä suoritettiin, ja tiedot on taulukoitu taulukossa 2. Yhdeksän erotettua fenolihappoa ja kuusi flavonoidia tunnistettiin havaittavissa olevina määrinä A. hierophanticin KEE:stä. Yleisimmät fenolihapot olivat hydroksikanelihapot, kuten sinappihappo (28,704 mg 100 g−1 ), jota seurasi kahvihappo (6,621 mg 10{). {61}} g-1), rosmariinihappo (2,884 mg 100 g-1), ferulihappo (1,854 mg 100 g-1) ja kanelihappo (0,094 mg 100 g-1); ja hydroksibentsoehapot, kuten p-hydroksibentsoehappo (3,440 mg 100 g-1), protokatekkihappo (1,811 mg 100 g-1), vanilliinihappo (3,326 mg 100 g-1) ja ruiskuhappo (1,083 mg 100 g-1) −1). Flavonoidit, kuten myrisetiini (16,269 mg 100 g-1), D-katekiini (2,410 mg 100 g-1), kaempferoli (0,434 mg 100 g-1), rutiini (0,539 mg 100 g-1), apigeniini{{56} }glukosidia (0,192 mg 100 g-1) ja kversetiiniä (0,184 mg 100 g-1) havaittiin arvokkaita määriä. Määritettiin myös A. hierophanticin KAE:n fenoliyhdisteet, ja tiedot on taulukoitu taulukossa 2. Syringiinihappo kirjattiin korkeimpana fenolihapona 21 tunnistetusta fenolista. Katekoli ja pyrogalloli olivat 2,526 ja 1,589 mg 100 g-1, vastaavasti. Data

osoitti, että joitain fenolihappoja, kuten kofeiini-, katekiini-, klorogeeni-, epikatekiini-, e-vanilliini-, p-hydroksibentsoe- ja protokatekuiinihappoja, havaittiin kohtuullisissa määrissä 0.725, 0.256, { {6}}.136, 0.193, {{10}}.443, 0.223 ja 0.454 mg 100 g−1. Samassa yhteydessä pienet määrät 3,4-5-aikaetoksikanelia, 4-aminobentsoe-, bentsoe-, kanelia-, kumariini-, ellag-, feruli-, galli-, isoferuli-, -kumaari-, p-kumariinihappoa. , ja salisyylihappo kvantifioitiin tunnistamisen jälkeen. Epikakekiini ja D-katekiini flavonoideina kvantifioitiin myös A. hierophanticin KAE:ssä.

3.3. Seerumin kreatiniini-, urea-, K-, kokonaisproteiini- ja albumiinitasot

CCl4-injektio nosti oleellisesti seerumin kreatiniini-, urea- ja k-tasoja GII-rotissa verrattuna kontrollirotteihin (GI). Sitä vastoin kokonaisproteiini- ja albumiinitasot laskivat merkittävästi CCl4-käsitellyissä rotissa (taulukko 3). Vit. E plus Se ja A. hierofanttiset uutteet (G III, IV, V ja VI) vähensivät oleellisesti CCl4-injektion aiheuttamia kreatiniinin ja urean muutoksia, kun taas ne nostivat albumiinin ja kokonaisproteiinien pitoisuuden lähelle normaaliarvoja GI:ssä (taulukko 3 ). Seerumin k-taso nousi huomattavasti CCl{5}}käsitellyillä rotilla (GII) verrattuna GI:ään (taulukko 3). Injektio vit. E plus Se ja A. hierofhantic alkoholi- ja vesiuutteiden (G IV, V ja VI) antaminen paransi myös positiivisesti k-tasoa GI:hen verrattuna (taulukko 3).

3.4. Munuaisten antioksidanttibiomarkkerit

Kuten taulukosta 4 näkyy, CCl4:n antaminen vähensi merkittävästi SOD- ja GSH-tasoja ja nosti MDA-tasoa GII:ssamunuainenhomogenoi kudos. Kuitenkin verrattuna GI: hen rotat hoidettiin sekä vit. E plus Se ja A. hierofanttiset uutteet (GIII, VI, V ja VI) osoittivat oleellista parannusta antioksidanttientsyymien SOD ja GSH aktiivisuudessa sekä MDA-tasojen laskua (taulukko 4). A. hierofantinen alkoholiuute (GIV) ylitti A. hierofantisen vesipitoisen uutteen (GV) ja yhdisti A. hierofantin alkoholi- ja vesiuutteet alentaen antioksidanttitasoja, ja itsehapetusprosessin torjuminen johti alhaisiin MDA-tasoihin verrattuna GI:hen.

3.5. Nefrosuojausprosentti

Nefrosuojausprosentti (suhteessa negatiiviseen kontrolliryhmään (GI) ja positiiviseen (GII) ryhmään).munuainentoiminnot, kuten kreatiniini, urea, k, TP ja albumiini, sekä antioksidanttiaktiivisuus munuaishomogenaatissa (MDA, SOD, GSH) on kuvattu taulukossa 5. Nefrosuojausprosentti kirjasi korkeimman arvon kreatiniinina, ureana, k GIII:ssa, TP ja albumiini GV:ssä, MDA ja GSH GIII:ssa ja SOD GV:ssä (taulukko 5). Nefrosuojauksen kokonaisprosentti suhteessa vit. E plus Se -käsittely rekisteröi maksimitasot KAE:llä hoidetussa ryhmässä (GV, 97,62 prosenttia ), sitten KEE (GIV, 83,27 prosenttia ) ja sitten KEE plus KAE (GVI, 78,85 prosenttia ), kuten taulukosta 5 käy ilmi.

3.6. A. hierofanttisten uutteiden vaikutukset munuaisten historialliseen arkkitehtuuriin

Biokemiallisten tutkimusten tuloksia tuki histopatologinen tutkimus. Taulukko 6 ja kuvio 1 esittävät histologisten muutosten astetta rotan taustarakenteessamunuaiseterilaisissa koeryhmissä, joita käsiteltiin A. hierophantisilla uutteilla. Tässä tutkimuksessamunuainenkontrolliryhmän (GI) todettiin olevan normaali histologinen rakenne (kuva 1 (I.1)). CCl4--käsiteltyjen rottien (GII) histoarkkitehtuuri osoitti fokaalista tulehdussolujen infiltraatiota (plus plus) aivokuoren tubulusten välillä, verisuonten tukkeutumista (plus plus) tubulusten välissä (kuva 1(II.2)) ), useita eosinofiilisiä kipsimuodostelmia (plus plus) joidenkin tubulusten ontelossa ja fokaalinen verenvuoto (plus plus) rappeutuneiden tubulusten välillä kortikomedullaarisessa osassa (kuva 1(II.3), taulukko 6). GIII:ssa vit. E plus Se, kun annettiin A. hierophanticin alkoholiuutetta (GIV), A. hierophanticin (GV) vesiuutetta ja A. hierophantic -uutteiden (GVI) yhdistelmää, heikensi CCl4:n sytotoksisia vaikutuksia ja kirjasi lievän (plus) kohtalainen (plus plus) tukkoisuus verisuonissa aivokuoren tubulusten joukossa (Kuva 1(III.4–VI.8), Taulukko 6) hyvin kehittynyt Bowmanin kapseli, jossa glomerulukset ja kierteiset tubulukset ovat laajentuneet. Lisäksi A. hierophanticin (GV) vesiuute tallensi fokaalisen tulehdussoluinfiltraation (plus plus) kortikomedullaarisessa osassa (kuvio 1 (V.7), taulukko 6).

4. Keskustelu

Fytokemikaalit ovat enimmäkseen tehokkaita vapaiden radikaalien sieppaajia ja niitä pidetään kasviperäisinä ylivertaisina antioksidantteina. Polyfenolisilla aineilla uskotaan olevan syöpää ehkäiseviä ja mutageenisia ominaisuuksia ihmisillä [40]. Arvokas TPC-pitoisuus A. hierophanticissa oli hieman korkeampi kuin Mohamed et ai. [21] 51,97 mg GAE g × 1 A. hierophatic herbissä ja AlGamdi et ai. [41], joka löysi 4 mmol L × 1 GAE:tä A. hierofhantic siemenistä. Äskettäin Zin et ai. [42] osoitti tanniinien esiintymisen A. hierophanticissa bioaktiivisena yhdisteenä ja suositteli sen bioaktiivisuutta, jota oli tutkittava perusteellisesti. Karoteenipitoisuus osana kaikkia karotenoideja oli 2,27 µg g × 1, kuten Mohamed et ai. [21], ja jopa nykyiset tulokset esittivät karotenoidien kokonaismäärän 3,51 µg g × 1 . Samanlaisia ​​havaintoja flavonoidi- ja flavonolipitoisuuksissa ovat osoittaneet Mohamed et ai. [21]. Biologisesti aktiivisia komponentteja, kuten fenoliyhdisteitä, on läsnäantioksidanttiaktiivisuuslipidien hapettumisketjureaktioiden hajoamisena antamalla vetyä aktiivisille vapaille radikaaleille. Tämä fenolien poistamispotentiaali radikaaleja inhiboimiseksi selvitettiin niiden fenolistella hydroksyyliryhmillä [8, 10, 22]. Tätä fenolihappoa on kuvattu tehokkaaksi antioksidanttikomponentiksi, mukaan lukien vetyperoksidi, hydroksyyliradikaali ja superoksidianioni [43]. A. Hierofanttinen metallikelatointiaktiivisuus näyttää olevan taitava häiritsemään "Fe2 plus -ferrotsiini" -kompleksin rakennetta, mikä viittaa sen kykyyn siepata "rauta"-ioneja ennen "ferrotsiinia". Positiivinen suhde niiden fenoliyhdisteiden pitoisuuksien lisääntymisen välillä osoittaa suoraan niiden antioksidanttikapasiteetin [42]. Andjelkovi´c et ai. [44] vahvisti useiden fenolihappojen aktiivisuuden muodostaen komplekseja metallien kanssa. Arvokas TPC ja asiaankuuluvat antioksidanttiaktiivisuudet käyttämällä erilaisia ​​mittausmenetelmiä antavat selkeän pohjan ja vahvistavat A. hierophanticin bioaktiivisuuden lääkekasvina ruoka- tai juomakäyttöön.

Tehokkaat antioksidanttikomponentit, mukaan lukien vetyperoksidi, hydroksyyliradikaali ja superoksidianioni [43,45,47]. HPLC:llä tunnistetut ja kvantifioidut yhdisteet A. hierophanticin KAE:ssä olivat korkeammat kuin KEE:ssä tunnistetut yhdisteet, mutta tunnistettuja yhdisteitä A. hierophanticin KEE:ssä oli suurempia määriä [22]. Tulokset osoittavat, että kuluttava A. hierophantic voisi sisältää monia komponentteja sekä polaarisissa että ei-polaarisissa muodoissa. Nämä tulokset ovat samalla tavalla esittäneet AlGamdi et ai. [41], koska he tunnistivat ja määrittivät 20 polyfenoliyhdistettä A. hirerochuntican siemenissä. Uute sisälsi klorogeenihappoja ja hydroksibentsoehappoja, mutta pääkomponentit olivat flavonin C-glykosidit, C-diglykosidit, O-glykosidit ja O-glykosidi-C-glykosidit, jotka esiintyvät pääasiassa luteoliinikonjugaatteina. Lisäksi 14 A. hierophatic -uutteen 20 yhdisteestä oli esilläantioksidanttiaktiivisuuskäyttämällä HPLC-on-line-antioksidanttitunnistusjärjestelmää [41]. Mielenkiintoista on, että nykyiset tiedot vahvistivat, että A. hierophantic sisältää runsaasti fytokemiallisia yhdisteitä ja on hyvä luonnollisten antioksidanttien lähde, jolla on potentiaalisia terveyshyötyjä, kuten siemenissä on tuskin aiemmin korostettu [41]. Tästä syystä koko kasvijauheesta valmistettu tee on perinteinen kulutusmuoto; tiedot havainnollistavat uusia tunnistettuja bioaktiivisia yhdisteitä A. hirerochuntican KEE:ssä ja KAE:ssä, jotka erosivat AlGamdi et ai. [41]

Lukuisissa tutkimuksissa CCl4-indusoitua munuaistoksisuutta on käytetty mallijärjestelmänä kasviuutteiden/lääkkeiden munuaisia ​​suojaavan vaikutuksen testaamiseen [48,49]. Nykyisessä tutkimuksessa tarkasteltiin A. hierofhantic -uutteiden vaikutusta CCl4--indusoituunmunuainenvaurioita sekä sen munuaissuojausta ja antioksidanttipotentiaalia rotilla. Tässä tutkimuksessa CCl4-hoitoryhmä (GII) nosti merkittävästi kreatiniini-, urea- ja k-tasoja ja vähensi kokonaisproteiini- ja albumiinipitoisuuksia GI:hen verrattuna. Tämä saattaa johtua siitä, että CCl4-myrkytys on tärkeä vapaiden radikaalien tuotannon lähde monissa elimissä, mukaan lukien maksa, munuaiset, keuhkot, aivot ja veri [50]. On myös havaittu, että CCl4-injektion jälkeen rotille CCl4-pitoisuus jakautuu tasaisemmin munuaisissa kuin maksaassa [51], koskamunuainensillä on korkea affiniteetti CCl4:ään ja se sisältää sytokromi P450:tä pääasiassa aivokuoressa. Yleisimmät CCl4:n vapaat radikaalit ovat trikloorimetyyliradikaali (CCl3• ) ja trikloorimetyyliperoksyyliradikaali (CCl3O2• ) [52]. Nämä radikaalit kiinnittyvät solunsisäiseen proteiiniin, solukalvon lipideihin ja DNA:han aiheuttaen proteiinien denaturaatiota, lipidien peroksidaatiota ja oksidatiivista DNA-vauriota, joka johtaa solukuolemaan [53]. Sitä vastoin CCl4-rottien hoito vit. E plus Se (GIII) ja A. hierofanttiset uutteet (GVI: VI) vaimensivat tehokkaasti näitä kreatiniini- ja ureapitoisuuksien nousuja sekä lisäsivät seerumin albumiini- ja kokonaisproteiinipitoisuuksia hyvin lähelle GI-tasojaan. Tämä voi johtua A. hierophant -uutteiden antioksidanttisista ominaisuuksista ja runsaasta fenolipitoisuudesta sekä vit:n antioksidanttikapasiteetista ja kelatoivasta aktiivisuudesta. E plus Se, joka poistaa vapaita radikaaleja ja estää siten munuaisvaurioita. Fytokemikaalit ovat tehokkaimpia vapaiden radikaalien sieppaajia, ja niitä pidetään parhaina kasvien antioksidantteina [54]. Yleisimmät fenoliyhdisteet olivat hydroksikanelihapot, kuten sinappihappo, yhdeksän tunnistetun fenoliyhdisteen joukossa KEE:ssä, kun taas syringiinihappo oli suurin fenolihappo KAE:n 21 tunnistetusta fenolihaposta. Kuusi flavonoidia tunnistettiin KEE:ssä ja kaksi KAE:ssä käyttämällä HPLC-analyysiä [55]. Lisäksi antioksidanttina vit. E:n uskotaan suojaavan kudoksia reaktiivisten hapen metaboliittien aiheuttamilta haitoilta. Seleeni on myös hyvin tunnustettu ihmisten terveydelle välttämättömäksi hivenaineeksi, joka suojaa soluja vapaiden radikaalien haitallisilta vaikutuksilta [22].

Nykyisessä tutkimuksessa CCl4:n antaminen vähensi huomattavasti GSH:ta ja SOD:ta ja lisäsi MDA-tasojamunuainenhomogenoituu suhteessa GI:hen. Vit. E plus Se ja A. hierofhantic -uutteet paransivat CCl4:n erilaisia ​​vaikutuksia palauttamalla antioksidanttiaineiden, kuten SOD:n ja GSH:n, muuttuneen aktiivisuuden ja voivat deaktivoida MDA:n tuotantoprosessin, kuten äskettäin raportoitiin [15,21,40,41] . GSH on ei-entsymaattinen antioksidantti, jota löytyy kaikista nisäkässoluista. GSH:n hapettuneessa muodossaan, GSSG, toimii kofaktorina lukuisille myrkkyjä poistaville entsyymeille (GPx, GST ja muut) oksidatiivista stressiä vastaan ​​ja ylläpitää solujen redox-tasapainoa [47]. Tämä havainto seuraa Khanin ja Siddiquen [56] ja Maknin et al. [57], joka raportoi, että CCl4 alensi GSH-tasoa rotan munuaisissa. Hoito vit. E plus Se- ja A. hierofanttiset uutteet osoittivat suojaa CCl4:n laukaisemaa GSH-tason laskua vastaan. Samassa yhteydessä SOD katalysoi kahden superoksidianionin (*O2) molekyylin dismutaatiota vetyperoksidiksi (H2O2) ja molekyylihapeksi (O2), mikä tekee mahdollisesti haitallisesta superoksidianionista vähemmän vaarallisen [58,59]. CCl4-myrkytys muuttaa geenin ilmentymistasoa heikentämällä munuaisten SOD:ta [60]. SOD-aktiivisuuden väheneminen on herkkä soluvaurion indeksi. Testatut A. hierophatic -uutteemme paransivat munuaistoksisuutta alentamalla SOD:n tasoa. Se osallistuu erilaisiin entsymaattisiin prosesseihin vähentääkseen detoksifikaatioreaktioiden pitoisuutta [61]. MDA on ensimmäinen lipidiperoksidaatiotuote ja yksi tärkeimmistä oksidatiivisen stressin merkkiaineista. A. hierofanttiset uutteet vähensivät MDA-tasojen nousua ja palauttivat antioksidanttivoiman CCl{20}}käsitellyissä rotan munuaisissa. Nämä suojaavat vaikutukset voivat johtua A. hierophatic -uutteiden voimakkaasta antioksidanttiaktiivisuudesta [15,21,40,41]. Nämä tulokset viittaavat myös siihen, että A. hierofhantic -uutteet voivat heikentää oksidatiivista stressiä alentamalla lipidiperoksiditasoja CCl4-altistuneissa rotan munuaisissa ja estämällä munuaisvaurioita. Nämä tulokset olivat yhtäpitäviä Zn:n CCl4--indusoidun akuutin munuaistoksisuuden antioksidanttisten vaikutusten kanssa [62,63].

A. hirerochuntica -uutteet esittivät arvokasta munuaisten suojakykyämunuainentoimintakokeet (kreatiniini, urea, K, TP ja albumiini) ja munuaisten antioksidanttiaktiivisuus (GSH, SOD, MDA) homogenoivat GIV:ssä, V:ssä ja IV:ssä. Nefrosuojauksen kokonaisprosentti suhteessa vit. E plus Se -käsittely rekisteröi maksimitasot KAE:llä hoidetussa ryhmässä (GV, 97,62 prosenttia ), sitten KEE (GIV, 83,27 prosenttia ) ja sitten KEE plus KAE (GVI, 78,85 prosenttia ) vastaavasti laskevassa järjestyksessä. Tämä voi johtua eroista A. hirerochuntica -uutteiden fenoli- ja antioksidanttipitoisuuksissa, joilla on suhde antioksidanttikapasiteettiin [15,19,22,40,42].

Histopatologiset löydöksetmunuaisetovat yhdenmukaisia ​​tutkittujen koeryhmien biokemiallisten arvioiden kanssa. CCl4:n antaminen (GII) aiheutti munuaisissa glomerulaarisen ja tubulaarisen leesion ja vasokongestion. Dogukan et ai. [64] löysi samanlaisen histologisen kuvion rotan munuaiskudoksesta vasteena pitkäaikaiselle CCl4-hoidolle. Uskotaan myös, että histologiset muutokset johtuvat nefronien toiminnallisesta ylikuormituksesta, joka johtaa munuaisten toimintahäiriöön [65] ja/tai johtuvat kudosten tuhoutumisesta, joka on provosoitu CCl4-aineenvaihdunnan kautta tapahtuvan vapaiden radikaalien muodostumisen seurauksena [56,66]. . vit:n vaikutus. E plus Se ja A. hierofanttinen uute korjaamaan ja palauttamaan munuaisia ​​tuhoavat CCl4:n vaikutukset olivat merkittäviä. Tämä voi johtua siitä, että vit. E plus Se (voimakkaana antioksidanttina) vaikuttaa CCl4:n indusoimaan ROS:iin [67]. A. hierofantiset uutteet estävät CCl4-indusoitua akuuttia munuaistoksisuutta johtuen A. hirerochuntica -uutteissa olevien fenoliyhdisteiden antioksidanttisesta roolista ja vapaita radikaaleja poistavista ominaisuuksista [22]. Tuloksemme ovat yhdenmukaisia ​​muiden tutkijoiden kanssa, jotka ovat osoittaneet, että erilaisilla kasvijohdannaisilla on farmakologisia vaikutuksia eliminoimalla CCl4:n väärinkäytökset ja palauttamalla ne normaaliksi [6].

5. Johtopäätökset

Tämän tutkimuksen tulokset osoittivat selvästi, että A. hierophatic -kasvi sisältää runsaasti polaarisia ja ei-polaarisia fenoliyhdisteitä, joilla on ylivoimainen antioksidanttikapasiteetti, mikä liittyy suoraan fytokemialliseen pitoisuuteen. A. hierofanttinen (erityisesti vesipitoinen uute) suojaa rottia CCl4-indusoidulta oksidatiiviselta stressiltä ja akuutiltamunuainenvaurioita, mistä on osoituksena MDA-tasojen merkittävä lasku ja lisääntynyt GSH- ja SOD-aktiivisuus, sekä biokemiallisten ja histologisten muutosten loppuminen munuaisissa. Suojausteho saattaa johtua A. hierophantisissa uutteissa olevien fenoliyhdisteiden antioksidanttisista ja vapaita radikaaleja poistavista ominaisuuksista. Nämä ominaisuudet auttavat selittämään kasvin lääkinnällisen tehon kasviperäisenä lääkkeenä. Lisää tutkimusta tarvitaan A. hierophanticin vaikuttavien aineiden täydelliseen kuvaamiseen, ja tämän tutkimuksen tarkoituksena on kannustaa kattavampaan asiaan liittyvään tutkimukseen tarjoamaan riittävästi tietoa ja suosituksia sen mekanismien ja turvallisten annosten määrittämiseksi.

Tekijän panokset:Käsitteellistäminen, TIA, YMA ja HB; metodologia, tutkimus, HB ja HAA-R.; tietojen kuratointi, TIA ja YMA; kirjoittaminen – alkuperäisen luonnoksen valmistelu, tarkistus ja editointi; HB ja HAA-R. Kaikki kirjoittajat ovat lukeneet käsikirjoituksen julkaistun version ja hyväksyneet sen.

Rahoitus:Tutkijat haluavat kiittää Qassim-yliopiston tieteellisen tutkimuksen dekaaniaa tämän projektin julkaisun rahoittamisesta.

Tietojen saatavuusilmoitus:Tässä tutkimuksessa esitetyt tiedot ovat saatavilla pyynnöstä vastaavalta kirjoittajalta.

Lyhenteet ABTS:2,2'-atsinobis(3-etyylibentseenitiatsoliini-6-sulfonihappo); AOA:antioksidanttiaktiivisuus; BHA: butyloitu hydroksianisoli; BHA: butyloitu hydroksianisoli; DPPH: 1,1-difenyyli-2-pikryylihydratsiini; DW: kuivapaino; GA: gallushappo; GAE: gallushappoekvivalentti; GSH: pelkistetty glutationi; HPLC-DAD: korkean suorituskyvyn nestekromatografinen diodirivitunnistus; KAE: A. hierofanttinen vesiuute; KEE: A. hierofanttinen etanoliuute; MDA: malonaldehydi; QE: kversetiinin ekvivalentti; RAA: suhteellinen antioksidanttiaktiivisuus; ROS: reaktiiviset happilajit; RSA: radikaaleja poistava aktiivisuus; Se: seleeni; SE: standardivirhe; SOD: superoksididismutaasi; TC: karotenoidit yhteensä; TC: karotenoidit yhteensä; TF: flavonoidit yhteensä; TE: Trolox-vastineet; TFL: flavonolien kokonaismäärä; TPC: fenoliyhdisteiden kokonaismäärä.

References

1. Statistics, KD Chronic Kidney Disease Yhdysvalloissa. 2021. Saatavilla verkossa:(käytetty 20.7.2021).

2. Ku, E.; Glidden, DV; Johansen, KL; Sarnak, M.; Tighiouart, H.; Grimes, B.; Hsu, CY Yhteys tiukan verenpaineen hallinnan välillä kroonisen munuaissairauden aikana ja alhaisemman kuolleisuuden välillä loppuvaiheen munuaissairauden puhkeamisen jälkeen. Kidney Int. 2015, 87, 1055–1060.

3. Tumlin, JA; Madaio, kansanedustaja; Hennigar, R. Idiopaattinen IgA-nefropatia: Patogeneesi, histopatologia ja hoitovaihtoehdot. Clin. J. Am. Soc. Nephrol. 2007, 2, 1054–1061.

4. Olah, G.; Reddy, VP; Prakash, GS; Reactions, FC Kirk-Othmer kemiantekniikan tietosanakirja. Piilolinssit 1978, 720–742.

5. Ozturk, F.; Ucar, M.; Ozturk, IC; Vardi, N.; Batcioglu, K. Hiilitetrakloridin aiheuttama nefrotoksisuus ja betaiinin suojaava vaikutus Sprague-Dawley-rotissa. Urology 2003, 62, 353–356.

6. Ogeturk, M.; Kus, I.; Colakoglu, N.; Zararsiz, I.; Ilhan, N.; Sarsilmaz, M. Kahvihapon fenetyyliesteri suojaa munuaisia ​​hiilitetrakloridin myrkyllisyydeltä rotilla. J. Ethnopharmacol. 2005, 97, 273–280.

7. Slater, TF Free Radical Mechanisms in Tissue Injury. Solujen toiminta ja sairaudet; Cañedo, LE, Todd, LE, Packer, L., Jaz, J., toim.; Springer: Boston, MA, USA, 1988; s. 209–218.

8. Khan, MR; Rizvi, W.; Khan, GN; Khan, RA; Shaheen, S. Hiilitetrakloridin aiheuttama nefrotoksisuus rotilla: Digerati muricatan suojaava rooli. J. Ethnopharmacol. 2009, 122, 91–99.

9. Afsar, T.; Khan, MR; Razak, S.; Ullah, S.; Mirza, B. Acacia hydaspica R. Parkerin antipyreettinen, tulehdusta ja analgeettinen vaikutus ja sen fytokemiallinen analyysi. BMC-täydennys. Altern. Med. 2015, 15, 1–12.

10. Al-Qabba, MM; El-Mowafy, MA; Althwab, SA; Alfheeaid, HA; Aljutaily, T.; Barakat, H. Chenopodium quinoan itujen fenoliprofiili, antioksidanttiaktiivisuus ja parantava tehokkuus CCl4:n aiheuttamaa oksidatiivista stressiä vastaan ​​rotilla. Ravinteet 2020, 12, 2904.

11. Al Zhrani, MM; Althwab, SA; Aljutaily, T.; Alfheeaid, HA; Ashish, IS; Barakat, H. Moringa-pohjaisten juomien suojaava vaikutus hyperlipidemiaa ja hyperglykemiaa vastaan ​​tyypin 2 diabeteksen aiheuttamissa rotissa. Food Res. 2021, 5, 279–289.

12. Khalifa, I.; Nawaz, A.; Sobhy, R.; Althwab, SA; Barakat, H. Polyasyloidut antosyaanit verkostoituvat rakentavasti 2019-nCoV:n 3CLpro:n katalyyttisten dyadijäämien kanssa kuin monomeeriset antosyaanit: Rakenteellisen suhdetoiminnan tutkimus 10 antosyaanilla käyttäen in-silico-lähestymistapoja. J. Mol. Kaavio. Malli. 2020, 100, 107690.

13. Yusof, J.; Mahdy, ZA; Noor, RM Täydentävän ja vaihtoehtoisen lääketieteen käyttö raskauden aikana ja sen vaikutus synnytystulokseen. Täydentää. Siellä. Clin. Harjoittele. 2016, 25, 155–163.

14. Salah, SH; Abdou, HS; Abd El-Azeem, A.; Abdel-Rahim, E. Joidenkin lääkekasvien antioksidatiiviset vaikutukset hypoglykeemisinä aineina kromosomipoikkeavuuksiin ja diabeteksen stressin aiheuttamaan epänormaaliin nukleiinihappojen aineenvaihduntaan aikuisilla urospuolisilla albiinorotilla. Diabetes Mellit. 2011, 1, 6–14.

15. Daur, I. Kaff Maryam -lääkeyrtin (Anastatica hierochuntica L.) kemialliset ominaisuudet ja sen suhde kansanlääketieteen käyttöön. Afr. J. Microbiol. Res. 2012, 6, 5048–5051.